KR20010024141A - 비트로넥틴 수용체 길항 물질 - Google Patents

비트로넥틴 수용체 길항 물질 Download PDF

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KR20010024141A
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윌리암 이. 본디넬
윌리암 에이치 밀러
더크 히르딩
제임스 마틴 사마넨
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스튜어트 알. 수터
스미스클라인 비참 코포레이션
스티븐 베네티아너
피터 존 기딩스
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Abstract

비트로넥틴 수용체 길항 물질이며 골다공증의 치료에 유효한 화학식 (I)의 화합물 또는 제약상 허용되는 그의 염이 개시된다. 여기에서, A는 CH2또는 O이고, R1은 H, C1-6알킬 또는 CH2NR"R"이며, X는 O 또는 CH2이고, Y는 (a), (b), (c), (d), (e), (f) 또는 (g)이고, G는 NR", S 또는 O이며, R'은 H, C1-6알킬, OC1-6알킬, NR"R" 또는 할로이고, 각각의 R"은 독립적으로 H 또는 C1-6알킬이며, s는 0, 1 또는 2이다.

Description

비트로넥틴 수용체 길항 물질{Vitronectin Receptor Antagonist}
인테그린스(integrins)는 다양한 세포상에서 발현되는 막투과 글리코단백질인 세포 부착 수용체의 초군(superfamily)이다. 이들 세포 표면 부착 수용체는 gpIIb/IIIa(피브리노겐 수용체) 및 αvβ3(비트로넥틴 수용체)를 포함한다. 피브리노겐 수용체 gpIIb/IIIa는 혈소판 표면 상에서 발현되고 출혈중인 상처 부위에서 혈소판 응집 및 지혈 혈병의 형성을 매개한다(필립스(Philips) 등의 문헌 Blood., 1988, 71, 831). 비트로넥틴 수용체 αvβ3은 내피 세포, 평활근 세포, 용골세포 및 종양 세포와 같은 다수의 세포 상에서 발현되므로 다양한 기능을 갖는다. 용골 세포의 막상에서 발현되는 αvβ3수용체는 뼈 용식 과정의 중심 단계인 골기질에 대한 용골 세포의 부착을 매개한다(Ross 등, J. Biol. Chem., 1987, 262, 7703). 과도한 뼈 용식으로 특징지워지는 질환이 골다공증이다. 인간 대평활근 세포 상에 발현된 αvβ3수용체는 경피 관상 혈관확장술 이후에 재협착증에 이를 수 있는 과정인 새로운 혈관 내막 내로 상기 세포들이 전이하는 것을 매개한다(Brown 등, Cardiovascular Res., 1994, 28, 1825). 또한, 브룩스(Brooks) 등의 문헌[Cell, 1994, 79, 1157]은 αvβ3길항 물질이 맥관생성 혈관의 고사를 유발하여 종양 퇴행을 촉진할 수 있다는 사실을 보여주고 있다. 따라서 비트로넥틴 수용체를 억제하는 제제는 골다공증, 재협착증 및 암과 같은 질환을 치료하는 데 유용할 것이다.
현재 비트로넥틴 수용체는 αvβ1, αvβ3및 αvβ5의 세 종의 상이한 인테그린스로 공지되어 있다(호르톤(Horton) 등의 문헌[Int. J. Exp. Pathol., 1990, 71, 741]). αvβ1은 비브로넥틴 및 비트로넥틴과 결합한다. αvβ3은 피브린, 피브리노겐, 라미닌, 트롬보스폰딘, 비트로넥틴, 폰 빌레브란드 인자(von Willebrand's factor), 오스테오폰틴 및 뼈 시알로프로틴 I을 포함하는 다양한 리간드와 결합한다. αvβ5은 비트로넥틴과 결합한다. 비트로넥틴 수용체 αvβ5가 모세혈관 내피 세포를 포함하는 다양한 형태의 세포의 세포 부착에 관여하는 것이 밝혀졌고(Davis, et al., J. Cell. Biol., 1993, 51, 206), 맥관형성에서의 그의 역활이 확인되었다(Brooks, et al., Science, 1994, 264, 569). 이러한 인테그린은 인간의 상처 육아 발생 세포 조직 내의 혈관 상에서 발현되지만, 정상적인 피부 내에서는 발현되지 않는다.
비트로넥틴 수용체는 트리-펩티드 Arg-Gly-Asp (또는 RGD) 모티프를 함유하는 골 기질 단백질에 결합되는 것으로 알려져 있다. 따라서, 호르톤(Horton) 등의 문헌[Exp. Cell Res. 1991, 195, 368]은 RGD-함유 펩티드 및 항-비트로넥틴 수용체 항체(23C6)가 골다공증에 의한 세포 전파 및 상아질(dentine) 용식을 억제한다는 사실을 개시한다. 또한, 사토(Sato) 등의 문헌[J. Cell Biol. 1990, 111, 1713]은 RGD 서열을 함유하는 뱀의 독 단백질인 에키스타틴이 세포 조직 배양에서 골 용식의 강제적 억제제이고 용골세포가 뼈에 부착되는 것을 억제한다는 사실을 개시한다.
현재 일정한 화합물이 αvβ3및 αvβ5수용체의 강력한 억제제인 것이 발견되었다. 특히, 이러한 화합물은 피브리노겐 수용체 보다 비트로넥틴 수용체에 대하여 더욱 강력한 억제제인 것이 발견되었다.
＜발명의 요약＞
본원발명은 비트로넥틴 수용체의 억제에 약리학적 활성을 가지며 염증, 암 및 죽상 경화증 및 재협착증과 같은 심장혈관 질환, 및 골다공증과 같이 골 용식이 요인인 질환의 치료에 유용한 하기에 기재된 화학식 (I)의 화합물을 포함한다.
본원발명은 또한 화학식 (I)에 따른 화합물 및 제약상 담체를 포함하는 제약 조성물이다.
본원발명은 또한 비트로넥틴 수용체에 의하여 매개되는 질환을 치료하는 방법이다. 구체적인 측면에서, 본원발명의 화합물은 죽상경화증, 재협착증, 염증, 암 및 골다공증과 같이 골 용식이 요인인 질환의 치료에 유효하다.
본원발명은 비트로넥틴 수용체를 억제하고 염증, 암 및 죽상 경화증 및 재협착증과 같은 심장혈관 질환, 및 뼈의 용식(resorption)이 요인인 골다공증과 같은 질환의 치료에 유용한 제약상 활성 화합물에 관한 것이다.
본원발명은 피브리노겐 수용체보다 비트로넥틴 수용체에 대하여 더 강력한 억제제인 신규한 화합물을 포함한다. 상기 신규한 화합물은 질소-함유 치환기가 디벤조시클로헵텐의 방향족 6-원 고리 중의 하나에 존재하고 산성 부분을 함유하는 지방족 치환제가 디벤조시클로헵텐의 7-원 고리에 존재하는 디벤조시클로헵탄 코어를 포함한다. 상기 디벤조시클로헵텐 고리 시스템은 치환된 측쇄가 6- 및 7-원 고리상에 위치되어 비트로넥틴 수용체와 용이하게 상호작용할 수 있게 된다고 믿어진다. 디벤조시클로헵텐의 7-원 고리의 지방족 치환기 상의 산성기와 디벤조시클로헵텐의 하나의 방향족 6-원 고리상의 질소-함유 치환기의 질소 사이에 약 12 내지 14 개의 매개 공유 결합이 가장 짧은 분자내 경로를 통하여 존재하는 것이 바람직하다.
본원발명은 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 제약상 허용되는 그의 염을 포함한다.
상기식에서,
A는 CH2또는 O이고,
R1은 H, 할로 또는 C1-6알킬이며,
R2는 H, C1-6알킬 또는 CH2NR"R"이고,
X는 O 또는 CH2이며,
Y는
이고,
이때, G는 NR", S 또는 O이며,
R'는 H, C1-6알킬, OC1-6알킬, SC1-6알킬, NR"R" 또는 할로이고,
각각의 R"은 독립적으로 H 또는 C1-6알킬이며,
s는 0, 1 또는 2이다.
본원발명은 본원발명의 화합물의 제약상 허용되는 부가염 및 복합체도 포함한다. 본원발명의 화합물이 1 이상의 키랄 중심을 갖는 경우, 제한이 없는 한 본원발명은 통상적인 기술에 의하여 합성되고 분리될 수 있는 각각의 특이적인 비-라세믹 화합물을 포함한다. 본원발명의 화합물이 불포화 탄소-탄소 결합을 갖는 경우, 시스(Z) 및 트란스(E) 이성질체 모두가 본원발명의 범위내에 포함된다. 본원발명의 화합물이 케토-에놀 호변이성질체(와 같은)와 같은 호변 이성질체의 형태로 존재할 수 있는 경우, 각각의 호변이성질체의 형태는 평형상태로 존재하든지 또는 R'을 갖는 적절한 치환기로 치환된 하나의 형태로만 제한되든지 본원발명의 범위내에 포함된다.
화학식 (I)의 화합물은 비트로넥틴 및 기타 RGD 함유 펩티드가 비트로넥틴 수용체에 결합되는 것을 억제한다. 용골세포에 대한 비트로넥틴 수용체의 억제는 용골세포의 골 용식을 억제하고 골 용식이 수반되는 골다공증 및 골관절염과 같은 질환의 치료에 유효하다.
또 다른 측면에서, 본원발명은 오스테오칼신 방출의 증가를 초래하는 화합물을 투여하는 것을 포함하는 골 형성 촉진 방법이다. 골 생성의 증가는 골절 치료 및 골절의 예방과 같이 무기화된 골체가 결핍된 질환 상태에 명백히 유효하다. 골 구조의 손실을 초래하는 질환 및 대사 이상에도 이러한 치료가 유효할 수 있다. 예를 들면, 하이퍼파라티로이디즘(hyperparathyroidism), 파제트병, 악성 칼슘과다혈증, 뼈의 전이에 의하여 생성되는 오스테올리틱 레젼(osteolytic lesion), 고정(immobiliztion) 또는 성 호르몬 결핍에 기인한 뼈 손실, 베체트병, 골연화증, 뼈과다형성증 및 골화석증과 같은 질환이 본원발명의 화합물을 투여하여 치료될 수 있다.
또한, 본원발명의 화합물은 다수의 다양한 형태의 세포에 대하여 비트로넥틴 수용체를 억제하기 때문에 류마티스성 관절염 및 건선과 같은 염증성 질환 및 죽상경화증 및 재협착증과 같은 심장혈관 질환의 치료에 유효할 수 있다. 본원발명의 화학식 (I)의 화합물은 혈전색전증성 질환, 천식, 알레르기, 성인성 호흡 곤란 증후군, 이식편대숙주병, 장기이식거부, 패혈성 쇼크, 습진, 접촉성 피부염, 염증성 장염 및 기타 자가면역 질환을 포함하는 질병의 예방 및 치료에 유효할 수 있지만 이에 한정되는 것은 아니다. 본원발명의 화합물은 상처의 치료에도 유용할 수 있다.
본원발명의 화합물은 맥관형성 질환의 예방 및 치료에도 유용하다. 본원에 사용된 용어 맥관형성성 질환(angiogenic disorder)은 비정상적인 혈관 신생에 관여하는 조건을 포함한다. 새로운 혈관의 성장이 질환과 관련된 병상의 원인이 되거나 기여하는 경우, 맥관 형성의 억제는 질환의 유해한 효과를 감소시킬 수 있을 것이다. 이러한 질환의 예가 당료병성 망막병증이다. 새로운 혈관의 성장이 유해한 세포 조직의 성장에 필요한 경우, 맥관형성의 억제는 상기 세포 조직에 혈액이 공급되는 것을 감소시켜서 혈액 공급 요건에 기초한 세포조직체의 감소에 기여할 것이다. 예로는 새로운 혈관의 형성이 종양의 성장 및 종양 덩어리 전이를 위하여 끊임 없이 요구되는 경우의 종양의 성장이 있다. 따라서, 본원발명은 종양세포 조직의 맥관 형성을 억제하여 종양의 전이 및 성장을 억제한다.
따라서, 본원발명의 방법에 따라, 본원발명의 화합물을 이용한 맥관형성의 억제는 질환의 징후를 완화시키고 일부의 경우에 질환을 치료할 수 있다.
본원발명 화합물의 또 다른 치료 목표는 새로운 혈관형성으로 특징지어지는 안질환이다. 이러한 안질환은 각막이식, 헤르페스성 각막염, 매독성 각막염, 콘택트 렌즈의 사용에 수반되는 익상편 및 신혈관성 판누스(pannus)와 같은 각막 혈관 신생성 질환을 포함한다. 안질환은 또한 노화에 따른 황반 퇴화, 가성 안 히스토플라스마병(presumed ocular histoplasmosis), 조숙 및 신혈관 녹내장의 망막병증을 포함한다.
본원발명은 또한 화학식 (I)의 화합물 및 토포테칸과 시스플라틴 같은 항종양제를 단계별로 또는 물리적인 조합으로 투여하는 것을 포함하는 종양 성장 억제 방법을 제공한다.
화학식 (I)의 화합물에 있어서:
적합한 Y는
이고, 상기식에서 R'은 H, C1-4알킬, OC1-4알킬, SC1-4알킬, NR"R" 또는 Cl이고 각각의 R"은 독립적으로 H 또는 C1-4알킬이다.
다른 한편으로, Y는
이고, 상기식에서 각각의 R"은 H 또는 C1-4알킬이다.
다른 한편으로 Y는
이고, 상기식에서 각각의 R"은 독립적으로 H 또는 C1-4알킬이며 s는 1이다.
다른 한편으로, Y는
이고, 상기식에서 G는 S이고 각각의 R"은 독립적으로 H 또는 C1-4알킬이다.
다른 한편으로, Y는
이고, 상기식에서 R"은 H 또는 C1-4알킬이다.
본원발명의 신규한 화합물의 대표적인 예는 하기 및 그의 제약상 허용되는 염이다:
(±)-10,11-디히드로-3-[2-(6-아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(±)-10,11-디히드로-3-[4-(피리딘-2-일아미노)-1-부틸]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(S)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(R)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(±)-10,11-디히드로-3-[3-(3,4,5,6-테트라히드로피리미딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(±)-10,11-디히드로-3-[2-[2-(에틸아미노)티아졸-4-일]-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(±)-10,11-디히드로-3-[3-(이소퀴놀린-1-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(±)-10,11-디히드로-6-메틸-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(±)-10,11-디히드로-2-(디메틸아미노)메틸-7-플루오로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(2-프로필옥시)피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(S)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(디메틸아미노)피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(±)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(에틸티오)피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-클로로피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(±)-10,11-디히드로-2-메틸-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-아미노피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
(±)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]-디벤조[b,f]옥세핀-10-아세트산, 및
(S)-10,11-디히드로-3-[3-(2-아미노피리딘-4-일)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산.
본원발명의 화합물이 1 이상의 키랄 중심을 갖는 경우, 특별한 한정이 없는한, 본원발명은 통상의 기술로서 합성 및 분리할 수 있는 각각의 특정 비라세믹 화합물을 포함한다. 본원발명에 따르면, 화학식 (I)의 화합물의 (S) 형이 바람직하다.
상기 화합물이 불포화 탄소-탄소 이중결합을 갖는 경우, 시스(Z) 및 트란스(E) 이성질체 모두가 본원발명의 범위 내에 있다. 임의의 한 경우에 있어서 특정 치환기의 의미는 기타 경우에 있어서의 그의 의미 또는 기타 치환기의 의미와는 독립적이다.
본원발명 화합물의 프로드럭도 본원발명에 포함된다. 프로드럭은 생체내에서 화학식 (I)에 따른 활성 모 약제를 방출하는 임의의 공유결합된 담체로 간주된다. 따라서, 본원발명의 또 다른 측면은 화학식 (I)의 화합물의 제조시의 중간체 이기도한 화학식 (II)의 신규한 프로드럭 또는 제약상 허용되는 그의 염이다.
상기식에서, A는 CH2또는 O이고,
R1은 H, 할로 또는 C1-6알킬이며,
R2는 H, C1-6알킬 또는 CH2NR"R"이고,
X는 O 또는 CH2이며,
Y는
이고,
이때 G는 NR", S 또는 O이며,
R'는 H, C1-6알킬, OC1-6알킬, SC1-6알킬, NR"R" 또는 할로이고,
각각의 R"은 독립적으로 H 또는 C1-6알킬이며,
s는 0, 1 또는 2이다.
본원발명의 또 다른 측면은 화학식 (III)의 신규한 중간체 또는 제약상 허용되는 그의 염이다.
상기식에서, A는 CH2또는 O이고,
R1은 H, 할로 또는 C1-6알킬이며,
R2는 H, C1-6알킬 또는 CH2NR"R"이고,
X는 O 또는 CH2이며,
R'는 H, C1-6알킬, OC1-6알킬, SC1-6알킬, NR"R" 또는 할로이고,
각각의 R"은 독립적으로 H 또는 C1-6알킬이다.
펩티드 및 화학 분야에서 통상적으로 사용되는 약어 및 기호가 본원에서 본원발명의 화합물을 기재하기 위하여 사용된다. 일반적으로, 아미노산의 약어는 문헌[Eur. J. Biochem., 158, 9 (1984)]에 기재된 바와 같은 IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature에 따랐다.
본원에 적용된 C1-4알킬은 1 내지 4개의 탄소를 가지는 임의로 치환된 알킬기를 의미하고 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸 및 t-부틸을 포함한다. C1-6알킬은 펜틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸 및 헥실 및 그의 간단한 지방족 이성질체를 더 포함한다. C0-4알킬 및 C0-6알킬은 알킬기가 존재할 필요가 없다는 것을 더 의미한다(예를 들면, 공유결합이 존재).
임의의 C1-4알킬 또는 C1-6알킬은 안정한 구조를 생성시키고 종래의 합성 기술로 가능한 임의의 탄소 원자상에 Rx기로 임의로 치환될 수 있다. Rx로 적합한 기로는 C1-4알킬, OR", SR", C1-4알킬술포닐, C1-4알킬술폭실, -CN, N(R")2, CH2N(R")2, -NO2, -CF3, -CO2R", -CON(R")2, -COR", -NR"C(O)R", F, Cl, Br, I 또는 CF3S(O)r-이 있고, 여기에서, r은 0, 1 또는 2이다.
할로겐 또는 할로는 F, Cl, Br 및 I를 의미한다.
본원에 적용된 Ar 또는 아릴은 페닐 또는 나프틸, 또는 상기에 정의된 알킬, 특히 C1-4알킬, C1-4알콕시, C1-4알킬티오, CF3, NH2, OH, F, Cl, Br 또는 I와 같은 치환기 1 내지 3 개로 치환된 페닐 또는 나프틸을 의미한다.
일정한 라디칼기가 본원에서 약어로 사용된다. t-Bu는 3차 부틸 라디칼을 나타내고, Boc는 t-부틸옥시카르보닐 라디칼을 나타내며, Fmoc는 플루오레닐메톡시카르보닐 라디칼을 나타내고, Ph는 페닐 라디칼을 나타내며, Cbz는 벤질옥시카르보닐라디칼을 나타내고, Bn은 벤질 라디칼을 나타내며, Me는 메틸을 나타내고, Et는 에틸을 나타내고, Ac는 아세틸을 나타내며, Alk는 C1-4알킬을 나타내고, Nph는 1- 또는 2- 나프틸을 나타내며, cHex는 시클로헥실을 나타낸다. Tet는 5-테트라졸릴을 나타낸다.
일정한 시약이 본원에서 약어로 사용된다. DCC는 디시클로헥실카르보디이미드를 나타내고, DMAP는 디메틸아미노피리딘을 나타내며, DIEA는 디이소프로필에틸 아민을 나타내고, EDC는 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드, 히드로클로리드를 나타낸다. HOBt는 1-히드록시벤조트리아졸을 나타내고, THF는 테트라히드로푸란을 나타내며, DIEA는 디이소프로필에틸아민을 나타내고, DEAD는 디에틸 아조디카르복실레이트를 나타내며, PPh3는 트리페닐포스핀을 나타내고, DIAD는 디이소프로필 아조디카르복실레이트를 나타내며, DME는 디메톡시에탄을 나타내고, DMF는 디메틸포름아미드를 나타내며, NBS는 N-브로모숙신이미드를 나타내고, Pd/C는 탄소 상의 팔라듐 촉매를 나타내며, PPA는 폴리포스포릭 애시드를 나타내며, DPPA는 디페닐포스포릴 아지드를 나타내고, BOP는 벤조트리아졸-1-일옥시-트리스(디메틸-아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트를 나타내며, HF는 히드로플루오릭 애시드를 나타내고, TEA는 트리에틸아민을 나타내며, TFA는 트리플루오로아세트산을 나타내고, PCC는 피리디늄 클로로크로메이트를 나타낸다.
화학식 (I)의 화합물은 하기 화학식 (IV)의 화합물을 하기 화학식 (V)의 화합물과 반응시킨 후 임의의 보호기를 제거하고 임의로 제약상 허용되는 염을 형성시켜서 일반적으로 제조된다.
상기식에서, R1, R2, Y 및 A는 화학식 (I)에서 정의된 바와 같고(임의의 반응성 관능기를 보호) L1은 OH 또는 할로이다.
적합하게는, 화학식 (I)의 특정 화합물이 하기 화학식 (IV)의 화합물을 하기 화학식 (VI)의 화합물과 반응시킨 후 임의의 보호기를 제거하고 임의로 제약상 허용되는 염을 형성시켜서 제조된다.
＜화학식 IV＞
상기식에서, R1, R2, R', R" 및 A는 화학식 (I)에서 정의된 바와 같다(임의의 반응성 관능기를 보호).
적합하게는, 화학식 (IV)의 화합물과 화학식 (VI)의 화합물 사이의 반응은 비양성자성 용매내에서 디에틸 아조디카르복실레이트 및 트리페닐포스핀의 존재하에 수행된다.
부가적으로, 화학식 (I)의 특정 화합물이 하기 화학식 (IV)의 화합물을 하기 화학식 (VII)의 화합물과 반응시킨 후 임의의 보호기를 제거하고 임의로 제약상 허용되는 염을 형성시켜서 제조된다.
＜화학식 IV＞
상기식에서, R1, R2, R" 및 A는 화학식 (I)에서 정의된 바와 같다(임의의 반응성 관능기를 보호).
적합하게는, 화학식 (IV)의 화합물과 화학식 (VII)의 화합물 사이의 반응은 비양성자성 용매내에서 디에틸 아조디카르복실레이트 및 트리페닐포스핀의 존재하에 수행된다.
화학식 (I)의 화합물은 본원에 참고문헌으로 포함되어 있는 본디넬(Bondinell)등의 PCT 출원 제WO97/01540(국제출원번호 제PCT/US96/11108호; 1997년 1월 16일 공고)호에 기재된 방법에 의하여 제조된다.
또한, 화학식 (I)의 화합물은 하기에 상세히 기재되어 있는 도표들에 기재되어 있는 것과 유사한 방법으로 제조된다.
도표 I
a) 10% Pd/C, HOAc; b) SOCl2, 톨루엔; c) AlCl3, CH2Cl2
도표 I은 화학식 (I)의 화합물의 제조에 유효한 중간체의 제조법을 예시한다.
도표 II
a) LiN(TMS)2, 에틸브로모아세테이트; b) 존스 시약, OsO4; c) H2, 10% Pd/C, HOAc; d) C2O2Cl2, DMF; e) AlCl3, CH2Cl2, RT; f) H2, 10% Pd/C, HOAc
도표 II도 화학식 (I)의 화합물의 제조에 유용한 중간체의 제조법을 예시한다.
도표 III
a) EtOAc/LiHMDS, THF; b) H2, 10% Pd/C, 진한 HCl, AcOH; c) EtSH, AlCl3, CH2Cl2; d) 2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]-4-니트로피리딘-N-옥시드, DEAD, (Ph)3P; e) NaOEt, EtOH; f) 시클로헥센, 10% Pd/C, EtOH; g) 1.0 N NaOH, EtOH; h) HCl
도표 III은 화학식 (I)의 화합물의 제조법을 예시한다. 에틸 아세테이트를 예를 들면 리튬 디이소프로필아미드(LDA) 또는 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드(LiHMDS)와 같은 적절한 아미드 염기에 노출시켜서생성시킬 수 있는 에틸 아세테이트의 에놀레이트와 III-1(도표 I-3의 화합물)을 알돌 타입의 반응을 시켜서 III-2를 얻는다. THF가 예를 들면 HMPA 또는 TMEDA와 같은 다양한 첨가제의 존재하에서 사용되는 경우가 자주 있지만, 종종, THF가 알돌 반응의 용매로 선택된다. III-3(도표 II-6 화합물)을 생성시키기 위한 III-2의 반응은 HCl과 같은 무기산의 존재하의 아세트산과 같은 적절한 용매내에서 예를 들면 활성 탄소상의 팔라듐 금속(Pd/C)와 같은 적절한 촉매를 통한 가수소분해에 의하여 수행될 수 있다. 다른 한편으로, 이러한 환원반응은 Orfanopoulos와 Smonou(Synth. Commun. 1988, 833)의 일반적인 방법에 의하여 보론 트리플루오리드 에테레이트의 존재하에서 III-2를 트리에틸실란으로 처리하여 수행될 수 있다. III-4를 생성시키기 위하여 III-3의 메틸 에테르를 제거하는 것은 예를 들면 CH2Cl2와 같은 불활성 용매 중에서 BBr3로 수행되거나 또는 바람직하게는 CH2Cl2와 같은 불활성 용매 중에서 에탄티올 및 AlCl3와 반응시켜서 수행할 수 있다. 메틸 에테르를 제거하는 기타 유용한 방법은 Greene의 문헌[Protective Groups in Organic Synthesis; Jhon Wiley and Sons]에 기재되어 있다. 도표 3의 화합물 4(III-4)는 미쯔노부(Mitsunobu)-타입 커플링 반응(Organic Reactions 1992, 42, 335-656; Synthesis 1981, 1-28)에서 2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]-4-니트로피리딘-N-옥시드와 반응하여 III-5를 생성시킨다. 상기 반응은 디에틸 아조디카르복실레이트와 트리페닐포스핀 사이에서형성된 복합체에 의하여 매개되고 예를 들면 THF, CH2Cl2또는 DMF와 같은 비양성자성 용매내에서 수행된다. 화합물 III-5는 적절한 알코올의 알칼리금속 염과 반응하여 III-6을 생성시킨다. 적절한 알칼리 금속은 리튬, 나트륨, 칼륨 및 세슘을 포함하고 상기 치환 반응에 사용된 알코올은 용매로서 일반적으로 사용된다. 알코올의 알칼리 금속염을 형성하는 방법은 당업자에게 잘 알려져 있다. III-6의 피리딘-N-옥시드 부분은 예를 들면 메탄올, 에탄올 또는 2-프로판올과 같은 불활성 용매내에서 팔라듐 촉매(바람직하게는 활성 탄소 상의 팔라듐 금속)를 사용하여 수소 첨가 반응 조건하에서 상응하는 피리딘 III-7로 환원된다. 시클로헥센, 1,4-시클로헥사디엔, 포름산, 및 포타슘 포르메이트 또는 암모늄 포르메이트와 같은 포름산의 염이 이러한 형태의 반응에서 수소 전달제로서 통상적으로 사용된다. III-7의 에틸 에스테르는 예를 들면 THF수용액 중의 LiOH 또는 메탄올이나 에탄올 수용액 중의 NaOH와 같은 염기 수용액을 사용하여 가수분해되고, 중간체 카르복실레이트 염은 예를 들면 TFA 또는 HCl과 같은 적절한 산으로 산성화하여 카르복실산 III-8을 얻는다. 또 다른 한편으로, 상기 중간체 카르복실레이트 염은 단리될 수 있고, 원한다면, 유리 카르복실산의 카르복실레이트 염은 당업자에게 잘 알려진 방법으로 제조될 수 있다.
