CN1302767C - 治疗中风注射剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及治疗中风的注射剂领域，特别涉及含有治疗中风的植物中草药有效成分的注射剂领域。本发明治疗中风注射剂含有5～100g/L的β-细辛醚及药学上可接受的注射溶剂，其中注射溶剂为水、乙醇、丙二醇其中一种或两种以上混合物。本发明具有用药剂量少、药物吸收速度快、避免对胃肠的刺激作用、避免首过效应、生物利用度高等特点。
Description
发明领域
本发明涉及治疗中风的注射剂领域，特别涉及含有治疗中风的植物中草药有效成分的注射剂领域。
技术背景
中风是指脑动脉系统病损引起的血管痉挛、闭塞或破裂，造成急剧发展的脑局部循环和功能障碍，常引起神志昏迷、失语、偏瘫、偏麻等，属危急重症，具有较高的死亡率和致残率。临床上对中风的治疗方法除了给氧和对症治疗之外，常用甘露醇脱水或激素，其副作用显而易见，如肾损害、水与电解质紊乱、上消化道出血等；在药物方面，西医主要应用抗血栓剂、溶栓剂、血液流变学改善剂等，疗效并不理想，钙通道阻断剂和纳络酮等的作用也未得到肯定。中医药在治疗中风上取得较大进展。中医学认为急性中风的主要病机是内风邪热、痰火闭窍，治疗主要采用清热化痰开窍法。开窍药是中医急救的常用药，治疗抢救多种危重疾病往往获得良效。其中脉络宁以及由清热化痰开窍古方安宫牛黄丸剂型改革而成的清开灵或醒脑静注射液被列为全国中医医院急诊科(室)必备中成药。该类药对中枢神经系统(CNS)、循环系统、脑细胞的超微结构等方面有着确切的药理作用，是一类很有前途的治疗脑病的药物。但现有的中成药多为复方制剂，存在成分复杂不清，有效成分不明，含量测定较难与药效相结合等问题。此外，由于中风病尤其是急性期中风的复杂多变性，现有的中成药远不能满足临床的需要。
祛痰开窍中药石菖蒲，对中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统、消化系统都具有一定的药理作用。石菖蒲挥发油的主要成分是β-细辛醚(40-80％)和α-细辛醚(2-10％)。研究显示石菖蒲可保护脑皮质神经细胞，抑制其凋亡(方永奇，匡忠生，谢宇晖等。石菖蒲对缺血再灌注脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响。现代中西医结合杂志，2002，11(17)：1647-79.)；其挥发油有镇静催眠作用，细辛醚是镇静作用的有效成分(杜毅，周超凡。石菖蒲临床应用与实验研究的概述。内蒙古中医药，1993，12(1)：40.)；石菖蒲能抑制脑内乙酰胆碱酯酶活力提高脑内乙酰胆碱水平，诱导c-jun基因表达，可改善多种记忆障碍模型，具有益智作用(吴宾，方永奇。石菖蒲益智作用的物质基础及其机理研究。中医药学刊，2004，22(9)：1635-41.)；可使豚鼠冠状动脉扩张，降低蛙心收缩频率和幅度(陈俐。石菖蒲药理作用的实验研究。广州医学院学报，2002，30(4)：75-8.)；能抑制离体家兔肠管自发性收缩，拮抗肠管痉挛，增强大鼠在体肠管蠕动及小鼠肠道推进功能(胡锦官，顾健，王志旺。石菖蒲及其有效成分对消化系统的作用。中药药理与临床，1999，15(2)：16-8.)；有舒张支气管平滑肌的作用(杨社华，王志旺，胡锦官。石菖蒲及其有效成分对豚鼠气管平滑肌作用的实验研究。甘肃中医学院学报，2003，20(2)：12-4.)。美国哈佛医学院的研究证明在石菖蒲的多种成分中，α-细辛醚、β-细辛醚和顺式甲基异丁香酚三个单体对β淀粉样蛋白诱导的PC12细胞的凋亡起保护作用，丁香酚、β-细辛醚、α-细辛醚3种单体能阻止细胞内钙离子的内流，可使神经细胞死亡率明显降低，并能使Aβ引起的凋亡细胞数量显著减少，具有抗细胞凋亡作用(Yoshifumi Irie，WingMing Keung.Rhizoma acori graminei and its active principles protect PC-12 cells from the toxiceffect of amyloid-βpeptide.Brain Research.2003.963.282-289)。然而未见提及β-细辛醚具有治疗中风的效果。
注射剂尤其是静脉注射剂药液直接进入人体组织或血管，具有吸收快，生物利用度高、起效迅速，作用可靠的优点，广泛应用在治疗危急重病人上。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是提供一种用于治疗急性期及恢复早期中风病、脑功能损害，具有吸收快，生物利用度高、起效迅速，作用可靠的治疗中风注射剂。
本发明所提及的治疗中风注射剂含有5～100g/L的β-细辛醚及药学上可接受的注射溶剂。
β-细辛醚可以用以下方法制备：石菖蒲加8倍量水，按《中国药典》一部附录挥发油提取法甲法，提取24小时，收集挥发油，挥发油精制提纯得β-细辛醚。
本发明所述治疗中风注射剂中的β-细辛醚含量优选10～80g/L，最好是10～50g/L。
