CN1254251C - 一种药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种药物组合物及其制备方法，其原料药组份用量在下述重量份范围内对于解酒护肝都有较好疗效：沙棘粉25-40份、牡蛎粉35-50份、维生素C 20-30份。本发明由上述原料药制备的药物组合物具有对化学性肝损伤辅助保护作用的功效，具有较好的解酒护肝作用。

Description

一种药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，属于中药领域。

背景技术

中华民族历史悠久，传统文化源远流长，酒文化更以其特殊的魅力被历代文人墨客所推崇，成为人们宣泄快乐，排解忧愁的最佳伙伴。

但是，凡事都有其两重性，饮酒在丰富我们的生活的同时，对身体也会造成损害，尤其是肝脏。进入人体的酒精被吸收后主要是通过乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶在肝脏内进行代谢，长期或过量饮酒必将损害肝脏的代谢功能，造成肝细胞酒精变性，进而发展成为脂肪肝、肝硬化甚至肝癌。酒精性肝损害已经成为化学性肝损伤最主要原因之一。

目前市场上解酒护肝的药物组合物较多，其中主要成分以葛根花、甘草、淡竹叶、枳(木具)子、苦参等为主，疗效并不确切。

发明内容

本发明的目的是提供一种对于解酒保肝有显著疗效的药物组合物。

本发明的另一个目的是提供该药物组合物的制备方法。

本发明药物是通过选择沙棘粉、牡蛎粉及维生素C为原料进行组合制备解酒护肝药的，将这些药物组合使得各药物功效产生协同作用，从而有效进行解酒护肝。

其中沙棘粉由沙棘果实制得。沙棘果实含黄酮类化合槲皮素、异鼠李素、四羟基黄酮及其苷，并含大量维生素C、维生素E、胡萝卜素、维生素B₁、维生素B₂、维生素B₆、维生素B₁₂和叶酸；所含脂肪酸有肉豆蔻酸、棕榈烯酸、棕榈酸、硬脂酸和油酸、亚油酸、反油酸、反亚油酸、花生四烯酸、月桂酸等；此外还含有多种有机酸、皂苷、甾醇、糖类及15种微量元素。

沙棘具有以下生理功能：

(1)保护肝脏和消化系统

20％的沙棘果汁0.84克/千克和1.68克/千克体重对CCl₄、扑热息痛所致小鼠损伤肝中丙二醛(MDA)的增高有明显抑制作用，并能显著降低CCl₄中毒小鼠的SGPT活力，对抗扑热息痛中毒小鼠肝谷胱甘肽(GSH)的耗竭。沙棘籽油0.25克/千克和0.5克/千克体重灌胃，可明显减少CCl₄造成的肝内坏死灶。电镜观察，CCl₄组粗面内质网发生变化，即肝细胞浆内小片状嗜碱性物质大部分消失，沙棘油可使该物质恢复至正常水平。沙棘油还可对抗由CCl₄引起的肝细胞的新陈代谢、糖合成、糖原凝固、蛋白质合成等代谢障碍。沙棘油可防止肝细胞P450的减少，也可防止肝脏中总蛋白和水溶性蛋白的减少，以及由乙醇和CCl₄引起的细胞质和微粒体、肝脏蛋白质的减少。另外，沙棘油腹腔注射有防治脂肪肝的作用，并对3，4-氯-1-丁烯慢性中毒大鼠的肝细胞膜具有稳定作用。

沙棘油和沙棘粉中的中性脂质成分有很强的抗溃疡作用，对利血平所致胃溃疡有显著对抗作用。可加速胃溃疡和肠损伤的愈合，降低胃黏膜脂质过氧化物并提高中性氨基酸的浓度。另外，沙棘油和沙棘粉可使动物唾液和胃肠腺体分泌增加，胃蛋白酶含量升高。同时对胃肠运动机能有刺激作用，节律性收缩周期延长，振幅增大。

(2)清除自由基

当每毫升沙棘溶液中含1.7毫克沙棘总黄酮时对PMA刺激多形核人白细胞(PMN)生成的活性氧自由基有明显清除作用，当每升沙棘溶液中含0.03～3毫克沙棘总黄酮时对黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶系统的活性氧自由基有显著剂量依赖性的清除作用，但对光照核黄素产生活性氧自由基的清除作用较弱。当每升沙棘溶液中含沙棘总黄酮3毫克时对Fenton反应生成的HO·有明显清除作用，当每升沙棘溶液中含1毫克沙棘总黄酮还能显著抑制多核人白细胞产生的活性发光。

