CN1279107A - 一种治疗艾滋病和肿瘤的药剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种治疗艾滋病和肿瘤的药剂及其制备方法,它由蓖麻、商陆、甘草、松果,组成其主要方剂,采用提取商陆皂甙、提取商陆多糖、提取蓖麻毒蛋白、提取注射用甘草酸、提纯松果酸性多糖、等多个工艺步骤,最后制取针剂和缓释胶囊,对艾滋病毒和肿瘤细胞具有极强的杀伤力,无毒副作用,临床应用效果明显,使用安全。

Description

一种治疗艾滋病和肿瘤的药剂及其制备方法

本发明涉及一种治疗艾滋病和肿瘤的药剂及其制备方法。

目前，治疗艾滋病和肿瘤是医学上一个亟待解决难题，虽然有很多医学家为此做了很多有价值得工作，但是，还没有一种能有效治愈艾滋病和肿瘤的药物。

本发明的目的就是要解决这一医学难题，提供一种效果突出，使用安全，配方独特，制取工艺科学得治疗艾滋病和肿瘤的药剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种治疗艾滋病和肿瘤的药剂，其特征在于其方剂由蓖麻、商陆、甘草、松果组成。

一种治疗艾滋病和肿瘤的药剂的制备方法，其特征在于工艺步骤如下：

(一)、蓖麻毒蛋白提取工艺：先剥去蓖麻外硬壳，将白色仁杵成糊状，除去蓖麻油

(1)在12℃以下加入3倍量乙醇浸4小时后离心，取其沉淀，以水捏溶，水溶液冰冻干燥即得粗制品，粗制品水溶液滤除不溶物，加适量酒精，放置片刻，滤除沉淀，母液再加入少量乙醇至微显混浊，放冰箱里析出结晶，必要时再重结晶；

(2)、酒精分级沉淀法：蓖麻糊加3倍量乙醇，有沉淀析出，离心除去；再于此母液加1倍量乙醇，离心收集此部分沉淀，但仍含杂质，再于此母液加1倍量乙醇，则析出的蛋白质较纯，沉淀用水溶解，冰冻干燥即得成品；

(3)、注射用乳糖酸蓖麻毒蛋白干冷冻结晶的制取：要求前述蛋白质纯度达99．9％以上时，以水溶解，用DEAE—纤维素柱层析的方法纯化二次即得纯品结晶，加半乳糖酸真空冷冻干燥即得；所得纯品蓖麻毒蛋白，须100％不含蓖麻因和蓖麻碱；

(二)、(1)．商陆皂甙提取工艺：

商陆根薄片加水提取三次，第一次加8倍量，煮沸4小时过滤，第二、三次加4倍量水，煮沸2小时，过滤、滤液合并，浓缩止药的五倍量，取浓硫酸慢慢加到浓缩液中，边加边搅拌，浓缩液1000ml加硫酸40g，加完后，煮至微沸4小时，放冷，倒入等量冷水中，搅匀，放置过夜，弃去上清液，残液即沉淀过滤，沉淀用水洗至PH值为6左右，滤集沉淀，抽干，至60℃以下干燥，既得粗品商陆皂甙元；

(2)．商陆多糖提取工艺：

商陆片加75％乙醇5倍量0．5NNaoH，加热回流2小时，同法提取三次；合并滤液浓缩成膏，加95％乙醇遂搅拌至沉淀，过夜，过滤，回收乙醇，连续2次；加水2倍量，用DEAE纤维素柱层析纯化，连续柱层析纯化2次，得纯商陆多糖PEP—1；

(三)、注射用甘草酸提取工艺：

甘草粉用12倍量0．5％氨水渗漏，渗漏液浓缩至原体积1／5过滤，滤液加浓硫酸至PH3，过滤析出的沉淀，水洗3次，60℃以下干燥，得粗甘草酸

纯品甘草酸提取：以前述所得粗甘草酸400g，加4倍量工业酒精，加热回流三小时，过滤，滤液加2倍量乙醇回流2次，合并回流液加10g活性炭，回流脱色半小时冷却、过滤，滤液通氨气至PH7—7．5，无固体析出为止；滤集沉淀，以少量乙醇洗涤，室温干燥，得甘草酸铵250g，继续用4倍量的80％乙醇，加热溶解并用活性炭脱色，冷却过滤，滤液浓缩，析出白色结晶，即为纯甘草酸。