도표 IV
a) NaH, 2-[N-(3-메탄술포닐옥시-1-프로필)-N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-N-옥시드, DMSO; b) TFA, CH2Cl2; c) 도표 III 참조.
도표 IV는 화학식 (I)의 화합물의 대안적인 제조법을 기재한다. 화합물 IV-1은 극성 비양자성 용매(일반적으로 THF, DMF, DMSO 또는 그의 혼합물)중에서 염기(바람직하게는 소듐 히드리드 또는 포타슘 히드리드와 같은 알칼리 금속 히드리드)와 반응하여 상응하는 알칼리 금속 페녹시드를 생성시킨다. 또 다른 한편으로, 예를 들면 LDA 또는 헥사메틸디실라잔의 리튬, 나트륨 또는 칼륨 염과 같은 알칼리 금속 아미드가 탈-양성자 반응에 사용될 수 있다. 상기 중간체 페녹시드는 일반적으로 단리하지 않지만, 예를 들면 2-[N-(3-메탄술포닐옥시-1-프로필)-N-(tert-부톡시카르보닐)-아미노]피리딘-N-옥시드와 같은 적절한 친전자체와 반응기 내 반응하여 커플링된 생성물 IV-2를 생성시킨다. IV-2 중의 상기 tert-부톡시카르보닐 보호기는 1,4-디옥산 중의 4 M HCl 또는 CH2Cl2중의 TFA와 같은 산성 조건하에서 제거되어 IV-3을 생성시킨다. 상기 tert-부톡시카르보닐 보호기의 제거 조건은 당업자에게 잘 알려져 있고, 몇몇 유용한 방법이 그린(Greene)의 문헌[Protective Groups in Organic Synthesis]와 같은 기본적인 참고 문헌에 기재되어 있다. IV-3은 이어서 도표 III에서 약술한 공정에 따라 IV-4로 변환된다.
도표 V
a) PhOH, Cu, K2CO3; b) 황, 모르폴린; c) KOH, H2O, i-PrOH; d) SOCl2, 벤젠; e) AlCl3, CH2Cl2; f) EtOAc, LiN(TMS)2, TMEDA, THF; g) Et3SiH, BF3, OEt2, CH2Cl2; h) H2, Pd/C, EtOH; i) BBr3, CH2Cl2
상업적으로 구입 가능한 2-플루오로-4-메톡시아세토페논 (V-1)은 예를 들면 K2CO3와 같은 적절한 염기 및 구리 금속의 존재하에서 예를 들면 페놀과 같은 알코올과 반응하여 디아릴 에테르 V-2를 생성시킨다. 해리스(Harris; J. Med. Chem. 1982, 25, 855)의 일반적인 방법에 따라서 황 및 적절한 1차 또는 2차 아민(바람직하게는 모르폴린)으로 처리하면, V-2는 고전적인 Willgerodt-Kindler 반응으로 V-3으로 변환된다. 상기 방법에 의하여 얻어진 티아아미드는 MeOH 수용액, EtOH 또는 i-PrOH 수용액과 같은 알코올 수용액 용매 중에서 알칼리 금속 히드록시드(적절하게는 KOH)와 반응하여 상응하는 카르복실산 V-4로 가수분해된다. 카르복실산 V-4는 당업자에게 잘알려진 조건에 따라서 SOCl2또는 옥살릴 클로리드 중의 하나와 반응하여 상응하는 애시드 클로리드로 변환된다. 이러한 애시드 클로리드들을 CH2Cl2또는 CS2와 같은 불활성 용매중에서 AlCl3또는 SnCl4와 같은 적절한 프리델-크라프츠 촉매로 처리하는 것은 환식 케톤 V-5를 제공한다. 또 다른 한편으로, 산 V-4는 예를 들면 폴리포스포릭 애시드와 같은 산 조건하에서 케톤 V-5로 직접 변환될 수 있다. 예를 들면 리튬 디이소프로필아미드(LDA) 또는 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드(LiHMDS)와 같은 적절한 아미드 염기에 에틸 아세테이트를 노출시켜서 생성될 수 있는 에틸 아세테이트의 에놀레이트와 V-5의 알돌 타입 반응은 V-6를 생성시킨다. THF가 예를 들면 HMPA 또는 TMEDA와 같은 다양한 첨가제의 존재하에서 자주 사용되기는 하지만, 종종 THF가 알돌 반응의 용매로 선택되기도 한다. V-7을 생성하기 위한 V-6의 환원은 Orphanopoulos 및 Smonu(Synth. Commun. 1988, 833)의 일반적인 방법에 의하여 보론 트리플루오리드 에테레이트의 존재하에서 V-6를 트리에틸실란으로 처리하여 수행될 수 있다. 알코올을 제거함에 의하여 발생하는 임의의 올레핀성 부산물은 MeOH 또는 EtOH와 같은 적절한 용매중에서 예를 들면, 활성 탄소 상의 팔라듐과 같은 적절한 촉매에 의한 수소첨가 반응에 의하여 환원된다. 또 다른 한편으로, V-7을 생성시키기 위한 V-6의 환원은 HCl과 같은 무기산의 존재하의 가수소분해반응에 의하여 수행될 수 있다. 통상적으로, 이러한 반응은 Pd/C에 의하여 촉매되고 아세트산 중에서 최적으로 수행된다. V-8을 생성하기 위한 V-7의 메틸 에테르의 제거는 예를 들면 CH2Cl2와 같은 불활성 용매 중에서 BBr3로 수행하거나 또는 불활성 용매(바람직하게는 CH2Cl2)중에서 에탄티올 및 AlCl3와 반응시켜서 수행될 수 있다. 메틸 에테르 제거를 위한 기타 유용한 방법이 그린의 문헌[Protective Groups in Organic Synthesis; John Wiley and Sons]에 기재되어 있다. V-8은 이어서 도표 III에 약술된 공정에 따라 화학식 (I)의 화합물로 변환된다.
상기 화합물의 산 부가 염은 모 화합물 및 염산, 브롬산, 불소산, 황산, 인산, 초산, 트리프루오로아세트산, 말레산, 숙신산 또는 메탄술폰산과 같은 과량의 산으로부터 적절한 용매내에서 기본적인 방법으로 제조된다. 일정한 화합물은 허용가능한 내부염 및 쯔비터이온을 형성한다. 양이온성 염은 모 화합물을 히드록시드, 카르보네이트 또는 알콕시드와 같이 적절한 양이온을 함유하는 과량의 염기성 시약으로 처리하거나 또는 적절한 유기 아민으로 처리하여 제조된다. Li+, Na+, K+, Ca++, Mg++및 NH4 +와 같은 양이온이 제약상 허용되는 염에 존재하는 양이온의 구체예이다.
본원발명은 또한 화학식 (I)의 화합물 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 따라서, 화학식 (I)의 화합물은 약제 제조에 사용될 수 있다. 상기와 같이 제조된 화학식 (I)의 화합물의 제약 조성물은 비경구 투여용 용액 또는 동결건조된 분말로 제제될 수 있다. 분말은 적절한 희석제 또는 기타 제약상 허용되는 담체를 사용전에 부가하여 재생될 수 있다. 액제는 완충된 등장의 수용액일 수 있다. 적절한 희석제의 예로는 일반적인 등장 염수, 물중의 표준 5% 덱스트로오스 또는 완충된 소듐이나 암모늄 아세테이트 용액이 있다. 이러한 제제는 특히 비경구 투여에 적합하지만 경구 투여에 사용될 수도 있고 또는 흡입을 위한 계량된 분량의 흡입기 또는 분무기 내에 함유될 수 있다. 폴리비닐피롤리돈, 젤라틴, 히드록시 셀룰로오스, 아카시아, 폴리에틸렌 글리콜, 만니톨, 염화나트륨 또는 시트르산 나트륨과 같은 부형제를 부가하는 것이 바람직할 수 있다.
또 다른 한편으로, 이들 화합물은 경구 투여용으로 캅셀화, 정제화되거나 또는 에멀젼이나 시럽으로 제조될 수 있다. 제약상 허용되는 고상 또는 액상 담체가 조성물을 강화시키거나 안정화시키기거나 또는 조성물의 제조를 용이하게 하기 위하여 부가될 수 있다. 고상 담체로는 전분, 락토오스, 칼슘 설페이트 디히드레이트, 테라 알바(terra alba), 마그네슘 스테아레이트 또는 스테아르산, 활석, 펙틴, 아카시아, 한천을 포함한다. 액상 담체는 시럽, 땅콩 기름, 올리브 기름, 염수 및 물을 포함한다. 상기 담체는 또한 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 서방형 물질을 단독으로 또는 왁스와 함께 포함할 수 있다. 고상 담체의 양은 가변적이지만, 바람직하게는 단위 분량 당 약 20 mg 내지 약 1 g 사이일 것이다. 제약상의 제제는 정제 형태를 위한 밀링, 혼합, 과립화 및 필요한 경우의 압착 또는 경질 젤라틴 캅셀 형태를 위한 밀링, 혼합 및 충전을 포함하는 제약상의 통상적인 기술에 의하여 제조된다. 액상 담체가 사용되는 경우 제제는 시럽, 엘릭시르, 에멀젼 또는 수성 또는 비수성 현탁액의 형태일 것이다. 이러한 액제는 직접적으로 p.o. 투여되거나 연질 젤라틴 캅셀내에 충전될 수 있다.
직장 투여를 위하여, 본원발명의 화합물은 코코아 버터, 글리세린, 젤라틴 또는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 부형제와 혼합되어 좌약으로 성형될 수도 있다.
본원에 기재된 화합물은 비트로넥틴 수용체의 길항 물질이고 근원적인 병상이 비트로넥틴 수용체와 상호작용하는 리간드 또는 세포에 의하여 유발되는 것인 질병의 치료에 유효하다. 예를 들면, 이러한 화합물은 골 기질의 손실이 병상을 유발하는 질환의 치료에 유효하다. 따라서, 본원발명의 화합물은 골다공증, 하이퍼파라티로이디즘, 파제트병, 악성 칼슘과다혈증, 뼈의 전이에 의하여 생성되는 오스테올리틱 레젼, 고정 또는 성호르몬 결핍에 기인한 뼈 손실의 치료에 유효하다. 본원발명의 화합물은 또한 항종양제, 항-맥관형성제, 함염증제 및 항전이제로서의 유용성을 가지며 죽상경화증 및 재협착증의 치료에 유효한 것으로 믿어진다.
상기 화합물은 약물의 농도가 골 용식 또는 기타 이러한 징후를 억제하기에 충분하게 하는 방식으로 환자에게 경구 또는 비경구의 방법으로 투여된다. 상기 화합물을 함유하는 제약 조성물은 환자의 상태에 부합되는 방식으로 약 0.1 내지 약 50 mg/kg 사이의 경구용 분량으로 투여된다. 바람직하게는 경구용 분량은 약 0.5 내지 약 20 mg/kg 이다. 시급한 치료를 위해서는, 비경구 투여가 바람직하다. 근육 내 대형환제의 주입이 또한 유효하기는 하지만, 물 또는 일반적인 염수 중의 5% 덱스트로스 중의 상기 펩티드 또는 적절한 부형제를 갖는 유사한 제제의 근육 내 주입이 가장 유효하다. 통상적으로, 비 경구용 분량은 약 0.01 내지 약 100 mg/kg이고, 바람직하게는 0.1과 20 mg/kg의 사이이다. 상기 화합물은 1 일 총 분량이 약 0.4 내지 약 400 mg/kg/일의 수준에 이르도록 1 일에 1 내지 4 회 투여된다. 상기 화합물의 투여의 정확한 수준 및 방법은 상기 제제의 혈중 수준과 치료 효과를 갖기 위하여 요구되는 농도를 비교하여 본 기술 분야의 통상의 기술자가 용이하게 결정할 수 있다.
본원발명은 화학식 (I)의 화합물 및 비스포스포네이트(즉, 알렌드로네이트), 호르몬 대체 치료요법, 항-에스트로겐 또는 칼시토닌과 같은 기타 골 용식 억제제를 단계별로 투여하거나 물리적 조합으로 투여하는 것을 포함하는, 골다공증을 치료하거나 뼈 손실을 억제하는 방법을 더 제공한다. 또한, 본원발명은 본원발명의 화합물 및 골형태발생 단백질, 이프로플라본과 같은 동화작용 시약을 사용하는, 뼈 손실을 억제하고/또는 뼈 덩어리의 증가에 유효한 치료 방법을 제공한다.
또한, 본원발명은 화학식 (I)의 화합물 및 항종양제를 단계별로 또는 물리적인 조합으로 투여하는 것을 포함하는 종양의 성장을 억제하는 방법을 제공한다. 토포테칸, 이리노테칸 및 9-아미노캄프토테신과 같은 캄프토테신 유사체 류, 및 시스플라틴, 오르마플라틴 및 테라플라틴과 같은 백금 배위 착물의 화합물은 잘 알려진 항종양제 군이다. 캄프토테신 유사체류의 화합물은 본원에 참고문헌으로 포함되어 있는 미국특허 제5,004,758호, 동 제4,604,463호, 동 제4,473,692호, 동 제4,545,880호, 동 제4,342,776호, 동 제4,513,138호, 동 제4,339,276호, 유럽특허공고 제0 418 099호 및 동 제0 088 642호, 와니(Wani)등의 문헌[J. Med. Chem. 1986, 29, 2358], 와니(Wani)등의 문헌[J. Med. Chem. 1980, 23, 554], 와니(Wani)등의 문헌[J. Med. Chem. 1987, 30, 1774], 및 니타(Nitta) 등의 문헌[Proc. 14th International Congr. Chemotherapy., 1985, Anticancer Section I. 28]에 기재되어 있다. 상기 백금 배위 착물(시스플라틴)은 Bristol Myers-Squibb Corporation 사에서 등록상표 Platinol의 제품으로 구입가능하다. 시스플라틴에 대한 유효한 제제가 본원발명에 참고문헌으로 포함된 미국특허 제5,562,925호 및 동 제4,310,515호에 기재되어 있다.
화학식 (I)의 화합물 및 항종양제를 단계적으로 또는 물리적인 조합으로 투여하는 것을 포함하는 종양 성장 억제 방법에서, 예를 들면 시스플라틴과 같은 백금 배위 착물은 느린 정맥내 주입을 사용하여 투여될 수 있다. 바람직한 담체는 만니톨을 함유하는 덱스토로오스/염수 용액이다. 백금 배위 화합물의 분량 스케쥴은 치료 과정 당 신체 표면 면적의 제곱 미터 당 약 1 내지 약 500 mg(mg/m2)를 기준으로 할 수 있다. 백금 배위 화합물의 주입은 매 주 1 내지 2 회일 수 있고 매 주의 치료는 몇 차례 반복될 수 있다. 비경구 투여에서 캄프톤테신 유사체류의 화합물을 사용하는 경우, 일반적으로 사용되는 치료 과정은 연속적으로 약 5 일간 매 일 신체 표면적의 약 0.1 내지 약 300.0 mg/m2이다. 가장 바람직하게는, 토포테칸의 경우 사용되는 치료 과정은 연속적으로 약 5 일간 신체 표면적의 약 1.0 내지 약 2.0 mg/m2이다. 바람직하게는, 치료 과정은 약 7 일 내지 약 28 일의 간격을 두고 적어도 한 번 반복된다.
제약 조성물은 화학식 (I)의 화합물 및 항종양제 모두를 동일한 용기내에서 제제할 수 있지만, 상이한 용기내의 제제가 바람직하다. 양자의 제제가 용액 형태로 제공되는 경우, 그들은 동시 투여를 위한 주입/주사 시스템 또는 직렬 배열로 함유될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 및 항종양제의 동시 또는 이시 투여의 편의를 위하여, 상기에 기재된 바와 같이 비경구 투여을 위한 화학식 (I)의 화합물의 유효량 및 상기에 기재된 바와 같은 비경구 투여를 위한 항종양제의 유효량을 각각 갖는 별개의 병, 백, 바이알 또는 기타 용기를 상자, 종이상자 또는 기타 용기와 같은 단일 용기 내에 포함하는 키트가 제조된다. 이러한 키트는 예를 들면 별개의 용기 또는 동일 용기내의 제약상의 제제 모두(임의적으로 동결건조된 충전물로서) 및 재생을 위한 용액의 용기를 포함할 수 있다. 이것의 변형은 재생용 용액 및 사용하기에 앞서 혼합될 수 있게 하는 단일 용기내의 두 개의 쳄버내의 동결건조된 충전물을 포함하는 것이다. 이러한 배치를 가지고, 항종양제 및 본원발명의 화합물은 두 개의 용기로서 분리되어 포장되거나 또는 분말로서 서로 동결건조되고 단일 용기내에 제공될 수 있다.
두 제제가 용액의 형태로 제공되는 경우, 그들은 동시 투여를 위한 주입/주사 시스템 또는 직렬 배치 내에 함유될 수 있다. 예를 들면, 화학식 (I)의 화합물은 i.v. 주사 가능한 형태 또는 튜브를 통하여 제2 주입 백 내의 항종양제에 직렬로 연결된 주입 백일 수 있다. 이러한 시스템을 사용하여, 환자는 화학식 (I)의 화합물의 초기 거환-형태의 주사 또는 주입에 이어서 항종양제의 주입을 수용할 수 있다.
상기 화합물들은 주어진 약리 효과를 가질 것이 요구되는 화합물의 농도를 결정하기 위하여 몇몇 생물학적 아세이 중 하나로 시험될 수 있다.
비트로넥틴 결합의 억제
αvβ3에 결합된 고체상 [3H]-SK＆F-107260: 완충액 T(2 mM CaCl2및 1% 옥틸글루코시드를 함유) 중의 인간 태반 또는 인간 혈소판 αvβ3(0.1-0.3 mg/mL)을 1 mM CaCl2, 1 mM MnCl2, 1 mM MgCl2(완충액 A) 및 0.05% NaN3를 함유하는 완충액 T로 희석한 후 즉시 96-웰(well) ELISA 플레이트(Corning, New York, NY)에 하나의 웰당 0.1 mL씩 부가하였다. 0.1 내지 0.2 μg의 αvβ3을 각각의 웰에 부가하였다. 플레이트를 4℃에서 밤새도록 인큐베이트시켰다. 실험 당시에, 상기 웰을 완충액 A로 한번 세척하고 동일한 완충액 내에서 0.1 mL의 3.5% 소 혈청 알부민과 함께 실온에서 1시간 동안 인큐베이트시켰다. 인큐베이션 후, 웰을 완전히 흡출한 후 0.2 mL의 완충액 A로 두 번 세척하였다.
화합물을 100% DMSO에 용해시켜서 2 mM 원액을 얻고, 이를 결합 완충액(15 mM 트리스-HCl(pH 7.4), 100 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MnCl2, 1 mM MgCl2)으로 희석하여 최종 화합물 농도 100 μM을 얻었다. 이어서, 이 용액을 요구되는 최종 화합물 농도로 희석하였다. 비표지(unlabeled) 길항물질(0.001-100 μM)의 다양한 농도를 3 배수의 웰에 부가한 후 5.0 nM의 [3H]-SK＆F-107260(65-86Ci/mmol)을 부가하였다.
상기 플레이트를 실온에서 1 시간 인큐베이트시켰다. 인큐베이션 후, 웰을 완전히 흡출한 후 얼음 냉각된 완충액 A 0.2 mL로 웰 마다 한번씩 세척하였다. 수용체를 0.1 ml의 1% SDS로 용해시키고 상기 결합 [3H]-SK＆F-107260를 Beckman LS 액체 섬광 계수기 내에 0.3 mL의 Ready Safe를 부가한 액체 섬광 계수법으로 40%의 효율로 측정하였다. [3H]-SK＆F-107260의 비특이적 결합은 2 μM의 SK＆F-107260 존재하에서 측정하였고 일관되게 총 방사성표지 리간드의 입력치의 1% 미만이었다. IC50([3H]-SK＆F-107260의 50% 결합 억제에 대한 길항물질의 농도)는 LUNDON-2 프로그램으로 부터 변형된 비선형 최소 자승 곡선-피팅(fitting) 경로에 의하여 측정하였다. Ki(길항물질 해리 상수)는 Ki=IC50/(1+L/Kd)의 수식에 따라 계산하였다(여기에서, L 및 Kd는 각각 [3H]-SK＆F-107260의 농도 및 해리 상수임).
본원발명의 화합물은 약 2.5 내지 약 0.001 미코몰라(micomolar)의 농도범위에서 SK＆F-107260에 대한 비트로넥틴 결합을 억제한다.
본원발명의 화합물은 또한 EP 528587에 개시된 막공(pit) 형성 아세이(랫 용골세포 대신에 인간 용골세포를 사용하여 수행될 수도 있음) 및 론스키(Wronski) 등의 문헌[Cells and Materials 1991, Sup. 1, 69-74]에 기재된 난소적출된 랫(rat) 모델과 같은 뼈 형성 억제를 측정하기 위한 본 기술 분야의 표준적인 아세이에서 뼈 용식을 생체외 및 생체내 시험하였다.
혈관 평활근 세포 전이 아세이
랫 또는 인간 대평활근 세포를 사용하였다. 상기 세포 전이는 Transwell 세포 배양 쳄버내에서 8 um의 공극을 갖는 폴리카르보네이트 막(Costar)를 사용항 관측하였다. 필터의 하부 표면을 비트로넥틴으로 코팅하였다. 세포를 2.5 내지 5.0 x 106세포/mL의 농도에서 0.2% 소 혈청 알부민으로 보충된 DMEM 내에서 현탁시키고 20℃에서 20 분 동안 다양한 농도에서 시험 화합물로 침전시켰다. 상기 용매 단독을 대조군으로 사용하였다. 세포의 현탁액 0.2 mL를 상기 쳄버의 상부 격실내에 거치시켰다. 0.6 mL의 DMEM을 함유하는 하부 격실을 0.2% 소 혈청 알부민으로 보충하였다. 95% 공기/5% CO2의 대기중에서 24 시간 동안 37℃에서 인큐베이트시켰다. 인큐베이션 후, 필터의 상부 표면상의 전이되지 않은 세포를 온화하게 긁어내어 제거하였다. 이어서 필터를 메탄올 내에 고정시키고 10% Giemsa 염료로 염색하였다. 전이를 a) 필터의 하부 표면으로 전이한 세포의 수를 세거나 또는 b)염색된 세포를 10% 아세트산으로 추출한 후 600 nM 에서 흡광도를 측정하여 측정하였다.
티로파라티로이덱토마이즈드(Thyroparathyroidectomized) 랫 모델
각각의 실험 군은 5-6 성숙한 수컷 Spargue-Dawley 랫(250-400 g 체중)으로 구성한다. 상기 랫은 사용 7 일 전에 티로파라티로이덱토마이즈 하였다(납품업자인 Taconic Farms에서 수행). 모든 랫은 매 3 일 티록신의 치환 분량을 수용하였다. 쥐를 받자 마자 헤파린으로 처리한 튜브로 꼬리 정맥천자에 의하여 뽑아낸 전체 혈액으로 즉시 순환 이온화 칼슘 수준을 측정하였다. 이온화 Ca 수준(Ciba-Corning 모델 634 칼슘 pH 분석기로 측정)이 ＜1.2 mM/L인 랫을 포함시켰다. 각각의 랫에 각각 시험물질의 전달 및 혈액 표본 추출을 위한 내부 정맥 및 동맥 도관을 장착하였다. 이어서 랫에 무-칼슘 먹이 및 탈염수 식이요법을 시행하였다. 기준 Ca 수준을 측정하고 각각의 랫에 대조 담체 또는 인간 부갑상선 호르몬 1-34 펩티드(hPTH1-34, 분량 0.1% 소 혈청 알부민 염수 중의 1.25 ug/kg/h, Bachem, Ca) 또는 hPTH1-34 및 시험 물질의 혼합물 중의 하나를 외부 시린지 펌프를 사용하는 정맥 도관을 통하여 연속적인 정맥내 주입을 통하여 투여하였다. 각각의 랫의 칼세믹(calcemic) 응답을 6-8 시간의 주입 기간 동안 2 시간 간격으로 측정하였다.
인간 용골세포 용식 및 부착 아세이
막공 용식 및 부착 아세이를 오스테오클라스토마(osteoclastoma) 조직 세포로부터 유도된 정상적인 인간 용골세포를 사용하여 개시하여 표준화하였다. 아세이 1은 레이저 동초점 현미경법에 의한 용골세포 막공 부피의 측정을 위하여 개시하였다. 아세이 2는 콜라겐 파편(용식도중에 방출되는)을 길항 ELISA에 의하여 측정하는 고처리량 스크린으로서 개시하였다.
아세이 1(레이져 동초점 현미경을 사용)
● 인간 오스테오클라스토마-유래 세포 현탁액의 분취량을 액체 질소 저장으로부터 회수하여, 37℃에서 신속히 데우고 RPMI-1640 배지 내에서 원심분리(1000 rpm, 4℃에서 5분)로 1 회 세척한다.
● 상기 배지를 흡출하고 이어서 희석된 1:3 RPMI-1640 배지에서 쥐과 동물의 항-HLA-DR 항체로 치환한다. 상기 현탁액을 얼음상에서 30 분간 인큐베이트시키고 자주 혼합한다.
● 상기 세포를 냉각된 RPMI-1640으로 2 회 세척한 후 원심분리하고(1000 rpm, 4℃에서 5 분) 이어서 세포를 무균 15 ml 원심분리 튜브로 옮긴다. 단핵 세포의 수를 개선된 Neubauer 계수 쳄버내에서 측정한다.