沙棘油2.5毫克/千克体重对小鼠进行腹腔注射，有抗氧化作用及防止脂肪肝作用，并能调节组织中脂质过氧化速度及维生素E水平。沙棘油与维生素E相似，对高脂血清损伤的血管平滑肌细胞有保护作用，能明显降低高脂损伤平滑肌细胞内升高的脂质过氧化物(LOP)的含量，并能明显提高SOD的活性，从而减轻高脂血清对细胞膜的损伤，保护并促进细胞的健康生长。

(3)抗疲劳及其他

沙棘粉富含维生素C及多种微量元素，对消除疲劳及增强运动能力有良好的影响，还可明显地改善心脏功能。小鼠腹腔注射沙棘总黄酮2毫克/千克体重，连续6天，体重净增加明显高于对照组。

大剂量的沙棘浓缩液可明显延长戊巴比妥钠所致小鼠睡眠的时间。沙棘籽油能显著抑制小鼠脑内单胺氧化酶的活性。

另外沙棘还具有增强免疫，改善心血管系统和造血系统功能，以及抗肿瘤抗辐射和抗炎症等功能。本发明使用的沙棘粉是采用先进生产工艺进行制备，有效地保存了沙棘果中所含有的所有功能成分，因此具备上述所述的各项功能。

维生素C的生理功能：

(1)氧化还原作用

在生物体内，维生素C/DHVC的氧化还原反应与巯基(-SH)/双硫键(-S-S)系统相联系。因此维生素C可使体内-SH水平提高。维生素C在体内可能有清除自由基的作用，有些化学物质对机体的损害，都涉及到自由基的作用，如氧、臭氧、二氧化氮、酒精、四氯化碳及抗癌药中的阿拉霉素对心脏的损伤。维生素C作为体内水溶性的抗氧化剂，可与脂溶性抗氧化剂有协同作用，可能在防止脂类过氧化作用上起一定的作用、人眼晶体在光的作用下，也可产生O₂的自由基，可能为白内障产生的原因。这些自由基在正常情况下为体内抗氧化剂如维生素C、麦胱甘肽所清除、所以大量的维生素C可以阻止这种过氧化作用的破坏。

(2)维生素C影响某些药物代谢

①维生素C对肝微粒体酶系统的影响；一些脂溶性药物在肝微粒体酶系统作用下，进行羧基化及去四基化，成为极性化合物后，易于从胆汁及尿中排出解毒。有机氯杀虫剂能透发微粒体酶活力。但此酶系统对维生素营养情况反应比较敏锐。维生素C缺乏的程度尚未达到体重下降时，微粒体中羟基化酶系统的活力已下降，其中以细胞色素还原酶的减少最多，约减85％，补充维生素C后，组织中维生素C量在较短时间内恢复正常，但酶活力恢复较慢。

②维生素C还具有去组胺作用以及防止联苯胺、萘胺及亚硝盐的致癌作用。

牡蛎粉的生理功能：

牡蛎是名贵海珍，它不仅味道鲜美，滋补保健作用也为古今中外所称道。牡蛎富含维生素B群、肌醇、胆碱和锌、铁等矿物质。

牡蛎粉对人体的益处是很多的：

(1)牡蛎富含的矿物质硒、锌等微量元素可促进身体的免疫功能，预防感冒，另外锌可促进蛋白质的合成，因而具有增强体力，恢复精神的效果。

(2)牡蛎粉含20％以上的优质蛋白质，其氨基酸组成完善，超过牛乳和人乳。

(3)牡蛎含脂类虽少，但多为具有生理活性的复合磷脂、磷酸肌醇、廿碳五烯酸(EPA)、廿二碳六烯酸(DHA)等。这些成分都有防止动脉硬化、抗血栓以及抗衰老作用。

(4)牡蛎富含天然牛磺酸。牛磺酸有消炎解毒、保肝利胆、降血脂、促进幼儿大脑发育及安神健脑等作用，其效果体现在：

1)保肝利胆，增进肝脏机能，提高肝脏的解毒功能；

2)促进乳酸分解，松弛平滑肌，消除疲劳；

3)促进胆汁分泌、脂肪的乳化，降血脂；

4)消炎、解热止痛；

 5)抑制酒精毒力。

(5)牡蛎所含糖份为糖元，其提取物中糖元占20-40％。糖元是组织能源物质的储备形式，是体力脑力活动效率及持久力的物质保证。

根据上述三种成分功效及作用机理，可以看出选择沙棘粉、牡蛎粉和维生素C作为药物组合物原料药是合适的。试验结果也表明由该原料药制备的药物组合物具有对化学性肝损伤辅助保护作用的功效，具有超加和作用。