(四)、松果酸性多糖提纯：

(1)、松果洗净晾干，粉碎粗粉，500g加0．5NNaoH溶液4000ml，浸泡半小时，煎煮1小时，用4层纱布过滤，得第一次液；

(2)、将药渣加0．5NNaoH蒸馏水3000ml，煎煮40分钟，4层纱布过滤，得第二次液；

(3)、药渣加0．5NNaoH蒸馏水溶液2000ml，煎煮40分钟，4层纱布过滤，得第三次液；

(4)、前述三次的滤液合并浓缩成糖浆状，放置，加95％乙醇，随加随搅拌至沉淀完全，放置过夜，回收乙醇，将所得液体再放置4小时后过滤，滤液缩成膏；

(5)、提取物即为酸性多糖，若作静脉注射用，再以水溶解，用DEAE纤维素柱层析二次纯化既得纯品；

(五)、针剂制剂工艺：

(1)乳糖酸蓖麻毒蛋白干冷冻结晶，精制蓖麻毒蛋白纯品每支含20mg另加等量0．1M半乳糖真空冷冻干燥即得；

(2)、治疗艾滋病和肿瘤的针剂制剂：每瓶含商陆酸性多糖500mg，松果酸性多糖2000mg，甘草酸2500mg，用注射用水加至100ml，灭菌既得；

(六)、缓释胶囊制取：蓖麻毒蛋白纯品人用量1ml／kg／日，商陆皂甙纯品，1mg／kg／日，商陆多糖10mg／kg／日，商陆毒蛋白纯品，1mg／kg／日，松果酸性多糖40mg／kg／日，甘草蛋白50mg／kg／日；按人50kg体重计算以提取6种成份，每人日需蓖麻毒蛋白50mg／50kg／日，商陆皂甙50mg／50kg／日，商陆多糖500mg／50kg／日，商陆毒蛋白50mg／50kg／日，松果酸性多糖2000mg／50kg／日，甘草酸2500mg／50kg／日，共合计5150mg，分12个1号胶囊装，每个胶囊装429mg。

前述治疗艾滋病和肿瘤的药剂的制备方法，其中蓖麻毒蛋白提取工艺中第2步骤还可以是盐分级沉淀法：原糊状物加硫酸铵至40％的饱合度，所以沉淀颜色较深，离心除去；母液加硫酸铵至50％的饱合度，收集此部分沉淀，但不纯；母液再加硫酸铵至75％饱和度，所得蛋白质沉淀较纯。

前述治疗艾滋病和肿瘤的药剂的制备方法，其中注射用甘草酸提取工艺中粗甘草酸的提取也可用甘草浸膏提取，方法如下：

甘草浸膏3kg，加热溶解于36升水中，冷至室温，过搅拌边滴加145ml浓硫酸；加完以后静置数小时，滤集沉淀，用水充分洗涤，在60℃以下烘干，得粗甘草酸1．2kg，含量约为55％。

本发明效果如下：

1、本药创新组方合理：由蓖麻毒蛋白、商陆多糖、松果酸性多糖、甘草酸铵，从各种文献检索从未见蓖麻毒蛋白用于临床治人癌症和艾滋病的报导，而临床治显效率、有效率很高，毒副作用很小。

2、该方所有药物提取工艺先进：纯度高，所有毒副作用极小，特别蓖麻毒蛋白除乙醇反复提取外，并用DEAE纤维素柱层析两次分级纯化提取纯度在99．9％以上。又经2次反复检验，100％不含蓖麻因和蓖麻碱。由于用0．1M半乳糖阻碍蓖麻毒蛋白S—S链裂解后释放出B结合链与细胞表面的碳水化合物受体结合，对无关癌细胞无抑制和杀伤作用。

另外：商陆皂甙虽有很强抑制肿瘤活性，但有溶血反应，所以只作胶囊口服，不用作针剂输入。但商陆酸多糖提取物有抗肿瘤活性，作针剂输注。所提取酸性多糖均经乙醇反复提取并用DEAE纤维素(磷酸盐型)柱层析两次分级纯化，纯度达99．9％以上，所以副作用极小。

3、新的中药提纯合理组合：乳糖酸蓖麻素蛋白干冻结晶：由于蓖麻毒蛋白遇热失去活性，所以低温提取、干冻结晶，安瓶装、密闭低温保存。加半乳糖阻碍蓖麻毒蛋白S—S链裂解后释放B链和细胞表面碳水化合物受体结合。对人正常细胞，无抑制和杀伤作用。商陆酸性多糖、松果酸性多糖、甘草酸铵三种多糖类提取物均有很强抗肿瘤和抗艾滋病活性，抗HIV—1逆转录和翻译。三种多糖类而且无配伍禁忌，所以三种多糖同装一液瓶，药效稳定，有协同作用。注射前将乳糖酸蓖麻毒蛋白干冻结晶，用水溶解后，加入艾瘤康注射液中摇匀后输注。这样药物同进体内，使甘草酸能阻止蓖麻毒蛋白热源和过敏反应，但抗肿瘤和抗HIV—1病毒作用更强。但注射乳糖酸蓖麻毒蛋白干冻结晶前，还需作皮试，阳性者勿用。单纯的该治疗艾滋病和肿瘤的注射液还可输入体内。

4、强有力的抑制杀伤肿瘤细胞作用，在治癌瘤方面，蓖麻毒蛋白、松果酸性多糖、甘草酸铵、商陆酸性多糖，均有很强的抗肿瘤活性抑制癌细胞的蛋白质合成，核糖核酸延伸因子减少，脱氧核糖核酸失活，抑制和杀伤肿瘤靶细胞。有较强选择性杀伤作用，特别是蓖麻毒蛋白在半乳糖存在时10^—9—10^—10M，免疫毒素(79：Ricin)能杀死99．9％Nalm—1靶细胞。对卡波济氏肉瘤有强的杀伤作用，但对人体正常细胞无明显抑制和杀伤作用。