● 염소(goat) 항-마우스 IgG(Dynal, Great Neck, NY)로 코팅된 충분한 자성 비이드(bead)(5/단핵세포)를 그들의 보관 병에서 회수하여 신선한 배지(독성 아지드 방부제를 씻어냄) 5 ml 내에 거치한다. 상기 배지를 자석 상의 고정 비이드로 제거하고 신선한 배지로 대체한다.
● 상기 비이드를 세포와 혼합하고 상기 현탁액을 얼음상에서 30 분간 인큐베이트시킨다. 상기 현탁액을 자주 혼합한다.
● 비이드-코오팅된 세포를 자석 위에 고정시키고 잔류하는 세포(용골세포가 풍부한 분획)를 무균 50 ml 원심분리 튜브내로 따라낸다.
● 신선한 매질을 비이드-코오팅된 세포에 부가하여 임의의 포획된 용골세포를 전이시킨다. 이러한 세척 공정은 10 회 반복한다. 상기 비이드-코오팅된 세포를 버린다.
● 생명력 있는 용골세포를 생존 세포를 표지하기 위한 플루오레세인 디아세테이트를 사용하여 계수 쳄버내에서 측정한다. 구멍이 큰 1 회용 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 표본을 상기 쳄버에 부가한다.
● 용골세포를 원심분리기를 사용하여 작은 덩어리로 만들고 밀도를 EMEM 배지(용골세포의 수는 종양 마다 다름)내에서 적절한 수로 조절하고, 10% 송아지 태아 혈청 및 1.7 g/리터의 중탄산나트륨으로 보충한다.
● 상기 세포 현탁액의 3 ml 분취량(화합물 치료 당)을 15 ml 원심분리 튜브내로 따라낸다. 상기 세포를 원신분리로 작은 덩어리로 만든다.
● 각각의 튜브에, 적절한 화합물 치료의 3 ml를 부가한다(EMEM 배지 중의 50 uM로 희석). 또한 적절한 담체 대조군, 양성 대조군(100 ug/ml로 희석된 항-비트로넥틴 수용체 쥐과 동물의 단일클론 항체 [87MEM1]) 및 이소타입 대조군(100 ug/ml로 희석된 IgG2)을 포함한다. 상기 표본을 37℃에서 30 분간 인큐베이트시킨다.
● 상기 세포의 0.5 ml 분취량을 48-웰 플레이트 내의 무균 상아질 조각 위에 파종하고 37℃에서 2 시간 동안 인큐베이트시킨다. 각각의 처리를 4 번씩 스크린 한다.
● 상기 조각을 따뜻한 6 회의 PBS(6-웰 플레이트 내의 10 ml/웰) 내에서 세척한 후 상기 화합물 처리 또는 대조 표본을 함유하는 신선한 배지 내에 거치시킨다. 표본을 37℃에서 48 시간 동안 인큐베이트시킨다.
타르타르 내성 애시드 포스파타아제(Tartrate resistant acid phosphatase; TRAP) 공정(상기 용골 세포 계통의 세포에 대한 선택적인 염색)
● 부착된 용골세포를 함유하는 뼈 조각을 포스페이트 완충된 염수 내에서 세척하고 2% 글루테르알데히드(0.2 M 소듐 카코딜레이트 중에서) 내에 5 분간 고정시켰다.
● 이어서, 이들을 물 중에서 세척하고 37℃의 TRAP 완충액(N,N-디메틸포름아미드 내에 용해되고 10 mM 소듐 타르트레이트를 함유하는 0.25 M 시트레이트 완충액(pH 4.5)과 혼합된 나프톨 AS-BI 포스페이트 0.5 mg/ml) 내에서 4 분간 인큐베이트시킨다.
● 차가운 물에서 세척한 후에, 상기 조각을 1 mg/ml 고정된 적색 석류석(fast red garnet)을 함유하는 냉각된 아세테이트 완충액(0.1 M, pH 6.2)에 담그고 4℃에서 4 분간 인큐베이트시킨다.
● 과량의 완충액은 흡출하고, 상기 조각을 공기 중에서 건조한 후 물 중에서 세척한다.
● TRAP 양성 용골세포(적벽돌색/자주색 침전)을 명실 현미경법으로 측정한 후 초음파 파쇄로 상아질 표면으로부터 제거한다.
● 막공 부피를 Nikon/Lasertec ILM21W 동초점 현미경을 사용하여 측정하였다.
아세이 2(ELISA 판독을 사용)
인간 용골세포를 아세이 1의 초기 9 단계에 기재된 바와 같이 화합물 스크린을 수행하기 위하여 제조한다. 명확하게 하기 위하여, 이들 단계는 하기와 같이 반복한다.
● 인간 오스테오클라스토마-유래 세포 현탁액의 분취량을 액체 질소 저장으로부터 회수하여, 37℃에서 신속히 데우고 RPMI-1640 배지 내에서 원심분리(1000 rpm, 4℃에서 5 분)로 1 회 세척한다.
● 상기 배지를 흡출하고 이어서 희석된 1:3 RPMI-1640 배지에서 쥐과 동물의 항-HLA-DR 항체로 치환한다. 상기 현탁액을 얼음 상에서 30 분간 인큐베이트시키고 자주 혼합한다.
● 상기 세포를 냉각된 RPMI-1640으로 2 회 세척한 후 원심분리하고(1000 rpm, 4℃에서 5 분) 이어서 세포를 무균 15 ml 원심분리 튜브내로 옮긴다. 단핵 세포의 수를 개선된 Neubauer 계수 쳄버내에서 측정한다.
● 염소(goat) 항-마우스 IgG(Dynal, Great Neck, NY)로 코팅된 충분한 자성 비이드(bead)(5/단핵세포)를 그들의 보관 병에서 회수하여 신선한 배지(독성 아지드 방부제를 씻어냄) 5 ml 내에 거치한다. 상기 배지를 자석 상의 고정 비이드로 제거하고 신선한 배지로 대체한다.
● 상기 비이드를 세포와 혼합하고 상기 현탁액을 얼음 상에서 30 분간 인큐베이트시킨다. 상기 현탁액을 자주 혼합한다.
● 비이드-코오팅된 세포를 자석 위에 고정시키고 잔류하는 세포(용골세포가 풍부한 분획)를 무균 50 ml 원심분리 튜브내로 따라낸다.
● 신선한 매질을 비이드-코오팅된 세포에 부가하여 임의의 포획된 용골세포를 전이시킨다. 이러한 세척 공정은 10 회 반복한다. 상기 비이드-코오팅된 세포를 버린다.
● 생명력 있는 용골세포를 생존 세포를 표지하기 위한 플루오레세인 디아세테이트를 사용하여 계수 쳄버 내에서 측정하였다. 구멍이 큰 1 회용 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 표본을 상기 쳄버에 부가한다.
● 용골세포를 원심분리기를 사용하여 작은 덩어리로 만들고 밀도를 EMEM 배지(용골세포의 수는 종양 마다 다름)내에서 적절한 수로 조절하고, 10% 송아지 태아 혈청 및 1.7 g/리터의 중탄산나트륨으로 보충한다.
상기 아세이 1에 기재된 방법과는 달리, 상기 화합물은 4 분량에서 스크린되어 하기에 약술된 바와 같이 IC50을 얻는다:
● 용골세포 제조물을 시험 화합물(4 분량) 또는 대조군과 함께 37℃에서 30분 동안 미리 인큐베이트시킨다.
● 이어서, 이들을 48-웰 세포 조직 배양 플레이트 내의 소 피질 뼈 조각 위에 파종하고 37℃에서 2 시간 더 인큐베이트시킨다.
● 뼈 조각을 6 번 교체되는 따뜻한 포스페이트 완충된 염수(PBS)내에서 세척하여 부착되지 않은 세포를 제거한 후, 신선한 화합물 또는 대조군을 함유하는 48-웰 플레이트의 웰로 되돌린다.
● 이어서 상기 세포 조직 배양 판을 37℃에서 48 시간 동안 인큐베이트시킨다.
● 각각의 웰로부터의 부유물을 각각의 튜브내로 흡출하고 용식 과정 동안에 방출되는 타입 I 콜라겐의 c-텔로펩티드를 감지하는 경합 ELISA 내에서 스크린한다. 이것은 타입 I 콜라겐의 a1-연쇄의 카르복시-말단 텔로펩티드내에 존재하는 8-아니노산 서열(Glu-Lys-Ala-His-Asp-Gly-Gly-Arg)과 특이적으로 반응하는 토끼 항체를 함유하는 상업적으로 구입가능한 ELISA(Osteometer, Denmark)이다. 결과를 담체 대조군과 비교되는 용식의 %억제로서 나타낸다.
인간 용골세포 부착 아세이
인간 용골세포를 상기 아세이 1의 초기 9단계에서 기재된 바와 같이 화합물 스크린을 수행하기 위하여 제조한다. 명확히 하기 위하여, 이들 단계를 하기에 반복한다.
● 인간 오스테오클라스토마-유래 세포 현탁액의 분취량을 액체 질소 저장으로부터 회수하여, 37℃에서 신속히 데우고 RPMI-1640 배지 내에서 원심분리(1000 rpm, 4℃에서 5 분)로 1 회 세척한다.
● 상기 배지를 흡출하고 이어서 희석된 1:3 RPMI-1640 배지에서 쥐과 동물의 항-HLA-DR 항체로 치환한다. 상기 현탁액을 얼음상에서 30 분간 인큐베이트시키고 자주 혼합한다.
● 상기 세포를 냉각된 RPMI-1640으로 2 회 세척한 후 원심분리하고(1000 rpm, 4℃에서 5 분) 이어서 세포를 무균 15 ml 원심분리 튜브내로 옮겼다. 단핵 세포의 수를 개선된 Neubauer 계수 쳄버내에서 측정한다.
● 염소(goat) 항-마우스 IgG(Dynal, Great Neck, NY)로 코팅된 충분한 자성 비이드(bead)(5/단핵세포)를 그들의 보관 병에서 회수하여 신선한 배지(독성 아지드 방부제를 씻어냄) 5 ml 내에 거치한다. 상기 배지를 자석 상의 고정 비이드로 제거하고 신선한 배지로 대체한다.
● 상기 비이드를 세포와 혼합하고 상기 현탁액을 얼음상에서 30 분간 성장시킨다. 상기 현탁액을 자주 혼합한다.
● 비이드-코오팅된 세포를 자석 위에 고정시키고 잔류하는 세포(용골세포가 풍부한 분획)을 무균 50 ml 원심분리 튜브내로 따라낸다.
● 신선한 매질을 비이드-코오팅된 세포에 부가하여 임의의 포획된 용골세포를 전이시킨다. 이러한 세척 공정은 10 회 반복한다. 상기 비이드-코오팅된 세포를 버린다.
● 생명력 있는 용골세포를 생존 세포를 표지하기 위한 플루오레세인 디아세테이트를 사용하여 계수 쳄버내에서 측정하였다. 구멍이 큰 1 회용 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 표본을 상기 쳄버에 부가한다.
● 용골세포를 원심분리기를 사용하여 작은 덩어리로 만들고 밀도를 EMEM 배지(용골세포의 수는 종양 마다 다름)내에서 적절한 수로 조절하고, 10% 송아지 태아 혈청 및 1.7 g/리터의 중탄산나트륨으로 보충한다.
● 오스테오클라스토마-유래 용골세포를 화합물(4 분량) 또는 대조군으로 37℃에서 30 분간 미리 인큐베이트시킨다.
● 이어서 상기 세포를 오스테오폰틴-코팅된 슬라이드(인간 또는 랫 오스테오폰틴, 2.5 ug/ml) 위로 파종하고 37℃에서 2 시간 동안 인큐베이트시킨다.
● 부착되지 않은 세포를 포스페이트 완충된 염수 내에서 슬라이드를 격렬하게 세척하여 제거하고 슬라이드에 잔류하는 세포를 아세톤 내에서 고정시킨다.
● 용골세포를 이러한 표현형(단계 15-17 참조)의 세포에 대한 선택적인 표지인 타르트레이트-내성 애시드 포스파타제(TRAP)에 대하여 염색하고 명실 현미경법으로 측정한다. 결과는 담체 대조군에 비교한 부착의 %억제로서 나타낸다.
세포 부착 아세이
세포 및 세포 배양
인간 태아의 신장세포(HEK293 세포)를 ATCC(카탈로그 번호 제CRL 1573)으로 부터 얻었다. 세포를 얼 염, 10% 소 태아 혈청, 1% 글루타민 및 1% 페니실린스텝토마이신을 함유하는 얼(Earl)의 최소 필수 배지(EMEM)내에서 성장시켰다.
구성 및 트랜스펙션
αv서브유닛의 3.2 kb EcoRI-KpnI 조각 및 β3서브유닛의 2.4 kb XbaI-XhoI 조각을 CMV 프로모터 및 G418 선택성 표지를 함유하는 pCDN 벡터(Aiyar 등, 1994)의 EcoRI-EcoRV 클로닝 부위내로 둔단 결찰(blunt end ligation)에 의하여 삽입하였다. 안정적인 발현을 위하여, 80 x 106HEK 293세포를 Gene Pulser(Hensley 등, 1994)을 사용하여 αv+β3구성(각각의 서브 유닛의 DNA 20μg)으로 전기형질전환하고 100 mm 플레이트내에 거치하였다(5 x 105세포/플레이트). 48 시간 경과후, 성장 배지를 450 μg/mL Geneticin(G418 설페이트, GIBCO-BRL, Bethesda, MD)으로 보충하였다. 상기 세포를 콜로니가 아세이되기에 충분하도록 커질때 까지 선택 배지 내에서 유지하였다.
형질감염된 세포의 면역세포화학적 분석
HEK 293 형질감염체가 비트로넥틴을 발현하는지의 여부를 판단하기 위하여, 세포를 원심분리에 의하여 유리 현미경 슬라디드 상에 고정시키고, 실온에서 2 분간 아세톤내에서 고정시키고 공기중에서 건조시켰다. αvβ3복합체에 특이적인 단일클론 항체의 일종인 23C6과의 특이적 반응성을 표준적인 간접 면역형광법을 사용하여 증명하였다.
세포 부착 연구
코닝(corning) 96-웰 ELISA 플레이트를 0.1 mL의 인간 비트로넥틴(RPMI 배지 중의 0.2 μg/mL)로 4℃에서 밤새도록 미리 코팅하였다. 실험 당시에, 상기 플레이트를 RPMI 배지로 1회 세척하고 RPMI 배지 내의 3.5% BSA로 실온에서 1 시간 동안 블로킹하였다. 형질감염된 293 세포를 RPMI 배지내에서 재현탁시키고, 20 mL Hepes(pH 7.4) 및 0.5 x 106세포/mL의 밀도의 0.1% BSA로 보충하였다. 세포 현탁액 0.1 mL를 각각의 웰에 부가하고 다양한 αvβ3길항물질의 존재 또는 부재하의 37℃에서 1 시간 동안 인큐베이트하였다. 인큐베이션 후, 0.025 mL의 10% 포름알데히드 용액(pH 7.4)을 부가하고 세포를 실온에서 10 분간 고정시켰다. 상기 플레이트를 0.2 mL의 RPMI 배지로 3 회 세척하고 부착된 세포를 0.1 mL의 0.5% 톨루이딘 불루로 실온에서 20 분간 염색하였다. 과량의 염색제를 탈염수로 격렬히 세척하여 제거하였다. 세포내에 포함된 톨루이딘 불루를 50 mM의 HCl을 함유하는 0.1 mL의 50% 에탄올을 부가하여 용출하였다. 세포 부착을 마이크로티터(microtiter) 플레이트 판독기(Titertek Multiskan MC, Sterling, Va)상의 600 nm의 광학 밀도에서 정량화하였다.
고상-αvβ5부착 아세이
비트로넥틴 수용체 αvβ5를 인간 태반으로부터 정제하였다. 수용체 제조물을 50 mM 트리스-HCl(pH 7.5), 100 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 1 mM MnCl2, 1 mM MgCl2(완충액)으로 희석하고 웰 당 0.1 ml로 96-웰 ELISA 플레이트에 즉시 부가하였다. αvβ30.1 내지 0.2 μg을 웰 1 개 당 부가하였다. 상기 플레이트를 4℃에서 밤새도록 인큐베이트하였다. 실험 당시에, 상기 웰을 완충액 A로 세척하고 동일한 완충액 중에서 실온에서 1 시간 동안 0.1 ml의 3.5% 소 혈청 알부민과 함께 인큐베이트하였다. 인큐베이션에 이어서, 상기 웰을 완전히 흡출하고 0.2 ml의 완충액 A로 2 회 세척하였다.
[3H]-SK＆F-107260 경합 아세이에서, 다양한 농도의 비표지 길항물질(0.001-100μM)를 웰에 부가한 후, [3H]-SK＆F-107260를 5.0 nM 부가하였다. 상기 플레이트를 실온에서 1 시간 동안 인큐베이트하였다. 인큐베이션에 이어서, 상기 웰을 완전히 흡출하고 얼음냉각된 완충액 A 0.2 ml로 웰 마다의 방식으로 세척하였다. 수용체를 0.1 ml의 1% SDS로 용해시키고 상기 결합 [3H]-SK＆F-107260를 Beckman LS 6800 액체 섬광 계수기 내에 0.3 mL의 Ready Safe를 부가한 액체 섬광 계수법으로 40%의 효율로 측정하였다. [3H]-SK＆F-107260의 비특이적 결합은 2 μM의 SK＆F-107260 존재하에서 측정하였고 일관되게 총 방사성표지 리간드의 입력치의 1% 미만이었다. IC50([3H]-SK＆F-107260의 50% 결합 억제에 대한 길항물질의 농도)는 LUNDON-2 프로그램으로 부터 변형시된 비선형 최소 자승 곡선-피팅(fitting) 경로에 의하여 측정하였다. Ki(길항물질 해리 상수)는 Ki=IC50/(1+L/Kd)(Cheng 및 Prusoff의 수식)의 수식에 따라 계산하였다(여기에서 L 및 Kd는 각각 [3H]-SK＆F-107260의 농도 및 해리 상수임).
RGD-매개 GPIIb-IIIa 결합의 억제
GPIIb-IIIa의 정제
쇠퇴한 세척된 인간 혈소판(적십자에서 얻음) 10 유닛을 3% 옥틸글루코시드, 20 mM 트리스-HCl(pH 7.4), 140 mM NaCl, 2 mM CaCl2내에서 4℃에서 2 시간 동안 온화하게 교반하여서 용혈시켰다. 상기 용혈물을 1 시간 동안 100,000 g에서 원심분리하였다. 얻어진 부유물을 20 mM 트리스-HCl(pH 7.4), 100 mM NaCl, 2 mM CaCl2, 1% 옥틸글루코시드(완충액 A)로 예비 형평을 이룬 5 ml의 편두(lentil) 렉틴 세파로오스 4B 컬럼(E.Y.Labs)에 적용하였다. 2 시간의 인큐베이션 후에, 상기 컬럼을 50 mL의 차가운 완충액 A로 세척하였다. 상기 렉틴-보유 GPIIb-IIIa를 10%의 덱스트로오스를 함유하는 완충액 A로 용출하였다. 모든 공정을 4℃에서 수행하였다. 얻어진 상기 GPIIb-IIIa는 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동법에 의하여 보여지는 바와 같이 ＞95%의 순도였다.
리포솜 내의 GPIIb-IIIa의 포함
포스파티딜세린(70%) 및 포스파디딜콜린(30%; Avanti Polar Lipids)의 혼합물을 질소 흐름 하의 유리 튜브의 벽에 건조시켰다. 정제된 GPIIb-IIIa를 최종 농도 0.5 mg/ml로 희석시키고 단백질:포스포리피드 비율 1:3(중량:중량)에서 포스포리피드와 혼합하였다. 상기 혼합물을 재현탁시키고 5 분동안 배드 초음파파쇄기 내에서 초음파파쇄하였다. 이어서 상기 혼합물을 1000-폴드 과량의 50 mM 트리스-HCl(pH 7.4), 100 mM NaCl, 2 mM CaCl2(2회 교체)에 대한 12,000-14,000 분자량 컷오프 투석 튜브를 사용하여 밤새도록 투석하였다. 상기 GPIIb-IIIa 함유 리포솜을 12,000 g에서 15 분간 원심분리하고 약 1 mg/ml의 최종 단백질 농도하의 투석 완충액 내에서 재 현탁하였다. 상기 리포솜을 필요할 때까지 -70℃에서 보관하였다.
GPIIb-IIIa에 대한 경합 결합
피브리노겐 수용체(GPIIb-IIIa)에 대한 결합을 RGD-타입 리간드로서 [3H]-SK＆F-107260을 사용하는 간접 경합 결합 방법을 사용하여 아세이 하였다. 결합 아세이는 0.22 um 친수성 듀라포어(durapore) 막을 사용하는 96-웰 여과 플레이트 조립품(Millipore Corporation, Bedford, MA) 내에서 수행하였다. 상기 웰은 비특이적 결합을 방지하기 위하여 실온에서 1시간 동안 0.2 mL의 10 μg/mL 폴리리신(Sigma Chemical Co., St. Louis, MO)로 미리 코팅하였다. 다양한 농도의 비표지 벤즈아제핀을 상기 웰(4 개씩)에 부가하였다. [3H]-SK＆F-107260을 각각의 웰에 최종 농도가 4.5 nM이 되도록 적용한 후에 1 g의 정제된 혈소판 GPIIb-IIIa-함유 리포솜을 부가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 인큐베이트 하였다. GPIIb-IIIa-결합 [3H]-SK＆F-107260을 결합되지 않은 것으로부터 Millipore 여과 방법을 수차례 사용하여 여과한 후, 얼음으로 냉각된 완충액(2 회, 각각 0.2 mL)으로 세척하였다. 필터에 잔류하는 결합된 방사능을 Beckman 액체 섬광 계수기(모델 LS 6800) 내에 1.5 mL의 Ready Solve 내에서 40%의 효율로 측정하였다. 비특이적 결합을 2 μM의 비표지 SK＆F-107260 존재하에서 측정하였고 일관되게 표본에 부가된 총 방사성표지 리간드 0.14% 미만이었다. 모든 데이터 포인트는 4 회 실험의 평균이었다.
경합 결합 데이터는 비선형 최소-자승 곡선 피팅 과정을 사용하여 분석하였다. 이 방법은 길항물질의 IC50(평형에서 [3H]-SK＆F-107260의 특이적 결합을 50%로 억제하는 길항물질의 농도)을 제공한다. 상기 IC50은 쳉(Cheng) 및 프루소프(Prusoff)의 식에 기초한 길항물질의 평형 해리 상수(Ki)에 관련된다:Ki=IC50/(1+L/Kd)(여기에서 L은 경합 결합 아세이에서 사용된 [3H]-SK＆F-107260의 농도(4.5 nM)이고 Kd는 스캇차드(Scatchard) 분석에 의하여 측정하였을 때 4.5 nM인 SK＆F-107260의 농도의 해리 상수임).
본원발명의 바람직한 화합물은 10:1보다 큰 피브리노겐 수용체에 상대적인 비트로넥틴 수용체에 대한 친화도를 갖는다. 가장 바람직한 화합물은 100:1보다 큰 활성 비를 갖는다.
화학식 (I)의 화합물 단독 및 항종양제와 조합에서의 효율은 몇몇 이식가능한 마우스 종양 모델을 사용하여 측정할 수 있다(이들 모델에 대한 상세 기재는 미국특허 제5,004,758호 및 동 제5,633,016호 참조).
하기의 실시예는 본원발명을 범위를 제한하여고 의도된 것은 절대 아니며, 본원발명의 화합물을 제조하고 사용하는 방법을 열거하기 위하여 제공된다. 기타 많은 실시태양이 본 기술분야의 숙련된 기술자에게 용이하게 명확할 것이다.
일반
250 또는 400 MHz에서 양성자핵자기공명(1H NMR) 스펙트럼을 기록하였다. 화학적 이동(chemical shift)은 내부 표준 테트라메틸실란(TMS)으로부터의 하류장방향으로 백만분율(parts per million)(δ)로 기록한다. NMR 데이터의 약어는 다음과 같다: s=단일선, d=이중선, t=삼중선, q=4중선, m=다중선, dd=이중선의 이중선, dt=삼중선의 이중선, app=명확, br=넓음. J는 헤르쯔로 측정되는 NMR 커플링 상수를 나타낸다. CDCl3는 듀테리오클로로포름, DMSO-d6는 헥사듀테리오디메틸술폭시드, 및 CD3OD는 테트라듀테리오메탄올이다. 적외선(IR )스펙트럼은 전송모드에서 기록되었고, 밴드 위치는 파수(wave number)의 역으로 기록한다(cm-1). 질량 스펙트럼은 전기분무(electrospray:ES) 또는 FAB 이온화 기술을 이용하여 구하였다. 원소 분석은 내부적으로 또는 Quantitative Technologies Inc. (Whitehouse , NJ)에 의해 수행되었다. 융점은 토마스-후버(Thomas-Hoover) 융점 기계에서 구하고 보정하지 않는다. 모든 온도는 섭씨로 기록한다. 아날테크 실리카 겔 GF 및 E. 머크 실리카 겔 60 F-254 박막 플레이트을 이용하여 박막 크로마토그래피를 하였다. 플래시 크로마토그래피 및 중력 크로마토그래피는 모두 E. 머크 키젤겔60(230-400메시) 실리카 겔에서 수행하였다. 분석용 HPLC 및 대용량 HPLC는 라이닌 또는 베크만 크로마토그래프상에서 수행하였다. ODS는 옥타데실실릴 유도된 실리카 겔 크로마토그래피 지지체를 칭한다. 5 μ Apex-ODS는 존스 크로마토그래피(Jones Chromatography, Littleton, Colorado)사 제조의 5 μ의 명목상 입도를 갖는, 옥타데실릴 유도된 실리카겔 크로마토그래피 지지체를 나타낸다. 등록상표 YMC ODS-AQ는 ODS 크로마토그래피용 지지체이고 이는 YMC Co. Ltd. (Kyoto, Japan)사의 등록상표이다. 등록상표 PRP-1은 중합체(스티렌-디비닐벤젠) 크로마토그래피 지지체이고, 하밀톤사(Hamilton Co., Reno, Nevada)의 등록상표이다. 등록상표 Celite는 산-세척된(acid-washed) 규조토 실리카로 구성된 필터 보조제이고, 만빌사(Manvile Corp., Denver, Colorado)의 등록상표이다.
에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트, 에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트 및 에틸(±)-10,11-디히드로-3-(트리플루오로메탄술포닐옥시)-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트는 국제특허 WO 971540-A1에 따라 제조하였다. 2-[2-(4-메톡시벤질아미노)피리딘-6-일]에탄올은 WO95/32710에 따라 제조하였다. 6-메톡시-1-인단온은 하우스와 허드슨(House and Hudson, J. Org. Chem. 1970, 35, 647)의 방법에 의해 제조하였다.
