CN1275976C - 99mTcN核标记配合物及其制备和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明是一种99mTcN核标记配合物，其通式为[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)，式中99mTcN代表锝氮中心核，PNP1为一种二膦基胺化合物，DTC为一类氨荒酸盐化合物，T代表吐温-80，通过先制备药盒，再进一步制取放化纯大于95%的所需配合物。本发明通过改变DTC类配体的基团和添加辅料的方法，设计制备的新的标记配合物的心肌摄取较高、滞留较好，心/肝比和心/肺比等靶/非靶比值较高，可用于人体或动物器官或组织的心肌灌注显像剂和肿瘤显像剂。
Description
技术领域
本发明涉及99mTcN核标记配合物及其在人或动物器官或组织的显像剂中的应用，特别是在心肌灌注显像剂和肿瘤显像剂中的应用。
背景技术
心血管疾病是严重危害人们身体健康和生命安全的主要疾病之一，心血管疾病的早期诊断对疾病的预防和治疗有着重要的意义。核心脏病学利用心肌放射性药物进行心肌显像，可实现对心血管疾病的早期诊断，对临床心肌缺血、心肌梗塞等疾病的诊断起着重要的作用。利用放射性核素标记物进行运动或药物负荷心肌灌注显像是一种成熟的诊断和评估冠状动脉疾病程度的技术，用于临床已有近30年历史，其诊断冠心病的价值已为临床所肯定。
对于心肌灌注显像剂，心肌摄取放射性标记化合物的量与局部心肌血流灌注成正比，在显像时表现为正常心肌显影而病灶区出现放射性稀疏缺损，该类显像剂又被称为“冷区”显像剂。理想的心肌灌注显像剂应满足以下要求：①很高的心肌初始摄取率和很好的心肌滞留率，心肌摄取与冠状动脉血流量成正比，且摄取机制与代谢无关；②肝和胃肠的摄取应在运动及药物负荷与静息状态下尽量小，且肝、肺和血中放射性应迅速清除；③显像剂的再分布是非常有用的，但应具有可预测性和可靠性，且在临床上有可行的显像方法。
80年代以来，99mTc以优良的核性质和便宜的价格使其标记的心肌灌注显像剂迅速发展。1981年，Deutsch E等(Deutsch E，Glavan KA，Sodd VJ，et al.，J Nucl Med，1981，22：897-907)首次提出99mTc标记的正一价脂溶性配合物用于心肌灌注显像的可能性，随后报道了大量此类配合物，其中最重要的有[99mTcCl2(DMPE)2]+(DMPE＝1，2-bis(dimethylphosphino)ethane)，其在动物体内显示了很好的心肌摄取和滞留，但在人体心肌中的摄取和滞留却很差。1984年，Jones AG等(Jones AG，Abrams MJ，Davison A，et al.，Int JNucl Med Biol，1984，11：225-234)报道了一种新型正一价99mTc标记的烷基异腈配合物：99mTc-TBI，它是世界上第一个在临床应用中取得成功的99mTc标记的心肌灌注显像剂。此后的近二十年中，99mTc-MIBI、99mTc-tetrofosmin(又名99mTc-P53)、99mTc-furifosmin(又名99mTc-Q12)、99mTc-teboroxime和99mTcN(NOEt)2等心肌灌注显像剂被陆续研制成功并广泛应用于临床，它们的特点列于表1(钟建国，夏振民，国外医学·放射医学核医学分册，1998，22：23-27)。
表1五种99mTc标记的心肌灌注显像剂的特点
| 心肌灌注显像剂 | 优点 | 缺点 |
| 99mTc-MIBI | 心肌摄取对血流变化较为灵敏，被认为是目前最好的心肌灌注显像剂。 | 肝清除较慢，一般需注射后1-2h显像；需服脂肪餐和行甲状腺封闭；运动负荷和静息实验必须分两天完成；需沸水浴加热制备。 |
| 99mTc-tetrofosmin | 肺、肝摄取低且肝清除快，可早期显像和在同一天内进行运动负荷和静态显像；室温制备。 | 心肌细胞(尤其静态下)的摄取低于99mTc-MIBI；配体为有机膦化合物，具有一定的不稳定性。 |
| 99mTc-furifosmin | 肝清除较快，运动负荷和静态显像可一天完成。 | 肺摄取略高于99mTc-MIBI；配体为有机膦化合物。 |
| 99mTc-teboroxime | 心肌初始摄取率最高。 | 心肌清除很快，对显像仪器要求高。 |
| 99mTcN(NOEt)2 | 心肌摄取较高且具有再分布性质。 | 肺初始摄取高，肝和血液中放射性滞留时间长。 |
