CN1310637C - 一种鹿茸精冻干粉针制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药制药技术领域,具体公开了一种鹿茸精冻干粉针制剂,它是由鹿茸精中分子量小于15000的提取物和水溶性注射用药用辅料制备而成的。本发明还公开了上述冻干粉针制剂的制备方法。安全性实验和药理实验结果表明,本发明制剂的安全性、治疗效果均好于市售的同类产品。
Description
技术领域
本发明属于中药制药技术领域,具体涉及一种鹿茸精冻干粉针制剂及其制备方法。
背景技术
鹿茸为鹿科动物梅花鹿Cervus nippon Temminck或马鹿Cervus elaphusLinnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角。前者习称“花鹿茸”,后者习称“马鹿茸”。《本草纲目》中记载:鹿茸“生精补髓,养血益阳,强筋健骨”。药理研究表明,鹿茸具有壮肾阳、益精血、强筋骨、调冲任、托疮毒之功效。据文献报道,鹿茸的化学成分主要包括:氨基酸、多肽、核酸及其碱基成分、脂质类(性激素、卵磷脂、神经节苷脂、前列腺素等)、芳香族化合物、酶类(过氧化物酶等)、多糖类及糖脂、维生素类、无机盐及微量元素等。
由鹿茸经过提取制成的鹿茸精注射液[部颁中药十一册],能增强肌体活力及促进细胞新陈代谢,但是鹿茸精注射液的制备经过多次醇沉工艺,生产周期长、物料消耗大、占用设备设施多、药液收率低、生产成本高,而且使用时经常伴有不良反应。文献[李钟,几种常用补益中药的不良反应。湖南中医药导报,1997,3(1):47]报道,鹿茸精注射液很容易出现过敏反应,多在肌注鹿茸精注射液几分钟或半小时内发生,表现为面色苍白、头晕、心慌、气短、烦闷,甚至小便失禁、大汗淋漓、呼吸急促、血压下降、昏迷不省等过敏性休克。
鹿茸药材中的许多有效成分对热非常的敏感,高温很容易使这些有效成分变性。对鹿茸药材中的有效成分进行加热提取,大分子的物质在水解成为小分子的有效成分的同时,很容易使得许多不耐热的小分子活性成分被破坏,从而影响了药物的疗效。分析鹿茸精注射液不良反应的发生原因,一个可能的原因是由于鹿茸精注射液的制备方法中没有去除干净鹿茸药材中含有的大量对于人体不利的大分子的异体蛋白而造成的。虽然在已公开的专利文献中有关于鹿茸有效成分的提取方法,但是对于上述的两个缺陷都没有从根本上得到解决。
鹿茸精注射液中含有的抑菌剂甲酚,在大量使用或长期使用时,对人体也会产生副作用。
在资料检索中未发现有关鹿茸精冻干粉针制剂的任何报道。
发明内容
针对鹿茸精注射液中的问题,本发明采用现代提取工艺和纯化方法,克服传统工艺的不足,提高鹿茸精注射制剂的安全性和治疗效果。
本发明的目的是公开一种疗效更好、安全性更高、使用方便的鹿茸精冻干粉针制剂。
本发明的另一个目的是提供上述鹿茸精冻干粉针制剂的制备方法。
本发明通过一下技术方案实现。
一、制备方法
(1)取鹿茸药材,粉碎,过80目筛,加入4-10倍量1℃-10℃水放入超声提取罐中,进行超声振荡提取,时间为30-60分钟,振荡频率为20-80kHz,提取3-4次,合并提取液,过滤,残渣备用;滤液用截留分子量为10000的超滤膜超滤,收集通过液作为提取液A;
(2)将上述超滤未通过液和药渣合并,加入95%乙醇使得含醇量为30%-60%,回流提取2-3次,每次2-3小时,合并提取液,放冷,静置,过滤,滤液用截留分子量为10000-15000的超滤膜超滤,收集通过液,减压回收乙醇,得提取液B:
(3)将上述超滤未通过液减压回收乙醇后,用0.2%盐酸溶液加热水解1小时,放冷,用氢氧化钠溶液调节pH值为7.0,静置,过滤,滤液用截留分子量为10000-15000的超滤膜超滤,收集通过液,作为提取液C;
(4)将提取液A、提取液B和提取液C合并,40℃旋转刮膜浓缩,干燥,粉碎,得到提取物;
(5)将上述提取物用注射用水溶解,加入水溶性注射用药用辅料,调节pH值至5.6-6.8,用0.22μm微孔滤膜过滤,冷冻干燥,制备成冻干粉针制剂。
超声提取技术是利用超声波产生强烈振动,高速度,强烈的空化效应,搅拌作用,能破坏鹿茸药材的细胞,使溶剂能渗透到药材细胞中,从而加速药材中的有效成分溶解于溶剂中。超声技术提出率高、提取时间短、提取温度低,对于鹿茸药材中遇热不稳定的物质是理想的提取方法,而且可以大大提高后续提取的效率。
超滤技术是指常温下以一定压力和流量,利用不对称微孔结构和半透膜分离介质、以错流方式进行过滤,使溶剂及小分子物质通过,高分子物质被滤膜阻留,从而达到分离、纯化、浓缩的发展最快的新型膜分离技术。与传统分离方法相比,具有分离过程无相变、分离效率高、无需添加化学试剂无污染、无需加热、能耗低、条件温和不破坏成分、操作方便、流程短的特点。本发明利用超滤技术,选择合适的超滤膜,使得小分子的有效成分顺利通过,而大分子的、对人体有害的异体蛋白和其它无活性物质则被阻留,对有效成分达到了很好的纯化作用。
本发明制备方法在对鹿茸的有效成分提取过程中分两步:第一步利用超声振荡在低温条件下、高效率的从鹿茸中提取出分子量小于10000的有效成分,以免在以后的提取过程中因长时间受热而变质;第二步从除去小分子有效成分的残渣和残液中提取大分子量的、对人体注射有不良反应的异体蛋白,并在提取的同时,利用其遇热性质上的不稳定性进行水解,使其转化为分子量小于15000的有活性的多肽。本发明制备方法的两个步骤相辅相成、缺一不可,最终不但使得有效成分的含量明显升高,最大限度的保留了有效成分,而且也使得不利的成分改变为有效成分,从而也就增强了疗效。
本发明鹿茸精冻干粉针制剂安全性的提高,使得制剂不但可以肌肉和皮下注射使用,也可以静脉注射使用。
二、制剂安全性比较
为了证实本发明鹿茸精冻干粉针制剂制备方法的科学性、合理性,本发明鹿茸精冻干粉针制剂相对于现有注射制剂来说更加安全,本发明研究人员进行了以下实验。
鹿茸药材为市售的同一批鹿茸药材。鹿茸精注射液按照[部颁中药十一册]中鹿茸精注射液项下的制法制备而成,规格为0.2g/2ml/支,本发明鹿茸精冻干粉针制剂按照上述的制备方法制成,规格为0.2g/支,使用前用生理盐水配制成2ml溶液;样品由广东天之骄药物开发有限公司提供。
1、制剂中蛋白质含量比较
取鹿茸精注射液和鹿茸精冻干粉针制剂溶液各3ml,加新配制的30%磺基水杨酸溶液1ml,混匀,放置5分钟,观察混浊情况。结果见表1。
表1蛋白质含量比较实验结果
批号 | 结果 | |
鹿茸精注射液 | 鹿茸精冻干粉针制剂 | |
1234 | +±±+ | ---- |
注:-表示无混浊;±表示轻微混浊;+表示混浊。
以上含量测定结果可以看出,本发明鹿茸精冻干粉针制剂中蛋白质的含量明显低于鹿茸精注射液,说明本发明制备方法对于大分子量的蛋白质的去除是成功的。
2、过敏反应
过敏反应又称变态反应,是机体受某些抗原物质刺激所产生的特异反应,一般认为能诱发过敏反应的抗原物质主要是蛋白质、多肽、多糖等大分子物质(具有完全抗原性、为全抗原)。本发明利用过敏反应来进一步观察本发明制剂的安全性。
取健康无伤豚鼠20只,体重250-300g,随机分为两组,每组10只,分别为:鹿茸精注射液组、鹿茸精冻干粉针制剂组。分别按无菌操作,每天每只肌肉注射供试品4.0ml,共5次。观察注射后动物的过敏反应症状。