제조예1
2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]피리딘-N-옥시드의 제조
a) 2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]피리딘-N-옥시드
2-클로로피리딘-N-옥시드 히드로클로리드(16.6 g, 0.1 몰), 3-아미노-1-프로판올(15.3 mL, 0.2 몰), NaHCO3(42 g, 0.5 몰) 및 tert-아밀 알코올(100 mL)의 혼합물을 환류온도까지 가열하였다. 21 시간 후 반응물을 냉각시키고, CH2Cl2(300 mL)로 희석하고 흡입 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 여과액을 농축시키고 톨루엔으로부터 재농축시켜 황색오일을 얻었다. 실리카 겔 크로마토그래피(20% MeOH/CHCl3)하여 표제 화합물(15.62 g, 93%)을 황색 고체로 얻었다.
TLC(20% MeOH/CHCl3) Rf0.48;1H NMR(250, CDCl3) δ 8.07(dd, J=6.6, 1.2 Hz, 1H), 7.34(br t, 1H), 7.10-7.30(m, 1H), 6.64(dd, J=8.5, 1.4 Hz, 1H), 6.40-6.60(m, 1H), 4.49(br s, 1H), 3.65-3.90(m, 2H), 3.35-3.60(m, 2H), 1.75-2.00(m, 2H); MS(ES) m/e 169(M + H)+.
제조예2
2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]-4-니트로피리딘-N-옥시드의 제조
a) 2-클로로-4-니트로피리딘-N-옥시드
진한 황산(30 mL) 및 발연 HNO3(54 mL)의 용액을 0℃에서 진한 황산(30 mL) 중의 2-클로로피리딘-N-옥시드 히드로클로리드(15.2 g, 91.56 mmole) 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 1 시간 동안 가열하고, 이어서 실온(RT)으로 냉각시켜 얼음(500 g)에 부었다. 이 반응 혼합물을 실온에서 밤새 방치한 후, 얼음 배드에서 냉각하고, 50% NaOH를 천천히 부가하여 침전물을 얻었다. 이를 수집하여 건조시켜 표제 화합물을 옅은 황색 고체로 얻었다(5.88 g, 37%).
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 8.42-8.37(m,2H), 8.06-8.04(m,1H).
a) 2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]-4-니트로피리딘-N-옥시드
2-클로로-4-니트로피리딘-N-옥시드를 2-클로로피리딘-N-옥시드 히드로클로리드 대신에 사용한 것 이외에는 제조예 1과 동일한 방법에 따라 표제 화합물을 황색 분말로 얻어 실리카겔 크로마토그래피하였다(1:9 MeOH/CH2Cl2). MeOH/CH2Cl2/Et2O로 재결정하여 표제 화합물을 얻었다. MS(ES) 214.1 (M + H)+.
제조예3
2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]-4-메틸피리딘-N-옥시드의 제조
a) 2-클로로-4-메틸피리딘
아질산나트륨(13.88 g, 200 mmole)을 0℃에서 진한 염산(200 mL) 중의 2-아미노-4-피콜린(15.0 g, 139 mmole) 용액에 천천히 부가하였다. 이 반응 혼합물을 실온에 이를 때까지 방치하고 16 시간 동안 교반시킨 후, 얼음(500 g)에 부었다. 진한 NH4OH로 pH를 8.0으로 조정한 후, 이 혼합물을 에테르로 추출하였다(3 X 300 mL). 수집한 에테르층을 물(2 X 200 mL) 및 염수(200 mL)로 차례로 세척하였다. 건조(MgSO4) 및 농축하여 희미한 황색의 오일로서 표제 화합물(10.3g, 58%)을 얻었다. MS(ES) m/e 127.8 (M + H)+.
b) 2-클로로-4-메틸피리딘-N-옥시드 히드로클로리드
빙초산(10 mL)중의 2-클로로-4-메틸피리딘(10.0 g, 78.3 mmole)과 34% 퍼아세트산(76.05 g, 91.0 mmole)의 혼합물을 70℃에서 3 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 진한 염산(35 mL)을 가하고, 이 혼합물을 로터리 진공 펌프에서 농축시켰다. n-부탄올로 재결정한 후 에테르로 분쇄(trituration)하여 표제 화합물(7.16g, 51%)을 백색 고체로 얻었다. MS(ES) m/e 143.9 (M + H)+.
c)2-[3-히드록시-1-프로필)아미노]-4-메틸피리딘-N-옥시드
tert-아밀 알코올(50 mL) 중의 2-클로로-4-메틸피리딘-N-옥시드 히드로클로리드(7.16 g, 39 mmole), 3-아미노프로판올(6.01 g, 80 mmole) 및 NaHCO3(16.8 g, 200 mmole)의 혼합물을 환류온도에서 19 시간 동안 가열하였다. 이 반응 혼합물을 CH2Cl2(200 mL)로 희석하여 여과하고, 여과액을 로터리 진공 펌프에서 농축시켰다. CH2Cl2/Et2O로 재결정화하여 표제 화합물(5.41 g, 75%)을 황색 고체로 얻었다. TLC(15% MeOH/CH2Cl2) Rf0.44;1H NMR(400, CDCl3) δ7.92(d, J=6.7, 1H), 7.28(br t, 1H), 6.43(s, 1H), 6.33(dd, J=6.6, 2.1 Hz, 1H), 3.73(t, J=5.7 Hz, 2H), 3.47(q, H=6.3 Hz, 2H), 2.29(s, 3H), 1.82-1.88(m, 2H); MS(ES) m/e 183(M + H)+.
제조예4
6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올의 제조
a) 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-6-피콜린
CH2Cl2(200 mL) 중의 2-아미노-6-피콜린(21.63 g, 200 mmole) 및 디-tert-부틸 디카르보네이트(52.38 g, 240 mmole)의 용액을 50℃에서 로터리 진공 펌프에서 농축시키고, 생성된 잔여물은 진공하에서 50℃에서 로터리 진공 펌프에서 회전시켰다. 21.5 시간 후, 반응물을 헥산(400 mL)으로 희석한 후, 실리카 겔을 통하여 여과하였다(헥산 및 이어서 20% EtOAc/헥산). 농축하면, 밝은 황색 오일로서의 표제 화합물(41.84 g, 정량적)이 얻어지고, 이를 방치하면 서서히 고체화된다.1H NMR(250, CDCl3) δ 7.71(d, J=8.3 Hz, 1H),7.40-7.65(m, 2H), 6.80(d, J=7.5 Hz, 1H), 2.43(s, 3H), 1.50(s, 9H); MS(ES) m/e 153(M + H - C4H8)+.
b) 2-[(tert-부톡시카르보닐)메틸아미노]-6-피콜린
NaH(광유중 60%, 3.60 g, 90 mmole)를 15℃에서(냉각된 수조에서) 무수 DMSO(75 mL) 중의 2-(tert-부톡시카르보닐아미노)-6-피콜린(15.62 g, 75 mmole) 및 요오도메탄(9.3 mL, 150 mmole)의 용액에 수분에 걸쳐 단계적으로 가하였다. 내부온도는 35℃까지 상승하였다. 기체 생성이 사라지게 되면, 냉각 수조를 제거하고, 실온에서 이 반응물을 교반하였다. 0.5 시간 후 흑황색 혼합물을 얼음/물(300 mL)에 붓고, Et2O로 추출하였다(3 X 300 mL). 수집한 유기층을 물(2 X 75 mL) 및 염수(75 mL)로 차례로 세척하였다. 건조(MgSO4) 및 농축하여 황색 오일을 얻고, 이를 실리카 겔 상에서 크로마토그래피(7% EtOAc/헥산)하였다. 표제 화합물이 희미한 황색 오일로 얻어졌다(13.01 g, 78%).1H NMR(250, CDCl3) δ 7.51(app t.1H), 7.37(d, J=8.2 Hz, 1H), 6.86(d, J=7.2 Hz, 1H), 3.38(s, 3H), 2.49(s, 3H), 1.50(s, 9H); MS(ES) m/e 223(M + H)+.
c) 에틸-6-[(tert-부톡시카르보닐)메틸아미노]-2-피리딜아세테이트
아르곤하 0℃에서 무수 THF(350 mL) 중의 헥산(46.4 mL, 115.95 mmole) 중의 2.5 M n-BuLi 및 디이소프로필아민(19.5 mL, 139.14 mmole)으로부터 LDA를 제조하였다. 이 용액을 -78℃로 냉각시키고, 무수 THF(46 mL)중의 2-[(tert-부톡시카르보닐)메틸아미노]6-피콜린(10.31 g, 46.38 mmole) 용액을 10 분에 걸쳐 적가하였다. 추가의 무수 THF(2 ml)이 전달하는데 사용되었다. 이 오렌지색 용액을 -78℃에서 15 분 동안 교반하고, 이어서 디에틸 카르보네이트(6.2 mL, 51.02 mmole)을 재빨리 부가하였다. 이 적색 용액을 -78℃에서 15 분 동안 교반시키고, 이어서 1/2 포화된 NH4Cl(175 mL)로 반응을 중지시켰다. 이 혼합물을 +5℃로 데워서 EtOAc(175 mL)로 추출하고 이어서 CH2Cl2(2 X 100 mL)로 추출하였다. 수집한 유기층을 염수(100 mL)로 세척하고, 건조(MgSO4)시키고, 농축시켰다. 이 탁한 황색 오일을 실리카 겔 크로마토그래피(15% EtOAc/헥산)하여 밝은 황색 오일로서 표제 화합물을 얻었다(10.72 g, 79%).
1H NMR(250, CDCl3) δ 7.51-7.63(m, 2H), 6.91-7.03(m, 1H), 4.19(q. J=7.1 Hz, 2H), 3.77(s, 2H), 3.38(s, 3H), 1.27(t, J=7.1 Hz, 3H), 1.51(s, 9H); MS(ES) m/e 295(M + H)+.
d) 에틸-6-(메틸아미노)-2-피리딜아세테이트
무수 디옥산(91 mL) 중의 에틸-6-[(tert-부톡시카르보닐)메틸아미노]-2-피리딜아세테이트(10.72 g, 36.42 mmole) 용액을 용매의 부분 결정화점까지 냉각시키고, 4 M HCl/디옥산(91 mL, 364.2 mmole)을 부가하였다. 이 용액을 실온까지 데우고 17 시간 동안 교반한 후 농축시켰다. 생성된 밝은 황색 고체를 CH2Cl2/톨루엔으로 슬러리화하고 재농축하여 밝은 황색 분말로서 표제 화합물을 얻었다(8.48 g, 정량적).
1H NMR(250 MHz, CD3OD) δ 7.84(dd, J=9.0, 7.2 Hz, 1H), 6.96(d, J=9.0 Hz, 1H), 6.78(d, J=7.2 Hz, 1H), 4.22(q, J=7.1 Hz, 2H), 3.93(s, 2H), 3.05(s, 3H), 1.27(t, J=7.1 Hz, 3H); MS(ES) m/e 195 (M + H)+.
e) 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올
THF(95 mL, 95 mmole)중의 1.0 M LiAlH4용액을 아르곤하 0℃에서 무수 THF(64 mL)중의 에틸-2-(메틸아미노)-6-피리딜아세테이트(7.34 g, 31.82 mmole)의 기계적으로 교반된 현탁액에 적가하였다. 이 부가는 기체 발생이 사라질 때까지는 천천히 하고, 그 다음에는 남은 용액을 재빨리 부가하였다. 부가에는 5 내지 7 분이 필요하였다. 이 반응물을 실온으로 데우고 45 분 동안 교반하고 이어서 환류 온도까지 가열하였다. 10 분 후, 이 반응물을 0℃까지 냉각시키고, H2O(3.6 mL), 15% NaOH(3.6 mL) 및 H2O(10.8 mL)를 차례로 적가하여 반응을 마무리하였다(work up). 이 혼합물을 0℃에서 15 분 동안 및 실온에서 15 분 동안 교반한 후, 부크너(Buchner) 깔대기를 통하여 여과하였다. 여과 패드는 다량의 THF로 세척하고, 여과액은 농축하였다. 잔여물을 톨루엔으로부터 재농축시키고, 이어서 실리카 겔 크로마토그래피하여(1:1 EtOAc/CHCl3중의 5% MeOH) 왁스형 고체로 고형화되는 황색 오일로서의 표제 화합물(3.23 g, 67%)을 얻었다.
1H NMR(250 MHz, CDCl3) δ 7.36(dd, J=8.3, 7.3 Hz, 1H), 6.42(d, J=7.3 Hz, 1H), 6.26(d, J=8.3 Hz, 1H), 4.93-5.28(m, 1H), 4.38-4.60(m, 1H), 3.96(t, J=5.4 Hz, 2H), 2.90(d, J=5.2 Hz, 3H), 2.84(t, J=5.4 Hz, 2H); MS(ES) m/e 153(M + H)+.
제조예5
2-(에틸아미노)-4-티아졸에탄올의 제조
a) 에틸 2-아세틸아미노-4-티아졸아세테이트
에틸 2-아미노-4-티아졸아세테이트(3.72 g, 20 mmole)를 아세트산(4 mL) 및 아세틱 안히드리드(4 mL) 중에서 부가하고, 이 생성된 현탁액을 환류온도에서 3 시간 동안 가열하였다. 농축하고 실리카 겔 플래시 크로마토그래피(5% MeOH/CH2H2)하여 백색 고체로서의 표제 화합물을 얻었다(4.1 g, 91%). MS(ES) m/e 229(M + H)+.
b) 2-(에틸아미노)-4-티아졸에탄올
THF(179 mL, 179 mmole) 중의 1.0 M LiAlH4의 교반 용액에 THF(50 mL) 중의 에틸 2-아세틸아미노-4-티아졸아세테이트(4.4 g, 17.9 mmole) 용액을 적가하였다. 부가 완료 후, 이 반응 혼합물을 환류온도에서 3 시간 동안 가열하고, 이어서 H2O(0.7 mL), 10% NaOH(0.7 mL) 및 H2O(2.1 mL)를 차례로 부가하여 반응을 마무리하였다. 생성된 혼합물을 등록상표 celite를 통하여 여과시키고, 여과액을 농축하였다. 실리카 겔 플래시 크로마토그래피(5% MeOH/CH2H2)로 정제하여 호박색 오일로서의 표제 화합물을 얻었다(1.6 g, 53%). MS(ES) m/e 173(M + H)+.
제조예6
6-아미노-2-피리딜에탄올의 제조
a) 6-아미노-2-피리딜에탄올
WO 95/32710의 공정에 따라 제조된 2-[2-(4-메톡시벤질아미노)피리딘-6-일]에탄올(0.95 g, 3.7 mmole)의 6 N HCl 중의 용액을 60℃에서 가열하였다. 16 시간 후, 진공에서 이 반응액을 농축시키고 잔여물을 건조 KOH로 염기화하였다. 생성된 혼합물을 MeOH로 추출하고, MeOH 추출물을 건조(MgSO4) 및 농축시켰다. 실리카 겔 플래시 크로마토그래피(5% MeOH/CH2H2)하여 옅은 황색 오일로서의 표제 화합물을 얻었다(0.2 g, 40%). MS(ES) m/e 139(M + H)+.
제조예7
3-(4-니트로벤질옥시카르보닐아미노)-1-프로판올의 제조
a) 3-(4-니트로벤질옥시카르보닐아미노)-1-프로판올
아르곤하 실온에서 교반된 THF(25 mL) 중의 4-니트로벤질 클로로포르메이트(5 g, 23 mmole) 및 트리에틸아민(6.4 mL, 46 mmol)의 현탁액에 3-아미노-1-프로판올(1.9 mL, 26 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 72 시간 동안 교반시키고, 이어서 농축시켰다. 잔여물을 실리카 겔 크로마토그래피(0.5-2% MeOH/CH2Cl2)로 정제하여 옅은 황색 오일로서의 표제 화합물을 얻었다(2 g, 34%). MS(ES) 255.3(M + H)+.
제조예8
1-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]이소퀴놀린-N-옥시드의 제조
a) 1-클로로이소퀴놀린 N-옥시드
문헌[Brown E. V. J. Amer. Chem. Soc. 1957, 79, 3565-3566]에 기재된 일반적인 방법에 따라 아질산 칼륨과 진한 HCl을 이용하여 1-아미노이소퀴놀린 N-옥시드 히드로클로리드(Deady, L. W. Synthetic Communications 1977, 509-514)를 1-클로로이소퀴놀린 N-옥시드로 변환시켰다. 밝은 갈색 고체로서 표제 화합물을 제조하였다. MS(ES) m/e 179.9(M + H)+.
b) 1-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]이소퀴놀린-N-옥시드
2-클로로피리딘-N-옥시드 히드로클로리드를 1-클로로이소퀴놀린 N-옥시드로 대체한 것을 제외하고는 제조예 1에 따라서 표제 화합물을 호박색 고체로서 얻었다. MS(ES) m/e 219.1(M + H)+.
제조예9
2-[N-(3-메탄술포닐옥시-1-프로필)-N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-N-옥시드의 제조
a) 2-[N-(3-히드록시-1-프로필)-N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-N-옥시드
2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]피리딘-N-옥시드(8.0 g, 47.6 mmol)의 t-부탄올(80 mL) 용액을 디-tert-부틸 디카르보네이트(11.4 g, 55.3 mmol)로 처리하였다. 18 시간 후, 이 용액을 농축시키고 잔여물을 헥산으로 분쇄하였다. 생성된 고체를 진공에서 건조시켜 회백색 고체로서의 표제 화합물(12.5 g, 98%)을 얻었다. MS(ES) m/e 269.3(M + H)+.
b) 2-[N-(3-메탄술포닐옥시-1-프로필)-N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-N-옥시드
2-[N-(3-히드록시-1-프로필)-N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-N-옥시드(0.50 g, 1.86 mmole) 및 피리딘(0.23 mL, 2.84 mmole)의 CHCl3(5mL, K2CO3로 탈수시킴)중의 용액에 메탄술포닐 클로리드(0.17 mL, 2.20 mmole)를 0℃에서 적가하였다. TLC에 의해 완료될 때, 이 반응물을 CHCl3로 희석하고 냉수로 세척하여 건조(Na2SO4) 및 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피(10% MeOH/CHCl3)하여 무색 오일로서의 표제 화합물을 얻었다(0.41 g, 64%).1H NMR (250 MHz, CDCl3) δ 8.25(dd, J=6.0, 1.9 Hz, 1H), 7.25(m, 4H), 4.35(t, J=6.2 Hz, 2H), 3.75(t, J=6.6 Hz, 2H), 3.00(s, 3H), 2.00(m, 2H), 1.40(s, 9H). 변화되지 않은 2-[N-(3-히드록시-1-프로필)-N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-N-옥시드(0.18 g, 36%)도 또한 크로마토그래피 정제로부터 회수될 수 있다.
제조예10
에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트의 제조
a) 6-메톡시-1-페닐인덴
Et2O(680 ml, 2.04 mole) 중의 3.0 M 페닐마그네슘 브로미드 용액을 아르곤하 주위온도에서 교반하면서 Et2O(700 mL)로 희석하고, 6-메톡시-1-인단온(277 g, 1.71 mole)의 THF(1400 mL) 중의 용액을 1 시간에 걸쳐 적가하였다. 이 반응 혼합물을 주위에서 2 시간 동안 교반하고, 이어서 포화 NH4Cl(2.8 L)중에 교반시키면서 부었다. H2O(1.4 L)를 부가하고, 유기층을 분리하였다. 수성층을 Et2O로 추출하고(2 X 1 L), 수집한 유기 추출액을 농축하여 조생성물 6-메톡시-1-페닐-1-인단올(445 g)을 갈색 오일로서 얻었다. 이 오일을 톨루엔(2.5 L)에 용해시키고, p-톨루엔술폰산 모노히드레이트(12.3 g, 0.065 mole)를 부가하였다. 이 용액을 응결기를 구비한 Dean-Stark trap을 이용하여 환류온도에서 16 시간 동안 교반 및 가열하였다. H2O 수거양은 2 시간 후가 최소이었으며, 총 28 mL였다. 이 용액을 냉각시켜서, 5% Na2CO3수용액(1 L) 및 물(2 X 1L)로 연속하여 추출하였다. 이 유기층을 농축하여 암갈색 오일(400 g)을 얻었다. 이 오일을 진공하에서 증류하여 황색 오일로서의 표제 화합물을 얻었다(298.2g, 79%).(bp 152-190℃/2.0 Torr; TLC(10% EtOAc/헥산) Rf0.75)
b) 2-벤조일-4-메톡시페닐아세트산
아세톤(4.2 L)을 10℃로 냉각시키고, 6-메톡시-1-페닐인덴(271 g, 1.22 mole)의 아세톤(1.8 L)중의 용액을 1.5 시간에 걸쳐 죤스 시약(Jones reagent)(1.8 L, CrO3(470 g, 4.70 mole), H2O(1 L) 및 진한 황산(405 mL)으로부터 제조됨)과 동시에 부가하였다. 4% OsO4수용액(153 mL)을 이 생성된 혼합물에 2 번에 걸쳐(첫번은 부가 개시시에 두번째는 부가 중간 시점에서) 반응 혼합물을 15℃ 미만으로 유지하면서 가하였다. 부가에 이어서, 이 반응 혼합물을 22℃로 데우고 1.5 시간동안 교반시키는데 이 시간동안 약한 발열로 온도가 28℃로 증가한다. 이어서 이 반응 혼합물을 20℃ 미만으로 냉각시키고 이소프로판올(1 L)을 처음에는 적가식으로 가하다가 초기 발열이 감소한 후 빠르게 가하였다. 이 상태 동안에는 교반이 힘들게 된다. 이소프로판올 부가 도중에는 온도가 32℃에 달하였다. H2O(2 L)를 부가하고 이 혼합물을 분별 깔대기로 옮겼다. 추가적으로 물을 부가하여 침전된 크로머스 애시드(chromous acid)를 용해시키고, 이 혼합물을 CH2Cl2(2 L)로 추출하였다. 유기(상부)층을 분리하고 수성층을 CH2Cl2(2 X 1 L)로 추출하였다. 수집한 CH2Cl2추출물을 H2O(2 L) 및 포화 염수(2 L)로 차례로 세척한 후 농축시켜 습기 있는 회색 고체(416 g)를 얻었다. 이를 아세톤 및 EtOAc의 혼합물로 분쇄하고 여과 및 건조시켜 회백색 고체로서의 표제 화합물을 얻었다(225.4 g, 71%)(mp 158-159℃).
c) 2-벤질-4-메톡시페닐아세트산
2-벤조일-4-메톡시페닐아세트산(215.5 g, 0.80 mole)을 동일하게 2 분획으로 나누고, 각각을 2.5 L 압력 용기에서 빙(glacial) AcOH(1.5 L)에 용해시켰다. 5% Pd/C(10 g, 0.0048 mole)을 각각에 부가하고 각 혼합물을 주위 온도 수소하 Parr 장치 상에서 교반하였다. 2.5 시간 후, 이 혼합물을 여과하여 촉매를 제거하고, 여과 패드를 EtOAc로 세척하였다. 수집한 여과액을 농축하여 황색의 진한 오일로서의 표제 화합물(215 g, 정량적)을 얻었고, 이를 방치하여 결정화하였다.1H NMR (250 MHz, CDCl3) δ 7.05-7.35(m, 6H), 6.77(dd, J=8.3, 2.7 Hz, 1H), 6.71(d, J=2.7 Hz, 1H), 4.00(s, 3H), 3.76(s. 3H), 3.54(s, 2H).
d) 10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-온
2-벤질-4-메톡시페닐아세트산(순물질 204.6 g(0.80 mole)을 함유하는 조생물 215 g)의 CH2Cl2(1 L)중의 용액을 아르곤하 주위 온도에서 교반시키고, DMF(1 mL)와 이어서 옥살릴 클로리드(400 mL, 4.59 mole)을 부가하였다. 옥살릴 클로리드는 1 시간에 걸쳐 부가하고, 처음에는 격렬한 기체 발생을 조절하기 위하여 적가하였다. 이 용액을 주위온도에서 16 시간 동안 교반시키고 이어서 농축시켜서 황색 액체로서의 조생 에시드 클로리드(207.7 g, 0.756 mol, 95%)를 얻었다. 이 액체를 CH2Cl2에 총 부피가 500 mL이 되도록 용해시키고, 이 용액 및 AlCl3(100.8 g, 0.756 mol)을 주위온도 아르곤하에서 교반하면서 CH2Cl2(3.7 L)에 1시간에 걸쳐 동시에 부가하였다. 부가 완료시의 온도는 28℃이었다. 이 반응 혼합물을 주위온도에서 16 시간 동안 교반하는데, 이때 고체가 침전하였다. H2O(1 L)를 30 분에 걸쳐 처음에는 적가식으로 첨가하였다. 이어서 이 혼합물을 분리하고 유기층을 H2O(1 L), 5% NaHCO3수용액(1 L)으로 연속하여 세척하였다. 이어서 CH2Cl2용액을 농축하여 황색 고체(175.3 g)를 얻었다. EtOAc/헥산으로 재결정화하여 표제 화합물(128 g, 71%)을 얻었다(mp 107-109℃).
e) 에틸(±)-10,11-디히드로-10-히드록시-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
헥산(1282 mL, 1.282 mole) 중의 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드 1.0 M 용액을 아르곤하 -70℃에서 THF(4.0 L)에 부가하고, 이어서 EtOAc(146 mL, 1.49 mole)을 20 분에 걸쳐 적가하였다. 이 반응 혼합물을 15 분 동안 교반시키고, N,N,N',N'-테트라메틸에틸렌디아민(378 mL, 2.5 mole)을 20 분에 걸쳐 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 10 분 동안 교반한 후 10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조-[a,d]시클로헵텐-10-온(119.2 g, 0.50 mol)의 무수 THF(1.26 L) 중의 용액을 40 분에 걸쳐 적가하였다. 이 모든 부가 도중 온도는 -65℃ 미만으로 유지하였다. 이 반응 혼합물을 -65℃ 내지 -70℃에서 20 분 동안 교반하고 이어서 격렬하게 교반하면서 이를 포화 수성 NH4Cl(6.2 L) 용액에 부었다. 유기층을 분리하고 수성층을 EtOAc(2 X 1 L)로 추출하였다. 수집한 유기 추출물을 물(2 X 1 L)로 세척하고 이어서 농축하여 밝은 갈색 오일(175 g)을 얻었다. 박막 크로마토그래피(20% EtOAc/헥산)는 Rf0.5(주)(원하는 생성물) 및 Rf0.7(부)(회수된 케톤)을 보였다. 이 조생 성물을 실리카 겔 크로마토그래피(2 kg, 10% EtOAc/헥산)하여 황색 오일로서의 표제 화합물(101 g, 61%)을 얻었다.1H NMR(250 MHz, CDCl3) δ 7.63(d, J=7.7 Hz, 1H), 7.00-7.30(m, 4H), 6.80(d, J=2.6 Hz, 1H), 6.69(dd, J=8.2, 2.6 Hz, 1H), 3.95-4.35(m, 2H), 4.07(s, 2H), 3.76(s, 3H), 3.68(s, 1H), 3.64(d, J=14.2 Hz, 1H), 3.35(d, J=14.2 Hz, 1H), 2.79(d, J=16.0 Hz, 1H), 2.66(d, J=16.0 Hz, 1H), 1.22(t, J=7.2 Hz, 3H).
f) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-10-히드록시-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(101 g, 0.31 mole)를 빙초산(1.8 L)에 용해시키고 12 N 염산(28.5 mL, 0.34 mole)을 첨가하였다. 이 혼합물을 5% Pd/C(20 g, 0.0094 mole)을 함유하는 2.5 L 압력용기에 넣고, 결과적인 혼합물을 재킷 가열기(jacket heater)가 구비된 Parr 수소화장치상에서 수소하 35℃에서 교반시켰다. 18 시간 후, 이 반응액을 주위온도로 냉각시키고 여과하여 촉매를 제거하였다. 여과액을 농축시켜 밝은 황색의 오일(85.1 g)을 얻었다. 이를 실리카 겔 크로마토그래피(2 kg, 5% 내지 10% EtOAc/헥산으로 단계적 구배)하여 오일로서의 표제 화합물(69.1 g, 72%)을 얻었다.1H NMR(250 MHz, CDCl3) δ 7.05-7.22(m, 4H), 7.01(d, J=8.2 Hz, 1H), 6.76(d, J=2.7 Hz, 1H), 6.67(dd, J=8.2, 2.7 Hz, 1H), 4.30(d, J=15.0 Hz, 1H), 4.11-4.25(m, 2H), 3.85(d, J=15.0 Hz, 1H), 3.70-3.90(m, 1H), 3.77 (s, 3H), 3.31(dd, J=15.0, 4.1 Hz, 1H), 2.93(dd, J=15.0, 9.2 Hz, 1H), 2.64(dd, J=15.6, 5.0 Hz, 1H), 2.52(dd, J=15.6, 9.3 Hz, 1H), 1.27(t, J=7.1 Hz, 3H).
g) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
CH2Cl2(150 mL)중의 에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(8.5 g, 0.027 mole) 용액을 아르곤하에서 저어주면서 -10℃로 냉각시켰다. 에탄티올(10.7 mL, 0.144 mole)을 첨가하고, 이어서 AlCl3(20.6 g, 0.154 mole)을 15 분에 걸쳐 두 분획으로 나누어 부가하였다. 부가 후 발열반응은 온도를 0℃로 증가시키고, 이어서 수조를 이용하여 온도를 25℃로 증가시켰다. 이 반응 혼합물을 25 내지 30℃에서 2.25 시간 동안 교반시키고 이 시점에서 이를 얼음수에 부었다. 유기층을 분리하고 메탄올(100 mL)을 첨가하고, 혼합물을 CH2Cl2(2 X 50 mL)로 추출하였다. 수집한 CH2Cl2추출물을 물(250 mL)로 세척하고, 이어서 농축하여 점성 오일(8.6 g)을 얻었다. 이를 Et2O(150 mL)중에서 취하고 에테르를 헥산으로 치환하면서 에테르를 가열하여 제거하였다. 원하는 페놀은 먼저 오일로서 분리하고 이를 주위온도에서 교반시켜 결정화하였다. 2 개의 고체를 수거하여 표제 화합물(7.1 g, 89%)을 얻었다(mp 110-112℃).
