CN1264290A - 护肤组合物 - Google Patents
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Abstract
有机鹰嘴豆提取物是植物雌激素,如果存在的话,其含量如具有相当于至少1nM雌二醇的雌激素活性。含有有机鹰嘴豆提取物的化妆品组合物可有效改善起皱、有纹路、干燥、薄片状、老化或光损伤皮肤的外观并且改善皮肤厚度、弹性、柔韧性和丰满度。
Description
发明领域
本发明涉及含有鹰嘴豆(chick pea)的有机提取物的化妆品组合物以及通过将该组合物涂敷在皮肤上而调理皮肤的方法。
发明背景
人体皮肤主要由两层构成,较厚的底层是真皮,较薄的顶层是表皮。真皮层为皮肤提供了强度、弹性和厚度。
真皮细胞的主要种类是成纤维细胞,其作用是合成和分泌所有皮肤基质组分,例如胶原,弹性蛋白和葡糖胺基葡聚糖。胶原使皮肤具有强度,弹性蛋白提供弹性,并且葡糖胺基葡聚糖令皮肤湿润和丰满。随着老化,真皮层厚度减小,而且可以肯定在老化皮肤中皱纹的形成部分与此有关。赋予皮肤回弹性和屏蔽性的人体皮肤顶层或表皮是由多种不同类型的细胞构成,其中包括角质细胞,黑素细胞和朗格罕氏细胞。角质细胞是表皮细胞的主要类型(占人体表皮细胞总数的75-80%)。据Richards等人报导,雌激素能够刺激人体真皮成纤维细胞分泌蛋白质,催乳激素,进而催乳激素刺激角质细胞增殖。Richards等人的“人体真皮成纤维细胞体外表达催乳激素”,皮肤病学研究杂志(J.Invest.Dermatol),106:1250,1996。
已知雌激素和具有雌激素样作用的合成化合物可以增加真皮层厚度并减少衰老皮肤中皱纹形成。皮肤的改变,如皮肤干燥、绝经后出现皮肤失去弹性和饱满性,均归因于雌激素生成不足。雌激素疗法可以预防或减缓许多这些与皮肤老化有关的变化(Creidi等人,共轭雌激素霜对面部衰老皮肤的作用,Maturitas,19,211页,1994)。雌激素对皮肤的某些作用包括:增加皮肤厚度并使细皱纹消失,提高表皮有丝分裂速率,减小皮脂腺的大小和活性,减慢毛发生长速度,促进胶原更新并且刺激成纤维细胞生产透明质酸和合成葡糖胺基葡聚糖(Pugliese,绝经期的皮肤,Skin Inc.,1994年3月/4月:69-77页)。
近年来,植物雌激素(即具有雌激素样活性并且在植物中发现的天然化合物)业已被更多地应用于治疗目的。所述用途中的某些是降胆甾醇和抗致动脉粥样化药,治疗特别是绝经后妇女中的心血管疾病,治疗中老年中的骨质疏松症,以及作为抗癌药,尤其是用作治疗妇女的乳腺癌、子宫内膜和子宫颈癌的抗癌药(Knight等人,植物雌激素-近期综述,Maturitas,22:167-75,1995)。
近年来消费者对“天然”型产品的需求在逐渐增长。消费者感到化学合成对环境不安全。化学合成的成分可能含有化学粗品。人们认为天然产品纯净、温和并且优于化学合成产品。然而,释放出植物原料的美容益处并不简单。为了获得“天然”原料的真实益处,不但需要识别植物或植物的一部分中所含有的特定活性物质,还需要确定植物提供实际美容益处的最小浓度和/或具体提取物。
植物中超过500种化合物具有雌激素作用。已发现这些被总称为植物雌激素的化合物存在于多种植物中,包括谷类、豆类(包括鹰嘴豆)和草本植物(Price等人,食物中的天然雌激素-综述,食品添加剂和污染物,2,73-106页,1985)。植物雌激素的浓度因植物部位、地理位置、生长年份等的不同而改变。两种主要的具有植物雌激素活性的植物化合物是黄酮类和香豆烷(coumestan)类。一些已普遍公开的植物雌激素化合物是染料木素、鹰嘴豆素A、芒柄花黄素、大黄豆素及其糖甙衍生物(Knight等人,植物雌激素-近期综述,Maturitas,更年期和绝经后期学杂志,22,167-75页,1995)。