结果:鹿茸精注射液组中有4只豚鼠出现了过敏反应,而本发明鹿茸精冻干粉针制剂组中豚鼠的过敏反应发生率为零。说明在相同的给药剂量下,本发明鹿茸精冻干粉针制剂的安全性更好。
三、有效成分含量比较
精密吸取上述实验的鹿茸精注射液2ml和鹿茸精冻干粉针制剂一支用2ml注射用水溶解,分别置蒸发皿中,在水浴上蒸干,残渣用水溶解,并定容转移至25ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,用截留分子量为15000的超滤膜超滤,滤液按照[部颁中药十一册]中鹿茸精注射液项下检查中的分光光度法测定,在253±2nm波长处测定其吸收度。结果见表2。
表2有效成分含量比较实验结果
批号 | 吸收度 | |
鹿茸精注射液 | 鹿茸精冻干粉针制剂 | |
1234 | 0.5160.5200.5080.512 | 0.5840.5900.6020.576 |
由以上测定结果可以看出,本发明鹿茸精冻干粉针制剂中有效成分的含量明显高于鹿茸精注射液。
四、药理实施例
以下用药理实验进一步证实本发明的有益效果。鹿茸精注射液由吉林敖东延边药业股份有限公司生产(2ml/支);本发明鹿茸精粉针制剂由广东天之骄药物开发有限公司提供。
1、对小鼠体重的影响
取小鼠40只,随机分为4组,即对照组、鹿茸精注射液组、本发明鹿茸精冻干粉针制剂低剂量组、本发明鹿茸精冻干粉针制剂高剂量组,每组10只。鹿茸精注射液组给药剂量为0.20g/kg,本发明鹿茸精冻干粉针制剂低剂量组给药剂量为0.15g/kg,本发明鹿茸精冻干粉针制剂高剂量组给药剂量为0.20g/kg。每天皮下注射给药一次,连续给药10天。分别于给药前和给药后第10天称量小鼠体重。结果见表3。
表3对小鼠体重的影响(X±S)
组别 | 体重 | ||
给药前 | 给药后 | ||
对照组鹿茸精注射液组 | 20.4±1.520.2±1.6 | 21.3±1.324.7±1.6** | |
鹿茸精冻干粉针制剂 | 低剂量组高剂量组 | 20.6±1.520.3±1.4 | 24.2±1.7**27.5±2.0**# |
注:与对照组比较:**P<0.01;
与鹿茸精注射液组比较:#P<0.05;
由以上实验结果可以看出,本发明鹿茸精冻干粉针制剂和鹿茸精注射液均可明显增加小鼠体重,与对照组比较有显著性的差异;本发明鹿茸精冻干粉针制剂和鹿茸精注射液在相同的给药剂量下,对小鼠体重的增加也有差异,说明本发明鹿茸精冻干粉针制剂好于鹿茸精注射液。
2、对小鼠游泳时间的影响
取小鼠40只,鼠尾系小鼠体重10%的负荷,在25℃温水中进行游泳耐力试验,按游泳时间随机分为4组,分组及给药方法、剂量同上。记录小鼠从放入至无力冲起沉入水底的时间。结果见表4。
表4对小鼠游泳时间的影响(X±S)
组别 | 游泳时间(min) | |
对照组鹿茸精注射液组 | 8.52±1.4618.44±3.87** | |
鹿茸精冻干粉针制剂 | 低剂量组高剂量组 | 17.86±3.24**24.38±3.65**# |
注:与对照组比较:**P<0.01;
与鹿茸精注射液组比较:#P<0.05;
由以上实验结果可以看出,本发明鹿茸精冻干粉针制剂和鹿茸精注射液均可明显延长小鼠游泳时间,与对照组比较有显著性的差异;本发明鹿茸精冻干粉针制剂和鹿茸精注射液在相同的给药剂量下,对小鼠游泳时间的延长也有差异,说明本发明鹿茸精冻干粉针制剂好于鹿茸精注射液。
3、对小鼠耐寒能力的影响
小鼠40只,随机分为4组,给药方法与剂量同上,连续10天。第11天将小鼠放入-20℃冰箱中,记录自小鼠放入-20℃冰箱到死亡的时间。结果见表5。
表5对小鼠耐寒能力的影响(X±S)
