CN1249745A - 玻连蛋白受体拮抗剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及为整联蛋白受体拮抗剂的部分三环化合物。

Description

玻连蛋白受体拮抗剂
                 本发明领域
本发明涉及抑制玻连蛋白受体的药用活性化合物，并且这些化合物对炎症、癌症和心血管疾病如动脉粥样硬化及血管再狭窄、以及与骨吸收有关的疾病如骨质疏松症的治疗是有用的。
                本发明背景
整联蛋白是细胞粘附受体的超家族，它们是在多种细胞上表达的跨膜糖蛋白。这些细胞表面的粘附受体包括gpIIb/IIIa(纤维蛋白原受体)和αVβ3(玻连蛋白受体)。所述纤维蛋白原受体gpIIb/IIIa在血小板表面表达，并在出血的伤口部位介导血小板聚集和止血凝块的形成(Philips等，Blood，1988年，71，831)。所述玻连蛋白受体αVβ3在许多细胞上表达，包括内皮细胞、平滑肌细胞、破骨细胞和肿瘤细胞，因此，它具有多种功能。在破骨细胞的细胞膜上表达的αVβ3受体介导破骨细胞对骨基质的粘附—一个在骨吸收过程中的关键步骤(Ross等，J.Biol.Chem.，1987年，262，7703)。一个以过度骨吸收为特征的疾病是骨质疏松症。在人动脉平滑肌细胞上表达的αVβ3受体介导它们迁移进入新内膜—一种在经皮冠状血管成形术后能够导致血管再狭窄的过程(Brown等，Cardivoascular Res.，1994年，28，1815)。此外，Brooks等在Cell 1994年第79卷1157页中已经揭示αVβ3拮抗剂能够通过诱导血管生成的细胞程序性死亡来促进肿瘤消退。因此，封闭玻连蛋白受体的药物在治疗如骨质疏松症、血管再狭窄和癌症的疾病中是有用的。
已知玻连蛋白受体涉及三种不同的整联蛋白，表示为αVβ1、αVβ3和αVβ5(Horton等，Int.J.Exp.Pathol.，1990年，71，741)。αVβ1结合纤连蛋白和玻连蛋白。αVβ3结合多种不同的配体，包括纤维蛋白、纤维蛋白原、层粘连蛋白、血小板反应蛋白、玻连蛋白、冯·维勒布兰德氏因子、骨桥蛋白和骨涎蛋白I。αVβ5结合玻连蛋白。已揭示玻连蛋白受体αVβ5参与各种细胞的细胞附着，包括微血管内皮细胞(Davis等，J.Cell.Biol.，1993年，51，206)，并且已证实其在血管生成中的作用(Brooks等，Science，1994年，264，569)。该整联蛋白在人伤口肉芽组织中的血管上表达，但是在正常皮肤血管上不表达。
已知玻连蛋白受体结合到含有Arg-Gly-Asp(或RGD)序列的三肽骨基质蛋白上。因此，Horton等在Exp.Cell Res.1991年第195卷368页中公开了含有RGD的肽和抗玻连蛋白受体的抗体(23C6)抑制由破骨细胞引起的牙本质吸收和细胞扩散。此外，Sato等在J.Cell Biol.1990年第111卷1713页中公开了含有RGD序列的一种蛇毒肽锯鳞血抑肽在组织培养中是有效的骨吸收抑制剂，并且抑制破骨细胞对骨的附着。
现已发现某些化合物是所述αVβ3和αVβ5受体的有效抑制剂。具体地讲，已发现与纤维蛋白原受体相比，这些化合物则是玻连蛋白受体更有效的抑制剂。
                   本发明概述
本发明包含在下文中所描述的化合物，它们对玻连蛋白受体具有抑制的药理学活性，并且在炎症、癌症和心血管疾病如动脉粥样硬化及血管再狭窄、以及与骨吸收有关的疾病如骨质疏松症的治疗中是有用的。
本发明也是一种包含在下文中所描述的化合物和药用载体的药用组合物。
本发明也是一种治疗由玻连蛋白受体介导的疾病的方法。具体地说，本发明的化合物对治疗动脉粥样硬化、血管再狭窄、炎症、癌症以及与骨吸收有关的疾病如骨质疏松症是有用的。
                   本发明详述
本发明包含新的化合物，与纤维蛋白原受体相比，这些化合物是玻连蛋白受体更有效的抑制剂。所述新的化合物包含一个二苯并环庚烯核心，其中含氮的取代基存在于二苯并环庚烯的一个六元芳环上，并且含有酸性部分的脂族取代基存在于二苯并环庚烯的七元环上。我们认为二苯并环庚烯环系统定向在六和七元环上的取代基侧链以便它们可以与玻连蛋白受体很好地相互作用。优选在二苯并环庚烯的七元环的脂族取代基上的酸性基团与二苯并环庚烯的一个六元芳环上的含氮的取代基的氮之间存在约12到14个经由最短的分子内路径形成的间插共价键。
本发明的特殊化合物是下列化合物或其药学上可接受的盐：(±)-10，11-二氢-3-[3-(4-氨基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸；(±)-10，11-二氢-3-[2-[6-(乙氨基)-2-吡啶基]-1-乙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸；和(±)-10，11-二氢-3-[3-(4-甲基-2-吡啶氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸。
当本发明的化合物可能具有一个或多个手性中心时，除非指定，否则本发明包括可通过常规方法合成和拆分的每个单独的非外消旋化合物。
本发明也包括本发明的所述化合物的前体药。前体药被认为是在体内释放活性母体药物(本发明的化合物)的任何共价结合的载体。
本发明的所述化合物抑制玻连蛋白和其它含RGD的肽与玻连蛋白受体的结合。在破骨细胞上的玻连蛋白受体的抑制抑制了破骨细胞的骨吸收，并且在病理上与骨吸收有关的疾病如骨质疏松症和骨性关节炎的治疗中是有用的。
在另一方面，本发明是刺激骨形成的一种方法，它包含给予引起骨钙释放增加的化合物。在矿化骨质不足或需要骨重塑形的疾病状态如骨折愈合和骨折的预防中，增加骨的生成是明显有益的。导致骨结构丢失的疾病和代谢紊乱也得益于这种治疗。例如，甲状旁腺功能亢进、佩吉特病、恶性高钙血症、骨转移瘤引起的溶骨损害、由于固定术或性激素缺乏而引起的骨丢失、Behcet’s病、骨软化、骨肥厚和骨硬化病，均能从给予本发明的化合物中得益。
此外，由于本发明的化合物在许多不同类型的细胞上抑制玻连蛋白受体，因而所述化合物在炎性疾病如类风湿性关节炎和牛皮癣、以及心血管疾病如动脉粥样硬化和血管再狭窄的治疗中是有用的。本发明的化合物对其它疾病包括(但不限于)血栓栓塞性疾病、哮喘、过敏、成人呼吸窘迫综合征、移植物抗宿主疾病、器官移植排异反应、脓毒性休克、湿疹、接触性皮炎、炎性肠疾病和其它自身免疫性疾病的治疗或预防是有用的。本发明的化合物对伤口愈合也可能有用。
本发明的化合物对血管生成疾病的治疗(包括预防)也是有用的。用于此处的术语血管生成疾病包括涉及异常的新血管形成的疾病。在新血管的生长是有关疾病的病理学原因或促进病理改变的情况下，血管生成的抑制将减少疾病的有害作用。这种疾病最终发展的一个实例是糖尿病性视网膜病。在需要新血管的生长来支持有害组织生长的情况下，血管生成的抑制将减少对该组织的血供，因而有助于减小以血供需要为基础的组织肿块。实例包括为了肿瘤生长和实体瘤转移的建立而不断需要新血管形成的肿瘤生长。因此，本发明的化合物抑制肿瘤组织血管生成，因而阻止肿瘤转移和肿瘤生长。
因此，按照本发明的方法，使用本发明的化合物抑制血管生成能改善疾病的症状，并且在某些情况下能治愈该疾病。
本发明化合物的另一治疗目标是以新血管形成为特征的眼部疾病。该眼部疾病包括角膜的新血管疾病如角膜移植、疱疹性角膜炎、梅毒性角膜炎、翼状胬肉和与接触式镜片的使用有关的新血管角膜翳。其它的眼部疾病也包括与年龄有关的斑点退化、假性(presumed)眼组织胞浆菌病、未熟儿视网膜病和新生血管性青光眼。
本发明进一步提供一种抑制肿瘤生长的方法，它包含逐步给予或以物理方式结合给予本发明的化合物和抗肿瘤药物，如托泊替堪和顺铂。
本发明也提供制备式(I)化合物的方法：
Figure A9880298300101
该方法包括使式(II)化合物还原：
Figure A9880298300102
本发明的另一方面是制备式(II)化合物的方法：
Figure A9880298300103
该方法包括使式(III)化合物环化：
Figure A9880298300111
本发明进一步提供了式(IV)、(V)、(VI)和(II)的新中间体：
Figure A9880298300112
此处使用的C1-6烷基包括甲基、乙基、正-丙基、异丙基、正-丁基、异丁基、叔-丁基、戊基、正-戊基、异戊基、新戊基和己基以及其单一脂族异构体。
某些试剂在此处缩写。DCC表示二环己基碳二亚胺，DMAP表示二甲氨基吡啶，DIEA表示二异丙基乙胺，EDC表示N-乙基-N’(二甲氨基丙基)-碳二亚胺，HOBt表示1-羟基苯并三唑，THF表示四氢呋喃，DME表示二甲基甲酰胺，NBS表示N-溴代-琥珀酰亚胺，Pd/C表示钯炭催化剂，DPPA表示二苯基磷酰基叠氮化物，BOP表示苯并三唑-1-基氧基-三(二甲氨基)六氟代磷酸磷鎓，HF表示氢氟酸，PPA表示多磷酸，TEA表示三乙胺，TFA表示三氟乙酸，PCC表示氯铬酸吡啶鎓。
通过Bondinell等在1997年1月16日公开的PCT公布号WO97/01540(国际专利申请号PCT/US96/11108)中所描述的方法制备本发明的化合物，其全部公开内容通过引用结合到本文中。
此外，通过与此后详述的流程中所描述的那些方法的类似方法制备本发明的化合物。
               流程1a)Tf2O，2，6-二甲基吡啶，CH2Cl2；b)烯丙基三丁基锡，LiCl，(Ph3P)2PdCl2，DMF；c)RuCl3，H5IO6，CCl4，CH3CN，H2O；d)PPA；e)EtOAc/LiHMDS，THF；f)H2，10％Pd/C，浓HCl，AcOH；g)EtSH，AlCl3，CH2Cl2；h)Tf2O，2，6-二甲基吡啶，CH2Cl2；i)CO，Pd(OAc)2，KOAc，dppf，DMSO。
在合适的碱存在下，通过与三氟甲磺酸酐(Tf2O)反应，将2-苄基-4-甲氧基苯酚(J.Am.Chem.Soc.1949年，71，64)转化为相应的三氟甲磺酸酯—流程1的化合物2(如1-2)，
在惰性溶剂(通常为CH2Cl2)中，于合适的碱(例如，2，6-二甲基吡啶)存在的条件下，通过与三氟甲磺酸酐(Tf2O)反应，将2-苄基-4-甲氧基苯酚(J.Am.Chem.Soc.1949年，71，64)转化为相应的三氟甲磺酸酯—流程1的化合物2(如1-2)。按照Tilley(J.Org.Chem.1990年，55，906)描述的方法，在惰性溶剂(如DMF)中，于LiCl和钯催化剂[例如，双(三苯基膦)氯化钯(II)((Ph3P)2PdCl2)]存在下，将1-2与烯丙基三丁基锡反应，得到1-3。在合适的水性溶剂(如，丙酮水溶液或乙酸水溶液)中，通过与合适的氧化剂(通常为KMnO4)反应来完成流程1的3中的烯烃的氧化裂解，直接得到羧酸1-4。然而，优选按照Sharpless(J.Org.Chem.1981年，46，3936；J.Org.Chem.1985年，50，1560，脚注4)的通用方法进行1-3中的烯烃的氧化裂解，直接得到羧酸1-4，其中在CCl4、CH3CN和H2O的溶剂混合物中通过RuCl3或RuO2与NaIO4或H5IO6的反应在位产生RuO4。或者氧化作用可以两种处理进行，在第一阶段中将有关烯烃氧化裂解为相应的醛，这可通过本领域技术人员熟知的方法完成，随后通过Pinnick(Tetrahedron1981年，37，2091)或Dalcanale和Montanari(J.Org.Chem.1986年，51，567)所描述的方法，使用例如NaClO2来完成醛到羧酸的氧化。按照由Proctor、Renfrew和Savage(J.Chem.Soc.(C)1969年，1000)所描述的方法，使用多磷酸来完成1-4到1-5的环化作用。或者经由相应的1-4的酰氯(它能通过本领域技术人员熟知的方法制备)将1-4转化为1-5。在惰性溶剂(如CH2Cl2或CS2)中，用合适的Friedel-Cratts催化剂(如AlCl3或SnCl4)处理该酰氯，获得环酮1-5。在1-5与乙酸乙酯的烯醇化物[其能由乙酸乙酯暴露于合适的酰胺碱(例如，二异丙基氨化锂(LDA)或双(三甲基硅烷基)氨化锂(LiHMDS))产生]的醛醇-型缩合反应中反应得列1-6。通常，选择THF用作醛醇缩合反应的溶剂，尽管在各种添加剂(例如，HMPA或TMEDA)存在下常常使用THF。在无机酸(如HCl)存在下，于合适的溶剂(如乙酸)中，通过用合适的催化剂催化氢解(例如在活性炭上的钯金属(Pd/C))来完成1-6到1-7的还原作用。或者由Orphanopoulos和Smonu(Synth.Commun.1988年，833)的通用方法，在三氟化硼醚合物存在下，通过用三乙基硅烷处理1-6来完成该还原作用。1-7的甲基醚的脱去得到1-8能在惰性溶剂(例如CH2Cl2)中用BBr3完成，或在惰性溶剂(优选CH2Cl2)中通过与乙硫醇和AlCl3反应完成。在Greene的“有机合成中的保护基团”(由John Wiley和Sons出版)中描述了用于甲基醚脱去的其它有用的方法。按照Cacchi和Lupi(Tet.Lett.1992年，33，3939)所描述的通用方法，在合适的溶剂(优选DMSO)中，于乙酸钾、1，1’-双(二苯膦基)二茂铁(dppf)和钯催化剂[例如，乙酸钯(Pd(OAc)2)]存在下，通过使按先前描述的1-1到1-2转化的方法制备1-8的三氟甲磺酸酯1-9与一氧化碳反应，得到1-10。