一种日常食用的兵豆,鹰嘴豆或西班牙豆(Cicer arietinum)含有黄酮类化合物,包括大黄豆素,鹰嘴豆素A,红车轴草素,高淝任素,美迪紫檀素,高丽槐素,甲基鹰嘴豆酚,苜缩酚,芒柄花黄素糖甙和鹰嘴豆素A糖甙(Ingham等人在:天然有机产物化学中的方法,第43卷:Ed-W.Herz等人,Springer-Verlag,Wien,New York,1983)。据报导,鹰嘴豆的黄酮类化合物在大鼠血液和肝脏中具有降脂作用。若干营养学研究报导了鹰嘴豆蛋白质用作营养添加物以及提高鹰嘴豆蛋白质质量的途径。Vasilious在美国专利4761285中公开了鹰嘴豆作为食用添加剂或作为内痔或局部痔疮治疗的用途。在印度,由鹰嘴豆粉末和水混合制成的化妆品面膜或皮肤处理物是常见的美容疗法。
上述现有技术没有公开适用于护肤或美容用途的鹰嘴豆有机提取物。现有技术也未建议局部涂敷作为植物雌激素的鹰嘴豆有机提取物及其具有特定的雌激素活性。
发明概述
本发明涉及一种护肤组合物,其含有:(i)一定量的鹰嘴豆有机提取物,所述一定量例如是具有相当于至少1nM雌二醇的雌激素活性的量,所述雌激素活性是通过本文所述的试验测定的;(ii)美容可接受载体。
本发明还涉及一种改善或预防皮肤起皱、出现纹路、干燥、薄片状、老化或光损伤的症状,并且可以改善皮肤的厚度、弹性、柔韧性和丰满性的方法,该方法包括给皮肤涂敷本发明所述组合物。将本发明的组合物局部涂敷在哺乳动物的已经干燥、薄片状、有纹路、起皱、老化、光损伤的皮肤上;或将本发明的组合物预防性地涂敷在正常健康的皮肤上以防止或减少衰变。
本发明也涉及通过将本发明组合物涂敷在皮肤上来提高人体皮肤中成纤维细胞和表皮细胞增殖的美容方法。发明详述鹰嘴豆
适用于本发明组合物的是鹰嘴豆的有机提取物。本发明所用的鹰嘴豆提取物得自干鹰嘴豆。干燥的鹰嘴豆得自Arrowhead Mills,或得自保健食品店或超市。
通过将1份干鹰嘴豆与2-5份溶剂在室温下搅拌4-24小时而用溶剂萃取干鹰嘴豆可以制得有机鹰嘴豆提取物。适用的溶剂如下所述。过滤和/或离心后使提取物澄清,随后蒸发至干(任选地在真空条件下),得到有机鹰嘴豆提取物。
适合用来制备鹰嘴豆提取物的溶剂包括但不限于:乙醇,甲醇,己烷,氯仿,二氯甲烷和乙酸乙酯。优选二氯甲烷、甲醇或乙醇作为溶剂以使活性最佳。可以将提取物进一步浓缩,分为若干部分,再提取或纯化,例如通过有机溶剂提取或通过色谱法纯化。
作为本发明的一部分,业已发现需使用特定最低量的有机鹰嘴豆提取物以产生雌激素作用。
只要是产生相当于至少1nM,一般是1nM-100nM雌二醇的雌激素活性,鹰嘴豆提取物或粉末的用量是0.0001-50%。在并排实验(如以下实施例1所述)中用ZR-75细胞与1nM雌二醇的活性比较以测定鹰嘴豆提取物的雌激素活性。优选的鹰嘴豆提取物的用量例如是可以产生相当于至少2nM雌二醇的雌激素活性的量。美容可接受载体
本发明的组合物还含有美容可接受载体,它们对组合物中的鹰嘴豆提取物起稀释剂,分散剂或载体作用,以便组合物在涂敷于皮肤上时易于分布。
除了水以外,载体包括液态或固态的润肤剂,溶剂,保温剂,增稠剂和粉末。特别优选的非水载体是聚二甲基硅氧烷和/或聚二甲基苯基硅氧烷。本发明的聚硅氧烷在250℃下的粘度约为10-10,000,000mm2/s(厘沲)。更优选是低粘度聚硅氧烷和高粘度聚硅氧烷的混合物。这些硅氧烷可购自通用电器公司(General ElectricCompany)的商品名Vicasil出售的产品,Dow Corning Company以200和550系列出售的SE和SF。可用于本发明组合物中的聚硅氧烷的用量是本发明组合物的5%-95%(重量),优选是本发明组合物的25%-90%(重量)。
