CN100400106C - 吐温介入的锝-99m异腈类配合物、二步法异腈类药盒及应用 - Google Patents

Abstract

一种吐温(聚乙氧基油酸山梨醇)介入的锝-99m标记的异腈类配合物，为吐温和^99mTc-(CNR)₆的结合物，其中，所述的R选自被1～4个相同或不相同的C_1-4烷基或C_1-4烷氧基取代或未取代的C_1-10烷基或C_5-10环烷基，所述的配合物是按所述的湿法或药盒法制备的。本发明还涉及用于制备所述配合物的二步法药盒和其制备方法，该药盒A瓶为冻干药盒，其中冻干还原剂、pH缓冲剂和赋形剂的重量比为(0.1～10)∶(0.5～50)∶(20～200)，B瓶为溶液，其中异腈配体和吐温的重量比为1∶(10～60)。所述的配合物可用于人或动物的器官或组织中作为心肌和肿瘤的显像剂，提高了心/肝比和心/血比，更加有利于得到清晰、高质量的显像图像，并可实现心肌的提前显像。

Description

吐温介入的锝-99m异腈类配合物、二步法异腈类药盒及应用

技术领域

本发明涉及一种锝-99m(^99mTc)标记的异腈类配合物，特别涉及一类吐温(聚乙氧基油酸山梨醇)介入的锝-99m标记的异腈类配合物。本发明还涉及一种用于制备上述配合物的二步法异腈类药盒，及其该二步法药盒的制备方法；另外，本发明进一步涉及上述吐温介入下的锝-99m标记的异腈类配合物在人或动物的器官或组织中作为显像剂的用途，特别是在心肌或肿瘤中作为显像剂的用途。

背景技术

目前，心血管疾病和肿瘤是严重危害人类健康的两大主要疾病。心血管疾病和肿瘤疾病的早期诊断对疾病的预防和治疗具有重要的意义。其中，核心脏病学利用放射性核素进行心肌灌注显像可实现对心血管疾病的早期诊断，目前该项诊断已经成为心脏病学检查的重要内容。

^99mTc具有半衰期短(6.02h)，γ射线能量适中(140KeV)等优良的核性质，其能与SPECT(Single-Photon Emission Computed Tomography，单光子发射计算机断层术)配合用于体内显像，且病人受到的辐射剂量很低。医用⁹⁹Mo/^99mTc发生器的研制成功，使^99mTc核素使用方便，价格低廉，因此^99mTc成为研究心肌灌注显像剂和肿瘤显像剂的首选标记核素，并且取得了巨大进展。

目前，^99mTc标记心肌灌注显像剂可以分为正一价和零价两类。Deutsch E等于1981年首次提出^99mTc标记正一价脂溶性配合物用于心肌灌注显像的可能性(Deutsch E，Bushong W，Glavan KA et al.Heart imaging with cationiccomplexes of technetium.Science，1981，214：85)。1984年，Jones AG等报道了一类^99mTc标记烷基异腈类配合物([^99mTc(I)(CNR)₆]⁺，R＝烷基)，结构式见(a)。其中^99mTc-TBI于同年用于临床试验，是世界上第一个在临床应用取得成功的^99mTc标记心肌灌注显像剂，但它的肝、肺本底高，清除慢，影响心肌成像质量(Holman BL，Jones AG，Lister-James J et al.A newTc-99m-labeled myocardial imaging agent，hexakis(t-butylisonitrile)technetium(I)[Tc-99m-TBI]：initial experience in the human.J Nucl Med，1984，25：1350)。

随后，有关此类配合物的研究十分丰富，并从中筛选出生物性能优良的^99mTc-CPI(CPI＝Carbomethoxyisopropylisonitrile，甲酯异丙异腈)，其分子中的酯基在体内水解，加速其在肝和肺中的代谢，从而改善了其生物性能。临床试验表明其肺清除和肝浓集等方面都优于^99mTc-TBI(Holman BL，Sporn V，Jones AG et al.Myocardial imaging with technetium-99m-CPI：initial experiencein the human.J Nucl Med，1987，28：13)。

另一报道的异腈类配合物^99mTc-MIBI成为第一个全世界公认的^99mTc标记心肌灌注显像剂，现在临床广泛使用。它的心肌显像质量明显优于^99mTc-TBI和^99mTc-CPI(Wackers FJT，Berman DS，Maddahi J et al.Technetium-99m hexakis-2-methoxy-isobutyl-isonitrile：human biodistribution，dosimetry，safety，and preliminary comparison to thallium-201 for myocardialperfusion imaging.J Nucl Med，1989，30：301)。McKusick等将^99mTc-TBI、^99mTc-CPI和^99mTc-MIBI的心肌与本底摄取之比进行了比较，结果见表1，由此可见^99mTc-MIBI的生物性能确实优于^99mTc-TBI和^99mTc-CPI。