流程2说明了可用于形成醚键的碳-氧键形成偶合的方法。
                     流程2a)2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，DEAD，(Ph)3P，DMF；b)环己烯，10％Pd/C，2-丙醇；c)1.0N NaOH，EtOH，然后酸化。
在Mitsunobu-型偶合反应(有机反应1992年，42，335-656；合成1981年，1-28)中，使流程2的化合物1(2-1)与2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物反应得到2-2。该反应通过偶氮二羧酸二乙酯和三苯基膦之间形成的配合物介导，并且在非质子传递溶剂(例如THF、CH2Cl2或DMF)中进行。在惰性溶剂(例如，甲醇、乙醇或2-丙醇)中，于转移氢化作用的条件下使用钯催化剂(优选在活性炭上的钯金属)，将2-2的吡啶-N-氧化物部分还原为相应的吡啶2-3。在该类型反应中，通常将环己烯、14-环己二烯、甲酸和甲酸的盐(如，甲酸钾或甲酸铵)用作氢转移剂。按照流程1中所描述的方法皂化2-3的乙基酯获得2-4。
如以下流程3和4中所示，完成此前描述的用于制备某些中间体化合物的另外的方法。
                       流程3
Figure A9880298300171
a)10％Pd/C，HOAc；b)SOCl2，甲苯；c)AlCl3，CH2Cl2
流程3概括了制备流程1式5(1-5)化合物的另外的方法。按照该流程，在合适的温度(如25℃)、合适的溶剂(如冰乙酸)中，于钯催化剂(如10％Pd/C)存在下，在合适压力(如50psi)的氢气环境中氢化3-1(J.Med.Chem.1981年，24，998)，得到3-2。在合适的温度(如85℃)、合适的溶剂(如苯)中，于适当的氯化剂(如亚硫酰氯)存在下，通过首先将3-2转化为相应的酰氯来完成3-2到3-3的环化作用。在合适的温度(如25℃)、合适的溶剂(如CH2Cl2)中，用合适的Friedel-Crafts催化剂(如AlCl3)处理该酰氯，得到6-3。
                   流程4
Figure A9880298300181
a)LiN(TMS)2，溴乙酸乙酯；b)Jones试剂，OsO4；c)H2，10％Pd/C，HOAC；d)C2O2Cl2，DMF；e)AlCl3，CH2Cl2，RT；f)H2，10％Pd/C，HOAC
流程4概括了制备流程1式7(1-7)化合物的另外的方法。按照该流程，在合适的温度(如-78℃)、合适的溶剂(如THF)中，于合适的碱(如LiN(TMS)2)存在下，使4-1(J.Med.Chem.1981年，24，998)与溴乙酸乙酯反应，得到4-2。在合适的温度(如25℃)、合适的溶剂(如丙酮)中，于合适的氧化剂混合物(如OsO4/Jones试剂)存在下氧化裂解4-2，得到4-3(J.Org.Chem.1993年，58，4745)。在合适的温度(如25℃)、合适的溶剂(如冰乙酸)中，于钯催化剂(如10％Pd/C)存在下，在合适压力(如50psi)的氢气环境中进一步氢化4-3，得到4-4。在合适的温度(如25℃)、合适的溶剂(如CH2Cl2)中，于催化量的添加剂(如DMF)、合适的氯化剂(如草酰氯)存在下，通过首先将4-4转化为相应的酰氯来完成4-4到4-5的环化作用。在合适的温度(如25℃)、合适的溶剂(如CH2Cl2)中，用合适的Friedel-Crafts催化剂(如AlCl3)处理该酰氯，得到4-5。在合适的温度(如25℃)、合适的溶剂(如冰乙酸)中，于钯催化剂(如10％Pd/C)存在下，在合适压力(如50psi)的氢气环境中进一步氢化4-5，得到4-6。
以标准方法，在合适的溶剂中，用母体化合物和过量的酸(如，盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸或甲磺酸)制备所述化合物的酸加成盐。部分化合物形成可接受的内盐或两性离子。通过用含有合适的阳离子的过量的碱性试剂(如氢氧化物、碳酸盐或醇盐)，或者用合适的有机胺处理母体化合物来制备阳离子盐。阳离子如Li+、Na+、K+、Ca++、Mg++和NH4 +是在药学上可接受的盐中存在的阳离子的具体实例。
本发明也提供了一种药用组合物，它包括此处所描述的化合物和药学上可接受的载体。因此，本发明的化合物可在药物的生产中使用。根据此前描述的方法制备的本发明化合物的药用组合物可以制成胃肠外给药的溶液或冻干粉剂。粉剂可以通过在用前加入合适的稀释剂或其它药学上可接受的载体复制。液体制剂可以是缓冲、等张的水溶液。合适的稀释剂的实例是等张生理盐水、标准的5％葡萄糖水溶液或缓冲的乙酸钠或铵溶液。该制剂特别适合胃肠外给予，但是也可用于口服给予或装于计量的吸入器或喷雾器中吸入给予。可能需要加入赋形剂，如聚乙烯吡咯烷酮、明胶、羟基纤维素、阿拉伯胶、聚乙二醇、甘露醇、氯化钠或枸橼酸钠。
或者可以将这些化合物制成胶囊、片剂或制成乳剂或糖浆用于口服。可加入药学上可接受的固体或液体载体来增强或稳定该组合物，或使该组合物的制备变的容易。固体载体包括淀粉、乳糖、硫酸钙二水合物、石膏粉、硬脂酸镁或硬脂酸、滑石粉、果胶、阿拉伯胶、琼脂或明胶。液体载体包括糖浆、花生油、橄榄油、盐水和水。载体也包括缓释物质，如甘油基单硬脂酸酯或甘油基双硬脂酸酯，单独使用或与蜡一起使用。固体载体的用量各异，但是优选为每剂量单位在大约20mg到约1g之间。按照制药常规技术进行药用制剂的制备，其中包括用于片剂形式的磨粉、混合、制粒以及需要时的压片；或者用于硬明胶胶囊形式的磨粉、混合和填充。当使用液体载体时，将以糖浆、酏剂、乳剂或水性或非水性混悬剂的形式制备。这种液体制剂可直接口服给予或填充入软明胶胶囊中。
用于直肠给药时，也可将本发明的化合物与赋形剂如可可脂、甘油、明胶或聚乙二醇混合并铸成栓剂形式，。
此处描述的化合物是玻连蛋白受体拮抗剂，并且可用于治疗其基本病理归因于与玻连蛋白受体相互作用的配体或细胞的疾病。例如，这些化合物对由骨基质的丢失造成病理改变的疾病的治疗是有用的。因此，这些化合物对骨质疏松症、甲状旁腺功能亢进、佩吉特病、恶性高钙血症、骨转移瘤引起的溶骨损害、由于固定术或性激素缺乏而引起的骨丢失的治疗是有用的。也认为本发明的化合物具有抗肿瘤、抗血管生成、抗炎和抗肿瘤转移药的效用，并且在动脉粥样硬化和血管再狭窄的治疗中是有用的。
所述化合物以足够抑制骨吸收或其它适应症的药物浓度方式口服或胃肠外给予患者。含有所述化合物的药用组合物用符合患者疾病的方式以大约0.1到大约50mg/kg的口服剂量给予。优选的口服剂量为大约0.5到大约20mg/kg。对于急性治疗，优选胃肠外给药。尽管肌内大剂量注射也有用，但是在5％葡萄糖水溶液或生理盐水中的肽的静脉内输注，或合适的赋形剂的类似制剂是最有效的。胃肠外给药剂量通常为大约0.01到大约100mg/kg；优选0.1和20mg/kg之间。所述化合物每日给予1至4次，以达到大约0.4到大约400mg/kg/天的总日剂量水平。通过比较药物的血液水平和具有治疗效果所需的浓度，本领域技术人员能容易地决定给予所述化合物的精确量和方法。
本发明进一步提供治疗骨质疏松症或抑制骨丢失的方法，它包含逐步给予或以物理结合的方式给予本发明的化合物和其它骨吸收抑制剂[如，二膦酸酯(即，allendronate)]、激素替代治疗、抗雌激素或降钙素。此外，本发明还提供了使用本发明的化合物和合成代谢药(如，骨形态发生蛋白、异丙氧黄酮(iproflavone))用于预防骨丢失和/或增加骨形成的治疗方法。
另外，本发明提供了一种抑制肿瘤生长的方法，它包含逐步给予或以物理结合的方式给予本发明的化合物和抗肿瘤药。喜树碱类化合物(如托泊替堪、irinotecan和9-氨基喜树碱)和铂配合物(如顺铂、ormaplatin和tetraplatin)是熟知的抗肿瘤药。在美国专利号5,004,758、4,604,463、4,473,692、4,545,880、4,342,776、4,513,138、4,399,276，欧洲专利申请公开号0 418 099和0 088 642，Wani等J.Med.Chem.(1986年，29，2358)，Wani等J.Med.Chem.(1980年，23，554)，Wani等J.Med.Chem.(1987年，30，1774)和Nitta等Proc.14th InternationalCongr.Chemotherapy.(1985年，Anticancer Section 1，28)(其全部公开内容通过引用结合到本文中)中描述了喜树碱类化合物，铂配位配合物顺铂，可得自Bristol Myers-Squibb公司的Platinol注册名下。在美国专利号5,562,925和4,310,515中(其全部公开内容通过引用结合到本文中)描述了顺铂的有用制剂，
在抑制肿瘤生长的方法(它包含逐步给予或以物理结合的方式给予本发明的化合物和抗肿瘤药物)中，所述铂配位化合物(如顺铂)能够以缓慢静脉输注的方式给予。优选的载体是含有甘露醇的葡萄糖/盐水溶液。所述铂配位化合物的剂量方案可以以治疗的每个疗程每平方米体表面积大约1到大约500mg(mg/m2)为基础。所述铂配位化合物的输注可以每周给予1到2次，并且每周的治疗可以重复几次。胃肠外给药使用喜树碱类化合物，通常采用的疗程为每天每平方米体表面积大约1.0到大约300.0mg连续应用大约5天。最优选托泊替堪使用的疗程为每天每平方米体表面积大约1.0到大约2.0mg连续应用大约5天。优选该疗程在大约7天到大约28天间期至少重复一次。
可以在相同的容器中用本发明的所述化合物和抗肿瘤药物两者配制药用组合物，但是优选在不同的容器中配制。当两种药物是以溶液形式提供时，能将它们装于一个输注/注射系统中同时给予，或者一前一后给予。
为了在相同或不同的时间方便地给予本发明的所述化合物和抗肿瘤药物，可制备一个药盒，该药盒包括在单个容器(如盒子、卡纸盒或其它容器)中包含各个药瓶、药袋、管制瓶或其它容器，每个装有如上所述的胃肠外给予的有效剂量的本发明的所述化合物，和如上所述的胃肠外给予的有效剂量的抗肿瘤药物。这种药盒可以包含例如，在分开的容器或同一容器中的两种药物，可任选地如冻干的物质(plugs)，和用于复制溶液的容器。其变化包括在单个容器的两个腔中的用于复制的溶液和冻干的物质，其在使用前可以混合。以这种安排，抗肿瘤药物和本发明的化合物可以分开包装，如在两个容器中，或者一起冻干成粉剂并装在单个容器中。
当两种药物是以溶液形式提供时，可以将它们装于一个输注/注射系统中同时给予或者一前一后安排给予。例如，本发明的化合物可以是静脉注射的形式，或者在输液袋中经管道与第二个输液袋中的抗肿瘤药物连接。利用这一系统，患者可以首先接受本发明化合物的最初的大剂量注射或输注，随后接受抗肿瘤药物的输注。
所述化合物可用几种生物学测定方法的一种来测试，以决定具有给定的药理学作用所需化合物的浓度。玻连蛋白结合的抑制
固相[3H]-SK&F-107260与αVβ3的结合：将缓冲液T(含2mM氯化钙和1％辛基葡糖苷)中的人胎盘或人血小板αVβ3(0.1-0.3mg/ml)用含1mM氯化钙、1mM氯化锰、1mM氯化镁(缓冲液A)和0.05％叠氮钠的缓冲液T稀释，然后立即以每孔0.1ml加入96孔ELISA板(Corning，New York，NY)。每孔加入0.1-0.2μg αVβ3。4℃下孵育该板过夜。实验中，用缓冲液A洗涤各孔一次，并在室温下用含有3.5％牛血清白蛋白的同一缓冲液0.1ml孵育1小时。孵育后，将各孔完全吸干，并用0.2mlA缓冲液A洗涤两次。
