CN1275969C - 一种从白芷中提取的香豆素类有效成份在制备治疗高血压药物的应用及其提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明为应用细胞膜色谱筛选技术和超临界提取技术，获得中药白芷中对主动脉血管有扩张作用的香豆素类有效部位，其中欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素、比克白芷素、脱水比克白芷素、别欧前胡素等为有效成分。中药白芷香豆类素有效部位中含有与钙通道阻滞剂维拉帕米类似作用的活性成分。白芷香豆素类有效部位对受体调控性钙通道具有较强的非竞争性抑制作用；对电压调控性钙通道有抑制作用，并具有剂量依赖性。白芷有效部位对自发性高血压大鼠(SHR)有明显的慢性降低作用，对肾性高血压大鼠有明显的急性降低作用。由超临界提取技术提取的白芷有效部位可用于制备预防和治疗高血压疾病的药品。

Description

一种从白芷中提取的香豆素类有效成份在制备治疗高血压 药物的应用及其提取方法
技术领域：
本发明属于一种从白芷中提取的香豆素类有效部位在制备治疗高血压药物的应用及其提取方法。
背景技术：
高血压在世界上许多国家都是常见的心脑血管疾病，尤其在中老年人群中发病率极高。高血压患者人群日益增多，并呈现年轻化的发展趋势。目前，高血压病的发病机理虽未十分清楚，但已知机体内有许多系统与血压的维持有密切的关系，如血管内皮松弛因子-收缩因子系统，系统的功能受内外环境的影响而变化，从而参与机体血压的调控。系统中包括有多种感受器和受体，在心脏和血管中受体都很丰富。这些受体的功能又与多种相关递质有密切关系，凡能影响递质的产生、释放与代谢或影响其与受体的结合，都可以使血压产生变化。有报告曾观察到自发性高血压大鼠的一氧化氮(NO)合成酶基因表达水平明显低于对照组大鼠，并认为内皮细胞功能不良可能是高血压发病的一个重要原因。
白芷为伞形科植物，白芷Angelica clahurica(Fisch ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.或抗白芷的干燥根。有报道白芷中主要含挥发油成分、香豆素类化合物和微量元素等。1977年版《中药大辞典》中报道白芷中含白当归素(Byak-angelicin)、白当归醚(Byak-angelicol)，氧化前胡素(Oxpeucedanine)、欧前胡素乙(Imperatorin)、异欧前胡素乙(Isoimperatorin)、珊瑚菜素(phellopterin)、花椒毒素(Xanthotoxin)、白芷毒素(Angelicotoxin)、东莨菪素(Scopoletin)、异白当归脑(Isobyakangelicol或Anhydrobyakangelicin)和新白当归脑(Neobyakangelicol)、别异前胡属乙(Alloisoimperatorin)、5-甲基-8-羟基补骨脂素(5-Methyl-8-hydroxypsoralen)、7-去甲基软木花椒素(7-demethylsuberosin)、5-(2-羟基-3-甲氧基-3-甲基丁氧基)补骨脂素[5-(2-Hydroxy-3-methoxy-3-methylbutoxy)psoralen]、叔-O-甲基白当昆素(Tert-omethyl byakangelicin)、仲-o-乙酰基白当归素(Sec-o-acetylbyakangeliein)、8-羟左右-7-异戊-2-烯基香豆精(8-Hydroxy-7-isopent-2-ene-coumarins)、Knidlin、Cedrelopsin，Sen-byakangelicol。此外还有胡萝卜甙、香柑内酯、氧化前胡素，水合氧化前胡素；另外白芷和杭白芷中含有无机元素Ca、Cu、Fe、Zn、Mn、Ni、Mg、Co、Cr、Mo、Na、P等，其中以Na、Mg、Fe、Ca、P含量较高。《中国药典》2000年版中记载白芷性温，味辛，归胃，大肠，肺经。具有散风除湿，通窍止痛，消肿排脓的功效。用于感冒头痛，眉棱骨痛，鼻塞，鼻渊，牙痛，白带，疮疡肿痛等病症。
发明内容：
本发明的目的是从天然药物提取有效成份用于制备治疗高血压的药物，同时提供提取方法。
本发明的内容可以简述为提供从中药白芷中提香豆素类有效成份的提取方法和利用提取香豆素类有效成份在制备高血压药物的应用。
提取的过程为取白芷药材饮片，粉碎，过筛，置于萃取釜中，加温装置正常工作后，打开压缩泵加压到20～35MP，温度40～50℃，加携带剂，以40～50kg/h的CO2流速循环萃取，分离釜的压力为5～10MP，温度为30～50℃，提取3h后，分取提取物，挥干携带剂，得到白芷的超临界香豆素类有效部位提取物。