5、很强抗HIV作用：在治疗艾滋病(HIV—1)方面：松果酸性多糖、甘草酸铵、商陆酸性多糖、蓖麻毒蛋白，均有很强的杀伤和抑制HIV—1复制、增殖。特别是松果提取多糖，PC₆能抑制CEM细胞中HIV—1蛋白的表达，PC₆能够抑制HIV—1在CEM细胞中的转录和翻译。PC₆诱导HIV—1抑制因子是一种新的免疫活性物质。甘草酸抑制和杀伤HIV细胞，0．5mg／ml可使98％HIV—1增殖受到抑制。

6、本方药力强劲，对免疫系统有很强的调节作用：有细胞免疫和体液免疫抑制作用和免疫增强作用，双方调节作用，能诱生r—干拢素(IFN—r)白细胞介素Ⅱ(IL—2)，白细胞介素—3(IL—3)，a肿瘤坏死因子(TNF—a)、B—转化因子(TBF—B1)，HTV—1抑制因子，自然杀伤细胞(NK细胞)，这些免疫活性物质对调节免疫，抑制癌瘤，抑制HTV有显著作用。

7、抗菌、抗真菌、抑制病毒作用：能抑制金葡菌、链球菌、真菌和病毒作用，特别对癌瘤合并细菌、病毒、感染和HIV—1合并各类细菌、真菌、病素感染有很强抑制杀伤作用。HTV—1卡氏肺囊虫性肺炎有强的治疗作用。

8、本方药有很强解毒作用、抗过敏作用：能解除各种癌瘤产生的毒素，细菌感染引起的外毒素和内素毒素、HIV—1卡氏肺囊虫性肺炎有强的治疗作用。另：甘草酸能解除蓖麻毒蛋白对人体毒副作用，并有抗过敏作用。

9、中药服法的创新：四种药物组成的胶囊，按50kg体重计算日需药量，日一次或分次服用，由于按癌细胞和HTV生长增殖周期，所以2—3天服药1天，或2—3天静脉输注一天，这样用药既减少毒性反应，使间歇期1—2天正常细胞又恢复活性、增殖、分泌IFN—r、IL—2、NK、TNF—a等，又增强了免疫功能。

10、该药药源广，价格低廉，而疗效高，毒副作用小，便于推广应用。

以下结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例一：

备好蓖麻、商陆、甘草、松果按以下工艺步骤制取治疗艾滋病和肿瘤的药剂：

(一)、蓖麻毒蛋白提取工艺：先剥去蓖麻外硬壳，将白色仁杵成糊状，除去蓖麻油

(1)、在12℃以下加入3倍量乙醇浸4小时后离心，取其沉淀，以水捏溶，水溶液冰冻干燥即得粗制品，粗制品水溶液滤除不溶物，加适量酒精，放置片刻，滤除沉淀，母液再加入少量乙醇至微显混浊，放冰箱里析出结晶，必要时再重结晶；

(2)、酒精分级沉淀法：蓖麻糊加3倍量乙醇，有沉淀析出，离心除去；再于此母液加1倍量乙醇，离心收集此部分沉淀，但仍含杂质，再于此母液加1倍量乙醇，则析出的蛋白质较纯，沉淀用水溶解，冰冻干燥即得成品；

(3)、注射用乳糖酸蓖麻毒蛋白干冷冻结晶的制取：要求前述蛋白质纯度达99．9％以上时，以水溶解，用DEAE—纤维素柱层析的方法纯化二次即得纯品结晶，加0．1M半乳糖酸真空冷冻干燥即得；所得纯品蓖麻毒蛋白，须100％不含蓖麻因和蓖麻碱；

(二)、(1)．商陆皂甙提取工艺：

商陆根薄片加水提取三次，第一次加8倍量，煮沸4小时过滤，第二、三次加4倍量水，煮沸2小时，过滤、滤液合并，浓缩止药的五倍量，取浓硫酸慢慢加到浓缩液中，边加边搅拌，浓缩液1000ml加硫酸40g，加完后，煮至微沸4小时，放冷，倒入等量冷水中，搅匀，放置过夜，弃去上清液，残液即沉淀过滤，沉淀用水洗至PH值为6左右，滤集沉淀，抽干，至60℃以下干燥，既得粗品商陆皂甙元；

(2)．商陆多糖提取工艺：

商陆片加75％乙醇5倍量0．5NNaoH，加热回流2小时，同法提取三次；合并滤液浓缩成膏，加95％乙醇遂搅拌至沉淀，过夜，过滤，回收乙醇，连续2次；加水2倍量，用DEAEN纤维素柱层析纯化，连续柱层析纯化2次，得纯商陆多糖PEP—1；

(三)、注射用甘草酸提取工艺：

甘草粉用12倍量0．5％氨水渗漏，渗漏液浓缩至原体积1／5过滤，滤液加浓硫酸至PH3，过滤析出的沉淀，水洗3次，60℃以下干燥，得粗甘草酸纯品甘草酸提取：以前述所得粗甘草酸400g，加4倍量工业酒精，加热回流三小时，过滤，滤液加2倍量乙醇回流2次，合并回流液加10g活性炭，回流脱色半小时冷却、过滤，滤液通氨气至PH7—7．5，无固体析出为止；滤集沉淀，以少量乙醇洗涤，室温干燥，得甘草酸铵250g，继续用4倍量的80％乙醇，加热溶解并用活性炭脱色，冷却过滤，滤液浓缩，析出白色结晶，即为纯甘草酸。