将化合物溶于100％DMSO中，得到2mM的储备液，该储备液用结合缓冲液(15mM Tris-HCl(pH7.4)，100mM氯化钠、1mM氯化钙、1mM氯化锰、1mM氯化镁)稀释成化合物的终浓度为100μM，然后将该溶液稀释至所需的化合物终浓度。按每孔三个复孔，将不同浓度的、未标记的拮抗剂(0.001-100μM)加入到各孔中，随后加入5.0nM的[3H]-SK&F-107260(65-86Ci/mmol)。
室温下将这些板孵育1小时，孵育后将各孔完全吸干，并用0.2ml冰冷的缓冲液A逐孔洗涤一次。将所述受体溶于0.1ml的1％SDS中，加入3ml Ready Safe在Beckman LS液闪计数仪上通过液闪计数测定[3H]-SK&F-107260的结合，有效率为40％。在2μM SK&F-107260的存在下测定[3H]-SK&F-107260的非特异性结合，并应一致低于放射性配体总输入的1％。通过非线性、最小平方曲线拟合程序(修改自LUNDON-2程序)测定IC50(即拮抗剂抑制50％[3H]-SK&F-107260结合的浓度)。根据方程式Ki＝IC50/(1+L/Kd)计算Ki(拮抗剂的解离常数)，其中L和Kd分别是[3H]-SK&F-107260的浓度和解离常数。
用本领域评价对骨形成的抑制的标准测定方法，如EP 528 587所公开的凹窝形成试验(pit formation assay)(也可以用人破骨细胞代替大鼠破骨细胞进行)，和Wronski(Cells and Materials.1991，Sup.1，69-74)等描述的大鼠卵巢切除术模型，对本发明的化合物进行体外和体内骨吸收测试。血管平滑肌细胞迁移试验
采用大鼠或人主动脉平滑肌细胞，在Transwell细胞培养小室中，用孔径8μm(Costar)的聚碳酸酯膜监测细胞迁移。将滤膜下表面用玻连蛋白包被。将细胞悬浮于含0.2％牛血清白蛋白的DMEM中，细胞浓度为2.5-5.0×106细胞/ml，并在20℃下，用不同浓度的受试化合物中预处理20分钟。单独应用溶剂做对照。将0.2ml细胞悬浮液加入到培养小室的上层分隔室(compartment)。下层分隔室含有0.6ml含0.2％牛血清白蛋白的DMEM。在37℃、95％空气、5％CO2下孵育24小时。孵育后，通过轻柔地刮除除去滤膜上表面的非迁移性细胞。然后将滤膜在甲醇中固定，并用10％姬姆萨染色液染色。可通过下述方法测定迁移：a)计数已迁移至滤膜下表面的细胞数；或b)用10％乙酸萃取染色细胞，然后测定600nm处的吸收值。甲状腺、甲状旁腺切除后大鼠模型
每一实验包括5-6个成年雄性Sprague-Dawley大鼠(体重250-400g)。用前7天对这些大鼠进行甲状腺、甲状旁腺切除术(通过TaconicFarms卖方)。所有大鼠每三天接受一次甲状腺素替代剂量。将接受治疗的大鼠通过尾静脉穿刺，采血到肝素化的试管中，立即对全血进行循环钙离子水平的测定。选取经Ciba-Corning 634型钙pH分析仪测定的钙离子水平＜1.2mM/L的大鼠。分别将静脉插管和动脉导管固定于每只大鼠身上，以便于输送受试物质和采集血样。然后给大鼠喂饲无钙食物和去离子水。测定其基础钙水平后，通过用外部的注射泵经静脉导管持续静脉输注的方式，给予每只大鼠对照溶媒或人甲状旁腺激素1-34肽(hPTH1-34，溶于含0.1％牛血清白蛋白、Bachem、Ca的盐水中，剂量为1.25μg/kg/小时)或hPTH1-34和受试物质的混合物。在输注的6-8小时内，每隔2小时，测定每只大鼠的钙反应。人破骨细胞吸收和粘附测定
采用从破骨细胞瘤组织衍生的正常人破骨细胞，将凹窝吸收和粘附测定进一步发展，并使之标准化。将测定1发展为通过激光共焦显微术测定破骨细胞凹窝体积。将测定2发展为如同一个高通量筛选仪(higher throughput screen)，其中可通过竞争性ELISA测定在吸收过程中释放的胶原片段。测定1(采用激光共焦显微术)●将等份的人破骨细胞瘤衍生物细胞悬浮液从液氮贮存中取出，37℃下快速温融，用RPMI-1640培养基离心洗涤一次(4℃，1000rpm，5分钟)。●吸出培养基，以鼠抗-HLA-DR抗体代替，并以1∶3比例用RPMI-1640培养基稀释。将悬浮液置于冰上孵育30分钟，并频繁混匀。●随后用冷RPMI-1640离心洗涤细胞两次(4℃，1000rpm，5分钟)，然后将细胞移至无菌的15ml离心管中。在改良Neubauer计数室中计数单核细胞数。●将包被有山羊抗-鼠IgG(Dynal，Great Neck，NY)的足量磁珠(5个/单核细胞)从其贮存瓶中取出，置于5ml新鲜培养基中(洗去毒性的叠氮化合物防腐剂)。将磁珠固定于磁铁上除去培养基而代之以新鲜培养基。●将磁珠与细胞混合，将悬浮液置冰上孵育30分钟。频繁混匀该悬浮液。●将磁珠包被的细胞固定于磁铁上，而将残余细胞(富含破骨细胞部分)倾到无菌的50ml离心管中。●将新鲜培养基加入到磁珠包被的细胞中，除去任何捕获的破骨细胞。将该洗涤过程重复10次。弃去磁珠包被的细胞。●用荧光素二乙酸盐标记活细胞，在计数小室中计数存活破骨细胞。用大孔径、一次性的塑料巴斯德吸管将样品加入到小室中。●通过离心沉淀破骨细胞，并用含10％胎牛血清和1.7g/L碳酸氢钠的EMEM培养基调节到合适数量的浓度(肿瘤之间的破骨细胞数量各异)。●将3ml等份的细胞悬浮液(每个化合物处理)倾到15ml离心管中。离心沉淀细胞。●向每管中加入3ml适当化合物处理物(用EMEM培养基稀释到50μM)。同时包括适当的溶媒对照、阳性对照(稀释到100μg/ml的抗玻连蛋白受体的鼠单克隆抗体[87MEM1])和同型对照(稀释到100μg/ml的IgG2a)。37℃下，将样品孵育30分钟。●将0.5ml等份的细胞接种到位于48孔培养板中的无菌牙质切片上，37℃下孵育2小时。一式四份筛选每个处理。●用温PBS交替洗涤切片6次(在6孔板中，每孔10ml)，然后将之置于含有化合物处理样品或对照样品的新鲜培养基中。37℃下孵育样品48小时。抗酒石酸盐的酸性磷酸酶(TRAP)方法(破骨细胞结合细胞的选择性染色)●用磷酸盐缓冲盐水洗涤含附着破骨细胞的骨切片，并用2％戊二醛(gluteraldehyde)(在0.2M二甲胂酸钠中)固定5分钟。●然后用水洗涤这些切片，并于37℃下，在TRAP缓冲液(溶于N，N-二甲基甲酰胺并与含有10mM酒石酸钠的0.25M的枸橼酸盐缓冲液(pH4.5)的混合的0.5mg/ml萘酚AS-BI磷酸盐)中孵育4分钟。●将用冰水洗涤后的切片浸没于含1mg/ml坚牢红石榴石的冷乙酸盐缓冲液(0.1M，pH6.2)中，并于4℃孵育4分钟。●吸出多余缓冲液，用水洗涤之后，风干该切片。●通过明视场显微术计数TRAP阳性破骨细胞(砖红/紫色沉淀)，然后通过超声处理将其从牙质表面除去。●用Nikon/Lasertec ILM21W共焦显微镜测定凹窝体积。测定2(应用ELISA示值读数)
如测定1中开始9步所述，富集并制备人破骨细胞用于化合物筛选。为清楚起见，下面将这些步骤重复一遍。●将等份的人破骨细胞瘤衍生细胞悬浮液从液氮贮存中取出，37℃下快速温融，用RPMI-1640培养基离心洗涤一次(4℃，1000rpm，5分钟)。●吸出培养基，以鼠抗-HLA-DR抗体代替，然后以1∶3比例用RPMI-1640培养基稀释。将悬浮液置于冰上孵育30分钟，并频繁混匀。●用冷RPMI-1640离心洗涤细胞两次，随后离心(4℃，1000rpm，5分钟)，然后将细胞移至无菌的15ml离心管中。在改良Neubauer计数室中计数单核细胞数。●将包被有山羊抗-鼠IgG(Dynal，Great Neck，NY)的足量磁珠(5个/单核细胞)从其贮存瓶中取出，置于5ml新鲜培养基中(洗去有毒的叠氮化合物防腐剂)。将磁珠固定于磁铁上，除去培养基而代之以新鲜培养基。●将磁珠与细胞混合，将悬浮液置冰上孵育30分钟。其间频繁混匀该悬浮液。●将磁珠包被的细胞固定于磁铁上，而将残余细胞(富含破骨细胞部分)倾到无菌的50ml离心管中。●将新鲜培养基加入到磁珠包被的细胞中，除去任何捕获的破骨细胞。将该洗涤过程重复10次。弃去磁珠包被的细胞。●用荧光素二乙酸盐标记活细胞，在计数小室中计数存活破骨细胞。用大孔径、一次性的塑料巴斯德吸管将样品加入到小室中。●通过离心沉淀破骨细胞，并用含10％胎牛血清和1.7g/L碳酸氢钠的EMEM培养基调节到合适数量的浓度(肿瘤之间的破骨细胞数量各异)。
与上面测定1所述方法不同，以4个剂量筛选所述化合物，以获取IC50值，概括如下：●在37℃下，将破骨细胞制备物与受试化合物(4个剂量)或对照物一起预孵育30分钟。●然后将其接种于48孔组织培养板孔中的牛皮质骨切片上，并在37℃进一步孵育2小时。●用温磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤所述骨切片6次，除去非粘附细胞，然后将其重新置于含新鲜化合物或对照物的48孔板的各孔中。●然后在37℃下，将该组织培养板孵育48小时。●将每孔中的上清液吸到各独立的管中，然后用竞争性ELISA筛选，该方法可检测吸收过程中释放的I型胶原的c-端肽。可自市售获得含有与8个氨基酸序列(Glu-Lys-Ala-His-Asp-Gly-Gly-Arg)特异性反应的兔抗体的ELISA(Osteometer，丹麦)，上述序列位于I型胶原al-链羧基端的端肽。结果以与溶媒对照比较的吸收抑制％表示。人破骨细胞粘附测定
如测定1中开始9步所述方法，富集并制备人破骨细胞用于化合物筛选。为清楚起见，下面将这些步骤重复一遍。●将等份的人破骨细胞瘤衍生细胞悬浮液从液氮贮存中取出，37℃下快速温融，用RPMI-1640培养基离心洗涤一次(4℃，1000rpm，5分钟)。●吸出培养基，以鼠抗-HLA-DR抗体代替，然后以1∶3比例用RPMI-1640培养基稀释。将悬浮液置于冰上孵育30分钟，并频繁混匀下。●用冷RPMI-1640离心洗涤细胞两次，随后离心(4℃，1000rpm，5分钟)，然后将细胞移至无菌的15ml离心管中。在改良Neubauer计数室中计数单核细胞数。●将包被有山羊抗-鼠IgG(Dynal，Great Neck，NY)的足量磁珠(5个/单核细胞)从其贮存瓶中取出，置于5ml新鲜培养基中(洗去有毒的叠氮化合物防腐剂)。将磁珠固定于磁铁上，除去培养基而代之以新鲜培养基。●将磁珠与细胞混合，将悬浮液置冰上孵育30分钟。其间频繁混匀该悬浮液。●将磁珠包被的细胞固定于磁铁上，而将残余细胞(富含破骨细胞部分)倾到无菌的50m1离心管中。●将新鲜培养基加入到磁珠包被的细胞中，除去任何捕获的破骨细胞。将该洗涤过程重复10次。弃去磁珠包被的细胞。●用荧光素二乙酸盐标记活细胞，在计数小室中计数存活破骨细胞，用大孔径、一次性的塑料巴斯德吸管将样品加入到小室中。●通过离心沉淀破骨细胞，并用含10％胎牛血清和1.7g/L碳酸氢钠的EMEM调节到合适数量的浓度(肿瘤之间的破骨细胞数量各异)。●将破骨细胞瘤衍生的破骨细胞与化合物(4个剂量)或对照物一起于37℃预孵育30分钟。●然后将细胞接种于包被骨桥蛋白的切片(人或大鼠骨桥蛋白，2.5μg/ml)上，并在37℃孵育2小时。●用磷酸盐缓冲盐水强力洗涤切片以除去非粘附细胞，用丙酮固定存留在切片上的细胞。●用该类型细胞的选择性标记-抗酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)染色破骨细胞(参见步骤15-17)，通过光学显微镜术计数细胞。结果以与溶媒对照比较的粘附抑制％表示。细胞粘附测定细胞和细胞培养
人胚肾细胞(HEK293细胞)获自ATCC(目录号CRL.1573)。使细胞在含有Earl’s盐、10％胎牛血清、1％谷氨酰胺和1％青霉素-链霉素的Earl’s极限必需培养基(EMEM)中生长。构建和转染
将αV亚单位的EcoRI-KpnI片段(3.2kb)和β3亚单位的XbaI-XhoI片段(2.4kb)插入到pCDN载体的EcoRI-EcoRV的克隆位点上(Aiyar等，1994)，pCDN载体含有CMV启动子和平端连接的G418选择性标记。为稳定表达，用Gene Pulser(Hensley等，1994)将αV+β3构建物(每一亚单位20μgDNA)电转染到80×106HEK293细胞中，并接种到100mm的平板上(每板5×105细胞)。48小时后，将生长培养基中补充入450μg/ml的基因菌素(G418 Sulfate，GIBCO-BRL，Bethesda，MD)。将细胞一直维持于选择性培养基中，直至克隆长大到足以用于测定。转染细胞的免疫细胞化学分析
为检测HEK293转染细胞是否表达玻连蛋白受体，通过离心将细胞包被在显微镜玻璃切片上，室温下用丙酮固定2分钟并风干。用标准的间接免疫荧光法测定其与23C6的特异反应性，23C6是αVβ3配合物的特异性单克隆抗体。细胞粘附研究