本发明药物组合物原料药的用量也是经过发明人进行大量实验摸索总结得出，各原料药组份用量为在下述重量份范围都有较好疗效：沙棘粉25-40份、牡蛎粉35-50份、维生素C20-30份。

本发明药物组合物原料药组份的优选重量配比是：沙棘粉27-38份、牡蛎粉40-45份、维生素C23-28份。

本发明药物组合物原料药组份的最优选重量配比是：沙棘粉32份、牡蛎粉42份、维生素C25份。

本发明药物组合物的制备过程如下：

(1)沙棘粉的制备：

选取新鲜、良好、完全成熟、呈橙黄色或桔红色的沙棘果，人工去除其中夹杂的枝叶土石块等杂质，用清水清洗干净，洗去其上所粘附的泥沙、虫卵等，清洗干净的沙棘经修整去除其果梗花蒂等，加入2～5倍重量为50～70℃的净化水，均匀地送入打浆机进行破碎打浆，打浆机的筛孔孔径应在0.6～1.0毫米左右，所得沙棘果浆用螺旋榨汁机进行挤压取汁并将残渣滤去，挤压所得汁液经过滤浓缩后，采用真空低温喷雾干燥法，制成沙棘粉。

(2)牡蛎粉的制备：

取鲜活牡蛎，破壳取全蛎黄在铰肉机中铰碎，过100～300目筛子，去滤渣取滤液，再过0.1～0.5μm滤膜，收集滤液，最后过截止量3500～6500的超滤膜，收集透过液，透过液冷冻干燥制成干粉待用。

(3)维生素C。

(4)半成品制备：

将上述三种原料药按上述比例装入混料筒内，充分混匀，装袋后钴-60辐照灭菌(5KGY)，干燥保存。

(5)成品制备：

选择1号机灌胶囊外壳，用胶囊灌装机灌装，0.3克/粒再采用铝塑包装，铝塑包装板与小干燥剂袋同装入塑料袋中，最后加外包装，制成成品。

根据制剂的需要，本发明药物中可以含有药剂学领域中常用的药物赋形剂，例如，溶剂、填充剂、调味剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、润湿剂、色素、增容剂、稀释剂、增稠剂等，以常规的中药制剂方法制备成任何一种常用口服剂型，如丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液等。本发明药物组合物的优选剂型是胶囊剂(以下简称之为护肝胶囊)。

本发明药物具有明显的解酒护肝的功效。

本发明药物组合物的服用方法为日常用量每日1次，每次3粒。

本发明药物组合物可以明显增加体内乙醇脱氢酶的活性，具有较好的解酒功能。药理实验表明，服用药物组合物的小鼠在连续给酒15天后，肝细胞较正常小鼠肝细胞无明显变化，而未用药物组合物的小鼠连续给酒15天后，肝细胞则出现明显的酒精样病变，说明该药物组合物护肝作用明显。该药物组合物在北京市疾病预防控制中心进行了毒理学安全性评价、保健功能评价、功效成份鉴定、稳定性及卫生学检验等实验，所有指标均达到检验要求。人体实验亦表明，该药物组合物可以增加乙醇脱氢酶的活性对酒精性肝损伤有明显的保护作用。

下面通过附图说明对本发明做进一步说明，但并不意味着对本发明保护范围的限制。

附图说明

图1是本发明低剂量组肝组织切片；

图2是本发明高剂量组肝组织切片；

图3是空白组肝组织切片；

图4是阳性对照组肝组织切片。

具体实施方式

以下通过试验例来进一步阐述本发明所述药物组合物(以下简称护肝胶囊)的有益效果，这些试验例包括了本发明药物组合物的药效学试验和临床疗效试验。

下面介绍功效成分、含量及功效成分的检验方法

1.功效成分

沙棘粉主要功效成分是总黄酮，牡蛎粉主要功效成分是微量元素，因此检测产品中总黄酮、维生素C的含量，即可达到控制产品质量的目的。

2.含量：

黄酮(毫克/100克)≥310

维生素C(克/100克)≥25.6

3.检验方法：

3.1维生素C含量测定：

符合“中华人民共和国药典”2000年版的一般规定。

3.2总黄酮的测定方法：

3.2.1试剂

3.2.1.1聚酰胺粉

3.2.1.2芦丁标准溶液

称取5.0毫克芦丁，加甲醇溶解并定容为100毫升，此液浓度为50微克(μg)/毫升。

3.2.1.3乙醇(分析纯)

3.2.1.4甲醇(分析纯)