表1  ^99mTc-TBI、^99mTc-CPI、^99mTc-MIBI的心肌与本底摄取之比的比较

但^99mTc-MIBI并非完美，其在肝脏中的浓集影响了对心肌显像结果的正确评价。

1992年，^99mTc(III)-Q12([^99mTc(III)(SWL)(TMPP)₂])⁺，又称^99mTc-furifosmin)被报道，结构式见(b)，它的心肌摄取高、滞留好，在5小时时仍无明显清除和再分布(Rossetti C，Vanoli G，Paganelli G et al.Human biodistribution，dosimetry and clinical use of technetium(III)-99m-Q12.J Nucl Med，1994，35：1571 )。^99mTc-Q12的心肌摄取和血、肝清除都很快，而且肺本底又很低，因此，在注射后15min即可得到高质量的心肌图像，但由于其属于混配配合物，制备较为困难，目前尚未在临床上得以推广。

1993年，Kelly等报道了配合物[^99mTc(V)O₂(tetrofosmin)₂]^-(tetrofosmin＝1，2-bis[bis(2-ethoxyethyl)phosphino]ethane，1，2-双[双(2-乙氧乙基)膦]乙烷，早期代号为P53)，结构式见(c)，它的非靶本底清除快、心肌摄取高、滞留好(Kelly ID，Forster AM，Higley B et al.Technetium-99m-tetrofosmin as a new radiopharmaceutical for myocardialperfusion imaging.J Nucl Med，1993，34：222)。此配合物已被广泛深入研究，其缺点是配体的合成条件苛刻，产率低。

上述几种正一价的放射性锝-99m标记的心肌灌注显像剂的结构式如下：

以上介绍的几种心肌灌注显像剂均为正一价脂溶性配合物。而在1986年，Nunn等报道了一种新的七配位中性脂溶性配合物^99mTc-teboroxime，也是锝肟硼酸加合物(BATOs)中最好的一种(Nunn AD et al.J Nucl Med，1986，27：893)，结构式见(d)。它的一次通过摄取高，早期摄取多，清除快，有明显的再分布性质。在2min时可获得高质量心肌图像，但同样因清除快而需要多探头SPECT显像，这也是其不足之处。

1994年，Pasqualini等报道了另一类基于^99mTcN核的中性心肌灌注显像剂，其中以^99mTcN(NOEt)₂的心肌显像效果最好(Pasqualini R，Duatti A，Bellande E et al.Bis(dithiocarbamato)nitrido technetium-99m radio-pharmaceuticals：a class of neutral myocardial imaging agents.J Nucl Med，1994，35：334)，结构式见(e)。它的心肌摄取高，而且滞留时间长达2h以上，大大不同于中性BATOs类配合物，其滞留机制尚不清楚。研究表明，其在90分钟内有再分布性质。^99mTcN(NOEt)₂的明显不足是有较高的肝本底。

上述两种零价的心肌灌注显像剂的结构式如下：

(d)^99mTc-teboroxime        (e)^99mTcN(NOEt)₂的结构

在国内，自有文献报道以来，北京师范大学、医科院北京阜外医院以及江苏原子医学研究所先后开始了异腈原料药的合成，标记化合物的研制，如^99mTc-TBI，^99mTc-CPI和^99mTc-MIBI等，以及冻干药盒的研制。1993年北京师范大学、医科院北京阜外医院以及江苏原子医学研究所获得了^99mTc-MIBI的新药证书，并将其冻干药盒作为产品供应国内各大医院，用于心肌灌注显像和某些恶性肿瘤的诊断，取得了良好的经济效益和社会效益。

然而由于^99mTc-MIBI也存在某些缺点，在肝脏中的浓集影响了对心肌显像结果的正确评价。由于其代谢较慢，一般需要在注射后60分钟显像；有时还需要采取进食方法，以减少肝脏对心肌显像的干扰等。针对上述不足，北京师范大学一直在进行各种探索，并取得了进展([1]王学斌，张现忠，唐志刚.新型MIBI药盒生物分布的初步研究，第二届全国核心脏病学学术会议论文汇编，1999，P7-8；[2]张现忠，王学斌.^99mTcN-MIBI的电荷性质及其与^99mTc-MIBI的比较，核化学与放射化学，2000，22(1)，55-59；[3]Zhang XZh，Wang XB，Tang ZG，Zhang JB，et al.Effects of tween-80on the Biodistributionof several Lipophilie Technetium-99m Complexes，Nucl Med Biol，2001，28(3)：303-308)。