在4℃下，将Corning 96孔ELISA板用0.1ml人玻连蛋白(在RPMI培养基中，0.2μg/ml)预包被过夜。实验中，用RPMI培养基洗涤这些板一次，并在室温下用含3.5％BSA的RPMI培养基封闭1小时。将转染的293细胞重悬于含20mM，pH 7.4的Hepes和0.1％BSA的RPMI培养基中，浓度为0.5×106细胞/毫升。在不同αVβ3拮抗剂存在或不存在下，将每孔加入0.1ml细胞悬浮液，并于37℃孵育1小时。孵育之后，加入0.025ml 10％甲醛溶液(pH7.4)，室温下将细胞固定10分钟。用0.2ml RPMI培养基洗涤该板3次，并在室温下，用0.1ml 0.5％甲苯胺蓝将粘附细胞染色20分钟。用去离子水充分洗涤以除去多余的染液。通过加入0.1ml含50mM HCl的50％乙醇，洗脱掺入细胞中的甲苯胺蓝。在微量测定板读板仪(Titertek MultiskanMC，Sterling，VA)上，于600nm处测定光密度对细胞粘附进行定量。固相αVβ5结合试验
从人胎盘中纯化玻连蛋白受体αVβ5。用50mM Tris-HCl(pH7.5)、100mM氯化钠、1mM氯化钙、1mM氯化锰、1mM氯化镁(缓冲液A)稀释受体制备物，并立即将其以每孔0.1ml加入到96孔ELISA板中。每孔加入0.1-0.2μg的αVβ3。4℃下孵育该板过夜。实验中，用缓冲液A洗涤各孔一次，并在室温下与0.1ml含3.5％牛血清白蛋白的同一缓冲液一起孵育1小时。孵育之后，将各孔完全吸干，并用0.2ml缓冲液A洗涤两次。
在[3H]-SK&F-107260竞争性测定中，向各孔加入不同浓度的未标记的拮抗剂(0.001-100μM)，随后加入5.0nM的[3H]-SK&F-107260。室温下孵育该板1小时。孵育之后，将各孔完全吸干，并用0.2ml冰冷的缓冲液A逐孔洗涤一次。用0.1ml的1％SDS溶解受体，加入3ml Ready Safe在Beckman LS 6800型液闪计数仪上通过液闪计数测定结合的[3H]-SK&F-107260，有效率为40％。在2μMSK&F-107260的存在下测定[3H]-SK&F-107260的非特异性结合，并应一致低于放射性配体总输入的1％。通过非线性、最小平方曲线拟合程序(修改自LUNDON-2程序)测定IC50(即拮抗剂抑制50％[3H]-SK&F-107260结合的浓度)。根据Cheng和Prusoff方程式：Ki＝IC50/(1+L/Kd)计算Ki(拮抗剂的解离常数)，其中L和Kd分别是[3H]-SK&F-107260的浓度和解离常数。
        RGD介导的GPIIb-IIIa结合的抑制GPIIb-IIIa的纯化
4℃下，通过在3％辛基葡糖苷、20mM Tris-HCl，pH 7.4，140mM氯化钠、2mM氯化钙中轻柔搅拌，使10个单位过期的、洗涤过的人血小板(获自红十字会)裂解2小时。离心该裂解物10,000g，1小时。将收获的上清液加到5ml晶状体凝集素琼脂糖4B柱(E.Y.Labs)上，将该柱用20mM Tris-HCl，pH7.4，100mM氯化钠、2mM氯化钙、1％辛基葡糖苷(缓冲液A)预平衡。经2小时孵育后，用50ml冷的缓冲液A洗涤该柱。用含有10％葡聚糖的缓冲液A洗脱凝集素保留的GPIIb-IIIa。所有过程均在4℃进行。经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳显示，所获GPIIb-IIIa的纯度＞95％。脂质体中GPIIb-IIIa的掺入
在氮气流下，将磷脂酰丝氨酸(70％)和磷脂酰胆碱(30％)(AvantiPolar Lipids)的混合物干燥在玻璃管壁上。将纯化的GPIIb-IIIa稀释至终浓度为0.5mg/ml，并以蛋白∶磷脂为1∶3(W∶W)的比例与磷脂混匀。将该混合物重新混悬并在浴超声仪中超声处理5分钟，用分子量12000-14000的截流透析管，将该混合物对超出1000倍量的50mM Tris-HCl，pH7.4，100mM氯化钠、2mM氯化钙透析过夜(换液2次)。将含有少量脂质体的GPIIb-IIIa离心，12000g，15分钟，用透析缓冲液重新悬浮使蛋白终浓度约为1mg/ml。将脂质体冻存于-70℃待用。对GPIIb-IIIa的竞争性结合
通过间接竞争结合方法，用[3H]-SK&F-107260作为RGD型配体测定对纤维蛋白原受体(GPIIb-IIIa)的结合。用0.22μm亲水的durapore膜在96孔过滤板装置(Millipore Corporation，Bedford，MA)上进行结合测定。室温下，将每孔用10μg/ml的聚赖氨酸(SigmaChemical Co.，St.Louis，MO)0.2ml预包被1小时以封闭非特异性结合。按每孔四个复孔向各孔中加入不同浓度、未标记的苯基氮杂。在每孔中加入终浓度为4.5nM的[3H]-SK&F-107260后，加入纯化的含GPIIb-IIIa的血小板脂质体1μg。将该混合物在室温下孵育1小时，通过用Millipore多功能过滤装置过滤，从未结合的物质中分离结合GPIIb-IIIa的[3H]-SK&F-107260，随后用冰冷的缓冲液洗涤(两次，每次0.2ml)。在Beckman液闪计数仪(Model LS6800)上用1.5mlReady Solve(Beckman Instruments，Fullerton，CA)计数留在滤膜上的结合物的放射性活性，有效率为40％。在2μM未标记的SK&F-107260的存在下，测定非特异性结合，并应一致低于加至样品总放射活性的0.14％。所有数据点都是四个复孔测定的平均值。
用非线性、最小平方拟合曲线程序分析竞争性结合的数据。该方法可提供拮抗剂的IC50(拮抗剂在平衡时抑制50％[3H]-SK&F-107260特异性结合的浓度)。所述IC50涉及拮抗剂的平衡解离常数(Ki)，该常数以Cheng和Prusoff方程式：Ki＝IC50/(1+L/Kd)为基础，其中L是用于竞争性结合测定的[3H]-SK&F-107260的浓度(4.5nM)，Kd是[3H]-SK&F-107260的解离常数，其浓度如同按Scatchard分析法所测定的，为4.5nM。
本发明的优选化合物对玻连蛋白受体的亲和性与对纤维蛋白原受体的亲和性大于10∶1。最优选的化合物的活性比大于100∶1。
用几种移植的小鼠肿瘤模型可测定本发明的化合物单独或与抗肿瘤剂合用时的效能。这些模型的细节可参见美国专利号5,004,758和5,633,016。
下面的实施例并不用于限制本发明的范围，而是用以说明如何制备和应用本发明的化合物。对于本领域的技术人员而言其它的实施方案是显而易见的。
                         实施例
概论
分别用Bruker AM 250或Bruker AC 400分光计于250或400MHz记录核磁共振光谱。CDCL3为氘氯仿，DMSO-d6为六氘二甲基亚砜，以及CD3OD为四氘甲醇。以由内标四甲基硅烷向低场移动的百万份数(δ)报告化学位移。下述为NMR数据的缩写：s＝单峰，d＝双峰，t＝三峰，q＝四峰，m＝多峰，dd＝双二峰，dt＝双三峰，app＝明显的，br＝宽峰。J代表以Hertz表示的测定的NMR偶合常数。在Perkin-Elmer 683红外分光计上记录红外(IR)光谱的连续波谱，在Nicolet Impact 400D红外分光计上记录傅里叶转换红外(FTIR)光谱。以透射方式记录IR和FTIR光谱，并以波数倒数(cm-1)报告带的位置。用快速原子轰击(FAB)或电喷雾(ES)离子化技术，在VG 70 FE，PE SyxAPIIII，或VGZAB HF仪器上测定质谱。用Perkin-Elmer 240C元素分析仪进行元素分析。在Thomas-Hoover熔点仪上进行熔点的测定，并且未加以校正。所有温度以摄式度数报告。
用Analtech Silica Gel GF和E.Merck Silica Gel 60F-254薄层板进行薄层层析。快速层析和重力层析均在E.Merck Kieselgel 60(230-400目)硅胶上进行。分析和制备性HPLC在Rainin或Beckman层析仪上进行。ODS代表十八烷基硅烷基硅胶层析载体。5μ Apex-ODS代表十八烷基硅烷基硅胶层析载体，该载体粒子大小为5μ，由JonesChromatography，Littleton，Colorado制造。YMC ODS-AQ是ODS层析载体，是YMC CO.Ltd.，Kyoto，日本的注册商标。PRP-1是聚合的(苯乙烯-二乙烯苯)层析载体，是Hamilton Co.，Reno，Nevada的注册商标。Celite是由酸洗的硅藻土组成的助滤剂，是Manville Corp.，Denver，Colorado的注册商标。
                           制备1(±)-10，11-二氢-3-羧基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯的制备a)3-苄基-4-(三氟甲磺酰氧基)茴香醚
在-78℃、氢气下用3分钟将三氟甲磺酸酐(10.0ml，60ml)加入到2-苄基-4-甲氧基苯酚(10.71g，50mmol；按照J.Am.Chem.Soc.1949，71，64制备)和无水2，6-二甲基吡啶(12.0ml，100mmol)的无水CH2Cl2(250ml)溶液中。在-78℃搅拌该反应物0.5小时，然后温热至室温。1小时后，该反应物用己烷(250ml)稀释并用1.0N HCl(2×100ml)、1.0N NaOH(2×50ml)、H2O(100ml)和盐水(50ml)顺序洗涤。干燥(Na2SO4)、浓缩和硅胶层析(10％EtOAc/己烷)获得为浅黄色固体的标题化合物(16.65g，96％)：TLC Rf0.51(10％EtOAc/己烷)；1HNMR(250MHz，CDCl3)δ7.10-7.40(m，6H)，6.77(dd，J＝9.0，3.1Hz，1H)，6.66(d，J＝3.1Hz，1H)，4.03(s，2H)，3.73(s，3H)；FTIR(CCl4)1492，1423，1405，1249，1216，1161，1144，1039，869cm-1；MS(ES)m/e 369(M+Na)+，364.0(M+NH4)+，347.0(M+H)+。b)4-烯丙基-3-苄基茴香醚
在高度真空中，将圆底烧瓶中的LiCl(3.08g，72.8mmol)火焰干燥，并且在氩气下使该系统冷却至室温。加入3-苄基-4-(三氟甲磺酰氧基)茴香醚(21.0g，60.6mmol)、双(三苯膦)氯化钯(II)(2.13g，3.0mmol)、无水DMF(150ml)和烯丙基三丁基锡(22.6ml，72.8mmol)，通过三次抽空/氩气通入循环，将氩气通入该混合物。在预设置的95℃的油浴中加热该混合物，获得黄色、均匀的溶液。1.5小时后，在旋转蒸发仪上(高度真空)浓缩深色混合物，并且残余物从二甲苯中再浓缩。所得残余物溶解于Et2O(120ml)中并与10％KF(120ml)一起剧烈搅拌0.5小时。分离各层，并用Et2O(2×120ml)萃取含水层。通过celite过滤合并的有机物以除去不溶的固体，该滤液用H2O(60ml)和盐水(60ml)顺序洗涤。干燥(MgSO4)并浓缩得到浑浊的、黄色油状物。层析(硅胶，5％EtOAc/己烷)获得浅黄色油状的所述标题化合物(14.21g，98％)：TLC Rf(5％EtOAc/己烷)0.51；1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.03-7.31(m，6H)，6.74(dd，J＝8.3，2.7Hz，1H)，6.66(d，J＝2.7Hz，1H)，5.79-5.98(m，1H)，4.89-5.07(m，2H)，3.97(s，2H)，3.75(s，3H)，3.21-3.33(m，2H)；FTIR(CCl4)1610，1496，1256，1046，914cm-1；MS(ES)m/e 239.2(M+H)+。c)2-苄基-4-甲氧苯基乙酸