从表1可以看出：上述五种心肌灌注显像剂各有优点，但同时，缺点也非常明显，它们均不能很好地满足“理想”心肌灌注显像剂的要求，临床应用受限。鉴于心血管病人多，对心肌灌注显像剂的要求高、用量大等特点，因此，研究开发生物性能更好的心肌灌注显像剂仍然是放药工作者的一项重要课题，具有重要的现实意义。
1999年，Duatti A等(Duatti A，Bolzati C，Uccelli L，et al.，EurPatent：EP0949265，1999)进行的大鼠实验表明，[99mTcN(PXP)(DTC)]+类配合物具有一定的心肌摄取。此后，Duatti A等(Duatti A，Bolzati C，Uccelli L，et al.，Int Patent.WO 02/09771，2002)对[99mTcN(PNP)(DTC)]+类配合物进行了深入研究，其中，结果较好的是[99mTcN(PNP3)(DBODC)]+和[99mTcN(PNP5)(DBODC)]+，两种配合物在大鼠心肌中初始摄取较高，滞留较好，与99mTc-MIBI和99mTc-tetrofosmin相比，心肌摄取略高于99mTc-tetrofosmin，与99mTc-MIBI相当。两种配合物的心/肺比随时间呈增大趋势，在30min前，与99mTc-tetrofosmin相当，略高于99mTc-MIBI，30min后，优于99mTc-MIBI和99mTc-tetrofosmin。二者的心/肝比呈指数增加，好于99mTc-MIBI和99mTc-tetrofosmin。在注射[99mTcN(PNP5)(DBODC)]+后60min获得了大鼠心脏的SPECT(单光子发射计算机断层术)图像。总之，[99mTcN(PNP)(DTC)]+类配合物体现了作为心肌灌注显像剂的良好的生物性能，具有重要的研究价值。
在肿瘤放射性药物的研究中，近年来发现了一种有趣的现象：原本设计用于心肌灌注显像的201Tl、99mTc-MIBI、99mTc-tetrofosmin及99mTc-furifosmin，却可以用作探测肿瘤特异性的分子生物学过程的灵敏工具，很多有关该类药物的体外肿瘤细胞实验和体内肿瘤显像实验的研究已见诸报道。其中，99mTc-MIBI在诊断乳腺癌、甲状腺癌等肿瘤疾病方面显示了良好的生物学性质。
发明目的
本发明的目的是克服已有技术的缺点，设计制备了新的[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)类配合物，它们可用于人或动物器官或组织的显像剂，尤其是心肌灌注显像剂和肿瘤显像剂。
发明内容
本发明99mTcN核标记配合物的通式如下：
[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)
式中：99mTcN为锝氮中心核；PNP1为N，N-二[二(3-甲氧基内基)膦基乙基]-2-乙氧基乙胺；DTC为氨荒酸盐，选自N-乙氧基-N-乙基氨荒酸盐(NOEt)、N，N-二乙基氨荒酸盐(DEDC)或N，N-二(2-乙氧基乙基)氨荒酸盐(DBODC)，它们是参照(Morassi R，Sacconi L，J Am Chem Soc(A)，1971：492-499；Jansen A，Pitter S，Monatshefte fue Chemie，1999，130：783794；Pasqualini R，Duatti A，Bellande E，et al.，J NuclMed，1994，35：334-341)所公开的方法制备的；T为辅料吐温-80。
本发明的99mTcN核标记配合物的制备方法包括以下步骤：
(1)制备药盒A：所用的原料丁二酰二酰肼(SDH)、1，2-丙二胺四乙酸(PDTA)和SnCl2·2H2O的重量比为1-20∶1-20∶0.005-0.5，先将SDH和PDTA混合，用已除氧的二次水溶解，再加入用浓度为1-6mol/L的盐酸溶解后的SnCl2·2H2O，混匀、定容，用1mol/L的盐酸或0.1-1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH值为5.0-9.0，用0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌后，将滤液分装至无菌的干净的青霉素小瓶中，将上述青霉素小瓶置于冻干机中，控制温度为-45～-40℃，预冻2小时，然后进行真空干燥，自然升温并最终控制温度为25～28℃，保持4小时，真空度为0.7Pa，再向上述冻干体系中充氮1分钟，然后将装有白色冻干粉末的青霉素小瓶用橡胶塞密封，再用铝盖进一步密封，经质检合格后，贴好标签，称装有白色冻干粉末的每支青霉素小瓶为药盒A；