作为优选的提取方式可以为取白芷药材饮片，粉碎，过20目筛，称取药粉2kg，置5L萃取釜中，待制冷装置与萃取釜和分离釜，加温装置正常工作后，打开压缩泵加压到30MP，温度30℃，加携带剂100ml，以45kg/h的CO2流速循环萃取，分离釜的压力和温度分别为5MP，40℃，提取3h后，分取提取物，挥干携带剂，得白芷的超临界总有效部位提取物。
将所提取的中药白芷有效部位进行进一步的分析，有效成份包括欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素、比克白芷素、脱水比克白芷素、别欧前胡素等中的任何一种或数种的组合。
所述的通过提取的白芷香豆素类有效部位是用于制备调节和治疗高血压疾病的功能性保健食品和药物的用途。
所述的治疗高血压疾病药物的应用是特别在于治疗原发性和继发性高血压病的舒张压和收缩压疾病药物的应用。
所提取的中药白芷香豆素类有效部位及成分可以单独或与其他中药提取物或有效部位或有效成分的组合使用，用于制备对高血压及其并发症的预防和治疗的药物。
所述的其他中药提取物可以优选山楂提取物、川芎提取物、葛根提取物、当归提取物、三七提取物和丹参提取物的任何一种或多种的组合。
白芷香豆类素有效部位中含有与钙通道阻滞剂维拉帕米类似作用的活性成分。白芷香豆素类有效部位可使受体调控性钙通道具有较强的非竞争性抑制作用；对主动脉条收缩有明显抑制作用表明其对电压调控性钙通道有抑制作用。白芷有效部位能起到降低动脉血管阻力的作用。对自发性高血压有明显的慢性降低作用，对肾性高血压有明显的急性降低作用。
附图说明：
图1是白芷有效部位的HPLC色谱图。
图2是白芷有效部位(a)、维拉帕米(b)和异欧前胡素(c)在血管细胞膜色谱柱筛选色谱图。
图3是白芷有效部位对NE引起的家兔离体主动脉条理收缩作用实验的收缩率的量效曲线。
图4是白芷有效部位对SHR收缩压慢性降压作用血压曲线。
图5是白芷有效部位对SHR舒张压慢性降压作用血压曲线。
具体实施例：
实施例1：中药白芷有效部位及成分的CMC法筛选研究
细胞膜色谱(Cell Membrane Chromatography，CMC)是一种仿生学的生物亲合色谱方法，可以测定药物和化合物分子与细胞膜及膜受体间的特异性相互作用。本实验中用主动脉细胞膜色谱模型，以钙拮抗剂维拉帕米为对照，对白芷总有效部位中的有效成分进行筛选。
色谱筛选条件  以兔主动脉细胞膜固定相装柱(50mm×2mm，I.D.)；流动相：50mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)；流速：0.5ml/min；检测波长：236nm；柱温：37℃。
色谱分析条件  色谱柱：LiChrosorb ODS C18(150×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-水(65∶35)；流速：1ml/min；检测波长：302nm。
有效部位的超临界萃取制备取白芷药材饮片，粉碎，过20目筛，称取药粉450g，置1L萃取釜中，待制冷装置与萃取釜和分离釜，加温装置正常工作后，打开压缩泵加压到30MP，温度30℃，加携带剂100ml，以45kg/h的CO2流速循环萃取，分离釜的压力和温度分别为5MP，40℃，提取3h后，分取提取物，挥干携带剂，得白芷的超临界总有效部位提取物，置于冰箱中备用。
HPLC法指纹图谱分析如图1所示，在色谱分析条件下，白芷总有效部位提取物的HPLC指纹图中有6个共有峰(图1中1～6号峰，图1中波峰4为欧前胡素，波峰6为异欧前胡素。)，作为白芷总有效部位定性鉴别的指标峰。同时，用面积归一化法以欧前胡素为标准进行测定，其中有效部位含量大于80％。
筛选方法分别取白芷总有效部位、维拉帕米(VP)和欧前胡素样品适量，加吡啶100 μl使溶解，离心5min(6000r/min)，吸取上清液5μl进样测定，以VP为阳性对照药，记录CMC筛选色谱图，如图2所示，曲线a为白芷总有效部位的色谱，曲线a为维拉帕米的色谱，曲线a为异欧前胡素的色谱，波峰1为香豆素类成分，波峰2、4为异欧前胡素，波峰3为维拉帕米。
筛选结果  在CMC筛选条件下，白芷总有效部位中含有与维拉帕米(VP)作用相似的有效成分，其中异欧前胡素与血管细胞膜及膜受体的作用强度大于阳性对照药。
实施例2  白芷有效部位的离体药理学实验研究
2.1家兔离体主动脉条实验
取健康家兔，颈总动脉放血处死，开胸暴露心脏，分离主动脉，剪取靠近心脏处下腔动脉，置于经氧饱和的Tyrode’s营养液中，清除血管壁表面的结缔组织，用剪刀将主动脉剪成宽3mm、长15mm的螺旋形条片，两端分别穿线结扎，下端固定在容积为10ml的浴槽底部通气钩上，上端连在张力换能器上，张力换能器与自动台式平衡记录仪相连。浴槽中持续、均匀地通入O2，动脉条加负荷1g，浴槽温度：37℃±0.5℃，pH：7.4±0.1。标本平衡时，每隔30min更换浴槽内Tyrode’s营养液(37℃)一次；每次加药后，均用Tyrode’s营养液冲洗3次。主动脉条的收缩经张力换能器转化后描记于记录仪上。以维拉帕米(VP)作为阳性对照药进行比较。