将H5IO6(23.83g，104.5mmol)的H2O(56ml)溶液加入到4-烯丙基-3-苄基茴香醚(5.30g，22.24mmol)的CCl4(28ml)和CH3CN(28ml)溶液中，再将充分搅拌的混合物完全冷却到0℃。加入RuCl3(231mg，1.11mmol)，并在0℃剧烈搅拌该反应物4小时，然后在室温搅拌45分钟。通过celite过滤该混合物，滤饼用CH2Cl2(120ml)然后用H2O(120ml)洗涤。分离各层，并用CH2Cl2(3×120ml)萃取含水层。干燥(Na2SO4)并浓缩得到棕色油状物。将其在Et2O(90ml)和0.25NNaOH(90ml)之间分配，分离各层。用0.25N NaOH(2×10ml)萃取Et2O层，并且用浓HCl酸化(pH2)合并的含水层。CH2Cl2萃取、干燥(Na2SO4)并浓缩，获得黄色油状的所述标题化合物，其固化成黄色固体(4.19g，74％)：1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.05-7.35(m，6H)，6.77(dd，J＝8.3，2.7Hz，1H)，6.71(d，J＝2.7Hz，1H)，4.00(s，2H)，3.76(s，3H)，3.54(s，2H)；FTIR(CCl4)2300-3500(宽峰)，1710，1611，1502，1496，1285，1257，1045cm-1；MS(ES)m/e 279.0(M+Na)+，274.0(M+NH4)+，257.0(M+H)+。d)3-甲氧基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10(11H)-酮
在100-110℃将细粉状的2-苄基-4-甲氧苯基乙酸(3.26g，12.72mmol)加入到充分搅拌的多磷酸(165g)中。15分钟后，将该反应物倒在冰(330g)上。加入Et2O(330ml)，并剧烈搅拌该混合物15分钟。分离各层，并用Et2O(330ml)萃取含水层。合并的有机层用5％NaHCO3(2×80ml)然后用盐水(80ml)洗涤，干燥(MgSO4)和浓缩。残余物从甲苯再浓缩，然后层析(硅胶，20％EtOAc/己烷)。获得为黄色固体的所述标题化合物(1.44g，48％)：TLC Rf(20％EtOAc/己烷)0.46；1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.07-8.15(m，1H)，7.39-7.49(m，1H)，7.25-7.48(m，2H)，7.19(d，J＝8.3Hz，1H)，6.86(d，J＝2.6Hz，1H)，6.71(dd，J＝8.3，2.6Hz，1H)，4.21(s，2H)，4.11(s，2H)，3.77(s，3H)；FTIR(CCl4)1680，1501，1282，1270cm-1；MS(ES)m/e 261(M+Na)+，256.0(M+NH4)+，239.0(M+H)+。e)(±)-10，11-二氢-10-羟基-3-甲氧基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
在-78℃、氩气下，将无水EtOAc(0.58ml，6.6mmol)滴加到火焰干燥烧瓶中的双(三甲基硅烷基)氨化锂(在THF中1.0M，6ml，6mmol)的无水THF(24ml)溶液中。将该黄色溶液在-78℃搅拌0.5小时，然后用3分钟滴加3-甲氧基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10(11H)-酮(715mg，3mmol)的无水THF(3ml)溶液。再用无水THF(0.4ml)进行转移。在-78℃0.5小时以后，将该反应物用饱和NH4Cl(15ml)骤冷，温热至室温，并用EtOAc(2×30ml)萃取。干燥(MgSO4)、浓缩和层析(硅胶，10％EtOAc/己烷(400ml)，然后20％EtOAc/己烷)得到为黄色固体的回收3-甲氧基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10(11H)-酮(305.4mg，43％)，随后是浅黄色油状物的所述标题化合物(531.9mg，54％)：TLC Rf0.37(20％EtOAc/己烷)；1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.63(d，J＝7.7Hz，1H)，7.00-7.30(m，4H)，6.80(d，J＝2.6Hz，1H)，6.69(dd，J＝8.2，2.6Hz，1H)，3.95-4.35(m，2H)，4.07(s，2H)，3.76(s，3H)，3.68(s，1H)，3.64(d，J＝14.2Hz，1H)，3.35(d，J＝14.2Hz，1H)，2.79(d，J＝16.0Hz，1H)，2.66(d，J＝16.0Hz，1H)，1.22(t，J＝7.2Hz，3H)；FTIR(CCl4)3580(尖峰)，3509(宽峰)，1735，1715，1503，1261，1198，1156，1044cm-1；MS(ES)m/e 675.2(2M+Na)+，653.2(2M+H)+。f)(±)-10，11-二氢-3-甲氧基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
将10％Pd/C(242mg，0.23mmol)加入到(±)-10，11-二氢-10-羟基-3-甲氧基-5H-二苯并[a，d]环庚烯基-10-乙酸乙酯(741.1mg，2.27mmol)和浓HCl(0.19ml，2.27mmol)的冰AcOH(23ml)中，并且在室温H2(50psi)下该混合物在Parr装置上振摇。6小时后，将该反应物通过celite过滤，并且滤饼用EtOAc洗涤。将滤液浓缩，残余物由甲苯再浓缩。所得微黄色油状残余物层析(硅胶，20％EtOAc/己烷)，获得无色油状的所述标题化合物(643.6mg，91％)：TLC Rf0.57(20％EtOAc/己烷)；1HNMR(250MHz，CDCl3)δ 7.05-7.22(m，4H)，7.01(d，J＝8.2Hz，1H)，6.76(d，J＝2.7Hz，1H)，6.67(dd，J＝8.2，2.7Hz，1H)，4.30(d，J＝15.0Hz，1H)，4.11-4.25(m，2H)，3.85(d，J＝15.0Hz，1H)，3.70-3.90(m，1H)，3.77(s，3H)，3.31(dd，J＝15.0，4.1Hz，1H)，2.93(dd，J＝15.0，9.2Hz，1H)，2.64(dd，J＝15.6，5.0Hz，1H)，2.52(dd，J＝15.6，9.3Hz，1H)，1.27(t，J＝7.1Hz，3H)；FTIR(CCl4)1734，1611，1504，1285，1263，1155，1044cm-1；MS(ES)m/e 333.0(M+Na)+，328.0(M+NH4)+，311.0(M+H)+，265.0(M+H-EtOH)+。g)(±)-10，11-二氢-3-羟基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
在0℃、氩气下将无水AlCl3(1.38g，10.35mmol)一次性加入到(±)-10，11-二氢-3-甲氧基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯(643.6mg，2.07mmol)的无水CH2Cl2(21ml)溶液中。将该黄色溶液温热至室温并搅拌3小时，然后冷却至0℃并用冷的3N HCl(10ml)骤冷。分离各层，并用CH2Cl2萃取含水层。将合并的有机层干燥(MgSO4)和浓缩。硅胶层析(25％EtOAc/己烷)获得几乎无色的油状的所述标题化合物(611.7mg，100％)：TLC Rf0.26(20％EtOAc/己烷)；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.03-7.22(m，4H)，6.93(d，J＝8.1Hz，1H)，6.69(d，J＝2.6Hz，1H)，6.58(dd，J＝8.1，2.6Hz，1H)，5.00(s，1H)，4.25(d，J＝14.9Hz，1H)，4.11-4.25(m，2H)，3.73-3.88(m，1H)，3.79(d，J＝14.9 Hz，1H)，3.28(dd，J＝15.0，4.1Hz，1H)，2.91(dd，J＝15.0，9.3Hz，1H)，2.65(dd，J＝15.6，4.9Hz，1H)，2.53(dd，J＝15.6，9.5Hz，1H)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H)；FTIR(CCl4)3611(尖峰)，3447(宽峰)，1734，1504，1291，1272，1176，1152cm-1；MS(ES)m/e 314.2(M+NH4)+，297.2(M+H)+。h)(±)-10，11-二氢-3-(三氟甲烷磺酰氧基)-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
在-78℃、氩气下，将三氟甲磺酸酐(0.45ml，2.68mmol)滴加到(±)-10，11-二氢-3-羟基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯(611.7mg，2.06mmol)和2，6-二甲基吡啶(0.48ml，4.12mmol)的无水CH2Cl2(10.3ml)中。0.5小时后，将该反应物温热至室温并搅拌1小时。该黄色溶液用Et2O(50ml)稀释并用1.0N HCl(5ml)、5％NaHCO3(5ml)和盐水(5ml)顺序洗涤。干燥(MgSO4)、浓缩和硅胶层析(20％EtOAc/己烷)获得无色油状的所述标题化合物(808.9mg，92％)：TLC Rf(20％EtOAc/己烷)0.58；1H NMR(250MHz，CDCl3)δ6.98-7.30(m，7H)，4.35(d，J＝15.2Hz，1H)，4.19(q，J＝7.1Hz，2H)，3.91(d，J＝15.2Hz，1H)，3.78-3.95(m，1H)，3.37(dd，J＝15.2，4.1Hz，1H)，3.02(dd，J＝15.2，9.6Hz，1H)，2.70(dd，J＝15.8，4.8Hz，1H)，2.53(dd，J＝15.8，9.6Hz，1H)，1.27(t，J＝7.1Hz，3H)；FTIR(CCl4)1735，1493，1427，1250，1215，1144，961，856cm-1；MS(ES)m/e 451.1(M+Na)+，446.2(M+NH4)+，429.2(M+H)+。i)(±)-10，11-二氢-3-羧基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
用一氧化碳(三次抽空/CO冲洗循环，随后吹入CO通过该混合物5分钟)清洗(±)-10，11-二氢-3-(三氟甲烷磺酰氧基)-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯(808.9mg，1.89mmol)、KOAc(742mg，7.56mmol)、Pd(OAc)2(21.2mg，0.095mmol)、1，1’-双(二苯膦基)二茂铁(210mg，0.38mmol)和无水DMSO(11ml)的混合物，然后在设置于70℃的油浴中在CO的环境下搅拌。3.5小时后，该反应物用H2O(11ml)稀释，冷却至0℃并用1.0N HCl(约8ml)酸化。CH2Cl2萃取(3×30ml)、干燥(Na2SO4)、浓缩并且由甲苯再浓缩得到红橙色液体(2-3ml)。层析(硅胶，3∶2∶0.1 EtOAc/甲苯/AcOH；混合部分再用1∶1∶0.1 EtOAc/甲苯/AcOH)获得粘滞的黄色油状的所述标题化合物(581.9mg，95％)，其在40℃高度真空中部分结晶：TLC Rf(3∶2∶0.1 EtOAc/甲苯/AcOH)0.60；1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.95(d，J＝1.5Hz，1H)，7.87(dd，J＝7.8，1.5Hz，1H)，7.00-7.35(m，5H)，4.40(d，J＝15.2Hz，1H)，4.19(q，J＝7.1Hz，2H)，3.97(d，J＝15.2Hz，1H)，3.82-4.00(m，1H)，3.43(dd，J＝15.3，4.0Hz，1H)，3.07(dd，J＝15.3，9.5Hz，1H)，2.69(dd，J＝15.8，4.8Hz，1H)，2.53(dd，J＝15.8，9.5Hz，1H)，1.28(t，J＝7.1Hz，3H)；FTIR(CCl4)2357-3378(宽峰)，1735，1692，1280cm-1；MS(ES)m/e 342.2(M+NH4)+，325.2(M+H)+，307.2(M+H-H2O)+。
                             制备22-羧基-10，11-二氢-5H-二苯并[a，d]环庚烯基-10-乙酸乙酯的制备a)2-苯甲酰基-5-甲氧苯基乙酸甲酯
