CN1310671C - 缓释注射剂用组合物的制造方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供以保持生理活性蛋白质的生理活性的状态进行喷雾干燥，高效率地将其封入生物降解性高分子物质中，且达到初期释放得到抑制、长时间持续释放的缓释注射用组合物。本发明还涉及使以生理活性蛋白质和糖类为实质性的组成成分、且粒径在10μm以下的粒子占90%以上的喷雾干燥微粉末分散于生物降解性高分子物质的有机溶剂溶液中之后，在油类中除去该有机溶剂而制得的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。

Description

缓释注射剂用组合物的制造方法
技术领域
本发明涉及将生理活性蛋白质封入生物降解性高分子物质中的缓释注射剂用组合物及其制造方法。更详细是涉及由生理活性蛋白质和糖类组成的、粒径在10μm以下的粒子占90％以上的喷雾干燥微粉末均匀地分散于生物降解性高分子物质的基质中而得到的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
背景技术
对人给予生理活性蛋白质已在广泛实施，但蛋白质口服吸收性低，在机体内消失也快，因此，作为注射剂现状是需多次给药。在该状况下，从避免多次给药及提高治疗效果的观点来看，强烈希望有可将生理活性蛋白质封入生物降解性高分子物质中、形成微球体的缓释技术。此外，蛋白质会由于热、溶剂等而变性，因此，在制造方面处理有困难，希望有更好的方法。但是，可将生理活性蛋白质稳定地、且封入率较高地封入微球体中、加之在溶出试验开始后不发生初期的急剧生理活性蛋白质的释放(以下称初期突释)、具有生产性、可实施性的缓释微球体的技术迄今为止还没有。
为了不使生理活性蛋白质的生理活性降低，以避免二氯甲烷等有机溶剂引起的变性为目的，实施了将水溶性的蛋白质进行粉末化处理、以保持其活性的尝试。例如，在特开平11-322631号公报中，公开了在生理活性多肽水溶液中添加与水混溶的有机溶剂及/或铵盐等挥发性盐类，经冷冻干燥将多肽制成粉末，实现了稳定地封入多肽的制剂中，使封入率、缓释性得到改善的生理活性多肽的缓释性制剂。又特开平11-302156号公报中，公开了冷冻干燥多肽及聚乙二醇的混合水溶液，通过使用多肽不能溶解，但聚乙二醇和生物降解性高分子物质溶解的溶剂，调制回收率高、不发生变性的高纯度的多肽微粒子，将该微粒子封入微球体中。该技术是涉及在调制微球体的前阶段用于多肽微粒化的冷冻干燥技术，不涉及喷雾干燥技术。
作为在调制微球体的前阶段使用喷雾干燥的技术，特开平4-36233号公报中有所公开。该技术是通过将多肽和明胶等水溶性高分子的混合水溶液进行喷雾干燥，制成微球，再用生物降解性高分子溶液包衣，而使药物的包封率得到提高，初期突释得到抑制的具有长时间缓释性的方法。但该方法依赖所使用的水溶性高分子、有使喷雾干燥时的温度变为高温的情况，可能导致多肽的失活。
迄今为止，在调制微球体的前阶段、其后的调制阶段，在生理活性的保持和与此同时的初期释放的控制、生理活性蛋白质的高封入率、以及长时间持续的释放性、生产性、可实施性的所有方面，具有充分效果的技术还未为人所知。为了满足上述所有的方面，需要做进一步的改善。
因此，本发明的目的是提供含有生理活性蛋白质的缓释注射剂，它是以保持生理活性蛋白质的生理活性的状态经喷雾干燥制成微粉末、以高封入率使其内包于生物降解性高分子物质、且这时仍可保持生理活性蛋白质的生理活性、加之实现了抑制初期释放和长时间持续释放的生产性高的、具有可实施性的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂。
发明内容
在该状况下，本发明者对通过生理活性蛋白质的喷雾干燥进行微粉末化处理进行了种种研究，其结果发现，如果以糖类、特别是甘露糖醇或2-羟丙基-β-环糊精作为载体使用，则可不使生理活性蛋白质变性地实施喷雾干燥，可得到保持良好粒径的微粉末，加之在采用使得到的生理活性蛋白质的微粉末于油类中内包于由生物降解性高分子物质组成的缓释基质的方法的情况下，其生理活性完全不丧失，可实现高封入率、抑制初期释放及长时间持续的药物释放，从而完成了本发明。
根据本发明，通过使用糖类，干燥温度可不需设定为高温即可实施喷雾干燥，从而可避免由于热而导致的生理活性蛋白质的变性和失活，调制粒径得到控制的蛋白质微粉末变得极为容易。此外，使用保持生理活性、粒径得到充分控制的蛋白质微粉末，可保持内包于微球体内的生理活性蛋白质的生理活性、还可实现在微球体中的高封入率、抑制初期释放。
即本发明是关于
1.粒径在10μm以下的粒子占90％以上的由生理活性蛋白质和糖类组成的喷雾干燥微粉末均匀地分散于生物降解性高分子物质的基质中的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
2.粒径在6μm以下的喷雾干燥微粉末所占的比例为50％以上的上述1所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
3.糖类为甘露糖醇及/或环糊精类的上述2所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
4.环糊精类为2-羟丙基-β-环糊精的上述3所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
5.生物降解性高分子物质为乳酸-乙醇酸的共聚物的上述4所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
6.生理活性蛋白质为干扰素类的上述5所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
7.干扰素类为干扰素-α-Con1的上述6所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