(四)、松果酸性多糖提纯：

(1)、松果洗净晾干，粉碎粗粉，500g加0．5NNaoH溶液4000ml，浸泡半小时，煎煮1小时，用4层纱布过滤，得第一次液；

(2)、将药渣加0．5NNaoH蒸馏水3000ml，煎煮40分钟，4层纱布过滤，得第二次液；

(3)、药渣加0．5NNaoH蒸馏水溶液2000ml，煎煮40分钟，4层纱布过滤，得第三次液；

(4)、前述三次的滤液合并浓缩成糖浆状，放置，加95％乙醇，随加随搅拌至沉淀完全，放置过夜，回收乙醇，将所得液体再放置4小时后过滤，滤液缩成膏；

(5)、提取物即为酸性多糖，若作静脉注射用，再以水溶解，用DEAE纤维素柱层析二次纯化既得纯品；

(五)、针剂制剂工艺：

(1)、乳糖酸蓖麻毒蛋白干冷冻结晶，精制蓖麻毒蛋白纯品每支含20mg另加等量0．1M半乳糖真空冷冻干燥即得；

(2)、治疗艾滋病和肿瘤的针剂制剂：每瓶含商陆酸性多糖500mg，松果酸性多糖2000mg，甘草酸2500mg，用注射用水加至100ml，灭菌既得；

(3)、将前述乳糖酸蓖麻毒蛋白干冷冻结晶20—60mg，加注射用水2—6ml，或按需要量加入治疗艾滋病和肿瘤的针剂中；

(六)、缓释胶囊制取：蓖麻毒蛋白纯品人用量1ml／kg／日，商陆皂甙纯品，1mg／kg／日，商陆多糖10mg／kg／日，商陆毒蛋白纯品，1mg／kg／日，松果酸性多糖40mg／kg／日，甘草蛋白50mg／kg／日；按人50kg体重计算以提取6种成份，每人日需蓖麻毒蛋白50mg／50kg／日，商陆皂甙50mg／50kg／日，商陆多糖500mg／50kg／日，商陆毒蛋白50mg／50kg／日，松果酸性多糖2000mg／50kg／日，甘草酸2500mg／50kg／日，共合计5150mg，分12个1号胶囊装，每个胶囊装429mg。

实施例二：

其它步骤相同，区别处为：

前述蓖麻毒蛋白提取工艺中第2步骤是盐分级沉淀法：原糊状物加硫酸铵至40％的饱合度，所以沉淀颜色较深，离心除去；母液加硫酸铵至50％的饱合度，收集此部分沉淀，但不纯；母液再加硫酸铵至75％饱和度，所得蛋白质沉淀较纯。

前述注射用甘草酸提取工艺中粗甘草酸的提取用甘草浸膏提取，方法如下：

甘草浸膏3kg，加热溶解于36升水中，冷至室温，过搅拌边滴加145ml浓硫酸；加完以后静置数小时，滤集沉淀，用水充分洗涤，在60℃以下烘干，得粗甘草酸1．2kg，含量约为55％。

按前述实施例制取的治疗艾滋病和肿瘤的药剂，其药理、监床应用、素副作用如下：

一、本方剂药理作用：

1、抗肿瘤作用：能抑制肿瘤、癌蛋白质的合成，抑制肿瘤靶细胞合成，对癌细胞有先择性杀伤用用，对白血病、宫颈癌U14、肉瘤S180，艾氏腹水癌、腹水肝癌、肺癌细胞株HIV—1引起卡波济肉瘤(Kaposi)均有抑制和杀伤作用。

2、抗艾滋病毒(HIV—1)作用：该药对HIV—1的增殖和复制有很强抑制作用，能抑制CEM细胞HIV—1的表达，又能抑制HIV—1在CEM细胞中的转录和翻译，在转录水平对LTR引导DNA基因表达也有很强抑制作用。

3、对免疫系统作用：

(1)抗过敏作用：甘草酸能抑制蓖麻毒蛋白引起过敏反应和对肝、脾、心、肾的损害。

(2)对免疫有双向调节作用。

(3)有很强的免疫抑制作用。

(4)增强和诱生淋巴细胞分沁白细胞介素—2(IL—2)和r—干拢素(IFN—r)。促进脾细胞DNA和蛋白质合成，和脾细胞产生IFN—r。

(5)能诱生巨噬细胞激活因子(GM—CSF)白细胞介素—3(IL—3)。B—转化因子(TGF—B1)，a—肿瘤坏死因子(TNF—a)。

二、单味药理作用：

(一)1．商陆对免疫系统影响：

(1)刺激淋巴细胞转化作用：①商陆有丝分裂原能促进淋巴T细胞和B细胞转化、分裂、增殖。②商陆糖蛋白(PWM)、T和B细胞在巨噬细胞存在下，对PHA和PWM都有反应产生干扰素(IFN)。③商陆多糖—1或商陆多糖—2(PEP—1)能诱导淋巴细胞转化增殖。

(2)诱生干扰素作用：①商陆有丝分源，刀豆素A能诱导白细胞产生干扰素(IFN)。②商陆糖蛋白(PWM)、T和B细胞在巨噬细胞存在下，对PHA和PWM都能反应产生干拢素(IFN)。③商陆皂甙(ES)对脾细胞胞诱生干扰素—r(IFN—r)。④商陆多糖Ⅰ(PEP—Ⅰ)能诱生巨噬细胞产生白细胞介素Ⅰ(IT—Ⅰ)。能诱生脾细胞产生白细胞介素Ⅱ(IL—2)、PEP—Ⅰ或Ⅱ刺激脾细胞产生集落刺激因子(CSF)(CSF为IL—3)。