如在J.Chem.Soc.，Perkin Trans 1，1991，171中所描述的，用苯甲酰氯和氯化铝处理3-甲氧基-苯基乙酸甲酯，获得所述标题化合物。b)2-苄基-5-甲氧苯基乙酸甲酯
按照Synthesis 1978，763的通用方法，在二氯甲烷中用硼氢化钠和三氟乙酸处理制备2(a)的化合物，获得所述标题化合物。c)2-苄基-5-甲氧苯基乙酸
用氢氧化钠水溶液和甲醇处理制备2(b)的化合物并搅拌。将该混合物浓缩并用稀盐酸处理，获得所述标题化合物。d)5，11-二氢-2-甲氧基-10H-二苯并[a，d]环庚烯-10-酮
按照美国专利号3,567,730的通用方法，将制备2(c)的化合物加入到搅拌并加热至80℃的磷酸和五氧化二磷混合物中，获得所述标题化合物。e)5，11-二氢-2-羟基-10H-二苯并[a，d]环庚烯-10-酮
按照Tetrahedron.Letters 1978，5211的通用方法，用乙硫醇和氯化铝处理制备2(d)的化合物，获得所述标题化合物。f)5，11-二氢-2-(三氟甲烷磺酰基)氧基-10H-二苯并[a，d]环庚烯-10-酮
按照J.Chem.Soc.，Chem.Commun.1987，904的通用方法，用三氟甲磺酸酐处理制备2(e)的化合物，获得所述标题化合物。g)5，11-二氢-2-甲氧羰基-10H-二苯并[a，d]环庚烯-10-酮
按照J.Chem.Soc.，Chem.Commun.1987，904的通用方法，在二甲基亚砜中用一氧化碳、甲醇、乙酸钯和1，3-双(二苯膦基)propare处理制备2(f)的化合物，获得所述标题化合物。h)5，11-二氢-2-羧基-10H-二苯并[a，d]环庚烯-10-酮
将制备2(g)的化合物与稀氢氧化钠水溶液一起搅拌。用稀盐酸处理该混合物获得所述标题化合物。i)5，11-二氢-2-叔-丁氧羰基-10H-二苯并[a，d]环庚烯-10-酮
按照Synthesis 1983，2，135的通用方法，用N，N-二甲基甲酰胺缩二-叔-丁醇(di-tert-bulyl acetal)处理制备2(h)的化合物，获得所述标题化合物。j)2-叔-丁氧羰基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
按照Org.Reactions 1947，1，1和J.Am.Chem.Soc.1938，60，2947的通用方法，用锌粉和溴乙酸乙酯处理制备2(i)的化合物，获得所述标题化合物。k)2-羧基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
在二氯甲烷中用三氟乙酸处理制备2(j)的化合物并搅拌。浓缩该混合物获得所述标题化合物。
                         制备32-[(2-氨基乙基)氨基]吡啶二盐酸盐的制备a)单-Boc-1，2-乙二胺
在0℃、氩气下，用30分钟将二-碳酸二叔丁酯(10.91g，50mmol)的CH2Cl2(50ml)溶液滴加到剧烈搅拌的1，2-乙二胺(33ml，500mmol)的CH2Cl2(250ml)溶液中。在加液期间沉淀分离。当加液完成时，将该反应物温热至室温，搅拌1小时，并在旋转蒸发仪上浓缩。将残余物溶解于H2O(100ml)中并过滤除去少量不溶的物质。滤液用CH2Cl3(3×100ml)萃取，并将合并的有机物干燥(MgSO4)和浓缩，获得为浑浊液体的所述标题化合物(6.00g，75％)：1H NMR(250，CDCl3)δ4.75-5.00(m，1H)，3.05-3.25(m，2H)，2.65-2.85(m，2H)，1.46(s，9H)，1.12(br s，2H)。b)2-[[2-(Boc-氨基)乙基]氨基]吡啶-N-氧化物
在回流下加热单-Boc-1，2-乙二胺(5.83g，36.39mmol)、2-氯代吡啶-N-氧化物盐酸盐(7.25g，43.67mmol)、NaHCO3(15.29g，182mmol)和叔-戊醇(36ml)的混合物。47小时后，冷却该深褐色混合物，用CH2Cl2(100ml)稀释，并抽滤除去不溶的物质。将滤液浓缩并由甲苯中再浓缩。硅胶层析(10％MeOH/CHCl3)获得为黄色固体的不纯的标题化合物(8.23g，89％)，其不用进一步纯化即可使用：TLC(10％MeOH/CHCl3)Rf0.42；1H NMR(250，CDCl3)δ8.16(dd，J＝6.5，1.3Hz，1H)，7.05-7.30(m，2H)，6.68(br d，J＝8.6Hz，1H)，6.50-6.65(m，1H)，5.70-5.95(m，1H)，3.25-3.60(m，4H)，1.44(s，9H)；MS(ES)m/e 254(M+H)+。c)2-[[2-(Boc-氨基)乙基]氨基]吡啶
将10％Pd/C(106.4mg，0.10mmol)加入到2-[[2-(Boc-氨基)乙基]氨基]吡啶-N-氧化物(126.7mg，0.5mmol)和环己烯(0.25ml，0.25mmol)的无水EtOH(5ml)溶液中，并将该混合物加热至回流。16小时后，将该反应物通过celite过滤并浓缩滤液。该残余物与得自另外制备(0.5mmol规模)的残余物合并，并将该合并物质通过硅胶层析(5％MeOH/CHCl3)纯化。获得黄色油状的所述标题化合物(148.4mg，63％在1mmol 2-[[2-(Boc-氨基)乙基]氨基]吡啶-N-氧化物的基础上)：TLC(5％MeOH/CHCl3)Rf0.43；1H NMR(400，CDCl3)δ8.05-8.12(m，1H)，7.37-7.46(m，1H)，6.53-6.61(m，1H)，6.41(d，J＝8.3Hz，1H)，5.12(br s，1H)，4.86(br s，1H)，3.26-3.51(m，4H)，1.44(s，9H)；MS(ES)m/e 238(M+H)+。d)2-[(2-氨基乙基)氨基]吡啶二盐酸盐
在0℃将二噁烷中的4N HCl(3.2ml)流加到2-[[2-(Boc-氨基)乙基]氨基]吡啶(148.4mg，0.63mmol)的无水CH2Cl2(3.2ml)溶液中，然后将该反应物温热至室温。2小时后，将该混合物抽滤收集沉淀的固体，将其用无水Et2O洗涤并干燥，获得黄色固体的所述标题化合物(132.8mg，定量的)：1H NMR(400，CD3OD)δ7.99-8.07(m，1H)，7.92-7.98(m，1H)，7.19(d，J＝9.1Hz，1H)，6.98-7.04(m，1H)，3.76(t，J＝6.2Hz，2H)，3.27(t，J＝6.2Hz，2H，部分被残余溶剂信号混淆)；MS(ES)m/e 138(M+H)+。
                          制备42-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物的制备a)2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物
将2-氯代吡啶-N-氧化物(16.6g，0.1mol)、3-氨基-1-丙醇(15.3ml，0.2mol)、NaHCO3(42g，0.5mol)和叔-戊醇(100ml)的混合物加热至回流。21小时后，冷却该反应物，用CH2Cl2(300ml)稀释，并且抽滤除去不溶的物质。浓缩该滤液并由甲苯再浓缩，得到黄色油状物。硅胶层析(20％MeOH/CHCl3)获得为黄色固体的所述标题化合物(15.62g，93％)：TLC(20％MeOH/CHCl3)Rf0.48；1H NMR(250，CDCl3)δ8.07(dd，J＝6.6，1.2Hz，1H)，7.34(br t，1H)，7.10-7.30(m，1H)，6.64(dd，J＝8.5，1.4Hz，1H)，6.40-6.60(m，1H)，4.49(br s，1H)，3.65-3.90(m，2H)，3.35-3.60(m，2H)，1.75-2.00(m，2H)；MS(ES)m/e 169(M+H)+。
                         制备52-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物的制备a)2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-硝基吡啶-N-氧化物
按照制备12的方法，但是用2-氯代-4-硝基吡啶-N-氧化物(见Jain，P.C.；Chatterjee，S.K.；Anand，N.Indian Journal of Chemistry 1966，403)替代2-氯代吡啶-N-氧化物盐酸盐，制备为橙色固体的所述标题化合物：MS(ES)m/e 214.2(M+H)+。
                          制备62-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-甲基吡啶-N-氧化物的制备a)2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-甲基吡啶-N-氧化物
按照制备12的方法，但是用2-氯代-4-甲基吡啶-N-氧化物(见Brown，E.V.J.Amer.Chem.Soc.1957，79，3565)替代2-氯代吡啶-N-氧化物盐酸盐，制备为灰白色固体的所述标题化合物：MS(ES)m/e 183(M+H)+。
                          制备72-(乙氨基)-6-吡啶基乙醇的制备a)2-(N-Boc-氨基)-6-甲基吡啶
在0℃向搅拌的2-氨基-6-甲基吡啶(4.33g，40mmol)、Et3N(6.2ml，40mmol)和CH2Cl2(50ml)的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(9.6g，44mmol)。在室温搅拌过夜后，真空浓缩该反应混合物，用H2O稀释，并用CH2Cl2(2×50ml)萃取。干燥(MgSO4)并浓缩获得无色油状的所述标题化合物：MS(ES)m/e 209(M+H)+。b)2-(N-Boc-N-乙氨基)-6-甲基吡啶
在0℃向NaH(60％的矿物油分散液，1.15g，29.5mmol)的DMF(50ml)混悬浮液中加入2-(N-Boc-氨基)-6-甲基吡啶的DMF(30ml)溶液。将该反应物在0℃搅拌15分钟；然后加入乙基碘(4.6g，30mmol)。将该反应混合物在室温搅拌过夜；然后真空浓缩。残余物用H2O稀释并用CH2Cl2(3×50ml)萃取。干燥(MgSO4)、浓缩并硅胶层析(20％EtOAc/己烷)获得无色油状的所述标题化合物：MS(ES)m/e237(M+H)+。c)2-(N-Boc-N-乙氨基)-6-吡啶基乙酸乙酯
制备LDA(0.018mol)在THF(30ml)中的溶液，冷却到-78℃，加入2-(N-Boc-N-乙氨基)-6-甲基吡啶(3.5g，15mmol)，形成深红色溶液。15分钟后，加入二碳酸二乙酯(2.2ml，17.9mmol)，将该深红酒色的溶液在-78℃再搅拌15分钟，然后该反应物用饱和NH4Cl骤冷。将该混合物温热至室温并用EtOAc(3×30ml)萃取。合并的有机层用盐水洗涤、干燥(MgSO4)并浓缩。硅胶层析(10％EtOAc/己烷)获得无色油状的所述标题化合物：MS(ES)m/e 309(M+H)+。d)2-(乙氨基)-6-吡啶基乙酸乙酯
将2-(N-Boc-N-乙氨基)-6-吡啶基乙酸乙酯(1.5g，4.87mmol)和4MHCl/二噁烷(5ml，20mol)溶液在室温搅拌过夜，然后浓缩。由甲苯再浓缩获得为白色固体的所述标题化合物：MS(ES)m/e 209(M+H)+。e)2-(乙氨基)-6-吡啶基乙醇
向机械搅拌的LiAlH4的THF(1.0M，20ml，20.4mmol)溶液中滴加2-(乙氨基)-6-吡啶基乙酸乙酯(1g，4.1mmol)的THF(30ml)溶液。加液完成后，将该反应混合物加热至回流。5小时后，将该反应物冷却至0℃并用10％NaOH溶液骤冷。过滤除去固体，真空浓缩该滤液。将残余物溶解于CH2Cl2中，干燥(MgSO4)并浓缩该溶液。由甲苯(3×)再浓缩获得无色油状的所述标题化合物：MS(ES)167(M+H)+。
                          制备810，11-二氢-3-甲氧基-5H-二苯并[a.d]环庚烯-10-酮的制备a)2-苄基-4-甲氧苯基乙酸