(2)制备药盒B：将PNP1和甘露醇以重量比为0.2-10∶1-50进行混合，用已除氧的二次水溶解，混匀、定容，用1mol/L的盐酸或0.1-1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH值为2.0-7.0，用0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌后，将滤液分装至无菌的干净的青霉素小瓶中，将上述青霉素小瓶置于冻干机中，控制温度为-45～-40℃，预冻2小时，然后进行真空干燥，自然升温并最终控制温度为25～28℃，保持4小时，真空度为0.7Pa，再向上述冻干体系中充氮1分钟，然后将装有白色冻干粉末的青霉素小瓶用橡胶塞密封，再用铝盖进一步密封，经质检合格后，贴好标签，称装有白色冻干粉末的每支青霉素小瓶为药盒B；
(3)制备药盒C：将氨荒酸盐、甘露醇和Na2HPO4·12H2O以重量比为0.2-10∶1-50∶1-50进行混合，用已除氧的二次水溶解，混匀、定容，用1mol/L的盐酸或0.1-1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH值为5.0-9.0，用0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌后，将滤液分装至无菌的干净的青霉素小瓶中，将上述青霉素小瓶置于冻干机中，控制温度为-45～-40℃，预冻2小时，然后进行真空干燥，自然升温并最终控制温度为25～28℃，保持4小时，真空度为0.7Pa，再向上述冻干体系中充氮1分钟，然后将装有白色冻干粉末的青霉素小瓶用橡胶塞密封，再用铝盖进一步密封，经质检合格后，贴好标签，称装有白色冻干粉末的每支青霉素小瓶为药盒C；
(4)制备药盒D：将吐温-80溶于无水乙醇中，使其浓度为200-2000mg/mL乙醇，用0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌后，将滤液分装至无菌的干净的安瓿瓶中，将瓶口烧结，得到的装有黄色液体的每支安瓿瓶为药盒D；
(5)取1-5mL的99mTcO4新鲜淋洗液注入步骤(1)的药盒A中，摇匀，固体完全溶解后，室温静置5-30分钟得到溶液a；
(6)取步骤(5)溶液a 1-5mL，加入步骤(2)的药盒B中摇匀后，将溶液取出加入药盒C中，摇匀，固体完全溶解后，加热到80-100℃，维持5-30分钟后冷却，得到溶液b；
(7)取步骤(4)药盒D中的溶液0.05-0.2mL加入到步骤(6)盛有溶液b的药盒C中，摇匀即得到放化纯大于95％的配合物。
上述制备过程可以调整为：
(1)所述的步骤(2)和步骤(3)可以合并，将药盒B和C制备成一个药盒B’：将PNP1、氨荒酸盐、甘露醇和Na2HPO4·12H2O以重量比为0.2-10∶0.2-10∶1-50∶1-50进行混合，用已除氧的二次水溶解，混匀、定容，用1mol/L的盐酸或0.1-1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH值为6.0-8.0，用0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌后，将滤液分装至无菌的干净的青霉素小瓶中，将上述青霉素小瓶置于冻干机中，控制温度为-45～-40℃，预冻2小时，然后进行真空干燥，自然升温并最终控制温度为25～28℃，保持4小时，真空度为0.7Pa，再向上述冻干体系中充氮1分钟，然后将装有白色冻干粉末的青霉素小瓶用橡胶塞密封，再用铝盖进一步密封，经质检合格后，贴好标签，称装有白色冻干粉末的每支青霉素小瓶为药盒B’；
(2)步骤(4)和步骤(5)不变，步骤(6)和步骤(7)调整为：
取步骤(5)溶液a 1-5mL，加入到前述的药盒B’中，摇匀，固体完全溶解后，加热到80-100℃，维持5-30分钟后冷却，得到溶液b’，再取步骤(4)药盒D中的溶液0.05-0.2mL加入到盛有溶液b’的药盒B’中，摇匀即得到放化纯大于95％的配合物。
上述步骤(1)至步骤(4)制得的药盒A至药盒D可以分别单独存放，应用时再通过步骤(5)至步骤(7)的过程制得配合物。
本发明所述的化学品，除已提到的按已知方法制备的以外，其余均是市售的。