在上述多年研究的基础上，发明人提出了一种具有优良特性的新型锝-99m标记的异腈类配合物及其二步法药盒。

发明内容

本发明的首要目的在于提供具有优良显像性能的一类新型放射性锝-99m标记的异腈类配合物，其为吐温介入的放射性锝-99m标记的异腈类配合物；

本发明的另一目的在于提供一种用于制备上述吐温介入的放射性锝-99m标记的异腈类配合物的二步法异腈类药盒；

本发明的再一目的在于提供一种上述二步法异腈类药盒的制备方法；

本发明进一步目的是提供一种所述的吐温介入的放射性锝-99m标记的异腈类配合物在人或动物的器官、组织中作为显像剂的用途，特别是在心肌或肿瘤中作为显像剂的用途。

本发明提供了一种吐温介入的放射性锝-99m标记的异腈类配合物，目前的研究尚不能用特定的结构式来表示其结构，但它的部分结构是清楚的，即是以^99mTc-(CNR)₆为核心的，其中锝(Tc)是以+1价形式存在的，与该中心核Tc配位的六个CNR异腈配体的结构是清楚的，但该配合物又如何与药盒中的相关成分吐温结合构成更复杂的复合体，达到改进原配合物^99mTc-(CNR)₆生物性能的目的，仍在进行研究之中。对于本发明所述的吐温介入的放射性锝-99m标记的异腈类配合物来说，可建议用^99mTc-CN-R·T表示，T表示吐温部分。此是一种习惯的示意方法，并非用于确切表示所述放射性配合物的结构。

由于本发明吐温介入的放射性锝-99m标记的异腈类配合物属于尚不知确切结构的物质，因此只能用它的部分结构和其制备方法进行表征。

本发明提供了一种吐温介入的放射性锝-99m标记的异腈类配合物，该配合物为吐温和结构为^99mTc-(CNR)₆的配合物的结合物，其中，所述的R选自被1～4个相同或不相同的C_1-4烷基或C_1-4烷氧基取代或未取代的C_1-10烷基或C_5-10环烷基，该吐温介入的放射性锝-99m标记的异腈类化合物是通过以下的湿法或药盒法制备而得：

湿法：

将含有异腈配体CNR、吐温的乙醇溶液，加入含有还原剂、pH值缓冲剂和赋形剂的反应瓶中，搅拌溶解后，再加入18.5～1850兆贝克的高锝酸根^99mTcO₄ ^-淋洗液，充分混匀，置沸水浴中反应10～15分钟，得到吐温介入的锝-99m标记的异腈类配合物。其中，异腈配体CNR、吐温、还原剂、pH值缓冲剂和赋形剂的重量比为1∶(10～60)∶(0.1～10)∶(0.5～50)∶(20～200)。

药盒法：由下述的A瓶和B瓶进行放射性标记而得。

A瓶的制备：

将还原剂：pH值缓冲剂：赋形剂以(0.1～10)∶(0.5～50)∶(20～200)的重量比溶于充氮二次水中(充氮量足以保证还原剂不被氧化)，pH值调节至4.0～5.6，经无菌过滤分装于容器中，再经冷冻干燥，充氮气密封得冻干的药盒A瓶；

将异腈类配体CNR：吐温以1∶(10～60)的重量比溶于乙醇中，经充分溶解后分装于容器中，制得药盒B瓶；

在无菌条件下，将药盒B瓶中的溶液加入到药盒A瓶中，再将约18.5～1850兆贝克的高锝酸根^99mTcO₄ ^-淋洗液(从医用⁹⁹Mo/^99mTc发生器获得)加入到药盒A瓶中，充分混匀后，于沸水浴中加热反应10～15分钟，得到所述吐温介入的放射性锝-99m标记的异腈类配合物。

在制备药盒A瓶的步骤中，若分装的容器是西林瓶，则每支冻干药盒的还原剂用量不低于0.05mg；

A瓶中所述的还原剂为可将^99mTc⁺⁷(^99mTcO₄ ^-)还原为^99mTc⁺¹(^99mTc(I))的常规化学试剂，例如Sn(II)卤素盐(即二价亚锡的卤素盐)、二氧硫脲、亚硫酸钠或连二亚硫酸钠等；所述的Sn(II)卤素盐包括SnCl₂·2H₂O、SnF₂等。还原剂优选二氧硫脲和SnCl₂·2H₂O，尤其优选二氧硫脲。

所述的pH值缓冲剂为调节体系酸度的物质，可以使体系的pH值在较小范围内变动，例如磷酸或其盐、柠檬酸或其盐、酒石酸或其盐、乙酸或其盐、抗坏血酸，或L-半胱氨酸等。缓冲剂优选柠檬酸钠和磷酸盐，尤其优选磷酸盐。

所述的赋形剂为保护冻干药盒中的还原剂以及决定冻干粉末外观，且不会影响最终配合物制备的化学物质，例如氯化钠、甘露醇、葡萄糖或尿素等。赋形剂优选甘露醇和葡萄糖，尤其优选甘露醇。

在制备B瓶的步骤中，若分装容器为安瓿，所用配体CNR的含量不少于0.5mg；

所述的吐温可为吐温-20，吐温-40或吐温-80，优选吐温-80。

所述的异腈类配体CNR，以及所述的吐温介入的放射性锝-99m标记的异腈类配合物中，R选自被1～4个相同或不相同的C_1-4烷基或烷氧基取代或未取代的C_1-10烷基或环烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧异丁基、环戊基、环己基、2-甲基环己基、2，3-二甲基环己基、3，3，5-三甲基环己基、环庚基、环辛基等。R优选为被1～4个相同或不相同的C_1-2烷基或烷氧基取代或未取代的C_1-4烷基，进一步优选叔丁基或甲氧异丁基。