8.组合物为微球体的上述7所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
9.微球体的平均粒径约为20-250μm的上述8所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
10.生理活性蛋白质的含有量相对于糖类约为0.01-80％(w/w)的上述9所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
11.喷雾干燥微粉末的浓度相对于生物降解性高分子物质约为0.01-20％(w/w)的上述9所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
12.使以生理活性蛋白质和糖类为实质性的组成成分、且粒径在10μm以下的粒子占90％以上的喷雾干燥微粉末分散于生物降解性高分子物质的有机溶剂溶液中之后，在油类中除去该有机溶剂而制得的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
13.使粒径在6μm以下的喷雾干燥微粉末所占的比例为50％以上的上述12所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
14.糖类为甘露糖醇及/或环糊精类的上述13所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
15.环糊精类为2-羟丙基-β-环糊精的上述14所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
16.生物降解性高分子物质为乳酸-乙醇酸的共聚物的上述15所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
17.生理活性蛋白质为干扰素类的上述16所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
18.干扰素类为干扰素-α-Con1的上述17所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
19.油类为硅油、大豆油、芝麻油、棉子油、矿物油的上述18所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
20.油类为硅油的上述19所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
21.组合物为微球体的上述20所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
22.微球体的平均粒径约为20-250μm的上述21所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
23.生理活性蛋白质的含有量相对于糖类约为0.01-80％(w/w)的上述9所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
24.喷雾干燥微粉末的浓度相对于生物降解性高分子物质为10％(w/w)以下的上述22所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物。
25.使以生理活性蛋白质和糖类为实质性的组成成分、且粒径在10μm以下的粒子占90％以上的喷雾干燥微粉末分散于生物降解性高分子物质的有机溶剂溶液中之后，在油类中除去该有机溶剂的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法。
26.使粒径在6μm以下的喷雾干燥微粉末所占的比例为50％以上的上述25所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法。
27.糖类为甘露糖醇及/或环糊精类的上述26所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法。
28.环糊精类为2-羟丙基-β-环糊精的上述27所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法。
29.生物降解性高分子物质为乳酸-乙醇酸的共聚物的上述28所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法。
30.生理活性蛋白质为干扰素类的上述29所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法。
31.干扰素类为干扰素-α-Con1的上述30所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法。
32.油类为硅油、大豆油、芝麻油、棉子油、矿物油的上述31所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法。
33.油类为硅油的上述32所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法。
34.组合物为微球体的上述33所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法。
35.微球体的平均粒径约为20-250μm的上述34所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法。
36.喷雾干燥微粉末的浓度相对于生物降解性高分子物质为10％(w/w)以下的上述35所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法。