本发明所述的药学上可接受的注射溶剂有水、乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇其中一种或两种以上混合物。溶剂较佳为水、乙醇、丙二醇、甘油其中一种或两种以上混合物，最好是水。
本发明治疗中风注射剂可以含有药学上可以接受的助溶剂。常用的助溶剂有吐温-40、吐温-60、吐温-80、span、普流罗尼克F-68、卵磷脂、豆磷脂、OP-10、十六烷醇、十八烷醇其中一种或两种以上混合物。较好是吐温-60、吐温-80、OP-10、span、豆磷脂、卵磷脂。最好是吐温-60、吐温-80、普流罗尼克其中一种或两种以上混合物。助溶剂用量为1～50g/L，较好是1～30g/L，最好是1～20g/L。
本发明治疗中风注射剂还可以含有渗透压调节剂，如氯化钠、葡萄糖、甘露醇、乳糖、山梨醇其中一种或两种以上混合物。其中渗透压调节剂优选氯化钠，用量为0.01～2％，优选0.5～1.0％，最佳为0.5～0.75％。
本发明治疗中风注射剂可以含有药学上可以接受的防腐剂。常用的防腐剂有苯酚、甲酚、氯甲酚、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯乙醇其中一种或两种以上混合物。最好用三氯叔丁醇和苯甲醇。用量为0.1～2％。
本发明治疗中风注射剂还可以含有抗氧化剂，如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠等。可以根据本领域技术人员已知的方法得到抗氧化剂优选的使用用量和形式。
本发明治疗中风注射剂可以含有pH调节剂，如盐酸、枸橼酸及磷酸缓冲溶液等。可以根据本领域技术人员已知的方法得到pH调节剂优选的使用用量和形式。
本发明治疗中风注射剂可以含有其他辅剂如药学上可以接受的减轻疼痛的附加剂。上述助溶剂、渗透压调节剂、防腐剂以及其他辅剂总用量不超过10％。
本发明治疗中风注射剂制备方法采用本领域技术人员已知的注射剂制备方法。例如将β-细辛醚溶解在溶剂中，然后加入其他药学上可以接受的载体或辅剂混合均匀，然后消毒制成产品。
本发明治疗中风注射剂的使用方法是常用的使用方法。例如作为针剂直接注射使用，或者和生理盐水一起进行静脉滴注。
本发明具有用药剂量少、药物吸收速度快、避免对胃肠的刺激作用、避免首过效应、生物利用度高等特点，尤其适用于临床上中风处于昏迷，以及吞咽功能丧失或者障碍的患者。
为了更好的理解本发明，下面用本发明治疗中风注射剂药理试验及结果来说明其在治疗中风上的效果。
本发明治疗中风注射剂的药效实验方法如下。
取β-细辛醚，加入适量的药学上可以接受的助溶剂、渗透压调节剂、防腐剂、抗氧化剂、pH调节剂等中的一种或几种，配制浓度分别为10g/L、20g/L、40g/L，进行相关的药效学实验。
(1)常压耐缺氧试验：健康小鼠，体重18-22g，雌雄各半，随机分成5组：高剂量组、中剂量组、低剂量组、阳性对照组、阴性对照组。各组动物腹腔注射给药7d，每天2次。模型对照组给等体积生理盐水。末次给药1h后，将小鼠放入盛有15g钠石灰的200ml广口瓶内，用凡士林涂抹瓶口盖严，使之不漏气，立即计时。以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧而死亡的时间。其结果如表1所示。
表1 对小鼠常压耐缺氧死亡时间的影响(x±s)
| 组别 | 动物数n | 死亡时间(min) |
| 10g/L β-细辛醚组20g/L β-细辛醚组40g/L β-细辛醚组阳性对照组阴性对照组 | 99999 | 38.32±12.51*42.20±10.63***42.11±9.32***41.82±5.24***27.91±7.37 |
注：与阴性对照组比：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001(下同)
2)血脑通透性试验：健康小鼠，体重18-22g，雌雄各半，分组给药同上。末次给药1h后，静脉注射1％Evans蓝0.4ml/20g，20min后断头处死，立即取脑，用5ml NS-丙酮液(3∶7)匀浆，放置24小时，离心3000rpm30min，上清液于610nm处测OD值(取正常小鼠脑组织同样处理，用于校零)。
表2 对小鼠正常血脑通透性的影响(x±s)
| 组别 | 动物数n | OD值 |
| 10g/L β-细辛醚组20g/L β-细辛醚组40g/L β-细辛醚组阳性对照组阴性对照组 | 1111111111 | 0.1076±0.0165*0.1095±0.0131**0.1212±0.0226***0.1102±0.0252**0.0823±0.0241 |
3)大鼠脑缺血-再灌注损伤试验
缺血再灌注脑损伤模型制造：用水合氯醛(300mg/kg体重)腹腔注射麻醉，取仰卧位，分离暴露两侧颈总动脉，并分别置线备用，用动脉夹夹闭两侧颈总动脉60min后，再灌注，缝合伤口，造成缺血再灌注脑损伤模型。