在氩气下，将2-苯甲酰基-4-甲氧苯基乙酸(13.0g，0.048mol)(由J.Med.Chem.1981，24，998的方法制备)的冰乙酸(600ml)溶液用4.3g的10％Pd/C处理，并且在50psi氢化17小时。该混合物用celite过滤，浓缩该滤液并由甲苯和二氯甲烷再浓缩，获得14.2g的所述标题化合物：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.52(s，2H)，3.75(s，3H)，4.0(s，3H)，6.7(m，2H)，7.15(m，6H)。b)10，11-二氢-3-甲氧基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-酮
将2-苄基-4-甲氧苯基乙酸(14.2g，0.055m)的苯(120ml)和亚硫酰氯(28ml)溶液回流1小时并浓缩。将酰氯溶于无水二氯甲烷(40ml)中，并在氩气下将该溶液滴加到AlCl3(14.7g，0.11mol)的二氯甲烷(600ml)溶液中。在室温、氩气环境下搅拌该反应物2.5小时，然后用冰水(200ml)骤冷。分离各层，将有机相用10％NaOH溶液、水和稀HCl顺序洗涤。所得溶液用乙醚(200ml)稀释，经MgSO4干燥并浓缩。固体残余物用乙醚/己烷(1∶1)研磨，通过过滤收集到9.35g的所述标题化合物：Mp 105-106℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.72(s，3H)，4.1(s，2H)，4.2(s，2H)，6.7(d，1H)，6.82(s，1H)，7.30(m，4H)，8.1(d，1H)。
                             制备9(±)-10，11-二氢-3-甲氧基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯的制备a)(±)3-(3-甲氧基苯基)茚乙酸乙酯
在0℃，用5分钟向冷的3-(3-甲氧苯基)茚(4g，18mmol)(由J.Med.Chem.1981，24，998的方法制备)的THF(15ml)溶液中滴加LiN(TMS)2(20ml，1M在THF中)溶液。在-78℃用30分钟将所得溶液滴加到溴乙酸乙酯(3.34g，20mmol)的THF(15ml)溶液中。2.5小时后，该混合物用饱和氯化铵溶液骤冷并分离各层。有机层经MgSO4干燥并浓缩得到粗品产物，其通过过柱层析(SiO2/2-4％EtOAc/己烷)纯化，获得所述标题化合物(1.1g)：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.30(t，3H)，2.50(m，1H)，2.85(m，1H)，3.85(s，3H)，4.0(m，1H)，4.20(q，2H)，6.6(s，1H)，6.9(m，1H)，7.2(s，1H)，7.35(m，6H)。b)(±)3-[(3-甲氧苯甲酰基)]苯基琥珀酸乙酯
按照文献方法(J.Org.Chem.1993，58，4745)，将(±)3-(3-甲氧苯基)茚乙酸乙酯(1.1g，3.6mmol)的丙酮(30ml)溶液用4％的四氧化锇水溶液(0.5ml)处理，随后滴加1.2M Jones试剂(5ml，6mmol)。在室温搅拌过夜后，该深色反应混合物用异丙醇(2.5ml)骤冷、随后用亚硫酸氢钠(0.9g)和水(30ml)。产物用乙酸乙酯萃取、用盐水洗涤、经MgSO4干燥，并浓缩得到固体残余物。用1∶1乙醚/己烷研磨获得0.76g的所述标题化合物：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.18(t，3H)，2.90(m，1H)，3.3(m，1H)，3.92(s，3H)，4.1(q，2H)，4.4(m，1H)，4.4(d，1H)，7.25(m，2H)，7.5(m，6H)。c)(±)3-[(3-甲氧苄基)]苯基琥珀酸乙酯
在50psi将冰乙酸(35ml)中的(±)3-[(3-甲氧苯甲酰基)]苯基琥珀酸乙酯(0.76g，2.1mmol)和10％Pd/C(0.6g)的混合物氢化17小时。用celite过滤该混合物并用乙酸洗涤滤饼。浓缩该滤液并由甲苯和二氯甲烷再浓缩，获得0.65g的所述标题化合物：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.20(t，3H)，2.20(m，1H)，3.0(m，1H)，3.74(s，3H)，4.1(q，2H)，4.18(q，2H)，4.4(d，1H)，6.2(m，2H)，7.22(m，6H)。d)(±)-10，11-二氢-3-甲氧基-11-氧代-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
向电磁搅拌的(±)3-[(3-甲氧苄基)]苯基琥珀酸乙酯(0.65g，1.9mmol)的无水二氯甲烷(l0ml)溶液中加入DMF(0.2ml)和草酰氯(0.2ml，2.28mmol)。1.5小时后，将该溶液滴加到氯化铝(0.6g，4.5mmol)的无水二氯甲烷(15ml)混悬浮液中。2小时后用冰水骤冷该混合物，分离各层，并用二氯甲烷萃取含水层。合并的有机层经MgSO4干燥并浓缩。残余物通过柱层析(SiO2/2-4％EtOAc/己烷)纯化获得所述标题化合物(0.3g)：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.28(t，3H)，2.88(m，1H)，3.55(m，1H)，3.84(s，3H)，3.88(d，1H)，4.18(q，2H)，4.85(d，1H)，4.95(m，1H)，5.8(m，2H)，7.22(m，4H)，8.1(s，1H)。e)(±)-10，11-二氢-3-甲氧基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
在50psi将冰乙酸(25ml)中的(±)-10，11-二氢-3-甲氧基-11-氧代-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯(0.3g，0.93mmol)和10％Pd/C(0.3g)的混合物氢化18小时。用celite过滤该混合物并用乙酸洗涤。浓缩该滤液并由甲苯和二氯甲烷再浓缩，获得0.25g的所述标题化合物：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.28(t，3H)，2.60(m，2H)，2.90(m，1H)，3.30(m，1H)，3.80(s，3H)，3.85(d，1H)，4.18(q，2H)，4.30(d，1H)，6.70(m，2H)，7.0(d，1H)，7.22(m，4H)。
下列化合物说明了由在先前的制备中所描述的中间体化合物制备本发明的生物活性化合物的方法。
                            实施例1(±)-10，11-二氢-3-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸的制备a)(±)-10，11-二氢-3-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
在室温、氩气下，用10分钟将2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物(1.94g，11.55mmol)和偶氮二羧酸二乙酯(1.8ml，11.55mmol)的无水DMF(58ml)溶液滴加到(±)-10，11-二氢-3-羟基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯(1.37g，4.62mmol)和三苯基膦(3.27g，12.47mmol)的无水DMF(23ml)溶液中。23.5小时后，将该反应物在旋转蒸发仪上浓缩，残余物由二甲苯再浓缩除去残余的DMF。硅胶层析(30％EtOAc/己烷(0.5L)，然后EtOAc(1L)，然后5％MeOH/CHCl3)得到回收的(±)-10，11-二氢-3-羟基-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯(298.1mg，22％)，然后是黄色油状的所述标题化合物(1.54g，75％)：1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.10(dd，J＝6.6，1.3Hz，1H)，6.85-7.30(m，7H)，6.78(d，J＝2.6Hz，1H)，6.68(dd，J＝8.2，2.6Hz，1H)，6.61(dd，J＝8.5，1.6Hz，1H)，6.45-6.57(m，1H)，4.29(d，J＝15.1Hz，1H)，4.10-4.25(m，2H)，4.06(t，J＝5.7Hz，2H)，3.84(d，J＝15.1Hz，1H)，3.70-3.92(m，1H)，3.49(q，J＝6.5Hz，2H)，3.30(dd，J＝15.0，4.2Hz，1H)，2.93(dd，J＝15.0，9.3Hz，1H)，2.65(dd，J＝15.6，5.0Hz，1H)，2.51(dd，J＝15.6，9.4Hz，1H)，2.05-2.25(m，2H)，1.27(t，J＝7.1Hz，3H)；MS(ES)m/e 447(M+H)+。b)(±)-10，11-二氢-3-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯基-10-乙酸乙酯
在回流下，将(±)-10，11-二氢-3-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯(1.54g，3.45mmol)、10％Pd/C(0.73g，0.69mmol)、环己烯(7ml，6.9mmol)和异丙醇(35ml)的混合物加热回流2小时，然后通过celite过滤除去催化剂。浓缩得到黄色油状物，使其再经历反应条件。17小时后，将该反应物如前述处理，并使黄色残余物再次经历反应条件，用1∶1 EtOAc/异丙醇(35ml)取代异丙醇作为溶剂。将该混合物在回流下加热5小时，加入Pd黑(73mg，0.69mmol)，并继续回流18.5小时。如前述处理，随后硅胶层析(1∶1EtOAc/己烷)获得浅黄色油状的所述标题化合物(0.94g，63％)：TLC Rf(1∶1 EtOAc/己烷)0.38；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.02-8.11(m，1H)，7.33-7.42(m，1H)，7.02-7.20(m，4H)，7.00(d，J＝8.2Hz，1H)，6.77(d，J＝2.6Hz，1H)，6.67(dd，J＝8.2，2.6Hz，1H)，6.50-6.60(m，1H)，6.39(d，J＝8.5Hz，1H)，4.69(br t，1H)，4.29(d，J＝15.0Hz，1H)，4.11-4.25(m，2H)，4.05(t，J＝5.8Hz，2H)，3.84(d，J＝15.0Hz，1H)，3.75-3.90(m，1H)，3.48(app.q，2H)，3.30(dd，J＝15.0，4.1Hz，1H)，2.93(dd，J＝15.0，9.2Hz，1H)，2.64(dd，J＝15.6，4.8Hz，1H)，2.52(dd，J＝15.6，9.5Hz，1H)，2.02-2.15(m，2H)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H)；MS(ES)m/e 431(M+H)+。c)(±)-10，11-二氢-3-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸
将无水EtOH(19.2ml)中的(±)-10，11-二氢-3-[3-(2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯(0.94g，2.18mmol)和1.0NNaOH(2.6ml，2.62mmol)的混合物在设置于50℃的油浴中温热。28.5小时后，该反应物在旋转蒸发仪上浓缩，残余物通过ODS层析(1∶1MeOH/H2O)纯化。浓缩得到浑浊的水溶液，加入一点1.0N NaOH使其均匀。用1.0N HCl将pH调节至7，收集固体沉淀物并用H2O洗涤。浓缩母液，同样处理该残余物又获得少量的物质。在40℃高度真空中干燥合并的物质获得几乎无色的固体的所述标题化合物(0.70g，79％)：HPLC(Hamilton PRP-1，40％CH3CN/H2O含有0.1％TFA)k’＝1.2；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.94(d，J＝4.4Hz，1H)，7.32-7.41(m，1H)，7.03-7.22(m，4H)，6.97(d，J＝8.4Hz，1H)，6.83(d，J＝2.4Hz，1H)，6.60-6.74(m，2H)，6.41-6.50(m，2H)，4.20(d，J＝14.7Hz，1H)，4.00(t，J＝6.2Hz，2H)，3.88(d，J＝14.7Hz，1H)，3.60-3.70(m，1H)，3.26-3.40(m，2H，部分被残余的溶剂信号混淆)，3.20(dd，J＝15.1，4.3Hz，1H)，2.83(dd，J＝15.1，10.3Hz，1H)，2.60(dd，J＝15.9，5.3Hz，1H)，2.50(dd，1H，部分被残余的溶剂信号混淆)，1.88-2.00(m，2H)；MS(ES)m/e 403(M+H)+。C25H26N2O3·0.25H2O分析计算值：C，73.78；H，6.56；N，6.88。实测值：C，73.85；H，6.47；N，6.75。