2.2对NE所致主动脉收缩作用的影响
标本平衡1-2h后，以累积给药法向浴管中加入去甲肾上腺素(NE)，连续记录标本对NE的量效反应曲线；然后用营养液冲洗标本，待血管张力恢复基线水平，先后分别向浴管内加入白芷有效部位不同剂量组，重测NE对血管平滑肌收缩的量效曲线；同法测量阳性药(VP)量效曲线；将结果绘制成量效曲线如图3所示。实验表明，不同剂量白芷有效部位使主动脉对NE收缩作用的量效曲线右移，最大抑制效应降低。
2.3对高K+去极化所致主动脉收缩作用的影响
标本平衡1～2h后，加入1mol/L KCl 1ml使主动脉收缩达稳态，以单次给药法向浴管内加入不同浓度的白芷有效部位或阳性药(VP)，记录主动脉条收缩张力见表2-1。实验表明，不同剂量白芷有效部位对高K+去极化所致主动脉收缩的最大抑制率为22.5％，而电压调控性钙通道特异性抑制剂VP在浓度1mg/ml时最大抑制率为95.5％。
表2-1  白芷有效部位对高K+去极化所致主动脉收缩的影响
组别     浓度(mg/ml)     平均抑制率(％)
空白组白芷有效部位组白芷有效部位组白芷有效部位组维拉帕米组     -0.150.51.51.0     -4.6214.022.595.3
2.4对NE依内钙、依外钙收缩收缩成分的影响
标本平衡1-2h后，加入NE使血管收缩反应达稳态，以无钙营养液冲洗，平衡后加入同剂量NE引起血管收缩，达稳态时加Ca2+恢复正常Ca2+浓度，此时血管将一步收缩至最大值。再以无钙液冲洗，平衡后加入不同浓度白芷有效部位或VP，记录各药对NE两种收缩成分的影响见表2-2。实验表明，白芷有效部位对NE引起主动脉依内钙、依外钙收缩具有剂量依赖性抑制作用。同时表明其阻断外钙内流作用强于VP。
表2-2  白芷有效部位对NE引起主动脉依内钙和依外钙收缩的影响
  浓度     无Ca2+液     正常Ca2+液
组别  (mg/ml)  无Ca2+液  正常Ca2+液
空白组白芷有效部位白芷有效部位白芷有效部位维拉帕米组  -0.452.254.500.20  最大收缩35.4±1.11 7.6±2.11.43±0.95.7±1.8 平均抑制率(％)56.996.590.6  最大收缩54.0±2.922.7±2.010.0±2.141.8±2.6   平均抑制率(％)61.683.128.3
2.5  小结
白芷有效部位使NE引起家兔离体主动脉收缩作用的量效曲线非平行右移，最大反应降低，表明其对受体调控性钙通道有非竞争性抑制作用；对高K+去极化所致的主动脉收缩具有抑制作用，表明其对电压调控性钙通道有抑制作用。提示白芷有效部位对NE引起主动脉条的作用是抑制细胞内钙释放、外钙内流的结果，达到降低动脉血管阻力的作用。
实施例3  白芷有效部位对SHR的慢性降压作用
受试药物  取一定量的白芷有效部位提取物，以0.5％CMC(羧甲基纤维素钠)分别配成2.5，5，10mg/ml的药液。硝苯地平片：西安博华制药有限责任公司生产，批号0003007，每片10mg，研碎，以0.5％CMC(羧甲基纤维素钠)配成浓度为0.5mg/ml的药液。
动物  自发性高血压大鼠(SHR)，6周龄，体重180±30g，购自中国医科院阜外医院动物实验科，合格证号：医动字第01-3080号。将动物饲养在室温26±3℃，每日人工照明12h，按性别分笼饲养，自由饮水，颗粒饲料喂养。
方法  选SHR40只，雌雄兼用，于室温28℃以上，用HEM-80F型容积阻抗法血压计间接测定大鼠尾动脉血压。训练1周后进行实验。
药前连续测血压5天，每天1次，每次测3～5个数据，取均值。按药前5天血压均值将SHR分层随机分为5组，每组8只：(1)对照组：0.5％CMC；(2)硝苯地平组：5mg/kg；(3)～(5)白芷有效部位组：100、50、25mg/kg组。各组均灌胃给药，每日1次，容积10ml/kg，连续20d，隔天测定当日药前及药后2h血压。停药后，连续测定8d恢复期血压。
3.1对SHR收缩压的慢性降低作用
如图4所示，药前5天各组收缩压基本平稳，维持在20.8～21.6kPa。对照组在整个给药期收缩压波动较小。白芷有效部位100、50mg/kg组及硝苯地平组收缩压从给药后d1到d15呈锯齿状缓慢下降，从d15药后至d19药后收缩压维持在15.6～16.9kPa之间。停药后收缩压逐渐恢复，4～6d基本恢复至药前水平。白芷有效部位25mg/kg组收缩压从给药后d1到d9亦呈锯齿状缓慢下降，d11至d19维持在18.2～19.5kPa之间。停药6d基本恢复至药前水平。
表3-1白芷有效部位对SHR收缩压(kPa)的影响(n＝8)
天数                                                  收缩压(kPa)
对照组 硝苯地平   白芷100mg/kg   白芷50mg/kg 白芷25g/kg