37.生理活性蛋白质的含有量相对于糖类约为0.01-80％(w/w)的上述9所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法。
本发明中的『基质』表示生物降解性高分子的网眼结构。『均匀地分散』表示在生物降解性高分子的网眼结构中，由生理活性蛋白质和糖类组成的喷雾干燥粉末充分分散的状态，本发明组合物的释放以下述释放试验法进行测定，不发生初期突释时，可间接得知生理活性蛋白质为『均匀分散』的状态。
在本发明中测定『喷雾干燥微粉末粒径』的意义在于，控制粒径从而可使微粉末容易内包于生物降解性高分子物质中、可抑制初期释放和实现高封入率。具体以粒径在10μm以下的粒子占90％以上为宜，此外粒径在6μm以下的粒子占50％以上。使用具有上述粒径的微粉末，可使喷雾干燥微粉末、即生理活性蛋白质内包在以后的生物降解性高分子物质内变得容易，可实现初期释放的抑制和高封入率。
本发明所述的『微球体』是指从粒径为几十μm至几百μm的球形粒子，具体是指约10μm～300μm的球形粒子，最好约为20μm～250μm。
本发明所述的『以生理活性蛋白质和糖类作为实质性的组成成分』是指以生理活性蛋白质和糖类为主要成分，但在不损害本发明效果的范围内，也可含有其它赋形剂等成分。本发明所述的生理活性蛋白质的『生理活性的保持』具体是指例如用下述生理活性试验法测定生理活性蛋白质的效价时，相对于标准品试样的效价约为70-125％，更好约为80-115％。
对于将本发明的生理活性蛋白质封入后的缓释注射剂用组合物，其『初期释放的抑制』及『持续释放』是指采用下述释放试验法时，『初期释放的抑制』表示在试验开始后的3小时内约为10％以下，『持续释放』也表示『缓释』，具体表示在使用开始后1日至1个月之间的时间范围内，药物持续释放。
此外，本发明所述的生理活性蛋白质的『高封入率』是指例如在以下述封入率的测定法进行测定时，封入率约为70％以上、更好约为75％以上、特好约为80％以上。
喷雾干燥时的干燥温度的『不使用高温』是指，例如作为机器选择喷雾干燥器时的送风出口温度的低温度范围，具体约为0～80℃、较好约为10～60℃、更好约为20～60℃。
本发明所使用的生理活性蛋白质只要是作为医药活性成分使用的蛋白质，就没有特别限定。作为医药活性成分可列举细胞因子、生长因子、造血因子、肽激素、酶等。
具体作为细胞因子可列举干扰素类(α型、β型、γ型等)、白细胞介素类(IL-1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23等)、肿瘤坏死因子(TNF)等，作为生长因子，可列举骨形成因子(BMP-1、2、3、4等)、神经生长因子(NGF-1、2等)、神经营养因子(NTF)、上皮细胞生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子(IGF-1、2、3等)、成纤维细胞生长因子(aFGF、bFGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、软骨衍生因子(CDF)、转化生长因子(TGF-α、-β等)等。
作为造血因子，可列举集落刺激因子(G-、M-、GM-CSF等)、血小板生成素(TPO)、红细胞生成素(EPO)、血小板生长刺激因子等，作为肽激素，可列举生长激素(GH)、生长激素释放因子(GRF)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、促甲状腺激素(TSH)、促卵泡激素(FSH)、黄体生成激素(LH)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)、促黑素细胞激素(MSH)、胰岛素、高血糖素、催乳素、降钙素、钠利尿肽等，作为酶可列举组织纤溶酶原激活物(tPA)、尿激酶(UK)、超氧化物歧化酶(SOD)、天冬酰胺酶、激肽释放酶、链激酶、蛋白质C、金属蛋白酶类、第VIII及IX因子、过氧化物酶等。
作为本发明较好的生理活性蛋白质为干扰素类、骨形成因子、生长激素，更好为干扰素类、生长激素，特好为干扰素类。干扰素类包含天然型、基因重组型两种。其中基因重组型的干扰素-α-Con1特别好。上述生理活性蛋白质可1种或2种以上组合使用。此外，也可与非蛋白质药物例如抗病毒剂组合使用。
作为本发明的生理活性蛋白质，分子量约为1,000～200,000，最好约为5,000～70,000。上述生理活性蛋白质可来自天然或为经基因重组技术等得到的变体，还可为其修饰体(例如使用聚乙二醇的化学修饰体)。此外，它们可以单体使用，也可作为同或杂的多聚物使用。
作为本发明的糖类，可列举环状及(直链及分支)的单糖、双糖、低聚糖、多糖、或其衍生物(也包括糖醇等)等，其中，较好为糖醇或环状低聚糖、更好为甘露糖醇或环糊精类(α型、β型、γ型、2-羟丙基-β-环糊精等)、特好为甘露糖醇及2-羟丙基-β-环糊精。上述糖类也可1种或2种以上组合使用。
本发明的生物降解性高分子物质是指具有生物相容性的特性、且不具有生理活性的在生物降解、消失的高分子，只要是制药学所上允许的物质，就没有特别限定。例如可列举α-羟基羧酸类(乳酸、乙醇酸等)、羟基二羧酸类(苹果酸等)、羟基三羧酸(柠檬酸等)等均聚物或共聚物等，较好为聚乳酸、乳酸乙醇酸共聚物，特好为乳酸乙醇酸共聚物。上述生物降解性高分子物质可1种或2种以上组合使用。
喷雾干燥微粉末实质上由生理活性蛋白质和糖类组成，相对于糖类，生理活性蛋白质的含有量较好约为0.01-80％(w/w)，更好约为2-50％(w/w)，特好约为5-20％(w/w)。如果活性蛋白质的含有量低于该范围，则丧失实质性的生理活性，如果高于该范围，则得不到糖类对稳定性的改善。
喷雾干燥微粉末的含有量，根据生理活性蛋白质的药理效果及释放时间的不同而有所差异，相对于生物降解性高分子物质约在0.01-20％(w/w)的范围，较好约为0.1-10％(w/w)。如果低于该范围，则释放时间显著减缓，如果高于该范围，则有释放时间提早的可能性。