本发明的优点和效果：本发明通过改变DTC类配体的基团和添加辅料吐温-80的方法，设计制备了一类新的[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)型配合物。上述[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)类配合物的心肌摄取较高，滞留较好，心/肝比和心/肺比等靶/非靶比值均较高，SPECT显像清晰，可用于人和动物器官或组织的心肌灌注显像剂，诊断心肌缺血、梗塞等疾病。另外，[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)类配合物在肿瘤细胞中显示了一定摄取，可用作肿瘤显像剂诊断乳腺癌、肺癌等疾病。
附图说明
图1：[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)类配合物与99mTc-MIBI的小鼠心肌摄取对比；
图2：[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)类配合物与99mTc-MIBI的小鼠心/肝比对比；
图3：[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)类配合物与99mTc-MIBI的小鼠心/肺比对比；
图4：[99mTcN(PNP1)(NOEt)]+(T)在狗体内的时间-放射性曲线；
图5：[99mTcN(PNP1)(NOEt)]+(T)的狗SPECT全身显像图；
图6：乳腺癌(MCF-7)细胞对配合物的摄取与时间关系曲线。
具体实施方式
下面通过具体实例进一步说明本发明的特点。
实例1-3
实例1-3为制备药盒A至药盒D，所用原料与其用量及pH条件见表2。
表2
| 药盒 | 药盒A | 药盒B | |||||
| 原料 | SDH | PDTA | SnCl2·2H2O | pH | PNP1 | 甘露醇 | pH |
| 实例1 | 1mg | 1mg | 0.2mg | 7.0 | 0.2mg | 50mg | 7.0 |
| 实例2 | 20mg | 10mg | 0.4mg | 5.0 | 10mg | 10mg | 4.0 |
| 实例3 | 5mg | 5mg | 0.05mg | 7.5 | 2mg | 10mg | 5.0 |
(接表2)
| 药盒 | 药盒C | 药盒D | ||||||
| 原料 | DTC类配体 | 甘露醇 | Na2HPO4·12H2O | pH | 吐温-80 | 无水乙醇 | ||
| NOEt | DEDC | DBODC | ||||||
| 实例1 | 0.2mg | 20mg | 1mg | 9.0 | 40mg | 0.2mL | ||
| 实例2 | 10mg | 40mg | 40mg | 5.0 | 400mg | 0.2mL | ||
| 实例3 | 2mg | 10mg | 5mg | 8.0 | 200mg | 0.2mL | ||
工艺条件和过程如下：
药盒A、B、C的制备：按配方将原料用已除氧的二次水溶解、混匀、定容，用1mol/L的盐酸或0.1-1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH值至所需范围(见表2)，用0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌后，将滤液分装至无菌的干净的青霉素小瓶中，将上述青霉素小瓶置于冻干机中，控制温度为-45～-40℃，预冻2小时，然后进行真空干燥，自然升温并最终控制温度为25～28℃，保持4小时，真空度为0.7Pa，向上述冻干体系中充氮1分钟，将装有白色冻干粉末的每支青霉素小瓶用橡胶塞密封，再用铝盖进一步密封，经质检合格后，贴好标签，得到药盒A、B、C。
药盒D的制备：按配方将吐温-80溶于无水乙醇中，用0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌后，将滤液分装至无菌的干净的安瓿瓶中，将瓶口烧结后，贴好标签。
按上述方法制备得到的药盒A、B、C均为白色冻干粉末，药盒D为黄色溶液。
实例4
本实例为[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)类配合物的制备
分别取体积为2mL的99mTcO4 -新鲜淋洗液(3.7-3700MBq)，注入实例1-3的药盒A中，摇匀，固体完全溶解后，室温静置15min。将上述溶液分别加入到实例1-3的药盒B中，摇匀后将溶液分别取出再加入到实例1-3的药盒C中，摇匀，固体很快完全溶解，加热到80-100℃，维持15min。冷却后，分别取实例1-3的药盒D中的溶液0.1mL加入到药盒C中，摇匀。经TLC(薄层色谱)分析，得到的三种[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)类配合物的放化纯均大于95％。