美容可接受载体通常是组合物的5%-99.9%(重量),优选25%-80%(重量),并且当其它美容辅料不存在时可以组成组合物的余量。以载体重量计,载体中适宜含有至少80%(重量)的水。在本发明组合物中,优选水分至少为50%(重量),首选水分占组合物重量的60%-80%(重量)。任选的皮肤有益材料和美容辅料
油或油性材料可以与乳化剂一起存在于组合物中,从而生成油包水乳状液或水包油乳状液,这很大地取决于所用乳化剂的平均亲水-亲油平衡值(HLB)。
优选本发明所述组合物中含有防晒剂。防晒剂包括那些常用于阻挡紫外光线的材料。可例举的化合物是PABA,肉桂酸和水杨酸的衍生物。例如,可以采用甲氧基肉桂酸辛酯和2-羟基-4-甲氧基-二苯酮(也称为羟基甲氧基二苯甲酮)。市售甲氧基肉桂酸辛酯和2-羟基-4-甲氧基-二苯酮的商品名称分别是Parsol MCX和Benzophenone-3。防晒剂在乳状液中的精确用量随所需的防阳光UV辐射程度而变化。
本发明所述化妆品组合物中经常含有润肤剂。所述润肤剂的含量是组合物总重量的0.5%-50%(重量),优选5%-30%(重量)。按照常规的化学分类,可以将润肤剂分为酯类化合物,脂肪酸类化合物和醇类,多元醇类和碳氢化合物。
所述酯类化合物可以是单酯或二酯类化合物。可接受的脂肪二酯例包括:己二酸二丁酯,癸二酸二乙酯,二聚(亚油)酸二异丙酯,和琥珀酸二辛酯。可接受的支链脂肪酯包括:肉豆蔻酸2-乙基-己酯,硬脂酸异丙酯和棕榈酸异硬脂基酯。可接受的三元酸酯包括:三亚油酸三异丙酯和柠檬酸三月桂基酯。可接受的直链脂肪酯包括:棕榈酸月桂基酯,乳酸肉豆蔻基酯,和油酸硬脂基酯。优选的酯类化合物包括:椰油-辛酸酯/癸酸酯(一种椰油辛酸酯和椰油癸酸酯的混合物),醋酸丙二醇肉豆蔻基醚酯,己二酸二异丙酯和辛酸鲸蜡基酯。
适用的脂肪醇和酸包括那些含有10-20个碳原子的化合物。更优选例如鲸蜡基,肉豆蔻基,棕榈基和硬脂基的醇和酸的化合物。
在多元醇中起润肤剂作用的是直链和支链烷基多羟基化合物。例如,优选丙二醇,山梨糖醇和甘油。也可以采用聚合多元醇,例如聚丙二醇和聚乙二醇。还特别优选丁二醇和丙二醇作为渗透促进剂。
具有润肤剂作用的碳氢化合物例如是那些具有12-30个碳原子的碳氢化合物链。具体实例包括矿物油,矿脂,角鲨烯和异链烷烃。
本发明化妆品组合物中的另一类功能组分是增稠剂。增稠剂的含量通常是组合物的0.1-20%(重量),优选约0.5-10%(重量)。可例举的增稠剂是B.F.Goodrich Company以商品名称Carbopol出售的交联聚丙烯酸酯材料。还可以使用树胶,如汉生胶、角叉菜胶、明胶、梧桐胶、果胶和刺槐豆胶。在某些情况下,用作聚硅氧烷或润肤剂的材料也可以起增稠作用。例如,粘度大于10厘沲的聚硅氧烷树胶和酯类化合物如硬脂酸甘油酯具有双重功能。
本发明化妆品组合物中可以掺有粉末。这些粉末包括白垩,滑石,高岭土,淀粉,绿土,化学改性的硅酸镁铝,有机改性的蒙脱石土,水合硅酸铝,煅制二氧化硅,淀粉辛烯基琥珀酸铝及其混合物。
在本发明化妆品组合物中还可以掺入其它次要辅料成分。这些组分包括着色剂,遮光剂和香料。其它这些次要辅料成分的含量是组合物的0.001%-20%(重量)。组合物的应用
本发明的组合物主要作为局部涂敷在人体皮肤上的产品,特别是可作为调理、保湿和光滑皮肤,增加皮肤的厚度、柔韧性和弹性并且防止或减少皱纹、纹路或衰老皮肤出现的物质。
在使用中,从适当的容器中或在必要时用涂敷器具取少量的所述组合物,如1-100ml涂敷在皮肤的暴露部位,随后用手或手指或合适的装置将其分布和/或涂擦到皮肤内。产品的形式和包装