约前     12345   22.2±2.922.0±2.921.1±2.521.1±1.721.6±2.1   21.1±3.220.3±2.620.9±1.820.5±1.721.3±2.2   21.3±2.320.4±1.420.8±1.821.2±1.320.0±1.8   20.9±2.921.7±2.022.2±2.620.7±2.921.4±2.2   20.7±2.621.2±1.321.6±1.220.4±1.421.1±1.6
x±s  21.6±1.3  20.8±1.0  20.8±1.2  21.3±1.7  20.9±0.3
给药期  1 药前药后  22.8±2.022.0±2.0  22.4±2.318.6±2.3△△  22.6±1.720.4±2.1△△  21.8±1.619.1±2.9△  20.9±2.320.3±2.0
 3 药前药后  21.3±2.621.2±3.4  20.7±2.318.5±2.5  20.3±2.118.7±3.0  21.8±3.919.1±3.1  20.2±1.418.8±1.7
 5 药前药后  22.9±1.321.8±3.0  20.2±3.019.8±2.2  19.4±1.319.0±2.1  19.4±1.617.8±2.1  19.5±2.318.1±1.6
 7 药前药后  21.4±1.020.5±2.0  18.3±2.517.6±2.1  20.3±3.017.4±2.6  20.4±2.218.1±2.9  20.4±2.319.0±1.4
 9 药前药后  21.2±2.020.4±1.2  19.4±2.117.2±3.1  19.4±2.116.5±1.8△  18.6±2.118.1±1.0  19.8±2.217.7±0.9△
11 药前药后  21.2±0.922.6±1.8  19.1±3.217.0±2.5  25.1±3.516.5±2.0  19.1±3.116.1±1.8△  19.1±1.418.8±1.6
13 药前药后  20.3±1.020.7±1.3  15.6±1.315.2±1.4  18.1±1.717.0±2.3  17.6±2.215.5±2.2  19.6±1.616.6±1.7△△
5 药前药后  21.1±1.721.3±2.5  16.9±1.816.0±1.0  17.4±1.816.1±1.3  17.8±2.616.4±2.0  19.5±1218.8±1.0
17 药前药后  20.8±1.820.7±0.9  16.5±1.817.0±2.1  16.2±1.416.2±1.6  16.8±1.817.0±0.9  19.1±1.619.2±1.0
19 药前药后  21.4±1.020.5±1.2  16.1±1.816.8±1.8  15.9±0.916.1±1.3  16.1±2.016.1±1.3  18.3±1.019.0±2.0
停药期 123468  21.2±1.421.2±1.321.8±1.620.4±1.221.2±1.021.1±1.8  17.3±2.517.7±1.317.9±1.620.0±2.320.2±1.420.8±1.6  16.5±1.317.7±2.018.8±3.119.8±1.720.5±2.021.1±20  18.1±2.118.5±1.618.1±1.418.3±1.620.3±2.521.8±1.4  19.0±1.019.2±1.320.1±1.820.0±1.420.5±2.021.3±1.6
注：t检验，与当日药前血压比较，△P＜0.05，△△P＜0.01
表3-2  白芷有效部位对SHR收缩压(kPa)的影响(n＝8)
天数                                                 收缩压降低值(kPa)
对照组 硝苯地平5mg/kg 白芷100mg/kg   白芷50mg/kg   白芷25mg/kg
给药期 1 药前药后   -1.2±2.1-0.4±2.3     -1.6±2.92.2±3.1   0.3±3.01.6±2.2   -0.4±1.82.2±3.3   0.0±2.20.6±2.0
3 药前药后   0.1±2.60.4±4.0     0.1±3.02.3±3.0   0.0±2.62.1±3.5   -0.4±4.02.2±2.9   0.9±1.72.1±1.6
5 药前药后   1.4±2.0-0.3±3.1     0.8±3.41.2±2.3   1.4±2.01.7±2.0   2.0±2.93.5±2.7+   1.4±2.32.9±1.6+
7 药前药后   0.1±1.80.8±1.4     2.5±2.2+3.4±2.2+   1.2±3.03.4±2.1+   1.0±2.33.2±2.2+   0.5±2.32.0±1.4