实例5
本实例是制备无辅料吐温-80的[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+配合物
取体积为2mL的99mTcO4 -新鲜淋洗液(3.7-3700MBq)，注入实例3的药盒A中，摇匀，固体完全溶解后，室温静置15min。将上述溶液加入到实例3的药盒B中，摇匀后将溶液取出再加入到实例3的药盒C中，摇匀，固体很快完全溶解，加热到80-100℃，维持15min。经TLC分析，配合物的放化纯大于95％。
下面为生物性能测定实例
测定[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)类配合物的生物性能，并与实例5未添加吐温-80辅料的[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+和现有技术中广泛用作心肌灌注显像剂的99mTc-MIBI进行比较。
实例6
本实例为[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)类配合物的小鼠生物分布实验
取体重为18-22g的昆明小鼠按照药典方法进行生物分布实验。尾静脉注射0.1mL(约0.74MBq)的实例4制备得到的[99mTcN(PNP1)(NOEt)]+(T)，并于注射后5、30和60min时，断颈处死，取血、心、肝、肺、肾、骨和肌肉等有关组织和器官，称重并测其放射性计数，计算每克组织的摄取剂量(％ID/g)，并以心脏为靶器官，计算其与血、肝、肺、骨和肌肉的％ID/g的比值，结果见表3和4。由实例4得到的[99mTcN(PNP1)(DEDC)]+(T)和[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+(T)的生物分布用同样方法进行，结果见表5-8。
表3[99mTcN(PNP1)(NOEt)]+(T)的小鼠生物分布数据(％ID/g，αm±s，n＝3)
| 组织 | t/min | ||
| 5 | 30 | ||
| 心血肝肺肾骨肉 | 23.94±1.211.47±0.1314.84±1.635.94±0.0139.16±4.372.55±0.174.17±0.79 | 19.23±2.040.39±0.056.28±0.363.09±0.3818.62±3.231.43±0.353.81±1.10 | 18.85±1.480.25±0.023.20±0.491.97±0.1312.26±1.311.01±0.213.70±1.34 |
表4[99mTcN(PNP1)(NOEt)]+(T)在小鼠体内靶与非靶的αm之比(n＝3)
| 靶/非靶 | t/min | ||
| 5 | 30 | 60 | |
| 心/血心/肝心/肺心/骨心/肉 | 16.291.614.039.395.74 | 49.313.066.2213.455.05 | 75.405.899.5718.665.09 |
表5[99mTcN(PNP1)(DEDC)]+(T)的小鼠生物分布数据(％ID/g，αm±s，n＝3)
| 组织 | t/min | ||
| 5 | 30 | 60 | |
| 心血肝肺肾骨肉 | 24.47±2.701.22±0.229.28±1.126.95±0.0134.50±0.632.97±0.117.56±0.32 | 21.05±3.510.41±0.097.29±0.422.47±1.1430.53±3.031.71±0.175.79±0.13 | 23.99±4.590.30±0.055.52±0.512.62±0.5416.80±2.031.36±0.517.41±1.66 |
表6[99mTcN(PNP1)(DEDC)]+(T)在小鼠体内靶与非靶的αm之比(n＝3)
| 靶/非靶 | t/min | ||
| 5 | 30 | 60 | |
| 心/血心/肝心/肺心/骨心/肉 | 20.062.643.528.243.24 | 51.342.898.5212.313.64 | 79.974.359.1617.643.24 |
表7[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+(T)的小鼠生物分布数据(％ID/g，αm±s，n＝3)
| 组织 | t/min | ||
| 5 | 30 | 60 | |