可以将本发明的局部皮肤护理组合物配制为洗液、膏霜或凝胶。组合物被包装在符合其粘度和用户所需用途的适当容器内。例如,将洗液或膏霜装在瓶或滚珠式涂敷器中,或装有适于手指操作泵的抛射剂驱动式气溶胶装置或容器内。当组合物是膏霜时,可以将其直接储存在不变形瓶内或挤压容器内,例如管或有盖子的罐内。还可以将组合物装在胶囊中,如美国专利5 063 507(在此引入作为参考)公开的胶囊。所以,本发明还提供了含有所述美容可接受组合物的封闭容器。
下列具体实施例进一步说明但不限定本发明。所有实施例中的p值是用学生t试验计算的。实施例1
本实施例用于说明,当有机鹰嘴豆提取物具有例如产生相当于至少1nM雌二醇的植物雌激素活性的浓度时,其适合用于本发明中。鹰嘴豆提取物的制备:
从Arrowhead Mills(Hareford,TX)获得干燥鹰嘴豆并在干式研磨机中研磨成粉末。将二氯甲烷(DCM)或甲醇(1∶3 w/v)与由此得到的鹰嘴豆粉末在室温下混合20小时以提取鹰嘴豆粉末。经过滤和离心使提取物变澄清。随后,真空下蒸发该提取物得到干燥提取物。用DCM提取63g鹰嘴豆干粉的提取液中溶解有1.47g干燥材料;用甲醇提取60g鹰嘴豆粉末的提取液中溶解了2.434g干燥材料。这相当于DCM和甲醇的提取量分别是2.31%和4.06%。此后,将干燥提取物重新溶解在二甲基亚砜(DMSO)中,令浓度达到适合细胞使用的50μg/μl。细胞内DNA合成速率的测定方法:
将3H-胸腺嘧啶脱氧核苷掺入培养细胞中以测定细胞的增殖作用(ZR75或角质细胞)。胸腺嘧啶脱氧核苷是DNA单体单元的一种四脱氧核苷。在体细胞进行细胞分裂前,经受细胞分裂的细胞的完全染色体组被复制。这其中包括细胞大规模地合成DNA,同时确保子代细胞获得与遗传物质相同的模板。当在为细胞分裂作DNA合成准备的细胞培养基中含有3H-胸腺嘧啶脱氧核苷时,标记的胸腺嘧啶脱氧核苷随后将被掺混到新合成的DNA中。细胞群内3H-胸腺嘧啶脱氧核苷的掺入程度与此细胞群的DNA合成速率成比例,因此它是细胞增殖作用的指征。
利用下列试验来测定有机鹰嘴豆提取物是否具有植物雌激素活性,以及是否此活性相当于至少1nM雌二醇:
ZR75细胞系是一种导管性乳腺癌细胞系,最初分离自一名36岁白种妇女的恶性乳房上皮(Engel等人,连续培养中的人体乳腺癌细胞:综述,癌症研究(Cancer Res.),38:4327-4339,1978)。该细胞系含有雌激素、孕酮和其它甾类激素的受体,但只对雌激素产生增强增殖作用的反应。该细胞系含有高亲和性雌激素特异性受体。所以,适合用该细胞系来测试雌激素样活性(Markiewicz等人,“非甾类植物雌激素的体内生物测定”,甾类化合物的生物化学,分子学和生物学杂志(J.Steroid Biochem.Molec.Biol.),45:399-405,1993)。1.令ZR75细胞(得自American Type Culture Collection,Rockville,Maryland)在RPMI 1640培养基(得自Gibco Life Technologies)中生长,所述RPMI 1640培养基中含有10%胎牛血清(FBS),100单位/ml青霉素和100单位/ml链霉素。该培养基不合有酚红(一种弱效拟雌激素物质)。细胞的接种密度为1,000,000/75cm2瓶。为了试验,将细胞接种在24孔平板上,密度为100,000细胞/ml/孔。2.生长24小时后,除去培养基,用PBS洗涤细胞并加入1ml不含有血清(但含有链霉素和青霉素)的RPMI 1640。在二甲基亚砜(DMSO)中制备鹰嘴豆提取物的储备液,在水中制备雌二醇的储备液。