9 药前药后   0.4±3.01.0±1.3     1.4±2.53.8±3.8   1.4±2.54.3±2.6*   2.7±2.73.4±2.3+   1.3±2.53.2±1.0*
11 药前药后   0.6±1.8-0.9±2.9     1.7±3.03.8±2.6*   2.7±3.64.3±2.2*   2.3±2.75.2±2.9*   2.0±1.42.2±3.0+
13 药前药后   1.3±2.00.8±2.1     5.3±1.4*5.6±2.2*   2.6±0.93.8±2.6+   3.9±2.3+5.8±3.4*   1.4±1.63.0±1.8+
15 药前药后   0.5±1.60.3±1.8     4.0±2.7*4.8±2.0*   3.4±2.2*4.7±1.8*   3.6±1.7*4.9±2.0*   1.4±1.22.2±1.3+
17 药前药后   0.8±1.21.3±1.3     4.4±2.5*3.8±2.7+   4.6±1.8*4.6±2.0*   4.7±1.8*4.4±2.0*   2.0±1.61.7±1.3
19 药前药后   0.0±1.70.9±2.0     4.7±1.8*4.0±2.1*   4.8±1.6*4.7±1.6*   5.3±2.1*5.2±1.8*   2.6±1.2*2.1±1.8
停药期 123468   0.4±2.10.4±1.60.3±1.71.2±2.30.4±1.80.4±1.6     3.5±2.7+3.1±1.8*3.0±1.8*0.8±3.00.6±1.70.0±1.7   4.3±1.2*3.1±2.7+2.0±3.40.6±1.40.3±2.3-0.3±1.7   3.4±1.7*2.9±2.5+3.4±1.7*3.0±2.21.0±3.0-0.4±1.4   2.0±0.91.7±1.40.8±1.80.9±1.70.4±2.0-0.3±1.6
注：t检验，与对照组比较，+P＜0.05，*P＜0.01；
从表3-1和表3-2可看出，药前5天各组收缩压变化较小，维持在20.8～21.6kPa。对照组在给药期收缩压波动不大。各给药组药后收缩压趋于下降，白芷100，50和25mg/kg组收缩压降低值分别从给药d5或d7开始，与对照组比较差异显著(P＜0.05)；100，50mg/kg剂量组至d9或d11药后差异更加明显(P＜0.01)，此后基本维持在同一水平。将当日给药前后收缩压进行比较，药后有降低趋势，在给药1～9d较明显，d1药后与药前比较，差异显著。硝苯地平组收缩压从给药d7开始与对照组比较，降低值差异显著，给药d11至停药3d维持在同一降压水平；当日给药前后比较，仅在给药d1差异显著。给药20天后上述4组收缩压分别平均下降了4.7±1.6、5.2±1.8、2.1±1.8、4.0±2.1kPa。白芷大、中剂量组及硝苯地平组于停药后1～3d与对照期比较仍差异显著。各剂量组收缩压均于停药后4～6d恢复至对照期水平。
3.2对SHR舒张压的慢性降低作用
图5可见，药前5天各组舒张压变化不大。对照组舒张压在给药后无明显变化。白芷有效部位100、50mg/kg组及硝苯地平组舒张压均在给药后呈锯齿状缓慢下降，给药d13到d19基本维持在9.1～10.4kPa之间，波动较小。白芷有效部位25mg/kg组舒张压降低幅度较小。各给药组停药后4～6d内恢复。
从表3-3～表3-4可看出，药前5天各组舒张压变化不大，维持在12.5～13kPa。对照组舒张压在整个给药期变化较小。白芷有效部位100和50mg/kg组舒张压从给药d7或d11开始，与对照组比较降低值差异显著(P＜0.05或P＜0.01)，从给药d11至给药d20基本维持在同一水平。但与对照组比较，主要为每日药后2h舒张压的降低值与对照组的同时间舒张压降低值比较差异显著(P＜0.05或P＜0.01)。白芷有效部位25mg/kg组仅在给药d3药前及13d药后降低值与对照组比较差异显著(P＜0.05)。硝苯地平组降压效果基本同白芷有效部位100mg/kg。各给药组的舒张压当日给药前后进行比较，均有降低趋势。给药19d后上述4组降低幅度分别为2.9±1.2、2.2±1.6、3.0±2.1、1.6±1.2kPa。各给药组舒张压停药后4～6d内恢复。
3.3小结
本实施例通过白芷有效部位对SHR血压影响的观察，表明白芷有效部位对SHR血压有明显的慢性降低作用。
表3-3.白芷有效部位对SHR舒张压的影响(n＝8)
    天数                                                         舒张压(kPa)
对照组   硝苯地平5mg/kg   白芷100mg/kg   白芷50mg/kg   白芷25mg/kg