本发明的喷雾干燥微粉末可通过采用喷嘴将生理活性蛋白质和糖类的混合水溶液向喷雾干燥器的干燥室内喷雾、使水挥发而制得。作为喷雾干燥器的例子，可列举喷雾式干燥器。作为喷雾干燥时所使用的喷嘴，有两液喷嘴、压力喷嘴、转盘型等，根据所选择的生理活性蛋白质、糖类，也可使用任何一种。
在调制混合水溶液时，可使水溶性低分子物质溶解于生理活性蛋白质的水溶液中，也可使生理活性蛋白质的水溶液和水溶性低分子物质的水溶液混合。此外，在不损害本发明效果的范围内，根据需要也可添加盐酸、氢氧化钠等pH调节剂、氯化钠等渗透压调节剂。这时，混合水溶液中的生理活性蛋白质的浓度，只要在生理活性蛋白质溶解的范围中，就没有特别限定，约为0.1-20mg/ml，较好约为1-10mg/ml，更好约为1-8mg/ml。混合水溶液中的糖类的浓度，只要在糖类溶解、且生理活性蛋白质不沉淀的范围内，就没有特别限定，约为1-150mg/ml，较好约为10-100mg/ml，更好约为20-70mg/ml。
喷雾干燥时的喷雾干燥室的送风室的送风入口温度约在20-150℃的范围，较好约为40-120℃，更好约为50-100℃。送风出口温度约在0-80℃的范围，较好约为10-80℃，更好约为20-60℃。
作为使生理活性蛋白质和糖类的喷雾干燥微粉末分散于生物降解性高分子物质的方法，可选择在喷雾干燥微粉末和生物降解性高分子物质的混合物中添加有机溶剂、使生物降解性高分子物质溶解、使喷雾干燥微粉末分散的方法；在生物降解性高分子物质的有机溶剂溶液中使喷雾干燥微粉末分散的方法；在喷雾干燥微粉末的有机溶剂分散液中使生物降解性高分子物质溶解的方法；使喷雾干燥微粉末的有机溶剂分散液与生物降解性高分子物质的有机溶剂溶液混合的方法中的任何一种方法。使喷雾干燥微粉末分散于生物降解性高分子物质的有机溶剂溶液中时，为了提高均匀性，也可进行旋涡搅拌、均化、超声波等的处理。有机溶剂中的生物降解性高分子物质的浓度较好约为10-500mg/ml，更好约为50-250mg/ml。
作为本发明所使用的有机溶剂，只要是不溶解喷雾干燥微粉末、而溶解生物降解性高分子物质的挥发性物质，就没有特别限定。作为有机溶剂具体可列举乙腈、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲苯等，其中，以乙腈、二氯甲烷为宜。上述有机溶剂也可2种以上混合使用。
此外，根据需要，在不损害本发明效果的范围内，也可添加赋形剂等。作为赋形剂可列举制药学上允许的盐类、表面活性剂、糖类、氨基酸类、有机酸、其它水溶性物质等，其掺和量相对于生物降解性高分子物质的重量约为0.1-20％(w/w)，最好约为1-10％(w/w)。上述赋形剂可添加1种或2种以上。
上述赋形剂中，不溶解于有机溶剂的以粉末的形式添加，这时赋形剂的平均粒径较好为20μm以下，更好为10μm以下。
作为具体的盐类，可列举L-谷氨酸钾、L-谷氨酸钠、乙二胺四乙酸钠、辛酸钠、肾上腺素色素(carbazochrome)磺酸钠、羧甲基纤维素钠、柠檬酸钠、葡糖酸钙、葡糖酸钠、葡糖酸镁、甲磺基苯甲酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化铝、氯化钾、氯化钙、氯化钠、醋酸钠、碳酸钠、碳酸氢纳等。作为糖类，可列举D-山梨糖醇、D-甘露糖醇、肌醇、木糖醇、葡聚糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖等，作为氨基酸类，可列举蛋氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、牛磺酸、组氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、赖氨酸等，作为其它水溶性物质，可列举抗坏血酸、人血清白蛋白、硫酸软骨素钠盐、明胶、明胶水解物、肝素钠等。
作为溶解于有机溶剂的赋形剂，也可添加表面活性剂、有机酸类等。具体的表面活性剂，可列举倍半油酸山梨糖醇酐、山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯(160)聚氧丙烯(30)二醇、聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯硬化蓖麻油、聚氧乙烯硬化蓖麻油50、聚氧乙烯硬化蓖麻油60、聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯80、聚乙二醇(マクロゴ一ル)400、聚乙二醇4000、聚乙二醇600等，作为有机酸类，可列举油酸、巯基乙酸、乳酸等。
作为固化有机溶剂中的生物降解性高分子物质的方法，例如可列举在油类中加入生物降解性高分子物质的有机溶剂溶液，经乳化调制O/O型乳剂，将得到的乳剂在液体中干燥的方法。作为油类，只要是不使喷雾干燥微粉末及生物降解性高分子物质溶解、而与使生物降解性高分子物质溶解的有机溶剂不相混合的油类，就没有特别限定，例如以硅油、大豆油、芝麻油、棉子油、矿物油等为宜，其中更好为硅油、矿物油，特好为硅油。它们也可2种以上混合使用。
油类的体积以占生物降解性高分子物质的有机溶剂溶液体积的1-1000倍左右为宜，特好为10-500倍左右。
通过在油类中除去有机溶剂，可容易内包于生物降解性高分子物质中，具有可实现高封入率的优点。
此外，在油类中也可添加防凝聚剂。防凝聚剂只要可抑制在油类中的微球体的凝聚，就没有特别限定，但以倍半油酸山梨糖醇酐为宜。
乳化操作时，可使用螺旋桨式搅拌机、涡轮型乳化机、超声波分散装置、高压乳化机等合适的机器。
液体中的干燥可采用减压法等常规方法实施，例如，一边用螺旋桨式搅拌机以约10-1000rpm搅拌乳剂，一边以约0.1-50mm/Hg蒸去有机溶剂，温度约为0-25℃，更好约为10-20℃。用0.1-20μm筛眼的筛子除去油类。在除去油类的过程中，通过添加与油类混合的溶剂，可有效地除去油类。例如添加异丙醇、乙醇等。此外，根据需要也可通过减压至1mmHg以下蒸去有机溶剂。温度较好为0-约30℃，更好约为15-25℃。为了完全蒸去有机溶剂，较好是进行约24-60小时的减压处理，更好是约36-48小时。油类的除去也可通过添加油类溶解、而生物降解性高分子物质不溶解的溶剂来实施。具体可添加n-己烷、异丙醇、乙醇、甲醇等。