3.2.2分析步骤

3.2.2.1样品处理：称取1克左右样品，加乙醇定容为25毫升，摇匀后，超声提取20分钟，放置，吸取上清液1.0毫升，于蒸发皿中，加1克聚酰胺吸附，于水浴上挥干乙醇，转入层吸柱，先用20毫升苯洗脱，弃苯，然后用25毫升甲醇洗脱总黄酮，定容为25毫升，此液于360纳米测定吸光度。同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算样品中总黄酮的含量。

3.2.2.2芦丁标准曲线

吸取芦丁标准溶液：0、1.0、2.0、3.0、40、5.0ml于10ml比色管中，加甲醇至刻度，于360nm测定吸光度，求回归方程。

3.2.2.3计算

$X=\frac{A\×V2}{V1\×M\×1000}$

式中：X为样品中总黄酮含量，毫克/克

A为由标准曲线算得的被测液中总黄酮量，微克(μg)

M为取样量

V1为测定用样品体积，毫升

V2为样品定容总体积，毫升

试验例1：本发明护肝胶囊对人体内乙醇脱氢酶的作用

人体对乙醇耐受性，主要取决于人体乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的含量，通过人服用本发明护肝胶囊后测定人血乙醇脱氢酶变化，可以考察出本发明护肝胶囊对人体内乙醇脱氢酶的影响，从而找出本发明护肝胶囊护肝作用机理。

(一)试验方法：

选健康成人30人，各取指血0.3毫升，然后服护本发明护肝胶囊3粒，半小时后，再各取指血0.3毫升；每人饮38°白酒150毫升，饮酒半小时后各取指血0.3毫升。指血离心分离，取血清备用。

乙醇脱氢酶活性测定：

A.试剂：1〕缓冲液：称取焦磷酸钠16.6克，盐酸联胺4.0克，甘氨酸0.8克，溶解在450毫升蒸馏水中，用2N氢氧化钠调节PH至8.7，然后加蒸馏水500毫升，冰箱保存。

2〕4.5毫摩尔辅酶I溶液：称取30毫克辅酶I，加蒸馏水至10毫升，冰箱保存。

3〕0.2魔尔乙醇溶液：吸取4.7毫升无水乙醇，加蒸馏水400毫升。

4〕抑制剂：10纳魔尔(nM)硫脲溶液：称取80毫克硫脲，加蒸馏水至40毫升。

B.操作：取试管若干支，1支作空白管，余下作测定管，各加0.1毫升血清，再加辅酶I溶液0.1毫升，缓冲液3毫升，摇匀，置37℃水浴中预热5分钟，取出，测定管中加入乙醇溶液0.4毫升，空白管中加入蒸馏水0.4毫升。摇匀，置37℃水浴中作用10分钟，立刻取出各加入抑制剂0.1毫升，随即在紫外分光光度计340纳米波长测定。样品测定值计为A1，

空白测定值计为A2，乙醇脱氢酶活性以ΔA计，

         ΔA＝(A1-A2)×100

(二)试验结果见表1

                                                                     表1

人员编号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
											药前ΔA	0.075	0.061	0.134	0.085	0.328	0.078	0.081	0.278	0.420	0.097
药后ΔA	0.184	0.124	0.327	0.078	0.392	0.246	0.173	0.302	0.387	0.134
											酒后ΔA	0.188	0.118	0.286	0.132	0.364	0.301	0.164	0.321	0.452	0.186
人员编号	11	12	13	14	15	16	17	18	19	20
											药前ΔA	0.102	0.091	0.231	0.147	0.087	0.034	0.521	0.082	0.113	0.087
药后ΔA	0.324	0.156	0.242	0.108	0.121	0.214	0.532	0.073	0.212	0.102
											酒后ΔA	0.287	0.167	0.198	0.232	0.132	0.221	0.487	0.124	0.210	0.124
人员编号	21	22	23	24	25	26	27	28	29	30
											药前ΔA	0.094	0.087	0.046	0.321	0.086	0.137	0.184	0.093	0.418	0.206
药后ΔA	0.230	0.470	0.086	0.478	0.102	0.119	0.312	0.154	0.512	0.212
											酒后ΔA	0.254	0.367	0.121	0.386	0.097	0.142	0.412	0.145	0.497	0.286

(三)试验结论：

由以上结果可以看出，80％以上人员服用护肝胶囊后，ΔA值明显增加，数理统计意义显著。酒后较服药后ΔA值变化不显著，上下各有变化。说明人服用护肝胶囊后，确有增加乙醇脱氢酶活性的作用。