药前     12345X±s   12.8±1.013.9±2.612.6±2.913.0±1.313.0±2.013.0±0.9   13.4±3.512.1±1.712.5±1.713.0±1.013.0±1.012.9±1.2   13.1±2.313.4±2.512.4±2.012.0±2.012.0±1.012.5±1.0   11.8±1.712.5±1.612.4±1.812.0±2.013.9±1.412.5±1.2   12.8±1.813.0±2.013.9±1.812.6±1.212.4±1.713.0±0.9
给药期 1   药前药后 13.8±1.612.4±0.9△ 13.0±1.011.2±2.1△ 14.3±1.813.3±2.2 13.8±1.311.2±1.8△△ 12.6±2.312.4±2.3
3   药前药后 13.9±2.112.5±1.8 12.0±1.711.8±1.6 12.4±2.211.0±1.8 13.4±1.011.8±1.7△ 12.0±1.712.5±1.4
5   药前 13.8±2.3 12.9±2.3 12.5±1.6 12.4±1.3 12.9±2.0
药后   13.3±2.1   11.2±1.3   11.6±2.0   10.9±1.7   11.7±1.4
7 药前药后 12.5±1.313.0±2.6 11.0±2.39.9±0.5 11.7±2.510.3±1.7 13.0±2.311.0±1.8 13.0±1.812.0±1.4
9 药前药后 12.6±1.712.1±2.1 11.6±1.810.3±2.1 12.1±1.89.8±1.2△△ 11.6±1.811.0±1.2 12.0±1.710.9±1.3
11 药前药后 12.6±2.014.2±1.4 11.3±0.810.1±1.2△ 11.3±2.79.8±1.2 12.0±3.19.6±1.2 11.8±1.212.0±1.3
13 药前药后 14.5±1.713.4±2.1 9.5±1.09.4±0.9 10.7±1.29.9±1.6 10.4±1.89.8±2.1 12.2±1.210.9±1.0
15 药前药后 12.6±2.212.2±3.0 10.3±0.99.6±1.6 10.5±1.69.8±1.6 10.7±1.410.3±1.6 12.5±1.211.0±1.2
17 药前药后 12.6±1.712.0±1.0 10.3±1.69.8±1.0 9.8±0.910.1±1.3 10.1±1.410.1±1.4 11.7±0.911.3±1.2
19 药前药后 13.0±1.312.0±0.8 10.1±1.09.8±1.4 9.8±0.89.8±0.5 10.7±1.310.3±1.0 11.6±2.011.4±0.5
停药期  123468   12.5±1.812.6±1.812.6±1.012.1±1.711.7±1.312.2±1.2   10.7±1.211.0±1.310.4±0.811.6±1.712.1±1.013.1±1.6   9.9±0.910.4±1.711.0±1.811.3±1.612.4±1.012.1±1.4   10.8±1.011.3±1.010.3±1.210.8±2.011.3±1.313.3±1.4   12.5±1.611.4±1.612.7±1.812.2±1.412.9±1.313.4±2.0
注：t检验，与当日药前血压比较，△P＜0.05，△△P＜0.01
表3-4.白芷有效部位对SHR舒张压的影响(n＝8)
    天数     舒张压降低值(kPa)
对照组 硝苯地5mg/kg   白芷100mg/kg   白芷50mg/kg   白芷25mg/kg
给药期 1   药前药后   -0.6±1.20.8±1.2   -0.3±1.41.6±2.6   -1.8±2.3-0.8±2.7   -1.3±1.61.3±2.1   0.3±2.90.6±2.6
3   药前药后   -0.9±1.80.5±2.0   0.9±1.6+0.9±2.3   0.1±2.51.4±2.2   -0.9±1.40.6±1.7   1.0±2.0+0.5±2.2
5   药前药后   -0.8±2.1-0.3±2.3   0.0±3.01.6±1.4   0.1±2.30.9±2.0   0.1±2.01.6±2.2   0.1±2.51.3±1.8
7   药前药后   0.6±1.00.1±2.7   1.7±2.2+3.0±1.0*   0.8±2.22.3±1.8+   -0.5±2.01.4±1.3   0.0±1.81.0±2.1
9   药前药后   0.5±1.81.0±1.4   1.2±2.32.6±2.9   0.4±1.72.7±1.7+   0.9±2.11.4±1.7   1.0±1.82.0±1.0