随后将不同浓度的有机鹰嘴豆提取物和雌二醇(如表1所示)直接施用给每个细胞。又一个24小时之后,向各孔中加入1μCi〔甲基-3H〕胸腺嘧啶脱氧核苷。24小时后除去培养基。细胞用PBS洗涤1次,除去全部PBS,并且将细胞残留在冰上,用1ml/孔的10%TCA(三氯乙酸)孵育30分钟。将平板用5%TCA洗涤3次以彻底洗去未掺入到细胞内的痕量胸腺嘧啶脱氧核苷。在各孔内加入500μl的0.1M氢氧化钠并且将平板在室温下保温至少30分钟。将250μl各样本转移到闪烁管形瓶内,在加入5ml计数流体后,在测定氚的设置条件下对各管形瓶计数5分钟。与没有加入鹰嘴豆提取物或雌二醇的对照孔进行比较,计算出一式三份孔中的胸腺嘧啶脱氧核苷掺杂百分比值。将数据表示为三份孔的平均值±标准偏差。
所得结果概括于表1中。
表1
雌二醇(nM) | ZR75的DNA合成(相对于空白对照的百分率) | 鹰嘴豆DCM提取物(μg/ml) | ZR75细胞的DNA合成(相对于空白对照的百分率) |
0 | 100±10 | 0 | 100±17.5 |
0.01 | 117±19.7 | 0.01 | 106±12.8 |
0.1 | 106±16.3 | 0.1 | 176±25.6* |
1.0 | 162±3.2* | 1.0 | 174±16.6* |
10.0 | 267±15.1* | 10.0 | 2264±28.7* |
100 | 203±51.2* | ||
1000 | 178±20.1* |
*表明与对照物相比,在p值<0.05下统计学上明显促进DNA合成
由表1结果可以看出,1nM(0.274ng/ml)或更高浓度的雌二醇提高了ZR75细胞的DNA合成。从浓度为0.1μg/ml或更高的上述具体鹰嘴豆提取物可以获得相同的活性。
有机鹰嘴豆提取物适合以一定量如产生相当于至少1nM雌二醇的雌激素活性的量应用于本发明的组合物中。对于本实施例中的这种具体提取物,每1ml介质含有0.1μg鹰嘴豆的浓度能够产生所需的活性。实施例2
用如表2所示的不同浓度的鹰嘴豆提取物重复进行实施例1。
所得结果概括在表2中。
表2
处理 | cpm±SD | 相对于空白对照的百分率 | p值 |
实验2: | |||
空白对照 | 14566±719 | 100±4.9 | |
雌二醇(10nM) | 122254±3940 | 839±27 | 0.000003 |
鹰嘴豆DCM提取物(10μg/ml) | 22530±1302 | 154.6±8.9 | 0.0016 |
实验3: | |||
空白对照 | 14302±1669 | 100±11.6 | |
雌二醇(10nM) | 30158±1087 | 211±7.6 | 0.0004 |
鹰嘴豆DCM提取物(1.0μg/ml) | 26053±901 | 182±6.3 | 0.0009 |
鹰嘴豆DCM提取物(10.0μg/ml) | 49541±591 | 346±2.1 | 0.000005 |
从表1(代表实验1)和表2的结果可以看出,分别在3天里用3种不同传代ZR75细胞进行的3个独立实验中,有机鹰嘴豆提取物显著刺激ZR75细胞的增殖。实施例3
本实施例说明了,用有机鹰嘴豆提取物处理的角质细胞排泄出一种刺激成纤维细胞增殖的物质。角质细胞的细胞培养:
令分离自新生儿包皮的、经胰蛋白酶处理的人体角质细胞在Dulbecco改进Eagle(DME)Hams F12(3∶1)培养基/5%胎牛血清中生长,培养基中存在经丝裂霉素C处理的3T3小鼠成纤维细胞,目的是建立分裂的角质细胞群。细胞在上述条件下生长直至其第二代出现并且将其冷冻保存以备后用。将冷冻的第二代角质细胞融化并且放置平板上,将平板置于上述培养基中生长5天。在第5天,当细胞融合达70-80%时,将其用胰蛋白酶处理,并且在24孔平板的每个孔中加入20000-30000个细胞,平板放置在含有0.15mM钙、不含有血清的角质细胞生长培养基(KGM-得自Clonetics,San Diego CA)中。实验前的5天内细胞生长至有80%融合。成纤维细胞的细胞培养:
将得自Clonetics Corporation(San Diego,CA)的新生儿人体包皮成纤维细胞培养在含有10%胎牛血清(均得自LifeTechnologies,Grand Island,NY)的DMEM中。用第5-15传代的细胞进行实验。在24孔平板的每个孔内加入7000-10000个细胞并使其在实验前的5天里生长至80%融合。角质细胞调理的培养基的制备:
为了从试验看出角质细胞和成纤维细胞对鹰嘴豆提取物处理的反应,制备如下的角质细胞调理的培养基:在无血清和酚红的RPMI培养基中,将上述制得的80%融合的角质细胞用不同浓度的鹰嘴豆提取物(如表3所示)处理24小时。从平板收集的培养基称为“角质细胞调理的培养基”。试验方法:
将在1ml不合有血清和酚红的RPMI培养基中的浓度不同的鹰嘴豆提取物分别施用给角质细胞和成纤维细胞。另外对成纤维细胞给予1ml角质细胞调理的培养基。24小时后,在每个孔中加入1μCi的3H胸腺嘧啶脱氧核苷并将细胞保温24小时。按照实施例1的步骤2分析与细胞DNA有关的3H胸腺嘧啶脱氧核苷的量。
所得结果概括在表3中。
表3
处理 | 角质细胞cpm±SD(相对于空白对照的百分率) | 成纤维细胞cpm±SD(相对于空白对照的百分率) | 角质细胞调理的培养基对成纤维细胞的cpm±SD(相对于空白对照的百分率) |
空白对照 | 105514±19070(100±18.1) | 32206±1207(100±3.7) | 24385±3056(100±12.5) |
鹰嘴豆DCM提取物: | |||
0.1μg/ml | 109855±28739(104±27.2)p=0.838 | 39617±6046(123±18.7)p=0.1057 | 47799±3920(196±16.0)p=0.00132 |
1.0μg/ml | 105596±19888(100±18.8p=0.996 | 35237±3279(109±10.2)p=0.2074 | 42093±5448(172±1.83)p=.0079 |
表3中的结果证实,鹰嘴豆提取物不直接影响角质细胞或成纤维细胞的增殖。但是,鹰嘴豆提取物可以诱发角质细胞分泌出促进成纤维细胞生长的物质,这是因为来自暴露在鹰嘴豆提取物下的角质细胞的调理的培养基明显增强了成纤维细胞的增殖。实施例4
本实施例说明的是,有机鹰嘴豆提取物可以提高小猪皮肤表皮部分中细胞的增殖作用。在此实施例中,测试雌二醇、纯的植物雌激素化合物和鹰嘴豆提取物对表皮细胞增殖作用的影响。小猪皮器官的培养:
猪皮在形态学和生物化学上与人体皮肤相似,所以常用于测试材料对人体局部应用的作用。新割下的小猪皮来自当地屠宰场,用Dove皂洗涤并在200μ的厚度取皮,以便获得表皮和真皮层。用7mm钻孔器对取下的猪皮进行均匀打孔活组织检查。将活组织在含有高浓度抗生素/抗真菌(antimycotic)混合物(来自Gibco的卡那霉素、青霉素和链霉素)的培养基中洗涤,并且在转孔中含有氢化可的松、L-谷氨酰胺、抗生素和抗真菌剂但不含有血清的高葡糖DMEM培养基中孵育,每个孔中含有3个活组织。从转孔底部加入培养基以使活组织的表皮侧与空气接触。在第3天,将培养基更换为新的培养基,并且将活组织暴露在1μlDMSO中浓度不同的多种活性物质下,如表4所示。3天后,更换培养基,再加入活性物质并且用10μCi3H胸腺嘧啶脱氧核苷标记各孔中的活组织。在PBS中洗涤活组织后,通过在振摇条件下将活组织在2M溴化钠溶液中保温24小时,可以将表皮与真皮分开。用镊子取下真皮上的表皮,将其溶解在1ml的0.5N氢氧化钠中并且在60℃下保温过夜。将200μl已溶解的表皮闪烁计数以测出掺杂在表皮中的3H胸腺嘧啶脱氧核苷。用至少4份样本计算出平均cpm,并且再相对于未接受活性物质的空白对照活组织计算出百分率。所得结果概括在表4中。