| 心血肝肺肾骨肉 | 18.55±1.350.93±0.0618.46±1.614.95±0.6346.74±6.401.36±0.142.52±0.99 | 15.73±1.590.23±0.037.97±1.901.51±0.2629.22±4.301.17±0.022.59±0.37 | 12.74±0.880.13±0.013.13±0.941.07±0.3912.68±0.610.62±0.102.76±0.68 |
表8[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+(T)在小鼠体内靶与非靶的αm之比(n＝3)
| 靶/非靶 | t/min | ||
| 5 | 30 | 60 | |
| 心/血心/肝心/肺心/骨心/肉 | 19.951.003.7513.647.36 | 68.391.9710.4213.446.07 | 98.004.0711.9120.554.62 |
由表3-8可以看出，[99mTcN(PNP1)(NOEt)]+(T)、[99mTcN(PNP1)(DEDC)]+(T)和[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+(T)在小鼠中的心肌初始摄取较高、滞留较好，血、肝和肺等非靶组织摄取较低且清除较快，心/血比、心/肝比和心/肺比等靶/非靶比值较高。
为了便于进一步说明本发明标记物在生物性能上的改进，下面通过比较实例进行说明。
实例7
本实例为比较实例1：[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+的小鼠生物分布实验
采用实例6的实验方法，测定实例5得到的[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+在小鼠体内的生物分布，结果见表9和10。
表9[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+的小鼠生物分布数据(％ID/g，αm±s，n＝3)
| 组织 | t/min | ||
| 5 | 30 | 60 | |
| 心血肝肺肾骨肉 | 9.32±1.430.78±0.1045.47±0.402.73±0.2748.56±1.751.73±0.172.44±0.61 | 8.20±0.510.13±0.0310.34±0.401.09±0.0916.42±1.370.52±0.071.57±0.01 | 9.18±0.100.09±0.024.22±1.580.78±0.067.08±0.640.36±0.042.73±029 |
表10[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+在小鼠体内靶与非靶的αm之比(n＝3)
| 靶/非靶 | t/min | ||
| 5 | 30 | 60 | |
| 心/血心/肝心/肺心/骨心/肉 | 11.950.203.415.393.82 | 63.080.797.5215.775.22 | 102.002.1811.7725.503.36 |
对比表7和9、表8和10可知：[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+(T)的心肌摄取和心/肝比值明显高于[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+，在心/血比和心/肺比方面二者相当，说明吐温-80的引入确实明显改善了配合物[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+用于心肌灌注显像的生物性能。
实例8
本实例为比较实例2：99mTc-MIBI的小鼠生物分布实验
采用实例6的实验方法，测定现行心肌灌注显像剂99mTc-MIBI在小鼠体内的生物分布，上述三种[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)类配合物与99mTc-MIBI在心肌摄取、心/肝比和心/肺比方面的数据对比示于图1-3。
图1-3显示：四种配合物的心肌摄取均较高，滞留较好。相比而言，心肌摄取依99mTc-MIBI、[99TcN(PNP1)(DEDC)]+(T)、[99mTcN(PNP1)(NOEt)]+(T)和[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+(T)的顺序降低。在心/肝比方面，99mTc-MIBI随时间呈平稳态势，[99mTcN(PNP1)(NOEt)]+(T)、[99mTcN(PNP1)(DEDC)]+(T)和[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+(T)的心/肝比值较高且随时间延长显著增大，明显优于99mTc-MIBI。另外，四种配合物的心/肺比均较高，数值接近，且均随时间呈增大趋势。