SD大鼠随机分组：高、中、低剂量组、阳性对照组、模型对照组，各组动物腹腔注射给药7d，模型对照组给等体积生理盐水，每天2次。第7天给药后1小时，造成缺血再灌注脑损伤模型。在造模夹闭颈总动脉前，将针灸针插入大鼠的大脑颅骨表面(表层骨膜下)，先测量并记录大鼠血管夹闭前的脑电图；然后，用动脉夹夹闭两侧颈总动脉60分钟，同时记录脑电图；夹闭60分钟后，再灌注观察24小时，并记录再灌注24小时时的脑电图；处死大鼠，快速取脑皮质和海马，按细胞凋亡原位末端标记法检测神经细胞凋亡。显微镜下观察细胞凋亡情况。用北京航空航天大学病理图像分析系统，定量分析神经元凋亡数(每高倍视野，放大倍数72.5)及凋亡积分；Bax、Bcl-2基因蛋白用免疫组织化学法检测，定量分析凋亡细胞数、细胞的凋亡积分(光密度×面积)。其余脑组织测含水量[85℃烘干三天后称重；脑含水量(％)＝(湿脑重-干脑重)/湿脑重×100％]。
表3 石菖蒲提取部位对大鼠脑含水量的影响(x±s，n＝10)
| 组别 | 动物数n | 脑含水量(％) |
| 10g/L β-细辛醚组20g/L β-细辛醚组40g/L β-细辛醚组阳性对照组模型对照组 | 88888 | 77.12±0.58***77.26±0.63***76.86±0.52***77.28±0.41***78.11±0.54 |
注：与模型对照组比：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001(下同)
表4 对大鼠脑电图的影响(x±s)
| 组别 | 夹闭前 | 夹闭中 | 夹闭后再灌注 | |||
| 频率Hz | 波幅uv | 频率Hz | 波幅uv | 频率Hz | 波幅uv | |
| 10g/L β-细辛醚20g/L β-细辛醚40g/L β-细辛醚阳性对照组模型对照组 | 14.80±2.6814.20±2.5515.06±2.5614.00±2.7015.10±2.38 | 9.15±2.12***△△△8.70±2.20***△△△8.96±2.50***△△△10.68±2.90***7.20±1.49 | 14.2±2.16△△△13.9±1.97△△△14.9±2.08△△△17.00±1.95***14.15±2.03 | 5.82±1.41***△△△5.78±1.19***△△△6.15±1.25***△△△10.35±1.98***4.55±0.78 | 14.25±3.85**14.45±3.03**14.33±2.91**14.55±2.11***17.35±2.16 | 5.12±1.01***△△△4.98±1.44***△△△5.38±1.25***△△△9.32±2.269.10±1.94 |
注：与阳性对照组比：△△△P＜0.001
表5 对大鼠脑神经细胞凋亡的影响(x±s，n＝10)
| 组别 | 皮质 | 海马 | ||
| 凋亡细胞数 | 凋亡积分 | 凋亡细胞数 | 凋亡积分 | |
| 10g/L β-细辛醚组20g/L β-细辛醚组40g/L β-细辛醚组阳性对照组模型对照组 | 51.9±36.1***49.5±25.4***48.8±42.2***42.5±38.2***107.8±22.9 | 716.1±255.1625.0±289.9664.0±312.5615.8±303.6842.8±151.2 | 0.78±0.52***0.81±0.42***0.88±0.54***0.85±0.58***6.32±2.23 | 52.9±20.3***48.0±16.9***49.1±21.4***51.1±18.3***118.3±34.9 |
表6 对BAX基因表达的影响(x±s，n＝10)
| 组别 | 皮质积分 | 海马积分 |
| 10g/Lβ-细辛醚20g/Lβ-细辛醚40g/Lβ-细辛醚阳性对照组模型对照组 | 501.1±185.6*491.2±206.0*481.9±224.3**475.6±216.5***835.6±330.9 | 522.6±199.8*511.4±239.7*506.4±215.3**509.1±203.8**961.5±363.5 |
表7 对BCL-2基因表达的影响(x±s，n＝10)
| 组别 | 皮质积分 | 海马积分 |
| 10g/L β-细辛醚20g/L β-细辛醚40g/L β-细辛醚阳性对照组模型对照组 | 140.7±45.6*141.8±33.7*143.9±35.8**142.5±51.1*99.9±25.9 | 68.5±15.567.5±17.766.8±20.165.9±27.670.0±23.6 |
以上系列实验结果显示：
1.β-细辛醚能提高机体耐缺氧能力，提高机体的血氧利用率，降低机体耗氧量。
2.β-细辛醚能提高血脑通透性，药物能够进入脑组织而作用于脑病损部位。
3.β-细辛醚有减轻大鼠脑水肿的作用，能减轻脑损害程度。
4.β-细辛醚有抑制脑电的作用，有镇静安神的作用。
5.β-细辛醚能减轻大鼠脑皮质和海马神经细胞凋亡，表现为凋亡细胞数减少、凋亡积分降低，减轻脑细胞的坏死程度，从而保护脑组织。
6.β-细辛醚能抑制大鼠脑皮质和海马神经细胞BAX基因的表达、能增强BCL-2基因的表达，减轻脑细胞凋亡的发生，对脑细胞有保护作用，进而保护脑组织。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例，但不限于所述实施例。