根据需要，可在1mmHg以下减压约1-2小时，除去油类溶解、而生物降解性高分子物质不溶解的溶剂。将以如上所述的方法得到的微球体用筛眼大小较好为100-500μm、更好为150-300μm的筛子过筛，可得到粒径整齐的微球体。还可根据需要对上述得到的微球体进行加温，进一步除去微球体中残留的有机溶剂。加温也可在减压下进行。通过实施上述一系列的操作，可得到平均粒径约为20μm-250μm的适用于注射剂的微球体。
以下对本发明的缓释注射用组合物的制造方法进行说明。
本发明组合物的制造是将生理活性蛋白质水溶液和糖类水溶液混合，用喷雾式干燥器得到喷雾干燥微粉末。另外，使生物降解性高分子物质(例如乳酸乙醇酸共聚物(PLGA))溶解于合适的有机溶剂(例如乙腈)后添加生理活性蛋白质/糖类喷雾干燥微粉末，用ポリトロン使其分散。将分散有喷雾干燥微粉末的生物降解性高分子物质溶液加至油中(例如硅油)，以400转进行搅拌、经30分钟10mmHg以下蒸去溶剂。添加异丙醇等，用筛眼大小为20μm的筛子回收微球体后，于0.1mmHg以下进行一定时间的处理。用己烷洗净除去油后，于0.1mmHg以下处理1小时，从而除去己烷。回收筛眼大小为250μm的筛子下面的微球体，得到本发明的组合物。
实施发明的最佳方式
以下列举实施例对本发明进行具体说明，但本发明的范围不限于此。
〔粒径测定法〕
在喷雾干燥微粉末中添加乙腈，用ポリトロン(KINEMATICA GmbH)以10,000转，经1分钟处理使其分散。用激光衍射/散射式粒度分布测定装置(HORIBALA-910)测定一部分或全部分散液。
〔生理活性试验法〕
用于喷雾干燥粉末中的活性测定的试料调制法
使喷雾干燥微粉末溶解于含有7％(w/v)牛血清白蛋白的1/30M磷酸缓冲液pH7.0中之后，用0.22μm的滤器(MILLEX-GV：MILLIPORE)过滤。用荧光光谱仪(F-4500：日立)测定荧光强度(激发波长495nm、荧光波长517nm)，从而算出FITC标记干扰素-α-Con1的浓度，制成试料溶液。
用于微球体中的活性测定的试料调制法
通过向含有喷雾干燥微粉末的微球体添加丙酮使PLGA溶解，离心处理(2,000rpm、10分钟)后，除去上清液。经4次重复该操作回收喷雾干燥微粉末。回收的喷雾干燥微粉末采用上述方法制成试料溶液。
效价测定法
干扰素-α-Con1的效价测定通过抗病毒活性实施(参考文献：蛋白质·核酸·酶、别册25、355-363、1981年)。细胞使用人羊膜衍生株细胞(FL细胞、ATCC编号CCL-62，由国立预防卫生研究所提供的株或同等物)及辛德毕斯(Sindbis)病毒(由国立预防卫生研究所提供的株)。
〔释放试验法〕
在含有荧光素异硫氰酸酯(fluorescein isothiocyanate)(FITC)标记干扰素-α-Con1的PL6A微球体50mg中，添加1/30M磷酸缓冲液(pH7.0)10ml，以60冲程/分钟、在37℃的水浴中保温。于规定时间之后，在上清的一部分中添加等量的含有5％(w/v)十二烷基硫酸钠的0.1N氢氧化钠后，用荧光光谱仪(F-4500：日立)测定荧光强度(激发波长495nm、荧光波长517nm)，由此算出干扰素-α-Con1的释放量。
〔封入率的测定法〕
在含有FITC标记干扰素-α-Con1的PLGA微球体20mg中添加二甲亚砜10ml使之溶解。添加含有5％(w/v)十二烷基硫酸钠的0.1N氢氧化钠10ml后，用荧光光谱仪(F-4500：日立)测定荧光强度(激发波长495nm、荧光波长517nm)，由此算出干扰素-α-Conl的封入率。
实施例1
〔干扰素-α-Con1的FITC标记化〕
在干扰素-α-Conl水溶液(19mg/ml)40ml中，添加pH9.5的碳酸缓冲液150ml，用0.1N氢氧化钠水溶液调制成pH9.5，用冰冷却。将荧光素异硫氰酸酯25mg溶解于碳酸缓冲液之后，添加在经冰冷却的干扰素-α-Con1水溶液中，以规定的时间搅拌。添加1N盐酸调整至pH7.0后，经使用Sephadex G-25的凝胶过滤精制FITC标记干扰素-α-Con1。每1分子干扰素-α-Con1标记的FITC分子数约为0.2。
〔荧光素异硫氰酸酯(FITC)标记干扰素-α-Con1/甘露糖醇喷雾干燥微粉末的制造〕
使FITC标记的干扰素-α-Con1水溶液和甘露糖醇水溶液混合，最终浓度调整为FITC标记干扰素-α-Con15mg/ml、甘露糖醇50mg/ml。喷雾干燥条件为送风入口的温度95-105℃、液体的供给速度6g/分钟、喷雾压2kg/cm2，其结果是送风出口的温度为35-45℃。回收的粉末与硅胶一同保存在密闭容器中。对喷雾干燥微粉末的粒径测定的结果为平均粒径是4.7μm、10μm以下的粒子所占的比例是98.1％。
〔封入FITC标记干扰素-α-Con1/甘露糖醇喷雾干燥微粉末的PLGA微球体的制造〕
将PLGA500mg溶解于乙腈2.5ml后，添加FITC标记干扰素-α-Con1/甘露糖醇喷雾干燥微粉末10mg，用ポリトロン10,000转，经1分钟的处理使其分散。将分散喷雾干燥微粉末的聚合物溶液加入硅油500ml中，以400转进行搅拌，在30分钟10mmHg以下蒸去乙腈。添加异丙醇500ml，用筛孔大小为20μm的筛子回收微球体之后，在0.1mmHg以下处理36小时。用己烷洗净除去硅油之后，在0.1mmHg以下经1小时处理除去己烷。回收筛孔大小为250μm的筛子下的微球体，得到本发明含有生理活性蛋白质的缓释注射用组合物。
实验例1
实施例1调制的微球体中的FITC标记干扰素-α-Con1/甘露糖醇喷雾干燥微粉末的封入率以上述封入率的测定法算出的结果为90％。从微球体的FITC标记干扰素-α-Con1的释放性以上述释放试验法测得的结果为：初期到3小时为止的释放度在5％以下。可持续释放1个月以上。