表4
处理 | cpm±SD | 相对于空白对照的百分率 | p值 |
实验1 | |||
对照物 | 4563±1523 | 100±33.3 | |
雌二醇 | |||
1nM | 2690±1113 | 58.9±24.4 | |
10nM | 5190±1096 | 113±24 | 0.476 |
100nM | 1757±1492 | 39.0±32.6 | |
异类黄酮 | |||
对照物 | 3789±1164 | 100±30.7 | |
黄豆苷原1μg/ml | 8599±927 | 227±24.4 | 0.000226 |
10μg/ml | 11065±2901 | 292±76.5 | 0.00228 |
7-羟基-4′-甲氧异黄酮1μg/ml | 4770±1260 | 126±33.2 | 0.826 |
10μg/ml | 6608±2886 | 174±76.1 | 0.1867 |
鹰嘴豆DCM提取物 | |||
0.1μg/ml | 10922±3887 | 288±102 | 0.0099 |
1.0μg/ml | 13149±3037 | 347±80 | 0.000686 |
实验2 | |||
对照物 | 1155±69 | 100±5.9 | |
雌二醇1nM | 2273±783 | 196±67.7 | 0.1147 |
雌二醇10nM | 3817±1175 | 330±101 | 0.0292 |
雌二醇100nM | 2785±751 | 241±65 | 0.0339 |
鹰嘴豆甲醇提取物 | |||
对照物 | 4451±1961 | 100±44 | |
0.01μg/ml | 5503±3026 | 123±67.9 | 0.5463 |
0.1μg/ml | 8435±2034 | 189±45.6 | 0.0205 |
1μg/ml | 2256±704 | 50.6±15.8 | -- |
从表4的结果可以看出,在2个独立的实验中,10nM的雌二醇使小猪表皮细胞的增殖作用提高(在实验2中,这种提高具体统计学意义)。也证实了黄豆苷原具有这种作用,黄豆苷原比天然激素雌二醇更有效。另一种异黄酮-7-羟基-4’-甲氧异黄酮对猪表皮没有明显的生长刺激作用。鹰嘴豆的甲醇和二氯甲烷提取物皆具有生长促进作用,二氯甲烷提取物比甲醇提取物更有效。鹰嘴豆的二氯甲烷提取物甚至比纯的异黄酮或雌二醇更有效。该结果证实了有机鹰嘴豆提取物在极其接近人体皮肤的模型体系中对皮肤细胞具有有益作用。
实施例5-10举例说明了本发明的皮肤护理组合物。可以以常规方式制备这些组合物。它们适宜于美容用途。特别是,适合将这些组合物涂敷在起皱的、有纹路的、粗糙的、干燥的、薄片状的、衰老的和/或紫外损伤的皮肤上,从而改善其外观和感觉,也可以将组合物涂敷在健康皮肤上以预防或延缓其衰变。实施例5
本实施例举例说明掺有本发明组合物的高内相油包水乳状液。
*Brij 92是聚氧乙烯(2)油基醚实施例6
%w/w | |
鹰嘴豆DCM提取物 | 0.5 |
1,3-二甲基-2-咪唑啉酮 | 0.2 |
Brij 92* | 5 |
皂土38 | 0.5 |
