SK4082000A3 - COMPOUND CONTAINING DIBENZOCYCLOHEPTENE NUCLEUS, PROCESS FOR THEì (54) PRODUCTION THEREOF, PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTA - Google Patents

COMPOUND CONTAINING DIBENZOCYCLOHEPTENE NUCLEUS, PROCESS FOR THEì (54) PRODUCTION THEREOF, PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTA Download PDF

Info

Publication number
SK4082000A3
SK4082000A3 SK408-2000A SK4082000A SK4082000A3 SK 4082000 A3 SK4082000 A3 SK 4082000A3 SK 4082000 A SK4082000 A SK 4082000A SK 4082000 A3 SK4082000 A3 SK 4082000A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
dihydro
dibenzo
cycloheptene
compound
propyloxy
Prior art date
Application number
SK408-2000A
Other languages
English (en)
Inventor
William Edward Bondinell
William Henry Miller
Dirk Heerding
James Martin Samanen
Original Assignee
Smithkline Beecham Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Smithkline Beecham Corp filed Critical Smithkline Beecham Corp
Publication of SK4082000A3 publication Critical patent/SK4082000A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/73—Unsubstituted amino or imino radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/74—Amino or imino radicals substituted by hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/22—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/04—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D233/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D233/44—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C07D233/48—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical with acyclic hydrocarbon or substituted acyclic hydrocarbon radicals, attached to said nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/06—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D239/08—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms directly attached in position 2
    • C07D239/12—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C07D239/14—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, attached to said nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D263/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
    • C07D263/52—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D263/54—Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles
    • C07D263/58—Benzoxazoles; Hydrogenated benzoxazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/32—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/38—Nitrogen atoms
    • C07D277/42—Amino or imino radicals substituted by hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D313/00—Heterocyclic compounds containing rings of more than six members having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D313/02—Seven-membered rings
    • C07D313/06—Seven-membered rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D313/10—Seven-membered rings condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with two six-membered rings
    • C07D313/14—[b,f]-condensed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Thiazole And Isothizaole Compounds (AREA)
  • Other In-Based Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Description