                           实施例2(±)-10，11-二氢-3-[3-(4-氨基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸的制备a)(±)-10，11-二氢-3-[3-[2-(4-硝基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
按照实施例1(a)的方法，但是用2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4硝基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，经硅胶层析(梯度：2∶1 EtOAc/己烷，然后EtOAc，然后在1∶1 EtOAc/CHCl3中的5％MeOH)后获得所述标题化合物：MS(ES)m/e 492(M+H)+。b)(±)-10，11-二氢-3-[3-(4-氨基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
按照实施例1(b)的方法，但是用(±)-10，11-二氢-3-[3-[2-(4-硝基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯代替(±)-10，11-二氢-3-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯，经硅胶层析(20％MeOH/CHCl3)后获得所述标题化合物：MS(ES)m/e 446(M+H)+。c)(±)-10，11-二氢-3-[3-(4-氨基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸
在室温下将1.0N LiOH(0.74ml，0.74mmol)一次性加入到(±)-10，11-二氢-3-[3-(4-氨基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯(216.3mg，0.49mmol)的THF(2.5ml)和H2O(1.8ml)溶液中。将该两相混合物在设置于40℃油浴中温热1小时，然后加入无水EtOH(约1ml)至合并的相中。该反应物保持在40℃持续19.5小时，然后浓缩，将残余物溶于1∶1 CH3CN/H2O(5ml)中。该溶液用TFA(0.11ml，1.47mmol)酸化并浓缩。ODS层析(40％CH3CN/H2O，含有0.1％TFA)，随后浓缩除去CH3CN得到油状的水溶液，通过加入一点CH3CN使其均匀。用1.0N NaOH调节pH至7，得到沉淀的油状的半固体。浓缩该混合物除去CH3CN，并收集所得的固体物质。将其溶于NaOH水溶液中，并调节pH至7。收集该固体，用大量的H2O洗涤，并在45℃高度真空中干燥，获得灰白色固体的所述标题化合物(133.3mg，61％)：HPLC(Hamilton PRP-1，35％CH3CN/H2O含有0.1％TFA)k’＝3.0；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ 7.48(d，J＝6.3Hz，1H)，7.04-7.22(m，4H)，6.95(d，J＝8.2Hz，1H)，6.88-7.02(m，1H)，6.82(d，J＝2.4Hz，1H)，6.67(dd，J＝8.2，2.4Hz，1H)，6.27(br s，2H)，5.95(dd，1H)，5.65(窄峰d，1H)，4.18(d，J＝14.7Hz，1H)，4.00(t，J＝6.1Hz，2H)，3.88(d，J＝14.7Hz，1H)，3.59-3.70(m，1H)，3.13-3.30(m，3H)，2.82(dd，J＝15.2，10.0Hz，1H)，2.46(dd，J＝15.8，8.8Hz，1H，部分被残余的溶剂信号混淆)，2.58(dd，J＝15.8，5.2Hz，1H)，1.86-2.01(m，2H)；MS(ES)m/e 418(M+H)+。C25H27N3O3·1.67H2O分析计算值：C，67.09；H，6.83；N，9.39。实测值：C，66.99；H，6.59；N，9.34。
                           实施例3(+)-10，11-二氢-3-[3-(4-甲基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸的制备a)(±)-10，11-二氢-3-[3-[2-(4-甲基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
按照实施例1(a)的方法，但是用2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]-4-甲基吡啶-N-氧化物代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，经硅胶层析(梯度变化：30，50，100％在己烷中的EtOAc，然后1-5％在CHCl3中的MeOH)后获得淡黄色油状的所述标题化合物：MS(ES)m/e461.3(M+H)+。b)(±)-10，11-二氢-3-[3-(4-甲基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
按照实施例1(b)的方法，但是用(±)-10，11-二氢-3-[3-[2-(4-甲基-N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯代替(±)-10，11-二氢-3-[3-[2-(N-氧代吡啶基)氨基]-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯，经硅胶层析(梯度变化：30-50％在己烷中的EtOAc)后获得所述标题化合物：MS(ES)m/e 445.3(M+H)+。c)(±)-10，11-二氢-3-[3-(4-甲基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸
在室温下将1.0N NaOH(0.144ml，0.144mmol)加入到(±)-10，11-二氢-3-[3-(4-甲基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯(35mg，0.08mmol)的EtOH(5ml)溶液中。将该混合物在设置于32℃油浴中温热过夜，然后浓缩。将残余物溶于H2O(3ml)中，并用20％TFA酸化该溶液。ODS层析(5-10％CH3CN/H2O含有0.1％TFA)，随后浓缩和冷冻干燥，获得白色粉末状的所述标题化合物：MS(ES)m/e 417.3(M+H)+。C26H28N2O3·2.0 TFA·1.0H2O分析计算值：C，54.38；H，4.87；N，4.23。实测值：C，54.66；H，6.4.53；N，4.32。
                           实施例4(±)-10，11-二氢-3-[2-[6-(乙氨基)-2-吡啶基]-1-乙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸的制备a)(±)-10，11-二氢-3-[2-[6-(乙氨基)-2-吡啶基]-1-乙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯
按照实施例1(a)的方法，但是用2-(乙氨基)-6-吡啶基乙醇代替2-[(3-羟基-1-丙基)氨基]吡啶-N-氧化物，经硅胶层析(5％MeOH/CH2Cl2)后获得无色油状的所述标题化合物：MS(ES)445(M+H)+。b)(±)-10，11-二氢-3-[2-[6-(乙氨基)-2-吡啶基]-1-乙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸
将(±)-10，11-二氢-3-[2-[6-(乙氨基)-2-吡啶基]-1-乙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸乙酯(80mg，0.18mmol)溶解于MeOH(3ml)中，并加入1.0N NaOH(0.22ml，0.22mmol)。该溶液在室温搅拌过夜，然后真空浓缩。将残余物溶解于H2O(3ml)中，并用20％TFA酸化该溶液。在C-18 Bond Elute上层析(30％CH3CN/H2O含有0.1％TFA)获得白色固体的所述标题化合物：MS(ES)417(M+H)+。C26H28N2O3·1.3CF3CO2H分析计算值：C，60.83；H，5.23；N，4.96。实测值：C，60.64；H，5.26；N，4.26。
以上的描述完全公开了怎样进行和使用本发明。然而，本发明并不限于以上所述的特别的实施方案，而是包括以下权利要求范围内的其所有的变更。此处引用的各种期刊、专利及其它公开的参考文献包括了现有技术水平并通过完全引用结合到本文中。

Claims (21)

1.化合物，它为下列化合物或其药学上可接受的盐：
(±)-10，11-二氢-3-[3-(4-氨基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸；
(±)-10，11-二氢-3-[2-[6-(乙氨基)-2-吡啶基]-1-乙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸；或
(±)-10，11-二氢-3-[3-(4-甲基-2-吡啶基氨基)-1-丙氧基]-5H-二苯并[a，d]环庚烯-10-乙酸。
2.药用组合物，它包含权利要求1的化合物和药学上可接受的载体。
3.药用组合物，它包含权利要求1的化合物、抗肿瘤剂和药学上可接受的载体。
4.按照权利要求3的药用组合物，其中所述抗肿瘤剂是托泊替堪。
5.按照权利要求3的药用组合物，其中所述抗肿瘤剂是顺铂。
6.治疗表明有αVβ3受体拮抗作用的疾病的方法，它包括给予需要的患者按照权利要求1的化合物。
7.治疗表明有αVβ5受体拮抗作用的疾病状态的方法，它包括给予需要的患者按照权利要求1的化合物。
8.治疗骨质疏松症的方法，它包括给予需要的患者按照权利要求1的化合物。
9.抑制血管发生的方法，它包括给予需要的患者按照权利要求1的化合物。
10.抑制肿瘤生长或肿瘤转移的方法，它包括给予需要的患者按照权利要求1的化合物。
11.治疗动脉粥样硬化症或再狭窄的方法，它包括给予需要的患者按照权利要求1的化合物。
12.治疗炎症的方法，它包括给予需要的患者按照权利要求1的化合物。
13.抑制肿瘤生长的方法，它包括逐步给予或以物理方式结合给予按照权利要求1的化合物和抗肿瘤剂。
14.按照权利要求13的方法，其中所述抗肿瘤剂是托泊替堪。
15.按照权利要求13的方法，其中所述抗肿瘤剂是顺铂。
16.制备式(I)化合物的方法：
Figure A9880298300031
该方法包括使式(II)化合物还原：
Figure A9880298300032
17.制备式(II)化合物方法：
Figure A9880298300033
该方法包括使式(III)化合物环化：
Figure A9880298300041
18.化合物是：
19.化合物是：
Figure A9880298300043
20.化合物是：
21.化合物是：
Figure A9880298300051
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