제조예11
에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트의 거울상 이성질체의 HPLC 분리
a) 에틸(R)-(+)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트 및 에틸(S)-(-)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 하기의 조건을 이용하여 각 거울상 이성질체로 분리하였다: Daicel Chiralcel OJ컬럼(21.2 × 250 mm), 헥산 이동상 중 20% 에탄올, 15 mL/분의 유속, 254 nm에서 140 mg 주입에서의 uv 검출; 에틸(S)-(-)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트에 대한 tR= 10.4 분; 에틸(R)-(+)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트에 대한 tR= 13.1분.
제조예12
에틸(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트의 제조
a) 1-(3-플루오로페닐)-6-메톡시-1-인단올
페닐마그네슘 브로미드를 3-플루오로페닐마그네슘 브로미드로 대체한 것 이외에는 제조예 10(a)의 방법에 따라 호박색 오일의 표제 화합물을 얻었다. MS(ES) m/e 276.0 (M + H)+.
b) 1-(3-플루오로페닐)-6-메톡시인덴
6-메톡시-1-페닐-1-인단올을 1-(3-플루오로페닐)-6-메톡시-1-인단올로 대체한 것 이외에는 제조예 10(a)의 방법에 따라 무색 오일의 표제 화합물을 얻었고 이어서 실리카 겔 크로마토그래피(4% EtOAc/헥산)하였다. MS(ES) m/e 241.1 (M + H)+.
c) 2-(3-플루오로벤조일)-4-메톡시페닐아세트산
6-메톡시-1-페닐인덴을 2-(3-플루오로페닐)-6-메톡시인덴으로 대체한 것 이외에는 제조예 10(b)의 방법에 따라 백색 고체의 표제 화합물을 얻었다. MS(ES) m/e 289.2 (M + H)+.
d) 2-(3-플루오로벤질)-4-메톡시페닐아세트산
2-벤조일-4-메톡시페닐아세트산을 2-(3-플루오로벤조일)-4-메톡시페닐아세트산으로 대체한 것 이외에는 제조예 10(c)의 방법에 따라 무색 오일의 표제 화합물을 얻었다. MS(ES-) m/e 273.2 (M-H)-.
e) 10,11-디히드로-7-플루오로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-온
2-벤질-4-메톡시페닐아세트산을 2-(3-플루오로벤질)-4-메톡시페닐아세트산으로 대체한 것 이외에는 제조예 10(d)에 따라 백색 고체의 표제 화합물을 얻었다(Mp 129-130℃). MS(ES) m/e 279.2 (M+Na)+.
f)에틸(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-10-히드록시-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시크로헵텐-10-온을 10,11-디히드로-7-플루오로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-온으로 대체한 것 이외에는 제조예 10(e)의 방법에 따라, 실리카 겔 크로마토그래피(8% EtOAc/헥산) 후 표제 화합물을 얻었다. MS(ES) m/e 362.2 (M+NH4)+.
g)에틸(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-10-히드록시-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-10-히드록시-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것 이외에는 제조예 10(f)의 방법에 따라, 실리카 겔 크로마토그래피(10% EtOAc/헥산) 후 무색 오일의 표제 화합물을 얻었다. MS(ES) m/e 329.2 (M + H)+.
h) 에틸(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것 이외에는 제조예 10(g)의 방법에 따라, 실리카겔 크로마토그래피(1% MeOH/CH2Cl2) 후 백색 고체의 표제 화합물을 얻었다. MS(ES) m/e 315.0 (M + H)+, 332.0(M+NH4)+.
제조예13
에틸(±)-10,11-디히드로-2-(디메틸아미노)메틸-7-플루오로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-2-(디메틸아미노)메틸-7-플루오로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
MeOH 중 2 M 디메틸아민(1.0 mL)을 함유하는 95% 에탄올 중 에틸(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.4 g, 1.33 mmol) 용액에 37% 포름알데히드 수용액(0.5 mL)을 실온 아르곤하에서 부가하였다. 20 시간 후, 반응물을 환류온도에서 5 시간 동안 가열하고, 로터리 진공 펌프에서 농축시켰다. 잔류물을 물과 Et2O 사이에서 분배하여 층을 분리하였다. 수성층을 Et2O로 추출하고 수집한 유기층을 염수로 세척하고, 건조(MgSO4), 및 로터리 진공 펌프에서 농축하여 무색 오일의 표제 화합물(330 mg, 67%)을 얻었다.1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.20(m, 1H), 6.88(m, 2H), 6.67(s, 2H), 4.25(d, J=15.1 Hz, 1H), 4.18(q, 2H), 3.78(m, 1H), 3.74(d, J=15.1 Hz, 1H), 3.55(s, 2H), 3.20(dd, 1H), 2.80(dd, 1H), 2.60(dd, 1H), 2.53(dd, 1H), 2.29(s, 6H), 1.27(t, 3H); MS(ES) m/e 372.3(M + H)+.
제조예14
에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-2-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트의 제조
a)에틸(±)-10,11-디히드로-2-포르밀-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
무수 DMF(40 mL) 중 에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(1.0 g, 3 mmol) 용액에 POCl3(17 mL)를 실온 아르곤하에서 적가하고 이 암용액을 90℃에서 48 시간 동안 가열하였다. 반응물을 로터리 진공 펌프에서 농축시키고 잔류물을 물과 EtOAc 사이에서 분배하였다. 유기층을 분리하고, 건조(MgSO4) 및 로터리 진공 펌프에서 농축시켰다. 잔류물을 크실렌으로부터 재농축(잔류 DMF를 제거하기 위하여)하고 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 7% EtOAc)하여 무색 오일의 표제 화합물(230 mg,21%)을 얻었다. MS(ES) m/e 339.3 (M + H)+.
b)에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-2-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-2-포르밀-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(220 mg, 0.65 mmol), 10% Pd/C(90 mg), 빙초산(15 mL) 및 진한 염산(2 mL)의 혼합물을 수소하(60 psi) 실온에서 교반하였다. 20 시간 후, 이 혼합물을 등록상표 celite를 통하여 여과하고, 여과액을 농축하여 무색 오일의 표제 화합물(200 mg, 95%)을 얻었다. MS(ES) m/e 325.2 (M + H)+.
c) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-2-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
얼음조에서 냉각시킨 무수 CH2Cl2(30 mL)에 디에틸설파이드(0.38 mL, 3.3 mmol) 및 AlCl3(438 mg, 3.3 mmol)을 첨가하였다. 이 용액에 무수 CH2Cl2(6 mL) 중의 에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-2-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(200 mg, 0.6 mmole)을 적가하여 생성된 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 1.0 N HCl(10 mL)로 이 반응을 종료시키고, 층을 분리하였다. 유기층을 건조(MgSO4) 및 로터리 진공 펌프에서 농축하여 무색 오일의 표제 화합물(100 mg, 56%)을 얻었다. MS(ES) m/e 311.2 (M + H)+.
제조예15
에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-6-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트의 제조
a) 6-메톡시-1-(2-메틸페닐)-1-인단올
페닐마그네슘 브로미드를 2-메틸페닐마그네슘 브로미드로 대체한 것 이외에는 제조예 10(a)의 방법에 따라, 오일로서의 표제 화합물을 얻었다. MS(ES) m/e 277.0 (M+Na)+.
b) 6-메톡시-1-(2-메틸페닐)인덴
6-메톡시-1-페닐-1-인단올을 6-메톡시-1-(2-메틸페닐)-1-인단올로 대체한 것 이외에는 제조예 10(a)의 방법에 따라, 무색 오일의 표제 화합물을 얻었고 이어서 실리카 겔 크로마토그래피(3% EtOAc/헥산)하였다. MS(ES) m/e 237.2 (M + H)+.
c) 4-메톡시-2-(2-메틸벤조일)페닐아세트산
6-메톡시-1-페닐인덴을 6-메톡시-1-(2-메틸페닐)인덴으로 대체한 것 이외에는 제조예 10(b)의 방법에 따라 점성 오일의 표제 화합물을 얻었다. MS(ES) m/e 285.3 (M+NH4)+.
d) 4-메톡시-2-(2-메틸벤질)페닐아세트산
2-벤조일-4-메톡시페닐아세트산을 4-메톡시-2-(2-메틸벤조일)페닐아세트산으로 대체한 것 이외에는 제조예 10(c)의 방법에 따라 점성 오일의 표제 화합물을 얻었다. MS(ES) m/e 288.2 (M+NH4)+.
e) 10,11-디히드로-3-메톡시-6-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-온
2-벤질-4-메톡시페닐아세트산을 4-메톡시-2-(2-메틸벤질)페닐아세트산으로 대체한 것 이외에는 제조예 10(d)에 따라, 실리카 겔 크로마토그래피(6% EtOAc/헥산)하여 백색 고체의 표제 화합물을 얻었다. MS(ES) m/e 253.0 (M + H)+.
f) 에틸(±)-10,11-디히드로-10-히드록시-3-메톡시-6-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시크로헵텐-10-온을 10,11-디히드로-3-메톡시-6-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-온으로 대체한 것 이외에는 제조예 10(e)의 방법에 따라, 실리카 겔 크로마토그래피(8% EtOAc/헥산) 후 표제 화합물을 얻었다. MS(ES) m/e 358.2 (M+NH4)+.
g)에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-6-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-10-히드록시-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-10-히드록시-3-메톡시-6-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것 이외에는 제조예 10(f)의 방법에 따라, 실리카 겔 크로마토그래피(5% EtOAc/헥산) 후 무색 오일의 표제 화합물을 얻었다. MS(ES) m/e 325.3 (M + H)+.
h) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-6-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-6-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것 이외에는 제조예 10(g)의 방법에 따라, MeOH로 분쇄한 후 백색 고체의 표제 화합물을 얻었다. MS(ES) m/e 311.2 (M + H)+.
제조예16
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
무수 DMF(10 mL) 중 2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]-4-니트로피리딘-N-옥시드(0.85 g, 4 mmole) 및 디에틸 아조디카르복실레이트 (0.63 mL, 4 mmole)의 용액을 무수 DMF(10 mL) 중 에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.59 g, 2 mmole) 및 트리페닐포스핀(1.10 g, 4.2 mmole) 용액에 실온 아르곤하에서 적가하였다. 23 시간 후, 반응물을 농축시키고 잔류물을 크실렌으로부터 재농축하였다(2X). 실리카 겔 크로마토그래피(구배: 1:1 EtOAc/헥산, 이어서 EtOAc, 이어서 1:1 EtOAc/CHCl3중의 5% MeOH)하여 조생 표제 화합물을 얻었다. 변하지 않은 에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트는 1:1 EtOAc/헥산 분획으로부터 회수할 수 있었다. 조생 표제 화합물의 재 크로마토그래피(1:1 EtOAc/CHCl3중 3% MeOH)하여 황색 발포체의 깨끗한 표제 화합물(0.72 g, 73%)을 얻었다. TLC(10% MeOH in 1:1 EtOAc/CHCl3) Rf0.59;1H NMR(250 MHz, CDCl3) δ 8.19 (d, J=7.1 Hz, 1H), 7.46 (d, J=2.9 Hz, 1H), 7.35 (dd, J=7.1, 2.9 Hz, 1H), 7.00-7.30 (m, 5H), 7.00 (d, J=8.2 Hz, 1H), 6.81 (d, J=2.6 Hz, 1H), 6.70 (dd, J=8.2, 2.6 Hz, 1H), 4.29 (d, J=15.1 Hz, 1H), 4.18 (q, J=7.1 Hz, 2 H), 4.08 (t, J=5.5 Hz, 2H), 3.86 (d, J=15.1 Hz, 1H), 3.72-3.90 (m, 1H), 3.59 (q, J=6.3 Hz, 2H), 3.30 (dd, J=15.0, 4.2 Hz, 1H), 2.93 (dd, J=15.0, 9.3 Hz, 1H), 2.64 (dd, J=15.6, 5.1 Hz, 1H), 2.51 (dd, J=15.6, 9.3 Hz, 1H), 2.10-2.30 (m, 2H), 1.27 (t, J=7.1 Hz, 3H): MS(ES) m/e 492 (M + H)+.
제조예17
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트의 제조
a) 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(S)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것 이외에는 제조예 16에 따라 표제 화합물를 제조하였다. MS(ES) m/e 492 (M + H)+.
제조예18
10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-온의 제조
a) 2-벤질-4-메톡시페닐아세트산
빙초산(600 mL) 중 2-벤조일-4-메톡시페닐아세트산(13.0 g, 0.048 mol)[J. Med. Chem. 1981, 24, 998의 방법에 의해 제조] 용액을 아르곤하에서 4.3 g의 10% Pd/C로 처리하고 50 psi에서 17 시간 동안 수소화(hyrogenate)하였다. 이 혼합물을 등록상표 celite를 이용하여 여과하고 여과액을 농축하고, 톨루엔 및 메틸렌 클로리드로부터 재농축하여 14.2 g의 표제 화합물을 얻었다.
1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 3.52 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 4.0 (s, 3H), 6.7 (m, 2H), 7.15 (m, 6H).
b) 10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-온
벤젠(120 mL) 중 2-벤질-4-메톡시페닐아세트산(14.2 g, 0.055 m) 및 티오닐 클로리드(28 mL)의 용액을 1 시간 동안 환류시키고 농축시켰다. 애시드 클로리드는 무수 메틸렌 클로리드(40 mL) 중에 용해시키고, 이 용액을 메틸렌 클로리드(600 mL) 중 AlCl3(14.7 g, 0.11 mol)의 용액에 아르곤하에서 적가하였다. 이 반응물을 실온에서 2.5 시간 동안 아르곤 대기하에서 교반시키고, 이어서 얼음수(200 mL)로 반응을 정지시켰다. 층들을 분리하고 유기층을 10% NaOH 용액, 물 및 묽은 HCl로 연속적으로 세척하였다. 생성된 용액을 에테르(200 mL)로 희석하여, MgSO4에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류 고체를 에테르/헥산(1:1)으로 분쇄하여 9.35 g의 표제 화합물을 여과에 의해 수거하였다. Mp 105-106℃;1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 3.72 (s, 3H), 4.1 (s, 2H), 4.2 (s, 2H), 6.7 (d, 1H), 6.82 (s, 1H), 7.30 (m, 4H), 8.1 (d, 1H).
제조예19
에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트의 제조
a) 에틸(±)3-(3-메톡시페닐)인덴아세테이트
THF(15 mL) 중 3-(3-메톡시페닐)인덴(4 g, 18 mmol)[J. Med. Chem. 1981, 24, 998의 방법에 의해 제조]의 냉 용액에 0℃에서 5 분에 걸쳐 LiN(TMS)2(20 mL, THF 중 1 M) 용액을 적가하였다. 생성된 용액을 -78℃에서 30 분에 걸쳐 THF(15 mL) 중 에틸 브로모아세테이트(3.34 g, 20 mmol)의 용액에 적가하였다. 2.5 시간 후, 포화 염화암모늄 용액으로 이 혼합물의 반응을 중지시키고 층들을 분리하였다. 유기층은 MgSO4에서 건조시키고 농축시켜 조 산물을 얻고, 이를 컬럼 크로마토그래피(SiO2/2-4% EtOAc/헥산)로 정제하여 표제 화합물(1.1 g)을 얻었다.1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 1.30 (t, 3H), 2.50 (m, 1H), 2.85 (m, 1H), 3.85 (s, 3H), 4.0 (m, 1H), 4.20 (q, 2H), 6.6 (s, 1H), 6.9 (m, 1H), 7.2 (s, 1H), 7.35 (m, 6H).
b) 에틸(±)3-[(3-메톡시벤조일)]페닐숙시네이트
문헌[J. Org. Chem. 1993, 58, 4745]의 방법에 따라, 아세톤(30 mL) 중 에틸(±)3-(3-메톡시페닐)인덴아세테이트(1.1 g, 3.6 mmol) 용액을 오스뮴 테트라옥시드(0.5 mL)의 4% 수용액으로 처리하고 이어서 1.2 M 존스(Jones) 시약(5 mL, 6 mmol)을 적가하였다. 실온에서 밤새 교반시킨 후, 암 반응 혼합물을 이소프로판올(2.5 mL)로 중단시키고, 이어서 소듐 비설파이트 (0.9 g) 및 물(30 mL)을 첨가하였다. 이 산물을 에틸 아세테이트로 추출하고, 염수로 세척하여 MgSO4에서 건조시키고 농축하여 고체 잔류물을 얻었다. 에테르/헥산(1:1)으로 분쇄하여 0.76 g의 표제 화합물을 얻었다.1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 1.18 (t, 3H), 2.90 (m, 1H), 3.3 (m, 1H), 3.92 (s, 3H), 4.1 (q, 2H), 4.4 (m, 1H), 4.4 (d, 1H), 7.25 (m, 2H), 7.5 (m, 6H).
c) 에틸(±)3-[(3-메톡시벤질)]페닐숙시네이트
빙초산(35 mL) 중 에틸(±)3-[(3-메톡시벤조일)]페닐숙시네이트(0.76 g, 2.1 mmol) 및 10% Pd/C(0.6 g)의 혼합물을 50 psi에서 17 시간 동안 수소화하였다. 이 혼합물을 등록상표 celite를 이용하여 여과하고 이 여과 패드를 초산으로 세척하였다. 여과액을 농축시키고 톨루엔 및 메틸렌 클로리드로부터 재농축시켜 0.65 g의 표제 화합물을 얻었다.1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 1.20 (t, 3H), 2.20 (m, 1H), 3.0 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 4.1 (q, 2H), 4.18 (q, 2H), 4.4 (d, 1H), 6.2 (m, 2H), 7.22 (m, 6H).
d) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-11-옥소-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
무수 메틸렌 클로리드(10 mL) 중 에틸(±)3-[(3-메톡시벤질)]페닐숙시네이트 (0.65 g, 1.9 mmol)의 자기 교반 용액에 DMF(0.2 mL) 및 옥살릴 클로리드(0.2 mL, 2.28 mmol)를 부가하였다. 1.5 시간 후, 이 용액을 무수 메틸렌 클로리드(15 mL) 중 알루미늄 클로리드(0.6 g, 4.5 mmol)의 현탁액에 적가하였다. 이 혼합물의 반응을 2 시간 후 얼음수로 중지시키고, 층을 분리하고, 수성층을 메틸렌 클로리드로 추출하였다. 수집한 유기층을 MgSO4로 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(SiO2/2-4% EtOAc/헥산)로 정제하여 표제 화합물(0.3 g)을 얻었다.1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 1.28 (t, 3H), 2.88 (m,1H), 3.55 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.88 (d, 1H), 4.18 (q, 2H), 4.85 (d, 1H), 4.95 (m,1H), 5.8 (m,2H), 7.22 (m,4H), 8.1 (s,1H).
e) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
빙초산(25 mL) 중 에틸(±)10,11-디히드로-3-메톡시-11-옥소-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.3 g, 0.93 mmol) 및 10% Pd/C(0.3 g)의 혼합물을 50 psi에서 18 시간 동안 수소화하였다. 이 혼합물을 등록상표 celite를 이용하여 여과하고 초산으로 세척하였다. 여과액을 농축시키고 톨루엔 및 메틸렌 클로리드로 재농축하여 0.25 g의 표제 화합물을 얻었다.1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 1.28 (t, 3H), 2.60 (m,2H), 2.90 (m, 1H), 3.30 (m, 1H), 3.80 (s, 3H), 3.85 (d, 1H), 4.18 (q, 2H), 4.30 (d, 1H), 6.70 (m, 2H), 7.0 (d, 1H), 7.22 (m, 4H).
제조예20
에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트의 제조
a) 4-메톡시-2-페녹시아세토페논
해리스(Harris, T.W.)등의 방법에 따라[J. Med. Chem. 1982, 25(7), 855-858] 2-플루오로-4-메톡시아세토페논(1.00 g, 5.95 mmole)을 페놀과 반응시켜 오일의 표제 화합물(1.27 g)을 얻었다.1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.90 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.35 (m, 2H), 7.20 (m, 1H), 7.05 (m, 2H), 6.70 (dd, J=2.4, 8.8 Hz, 1H), 6.35 (d, J=2.4 Hz, 1H), 3.75 (s, 3H), 2.61 (s, 3H).
b) 2-(4-메톡시-2-페녹시페닐)-1-모르폴린-4-일에탄-1-티온
해리스(Harris, T.W.)등의 방법에 따라[J. Med. Chem. 1982, 25(7), 855-858] 4-메톡시-2-페녹시아세토페논(1.69 g, 6.98 mmol), 황(0.36 g, 11.2 mmol) 및 모르폴린(0.98 mL, 11.2 mmole)을 반응시켜 백색 고체로서 표제 화합물(1.24 g)을 얻었다. MS(ES) m/e 344.0(M + H)+.
c) 2-(4-메톡시-2-페녹시페닐)아세트산
i-PrOH(15 mL) 및 물(15 mL) 중 2-(4-메톡시-2-페녹시페닐)-1-모르포린-4-일에탄-1-티온(0.35 g, 1.02 mmole) 용액에 KOH(0.57 g, 10.2 mmole)를 첨가하였다. 이 반응액을 환류온도에서 18 시간 동안 가열시키고, 실온으로 냉각시켜서 물로 희석하고 Et2O로 세척하였다. 진한 염산으로 수성층을 약 pH=4로 산화시키고 CHCl3로 추출하였다. 수집한 추출물을 MgSO4로 건조시키고 농축시켜 백색 고체의 표제 화합물(0.22 g)을 얻었다. 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다. MS(ES) m/e 259.0(M + H)+.
d) 3-메톡시디벤조[b,f]옥세핀-10-온
티오닐 클로리드(10 mL) 중 2-(4-메톡시-2-페녹시페닐)아세트산(594 mg, 2.3 mmole) 용액을 환류온도에서 30 분 동안 가열한 후, 농축하여 건조시키고, 잔류물을 톨루엔으로부터 재농축시켰다. 생성된 잔류물을 무수 CH2Cl2(3 mL) 중에 용해시키고, 이 용액을 실온 아르곤하 flame-dried 플라스크내에서 무수 CH2Cl2(4 mL) 중 AlCl3(673 mg, 5.06 mmole)의 현탁액에 적가하였다. 2.5 시간 동안 교반한 후, 이 혼합물을 CH2Cl2(10 mL)로 희석하고 연속하여 1.0 N NaOH 및 염수로 세척하였다. 건조(MgSO4), 농축, 및 실리카 겔 플래시 크로마토그래피(5% EtOAc/헥산)하여 밝은 황색 오일의 표제 화합물(264 mg, 48%)을 얻었다.1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 3.80 (s, 3H), 4.02 (s, 2H), 6.74-8.08 (m, 7H).
e) 에틸(±)-10,11-디히드로-10-히드록시-3-메톡시디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트
무수 EtOAc(0.94 mL, 9.6 mmole)를 -78℃ 아르곤하에서 flame-dried 플라스크에서, 무수 THF(7 mL) 중 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드(THF 중 1.0 M, 7 mL, 7 mmole)의 용액에 적가하였다. 0.5 시간 후, TMEDA(2.4 mL, 16 mmole)을 첨가하였다. 다시 5 분 후, THF(2 mL) 중 3-메톡시디벤조[b,f]옥세핀-10-온(760 mg, 3.2 mmole) 용액을 3 분에 걸쳐 적가하였다. 추가의 무수 THF(0.4 mL)을 전달에 사용하였다. 반응물을 -78℃ 내지 -40℃에서 1 시간 동안 교반시킨 후, 포화 NH4Cl(10 mL)로 반응을 중단시켰다. 이 혼합물을 실온으로 데우고 EtOAc로 추출하였다. 건조(MgSO4), 농축, 및 실리카 겔 플래시 크로마토그래피(10% EtOAc/헥산)으로 투명한 오일의 표제 화합물을 얻었다.1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 1.14-1.20 (t, 3H), 1.21-1.30 (m, 1H), 2.62-2.68 (dd, 1H), 2.94-3.02 (dd, 1H), 3.24-3.30 (dd, 1H), 3.40-3.46 (dd, 1H), 3.40-3.46 (dd, 1H), 3.78 (s, 3H), 4.08-4.18 (m, 2H), 6.60-7.26 (m, 6H), 7.64-7.68 (dd, 1H).
f) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트
보론 트리플루오리드 에테레이트(0.48 mL, 3.9 mmole)를 아르곤하 0℃에서 무수 CH2Cl2중 에틸(±)-10,11-디히드로-10-히드록시-3-메톡시디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트(690 mg, 1.95 mmole) 및 트리에틸실란(0.62 mL, 3.9 mmole)의 용액에 부가하였다. 20 분 후, 5% NaHCO3로 이 반응을 중지시키고, 이 혼합물을 CH2Cl2로 추출하였다. 건조(MgSO4), 농축하여 황색 오일을 얻었다. 이것을 무수 에탄올(20 mL) 중에 용해시키고 10% Pd/C(413 mg, 0.39 mmole)를 부가하였다. 이 혼합물을 Parr 수소화 장치 50 psi에서 3 시간 동안 수소화하였다. 촉매는 등록상표 celite를 통한 여과로 제거하고, 여과액을 농축하여 투명한 오일로서 표제 화합물(523 mg, 86%)을 얻었다.1H NMR(300 MHz, CDCl3) δ 7.18-6.58 (m, 7H), 4.18-4.08 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.80-3.74 (m, 1H), 3.40-3.30 (dd, 1H), 2.98-2.84 (dd, 1H), 2.74-2.62 (dd, 1H), 2.60-2.52 (m, 1H), 1.32-1.20 (t, 3H).
g) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트
CH2Cl2(6.8 mL) 중 에틸(±)-10,11-디히드로-3-메톡시디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트(523 mg, 1.68 mmole)의 용액을 0℃ 아르곤하에서 CH2Cl2(1.0 M, 6.7 mL, 6.7 mmole) 중 BBr3의 냉 용액에 적가하였다. 이 용액을 20 분 동안 교반하고, 이어서 CH3OH(7 mL)를 조심스럽게 첨가하였다. 이 혼합물을 농축시키고 잔여물을 실리카 겔 플래시 크로마토그래피(15-20% EtOAc/헥산)하여 옅은 황색 오일의 표제 화합물(407 mg, 89%)을 얻었다. MS(ES) m/e 299 (M + H)+.