组别 | -20℃存活时间(min) | |
对照组鹿茸精注射液组 | 227.3±40.5304.6±41.4** | |
鹿茸精冻干粉针制剂 | 低剂量组高剂量组 | 296.2±33.8**332.8±38.2**# |
注:与对照组比较:**P<0.01;
与鹿茸精注射液组比较:#P<0.05;
由以上实验结果可以看出,本发明鹿茸精冻干粉针制剂和鹿茸精注射液均可明显延长小鼠-20℃存活时间,与对照组比较有显著性的差异;本发明鹿茸精冻干粉针制剂和鹿茸精注射液在相同的给药剂量下,对小鼠-20℃存活时间的延长也有差异,说明本发明鹿茸精冻干粉针制剂好于鹿茸精注射液。
总结:以上药理实验说明,本发明制备方法得到的本发明鹿茸精冻干粉针制剂的药理作用明显好于市售的同类产品的效果。说明,本发明制备方法得到的本发明制剂中有效成分的含量更高,进一步说明本发明的制备方法是科学的、合理的。
五、制备实施例
实施例1
取鹿茸药材2kg,粉碎,过80目筛,加入10倍量1℃水放入超声提取罐中,进行超声振荡提取,时间为30分钟,振荡频率为80kHz,提取4次,合并提取液,过滤,残渣备用;提取液用截留分子量为10000的超滤膜超滤,收集通过液作为提取液A;将上述超滤未通过液和药渣合并,加入95%乙醇使得含醇量为30%,回流提取2次,每次3小时;合并提取液,放冷,静置,过滤,滤液用截留分子量为15000的超滤膜超滤,收集通过液,减压回收乙醇,得提取液B;将未通过液减压回收乙醇后,用0.2%盐酸溶液加热水解1小时,放冷,用氢氧化钠溶液调节pH值为7.0,静置,过滤,滤液用截留分子量为15000的超滤膜超滤,收集通过液,作为提取液C;将提取液A、提取液B和提取液C合并,40℃旋转刮膜浓缩,干燥,粉碎,得到提取物;将上述提取物用注射用水溶解,加入聚乙烯吡咯烷酮,调节pH值至5.6,用0.22μm微孔滤膜过滤,冷冻干燥,制备成冻干粉针制剂10000支。
实施例2
取鹿茸药材2kg,粉碎,过80目筛,加入4倍量10℃水放入超声提取罐中,进行超声振荡提取,时间为60分钟,振荡频率为20kHz,提取3次,合并提取液,过滤,残渣备用;提取液用截留分子量为10000的超滤膜超滤,收集通过液作为提取液A;将上述超滤未通过液和药渣合并,加入95%乙醇使得含醇量为60%,回流提取3次,每次2小时;合并提取液,放冷,静置,过滤,滤液用截留分子量为10000的超滤膜超滤,收集通过液,减压回收乙醇,得提取液B;将未通过液减压回收乙醇后,用0.2%盐酸溶液加热水解1小时,放冷,用氢氧化钠溶液调节pH值为7.0,静置,过滤,滤液用截留分子量为10000的超滤膜超滤,收集通过液,作为提取液C;将提取液A、提取液B和提取液C合并,40℃旋转刮膜浓缩,干燥,粉碎,得到提取物;将上述提取物用注射用水溶解,加入甘露醇,调节pH值至6.8,用0.22μm微孔滤膜过滤,冷冻干燥,制备成冻干粉针制剂10000支。
实施例3
取鹿茸药材2kg,粉碎,过80目筛,加入8倍量6℃水放入超声提取罐中,进行超声振荡提取,时间为40分钟,振荡频率为60kHz,提取3次,合并提取液,过滤,残渣备用;提取液用截留分子量为10000的超滤膜超滤,收集通过液作为提取液A;将上述超滤未通过液和药渣合并,加入95%乙醇使得含醇量为45%,回流提取2次,每次3小时;合并提取液,放冷,静置,过滤,滤液用截留分子量为13000的超滤膜超滤,收集通过液,减压回收乙醇,得提取液B;将未通过液减压回收乙醇后,用0.2%盐酸溶液加热水解1小时,放冷,用氢氧化钠溶液调节pH值为7.0,静置,过滤,滤液用截留分子量为13000的超滤膜超滤,收集通过液,作为提取液C;将提取液A、提取液B和提取液C合并,40℃旋转刮膜浓缩,干燥,粉碎,得到提取物;将上述提取物用注射用水溶解,加入果糖,调节pH值至6.0,用0.22μm微孔滤膜过滤,冷冻干燥,制备成冻干粉针制剂10000支。