试验例2：本发明护肝胶囊对肝细胞的保护作用

试验例2：本发明护肝胶囊对肝细胞的保护作用

(一).试验方法：

选取体重为20±2克的健康昆明种小白鼠40只(雌雄各半)，预养3天后，随机分成四组，每组10只。其中设空白组一组，对照组一组，给药组高、低量组各一组。空白组每日经胃管给水两次，第一次给水半小时后再给水一次，给水量每次0.4毫升；对照组先给水0.4毫升，半小时后再给38°白酒0.3毫升；给药高剂量组先给含护肝胶囊溶液0.4毫升(浓度为6.0毫克/毫升)，半小时后再给38°白酒0.3毫升；给药低剂量组先给含护肝胶囊溶液0.4毫升(浓度为2.0毫克/毫升)，半小时后再给38°白酒0.3毫升。连续14天，脱颈处死，解剖取肝脏，部分做肝细胞匀浆，部分做固定、包埋、切片。

1.肝细胞匀浆制备及涂片、染色：

a.取消毒的平皿，放入少许Hanks液；

b.将采取的小块鼠肝先用PBS漂洗，去除表面的血污，剪去脂肪、纤维、包膜等，切成5毫米左右大小的小块，放入平皿内；

c.用眼科剪将肝小块剪成1毫米左右的碎块；

d.将碎块及Hanks液置于组织研磨匀浆器内，用手缓慢研磨，制成肝细胞匀浆。

e.取少量肝细胞涂片，用基姆萨染色；

f.显微镜下观察，记录试验结果。

2.肝组织固定、包埋与切片、染色：

a.固定：将肝脏切成4毫米左右厚度的小块，用10％中性福尔马林溶液固定24小时，然后用流水冲洗24小时。

b.包埋：将固定的肝小块按下列程序操作，1〕70％乙醇浸泡4小时；2〕80％乙醇浸泡3小时；3〕95％乙醇浸泡3小时；4〕95％乙醇浸泡3小时；5〕95％乙醇浸泡2小时；6〕100％乙醇浸泡2小时；7〕100％乙醇浸泡2小时；8〕二甲苯浸泡20分钟；9〕二甲苯浸泡20分钟；10〕60℃恒温石腊浸泡1小时；11〕60℃恒温石腊浸泡2小时；12〕室温放置待切片。

c.切片；用切片机切片。

d.染色：采用常规染色苏木素-伊红染色法：

1)Harris苏木素配制：将苏木素溶于纯乙醇，明矾溶于加温的双蒸水中，两者混合煮沸，仔细一点点加入氧化汞并充分摇匀，使染料呈深紫色液体；然后很快将其置冰水浴中冷却，保存备用。使用前加入5％冰醋酸。染色时间为5-10分钟。

2〕伊红染液的配制：称取5克伊红Y加500毫升蒸馏水，充分溶解，染色1-3分钟。

3〕染色程序：切片脱腊，入水，蒸馏水洗，染苏木素，自来水洗，含0.25％HCL.的70％乙醇分色，数秒至1分钟，1％氨水返蓝，自来水洗，染伊红，自来水洗，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，封盖。显微镜下观察拍片。得图1～图4所示照片。

(二)试验结果：

如图4所示，肝细胞匀浆涂片对照组可见单个肝细胞或小灶状肝细胞脂变，个别产生大泡状脂变。如图1～3所示，空白组与高、低剂量组均未发现肝细胞脂变现象。肝组织切片对照组可见明显细胞病变，空白组与高、低剂量组均未发现肝细胞病变现象。

(三)试验结论：

对照组经14天连续给酒，肝细胞明显损伤，出现脂变及空洞。而空白组与高、低剂量组均未发现肝细胞脂变现象，说明护肝胶囊具有较强的护肝抗乙醇肝损伤作用。

试验例3：本发明护肝胶囊对小鼠体内乙醇脱氢酶活性的影响

动物对乙醇耐受性，主要取决于肝脏中乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶的含量，通过小鼠服用护肝胶囊后测定小鼠肝内乙醇脱氢酶活性变化，可以考察出本发明护肝胶囊对小鼠体内乙醇脱氢酶活性的影响。

(一)试验方法：

选取体重为20±2克的健康昆明种小白鼠30只(雌雄各半)，预养3天后，随机分成三组，每组10只。其中设对照组一组，给药组高、低量组各一组。对照组先给水0.4毫升，半小时后再给38°白酒0.3毫升；给药高剂量组先给含护肝胶囊溶液0.4毫升(浓度为6.0毫克/毫升)，半小时后再给38°白酒0.3毫升；给药低剂量组先给含护肝胶囊溶液0.4毫升(浓度为2.0毫克/毫升)，半小时后再给38°白酒0.3毫升。各组给酒半小时后脱颈处死，解剖取肝脏，做肝细胞匀浆。