제조예21
2-[(3-브로모-1-프로필)아미노]-4-메틸피리딘-N-옥시드 히드로브로미드의 제조
a) 2-[(3-브로모-1-프로필)아미노]-4-메틸피리딘-N-옥시드 히드로브로미드
CH2Cl2(20 mL) 중 SOBr2(5.0 mL, 64.5 mmole) 용액을 0℃에서 CH2Cl2(100 mL) 중 2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]-4-메틸피리딘-N-옥시드(10.0 g, 54.87 mmole) 용액에 15-20 분에 걸쳐 적가하였다. 이 반응물을 실온으로 데우고 2 시간 동안 교반 한 후, Et2O(200 mL)를 천천히 부가하였다. 점착성의 침전물로부터 용매를 따라내고, 침전물을 추가로 CH2Cl2/Et2O로 세척하였다(수회). 생성된 갈색을 띤 황색의 잔여물을 냉장고에서 밤새 방치하여 고화시켰다. 이 고체를 수거하고 Et2O로 세척하여 황색 고체의 표제 화합물(15.07 g)을 얻었다. 수집한 유기층을 농축하여 추가적으로 백색 바늘상의 표제 화합물(2.05 g)을 얻었다. 표제 화합물의 총량은 17.89 g(96%)이었다. MS(ES) m/e 245 및 247 (M + H)+.
하기 화합물은 상기 제조예에서 기술한 것과 같은 중간 화합물로부터 본원 발명의 생물학적 활성을 갖는 화합물을 제조하는 방법을 예시한다.
실시예 1
(±)-10,11-디히드로-3-[4-(피리딘-2-일아미노)-1-부틸]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 4-(2-테트라히드로피라닐옥시)-1-트리부틸스타닐-1-부틴
2-(3-부티닐옥시)테트라히드로-2H-피란(4.7 mL, 30 mmole)의 무수 THF(60 mL) 중의 용액에 헥산 중 n-부틸리튬(1.6 M, 18.8 mL, 30 mmole) 용액을 아르곤하 0℃에서 2 분에 걸쳐 스팀(steam)으로 부가하였다. 0.5 시간 후, 트리부틸틴 클로리드(8.1 mL, 30 mmole)를 전부 한 번에 첨가하고, 이 반응물을 실온으로 데웠다. 3 시간 후, 이 반응물을 헥산(300 mL)으로 희석하고 물(2×60 mL), 10% KF(2×30 mL), 포화 염수(60 mL)로 차례로 세척하였다. 건조(Na2SO4), 농축, 및 실리카 겔 크로마토그래피(3% EtOAc/헥산)하여 거의 무색의 오일로서 표제 화합물(3.58 g, 27%)을 얻었다. TLC (5% EtOAc/헥산) Rf0.371H NMR(400 MHz, CDCl3)δ 4.66 (narrow t, 1H), 3.75-3.96 (m, 2H), 3.49-3.62(m, 2H), 2.56 (app t, 2H), 1.76-1.91 (m, 1H), 1,65-1.78 (m, 1H), 1.42-1.65 (m, 10H), 1.22-1.41 (m, 6H), 0.82-1.08(m, 15H).
b)에틸(±)-10,11-디히드로-3-[4-(2-테트라히드로피라닐옥시)-1-부틴-1-일]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-(트리플루오로메탄술포닐옥시)-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(1.34 g, 3.13 mmole), 4-(2-테트라히드로피라닐옥시)-1-트리부틸스타닐-1-부틴(1.66 g, 3.76 mmole), LiCl(398 mg, 9.39 mmole), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐 디클로리드(110 mg, 0.094 mmole) 및 무수 디옥산(31 mL)의 혼합물을 아르곤하 환류 온도에서 가열하였다. 1.5 시간 후, 이 반응물을 농축하여 대부분의 디옥산을 제거하고 잔여물을 Et2O(100 mL) 중에서 취하였다. 10% KF(50 mL)를 첨가하고, 이 혼합물을 0.5 시간 동안 격렬하게 교반하였다. 수성층을 제거하고 Et2O층을 등록상표 celite 및 MgSO4의 혼합물을 통하여 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(10% EtOAc/헥산)하여 옅은 황색의 오일로서 표제 화합물(1.12 g, 83%)을 얻었다. TLC (20% EtOAc/헥산) Rf0.401H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.21-7.30(m, 1H), 7.06-7.20(m, 5H), 7.00(d, J=7.8 Hz, 1H), 4.69(t, J=3.6 Hz, 1H), 4.31(d, J=15.2 Hz, 1H), 4.11-4.23(m, 2H), 3.76-3.97(m, 4H), 3.59-3.68(m, 1H), 3.48-3.57(m, 1H), 3.34(dd, J=15.2, 4.1Hz, 1H), 2.97(dd, J=15.2, 9.5 Hz, 1H), 2.70(t, J=7.3 Hz, 2H), 2.65(dd, J=15.7, 4.8 Hz, 1H), 2.51(dd, J=15.7, 9.5 Hz, 1H), 1.78-1.92(m, 1H), 1.68-1.78(m, 1H), 1.44-1.68(m, 4H), 1.27(t, J=7.1 Hz, 3H); MS(ES) m/e 455 (M + Na)+.
c) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[4-(2-테트라히드로피라닐옥시)-1-부틸]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[4-(2-테트라히드로피라닐옥시)-1-부틴-1-일]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(1.2 g, 2.77 mmole), 10% Pd/C (0.3 g, 0.28 mmole) 및 EtOAc(28 mL)의 혼합물을 Parr 장치에서 수소하(50 psi) 실온에서 교반하였다. 3 시간 후 반응물을 등록상표 celite를 통하여 여과하고 여과액을 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피(10% EtOAc/헥산)하여 무색의 오일로서 표제 화합물(1.06 g, 88%)을 얻었다. TLC (20% EtOAc/헥산) Rf0.511H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.05-7.20(m, 4H), 6.92-7.03(m, 3H),4.53-4.60(m, 1H), 4.34(d, J=15.1 Hz, 1H), 4.12-4.26(m, 2H), 3.80-3.90(m, 3H), 3.71-3.80(m, 1H), 3.44-3.53(m, 1H), 3.35-3.44(m, 1H), 3.33(dd, J=15.1, 4.1 Hz, 1H), 2.95(dd, J=15.1, 9.4 Hz, 1H), 2.65(dd, J=15.5, 4.9 Hz, 1H), 2.49-2.61(m, 3H), 1.77-1.90(m, 1H), 1.45-1.77(m, 9H), 1.27(t, J=7.1 Hz, 3H); MS(ES) m/e 459 (M + Na)+.
d) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-(4-히드록시-1-부틸)-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[4-(2-테트라히드로피라닐옥시)-1-부틸]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(456.0 mg, 1.04 mmole) 및 p-톨루엔술폰산 모노히드레이트(60 mg, 0.31 mmole)의 무수 에탄올(10 mL) 중 용액을 실온에서 교반하였다. 2 시간 후 이 반응을 5% NaHCO3(1 mL)로 중단시키고 농축하여 에탄올을 제거하였다. 잔류물을 물(2 mL)로 희석하고 CH2Cl2로 추출하였다. 건조(MgSO4), 농축, 및 실리카 겔 크로마토그래피(1:1 EtOAc/헥산)하여 무색의 오일로서 표제 화합물(342.4 g, 93%)을 얻었다. TLC (1:1 EtOAc/헥산) Rf0.491H NMR(250 MHz, CDCl3)δ 6.85-7.25(m, 7H), 4.34(d, J=15.1 Hz, 1H), 4.08-4.30(m, 2H), 3.75-3.95(m, 2H), 3.53-3.72(m, 2H), 3.33(dd, J=15.1, 4.1 Hz, 1H), 2.95(dd, J=15.1, 9.4 Hz, 1H), 2.40-2.75(m, 4H), 1.45-1.80(m, 4H), 1.27(t, J=7.1 Hz, 3H); MS(ES) m/e 353 (M + H)+.
e) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[4-(N-프탈리디미도)-1-부틸]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-(4-히드록시-1-부틸)-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.37 g, 1.05 mmole), 트리페닐포스핀(0.33 g, 1.26 mmole) 및 프탈이미드(0.19 g, 1.26 mmole)의 무수 THF(10 mL) 중의 용액에 디에틸 아조디카르복실레이트(0.2 mL, 1.26 mmole)를 실온 아르곤하에서 적가하였다. 23 시간 후, 반응물을 로터리 진공 펌프에서 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피(30% EtOAc/헥산)하여 무색의 오일로서 표제 화합물(0.35 g, 70%)을 얻었다. MS(ES) m/e 504.3 (M + Na)+.
f)에틸(±)-10,11-디히드로-3-(4-아미노-1-부틸)-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
실온에서 히드라진 모노히드레이트(0.11 g, 2.18 mmole)를 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[4-(N-프탈리디미도)-1-부틸]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.35 g, 0.73 mmole)의 무수 에탄올(10 mL) 및 톨루엔(2 mL) 중의 용액에 첨가하였다. 이 반응물을 실온에서 17 시간 동안 교반시키고, 여과하며, 여과 패드를 톨루엔으로 세척하였다. 로터리 진공 펌프에서 농축하여 무색 고체로서의 표제 화합물(0.23 g, 90%)을 얻었다. MS(ES) m/e 352.3 (M + H)+.
g) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[4-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-부틸]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
2-클로로피리딘-N-옥시드 히드로클로리드(0.31 g, 1.88 mmole), 에틸(±)-10,11-디히드로-3-(4-아미노-1-부틸)-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.22 g, 0.63 mmole), 및 NaHCO3(0.26 g, 3.13 mmole)의 tert-아밀 알코올(6 mL) 중의 혼합물을 환류 온도에서 21 시간 동안 가열하였다. 이 반응 혼합물을 CH2Cl2(100 mL)로 희석하고 여과하여, 여과액을 로터리 진공 펌프에서 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피(1:9:5 MeOH/CH2Cl2/EtOAc)하여 황색 오일의 표제 화합물(82 mg, 30%)을 얻었다. MS(ES) m/e 445.2 (M + H)+.
h)에틸(±)-10,11-디히드로-3-[4-(피리딘-2-일아미노)-1-부틸]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[4-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-부틸]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.07 g, 0.16 mmole), 10% Pd/C(0.08 g, 0.075 mmole), 시클로헥센(0.16 mL 1.6 mmole) 및 이소프로판올(4 mL)의 혼합물을 아르곤하 환류온도에서 14 시간 동안 가열하고, 등록상표 celite를 통해 여과하여 촉매를 제거하였다. 여과 패드를 이소프로판올 및 메탄올로 세척하고, 여과액을 로터리 진공 펌프에서 농축시켜 무색 오일의 표제 화합물(0.046 g, 69%)을 얻었다. MS(ES) m/e 429.3 (M + H)+.
i)에틸(±)-10,11-디히드로-3-[4-(피리딘-2-일아미노)-1-부틸]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[4-(피리딘-2-일아미노)-1-부틸]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(46 mg, 0.11 mmole) 및 1.0 N LiOH(0.66 mL, 0.66 mmole)의 THF(3 mL) 및 물(3 mL) 중의 혼합물을 실온에서 교반하였다. 24 시간 후, 반응 혼합물을 로터리 진공 펌프에서 농축시키고 잔여물을 물(5 mL)로 희석하였다. 용액을 얼음조에서 냉각시키고, 1.0 N AcOH를 천천히 가하여 흰색 침전을 얻었다. C-18 YMC(0.1% TFA를 함유하는 45% CH3CN/H2O)상에서 크로마토그래피하여 백색 고체의 표제 화합물(13 mg, 21%)을 얻었다. MS(ES) m/e 401.3 (M + H)+. Anal. Calcd for C26H28N2O2·0.75 H2O·1.5 CF3CO2H: C, 59.54; H, 5.31; N, 4.72. Found: C, 59.69; H, 5.31; N, 4.72.
실시예2
(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.67 g, 1.36 mmole), 에탄올 중의 1.0 M NaOEt(6.8 mL, 6.8 mmole) 및 무수 에탄올(6.9 mL)을 혼합하고, 상기 혼합물을 70℃로 미리 고정시킨 오일 배드내에서 승온시켰다. 짙은 용액이 생성되면 10 분간 데운 후, 상기 오일 배드를 제거하고, 상기 용액을 외부 가열없이 5-7 분 더 교반하였다. 얻어진 용액을 얼음내에서 냉각시키고, 반응을 빙초산(0.47 mL, 8.2 mmole)로 정지시켰다. 상기 혼합물을 농축시키고 잔여물을 CH2Cl2(10 ml)와 절반-포화시킨 NH4Cl(10 mL) 상이에서 분배시켰다. 상기 층들을 분리하고 수성 층을 CH2Cl2(2 x 10 mL)로 추출하였다. 수집된 유기층을 건조시키고(MgSO4) 농축하고, 잔여물을 톨루엔으로부터 재농축하여 붉은 오렌지색 오일을 얻었다. 실리카 겔 크로마토그래피(5% MeOH/CHCl3)하여 표제 화합물(601.1 mg, 90%)을 황색 오일로 얻었다:TLC(5% MeOH/CHCl3)Rf0.36;1H NMR(250 MHz, CDCl3) δ7.95(d, J=7.1 Hz, 1H), 6.88-7.30(m, 6H), 6.77(d, J=2.6 Hz, 1H), 6.67(dd, J=8.2, 2.6 Hz, 1H), 5.95-6.20(m, 2H), 4.28(d, J=15.0 Hz, 1H), 4.18(q, J=7.2 Hz, 2H), 4.04(t, J=5.6 Hz, 2H), 3.65-4.00(m, 4H), 3.46(q, J=6.5 Hz, 2H), 3.30(dd, J=15.0, 4.2 Hz, 1H), 2.93(dd, J=15.0, 9.2 Hz, 1H), 2.65(dd, J=15.6, 5.0 Hz, 1H), 2.52(dd, J=15.6, 9.4 Hz, 1H), 1.95-2.25(m, 2H), 1.10-1.45(m, 6H); MS(ES) m/e 491 (M + H)+.
b)에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(601.1 mg, 1.23 mmole), 시클로헥센(1.2 mL, 12.3 mmole), 10% Pd/C(130 mg, 0.012 mmole) 및 무수 에탄올(12.3 mL)의 혼합물을 아르곤 하의 환류온도에서 가열하였다. 23.5 시간 경과후, 반응물을 등록상표 celite를 통하여 고온-여과하고, 필터 패드를 에탄올로 세척하였다. 상기 여과액을 농축하고 잔여물을 톨루엔으로부터 재농축하였다. 실리카 겔 크로마토그래피(1:1 EtOAc/CHCl3중의 5% MeOH)하여 표제 화합물(528.1 mg, 90%)을 밝은 황색 오일로 얻었다:TLC(EtOAc/CHCl3중의 10% MeOH)Rf0.67;1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ7.89(d, J=5.8 Hz, 1H), 7.05-7.18(m, 4H), 6.99(d, J=8.2 Hz, 1H), 6.77(d, J=2.6 Hz, 1H), 6.66(dd, J=8.2, 2.6 Hz, 1H), 6.17(dd, J=5.8, 2.1 Hz, 1H), 5.86(d, J=2.1 Hz, 1H), 4.73(br t, 1H), 4.28(d, J=14.9 Hz, 1H), 4.11-4.25(m, 2H), 4.04(t, J=5.9 Hz, 2H), 3.98(q, J=7.0 Hz, 2H), 3.83(d, J=14.9 Hz, 1H), 3.76-3.85(m, 1H), 3.43(q, J=6.4 Hz, 2H), 3.30(dd, J=15.0, 4.1 Hz, 1H), 2.93(dd, J=15.0, 9.2 Hz, 1H), 2.64(dd, J=15.6, 4.8 Hz, 1H), 2.52(dd, J=15.6, 9.5 Hz, 1H), 2.01-2.11(m, 2H), 1.37(t, J=7.0 Hz, 3H), 1.27(t, J=7.0 Hz, 3H); MS(ES) m/e 475 (M + H)+.
c) (±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
무수 에탄올(11 mL) 중의 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(528.1 mg, 1.11 mmole) 용액에 1.0 N NaOH(1.7 mL, 1.7 mmole)를 실온에서 적가하고, 상기 용액을 45℃로 미리 고정된 오일 배드에서 승온시켰다. 20 시간 경과후, 반응물을 농축시키고 잔여물을 H2O로부터 재농축하였다. 생성된 잔여물을 H2O(10 mL)내에서 용해시키고 상기 용액을 여과하였다. 상기 pH를 1.0 N HCl로 7로 조절하고, 상기 혼합물을 격렬하게 교반하여 초기에 형성된 검상태의 침전물을 고체로 변환시켰다. 이러한 변환을 위하여 유리 막대 및 스파튤러로 분쇄하였다. 생성된 혼합물의 pH를 7로 조절하고, 상기 고체를 수집하고 다량의 H2O로 세척하였다. 여과액을 농축하고 잔여물을 소량의 1.0 N NaOH를 사용하여 H2O에 용해시켰다. pH를 7로 조절하여 소량의 수확물을 한 번 더 얻었다. 수확물을 수집하고 진공에서 건조하여(40-50℃) 표제 화합물(453.7 mg, 82%)을 회백색 고체로 얻었다:HPLC(등록상표 Hamilton PRP-1, 45% CH3CN/H2O 함유 0.1% TFA) k'=1.32;1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ7.78(d, J=6.6 Hz, 1H), 7.35-7.65(m, 1H), 7.02-7.22(m, 4H), 6.97(d, J=8.3 Hz, 1H), 6.82(d, J=2.4 Hz, 1H), 6.68(dd, J=8.3, 2.4 Hz, 1H), 6.29(dd, 1H), 6.15(narrow d, 1H), 4.20(d, J=14.6 Hz, 1H), 3.93-4.12(m, 4H), 3.89(d, J=14.6 Hz, 1H), 3.60-3.71(m, 1H), 3.30-3.50(m, 2H), 3.20(dd, J=15.1, 4.1 Hz, 1H), 2.83(dd, J=15.1, 10.1 Hz, 1H), 2.60(dd, J=16.0, 5.3 Hz, 1H), 2.48(dd, J=16.0, 8.9 Hz, 1H, 잔류 용매 신호에 의하여 부분적으로 구별어려움), 1.90-2.05(m, 2H), 1.30(t, J=6.9Hz, 3H); MS(ES) m/e 447 (M + H)+. C27H30N2O4·1.5HCl(계산치):C, 64.70; H, 6.33; N, 5.59. 측정치:C, 64.53; H, 6.14; N, 5.31.
실시예3
(±)-10,11-디히드로-3-[2-[2-(에틸아미노)티아졸-4-일]-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[2-[2-(에틸아미노)티아졸-4-일]-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
무수 DMF(5 mL) 중의 2-(에틸아미노)-4-티아졸에탄올(0.33 g, 1.9 mmole) 및 디에틸 아조디카르복실레이트(0.30 mL, 1.9 mmole)의 용액을 무수 DMF(5 mL) 중의 (±)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(296.4 mg, 1 mmole) 및 트리페닐포스핀(525 mg, 2 mmole) 용액에 실온에서 5 분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 부가 도중에 실온의 물 배드 내에서 냉각하여 유지하였다. 16 시간 경과 후, 반응물을 농축하고 잔여물을 크실렌으로 2 회 재농축하였다. 실리카 겔 크로마토그래피(20% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물(145.0 mg, 32%)을 황색 오일로 얻었다:TLC(1:1 EtOAc/헥산)Rf0.60;1H NMR(250 MHz, CDCl3) δ7.00-7.30(m, 4H), 6.98(d, J=8.2 Hz, 1H), 6.77(d, J=2.6 Hz, 1H), 6.68(dd, J=8.2, 2.6 Hz, 1H), 6.21(s, 1H), 5.00-5.25(m, 1H), 4.04-4.38(m, 5H), 3.81(d, J=15.1 Hz, 1H), 3.70-3.90(m, 1H), 3.13-3.40(m, 3H), 2.99(t, J=6.7 Hz, 2H), 2.92(dd, J=14.9, 9.3 Hz, 1H), 2.64(dd, J=15.6, 5.0 Hz, 1H), 2.51(dd, J=15.6, 9.3 Hz, 1H), 1.27(t, J=7.2 Hz, 3H); MS(ES) m/e 451 (M + H)+.
b) (±)-10,11-디히드로-3-[2-[2-(에틸아미노)티아졸-4-일]-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
THF(2.4 mL) 및 H2O(0.48 mL) 중의 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[2-[2-(에틸아미노)티아졸-4-일]-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(145.0 mg, 0.32 mmole)의 용액에 0℃에서 1.0 N LiOH(0.32 mL, 0.32 mmole)을 적가하였다. 생성된 분홍색을 띤 오렌지색의 2-상 혼합물을 0℃에서 10 분간 교반한 후(교반도중에 색깔이 오렌지색을 띤 황색으로 변해감), 실온까지 승온시켰다. 1.5 시간 경과 후에, 약간의 H2O(5 방울)를 더 부가하고 반응물을 42 시간 동안 교반한 후, 0℃까지 냉각시키고 TFA(0.025 mL)로 중화시켰다. THF를 로터리 진공 펌프에서 제거하고, 생성되는 오일상의 잔여물을 0.1% TFA/CH3CN으로 희석하여 균질 용액을 얻었다. ODS 크로마토그래피(구배:40% CH3CN/H2O 함유 0.1% TFA, 이어서 45% CH3CN/H2O 함유 0.1% TFA)로 표제 화합물을 함유하는 분획을 얻었다. 상기를 수집하여 CH3CN을 로타리 진공 펌프에서 제거하였다. 생성되는 수성 혼합물을 0℃에서 염기성으로 만들어서 균질한 용액을 얻었다. 1.0 N HCl로 조심스럽게 pH 4-5로 산성화하여 고체 침전물을 얻고, 이를 수집하여 다량의 H2O로 세척하고, 건조하여 표제 화합물(80.9 mg, 51%)을 회백색 고체로 얻었다:HPLC(등록상표 Hamilton PRP-1, 45% CH3CN/H2O 함유 0.1% TFA) k'=0.89;1H NMR(400 MHz, CD3OD) δ7.02-7.18(m, 4H), 7.00(d, J=8.3 Hz, 1H), 6.79(d, J=2.6 Hz, 1H), 6.68(dd, J=8.3, 2.6 Hz, 1H), 6.45(s, 1H), 4.26(d, J=14.9 Hz, 1H), 4.20(t, J=6.4 Hz, 2H), 3.87(d, J=14.9 Hz, 1H), 3.68-3.80(m, 1H), 3.34(q, J=7.3 Hz, 2H, 잔류하는 용매 신호로 인하여 부분적으로 식별 어려움), 3.30(dd, 1H, 잔류 용매 신호 때문에 식별 어려움), 2.99(t, J=6.4 Hz, 2H), 2.92(dd, J=15.0, 9.4, 1H), 2.62(dd, J=15.9, 5.0 Hz, 1H), 2.47(dd, J=15.9, 9.3 Hz, 1H), 1.27(t, J=7.3 Hz, 3H); MS(ES) m/e 423 (M + H)+. C24H26N2O3S·0.67CF3CO2H(계산치):C, 61.03; H, 5.39; N, 5.62. 측정치:C, 61.21; H, 5.36; N, 5.60.