因此，确认了使用以本发明的甘露糖醇为载体的喷雾干燥微粉末、采用本发明的制造方法调制的微球体，有效地封入了生理活性蛋白质、初期释放得到抑制、且具有经长时间持续释放的特性。
实施例2
〔FITC标记干扰素-α-Con1/2-羟丙基-β-环糊精喷雾干燥微粉末的制造〕
使FITC标记干扰素-α-Con1水溶液和2-羟丙基-β-环糊精水溶液混合，最终浓度调整为FITC标记干扰素-α-Con1 5mg/ml、2-羟丙基-β-环糊精50mg/ml。喷雾干燥条件为送风入口的温度95-105℃、液体的供给速度6g/分钟、喷雾压2kg/cm2，其结果是送风出口的温度为35-45℃。回收的粉末与硅胶一同保存在密闭容器中。对喷雾干燥微粉末的粒径测定的结果为平均粒径是4.0μm、10μm以下的粒子所占的比例是99.4％。
〔封入FITC标记干扰素-α-Con1/2-羟丙基-β-环糊精喷雾干燥微粉末的PLGA微球体的制造〕
将PLGA500mg溶解于乙腈2.5ml后，添加FITC标记干扰素-α-Con1/2-羟丙基-β-环糊精喷雾干燥微粉末10mg，用ポリトロン10,000转，经1分钟的处理使其分散。将分散有喷雾干燥微粉末的聚合物溶液加入硅油500ml中，以400转进行搅拌，于10mmHg以下经30分钟蒸去乙腈。添加异丙醇500ml，用筛孔大小为20μm的筛子回收微球体之后，在0.1mmHg以下处理36小时。用己烷洗净除去硅油之后，在0.1mmHg以下经1小时处理除去己烷。回收筛孔大小为250μm的筛子下的微球体，得到本发明含有生理活性蛋白质的缓释注射用组合物。
实验例2
实施例1调制的PLGA微球体中的FITC标记干扰素-α-Con1/2-羟丙基-β-环糊精喷雾干燥微粉末的封入率以上述封入率的测定法测定的结果为85％。使PLGA微球体在pH7.0的磷酸缓冲液中浸渍时FITC标记干扰素-α-Con1的释放度以上述释放试验法测得的结果为：初期到3小时为止的释放度在10％以下。可持续释放3周以上。
因此，确认了使用以本发明的2-羟丙基-β-环糊精为载体的喷雾干燥微粉末、采用本发明的制造方法调制的微球体，有效地封入了生理活性蛋白质、初期释放得到抑制、且具有经长时间持续释放的特性。
实施例3
使干扰素-α-Con1水溶液和甘露糖醇水溶液混合，最终浓度调整为干扰素-α-Con1 0.5mg/ml、甘露糖醇50mg/ml。喷雾干燥条件为送风入口的温度45-55℃、液体的供给速度3g/分钟、喷雾压2kg/cm2，送风出口的温度为23-28℃。使用回收的干扰素-α-Con1/甘露糖醇喷雾干燥微粉末，以与实施例1相同的制造方法调制含有干扰素-α-Con1的PLGA微球体。
实验例3
〔在含有干扰素-α-Con1的PLGA微球体的制造工序中的干扰素-α-Con1的稳定性〕
使用封入了实施例3所示的干扰素-α-Con1/甘露糖醇喷雾干燥微粉末的PLGA微球体，评价干扰素-α-Con1在制造工序中的稳定性。进行使用FL细胞和辛德毕斯病毒的抗病毒活性测定。与干扰素-α-Con1溶液的活性值比较的结果表明，封入PLGA微球体的干扰素-α-Con1的活性为103.5％，确认了在制造工序中未发生失活。保持着稳定性。
比较例1
〔共有序列(consensus)干扰素/聚乙二醇4000喷雾干燥微粉末的制造〕
使共有序列干扰素水溶液和聚乙二醇4000水溶液混合，最终浓度调整为共有序列干扰素0.2mg/ml、聚乙二醇400020mg/ml。喷雾干燥条件为送风入口的温度47-52℃、液体的供给速度3g/分钟、喷雾压2kg/cm2，送风出口的温度为26-31℃。回收的粉末与硅胶一同保存在密闭的容器中。
〔在含有共有序列干扰素的PLGA微球体的制造工序中共有序列干扰素的稳定性〕
为了评价共有序列干扰素/聚乙二醇4000喷雾干燥微粉末在制造工序中的稳定性，进行使用FL细胞和辛德毕斯病毒的抗病毒活性测定。与共有序列干扰素溶液的活性值比较的结果表明，共有序列干扰素/甘露糖醇喷雾干燥微粉末的活性为31.2％，确认了在制造工序中失活。因此，与实施例比较的结果确认了利用糖类可避免制造工序中的共有序列干扰素的失活。
比较例2
〔FITC标记共有序列干扰素/甘露糖醇冷冻干燥微粉末的制造〕
使FITC标记共有序列干扰素水溶液和甘露糖醇水溶液混合，最终浓度调整为FITC标记共有序列干扰素3.9mg/ml、甘露糖醇50mg/ml、进行冷冻干燥。对冷冻干燥粉末的粒径测定的结果为平均粒径是69.3μm、10μm以下的粒子所占的比例是3.3％。
〔封入FITC标记共有序列干扰素/甘露糖醇冷冻干燥微粉末的PLGA微球体的制造〕
将PLGA500mg溶解于乙腈2.5ml后，添加FITC标记共有序列干扰素/甘露糖醇冷冻干燥微粉末10mg，用ポリトロン10,000转，经1分钟的处理使其分散。将分散冷冻干燥微粉末的聚合物溶液加入硅油500ml中，以400转进行搅拌，于10mmHg以下经30分钟蒸去乙腈。添加异丙醇500ml，用筛孔大小为20μm的筛子回收微球体之后，在0.1mmHg以下处理36小时。用己烷洗净除去硅油之后，在0.1mmHg以下经1小时处理除去己烷。回收筛孔大小为250μm的筛子下的微球体，得到本发明含有生理活性蛋白质的缓释注射用组合物。
〔从封入FITC标记共有序列干扰素/甘露糖醇冷冻干燥微粉末的PLGA微球体的初期释放度的评价〕
微球体中的FITC标记共有序列干扰素/甘露糖醇冷冻干燥微粉末的封入率以上述封入率的测定法算出的结果为122％。从微球体的FITC标记共有序列干扰素的释放度以上述释放试验法测得的结果为：初期到3小时为止的释放度为68％。
因此，确认了使用本发明的喷雾干燥微粉末的含有生理活性蛋白质的缓释注射用组合物不仅有效地封入生理活性蛋白质、初期释放得到抑制、且具有长时间持续释放的特性，而且生理活性蛋白质的生理活性也得到保持。加之如果喷雾干燥微粉末的粒径在10μm以下的占90％以上，则可得到封入率、初期释放均良好的微球体。
实施例4
〔BMP-2实验方法〕