实施例1
取β-细辛醚0.5g，吐温-80 1g，加入100ml水中，加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例2
取β-细辛醚8g，2.5g吐温-40，0.5g十八烷醇氯化钠9g，加入100mlpH为5.5磷酸缓冲溶液中，加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例3
取β-细辛醚5g、1g吐温-60、2g吐温-80、1g十六烷醇，加入50ml水和50ml丙二醇中，加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例4
取β-细辛醚10g，3g豆磷脂(精制)，2g普流罗尼克F-68，甘油(注射用)25ml，注射用水75ml，加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例5
取β-细辛醚4g，2.5g吐温-60，葡萄糖5g，加入100ml水中，加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例6
取β-细辛醚5g、1g吐温-60、1g吐温-80、1g卵磷脂，加入50ml水和50ml丙二醇中，加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例7
取β-细辛醚10g，4.5g普流罗尼克F-68，甘油(注射用)25ml，注射用水75ml，加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例8
取β-细辛醚3g、加入50ml水和50ml乙醇中，加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例9
取β-细辛醚4g、加入100ml甘油中，加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例10
取β-细辛醚2g、加入30ml水和70ml甘油中，加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例11
取β-细辛醚8g、加入100ml丙二醇中，加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例12
取β-细辛醚7g、加入80ml水和20ml乙醇中，加热溶解，冷却后加入0.5g三氯叔丁醇、0.01g维生素C和0.75g氯化钠，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例13
取β-细辛醚4g、加入40ml水、20ml乙醇、20ml丙二醇和20ml甘油中，加热溶解，冷却然后加入1g苯甲醇、0.02g亚硫酸氢钠、0.6g氯化钠混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例14
取β-细辛醚5g、加入100ml以酒石酸及其盐配置pH5.5的0.9％的氯化钠水溶液，加热溶解，混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
实施例15
取β-细辛醚5g、加入40ml水、20ml乙醇、20ml乙二醇和20ml甘油中，加热溶解，冷却然后加入0.5g苯甲醇、0.1g三氯叔丁醇、0.02g亚硫酸氢钠、0.6g氯化钠、0.4葡萄糖混合均匀后，装入药瓶中密封，消毒成产品。
Claims (9)
1.一种治疗中风注射剂，该注射剂含有5～100g/L的β-细辛醚及药学上可接受的注射溶剂；其中注射溶剂为水、乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇其中一种或两种以上混合物。
2.权利要求1所述的治疗中风注射剂，其特征是β-细辛醚用量为10～80g/L。
3.权利要求1所述的治疗中风注射剂，其特征是β-细辛醚用量为10～50g/L。
4.权利要求1所述的治疗中风注射剂，其中注射溶剂是水。
5.权利要求1至4其中之一所述的治疗中风注射剂，其特征是含有药学上可以接受的助溶剂，用量为1～50g/L，其中助溶剂是吐温-40、吐温-60、吐温-80、普流罗尼克F-68、卵磷脂、豆磷脂、十六烷醇、十八烷醇其中一种或两种以上混合物。
6.权利要求5所述的治疗中风注射剂，其特征是助溶剂是吐温-60、吐温-80、普流罗尼克F-68其中一种或两种以上混合物。
7.权利要求6所述的治疗中风注射剂，其特征是助溶剂用量为1～30g/L。
8.权利要求6所述的治疗中风注射剂，其特征是助溶剂用量为1～20g/L。
9.权利要求1所述的治疗中风注射剂，其特征是含有渗透压调节剂、防腐剂、抗氧化剂、pH调节剂其中一种或者两种以上。
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