实施例4
取鹿茸药材2kg,粉碎,过80目筛,加入6倍量3℃水放入超声提取罐中,进行超声振荡提取,时间为50分钟,振荡频率为40kHz,提取4次,合并提取液,过滤,残渣备用;提取液用截留分子量为10000的超滤膜超滤,收集通过液作为提取液A;将上述超滤未通过液和药渣合并,加入95%乙醇使得含醇量为40%,回流提取3次,每次2小时;合并提取液,放冷,静置,过滤,滤液用截留分子量为12000的超滤膜超滤,收集通过液,减压回收乙醇,得提取液B;将未通过液减压回收乙醇后,用0.2%盐酸溶液加热水解1小时,放冷,用氢氧化钠溶液调节pH值为7.0,静置,过滤,滤液用截留分子量为12000的超滤膜超滤,收集通过液,作为提取液C;将提取液A、提取液B和提取液C合并,40℃旋转刮膜浓缩,干燥,粉碎,得到提取物;将上述提取物用注射用水溶解,加入右旋糖苷,调节pH值至6.4,用0.22μm微孔滤膜过滤,冷冻干燥,制备成冻干粉针制剂10000支。
实施例5
取鹿茸药材2kg,粉碎,过80目筛,加入9倍量8℃水放入超声提取罐中,进行超声振荡提取,时间为45分钟,振荡频率为50kHz,提取4次,合并提取液,过滤,残渣备用;提取液用截留分子量为10000的超滤膜超滤,收集通过液作为提取液A;将上述超滤未通过液和药渣合并,加入95%乙醇使得含醇量为50%,回流提取2次,每次3小时;合并提取液,放冷,静置,过滤,滤液用截留分子量为14000的超滤膜超滤,收集通过液,减压回收乙醇,得提取液B;将未通过液减压回收乙醇后,用0.2%盐酸溶液加热水解1小时,放冷,用氢氧化钠溶液调节pH值为7.0,静置,过滤,滤液用截留分子量为14000的超滤膜超滤,收集通过液,作为提取液C;将提取液A、提取液B和提取液C合并,40℃旋转刮膜浓缩,干燥,粉碎,得到提取物;将上述提取物用注射用水溶解,加入葡聚糖,调节pH值至5.8,用0.22μm微孔滤膜过滤,冷冻干燥,制备成冻干粉针制剂10000支。
Claims (1)
1.一种鹿茸精冻干粉针制剂,其特征在于该粉针剂是以鹿茸中提取的分子量小于15000的提取物为有效成分的制剂,其制备方法为:
(1)取鹿茸药材,粉碎,过80目筛,加入4-10倍量1℃-10℃水放入超声提取罐中,进行超声振荡提取,时间为30-60分钟,振荡频率为20-80kHz,提取3-4次,合并提取液,过滤,残渣备用;滤液用截留分子量为10000的超滤膜超滤,收集通过液作为提取液A;
(2)将上述超滤未通过液和药渣合并,加入95%乙醇使得含醇量为30%-60%,回流提取2-3次,每次2-3小时,合并提取液,放冷,静置,过滤,滤液用截留分子量为10000-15000的超滤膜超滤,收集通过液,减压回收乙醇,得提取液B;
(3)将上述超滤未通过液减压回收乙醇后,用0.2%盐酸溶液加热水解1小时,放冷,用氢氧化钠溶液调节pH值为7.0,静置,过滤,滤液用截留分子量为10000-15000的超滤膜超滤,收集通过液,作为提取液C;
(4)将提取液A、提取液B和提取液C合并,浓缩,浓缩方法为40℃旋转刮膜浓缩,干燥,粉碎,得到提取物;
(5)将上述提取物用注射用水溶解,加入水溶性注射用药用辅料,调节pH值至5.6-6.8,用0.22μm微孔滤膜过滤,冷冻干燥,制备成冻干粉针制剂。
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