乙醇脱氢酶活性测定：

A.试剂：1〕缓冲液：称取焦磷酸钠16.6克，盐酸联胺4.0克，甘氨酸0.8克，溶解在450毫升蒸馏水中，用2N氢氧化钠调节PH至8.7，然后加蒸馏水500毫升，冰箱保存。

2〕4.5毫魔尔的辅酶I溶液：称取30毫克辅酶I，加蒸馏水至10毫升，冰箱保存。

3〕0.2魔尔乙醇溶液：吸取4.7毫升无水乙醇，加蒸馏水400毫升。

4〕抑制剂：10nM硫脲溶液：称取80毫克硫脲，加蒸馏水至40毫升。

5〕肝匀浆的制备：小鼠断颈处死，迅速解剖，取出肝脏，用蒸馏水冲洗干净。然后定量称取0.5克左右肝脏，剪成糊状，加入1毫升生理盐水，捣匀，将匀浆低温离心，除掉上层液，取中、下层匀浆液稀释备用。

B.操作：取试管若干支，1支作空白管，余下作测定管，各加0.1毫升肝匀浆，再加辅酶I溶液0.1毫升，缓冲液3毫升，摇匀，置37℃水浴中预热5分钟，取出，测定管中加入乙醇溶液0.4毫升，空白管中加入蒸馏水0.4毫升。摇匀，置37℃水浴中作用10分钟，立刻取出各加入抑制剂0.1毫升，随即在紫外分光光度计340nm波长测定。样品测定值计为A1，空白测定值计为A2，乙醇脱氢酶活性以ΔA计，

         ΔA＝(A1-A2)×100

(二)试验结果见表2

                                                           表2

小鼠编号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
											对照ΔA	0.269	0.293	0.292	0.279	0.299	0.258	0.285	0.234	0.210	0.269
小鼠编号	11	12	13	14	15	16	17	18	19	20
											高剂量ΔA	0.320	0.230	0.342	0.383	0.348	0.416	0.346	0.325	0.317	0.292
小鼠编号	21	22	23	24	25	26	27	28	29	30
											低剂量ΔA	0.342	0.247	0.305	0.297	0.316	0.368	0.282	0.352	0.267	0.245

(三)试验结论：

由以上结果可以看出，80％小鼠服用护肝胶囊后，高低剂量组ΔA值明显增加，数理统计意义显著。高剂量组较低剂量组更为明显。说明小鼠服用护肝胶囊后，确有增加肝内乙醇脱氢酶活性的作用。

试验例4：本发明护肝胶囊对小鼠饮酒后肌肉协调性的影响

(一).转棒实验法：

1.实验目的和原理：

该实验用于评价影响动物运动协调性的药物，原理是受试药物诱导的动物运动协调能力的改变可由其停留在转动物体上的能力来判断。

2.实验材料：

仪器：RRC-9750型大小鼠转棒计数仪(沈阳药科大学仪器厂)。

动物：雄性小鼠(KM品系)，体重18～22克。

3.实验方法：

设定转棒计数仪的转速为16周/分钟，首先进行筛选实验，只有能停留在转棒上至少20秒的动物才能用于实验。取筛选合格的小鼠40只，分为四组，分别为空白组，高剂量组，低剂量组，给酒对照组，每组10只，提前16小时禁食待测。

各组分别口服给药，给药方式如下：

空白组每只0.4毫升水；高剂量组每只0.4毫升(6毫克/毫升)的胶囊水溶液，15～30分钟后给酒，每只38°白酒0.2毫升；低剂量组每只0.4毫升(2毫克/毫升)的胶囊水溶液，15～30分钟后给酒，每只38°白酒0.2毫升；给酒对照组每只0.4毫升水，15～30分钟后给酒，每只38°白酒0.2毫升。在给酒5～15分钟后将各组小鼠放于转棒上观察，分别记录各组中超过20秒后从转棒上落下的小鼠数目。

(二).爬杆实验法

1.实验目的与原理：

啮齿类动物肌肉力量或神经肌肉接头功能不仅受镇静剂和肌松剂的影响，而且受毒性物质的影响，该实验利用动物在光滑金属杆上停留的能力来评价服用护肝胶囊后饮酒对动物的肌肉协调性的影响。

2.实验材料：

仪器：表面光滑的金属杆(直径12毫米)

动物：雄性小鼠(KM品系)，体重18～22克

3.实验方法：

先进行筛选实验，将金属杆垂直于地面放置，小鼠会用前肢攀于杆上，正常小鼠能同时用后肢抓住并于10秒内攀住金属杆而不滑落。合乎此标准的动物才能用于实验。正常小鼠给酒后在10秒内无法攀住金属杆或从杆上滑落者即算作抓握能力(运动协调能力)受到损伤。同时观察小鼠在笼子中的行为，只有行为较为正常的小鼠，其抓握反射失调才能被认为是由于给酒引起的。