同时，本发明提供了一种制备上述吐温介入的锝-99m标记的异腈类配合物的二步法异腈药盒，由A瓶和B瓶组成，其中：

A瓶为冻干药盒，其中组分为还原剂、pH值缓冲剂和赋形剂，它们三者的重量比依序为(0.1～10)∶(0.5～50)∶(20～200)；

B瓶为溶液，其中组分为溶解于乙醇中的异腈配体CNR和吐温，它们二者的重量比为1∶(10～60)，其中，R选自被1～4个相同或不相同的C_1-4烷基或烷氧基取代或未取代的C_1-10烷基或环烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧异丁基、环戊基、环己基、2-甲基环己基、2，3-二甲基环己基、3，3，5-三甲基环己基、环庚基或环辛基等。R优选为被1～4个相同或不相同的C_1-2烷基或烷氧基取代或未取代的C_1-4烷基，进一步优选叔丁基或甲氧异丁基。

A瓶为无菌无热源的冻干药盒，当A瓶的分装容器为西林瓶时，每支冻干药盒中的还原剂用量不低于0.05mg；

A瓶中所述的还原剂为可将^99mTc⁺⁷(^99mTcO₄ ^-)还原为^99mTc⁺¹(^99mTc(I))的常规化学试剂，例如Sn(II)卤素盐、二氧硫脲、亚硫酸钠或连二亚硫酸钠等；所述的Sn(II)卤素盐包括SnCl₂·2H₂O、SnF₂等。还原剂优选二氧硫脲和SnCl₂·2H₂O，尤其优选二氧硫脲。

所述的pH值缓冲剂为调节体系酸度的物质，可以使体系的pH值在较小范围内变动，例如磷酸或其盐、柠檬酸或其盐、酒石酸或其盐、乙酸或其盐、抗坏血酸，或L-半胱氨酸等。pH值缓冲剂优选柠檬酸钠和磷酸盐，尤其优选磷酸盐。

所述的赋形剂为保护冻干药盒中的还原剂以及决定冻干粉末外观，且不会影响最终配合物制备的化学物质，例如氯化钠、甘露醇、葡萄糖或尿素等。赋形剂优选甘露醇和葡萄糖，尤其优选甘露醇。

B瓶为无菌无热原的溶液，当分装容器为安瓿时，每支安瓿中配体CNR的含量不少于0.5mg。

所述的吐温可为吐温-20，吐温-40或吐温-80，优选吐温-80。

上述的二步法异腈药盒，是按照下述的方法，分别制备A瓶和B瓶而得到：

1)A瓶的制备：

将还原剂：pH值缓冲剂：赋形剂以(0.1～10)∶(0.5～50)∶(20～200)的重量比溶于充氮二次水中(充氮量足以保证还原剂不被氧化)，pH调节至4.0～5.6，经无菌过滤分装于容器中，再经冷冻干燥，充氮气密封得冻干的药盒A瓶；

2)B瓶的制备：

将作为主要原料药的异腈类配体CNR和吐温以1∶(10～60)的重量比溶于乙醇中，经充分溶解后分装于容器中，制得药盒B瓶，其中R选自被1～4个相同或不相同的C_1-4烷基或烷氧基取代或未取代的C_1-10烷基或环烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧异丁基、环戊基、环己基、2-甲基环己基、2，3-二甲基环己基、3，3，5-三甲基环己基、环庚基、环辛基等。R优选为被1～4个相同或不相同的C_1-2烷基或烷氧基取代或未取代的C_1-4烷基，进一步优选叔丁基或甲氧异丁基。

A瓶为无菌无热原的冻干药盒，在制备药盒A瓶的步骤中，若分装的容器是西林瓶，则每支冻干药盒的还原剂用量不低于0.05mg；

A瓶中所述的还原剂为可将^99mTc⁺⁷(^99mTcO₄ ^-)还原为^99mTc⁺¹(^99mTc(I))的常规化学试剂，例如Sn(II)卤素盐、二氧硫脲、亚硫酸钠或连二亚硫酸钠等；所述的Sn(II)卤素盐包括SnCl₂·2H₂O、SnF₂等。还原剂优选二氧硫脲和SnCl₂·2H₂O，尤其优选二氧硫脲。

所述的pH值缓冲剂为调节体系酸度的物质，可以使体系的pH值在较小范围内变动，例如磷酸或其盐、柠檬酸或其盐、酒石酸或其盐、乙酸或其盐、抗坏血酸，或L-半胱氨酸等。pH值缓冲剂优选柠檬酸钠和磷酸盐，尤其优选磷酸盐。

所述的赋形剂为保护冻干药盒中的还原剂以及决定冻干粉末外观，且不会影响最终配合物制备的化学物质，例如氯化钠、甘露醇、葡萄糖或尿素等。赋形剂优选甘露醇和葡萄糖，尤其优选甘露醇。