(3)对肝脾组织3H胸腺嘧啶核苷体内掺入影响：商陆皂甙(SE)是一种激活核苷酸还原酶的生物活动物质，PWM亦能刺激B细胞对胞腺核苷的活力。因而促进DNA的代谢。增强细胞免疫功能。

2、抗肿瘤作用：

(1)商陆皂甙诱生r—干扰素(IFN—r)白细胞介素—2及淋巴毒素(IT)。含这些淋巴因子制品，对人肺癌细胞株(SPC—3)。人T淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat及Moit—4细胞)，人宫颈癌细胞株(Hela细胞)、人肝癌细胞株(SMMC—7721)等均有细胞毒作用。对人正常细胞(WISH)无毒性作用。

(2)商陆皂甙辛(EH)和脂多糖(IPS)能分泌肿瘤坏死因子(TNF)是一种杀伤肿瘤细胞的细胞因子。

(3)商陆多糖(PEP—1)激活巨噬细胞(Mφ)和启动诱生TNF是其抗肿瘤作用，抑瘤率达51．7％。通过增强T细胞功能来抑制肿瘤生长。

3、抗炎、抗菌、抗病毒：

(1)①商陆抗病毒蛋白(PAP)能显著改善和增强IgG作用。②商陆皂甙对多种急慢性炎症有明显抑制作用，并能降低毛细血管通透性。③商陆提取三萜酸消炎作用强度与氢化可的松相似。④皂甙E及加利果酸有明显的抗炎作用。

(2)抗病毒作用：商陆所含抗病毒蛋白(PAP)和糖蛋白(PWM)对艾滋病毒、脊髓灰质炎Ⅲ型病毒、抗烟花叶病毒有较强的抗病毒活性。

4、商陆有解热、镇痛、肌肉松弛作用。

5、商陆药代动力学研究：小鼠4天腹腔注射商陆多糖Ⅰ，诱生肿瘤坏死因子(TNF)的达峰时间是二次注射后的第8天，商陆皂甙辛诱导的TNF分泌随时间延常而逐渐增多，于24小时左右达峰。

6、商陆毒副作用：

垂序商陆提取的酸性甾体皂甙，小鼠腹腔注药LD50为65mg／kg。煎剂小鼠灌胃每日5g／kg连续3周，动物体重及状态无明显变化，动物处死后，心、肝、肺、肾未岁明显改变。

(二)蓖麻子所含蓖麻毒蛋白(蓖麻毒素)：

(1)、抗肿瘤作用：蓖麻毒蛋白可强烈抑制各种癌细胞的蛋白质合成，中等强度抑制DNA合成，而对RNA合成抑制作用轻微，而是强烈抑制真核生物核蛋白体的蛋白质合成。具有针对B细胞类1a抗原特异反应性Mab—737蓖麻毒蛋白通过二硫键连接成免疫毒素蓖麻毒蛋白—737蓖麻毒蛋白通过二硫键连接成免疫毒素蓖麻毒蛋白—737(ricin—737)体外0．1M乳糖存在时，此免疫素素(IT)对含B细胞抗原的Burkitt氏淋巴瘤细胞系Rajj细胞表现出选择性地强力杀伤，不含靶抗原的无杀伤作用。免疫毒素1h就可抑制靶细胞增殖，随时间延长杀伤更显著。对肿瘤靶细胞显示选择性杀伤作用，对靶细胞蛋白质合成抑制率71％。蓖麻毒蛋白对小鼠艾氏腹水癌，腹水肝癌，宫颈癌U14、肉溜S180，白血病等移植性肿瘤均有一定治疗作用；于接种后1，3b腹腔注射7．5mg／kg，能够完全抑制艾氏腹腔水癌细胞生长；1次腹腔腔注射25mg／kg，48小时后可使癌细胞减少90％，96小时后几乎所有癌细胞形态改变：细胞核膨胀，核心出现空泡，有丝分裂停止，胞浆暗染，周围出现不规则空泡等。

蓖麻毒蛋白具有二个肽链，由S—S链组成，发生作用前有一个裂解过程，裂解后释放出A链——效应链，B链为结合链；A链或整个毒蛋白分子通过质膜进入胞浆，与核蛋白60—S亚基发生作用，抑制氨基酰t—RNA与核蛋白体的酰结合，使核酸的延伸因子减少，核酸失活，抑制蛋白质合成，导致细胞死亡，B链可与细胞表面的碳水化合物结合；B链用0．1M半乳糖封闭其B链的细胞结合点后，具有高度特异的强靶细胞杀伤活性。

免疫毒素(IT)是较理想的一类肿瘤定向治疗药物：蓖麻素蛋白与阿霉素偶联到一个抗人膀胱癌单克隆抗体分子上构建了第一个具有双弹头的抗肿瘤导向药物，在0．1mol／L半乳糖存在下，对无关癌细胞无杀伤作用，对人膀胱癌BIU—87及E—J细胞的杀伤用用比McSb—Ricin强10倍，比McAb—Abuiamycin强3万倍。具有高度特异强杀伤肿瘤靶细胞活性。