取合格小鼠40只，分为四组，分别为空白组，高剂量组，低剂量组，给酒对照组，每组10只，提前16小时禁食待测。

给药方式及时间同转棒实验法。

在给酒5～15分钟后将各组小鼠放于金属杆上观察，分别记录各组中能在杆上攀住超过10秒而不滑落的小鼠数目。

(三).实验结果：

各组小鼠测定结果见表3

                               表3

组别	转棒实验法		爬杆实验法
						达到规定时间的个体数(只)	占小鼠总数的百分比	达到规定时间的个体数(只)	占小鼠总数的百分比
空白组	10	100％	10	100％
					高剂量组	10	100％	8	80％
低剂量组	9	90％	6	60％
					给酒对照组	5	50％	0	0％

(四).效果：

1.饮酒后小鼠的肌肉协调能力降低，给酒对照组在转棒和金属杆上攀爬时间达到规定时间的个体数，明显较空白组为低，而给药组小鼠攀爬在转棒和金属杆上达到规定时间的比例高于给酒对照组，说明护肝胶囊有显著增强小鼠饮酒后的肌肉协调性的效果；

2.护肝胶囊的效果与给药剂量有关，高剂量组对小鼠饮酒后的肌肉协调性的增强效果好于低剂量组。

以下通过实施例来进一步阐述本发明药物组合物及其制备方法：

实施例1

本发明护肝胶囊原料组份的重量是：

沙棘粉         32千克

牡蛎粉         42千克

维生素C粉剂    25千克

本发明护肝胶囊的制备过程如下：

(1)沙棘粉的制备：

选取新鲜、良好、完全成熟、呈橙黄色或桔红色的沙棘果，人工去除其中夹杂的枝叶土石块等杂质，用清水清洗干净，洗去其上所粘附的泥沙、虫卵等，清洗干净的沙棘经修整去除其果梗花蒂等，加入3倍重量为60℃的净化水，均匀地送入打浆机进行破碎打浆，打浆机的筛孔孔径应在0.8毫米左右，所得沙棘果浆用螺旋榨汁机进行挤压取汁并将残渣滤去，挤压所得汁液经过滤浓缩后，采用真空低温喷雾干燥法，制成沙棘粉。

(2)牡蛎粉的制备：

取鲜活牡蛎，破壳取全蛎黄在铰肉机中铰碎，过200目筛子，去滤渣取滤液，再过0.2μm滤膜，收集滤液，最后过截止量5000的超滤膜，收集透过液，透过液装冷冻盘中，厚度不超过1厘米，零下10℃，10小时，40℃，3小时；干燥制成干粉待用。

(3)维生素C粉剂：市售的石家庄维尔康粉剂；

(4)半成品制备：

取沙棘粉32千克、牡蛎粉42千克、维生素C25千克装入混料筒内，充分混匀，装袋后钴-60辐照灭菌(5KGY)，干燥保存。

(5)成品制备：

选择1号机灌胶囊外壳，用胶囊灌装机灌装，0.3克/粒，再采用铝塑包装，铝塑包装板与小干燥剂袋同装入塑料袋中，最后加外包装，制成成品。

实施例2

本发明护肝胶囊原料药组份的重量是：

沙棘粉           25千克

牡蛎粉            35千克

维生素C粉剂       20千克

本发明护肝胶囊的制备过程如下：

(1)沙棘粉的制备：

选取新鲜、良好、完全成熟、呈橙黄色或桔红色的沙棘果，人工去除其中夹杂的枝叶土石块等杂质，用清水清洗干净，洗去其上所粘附的泥沙、虫卵等，清洗干净的沙棘经修整去除其果梗花蒂等，加入2倍重量为50℃的净化水，均匀地送入打浆机进行破碎打浆，打浆机的筛孔孔径应在0.6毫米左右，所得沙棘果浆用螺旋榨汁机进行挤压取汁并将残渣滤去，挤压所得汁液经过滤浓缩后，采用真空低温喷雾干燥法，制成沙棘粉。

(2)牡蛎粉的制备：

取鲜活牡蛎，破壳取全蛎黄在铰肉机中铰碎，过100目筛子，去滤渣取滤液，再过0.1μm滤膜，收集滤液，最后过截止量3500的超滤膜，收集透过液，透过液装冷冻盘中，厚度不超过1厘米，零下10℃，10小时，40℃，3小时；干燥制成干粉待用。