B瓶为无菌无热原的溶液，在制备B瓶的步骤中，若分装容器为安瓿，所用配体CNR的含量不少于0.5mg；

所述的吐温可为吐温-20，吐温-40或吐温-80，优选吐温-80。

本发明所述的吐温介入的放射性锝-99m标记的异腈类配合物可在人或动物的器官或组织中用作显像剂，特别是在心肌或肿瘤中用作显像剂。

附图说明

图1为本发明的配合物中吐温-80浓度与^99mTc-MIBI·T分配系数的关系图。

具体实施方式

通过下述的制备例、实施例和性能测定实施例可使本发明得到更清楚的说明：

一、制备例：异腈配体CNR的制备：

参照中国专利申请00107287.0中公开的方法制备得到异腈配体甲氧异丁基异腈(MIBI)和CNR′，其中CNR′为环戊基异腈(CPeFI)，环己基异腈(CHI)，2-甲基环己基异腈(MCHI)，2，3-二甲基环己基异腈(DMCHI)，3，3，5-三甲基环己基异腈(TMCHI)，环庚基异腈(CHpI)或环辛基异腈(COI)。

另一种配体叔丁基异腈(TBI)为Acros产品。

二、实施例：

实施例1：二步法MIBI(甲氧异丁异腈)药盒的制备

二步法药盒分为A瓶和B瓶两部分。其中A瓶为无菌无热原冻干药盒，主要含有还原剂、pH值缓冲剂、赋形剂等，A瓶的作用在于将^99mTcO₄ ^-淋洗液还原为^99mTc(I)价，使之形成可与MIBI配体进行螯合的化学状态。

1)A瓶：冻干药盒的制备(以100支为例)

取二氧硫脲100mg，磷酸二氢钠500mg，甘露醇2000mg溶于充氮二次水中，并用该充氮二次水将该混合液定容至100mL，pH值会自然控制在4.0～5.6之间，无菌过滤该混合溶液，取100支，每支为10mL的西林瓶，每瓶中分装1.0mL，然后经冷冻干燥后充氮密封得A瓶。

2)B瓶：MIBI安瓿的制备(以100支为例)

二步法药盒B瓶为安瓿盛装的无菌无热原溶液，其主要提供制备吐温介入的锝-99m标记的MIBI配合物注射液的主原料药。

取上述制备例制备的MIBI 100mg和吐温-80 1500mg溶于无水乙醇20mL中，经充分溶解后，取100支每支2mL的安瓿瓶，每瓶中分装0.2mL该溶液，封口得B瓶。

实施例2：吐温介入的放射性锝-99m标记的MIBI配合物注射液的制备

A：湿法

将含有MIBI配体10mg、吐温-80 150mg溶于乙醇中，然后加入到含有二氧硫脲10mg，磷酸二氢钠50mg，甘露醇200mg的反应瓶中，搅拌溶解后，再加入18.5～1850兆贝克的高锝酸根^99mTcO₄ ^-淋洗液，充分混匀，置沸水浴中反应10～15分钟，即得到吐温介入的锝-99m标记的异腈类配合物。

B：药盒法

在无菌条件下，将实施例1中制备的二步法药盒B瓶打开，用注射器将其中的溶液取出注入所述的A瓶中，然后再将约18.5～1850兆贝克的高锝酸根^99mTcO₄ ^-淋洗液(从医用⁹⁹Mo/^99mTc发生器获得)加入A瓶中，充分摇匀后，将A瓶置于沸水浴中，加热反应15min，取出室温放置冷却后，即得吐温介入的放射性锝-99m标记的MIBI配合物^99mTc-MIBI·T注射液。

实施例3：二步法TBI(叔丁基异腈)药盒的制备

二步法药盒分为A瓶和B瓶两部分。其中A瓶为无菌无热原冻干药盒，其主要含还原剂、pH值缓冲剂、赋形剂等，A瓶的作用在于将^99mTcO₄ ^-淋洗液还原为^99mTc(I)价，使之形成可与TBI配体进行螯合的化学状态。

1)A瓶：冻干药盒的制备(以100支为例)

取SnCl₂·2H₂O 10mg，柠檬酸钠50mg，葡萄糖200mg溶于充氮二次水中，并用该充氮二次水将该混合液定容至100mL，用0.1mol/L NaOH溶液调节pH值在4.0～5.6之间，无菌过滤该混合溶液，取100支，每支为10mL的西林瓶，每瓶中分装1.0mL，然后经冷冻干燥后充氮密封得A瓶。

2)B瓶：TBI安瓿的制备(以100支为例)

二步法药盒B瓶为安瓿盛装的无菌无热原溶液，其主要提供制备吐温介入的锝-99m标记的TBI配合物注射液的主原料药。

取Acros产品叔丁基异腈TBI(97％)100mg和吐温-80 1000mg溶于无水乙醇20mL中，经充分溶解后，取100支每支2mL的安瓿瓶，每瓶中分装0.2mL该溶液，封口得B瓶。