실시예4
(S)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
아르곤 하의 무수 THF(1.1 L) 및 무수 DMF(600 mL) 중의 에틸(S)-10,11-디히드로-3-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(35 g, 118 mmole)의 교반된 용액에 2-[(3-히드록시-1-프로필)-아미노]피리딘-N-옥시드(29.4 g, 175 mmole) 및 트리페닐포스핀(45.9 g, 175 mmole)을 부가하였다. 모든 고체가 완전히 용해된 후(약 1 시간), 반응물을 얼음 배드 내에서 0℃까지 냉각시키고 디이소프로필 아조디카르복실레이트(36.4 mL, 95%, 175 mmol)을 시린지를 통하여 부가하였다. 반응물을 실온까지 천천히 승온시키고 18 시간 동안 교반하였다. 농축 및 실리카 겔 상의 플래시 크로마토그래피(95:5 CHCl3/MeOH)에 이은 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피(80:20:5 CHCl3/EtOAc/EtOH)에 의한 제2 정제에 의하여 표제 화합물(37.66g, 71%)을 옅은 황색 고체 발포체로 얻었다:1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ8.08(dd, J=6.3, 1.1 Hz, 1H), 7.29(t, 1H), 7.19-7.06(m, 5H), 6.97(d, J=8.3 Hz, 1H), 6.84(d, J=2.5, 1H), 6.79(dd, J=8.5, 1.6 Hz, 1H), 6.69(dd, J=8.3, 2.6 Hz, 1H), 6.57(m, 1H), 4.17(d, J=14.7 Hz, 1H), 4.13-4.07(m, 2H), 4.00(t, 2H), 3.91(d, J=14.7 Hz, 1H), 3.66(m, 1H), 3.39(t, 2H), 3.19(dd, J=15.1, 4.5 Hz, 1H), 2.85(dd, J=15.1, 10.0 Hz, 1H), 2.65(dd, J=15.8, 5.4 Hz, 1H), 1.99(m, 2H), 1.18(t, 3H); MS(ES) m/e 447.3 (M + H)+.
b)에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
이소프로판올(700 mL) 중의 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(37.66 mg, 84 mmol)의 교반된 용액에 아르곤하의 이소프로판올 중에서 조심스럽게 미리 습윤된 활성 탄소 상의 10% 팔라듐(18 g, 16.9 mmol) 및 시클로헥센(85 mL, 839 mmol)을 부가하였다. 이어서 상기 반응물을 90℃로 고정된 오일 배드내에서 아르곤 하의 환류온도에서 가열하였다. 6 시간 경과후, 활성 탄소 상의 10% 팔라듐(18 g, 84 mmole, 아르곤하의 이소프로판올 중에서 조심스럽게 예비 습윤) 및 시클로헥센(85ml, 839 mmol)을 더 부가하였다. 18 시간 더 경과한 후, 반응물을 등록상표 celite를 통하여 고온-여과하고, 필터 패드를 1:1 MeOH/CHCl3(600 mL)로 세척하였다. 상기 여과액을 진공하에서 농축하고 잔여물을 실리카겔 상의 플래시 크로마토그래피(95:5 CHCl3/MeOH) 중에서 정제하여 표제 화합물(29.2 g, 81%)을 옅은 황색 오일로서 얻었다:1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ7.94(dd, J=5.4, 1.9 Hz, 1H), 7.35-7.31(m, 1H), 7.18(d, J=7.2 Hz, 1H), 7.14-7.06(m, 3H), 6.97(d, J=8.3 Hz, 1H), 6.83(d, J=2.6 Hz, 1H), 6.68(dd, J=8.3, 2.6 Hz, 1H), 6.54(t, 1H), 6.44(m, 2H), 4.17(d, J=14.6Hz, 1H), 4.13-4.02(m, 2H), 4.00(t, 2H), 3.91(d, J=14.7 Hz, 1H), 3.66(m, 1H), 3.35(m, 2H), 3.19(dd, J=15.1, 4.4 Hz, 1H), 2.86(dd, J=15.1, 10.1 Hz, 1H), 2.65(dd, J=15.8, 5.4 Hz, 1H), 2.55(dd, J=15.8, 8.7 Hz, 1H), 1.93(m, 2H), 1.18(t, 3H); MS(ES) m/e 431.4 (M + H)+.
c)(S)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
디옥산(350 mL) 중의 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(29.20 mg, 68 mmole)의 교반된 용액에 1.0 N NaOH 수용액(110 mL, 110 mmol)을 부가하였다. 상기 탁한 반응물을 50℃ 오일 배드에서 24 시간 동안 교반한 후 생성된 균질 용액을 1.0 N HCl 수용액(110 mL, 110 mmol)으로 중화하였다. 용액을 로터리 진공 펌프에서 거의 건조될 정도로 농축하여 생성물을 침전시켰다. 부유물을 따라내고 잔여 검상태의 고체를 진공하에서 건조시키고 1:1 메탄올/CHCl3내에서 재용해하였다. 이어서 투명한 용액을 로터리 진공 펌프에서 증발시켜 재농축시키고 진공하에서 완전히 건조시켰다. 잔여 고체를 소량의 물과 함께 분쇄하고, 여과하고 진공하에서 건조하여 표제 화합물(26.85 g, 94%)을 회백색 분말로 얻었다:HPLC(등록상표 Hamilton PRP-1, 35% CH3CN/H2O 함유 0.1% TFA) k'=2.88;1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ7.94(dd, J=4.7, 1.6 Hz, 1H), 7.38(m, 1H), 7.18(d, J=7.3 Hz, 1H), 7.14(d, J=3.9 Hz, 2H), 7.08(m, 1H), 6.97(d, J=8.4 Hz, 1H), 6.83(d, J=8.6 Hz, 1H), 6.78(br s, 1H), 6.68(dd, J=8.2, 2.6 Hz, 1H), 6.50(d, J=8.2 Hz, 1H), 6.47(dd, 1H), 4.20(d, J=14.6 Hz, 1H), 4.00(t, 2H), 3.88(d, J=14.6 Hz, 1H), 3.67(m, 1H), 3.37(m, 1H), 3.20(dd, J=15.2, 4.4 Hz, 1H), 2.83(dd, J=15.2, 10.1 Hz, 1H), 2.60(dd, J=15.9, 5.3 Hz, 1H), 2.50(dd, 1H), 1.95(m, 1H); MS(ES) m/e 403.3 (M + H)+. C25H26N2O3·H2O(계산치):C, 71.41; H, 6.71; N, 6.66. 측정치:C, 72.21; H, 6.53; N, 6.54.
실시예5
(±)-10,11-디히드로-3-[2-(6-아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[2-(6-아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
무수 DMF(5 mL) 중의 6-아미노-2-피리딜에탄올(0.23g, 1.68 mmol) 및 디에틸 아조디카르복실레이트(0.26 mL, 1.68 mmol)의 용액을 무수 DMF(5 mL) 중의 에틸 (±)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트 및 트리페닐포스핀(0.48 g, 1.82 mmol) 용액에 실온에서 적가하였다. 1 시간 경과후, 반응물을 농축하고 잔여물을 실리카 겔 상의 플래시 크로마토그래피(1:1 EtOAc/헥산)으로 정제하여 표제 화합물(0.030 g)을 얻었다: MS(ES) m/e 417 (M + H)+.
b)(±)-10,11-디히드로-3-[2-(6-아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
MeOH(2 mL) 중의 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[2-(6-아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.030 g, 0.072 mmol) 및 1 N NaOH(0.14 mL, 0.14 mmol)의 용액을 실온에서 밤새도록 교반한 후, 농축하였다. 잔여물을 H2O에 용해시키고 용액의 pH를 1.0 N HCl에 의하여 7로 조절하였다. 농축 및 C-18 Bond Elute 컬럼 상의 크로마토그래피(10:9:1 CH3CN/H2O/TFA)에 의하여 표제 화합물(0.013 g)을 얻었다: MS(ES) m/e 389 (M + H)+.
실시예6
(R)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(R)-10,11-디히드로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
무수 DMF(8 mL) 중의 에틸(R)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.45 g, 2 mmole) 및 트리페닐포스핀(1.2 g, 4 mmole)의 용액에 무수 DMF(20 mL) 중의 2-[(3-히드록시-1-프로필)-아미노]피리딘-N-옥시드(0.70 g, 4 mmol) 및 디메틸 아조디카르복실레이트(0.65 ml, 4 mmole)의 용액을 아르곤하의 실온에서 부가하였다. 23.5 시간 경과후, 반응물을 로터리 진공 펌프에서 농축하고 잔여물을 크실렌으로 재농축하여 잔류 DMF를 제거하였다. 실리카 겔 크로마토그래피(1-4% CH3OH/CH2Cl2)에 의하여 표제 화합물(0.50 g, 74%)을 황색 오일로서 얻었다: MS(ES) m/e 447 (M + H)+.
b)에틸(R)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(R)-10,11-디히드로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.5g, 1 mmol), 10% Pd/C(0.25g, 0.2 mmol), 시클로헥센(2 mL, 20 mmole) 및 이소프로판올(10 mL)의 혼합물을 환류온도에서 18시간 동안 가열한 후, 촉매를 등록상표 celite를 통하여 여과하여 제거하였다. 실리카 겔 크로마토그래피(0.5-2% CH3OH/CH2Cl2)에 의하여 표제 화합물(0.4g, 83%)을 밝은 황색 오일로서 얻었다: MS(ES) m/e 431(M + H)+.
c)(R)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
무수 EtOH(10 mL) 중의 중의 에틸(R)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.4 g, 0.93 mmole) 및 1.0 N NaOH 수용액(1.1 mL, 1.1 mmol)의 혼합물을 50℃로 고정된 오일 배드 내에서 승온시켰다. 18 시간 경과 후, 반응물을 로터리 진공 펌프에서 농축하고 잔여물을 H2O에 용해시켰다. 상기 수용액을 3 N HCl로 pH를 4로 조절하고, 고체 침전물을 수집하여 H2O로 세척하였다. 상기 물질을 40℃하의 고진공에서 건조하여 표제 화합물(0.36 g, 96%)을 거의 무색인 고체로 얻었다: [α]D+50.8。(c=0.12, CH3OH); MS(ES) m/e 403 (M + H)+. C25H26N2O3·0.5H2O(계산치):C, 72.97; H, 6.61; N, 6.80. 측정치:C, 73.09; H, 6.38; N, 6.58.
실시예7
(S)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]피리딘-N-옥시드를 6-(메틸아미노)-2-피리딜에탄올로 대체하고 에틸(R)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(S)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로펜텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(a)의 공정에 따라, 표제 화합물을 무색 오일로 얻고 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하였다(0.2-2% MeOH/CH2Cl2): MS(ES) m/e 431.2 (M + H)+.
b) (S)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(80 mg, 0.18 mmol)을 THF(4 mL)에 용해시키고 H2O(4 mL) 중의 LiOH·H2O(35 mg, 0.84 mmol)의 용액을 부가하였다. 용액을 실온에서 72 시간 동안 교반한 후, 에테르(10 mL)로 희석하였다. 부유물을 따라내고 고체를 H2O에서 현탁시켰다. 3 N HCl로 조심스럽게 pH 4로 산성화하여 표제 화합물을 백색 고체로 얻었다: MS(ES) m/e 403 (M + H)+. C25H26N2O3·0.75H2O(계산치):C, 72.18; H, 6.66; N, 6.73. 측정치:C, 72.44; H, 6.52; N, 6.71.
실시예8
(±)-10,11-디히드로-3-[3-(3,4,5,6-테트라히드로피리미딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로벤질옥시카르보닐)아미노-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]피리딘-N-옥시드를 3-(4-니트로벤질옥시카르보닐아미노)-1-프로판올로 대체하고 에틸(R)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(a)의 공정에 따라, 표제 화합물을 호박색 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 533.3 (M + H)+.
b) 에틸 (±)-10,11-디히드로-3-(3-아미노-1-프로필옥시)-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로벤질옥시카르보닐아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(1.6 g, 3 mmol), 활성탄 상의 10% 팔라듐(0.8 g, 1 mmol) 및 에탄올(50 mL)의 혼합물을 H2(48 psi)하에서 3 시간 동안 진탕한 후, 촉매를 등록상표 celite를 통하여 여과하여 제거하였다. 여과액을 농축하여 표제 화합물(1.2 g, 100%)을 황색 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 348.2 (M + H)+.
c) 에틸 (±)-10,11-디히드로-3-[3-(피리미딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-(3-아미노-1-프로필옥시)-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.4 g, 1 mmol), 중탄산나트륨(0.5 g, 6 mmole), 2-브로모피리미딘(0.34 g, 2 mmole) 및 에탄올(10 mL)의 혼합물을 아르곤하 환류온도에서 18 시간 동안 가열하였다. 이어서, 상기 용액을 따라내고 농축하였다. 잔여물을 실리카 겔상의 크로마토그래피(0.2-2% MeOH/CH2Cl2)로 정제하여 표제 화합물(0.17 g, 34%)을 옅은 황색 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 432.3 (M + H)+.
d) 에틸 (±)-10,11-디히드로-3-[3-(3,4,5,6-테트라히드로피리미드-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(피리미딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.17 g, 0.38 mmol), 활성탄 상의 10% 팔라듐(0.085 g, 0.08 mmol), 디옥산(0.1 mL, 0.4 mmol) 중의 4M HCl 및 에탄올(5 mL)의 혼합물을 H2(48 psi)하에서 6 시간 동안 진탕한 후, 촉매를 등록상표 celite를 통하여 여과하여 제거하였다. 여과액을 농축하여 표제 화합물(0.19 g)을 황색 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 436.3 (M + H)+.
e) 에틸 (±)-10,11-디히드로-3-[3-(3,4,5,6-테트라히드로피리미드-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(3,4,5,6-테트라히드로피리드-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.17 g, 0.36 mmol), 리튬 히드록시드 모노히드레이트(0.042 g, 1 mmol), THF(3 mL) 및 물(10 mL)의 용액을 실온에서 20 시간 동안 교반한 후, 농축하였다. 잔여물을 물에 용해시키고, 3 N HCl로 용액의 pH를 4로 조절하였다. 생성된 용액을 냉장고내에 밤새 거치시킨 후, 부유물을 고체로부터 따라내어 제거하였다. 상기 고체를 진공에서 건조시켜서 표제 화합물(0.145 g, 91%)을 갈색 고체로 얻었다: MS(ES) m/e 408.3 (M + H)+. C24H29N3O3·1.3H2O(계산치):C, 63.37; H, 6.71; N, 9.23. 측정치:C, 63.67; H, 6.84; N, 9.46.
실시예9
(±)-10,11-디히드로-3-[3-(이소퀴놀린-1-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(1-옥소이소퀴놀린-1-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]피리딘-N-옥시드를 1-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]-이소퀴놀린 N-옥시드로 대체하고 에틸(R)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(a)의 공정에 따라, 표제 화합물을 옅은 황색 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 497.2 (M + H)+.
b)에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(이소퀴놀린-1-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸 (R)-10,11-디히드로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(1-옥소이소퀴놀린-1-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(b)의 공정에 따라, 표제 화합물을 투명한 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 481.3 (M + H)+.
c) (±)-10,11-디히드로-3-[3-(이소퀴놀린-1-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸 (R)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(이소퀴놀린-1-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(c)의 공정에 따라, 표제 화합물을 호박색 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 453.2 (M + H)+. C29H28N2O3·1.3TFA·0.25H2O(계산치):C, 62.71; H, 4.96; N, 4.63. 측정치:C, 62.45; H, 4.92; N, 4.41.
실시예10
(±)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(에틸티오)피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(에틸티오)-1-옥소피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(300 mg, 0.61 mmol) 및 소듐 티오에틸레이트(145 mg, 1.22 mmol)의 DMF(5 mL) 중의 용액을 70℃에서 3 시간 동안 승온시켰다. 용매를 로터리 진공 펌프에서 제거하고 잔여물을 실리카 겔 크로마토그래피(2-6% CH3OH/CH2Cl2)에서 정제하여 표제 화합물(90 mg)을 오렌지색 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 507.3 (M + H)+.
b)에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(에틸티오)피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(에틸티오)-1-옥소피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(60 mg, 0.119 mmol), Fe 분말(70 mg) 및 빙초산(2 mL)을 100℃에서 1.5 시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온까지 냉각하고 H2O 및 EtOAc로 희석하고, 고체 Na2CO3로 pH를 7-8로 조절하였다. 층들을 분리하고, 수성층을 EtOAc로 추출하였다. 수집한 유기층을 H2O로 세척하고, 건조시키고(MgSO4), 농축하여 표제 화합물(60 mg)을 황색 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 491.3 (M + H)+.
c) (±)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(에틸티오)피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸 (R)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(에틸티오)피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(c)의 공정에 따라, 표제 화합물을 황색으로 얻었다:1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 7.77-7.76(d, 1H), 7.17-7.15(d, 1H), 7.13-7.12(d, 2H), 7.08-7.07(m, 1H), 6.96-6.94(d, 1H), 6.81-6.80(s, 1H), 6.68-6.67(d, 1H), 6.52(s 1H), 6.35-6.33(d, 2H), 6.30(s, 1H), 4.20-4.16(d, 1H), 3.99-3.96(t, 2H), 3.89-3.85(d, 1H), 3.65-3.63(m, 1H), 3.36-3.32(m, 2H), 3.22-3.15(m, 1H), 2.96-2.90(m, 2H), 285-2.78(m, 1H), 2.62-2.56(m, 2H), 1.94-1.90(m, 2H), 1.26-1.22(t, 3H); MS(ES) m/e 463.4(M + H)+.
실시예11
(±)-10,11-디히드로-2-메틸-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-2-메틸-3-[3-[N-(tert-부톡시카르보닐)-N-(1-옥소피리딘-2-일)아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-2-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(100 mg, 0.32 mmol)의 DMSO(2 mL) 중의 용액에 NaH(광유중에 60% 분산, 0.14 g, 0.37 mmol)을 아르곤하에 부가하고, 반응물을 실온에서 0.5 시간 동안 교반하였다. 이어서, DMSO(1 mL) 중의 2-[N-(3-메탄술포닐옥시-1-프로필)-N-(tert-부톡시카르보닐)아미노]피리딘-N-옥시드(160 mg, 0.4 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응물을 실온의 아르곤하에서 18 시간 동안 교반한 후에, 물(20 mL)로 반응을 중지시키고 EtOAc로 추출하였다. 건조시키고(MgSO4), 농축하고, 실리카 겔 크로마토그래피(1% MeHO/CH2Cl2)하여 표제 화합물(85 mg, 42%)을 무색 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 561.3 (M + H)+.
b) 에틸(±)-10,11-디히드로-2-메틸-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
무수 CH2Cl2(3 mL) 중의 에틸(±)-10,11-디히드로-2-메틸-3-[3-[N-(tert-부톡시카르보닐)-N-(1-옥소피리딘-2-일)아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(80 mg, 0.14 mmol)의 용액에 TFA(0.16 g, 1.4 mmol)을 적가하였다. 반응물을 5 시간 동안 교반한 후 로터리 진공 펌프에서 농축하여 표제 화합물(60 mg, 43%)을 무색 오일로 얻었다:MS(ES) m/e 461.1 (M + H)+.
c)에틸(±)-10,11-디히드로-2-메틸-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸 (R)-10,11-디히드로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-2-메틸-3-[3-(1-옥소피리딘-1-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(b)의 공정에 따라, 표제 화합물을 투명한 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 417.3 (M + H)+.
d) (±)-10,11-디히드로-2-메틸-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸 (R)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-2-메틸-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(c)의 공정에 따라, 표제 화합물을 회백색 고체로 얻었다:1H NMR(400 MHz, CDCl3) δ 7.75(d, 1H), 7.65(t, 1H), 7.15(m, 3H), 7.05(m, 1H), 6.83(s, 1H), 6.7(d, 1H), 6.65(m, 1H), 6.60(s, 1H), 4.25(d, J=15.1 Hz, 1H), 4.05(t, 2H), 3.80(m, 1H), 3.75(d, J=15.1 Hz, 1H), 3.50(t, 2H), 3.25(dd, 1H), 2.85(dd, 1H), 2.68(dd, 1H), 2.60(dd, 1H), 2.15(t, 2H), 2.10(s, 3H); MS(ES) m/e 417.3(M + H)+.
실시예12
(±)-10,11-디히드로-2-(디메틸아미노)메틸-7-플루오로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-2-(디메틸아미노)메틸-7-플루오로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(R)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-2-(디메틸아미노)메틸-7-플루오로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(a)의 공정에 따라, 표제 화합물을 얻고 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하였다(구배: 1:1 EtOAc 헥산, 이어서, EtOAc, 이어서, 20% MeOH/CH2Cl2, 이어서 30% MeOH/CH2Cl2): MS(ES) m/e 522.3 (M + H)+.
b)에틸(±)-10,11-디히드로-2-(디메틸아미노)메틸-7-플루오로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸 (R)-10,11-디히드로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-2-(디메틸아미노)메틸-7-플루오로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(b)의 공정에 따라, 표제 화합물을 얻고 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하였다(10% MeOH/CH2Cl2): MS(ES) m/e 506.2 (M + H)+.
c) (±)-10,11-디히드로-2-(디메틸아미노)메틸-7-플루오로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸 (R)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-2-(디메틸아미노)메틸-7-플루오로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(c)의 공정에 따라 비누화반응을 수행하였다. 반응물을 빙초산으로 산성화하고 조생성물을 XAD-2 수지 상의 크로마토그래피에 의하여 탈염하여 표제 화합물을 백색 고체로 얻었다: MS(ES) m/e 478.3 (M + H)+. C30H36FN3O5·1.25H2O(계산치):C, 64.32; H, 6.92; N, 7.50. 측정치:C, 63.87; H, 6.47; N, 7.96.
실시예13
(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]-4-메틸피리딘-N-옥시드(1.72 g, 9.45 mmole) 및 디에틸 아조디카르복실레이트(1.49 mL, 9.45 mmole)의 무수 DMF(50 mL) 중의 용액을 에틸(S)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트 (1.4 g, 4.72 mmole) 및 트리페닐포스핀(2.60 g, 9.92 mmole)의 무수 DMF(50 mL) 중의 용액에 아르곤하의 실온에서 10 분에 걸쳐 적가하였다. 19 시간 경과 후, 반응물을 로터리 진공 펌프에서 농축하고, 잔여물을 크실렌으로부터 재농축하여 잔류 DMF를 제거하였다. 실리카 겔 크로마토그래피(구배: 30% EtOAc/헥산(0.5L), 이어서 EtOAc(1L), 이어서 5% MeOH/CHCl3)하여 표제 화합물(1.31 g, 60%)을 황색 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 461.3 (M + H)+.
b)에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.86 g, 1.87 mmol), 10% Pd/C(0.86 g, 0.81 mmole), 시클로헥센(1.89 mL, 18.7 mmole) 및 이소프로판올(20 mL)의 혼합물을 아르곤하의 환류온도에서 19 시간 동안 가열한 후, 촉매를 등록상표 celite를 통하여 여과하여 제거하였다. 실리카 겔 크로마토그래피(구배: 1:9:10 MeOH/CH2Cl2/EtOAc)하여 표제 화합물(0.65 g, 78%)을 투명한 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 445.2 (M + H)+.
c) (S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(2.08 g, 4.69 mmol) 및 1.0 N NaOH(7.0 mL, 7.0 mmole)의 무수 EtOH(45 mL) 중의 혼합물을 45℃로 고정된 오일 배드에서 승온시켰다. 18 시간 경과 후, 반응물을 로터리 진공 펌프에서 농축하고 1.0 N HCl로 pH를 7로 조절하였다. 고체 침전물을 수집하고 H2O로 세척하였다. 밤새도록 건조시켜서 표제 화합물(1.61 g, 82%)을 거의 무색의 고체로 얻었다: MS(ES) m/e 417.4 (M + H)+. C26H28N2O3·1.0H2O(계산치):C, 71.87; H, 6.96; N, 6.45. 측정치:C, 71.63; H, 6.96; N, 6.30.
실시예14
(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(2-프로필옥시)피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 이소프로필(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(2-프로필옥시)-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.2 g, 0.4 mmole) 및 소듐 이소프로폭시드(0.067 g, 0.8 mmol)의 이소프로판올(5 mL) 중의 혼합물을 80℃에서 3.5 시간 가열한 후, 소듐 이소프로폭시드(0.05 g, 0.6 mmole)을 더 부가하고, 반응물을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 농축하고 실리카 겔 크로마토그래피(구배: 5-15% MeOH/CH2Cl2)하여 표제 화합물(0.106g, 52%)을 밝은 갈색 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 519.3 (M + H)+.
b)이소프로필(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(2-프로필옥시)피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 이소프로필(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(2-프로필옥시)-1-옥소피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 13(b)에 따라 표제 화합물을 옅은 황색 오일로 얻은 후 실리카 겔 크로마토그래피(구배: 5% MeOH/CH2Cl2)하였다: MS(ES) m/e 503.4 (M + H)+.
c) (S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(2-프로필옥시)피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 이소프로필(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(2-프로필옥시)피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 13(c)에 따라 표제 화합물을 얻었다: MS(ES) m/e 461.3 (M + H)+. C28H32N2O4·0.96HCl(계산치):C, 67.86; H, 6.70; N, 5.65. 측정치:C, 68.26; H, 6.86; N, 5.25.
실시예15
(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-클로로피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-클로로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-니트로-1-옥소피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.47 g, 0.96 mmole)의 아세틸 클로리드(0.7 mL, 98 mmole) 중의 용액을 환류온도에서 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 얼음(50 g)에 붓고, pH를 포화 NaHCO3(주의: 격렬한 기포 발생)을 사용하여 pH를 8.0으로 조절하였다. 혼합물을 CH2Cl2(2 x 100 mL)로 추출하고, 수집한 유기층을 H2O(50 mL) 및 염수(50 mL)로 차례로 세척하였다. 건조시키고(MgSO4) 농축하여 표제 화합물을 얻었다: MS(ES) m/e 481.2 (M + H)+.
b)에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-클로로피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-클로로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.13 g, 0.27 mmole) 및 2.0 M PCl3의 CH2Cl2(8 mL, 16 mmole) 중의 혼합물을 환류온도하에서 22 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고 얼음(200 g) 상으로 붓고, 40% NaOH를 사용하여 pH를 12로 조절하였다. CH2Cl2(2 x 100 mL)로 추출하고, 건조시키고(MgSO4), 농축하고, 실리카 겔 크로마토그래피(구배: 4% MeOH/CH2Cl2)하여 표제 화합물을 밝은 황색 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 465.3 (M + H)+.
c) (S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-클로로피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-클로로피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 13(c)에 따라 표제 화합물을 얻었다: MS(ES) m/e 437.2 (M + H)+. C25H25N2O3·1.0HCl(계산치):C, 63.43; H, 5.54; N, 5.92. 측정치:C, 63.11; H, 5.82; N, 5.62.