总之，以上数据说明：上述三种[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)类配合物显示了良好的生物性能，心肌摄取较高、滞留较好，心/肝比和心/肺比等靶/非靶比值均较高，体现了用于心肌灌注显像的潜力。
实例9
本实例为[99mTcN(PNP1)(NOEt)]+(T)的狗SPECT显像实验
按前述实例4中方法制备出标记物[99mTcN(PNP1)(OEt)]+(T)，用Toshiba GCA 7200A双探头SPECT仪进行狗的全身显像，实验方法如下：在戊巴比妥溶液麻醉下，狗舌静脉注入放射性活度为15mCi的[99mTcN(PNP1)(NOEt)]+(T)的溶液后，立即以帧/2s连续采集60帧，再以帧/30s连续采集80帧，采用相同ROI(感兴趣区)技术作心、肝、肺和肾的时间-放射性强度曲线，并在40、60、90和120min时进行全身显像。
结果显示：[99mTcN(PNP1)(NOEt)]+(T)在狗体内的心肌摄取较高、滞留较好，肝摄取低且清除快，在注射后22min时心/肝比值即可达1以上(请参见图4)。另外，注射后获得了清晰的心肌显像图，且随时间延长图像变得愈加清晰(请参见图5)，是值得深入研究的新型心肌灌注显像剂。
实例10
本实例为乳腺癌细胞(MCF-7)体外结合实验
按前述实例4中方法制备出标记物[99mTcN(PNP1)(NOEt)]+(T)，将此配合物溶液10μL加入到8mL乳腺癌细胞悬液(MCF-7，1×106个细胞/mL)中，充分振荡摇匀后，置于37℃培养箱中培养。在5、15、30、60和120min时分别取样，每个时相取三个平行样。取样前注意摇匀细胞悬液，再用定量取样器吸取300μL细胞悬液加入到含有200μL DMEM细胞培养基的1.5mL的离心管中，在转速1000-2000r/min的条件下离心3-5min后，先测总放射性计数，再弃去上层清液，然后将附有细胞沉淀的离心管置于阱形探头中测定放射性计数。空白对照实验(非特异性吸附实验)方法同上，只是不含肿瘤细胞。由实例4得到的[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+(T)的乳腺癌细胞(MCF-7)体外结合实验依同样方法进行。实验结果用细胞的百分摄取剂量表示(％D)，计算方法为：
％D＝特异性细胞摄取计数(沉淀计数-空白计数)/总计数×100％
乳腺癌(MCF-7)细胞对[99mTcN(PNP1)(NOEt)]+(T)和[99mTcN(PNP1)(DBODC)]+(T)的摄取实验结果见图6。由图可以看出：乳腺癌细胞(MCF-7)对两种配合物均有一定摄取，且摄取量随时间呈规律性变化。
Claims (6)
1、一种99mTcN核标记配合物，其特征在于：配合物的通式为：[99mTcN(PNP1)(DTC)]+(T)，式中：99mTcN为锝氮中心核；PNP1为N，N-二[二(3-甲氧基丙基)膦基乙基]-2-乙氧基乙胺；DTC为氨荒酸盐，选自N-乙氧基-N-乙基氨荒酸盐、N，N-二乙基氨荒酸盐或N，N-二(2-乙氧基乙基)氨荒酸盐；T为吐温-80。
2、权利要求1所述的99mTcN核标记配合物的制备方法，其特征在于制备过程包括以下步骤：
(1)制备药盒A：所用的原料丁二酰二酰肼、1，2-丙二胺四乙酸和SnCl2·2H2O的重量比为1-20∶1-20∶0.005-0.5，先将丁二酰二酰肼和1，2-丙二胺四乙酸混合，用已除氧的二次水溶解，再加入用浓度为1-6mol/L的盐酸溶解后的SnCl2·2H2O，混匀、定容，用1mol/L的盐酸或0.1-1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH值为5.0-9.0，用0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌后，将滤液分装至无菌的干净的青霉素小瓶中，将上述青霉素小瓶置于冻干机中，控制温度为-45～-40℃，预冻2小时，然后进行真空干燥，自然升温并最终控制温度为25～28℃，保持4小时，真空度为0.7Pa，再向上述冻干体系中充氮1分钟，然后将装有白色冻干粉末的青霉素小瓶用橡胶塞密封，再用铝盖进一步密封，经质检合格后，贴好标签，称装有白色冻干粉末的每支青霉素小瓶为药盒A；