(3)维生素C粉剂：市售的石家庄维尔康粉剂；

(4)半成品制备：

取沙棘粉25千克、牡蛎粉35千克、维生素C20千克装入混料筒内，充分混匀，装袋后钴-60辐照灭菌(5KGY)，干燥保存。

(5)成品制备：

选择1号机灌胶囊外壳，用胶囊灌装机灌装，0.3克/粒，再采用铝塑包装，铝塑包装板与小干燥剂袋同装入塑料袋中，最后加外包装，制成成品。

实施例3

本发明护肝胶囊原料药组份的重量是：

沙棘粉            40千克

牡蛎粉            50千克

维生素C粉剂       30千克

本发明护肝胶囊的制备过程如下：

(1)沙棘粉的制备：

选取新鲜、良好、完全成熟、呈橙黄色或桔红色的沙棘果，人工去除其中夹杂的枝叶土石块等杂质，用清水清洗干净，洗去其上所粘附的泥沙、虫卵等，清洗干净的沙棘经修整去除其果梗花蒂等，加入5倍重量为70℃的净化水，均匀地送入打浆机进行破碎打浆，打浆机的筛孔孔径应在1.0毫米左右，所得沙棘果浆用螺旋榨汁机进行挤压取汁并将残渣滤去，挤压所得汁液经过滤浓缩后，采用真空低温喷雾干燥法，制成沙棘粉。

(2)牡蛎粉的制备：

取鲜活牡蛎，破壳取全蛎黄在铰肉机中铰碎，过300目筛子，去滤渣取滤液，再过0.4μm滤膜，收集滤液，最后过截止量6500的超滤膜，收集透过液，透过液装冷冻盘中，厚度不超过1厘米，零下10℃，10小时，40℃，3小时；干燥制成干粉待用。

(3)维生素C粉剂：市售的石家庄维尔康粉剂；

(4)半成品制备：

取沙棘粉40千克、牡蛎粉50千克、维生素C30千克装入混料筒内，充分混匀，装袋后钴-60辐照灭菌(5KGY)，干燥保存。

(5)成品制备：

选择1号机灌胶囊外壳，用胶囊灌装机灌装，0.3克/粒，再采用铝塑包装，铝塑包装板与小干燥剂袋同装入塑料袋中，最后加外包装，制成成品。

Claims (10)

1、一种用于解酒护肝的药物组合物，其特征在于所述药物组合物是由下列重量份的原料药制成：沙棘粉为25-40份、牡蛎粉为35-50份和维生素C为20-30份。

2、根据权利要求1所述的用于解酒护肝的药物组合物，其特征在于：所述沙棘粉为27-38份；所述牡蛎粉为40-45份；所述维生素C为23-28份。

3、根据权利要求1所述的用于解酒护肝的药物组合物，其特征在于：所述沙棘粉为32份；所述牡蛎粉为42份；所述维生素C为25份。

4、一种药物组合物的制备方法，包括下列步骤：

(1)将沙棘果去除杂质，清洗干净，去除其果梗花蒂，加入水，破碎打浆，将所得沙棘果浆挤压取汁并将残渣滤去，所得汁液经过滤浓缩后干燥，制成沙棘粉；

(2)取鲜活牡蛎，破壳取全蛎黄，铰碎，过筛，去滤渣，所得滤液经滤膜过滤，收集滤液，再经超滤膜过滤，收集透过液，冷冻干燥，制成牡蛎粉；

(3)取维生素C；

(4)取上述沙棘粉25-40重量份、牡蛎粉35-50重量份和维生素C 20-30重量份混合，充分混匀，装袋后辐照灭菌，干燥，得药物组合物。

5、根据权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中所述水为净化水，所述净化水的重量为沙棘果的2～5倍；所述净化水的温度为50～70℃。

6、根据权利要求4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中所述水为净化水，所述净化水的重量为沙棘果的3倍；所述净化水的温度为60℃。

7、根据权利要求4～6中任一项所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中所述破碎打浆使用筛孔孔径为0.6～1.0毫米的打浆机；所述步骤(2)所述过筛所用的筛子为100～300目；所述步骤(3)中的维生素C为粉末状。

8、根据权利要求4～6中任一项所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中所用滤膜为0.1～0.5μm的滤膜；所用超滤膜为截止量为3500～6500的超滤膜。

9、根据权利要求8所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中所用滤膜为0.2μm的滤膜；所用超滤膜为截止量为5000的超滤膜。

10、根据权利要求7所述的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中所述破碎打浆使用筛孔孔径为0.8毫米的打浆机；所述步骤(2)中过筛所用的筛子为200目。

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