(2)、对免疫功能影响：对体液免疫和细胞免疫有很强的抑制作用。

(3)、致敏作用：蓖麻毒蛋白有严重过敏反应，其发生率85．11％。

(4)、毒副作用：蓖麻子所含蓖麻因(ricin)7mg或蓖麻碱(ticinine)0．16g既可使成人死亡。此二种成份加热既被破坏。但经柱层析反复纯化得到纯品蓖麻毒蛋白99．9％以上，无此毒性成份。

急性亚急性毒性作用：

蓖麻毒蛋白对小鼠1次静注LD50为6—12mg，但对小鼠的LD50报导各异，多数报导较上述LD50为大，乃是样品纯度差异所致，经DEAE纤维素分级纯化的蓖麻毒蛋白各样、品，对大鼠一次毒脉注射的LK50为50—150mg／kg，另报导蓖麻毒蛋白对小鼠一次静注的LD50为47．97mg／kg，对家兔一次静注的MTK为3．2mg／kg，对家兔静注每日一次连续16次的MTD为1．6mg／kg。

蓖麻毒蛋白对小鼠有剧毒，对遗传物质也有影响。

(三)甘草所含甘草酸(甘草甜素)甘草皂甙、甘草黄酮。

1、对免疫系统影响：

(1)抗过敏反应作用：甘草所提取复合体(LX)含有蛋白质、核酸、多糖、甘草酸有较好的抗过敏作用，对小鼠过敏性休克也有保护作用，对过敏性休克和死亡抑制率在95％以上。甘草酸25～50mg／kg能显著抑制过敏反应，能阻止过敏介质释放。

(2)对非特异性免疫功能影响：①甘草甜素能增强网状内皮系统活性，使白细胞总数增加嗜中性白细胞，单核细胞增加更明显，有刺激巨噬细胞吞噬作用。②对网状内皮系统及自然杀伤细胞活性有显著增强。

(3)对抗体产生的影响：①甘草酸能使抗体显著增加，30mg／kg可使抗体产生显著增强。②对抗体产生抑制作用，甘草抑制1gE合成是T细胞介导的，且与CD8+细胞有关。③甘草对抗体产生双向作用：即对正常病源的反应有增强作用，对反常的过敏反应则呈抑制作用。

(4)对补体影响：甘草酸肌注对CP50和AP50均能抑制50％溶血，能抑制补体反应，相关炎症过程缓解和静止。

(5)对白细胞介素—2的产生和诱生干扰素作用：甘草酸100ug／ml明显促进刀豆蛋白A(ConA)活化的脾细胞DNA和蛋白质的生物合成，DNA合成高峰48小时。对白细胞介素2(IL—2)产生明显增强作用，甘草酸能增强ConA诱导淋巴细胞分泌IL—2。并可增强ConA诱导淋巴细胞分泌r—干扰素(IFN—r)，可提高脾细胞产生IFN—r为主。

(6)对前列腺素：对前列腺素有双向调节作用。

(7)对自然杀伤细胞(NK)活性有显著增强作用，对机体免疫有重要调节作用。

2．抗艾滋病毒(HIV)的作用

(1)甘草皂甙0．5mg／ml对HIV的增殖抑制98％以上，50％空斑形成抑制值0．125mg／ml，但不能抑制HIV的逆转录，是通过恢复T细胞发挥作用。

(2)甘草甜素抑HIV增殖抑制率78．81％，能破坏HIV细胞。

(3)甘草酸0．5mg／ml可使98％HIV增殖受到抑制，0．125mg／ml溶液可使50％HIV增殖受到抑制。

(4)甘草黄酮类抗HIV作用：有极好的抗HIV作用，甘草中有3种黄酮成份对HIV增殖的抑制作用是甘草甜素的25倍。

(5)甘草多糖有抗水泡性口炎病毒、腺病毒、牛痘病毒、单纯疱疹病毒。

3．抗菌作用：甘草酸和次酸对金葡菌、结核杆菌、大肠杆菌、阿米巴原虫、滴虫均有抑制作用，6．25—12．5ug／ml能完全抑制细菌生长。

4．抗肿瘤、抗癌作用：

(1)甘草酸对大鼠腹水肝癌及艾氏腹水癌，吉田肉瘤均有抑制作用。

(2)甘草次酸对骨髓瘤、腹水肝癌、白血病有抑制作用。

(3)甘草甜素有明显抑制黄曲霉素所致肝癌、吉田肉瘤、腹水肝癌、艾氏腹水癌。

(4)甘草皂甙对鼠腹水肝癌、艾氏腹水癌均有抑制作用。

5．抗肿瘤作用机理：甘草甜素有增强小鼠巨噬细胞中一氧化氮产生作用，这种作用对抑制肿瘤增殖有明显作用，甘草甜素引起巨噬细胞，以脂多糖(LPS)进行刺激产生一氧化氮，而抑制肿瘤增殖。

6．甘草复合体(LX)对心、肝、肾、内分泌腺均有保护和解毒作用，各种毒素和药物所致心律失常有保护作用，使心脏收缩力加强，对各种药物和毒素所致肝肾损伤有保护作用，防伤害作用。