实施例4：吐温介入的放射性锝-99m标记的TBI配合物注射液的制备

采用实施例3制备得到的二步法TBI(叔丁基异腈)药盒，按照实施例2的药盒法制备得到吐温介入的放射性锝-99m标记的TBI配合物^99mTc-TBI·T注射液，其中，加热时间为10min。

实施例5：二步法CNR′(CNR′的定义如制备例中所述)药盒的制备

1)A瓶：冻干药盒的制备(以100支为例)

取二氧硫脲10mg，磷酸二氢钠50mg，甘露醇2000mg溶于充氮二次水中，并用该充氮二次水将该混合液定容至100mL，pH值会自然控制在4.0～5.6之间，无菌过滤该混合溶液，取100支，每支为10mL的西林瓶，每瓶中分装1.0mL，然后经冷冻干燥后充氮密封得A瓶。

2)B瓶：CNR′安瓿的制备(以100支为例)

取制备例所制备的异腈配体CNR′50mg和吐温-40 3000mg溶于无水乙醇20mL中，经充分溶解后，取100支每支2mL的安瓿瓶，每瓶中分装0.2mL该溶液，封口得B瓶。

实施例6：吐温介入的放射性锝-99m标记的CNR′配合物注射液的制备

采用实施例5中制备得到的二步法药盒，按照实施例2的药盒法制备得到吐温介入的放射性锝-99m标记的CNR′配合物^99mTc-CNR′·T注射液。

三、性能测定实施例

下面对本发明二步法异腈类药盒的性能测定描述如下：

1、^99mTc-CNR·T注射液的放射化学纯度的测定

以实施例2、4、6制备的^99mTc-MIBI·T、^99mTc-TBI·T和^99mTc-CNR′·T注射液为例，对该类配合物的放射化学纯度进行测定。

可采用三种展开体系对实施例2，4和6中分别制备得到的^99mTc-MIBI·T、^99mTc-TBI·T和^99mTc-CNR′·T的生成进行层析鉴定，体系1：展开剂为氯仿∶丙酮∶浓氨水＝2∶6∶0.1(v/v)，载体为聚酰胺薄片；体系2：展开剂为乙腈，载体为聚酰胺薄片；体系3：展开剂为乙醇，载体为新华滤纸；结果见表2。

表2  ^99mTc-MIBI·T、^99mTc-TBI·T和^99mTc-CNR′·T注射液的层析结果

从表2的结果可以看出，采用三种体系中的任何一种，都可以将产物^99mTc-MIBI·T，^99mTc-TBI·T或^99mTc-CNR′·T与其他杂质分开，进行^99mTc-MIBI·T，^99mTc-TBI·T或^99mTc-CNR′·T的放化纯测定。其中尤以体系1将三种不同组分分开得最好，这对于计算每种组分在总产物中所占的比例非常有利。

2、^99mTc-CNR·T分配系数的测定

以^99mTc-MIBI·T配合物溶液和^99mTc-TBI·T配合物溶液为例，对分配系数进行测定。

分别制备放化纯大于95％的^99mTc-MIBI配合物溶液和^99mTc-TBI配合物溶液，含有0.01％，0.1％，1％，2％，5％和10％吐温-80浓度的^99mTc-MIBI·T配合物溶液和^99mTc-TBI·T配合物溶液。取0.1mL(1.11MBq)各种溶液加入到含有0.2mL正辛醇和2.0mL蒸馏水的10mL离心试管中，盖好后充分振荡5分钟，分别取有机相和水相各0.1mL于洁净试管中，在井形γ探测器上测量放射性计数，其分配系数P为N_有/N_水，重复本操作3次后取平均值为该配合物的分配系数。^99mTc-TBI·T和^99mTc-MIBI·T显示出类似的影响趋势，现列出^99mTc-MIBI·T的实验结果如图1所示。由此可见吐温-80的浓度增加，脂水分配系数不断降低，直至Tween-80的浓度大于1％后趋于恒定。

3、^99mTc-CNR·T稳定性的测定

以^99mTc-MIBI·T配合物溶液和^99mTc-TBI·T配合物溶液为例，对该类配合物的稳定性进行测定。

将实施例2和4制备的^99mTc-MIBI·T配合物溶液^99mTc-TBI·T配合物溶液在室温下放置7小时后进行点样层析，与刚制备的新鲜溶液对比，测定放化纯。实验结果表明，^99mTc-MIBI·T和^99mTc-TBI·T在室温下均可稳定存在7小时以上，其放化纯及溶液外观均无明显变化。

4、二步法异腈类药盒的稳定性研究

以实施例1所制备的二步法MIBI药盒为代表，对稳定性进行考察。

1)A瓶药盒稳定性考察：

将A瓶药盒样品分别置于0℃以下，0℃～4℃，室温下贮存，定期取出进行性状观察和放化纯度检测，考察A瓶药盒在上述条件下的稳定性结果如表3、4和5。

表3  药盒A瓶于冰箱条件(0℃～4℃)下贮存的稳定性考察

n

从以上数据可见，样品放置六个月，其性状无明显变化，放射性标记后的放化纯仍大于95％，符合要求，说明药盒A瓶在该条件下是比较稳定的。

表4  药盒A瓶于室温条件下贮存的稳定性考察

以上表4的数据说明，药盒A瓶在室温下放置30天，其性状和放化纯度均无明显改变，说明药盒在该条件下是比较稳定的。

表5  药盒A瓶于低于-5℃贮存时间的稳定性考察

由以上数据可见，样品放置在低于-5℃的冰箱内，经过1年半的存贮，其性状无明显变化，标记后的放化纯仍大于95％，符合要求，说明二步法MIBI药盒A瓶在该条件下是相当稳定的。