(2)制备药盒B：将N，N-二[二(3-甲氧基丙基)膦基乙基]-2-乙氧基乙胺和甘露醇以重量比为0.2-10∶1-50进行混合，用已除氧的二次水溶解，混匀、定容，用1mol/L的盐酸或0.1-1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH值为2.0-7.0，用0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌后，将滤液分装至无菌的干净的青霉素小瓶中，将上述青霉素小瓶置于冻干机中，控制温度为-45～-40℃，预冻2小时，然后进行真空干燥，自然升温并最终控制温度为25～28℃，保持4小时，真空度为0.7Pa，再向上述冻干体系中充氮1分钟，然后将装有白色冻干粉末的青霉素小瓶用橡胶塞密封，再用铝盖进一步密封，经质检合格后，贴好标签，称装有白色冻干粉末的每支青霉素小瓶为药盒B；
(3)制备药盒C：将氨荒酸盐、甘露醇和Na2HPO4·12H2O以重量比为0.2-10∶1-50∶1-50进行混合，用已除氧的二次水溶解，混匀、定容，用1mol/L的盐酸或0.1-1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH值为5.0-9.0，用0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌后，将滤液分装至无菌的干净的青霉素小瓶中，将上述青霉素小瓶置于冻干机中，控制温度为-45～-40℃，预冻2小时，然后进行真空干燥，自然升温并最终控制温度为25～28℃，保持4小时，真空度为0.7Pa，再向上述冻干体系中充氮1分钟，然后将装有白色冻干粉末的青霉素小瓶用橡胶塞密封，再用铝盖进一步密封，经质检合格后，贴标签，称装有白色冻干粉末的每支青霉素小瓶为药盒C；
(4)制备药盒D：将吐温-80溶于无水乙醇中，使其浓度为200-2000mg/mL乙醇，用0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌后，将滤液分装至无菌的干净的安瓿瓶中，将瓶口烧结，得到的装有黄色液体的每支安瓿瓶为药盒D；
(5)取1-5mL的99mTcO4 -新鲜淋洗液注入步骤(1)的药盒A中，摇匀，固体完全溶解后，室温静置5-30分钟得到溶液a；
(6)取步骤(5)溶液a 1-5mL，加入步骤(2)的药盒B中摇匀后，将溶液取出加入药盒C中，摇匀，固体完全溶解后，加热到80-100℃，维持5-30分钟后冷却，得到溶液b；
(7)取步骤(4)药盒D中的溶液0.05-0.2mL加入到步骤(6)盛有溶液b的药盒C中，摇匀即得到放化纯大于95％的配合物。
3、按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于：
(1)步骤(2)和步骤(3)可以合并，将药盒B和C制备成一个药盒B’：将N，N-二[二(3-甲氧基丙基)膦基乙基]-2-乙氧基乙胺、氨荒酸盐、甘露醇和Na2HPO4·12H2O以重量比为0.2-10∶0.2-10∶1-50∶1-50进行混合，用已除氧的二次水溶解，混匀、定容，用1mol/L的盐酸或0.1-1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液pH值为6.0-8.0，用0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌后，将滤液分装至无菌的干净的青霉素小瓶中，将上述青霉素小瓶置于冻干机中，控制温度为-45～-40℃，预冻2小时，然后进行真空干燥，自然升温并最终控制温度为25～28℃，保持4小时，真空度为0.7Pa，再向上述冻干体系中充氮1分钟，然后将装有白色冻干粉末的青霉素小瓶用橡胶塞密封，再用铝盖进一步密封，经质检合格后，贴好标签，称装有白色冻干粉末的每支青霉素小瓶为药盒B’；
(2)步骤(6)和步骤(7)调整为：
取步骤(5)溶液a 1-5mL，加入到前述的药盒B’中，摇匀，固体完全溶解后，加热到80-100℃，维持5-30分钟后冷却，得到溶液b’，再取步骤(4)药盒D中的溶液0.05-0.2mL加入到盛有溶液b’的药盒B’中，摇匀即得到放化纯大于95％的配合物。
4、权利要求1所述的99mTcN核标记配合物在制备人体或动物的器官或组织的显像剂中的用途。
5、权利要求1所述的99mTcN核标记配合物在制备心肌灌注显像剂中的用途。
6、权利要求1所述的99mTcN核标记配合物在制备肿瘤显像剂中的用途。
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