(四)油松果所含活性的酸性多糖类。

1．对免疫系统的影响：

Parvifiorb Sieb et Zucc的提取物具有多种免疫活性，多糖类物质能够激活小鼠巨噬细雨胞，热水提取物能提高FC受体活性，酸性多糖能显著刺激小鼠、大鼠离体脾红胞DNA的合成，对白细胞DNA合成也有一定刺激作用。酸性多糖有免疫促进作用。

2．抗AIDS病毒作用：

Pinus Parvitora Sieb et Zucc的提取物PC6经体外实验收，能抑制HIV的复制，对感染的HIV—1的CEM细胞，PC6均能依剂量抑制HIV—1的复制，使病毒繁殖受到抑制，3mg／ml最小浓度抑制效果达到80％，对U937人淋巴细胞中的HIV—1也显示明显的抑制作用，PC6能抑制HIV—1蛋白的表达，但对于转录后水平的HIV—1蛋白无明显影响，PC6能抑制HIV—1蛋白的表达，但参于转录后水平的HIV—1蛋白无明显影响，PC6能抑制HIV—1在CEM细胞中的转录和翻译，在转录水平对LTR引导DNA基因表达也有抑制作用。另有报导：PC6能诱导T细胞(CEM)产生一种对胃蛋白酶敏感的可溶性物质，该物质是PC6产生抑制HIV—1复制作用的原因，这种PC6诱导的HIV—1抑制因子与已知的粒细胞巨噬细胞激活因子(GM—CSF)，细胞介素—3(IL—3)B—转化因子(TGF—B1)与a肿瘤坏死因子(TNF—a)对抗HIV—1均有协同作用。PC6诱导的这种抗HIV—1物质可能是一种新的免疫活性物质。

3．抗肿瘤作用：

Parvifiora Sied et Zucc中提取的酸性多糖有抗肿瘤作用，能依剂量依赖地抑制植入小鼠的肉瘤及腹水癌细胞生长，显著延常小鼠存活时间，抗肿瘤大小酸性强度有关，NaoH提取物的酸性多糖，抗肿瘤活性最强，最明显抑制肉瘤细胞生长，甚至引起肿瘤退化和坏死。油松所含木质素类物对小鼠乳腺癌中细胞增生酶系的活性有抑制作用，175mg／0．1Mi＼0．9％盐水、I、V、对患病的SHV小鼠瘤细胞中胸腺密嘧脱氧核苷酸合成酶、胸腺密喧脱氧核苷激酶等有显著降低活性作用。同时防止肿瘤溃烂，又有防止乳腺结节性增生的生长、发育。本质素有一定搞癌活性。

4．松提取物大剂量使动物睡眠及麻醉用。果实口服有系统性变态反应的报导。

(五)综上所述：1、抗癌作用：商陆多糖皂甙：蓖麻毒蛋白；甘草酸、皂甙、黄酮、多糖；松果所含活性的多糖类、酸性多糖均有抗癌、抗肿瘤活性的协同作用，松果酸多糖和甘草酸封闭蓖麻毒蛋白裂解后释放的B链的细胞结合点后，具有高度特异的强靶细胞杀伤作用。2、抗艾滋病毒(HIV—1)作用：四药的提取成份抗HIV—1有协同作用。3、有免疫调节作用(双向调节、抑制反应、免疫增强作用)。4、甘草有解毒作用：甘草提取复合物LX能解除蓖麻毒蛋白对心血管、呼吸系统、皮肤等强过敏返反应，甘草提取LX可保护心、肝、肾血管组织、调节心律失常和呼吸系统的保护作用，能解除蓖麻毒蛋白对白细胞、淋巴细胞、呼吸功能的抑制，并能降低细胞耗氧量，增加细胞呼吸功能。甘草酸防止蓖麻毒蛋白对肝细胞的破坏和小肠的损伤。甘草酸能保护脑组织，肾上腺、垂体、胸腺、睾丸、卵巢、胰腺及淋巴组织等发生出血性坏死和退行性变，还能保护网状内皮系统、神经节、胸壁从的外围神经细胞核染色质破坏，并有很强的保肾和防伤害功能。

Claims (4)

1、一种治疗艾滋病和肿瘤的药剂，其特征在于其方剂由蓖麻、商陆、甘草、松果组成。

2、一种治疗艾滋病和肿瘤的药剂的制备方法，其特征在于工艺步骤如下：

(一)、蓖麻毒蛋白提取工艺：先剥去蓖麻外硬壳，将白色仁杵成糊状，除去蓖麻油

(1)、在12℃以下加入3倍量乙醇浸4小时后离心，取其沉淀，以水捏溶，水溶液冰冻干燥即得粗制品，粗制品水溶液滤除不溶物，加适量酒精，放置片刻，滤除沉淀，母液再加入少量乙醇至微显混浊，放冰箱里析出结晶，必要时再重结晶；

(2)、酒精分级沉淀法：蓖麻糊加3倍量乙醇，有沉淀析出，离心除去；再于此母液加1倍量乙醇，离心收集此部分沉淀，但仍含杂质，再于此母液加1倍量乙醇，则析出的蛋白质较纯，沉淀用水溶解，冰冻干燥即得成品；