2)B瓶药盒的稳定性考察

将B瓶药盒样品分别置于室温、0℃～4℃贮存不同时间，定期取出进行性状观察和放射化学纯度的检测，考察B瓶药盒在上述二种条件下的稳定性。结果如表6、7所示。

表6  药盒B瓶于室温下的稳定性考察

由以上数据可见，药盒B瓶在室温下放置90天，性状和放射化学纯度均无明显改变，说明药盒在该条件下是比较稳定的。

表7  药盒B瓶于0℃～4℃贮存条件下的稳定性考察

由以上表7数据可见，药盒B瓶于0℃～4℃冰箱放置可长达二年，其性状和放射化学纯度均无明显改变，说明药盒在该条件下是比较稳定的。

5、^99mTc-CNR·T配合物的急性毒性试验

参照药典的有关实验方法，取实施例2所制备得到的^99mTc-MIBI·T注射液各0.5mL，即药量为人体用量的四分之一，以4～5秒匀速(约0.1mL/s)注射于体重18～20g小鼠的尾静脉，共5只，按要求观察48小时小鼠全部存活，72小时后解剖观察心、肝、脾、肺、肾等各脏器未见异常。以同样的方法注射实施例4所制备的^99mTc-TBI·T注射液，进行毒性实验，按要求观察48小时小鼠全部存活，72小时后解剖观察心、肝、脾、肺、肾等各脏器未见异常。急性毒性试验表明，按正常人用量的约600倍注入小鼠尾静脉，在规定的时间内(7天)，观察注射组与对照组无明显差别。实验结果说明注射液毒性较低，经无菌无热原检查合格后可以进行临床试用研究。

6、^99mTc-CNR·T配合物的生物分布

取体重18～22g昆明小白鼠按照药典方法进行生物分布实验。尾静脉注射0.10mL(约0.74MBq)的实施例2制备得到的^99mTc-MIBI·T，分别于注射后5分钟、15分钟、30分钟和60分钟将小鼠断颈处死，取出心、肝、肺、肾、脑、肌肉和血，分别称重，并在井型γ探测器内测其放射性计数，计算每克组织的摄取剂量(％ID/g)；并以心脏为靶器官，比较其与肺、肝、血和肌肉的％ID/g比值。百分之一注射剂量的计算是取0.10mL(注射量)配合物溶液，稀释至100倍后再分别取0.10mL于三支小试管中，在测量组织放射性计数的同时测量其放射性计数，百分之一剂量为三支小试管中放射性计数的平均值。结果如表8、9所示。

用同样的方法研究实施例4所制备的^99mTc-TBI·T的生物分布，结果如表10、11所示。

表8  ^99mTc-MIBI·T在小鼠体内分布结果(X±S，％ID/g，n＝3)

表9  ^99mTc-MIBI·T的靶/非靶器官的比值

表10  ^99mTc-TBI·T在小鼠体内的分布结果(X±S，％ID/g，n＝4)

表11  ^99mTc-TBI·T的靶/非靶器官的比值

从表中数据可见，由新型MIBI药盒制备的标记物溶液^99mTc-MIBI·T和^99mTc-TBI·T，在小鼠的心肌中有较高的摄取，血清除快，且肝、肺摄取较低，可以用于心肌显像。

为了便于进一步说明二步法异腈药盒所制备出的标记物^99mTc-CNR·T生物性能的改进，下面通过比较例来说明：

比较例1：

二步法药盒与原一步法配方药盒制备注射液的小鼠体内生物分布比较，由于二步法药盒中所加入辅料的作用，进一步改善了配合物注射液的生物性能。主要表现在肝的初始摄取明显降低，和早期心/肝比值的显著提高，这样更加有利于在临床上得到清晰、高质量的显像图像和实现心肌的提前显像。

表12、13为按实施例2制得的^99mTc-MIBI·T注射液(二步法)，与参考原美国杜邦公司药盒配方药盒(Cardiolite)制得的^99mTc-MIBI注射液(一步法)，小鼠体内生物数据比较。

表12  两种注射液在小鼠体内的生物分布比较(X±S，％ID/g，n＝3)

表13  两种注射液在小鼠体内的靶/非靶器官的比值

由表12和表13可见，与原一步法药盒配方制备的^99mTc-MIBI注射液相比，二步法药盒制得的^99mTc-MIBI·T注射液在小鼠体内的心肌摄取仍维持在高水平范围，而肝的初始摄取明显降低，血本底也更低，这样大大提高了心/肝比和心/血比，更加有利于得到清晰、高质量的显像图像，并可实现心肌的提前显像，以减少病人排队等候时间。