11   药前药后   0.4±2.0-1.0±1.6   1.6±1.42.6±1.4*   1.2±2.62.7±1.6*   0.5±3.02.9±2.1*   1.0±1.41.0±1.8+
13   药前药后   0.6±2.3-0.3±2.5   3.4±1.0*3.5±1.8*   2.0±1.32.7±1.4*   2.1±1.62.7±2.6+   0.6±1.02.1±1.3+
15   药前药后   0.5±2.30.8±2.7   2.6±1.7+3.1±2.2+   2.0±2.12.7±1.7   1.8±0.82.2±1.3   0.5±0.61.8±1.6
17   药前药后   0.5±1.61.2±1.3   2.6±2.3+3.1±1.3*   2.7±1.4*2.3±1.7   2.3±2.0+2.3±2.1   1.3±1.41.7±1.2
19   药前药后   0.1±1.41.0±1.0   2.7±1.7*3.0±2.1+   2.7±1.4*2.9±1.2*   1.8±1.7+2.2±1.6   1.4±2.21.6±1.2
停药期   123468   0.6±2.20.5±2.20.4±1.21.0±2.11.4±2.00.9±2.0   2.1±1.71.8±2.22.5±1.0*1.3±1.70.8±1.6-0.3±2.1   2.6±1.3+2.2±2.11.6±1.81.2±1.80.1±1.20.4±1.4   1.7±1.71.2±1.72.2±1.2*1.7±2.21.2±2.0-0.8±1.3   0.5±1.41.6±2.00.1±1.30.6±1.60.0±1.4-0.4±2.0
注：t检验，与对照组比较，+P＜0.05，*P＜0.01
实施例4  白芷有效部位对肾性高血压大鼠的急性降压作用
受试药物  取一定量的白芷有效部位提取物，以0.5％CMC(羧甲基纤维素钠)分别配成2.5，5，10mg/ml的药液。卡托普利：中美合资湖南正太药业有限公司生产，批号000902，每片25mg，研碎，以0.5％CMC(羧甲基纤维素钠)配成浓度为1.25mg/ml的药液。
动物  SD大白鼠，由西安交通大学实验动物中心提供。动物质量合格证号分别为陕医动证字08-005号。将动物饲养在室温26±3℃，每日人工照明12h，按性别分笼饲养，自由饮水，颗粒饲料喂养。
肾性高血压大鼠制备取SD大鼠70只，雌雄各半，适应环境1周后，以间接测压法测量尾动脉血压。乙醚麻醉，腹位固定，在一侧背腰部做长约2cm的纵形切口，暴露肾蒂，以口径约0.3mm银夹狭窄肾动脉。切除另一侧肾脏。缝合切口。术后连续3日ip青霉素。40d后，存活27只，测其血压，选收缩压高于145mmHg者10只，供实验用。
分组  按收缩压将动物随机分为5组，每组2只。(1)对照组：0.5％CMC；(2)卡托普利组：12.5mg/kg；(3)、(4)、(5)分别为白芷有效部位100，50，25mg/kg组。采用2个5×5拉丁方设计。1次性灌胃给药，容积10ml/kg。药后1、2、4、6、8h经尾间接测量血压。清洗期3d，进行下一轮实验，共5轮。
4.1  对肾性高血压大鼠收缩压的急性降低作用
从表4-1～表4-2可看出，对照组收缩压药前药后无明显变化。白芷有效部位100、50mg/kg组及卡托普利组药后1h收缩压降低值与对照组比较差异显著(P＜0.05或P＜0.01)，分别维持至药后4、2、4h。白芷有效部位25mg/kg在药后1h的收缩压降低值与对照组比较差异显著(P＜0.05)。各给药组收缩压在药后1h降低最明显，降低幅度分别为2.5±2.2、2.2±1.6、3.5±2.2、1.6±1.3mmHg。2h后各给药组收缩压逐渐回升，但8h仍低于药前血压。
表4-1.白芷有效部位对肾性高血压大鼠收缩压的急性降低作用(n＝10)
  药后时间(h)                                                        血压(kPa)
对照组 卡托普利 白芷100mg/kg 白芷50mg/kg 白芷25mg/kg
  012468   20.3±1.720.4±2.319.9±1.619.5±2.219.6±1.419.9±1.2   19.8±1.416.2±1.416.6±1.217.4±1.417.8±1.418.3±1.2     19.2±1.016.9±2.616.8±1.217.4±1.218.1±1.418.1±1.4     20.5±1.018.3±1.618.1±2.218.3±1.218.6±1.318.2±1.6     19.6±1.918.1±1.618.2±2.318.1±2.217.7±2.918.1±2.4
表4-2.白芷有效部位对肾性高血压大鼠收缩压的急性降低作用(n＝10)
  药后时间                                                      收缩压降低值(kPa)