用于喷雾干燥微粉末中的活性测定的试料调制法
将喷雾干燥微粉末溶解于稀释用的缓冲液(0.01％吐温80甘氨酸缓冲液pH4.5，采用微罗利(マイクロロ一リ一)法测定BMP-2的浓度，使用含有10％胎牛血清的杜尔贝科(ダルベッコ)改良的MEM培养基(pH7.4)，由用稀释用缓冲液调制的BMP-2溶解液制成BMP-2浓度约为0.488-1380ng/mL的稀释系列，作为试料溶液使用。
用于微球体中的活性测定的试料调制法
在含有喷雾干燥微粉末的微球体中添加丙酮，使PLGA溶解，经离心处理后(2000rpm、10分钟)后，除去上清液。经4次重复该操作回收喷雾干燥微粉末。
回收的喷雾干燥微粉末采用与上述相同的方法制作试料溶液。
效价测定法
BMP-2的效价是测定依赖于BMP-2浓度的亢进细胞的碱性磷酸酶活性(参考文献：内分泌学130卷、1992年1318-1324页)。细胞是使用骨髓基质细胞的W20细胞(由遗传学研究院(现为Wyeth公司)提供的细胞株)。
〔BMP-2/甘露糖醇喷雾干燥微粉末的制造〕
使BMP-2水溶液和甘露糖醇水溶液混合，最终浓度调整为BMP-2 0.5mg/ml、甘露糖醇50mg/ml。喷雾干燥条件为送风入口的温度48-53℃、液体的供给速度3g/分钟、喷雾压2kg/cm2，其结果是送风出口的温度为26-31℃。回收的粉末与硅胶一同保存在密闭容器中。对喷雾干燥微粉末的粒径测定的结果为平均粒径是4.9μm、10μm以下的粒子所占的比例是97.9％。
实施例5
〔BMP-2/甘露糖醇/吐温80喷雾干燥微粉末的制造〕
使BMP-2水溶液和甘露糖醇/吐温80水溶液混合，最终浓度调整为BMP-20.5mg/ml、甘露糖醇50mg/ml、吐温801mg/ml。喷雾干燥条件为送风入口的温度48-53℃、液体的供给速度3g/分钟、喷雾压2kg/cm2，其结果是送风出口的温度为27-32℃。回收的粉末与硅胶一同保存在密闭容器中。对喷雾干燥微粉末的粒径测定的结果为平均粒径是6.2μm、10μm以下的粒子所占的比例是90.2％。
实施例6
〔BMP-2/甘露糖醇/甘氨酸喷雾干燥微粉末的制造〕
使BMP-2水溶液和甘露糖醇/甘氨酸水溶液混合，最终浓度调整为BMP-20.5mg/ml、甘露糖醇45mg/ml、甘氨酸5mg/ml。喷雾干燥条件为送风入口的温度48-53℃、液体的供给速度3g/分钟、喷雾压2kg/cm2，其结果是送风出口的温度为26-31℃。回收的粉末与硅胶一同保存在密闭容器中。对喷雾干燥微粉末的粒径测定的结果为平均粒径是4.6μm、10μm以下的粒子所占的比例是98.3％。
实施例7
〔BMP-2/2-羟丙基-β-环糊精喷雾干燥微粉末的制造〕
使BMP-2水溶液和2-羟丙基-β-环糊精水溶液混合，最终浓度调整为BMP-2 0.5mg/ml、2-羟丙基-β-环糊精50mg/ml。喷雾干燥条件为送风入口的温度48-53℃、液体的供给速度3g/分钟、喷雾压2kg/cm2，其结果是送风出口的温度为26-31℃。回收的粉末与硅胶一同保存在密闭容器中。对喷雾干燥微粉末的粒径测定的结果为平均粒径是4.7μm、10μm以下的粒子所占的比例是98.3％。
实施例8
〔BMP-2/2-羟丙基-β-环糊精/吐温80喷雾干燥微粉末的制造〕
使BMP-2水溶液和2-羟丙基-β-环糊精水溶液混合，最终浓度调整为BMP-20.5mg/ml、2-羟丙基-β-环糊精50mg/ml、吐温801mg/mL。喷雾干燥条件为送风入口的温度47-52℃、液体的供给速度3g/分钟、喷雾压2kg/cm2，其结果是送风出口的温度为26-31℃。回收的粉末与硅胶一同保存在密闭容器中。对喷雾干燥微粉末的粒径测定的结果为平均粒径是6.3μm、10μm以下的粒子所占的比例是90.1％。
实施例9
〔BMP-2/2-羟丙基-β-环糊精/甘氨酸喷雾干燥微粉末的制造〕
使BMP-2水溶液和2-羟丙基-β-环糊精/甘氨酸水溶液混合，最终浓度调整为BMP-20.5mg/ml、2-羟丙基-β-环糊精45mg/ml、甘氨酸5mg/mL。喷雾干燥条件为送风入口的温度48-53℃、液体的供给速度3g/分钟、喷雾压2kg/cm2，其结果是送风出口的温度为25-30℃。回收的粉末与硅胶一同保存在密闭容器中。对喷雾干燥微粉末的粒径测定的结果为平均粒径是5.8μm、10μm以下的粒子所占的比例是97.2％。
实施例10
〔封入含有BMP-2的喷雾干燥微粉末的PLGA微球体的制造〕
将PLGA500mg溶解于乙腈2.5ml后，添加BMP-2/2-羟丙基-β-环糊精喷雾干燥微粉末10mg，用ポリトロン10,000转，经1分钟的处理使其分散。将分散喷雾干燥微粉末的聚合物溶液加入硅油500ml中，以400转进行搅拌，在30分钟10mmHg以下蒸去乙腈。添加异丙醇500ml，用筛孔大小为20μm的筛子回收微球体之后，在0.1mmHg以下处理36小时。用己烷洗净除去硅油之后，在0.1mmHg以下经1小时处理除去己烷。回收筛孔大小为250μm的筛子下的微球体，得到本发明含有生理活性蛋白质的缓释注射用组合物。
实验例4
〔含有BMP-2的喷雾干燥粉末及PLGA微球体中的BMP-2的稳定性〕
为了评价含有BMP-2的喷雾干燥粉末及PLGA微球体中封入的BMP-2在制造工序中的稳定性，进行使用W20细胞的活性测定。与BMP-2溶液的活性值比较的结果表明，BMP-2-甘露糖醇喷雾干燥微粉末及使用BMP-2-2-羟丙基-β-环糊精喷雾干燥微粉末的PLGA微球体中封入的BMP-2的活性分别保持为高活性的105.7％、103.9％。确认了在制造工序中未失活而保持稳定状态。
实施例11
〔氯化溶菌酶实验方法〕
用于喷雾干燥微粉末中的活性测定的试料调制法
将喷雾干燥微粉末用精制水溶解，采用微罗利法测定氯化溶菌酶的浓度，使用pH6.2的磷酸缓冲溶液稀释，使蛋白浓度为1μg/mL，作为试料溶液使用。
用于微球体中的活性测定的试料调制法
在含有喷雾干燥微粉末的微球体中添加丙酮，使PLGA溶解，经离心处理(2000rpm、10分钟)后，除去上清液。经4次重复该操作回收喷雾干燥微粉末。