실시예16
(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(디메틸아미노)피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-클로로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.47 g, 0.96 mmole)의 아세틸 클로리드(7 mL, 98 mmole) 중의 용액을 환류온도하에서 1 시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 얼음(50 g) 상에 붓고, 포화 NaHCO3(주의: 격렬한 기포 발생)로 pH를 8.0으로 조절하였다. 혼합물을 CH2Cl2(2 x 100 mL)로 추출하고, 수집한 유기층을 H2O(50 mL) 및 염수(50 mL)로 차례로 세척하였다. 건조시키고(MgSO4) 농축하여 표제 화합물의 조생성물(더 이상의 정제없이 사용)을 얻었다: MS(ES) m/e 481.3 (M + H)+.
b)에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(디메틸아미노)-1-옥소피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-클로로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(0.96 mmole) 및 2.0 M 디메틸아민의 MeOH(3 mL, 6 mmole) 중의 혼합물을 16 시간 동안 환류시켰다. 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(구배: 7% MeOH/CH2Cl2)하여 표제 화합물(0.049 g, 10%)을 밝은 갈색 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 490.3 (M + H)+. 변화하지 않은 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-클로로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트도 크로마토그래피 정제를 통하여 회수하였다.
c)에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(디메틸아미노)피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(디에틸아미노)-1-옥소피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 13(b)에 따라 표제 화합물을 백색 분말로 얻은 후, 실리카 겔 크로마토그래피(구배: 8% MeOH/CH2Cl2)하였다: MS(ES) m/e 474.3 (M + H)+.
d) (S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(디메틸아미노)피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(디메틸아미노)피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 13(c)에 따라 표제 화합물을 백색 고체로 얻었다: MS(ES) m/e 446.2 (M + H)+. C27H31N3O3·0.5H2O·1.0HCl(계산치):C, 66.04; H, 6.77; N, 8.56. 측정치:C, 65.96; H, 6.60; N, 8.26.
실시예17
(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(496.9 mg, 1.01 mmole)로 대체한 것을 제외하고는 실시예 2(a)의 공정에 따라, 치환 반응에서 0.53 M NaOEt(4.0 mL, 2.12 mmol) 및 무수 에탄올(10 mL)을 사용하여 표제 화합물(456.2 mg, 92%)을 얻었다: MS(ES) m/e 491 (M + H)+.
b)에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(456.2 mg, 0.93 mmole)으로 대체한 것을 제외하고는 실시예 2(b)의 공정에 따라 표제 화합물(475.2 mg, 정량적)을 제조하였다: MS(ES) m/e 475 (M + H)+.
c) (S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
무수 에탄올(10 mL) 중의 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(475.2 mg, 1.0 mmol) 용액에 1.0 N NaOH(2.0 mL, 2.07 mmole)을 부가하고, 상기 용액을 50℃의 오일 배드에서 승온시켰다. 20 시간 경과 후, 반응물을 농축시키고 수성 잔여물을 얼음 배드에서 0℃까지 냉각시켰다. 1.0 N HCl(2.0 mL, 2.0 mmole) 수용액을 교반하면서 천천히 부가하였다. 불투명한 고체 잔여물을 침전시키고 용융소결된 유리 깔데기 상에서 수집하였다. 진공 건조기내에서 밤새도록 건조시켜서 표제 화합물(452.6 mg, 83%)을 얻었다: MS(ES) m/e 447 (M + H)+. C27H30N2O4·0.20H2O·1.75HCl(계산치):C, 63.10; H, 6.30; N, 5.45. 측정치:C, 63.10; H, 5.98; N, 5.38.
실시예18
(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(R)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(a)의 공정에 따라, 표제 화합물을 무색 오일로 얻고 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하였다(구배: 1:1 EtOAc/헥산, 이어서, EtOAc, 이어서, 4% MeOH/CH2Cl2): MS(ES) m/e 465.3 (M + H)+.
b)에틸(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸 (R)-10,11-디히드로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(b)의 공정에 따라, 표제 화합물을 얻었다: MS(ES) m/e 449.2 (M + H)+.
c) (±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸 (R)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(c)의 공정에 따라 표제 화합물을 얻었다: MS(ES) m/e 421.1 (M + H)+. C25H25FN2O3·0.5H2O(계산치):C, 69.99; H, 6.10; N, 6.52. 측정치:C, 69.86; H, 5.90; N, 6.35.
실시예19
(±)-10,11-디히드로-6-메틸-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-6-메틸-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(R)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시-6-메틸-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(a)의 공정에 따라, 표제 화합물을 무색 오일로 얻고 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하였다(구배: 1:1 EtOAc/헥산, 이어서, EtOAc, 이어서 4% MeOH/CH2Cl2): MS(ES) m/e 461.3 (M + H)+.
b)에틸(±)-10,11-디히드로-6-메틸-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸 (R)-10,11-디히드로-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-6-메틸-3-[3-(1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(b)의 공정에 따라, 표제 화합물을 얻고 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하였다(1% MeOH/CH2Cl2): MS(ES) m/e 445.3 (M + H)+.
c) (±)-10,11-디히드로-6-메틸-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸 (R)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트를 에틸(±)-10,11-디히드로-6-메틸-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트로 대체한 것을 제외하고는 실시예 6(c)의 공정에 따라 표제 화합물을 백색 고체로 얻었다: MS(ES) m/e 417.3 (M + H)+. C26H28N2O3·1.25H2O(계산치):C, 71.13; H, 7.02; N, 6.38. 측정치:C, 71.33; H, 6.67; N, 6.01.
실시예20
(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-아미노피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(S)-10,11-디히드로-3-히드록시-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(426.5 mg, 1.5 mmole), 2-[(3-히드록시-1-프로필)아미노]-4-니트로피리딘-N-옥시드(1.7g, 8 mmole) 및 트리페닐포스핀(2.5g, 8 mmole)의 무수 DMF(20 mL) 중의 용액에 디이소프로필 아조디카르복실레이트(1.7 mL, 8 mmole)의 THF(10 mL) 중의 용액을 아르곤하의 0℃에서 적가하였다. 상기 황색 용액을 0℃에서 10 분간 방치한 후, 실온까지 승온시켰다. 23 시간 경과후, 상기 반응물을 농축하였다. 실리카 겔 크로마토그래피(구배: 30%-100% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물(2.7 g, 81%)을 오렌지색 발포체로 얻었다: MS(ES) m/e 491.8 (M + H)+.
b)에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-아미노피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-니트로-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(2.7 g, 6 mmole), 시클로헥센(6 mL, 60 mmole), 10% Pd/C(1.2 g, 1.10 mmole) 및 이소프로판올(30 mL)의 혼합물을 아르곤하의 환류온도에서 20.5 시간 가열한 후, 등록상표 celite를 통하여 고온 여과하였다. 상기 필터 패드를 고온의 EtOAc로 세척하고 수집한 여과액을 농축하였다. 상기 잔여물을 실리카 겔상에서 크로마토그래프하여(5% MeOH/CHCl3) 표제 화합물(2.4 g, 98%)을 얻었다: MS(ES) m/e 445.9 (M + H)+.
c) (S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-아미노피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-아미노피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트(2.4 g, 5 mmol), LiOH·H2O(0.3 g, 7 mmole), THF(30 mL) 및 H20(10 mL)의 혼합물을 실온에서 48 시간 동안 가열한 후, 농축하였다. 잔여물을 H2O로 희석하고 Et2O로 추출하였다. 상기 Et2O 층을 버렸다. 수성층을 진공하에서 온화하게 승온시키면서 교반하여 잔여 유기 용매를 제거한 후, 여과하였다. 1.0 N HCl로 천천히 조심스럽게 pH를 5.5-6.0으로 조절하면서 생성된 수용액을 실온에서 교반하였다. 상기 혼합물을 0.5 시간 동안 교반한 후, 상기 고체를 흡입 여과로 수집하고 다량의 H2O로 세척하였다. 60℃의 고진공하에서 건조시켜서 표제 화합물(1.0 mg, 42%)을 얻었다: MS(ES) m/e 417.7 (M + H)+. C25H27N3O3·1.4HCl(468.554;계산치):C, 64.08; H, 6.11; N, 8.97. 측정치:C, 64.16; H, 6.20; N, 8.71.
실시예21
(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]디벤조[b,f]옥세핀-10-아세트산의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트(257 mg, 0.86 mmole), 2-[(3-브로모-1-프로필)아미노]-4-메틸피리딘-N-옥시드 히드로브로미드(308 mg, 0.94 mmole), NaOH 펠릿(110 mg, 2.75 mmole) 및 CH3CN(4 mL)를 아르곤하의 실온에서 밤새도록 교반하였다. 상기 혼합물을 여과하고 고체를 CH3CN으로 세척하였다. 여과액을 농축시키고, 잔여물을 실리카 겔 상에서 플래시 크로마토그래피(1-2.5% CH3OH/CH2Cl2)하여 표제 화합물(190 mg, 48%)을 백색 발포체로 얻었다: MS(ES) m/e 462.6 (M + H)+.
b)에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸-1-옥소피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트(183 mg, 0.4 mmole), 시클로헥센(810 mg, 8 mmole), 10% Pd/C(85 mg, 0.08 mmole) 및 이소프로판올(4 mL)의 혼합물을 환류온도에서 밤새도록 가열하였다. 촉매를 등록상표 celite를 통하여 여과하여 제거한 후, 여과 케이크(cake)를 에테르로 세척하였다. 여과액을 농축하여 표제 화합물(122 mg, 68%)을 투명한 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 446.9 (M + H)+.
c) (±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]디벤조[b,f]옥세핀-10-아세트산
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트(119 mg, 0.27 mmol) 및 0.991 N NaOH(0.545 mL, 0.54 mmole)의 무수 EtOH(2 mL) 중의 혼합물을 45℃로 고정된 오일 배드내에서 승온시켰다. 20 시간 경과한 후, 상기 반응물을 로터리 진공 펌프에서 농축하고, 잔여물을 H2O(1.5 mL)에 용해시켰다. 상기 용액을 여과하여 불용성 물질을 제거하고, 여과액에 1.0 N HCl(0.54 mL, 0.54 mmole)을 점적하여 조심스럽게 중화시켰다. 상기 침전물을 수집하고 고진공하에서 건조시켜서 표제 화합물(68 mg, 58%)을 얻었다: MS(ES) m/e 418.9 (M + H)+. C25H26N2O4·0.45HCl(계산치):C, 69.05; H, 6.13; N, 6.44. 측정치:C, 69.25; H, 6.27; N, 6.16.
실시예22
(±)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-프로필옥시]디벤조[b,f]옥세핀-10-아세트산의 제조
a) 에틸(±)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(N-tert-부톡시카르보닐)-N-메틸아미노]피리딘-2-일]-1-에톡시]디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트
에틸(±)-10,11-디히드로-3-히드록시디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트(186 mg, 0.63 mmole) 및 트리페닐포스핀(413 mg, 1.58 mmole)의 무수 CH2Cl2(3.2 mL) 중의 용액에 6-[N-(tert-부톡시카르보닐)-N-메틸아미노]-2-피리딜에탄올(397 mg, 1.58 mmole) 및 디이소프로필 아조디카르복실레이트(0.31 mL, 1.58 mmole)의 무수 CH2Cl2(8 mL) 중의 용액을 아르곤하의 실온에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 22 시간 경과한 후, 상기 반응물을 로터리 진공 펌프에서 농축하고, 잔여물을 실리카 겔 상에서 플래시 크로마토그래피(2-13% EtOAc/헥산)하여 표제 화합물(146 mg, 44%)을 투명한 오일로 얻었다: MS(ES) m/e 533.0 (M + H)+.
b)에틸(±)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일}-1-에톡시]디벤조[b,f]옥세핀-10-아세트산
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(N-tert-부톡시카르보닐)-N-메틸아미노]피리딘-2-일]-1-에톡시]디벤조[b,f]옥세핀-10-아세테이트(140 mg, 0.26 mmol)의 CH2Cl2(1.3 mL) 중의 용액에 디옥산(1.3 mL, 5.2 mmole) 중의 4 N HCl을 적가하였다. 12 시간 경과 후, 혼합물을 농축하고, 잔여물을 에테르로 분쇄하여 표제 화합물을 백색 고체로 얻었다: MS(ES) m/e 432.9 (M + H)+
c)(±)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]디벤조[b,f]옥세핀-10-아세트산
에틸(±)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]디벤조[b,f]옥세핀-10-아세트산(0.26 mmole) 및 0.991 N NaOH(0.525 mL, 0.52 mmole)의 무수 EtOH(2 mL) 중의 혼합물을 50℃로 고정된 오일 배드중에서 승온시켰다. 20 시간 경과 후, 반응물을 로터리 진공 펌프에서 농축하고, 잔여물을 H2O(1.5 mL)에 용해시켰다. 용액을 여과하여 불용성 물질을 제거하고, 여과액을 1.0 N HCl을 적가하여 조심스럽게 중화하였다. 침전물을 수집하고 고진공하에 건조시켜서 표제 화합물(72 mg, 2 단계에 대하여 30%)을 회백색 고체로 얻었다: MS(ES) m/e 405.0 (M + H)+. C24H24N2O4·1.25HCl(계산치)·0.25H2O:C, 63.42; H, 5.71; N, 6.16. 측정치:C, 63.35; H, 5.9; N, 6.16.
실시예23
(S)-10,11-디히드로-3-[3-(2-아미노피리딘-4-일)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산의 제조
a) 3-(2-아미노피리딘-4-일)프로판-1-올
THF(10 mL) 중에서 WO94/14776에 따라 제조된 3-(2-아미노피리딘-4-일)프로판산 염산염(0.73 g, 3.60 mmole)의 현탁액을 리튬 알루미늄 히드리드(12 mL, 12 mmole, THF 중의 1 M)에 0℃에서 45 분에 걸쳐 부가하였다. 얼음 배드를 제거하고 반응물을 실온에서 4.5 시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃까지 냉각하고, 톨루엔(22 mL)으로 희석하고 H2O(0.86 mL) 및 NaF(1.54 g)을 차례로 부가하여 반응을 중지시켰다. 생성되는 현탁액을 0℃에서 4.5 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고 침전물을 부가적인 CHCl3중의 10% MeOH로 세척하였다. 수집한 여과액을 감압하에 농축하였다. 플래시 크로마토그래피(10% MeOH/CHCl3, 실리카 겔)하여 의도하는 물질 0.25 g을 투명한 오일로 얻었다: MS(ES+) m/z 152.7 [M + H]+.
b)에틸(S)-10,11-디히드로-3-[3-(2-아미노피리딘-4-일)-1-프로폭시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세테이트
실시예 1(a)(0.23 g, 1.51 mmole) 및 디-이소프로필아자디카르복실레이트(0.29 mL, 1.50 mmol)의 CH2Cl2(7.5 mL) 중의 용액을 트리페닐포스핀(0.39 g, 1.50 mmole) 및 에틸 2-[(10S)-3-히드록시-10,11-디히드로-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10일]아세테이트(0.30 g, 1.00 mmol)의 CH2Cl2(5 mL) 중의 용액에 0℃에서 적가하였다. 얼음 배드를 제거하고 반응물을 실온까지 승온시켰다. 18 시간 경과후, 용매를 감압하에 제거하였다. 플래시 크로마토그래피(50% EtOAc/헥산 에서 100% EtOAc까지, 실리카 겔)하여 의도하는 생성물을 함유하는 0.32 g의 물질을 얻었다. 플래시 크로마토그래피(75%로부터 90%까지의 EtOAc/헥산, 실리카 겔)에 의한 제2 정제에 의하여 0.23 g의 의도하는 물질을 얻었다: MS(ES) m/e 430.9 (M + H)+
c) (S)-10,11-디히드로-3-[3-(2-아미노피리딘-4-일]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산
실시예 1(b)의 화합물(0.22 g, 0.50 mmole)을 1 N NaOH(0.77 mL, 0.77 mmol), EtOH(3 mL) 및 THF(3 mL)에 용해시켰다. 반응물을 50℃에서 18 시간 가열한 후, 용매를 감압하에 제거하였다. 잔여물을 H2O(4 mL)에 용해키고 여과하였다. 여과물을 H2O중의 30% TFA로 산성화하고 생성되는 침전물을 수집하였다. 대용량(preparative) HPLC(등록상표 Hamiton PRP-1, 3% CH3CN/H2O-0.1% TFA)하여 의도하는 물질 10 mg을 흡습성 고체로 얻었다: MS(ES+) m/z 402.6 [M+H]+.
실시예 24
비경구용 분량 단위 조성물
실시예 1의 화합물 20 mg을 무균 건조 분말로서 함유하는 제제를 하기와 같이 제조하였다: 화합물 20 mg을 증류수 15 mL에 용해시킨다. 상기 용액을 무균 조건하에서 25 mL 다 분량 앰플내로 여과하여 부가하고 동결건조하였다. 분말을 정맥내 또는 근육내 주사용으로 물중의 5% 덱스트로오스(D5W) 25 mL를 부가하여 재생시켰다. 이에 의하여 상기 분량을 주사 부피로 결정한다. 차후의 희석은 이러한 분량 단위의 계량된 부피를 또 다른 주사용 D5W 부피에 부가하여 제조되거나 또는 계량된 분량을 IV 점적 주입용 병 또는 백 또는 기타 주사-주입 시스템과 같은 또 다른 약제 전달 메카니즘에 부가할 수 있다.
실시예 25
경구 분량 단위 조성물
경구 투여용 캅셀을 실시예 1의 화합물과 75 mg의 락토오스 및 5 mg의 마그네슘 스테아레이트와 혼합하고 분쇄하여 제조한다. 생성되는 분말을 스크리닝하여 경질의 젤라틴 캅셀내에 충전한다.
실시예 26
경구 분량 단위 조성물
경구 투여용 정제를 20 mg의 수크로오스, 150 mg의 칼슘 술페이트 디히드레이트 및 실시예1의 화합물 50 mg을 10% 젤라틴 용액과 함께 혼합하고 과립화하여 제조하였다. 습윤된 과립을 스크리닝하고, 건조하고 10 mg의 전분, 5 mg의 활석 및 3 mg의 스테아르산과 혼합하고, 정제로 압착하였다.
상기의 기재는 본원발명의 제조 및 사용법을 상세히 개시한다. 그러나, 본원발명은 상기에 기재된 특정 실시태양에 한정되는 것은 아니며, 하기 청구범위의 범위내에 있는 그의 모든 변형을 포함한다. 본원에서 인용된 잡지, 특허 및 기타 간행물에 대한 다양한 참조는 본 기술 상태를 포함하며 완전히 제공되는 것처럼 본원에 참고문헌으로서 포함된다.

Claims (38)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 제약상 허용되는 그의 염.
    ＜화학식 I＞
    상기식에서,
    A는 CH2또는 O이고,
    R1은 H, 할로 또는 C1-6알킬이며,
    R2는 H, C1-6알킬 또는 CH2NR"R"이고,
    X는 O 또는 CH2이며,
    Y는
    이고,
    G는 NR", S 또는 O이며,
    R'는 H, C1-6알킬, OC1-6알킬, SC1-6알킬, NR"R" 또는 할로이고,
    각각의 R"은 독립적으로 H 또는 C1-6알킬이며,
    s는 0, 1 또는 2이다.
  2. 제1항에 있어서, Y가
    인 화합물.
    상기식에서, R'은 H, C1-4알킬, OC1-4알킬, SC1-4알킬, NR"R" 또는 Cl이고 각각의 R"은 독립적으로 H 또는 C1-4알킬이다.
  3. 제1항에 있어서, Y가
    인 화합물.
    상기식에서, 각각의 R"은 H 또는 C1-4알킬이다.
  4. 제1항에 있어서, Y가
    인 화합물.
    상기식에서, 각각의 R"은 독립적으로 H 또는 C1-4알킬이며 s는 1이다.
  5. 제1항에 있어서, Y가
    인 화합물.
    상기식에서, G는 S이고 각각의 R"은 독립적으로 H 또는 C1-4알킬이다.
  6. 제1항에 있어서, Y가
    인 화합물.
    상기식에서, R"은 H 또는 C1-4알킬이다.
  7. (±)-10,11-디히드로-3-[2-(6-아미노피리딘-2-일)-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (±)-10,11-디히드로-3-[4-(피리딘-2-일아미노)-1-부틸]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (S)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (R)-10,11-디히드로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (±)-10,11-디히드로-3-[3-(3,4,5,6-테트라히드로피리미딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (±)-10,11-디히드로-3-[2-[2-(에틸아미노)티아졸-4-일]-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (±)-10,11-디히드로-3-[3-(이소퀴놀린-1-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (±)-10,11-디히드로-7-플루오로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-에톡시피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (±)-10,11-디히드로-6-메틸-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (±)-10,11-디히드로-2-(디메틸아미노)메틸-7-플루오로-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(2-프로필옥시)피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (S)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (S)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(디메틸아미노)피리딘-2-일아미노]-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (±)-10,11-디히드로-3-[3-[4-(에틸티오)피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-클로로피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (±)-10,11-디히드로-2-메틸-3-[3-(피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (S)-10,11-디히드로-3-[3-(4-아미노피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (±)-10,11-디히드로-3-[3-(4-메틸피리딘-2-일아미노)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산,
    (±)-10,11-디히드로-3-[2-[6-(메틸아미노)피리딘-2-일]-1-에톡시]-디벤조[b,f]옥세핀-10-아세트산, 및
    (S)-10,11-디히드로-3-[3-(2-아미노피리딘-4-일)-1-프로필옥시]-5H-디벤조[a,d]시클로헵텐-10-아세트산인 제1항의 화합물 또는 제약상 허용되는 그의 염.
  8. 제1항에 따른 화합물 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  9. 제1항에 따른 화합물, 항종양제 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 항종양제가 토포테칸인 제약 조성물.
  11. 제9항에 있어서, 상기 항종양제가 시스플라틴인 제약 조성물.
  12. 제1항에 따른 화합물을 그것이 요구되는 대상에 투여하는 것을 포함하는 αvβ3수용체의 길항작용이 나타나는 질병 상태의 치료방법.
  13. 제1항에 따른 화합물을 그것이 요구되는 대상에 투여하는 것을 포함하는 αvβ5수용체의 길항작용이 나타나는 질병 상태의 치료방법.
  14. 제1항에 따른 화합물을 그것이 요구되는 대상에 투여하는 것을 포함하는 골다공증의 치료방법.
  15. 제1항에 따른 화합물을 그것이 요구되는 대상에 투여하는 것을 포함하는 맥관형성의 억제방법.
  16. 제1항에 따른 화합물을 그것이 요구되는 대상에 투여하는 것을 포함하는 종양 성장 또는 종양 전이의 억제방법.
  17. 제1항에 따른 화합물을 그것이 요구되는 대상에 투여하는 것을 포함하는 죽상경화증 또는 재협착증의 치료방법.
  18. 제1항에 따른 화합물을 그것이 요구되는 대상에 투여하는 것을 포함하는 염증의 치료방법.
  19. 제1항에 따른 화합물 및 항종양제를 단계별로 또는 물리적 조합으로 투여하는 것을 포함하는 종양 성장의 억제방법.
  20. 제19항에 있어서, 상기 항종양제가 토포테칸인 방법.
  21. 제19항에 있어서, 상기 항종양제가 시스플라틴인 방법.
  22. 하기 화학식 (II)의 화합물 및 제약상 허용되는 그의 염.
    ＜화학식 II＞
    상기식에서, A는 CH2또는 O이고,
    R1은 H, 할로 또는 C1-6알킬이며,
    R2는 H, C1-6알킬 또는 CH2NR"R"이고,
    X는 O 또는 CH2이며,
    Y는
    이고,
    G는 NR", S 또는 O이며,
    R'는 H, C1-6알킬, OC1-6알킬, SC1-6알킬, NR"R" 또는 할로이고,
    각각의 R"은 독립적으로 H 또는 C1-6알킬이며,
    s는 0, 1 또는 2이다.
  23. 하기 화학식 (III)의 화합물 또는 제약상 허용되는 그의 염.
    ＜화학식 III＞
    상기식에서, A는 CH2또는 O이고,
    R1은 H, 할로 또는 C1-6알킬이며,
    R2는 H, C1-6알킬 또는 CH2NR"R"이고,
    X는 O 또는 CH2이며,
    R'는 H, C1-6알킬, OC1-6알킬, SC1-6알킬, NR"R" 또는 할로이고,
    각각의 R"은 독립적으로 H 또는 C1-6알킬이다.
  24. 하기 화학식 (IV)의 화합물을 하기 화학식 (V)의 화합물과 반응시킨 후, 임의의 보호기를 제거하며, 임의로 제약상 허용되는 염을 형성시키는 것을 포함하는 제1항에서 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 제조 방법.
    ＜화학식 IV＞
    ＜화학식 V＞
    상기식에서, R1, R2, Y 및 A는 화학식 (I)에서 정의된 바와 같고(임의의 반응성 관능기가 보호됨) L1은 OH 또는 할로이다.
  25. 하기 화학식 (IV)의 화합물을 하기 화학식 (VI)의 화합물과 반응시킨 후, 임의의 보호기를 제거하며, 임의로 제약상 허용되는 염을 형성시키는 것을 포함하는 제1항에서 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 제조 방법.
    ＜화학식 IV＞
    ＜화학식 VI＞
    상기식에서, R1, R2, R', R" 및 A는 화학식 (I)에서 정의된 바와 같다(임의의 반응성 관능기가 보호됨).
  26. 하기 화학식 (IV)의 화합물을 하기 화학식 (VII)의 화합물과 반응시킨 후, 임의의 보호기를 제거하며, 임의로 제약상 허용되는 염을 형성시키는 것을 포함하는 제1항에서 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 제조 방법.
    ＜화학식 IV＞
    ＜화학식 VII＞
    상기식에서, R1, R2, R" 및 A는 화학식 (I)에서 정의된 바와 같다(임의의 반응성 관능기가 보호됨).
  27. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 화합물의 약제로서의 용도.
  28. αvβ3수용체의 길항작용이 나타나는 질병 상태의 치료용 약제의 제조에 있어서 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 용도.
  29. αvβ5수용체의 길항작용이 나타나는 질병 상태의 치료용 약제의 제조에 있어서 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 용도.
  30. 골다공증의 치료용 약제의 제조에 있어서 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 용도.
  31. 맥관형성 억제용 약제의 제조에 있어서 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 용도.
  32. 종양의 성장 또는 종양 전이 억제용 약제의 제조에 있어서 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 용도.
  33. 죽상경화증 또는 재협착증 치료용 약제의 제조에 있어서 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 용도.
  34. 염증 치료용 약제의 제조에 있어서 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물의 용도.
  35. 종양 성장 억제용 약제를 물리적 조합으로 또는 단계별로 투여 형태로 제조하는 데 있어서 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 및 항종양제의 용도.
  36. 제35항에 있어서, 상기 항종양제가 토포테칸인 방법.
  37. 제35항에 있어서, 상기 항종양제가 시스플라틴인 방법.
  38. 골다공증 치료용 약제를 물리적 조합으로 또는 단계별 투여형태로 제조하는 데 있어서 제1항에 정의된 바와 같은 화학식 (I)의 화합물 및 뼈 용식 억제제의 용도.
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