    对照组   卡托普利     白芷100mg/kg   白芷50mg/kg   白芷25mg/kg
  12468     -0.1±1.60.4±1.40.8±1.70.6±1.70.3±1.6   3.5±2.2*3.1±2.2*2.3±1.3+2.0±161.4±2.3     2.5±2.2+2.5±1.4*1.6±1.61.1±±1.41.3±1.0   2.2±1.6*2.5±2.3+2.2±1.3+2.0±1.62.3±1.6*   1.6±1.3+1.3±2.51.6±1.72.0±1.61.4±1.4
注：t检验，与对照组比较，+p＜0.05，*p＜0.01
4.2  对肾性高血压大鼠舒张压的急性降低作用
从表4-3和表4-4可看出，各给药组舒张压有降低趋势，但与对照组比较无显著性意义。与药前血压比较，白芷有效部位100、50和25mg/kg组分别在药后1、2、4h，药后1、4h和药后1h的舒张压降低值差异显著(P＜0.05或P＜0.01)。卡托普利组药后1、2、4h降低值差异显著(P＜0.05或P＜0.01)。
表4-3.白芷有效部位对肾性高血压大鼠舒张压的急性降低作用(n＝10)
  药后时间(h)                                             舒张压(kPa)
  对照组   卡托普利     白芷100mg/kg     白芷50mg/kg     白芷25mg/kg
  012468   12.7±2.612.4±1.611.8±2.312.0±1.612.4±1.711.8±16   12.0±1.610.0±1.0+9.6±1.2+10.4±1.3+10.7±0.910.9±1.0     11.7±1.310.1±1.6+9.9±0.9+10.4±1.2+10.5±0.611.0±0.6     12.5±2.011.2±1.3+11.0±±1.411.4±±1.4+11.2±1.610.9±1.7     12.3±2.011.2±1.2+11.0±1.611.7±1.711.2±1.711.2±0.8
注：t检验，与药前血压比较，+P＜0.05，*P＜0.0
表4-4.白芷有效部位对肾性高血压大鼠舒张压的急性降低作用(n＝10)
  药后时间(h)                                                舒张压降低值(kPa)
  对照组   卡托普利     白芷100mg/kg     白芷50mg/kg     白芷25mg/kg
  12468   0.3±2.30.9±2.30.7±2.30.3±2.50.9±2.5   2.0±2.32.4±1.61.6±0.91.3±1.61.1±2.3     1.6±1.61.6±1.41.3±1.41.2±1.60.7±1.3     1.3±1.71.6±2.51.1±1.31.4±2.31.6±2.9     1.1±1.41.2±2.50.6±2.11.1±2.21.1±2.0
注：t检验，各组与对照组比较均P＞0.05
4.3小结
本实施例通过白芷有效部位对SHR血压影响的观察，表明白芷有效部位对肾性高血压大鼠血压有明显的急性降低作用，对收缩压的降低效果作用强于舒张压。

Claims (4)

1、一种从白芷中提取用于制备治疗高血压药物的香豆素类有效成份的超临界提取方法，其特征在于白芷药材，粉碎，过筛，置于萃取釜中，加温装置正常工作后，打开压缩泵加压到20～35MP，温度40～50℃，加携带剂，以40～50kg/h的CO2流速循环萃取，分离釜的压力为5～10MP，温度为30～50℃，提取3h后，分取提取物，挥干携带剂，得到白芷的超临界香豆素类有效部位提取物。
2、一种从白芷中提取用于制备治疗高血压药物的香豆素类有效成份的超临界提取方法，其特征在于白芷药材，粉碎，过筛，置于萃取釜中，加温装置正常工作后，打开压缩泵加压到30MP，温度30℃，加携带剂100ml，以45kg/h的CO2流速循环萃取，分离釜的压力和温度分别为5MP，40℃，提取3h后，分取提取物，挥干携带剂，得白芷的超临界总有效部位提取物。
3、一种从白芷中提取的香豆素类有效部位在制备防治高血压的功能性保健食品和药物的应用，有效部位成份包括欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素、比克白芷素、脱水比克白芷素、别欧前胡素的组合。
4、如权利要求1所述的通过提取的白芷香豆素类有效部位制备的调节和治疗高血压疾病的功能性保健食品和药物，有效部位成份包括欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素、比克白芷素、脱水比克白芷素、别欧前胡素的组合。
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