回收的喷雾干燥微粉末采用与上述相同的方法制作试料溶液。
效价测定法
氯化溶菌酶的效价是以依从于氯化溶菌酶的浓度而变化的底物溶解性为指标进行测定(参考文献：日本药局方外医药品规格，1997，P352-353)。底物使用溶壁微球菌的干燥菌体。
〔氯化溶菌酶/甘露糖醇喷雾干燥微粉末的制造〕
使氯化溶菌酶水溶液和甘露糖醇水溶液混合，最终浓度调整为氯化溶菌酶5mg/ml、甘露糖醇50mg/ml。喷雾干燥条件为送风入口的温度48-53℃、液体的供给速度3g/分钟、喷雾压2kg/cm2，其结果是送风出口的温度为24-30℃。回收的粉末与硅胶一同保存在密闭容器中。对喷雾干燥微粉末的粒径测定的结果为平均粒径是4.9μm、10μm以下的粒子所占的比例是96.6％。
实施例12
〔氯化溶菌酶/2-羟丙基-β-环糊精喷雾干燥微粉末的制造〕
使氯化溶菌酶水溶液和2-羟丙基-β-环糊精水溶液混合，最终浓度调整为氯化溶菌酶10mg/ml、甘露糖醇50mg/ml。喷雾干燥条件为送风入口的温度49-50℃、液体的供给速度3g/分钟、喷雾压2kg/cm2，其结果是送风出口的温度为27-29℃。回收的粉末与硅胶一同保存在密闭容器中。对喷雾干燥微粉末的粒径测定的结果为平均粒径是5.8μm、10μm以下的粒子所占的比例是90.9％。
〔封入含有氯化溶菌酶的喷雾干燥微粉末的PLGA微球体的制造〕
将PLGA500mg溶解于乙腈2.5ml后，添加含有氯化溶菌酶的喷雾干燥微粉末10mg，用ポリトロン10,000转，经1分钟的处理使其分散。将分散有喷雾干燥微粉末的聚合物溶液加入硅油500ml中，以400转进行搅拌，在30分钟10mmHg以下蒸去乙腈。添加异丙醇500ml，用筛孔大小为20μm的筛子回收微球体之后，在0.1mmHg以下处理36小时。用己烷洗净除去硅油之后，在0.1mmHg以下经1小时处理除去己烷。回收筛孔大小为250μm的筛子下的微球体，得到含有生理活性蛋白质的缓释注射用组合物。
实验例5
〔在含有氯化溶菌酶的PLGA微球体的制造工序中的氯化溶菌酶的稳定性〕
为了评价氯化溶菌酶溶液、含有氯化溶菌酶的喷雾干燥微粉末、PLGA微球体中封入的氯化溶菌酶在制造工序中的稳定性，进行使用溶壁微球菌干燥菌体的活性测定。与氯化溶菌酶溶液的活性值比较的结果表明，使用氯化溶菌酶/甘露糖醇喷雾干燥微粉末的PLGA微球体中氯化溶菌酶的活性值为90.1％，使用氯化溶菌酶/2-羟丙基-β-环糊精喷雾干燥微粉末的PLGA微球体中氯化溶菌酶的活性为92.6％。均显示不小于90％的活性。确认了在制造工序中保持不失活的稳定状态。
产业上利用的可能性
根据本发明，通过使用糖类，干燥温度可不需设定为高温即可实施喷雾干燥，从而可避免由于热而导致的生理活性蛋白质的变性和失活，调制粒径得到控制的蛋白质微粉末变得极为容易。此外，使用保持有生理活性、粒径得到充分控制的蛋白质微粉末，可均匀分散于生物降解性高分子溶液中，保持内包于微球体内的生理活性蛋白质的生理活性、还可实现在微球体中的高封入率、抑制初期释放。
因此本发明可以高封入率将喷雾干燥微粉末封入缓释微球体中，同时，可抑制自微球体的初期释放及达到持续的释放，在制剂的过程中一般难以保持生理活性蛋白质的生理活性，本发明可提供生理活性蛋白质的生产性高的缓释注射用组合物。

Claims (11)

1.含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法，其特征在于，使以生理活性蛋白质和甘露醇及/或2-羟丙基-β-环糊精为实质性的组成成分、且粒径在10μm以下的粒子占90％以上的喷雾干燥微粉末分散于生物降解性高分子物质的有机溶剂溶液中之后，在油类中除去该有机溶剂而制得。
2.根据权利要求1所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法，其特征在于，使粒径在6μm以下的喷雾干燥微粉末所占的比例为50％以上。
3.根据权利要求1所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法，其特征在于，生物降解性高分子物质为乳酸-乙醇酸的共聚物。
4.根据权利要求1所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法，其特征在于，生理活性蛋白质为干扰素类。
5.根据权利要求4所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法，其特征在于，干扰素类为干扰素-α-Con1。
6.根据权利要求1所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法，其特征在于，油类为硅油、大豆油、芝麻油、棉子油、矿物油。
7.根据权利要求6所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法，其特征在于，油类为硅油。
8.根据权利要求1所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法，其特征在于，组合物为微球体。
9.根据权利要求8所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法，其特征在于，微球体的平均粒径约为20-250μm。
10.根据权利要求1所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法，其特征在于，喷雾干燥微粉末的浓度相对于生物降解性高分子物质的重量比为0.01-10％。
11.根据权利要求1所述的含有生理活性蛋白质的缓释注射剂用组合物的制造方法，其特征在于，生理活性蛋白质的含有量相对于甘露醇及/或2-羟丙基-β-环糊精的重量比约为0.01-80％。
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