(3)、注射用乳糖酸蓖麻毒蛋白干冷冻结晶的制取：要求前述蛋白质纯度达99．9％以上时，以水溶解，用DEAE—纤维素柱层析的方法纯化二次即得纯品结晶，加0．1M半乳糖酸真空冷冻干燥即得；所得纯品蓖麻毒蛋白，须100％不含蓖麻因和蓖麻碱；

(二)、(1)．商陆皂甙提取工艺：

商陆根薄片加水提取三次，第一次加8倍量，煮沸4小时过滤，第二、三次加4倍量水，煮沸2小时，过滤、滤液合并，浓缩止药的五倍量，取浓硫酸慢慢加到浓缩液中，边加边搅拌，浓缩液1000ml加硫酸40g，加完后，煮至微沸4小时，放冷，倒入等量冷水中，搅匀，放置过夜，弃去上清液，残液即沉淀过滤，沉淀用水洗至PH值为6左右，滤集沉淀，抽干，至60℃以下干燥，既得粗品商陆皂甙元；

(2)．商陆多糖提取工艺：

商陆片加75％乙醇5倍量0．5NNaoH，加热回流2小时，同法提取三次；合并滤液浓缩成膏，加95％乙醇遂搅拌至沉淀，过夜，过滤，回收乙醇，连续2次；加水2倍量，用DEAE纤维素柱层析纯化，连续柱层析纯化2次，得纯商陆多糖PEP—1；

(三)、注射用甘草酸提取工艺：

甘草粉用12倍量0．5％氨水渗漏，渗漏液浓缩至原体积1／5过滤，滤液加浓硫酸至PH3，过滤析出的沉淀，水洗3次，60℃以下干燥，得粗甘草酸

纯品甘草酸提取：以前述所得粗甘草酸400g，加4倍量工业酒精，加热回流三小时，过滤，滤液加2倍量乙醇回流2次，合并回流液加10g活性炭，回流脱色半小时冷却、过滤，滤液通氨气至PH7—7．5，无固体析出为止；滤集沉淀，以少量乙醇洗涤，室温干燥，得甘草酸铵250g，继续用4倍量的80％乙醇，加热溶解并用活性炭脱色，冷却过滤，滤液浓缩，析出白色结晶，即为纯甘草酸。

(四)、松果酸性多糖提纯：

(1)、松果洗净晾干，粉碎粗粉，500g加0．5NNaoH溶液4000ml，浸泡半小时，煎煮1小时，用4层纱布过滤，得第一次液；

(2)、将药渣加0．5NNaoH蒸馏水3000ml，煎煮40分钟，4层纱布过滤，得第二次液；

(3)、药渣加0．5NNaoH蒸馏水溶液2000ml，煎煮40分钟，4层纱布过滤，得第三次液；

(4)、前述三次的滤液合并浓缩成糖浆状，放置，加95％乙醇，随加随搅拌至沉淀完全，放置过夜，回收乙醇，将所得液体再放置4小时后过滤，滤液缩成膏；

(5)、提取物即为酸性多糖，若作静脉注射用，再以水溶解，用DEAE纤维素柱层析二次纯化既得纯品；

(五)、针剂制剂工艺：

(1)、乳糖酸蓖麻毒蛋白干冷冻结晶，精制蓖麻毒蛋白纯品每支含20mg另加等量0．1M半乳糖真空冷冻干燥即得；

(2)、治疗艾滋病和肿瘤的针剂制剂：每瓶含商陆酸性多糖500mg，松果酸性多糖2000mg，甘草酸2500mg，用注射用水加至100ml，灭菌即得；

(3)、将前述乳糖酸蓖麻毒蛋白干冷冻结晶20—60mg，加注射用水2—6ml，或按需要量加入治疗艾滋病和肿瘤的针剂中；

(六)、缓释胶囊制取：蓖麻毒蛋白纯品人用量1ml／kg／日，商陆皂甙纯品，1mg／kg／日，商陆多糖10mg／kg／日，商陆毒蛋白纯品，1mg／kg／日，松果酸性多糖40mg／kg／日，甘草蛋白50mg／kg／日；按人50kg体重计算以提取6种成份，每人日需蓖麻毒蛋白50mg／50kg／日，商陆皂甙50mg／50kg／日，商陆多糖500mg／50kg／日，商陆毒蛋白50mg／50kg／日，松果酸性多糖2000mg／50kg／日，甘草酸2500mg／50kg／日，共合计5150mg，分12个1号胶囊装，每个胶囊装429mg。

3、如权利要求2所述的治疗艾滋病和肿瘤的药剂的制备方法，其特征在于所述蓖麻毒蛋白提取工艺中第2步骤还可以是盐分级沉淀法：原糊状物加硫酸铵至40％的饱合度，所以沉淀颜色较深，离心除去；母液加硫酸铵至50％的饱合度，收集此部分沉淀，但不纯；母液再加硫酸铵至75％饱和度，所得蛋白质沉淀较纯。

4、如权利要求2所述的治疗艾滋病和肿瘤的药剂的制备方法，其特征在于所述注射用甘草酸提取工艺中粗甘草酸的提取也可用甘草浸膏提取，方法如下：甘草浸膏3kg，加热溶解于36升水中，冷至室温，过搅拌边滴加145ml浓硫酸；加完以后静置数小时，滤集沉淀，用水充分洗涤，在60℃以下烘干，得粗甘草酸1．2kg，含量约为55％。