比较例2：

正如比较例1所述的理由，在二步法药盒中加入辅料的作用也进一步改善了^99mTc-CNR·T注射液的生物性能。主要表现在肝的初始摄取明显降低和早期心/肝比值的显著提高，因此更加有利于在临床上得到清晰、高质量的显像图像和实现心肌的提前显像。

表14、15为按实施例4制得的^99mTc-TBI·T注射液(二步法)，与改进前所普遍采用的常规方法制得的^99mTc-TBI注射液小鼠体内生物数据比较。

表14  两种注射液在小鼠体内的生物分布比较(X±S，％ID/g，n＝4)

注：A^99mTc-TBI  B^99mTc-TBI·T

表15  两种注射液在小鼠体内的靶/非靶器官的比值

本发明所具有的有益效果为：

1.通过二步法药盒制备的^99mTc-CNR·T结合物，如^99mTc-MIBI·T和^99mTc-TBI·T是一类新型的心肌显像剂，其脂水分配系数及生物性能与现有的国内外广泛使用的^99mTc-CNR，如^99mTc-MIBI或^99mTc-TBI不同，对其结构与组成目前正在进行研究。初步结果表明：^99mTc-CNR与吐温，如吐温-80等有一定的结合，是构成与原^99mTc-CNR不同理化状态的新的组成物。该标记物与原一步法制备的^99mTc-CNR相比，能显著降低小鼠的初始肝摄取和血本底，这将导致临床上改善心肌显像的质量，能实现早期心肌显像，并可减少病人的候诊时间。

2.二步法药盒将不很稳定的主原料药CNR，如MIBI或TBI与其它组分分开，使其保存在稳定的介质环境中，这样不但保存了一步法异腈药盒在注射液制备方面的方便性，而且延长了药盒的保质期，达一年之多，优于国际上规定的半年保质期。

Claims (8)

1.一种用于制备吐温介入的放射性锝-99m标记的异腈类配合物的二步法异腈药盒，该异腈类配合物为吐温和^99mTc-(CNR)₆的结合物，其中，所述的R选自被1～4个相同或不相同的C_1-4烷基或C_1-4烷氧基取代或未取代的C_1-10烷基或C_5-10环烷基，其特征在于所述的二步法异腈药盒由A瓶和B瓶组成，

所述的A瓶内的物质由冻干法制得，其中组分为还原剂、pH值缓冲剂和赋形剂，它们三者的重量比依序为0.1～10∶0.5～50∶20～200；

所述的B瓶内的物质为溶液，其中组分为溶解于乙醇中的异腈配体CNR和吐温，它们二者的重量比为1∶10～60，其中，R选自被1～4个相同或不相同的C_1-4烷基或C_1-4烷氧基取代或未取代的C_1-10烷基或C_5-10环烷基。

2.根据权利要求1所述的二步法异腈药盒，其特征在于，所述的R为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧异丁基、环戊基、环己基、2-甲基环己基、2，3-二甲基环己基、3，3，5-三甲基环己基、环庚基或环辛基。

3.根据权利要求1所述的二步法异腈药盒，其特征在于，所述的吐温为吐温-20，吐温-40或吐温-80。

4.根据权利要求1所述的二步法异腈药盒，其特征在于，所述的还原剂为二价亚锡的卤素盐、二氧硫脲、亚硫酸钠或连二亚硫酸钠；所述的pH值缓冲剂为磷酸或其盐、柠檬酸或其盐、酒石酸或其盐、乙酸或其盐、抗坏血酸，或L-半胱氨酸；所述的赋形剂为氯化钠、甘露醇、葡萄糖或尿素。

5.根据权利要求1所述的二步法异腈药盒，其特征在于，所述A瓶的分装容器为西林瓶，还原剂的含量不低于0.05mg；所述B瓶的分装容器为安瓿，异腈配体CNR的含量不低于0.5mg。

6.一种权利要求1所述的二步法异腈药盒的制备方法，其特征在于，所述的二步法药盒由下述的方法分别制备A瓶和B瓶得到：

A瓶的制备：

将还原剂、pH值缓冲剂和赋形剂以0.1～10∶0.5～50∶20～200的重量比溶于充氮二次水中，pH调节至4.0～5.6，经无菌过滤分装于容器中，再经冷冻干燥，充氮气密封得冻干的药盒A瓶；

B瓶的制备：

将异腈类配体CNR和吐温以1∶10～60的重量比溶于乙醇中，经充分溶解后分装于容器中，制得药盒B瓶，其中，R选自被1～4个相同或不相同的C_1-4烷基或C_1-4烷氧基取代或未取代的C_1-10烷基或C_5-10环烷基。

7.权利要求1～5中任意一项所述的二步法异腈药盒在制备人或动物器官或组织中的显像剂中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的人或动物器官或组织中的显像剂为心肌或肿瘤中的显像剂。

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