MgSO4 7H2O | 0.3 |
丁基化羟基甲苯 | 0.01 |
香料 | 适量 |
水 | 至100 |
本实施例举例说明掺有本发明组合物的水包油膏霜。
*Brij 56为鲸蜡基醇POE(10)*Alfol 16RD是鲸蜡基醇实施例7
%w/w | |
鹰嘴豆甲醇提取物 | 2 |
矿物油 | 4 |
1,3-二甲基-2-咪唑啉酮 | 1 |
Brij 56* | 4 |
Alfol 16RD* | 4 |
三乙醇胺 | 0.75 |
丁烷-1,3-二醇 | 3 |
汉生胶 | 0.3 |
香料 | 适量 |
丁基化羟基甲苯 | 0.01 |
水 | 至100 |
本实施例举例说明掺有本发明组合物的醇性洗液。
实施例8
%w/w | |
鹰嘴豆甲醇提取物 | 5 |
1,3-二甲基-2-咪唑啉酮 | 0.1 |
乙醇 | 40 |
香料 | 适量 |
丁基化羟基甲苯 | 0.01 |
水 | 至100 |
本实施例举例说明含有本发明组合物的另一种醇性洗液。
实施例9
%w/w | |
鹰嘴豆DCM提取物 | 10 |
1,3-二甲基-2-咪唑啉酮 | 0.01 |
乙醇 | 40 |
抗氧剂 | 0.1 |
香料 | 适量 |
水 | 至100 |
本实施例举例说明掺有本发明组合物的防晒霜。
实施例10
%w/w | |
鹰嘴豆乙醇提取物 | 2 |
1,3-二甲基-2-咪唑啉酮 | 0.2 |
硅油200cts | 7.5 |
甘油单硬脂酸酯 | 3 |
十六醇十八醇混合物 | 1.6 |
聚氧乙烯-(20)-鲸蜡基醇 | 1.4 |
汉生胶 | 0.5 |
Parsol 1789 | 1.5 |
甲氧基肉桂酸辛酯(PARSOLMCX) | 7 |
香料 | 适量 |
着色剂 | 适量 |
水 | 至100 |
本实施例举例说明掺有本发明组合物的非水护肤组合物。
1一种二甲基硅氧烷聚合物,分子量至少为50 000,并且25℃时的粘度至少为10 000厘沲,购自GEC2环状二甲基硅氧烷五聚物,购自Dow Corning Corp.3二甲基硅氧烷四聚物,购自Dow Corning Corp.
%w/w | |
鹰嘴豆DCM提取物 | 5 |
1,3-二甲基-2-咪唑啉酮 | 1 |
聚硅氧烷树胶SE-301 | 10 |
聚硅氧烷流体3452 | 20 |
聚硅氧烷流体3443 | 50.26 |
角鲨烯 | 10 |
亚油酸 | 0.01 |
胆甾醇 | 0.03 |
2-羟基-正辛酸 | 0.7 |
维生素E亚油酸酯 | 0.5 |
中草药油 | 0.5 |
乙醇 | 2 |
应理解,在此例举和描述的本发明具体形式只起代表作用。可以根据所例举的实施方案、在不背离本发明公开内容明确教导的条件下进行各种变化,包括但不限于本申请说明书所述的变化。所以,本发明的全部保护范围参见所附的权利要求书。
Claims (5)
1.一种皮肤护理组合物,其含有:(i)一定量的鹰嘴豆有机提取物,所述一定量例如具有相当于至少1nM雌二醇的雌激素活性的量;(ii)美容可接受的载体。
2.一种将植物雌激素输送到人体皮肤的美容方法,该方法包括将权利要求1所述的组合物涂敷在皮肤上。
3.一种改善起皱、有纹路、干燥、薄片状、老化或光损伤皮肤的外观并且改善皮肤厚度、弹性、柔韧性和丰满度的美容方法,该方法包括将权利要求1所述的组合物涂敷在皮肤上。
4.一种增强人体皮肤中成纤维细胞增殖的美容方法,该方法包括将权利要求1所述的组合物涂敷在皮肤上。
5.一种增强表皮皮肤细胞增殖的美容方法,该方法包括将权利要求1所述的组合物涂敷在皮肤上。
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