Zlúčenina obsahujúca dibenzocyklohepténové jadro, spôsob jej výroby, farmaceutické prostriedky s jej obsahom, jej použitie a medziprodukty
Oblasť techniky
Vynález sa týka farmaceutický aktívnych látok, ktoré inhibujú receptor vitronektinu a sú užitočné na liečenie zápalov, rakoviny a kardiovaskulárnych porúch, ako sú napríklad ateroskleróza a restenóza, a ochorení, pri ktorých je faktorom resorpcia kosti, ako je napríklad osteoporóza.
Doterajší stav techniky
Integríny sú veľkorodina bunkových adhéznych receptorov, ktorými sú transmembránne glykoproteíny exprimované rôznymi bunkami. Tieto bunkové povrchové adhézne receptory zahŕňajú gpllb/llla (fibrinogénový receptor) a ανβ3 (vitronektínový receptor). Fibrinogénový receptor gpllb/llla je exprimovaný na povrchu krvných doštičiek a sprostredkuje agregáciu krvných doštičiek a tvorbu hemostatickej zrazeniny na mieste krvácajúceho poranenia. Philips a spol., Blood, 1988, 71, 831. Vitronektínový receptor ανβ3 je exprimovaný mnohými bunkami, vrátane endotelových, hladkého svalstva, osteoklastov a tumorových buniek, a teda má rôzne účinky. ανβ3 receptor exprimovaný membránou osteoklastových buniek sprostredkuje adhéziu osteoklastov na matricu kosti, kľúčový krok pri procese resorpcie kostí. Ross a spol., J. Biol. Chem., 1987, 262, 7703. Ochorenie charakterizované nadmernou resorpciou kosti je osteoporóza. ανβ3 receptor exprimovaný ľudskými bunkami hladkého svalstva aorty sprostredkuje ich migráciu do neointima, čo je proces, ktorý môže viesť k restenóze po perkutánnej koronárnej angioplastike. Brown a spol., Cardiovascular Res., 1994, 28, 1815. Okrem toho Brooks a spol., Celí, 1994, 79, 1157 zistili, že ανβ3 antagonistické látky sú schopné podporovať regresiu tumoru pomocou indukovania apoptózy angiogenetických krvných ciev. Teda činidlá, ktoré blokujú receptor vitronektinu, by boli užitočné na
-2liečenie chorôb, ako je napríklad osteoporóza, restenóza a rakovina.
O vitronektínovom receptore je teraz známe, že zodpovedá trom rôznym integrínom, označovaným οςβ,. ανβ3 a ανβ5. Horton a spol., Int. J. Exp. Pathol., 1990, 71, 741. ανβ, viaže fibronektín a vitronektín. ανβ3 viaže veľké množstvo ligandov, zahrnujúcich fibrín, fibrinogén, laminín, trombospondin, vitronektín, von Willebrandov faktor, osteopontín a kostný sialoproteín I. α„β5 viaže vitronektín. Ukázalo sa, že receptor vitronektínu ανβ5 je zahrnutý pri bunkovej adhézii rôznych bunkových typov, vrátane endotelových buniek mikrociev (Davis a spol., J. Celí. Biol., 1993, 51, 206), a bola potvrdená jeho úloha pri angiogenéze, Brooks a spol., Science, 1994, 264, 569. Tento integrín je exprimovaný krvnými cievami v ľudskom poranenom granulačnom tkanive, ale nie v normálnej pokožke.
Je známe, že receptor vitronektínu sa viaže na proteíny kostnej matrice, ktoré obsahujú troj-peptidový Arg-Gly-Asp (alebo RGD) motív. Horton a spol., Exp. Celí Res. 1991, 195, 368, teda zistili, že RGD-obsahujúce peptidy a antireceptorové vitronektí nové protilátky (23C6) inhibujú resorpciu dentínu a rozprestretie buniek osteoklastami. Okrem toho, Sato a spol., J. Celí Biol. 1990, 111, 1713 zistili, že echistatín, peptid hadieho jedu, ktorý obsahuje RGD sekvenciu je silný inhibítor resorpcie kostí v tkanivovej kultúre a inhibuje pripojenie osteoklastov na kosť.
Teraz sa zistilo, že určité látky sú účinnými inhibítormi ανβ3 a ανβ5 receptorov. Konkrétne bolo zistené, že tieto látky sú účinnejším inhibítorom receptora vitronektínu ako receptora fibrinogénu.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu sú zlúčeniny obsahujúce dibenzocyklohepténové jadro všeobecného vzorca I
A (D
-3kde
A znamená CH2 alebo O;
R1 znamená H, halogén alebo C^alkyl;
R2 znamená H, C^alkyl alebo CH2NR“R,,I· X znamená O alebo CH2;
Y znamená alebo
G znamená NR, S alebo O;
R' znamená H, C^alkyl, OC^alkyl, SCMalkyl, NRR alebo halogén;
každý R je nezávisle H alebo C^alkyl; a s je 0, 1 alebo 2;
alebo ich farmaceutický prijateľné soli, ktoré majú farmakologickú aktivitu na inhibovanie vitro-nektínového receptora a sú užitočné na liečenie zápalov, rakoviny a kardiovaskulárnych porúch, ako sú napríklad ateroskleróza a restenóza, a ochorení, u ktorých je faktorom resorpcia kosti, ako je napríklad osteoporóza.
Vynálezom je tiež farmaceutický prostriedok obsahujúci látku všeobecného vzorca I a farmaceutický nosič.
-4Vynálezom je tiež použitie zlúčenín všeobecného vzorca I na liečenie ochorení, ktoré sú sprostredkované receptorom vitronektínu. V konkrétnom prípade sú látky podľa tohto vynálezu užitočné na liečenie aterosklerózy, restenózy, zápalov, rakoviny a ochorení, u ktorých je faktorom resorpcia kosti, ako je napríklad osteoporóza.
Vynález zahrnuje nové látky, ktoré sú účinnejšími inhibítormi receptora vitronektínu ako receptora fibrinogénu. Nové látky zahrňujú dibenzocyklohepténové jadro, v ktorom je na jednom z aromatických šesť-členných kruhov dibenzocyklohepténu prítomný substituent obsahujúci dusík a alifatický substituent obsahujúci kyselinovú skupinu je prítomný na sedem-člennom kruhu dibenzocyklohepténu. Predpokladá sa, že dibenzocyklohepténový kruhový systém orientuje substituenty bočných reťazcov na šesť a sedem členných kruhoch tak, že tieto môžu interagovať prednostne s receptorom vitronektínu. Je výhodné, ak existuje okolo dvanásť až štrnásť vložených kovalentných väzieb prostredníctvom najkratšej intramolekulovej dráhy medzi kyslou skupinou na alifatickom substituente sedemčlenného kruhu dibenzocyklohepténu a dusíkom dusík-obsahujúceho substituenta na jednom z aromatických šesťčlenných kruhov dibenzocyklohepténu.
V tomto vynáleze sú zahrnuté tiež farmaceutický prijateľné adičné soli a komplexy látok podľa tohto vynálezu. V prípadoch, kde látky podľa tohto vynálezu môžu mať jedno alebo viac chirálnych centier, pokiaľ nie sú špecifikované, tento vynález zahŕňa každú jednotlivú neracemickú látku, ktorá môže byť syntetizovaná a rozložená na optické izoméry konvenčnými postupmi. V prípadoch, v ktorých látky majú nenasýtené dvojité väzby uhlík-uhlik, aj cis (Z) aj trans (E) izoméry sú v rozsahu tohto vynálezu. V prípadoch, kde látky môžu existovať v tautomérnych formách, ako sú napríklad keto-enol tautoméry, ako napríklad
O OR* a každá tautomérna forma sa považuje za zahrnutú v tomto vynáleze, či už existuje v rovnováhe alebo je blokovaná v jednej forme príslušnou substitúciou s R'.
Látky všeobecného vzorca I inhibujú viazanie vitronektínu a ďalších RGD-5obsahujúcich peptidov na receptor vitronektínu. Inhibícia receptora vitronektínu na osteoklasty inhibuje osteoklastickú resorpciu kosti a je užitočná pri liečení ochorení, pri ktorých je s patológiou spojená resorpcia kosti, ako sú napríklad osteoporóza a osteoartritída.
Ďalej vynález poskytuje metódu na stimuláciu tvorby kosti, ktorá zahŕňa podávanie látky, ktorá spôsobuje zvýšenie uvoľňovania osteokalcínu. Zvýšená tvorba kosti je jasným ziskom pri chorobných stavoch, pri ktorých je nedostatok mineralizovanej kostnej hmoty, alebo ak je požadovaná prestavba kosti, ako je napríklad liečba fraktúr a prevencia fraktúr kostí. Z takejto liečby môžu tiež mať prospech ochorenia a metabolické poruchy, ktorých dôsledkom je strata kostnej štruktúry. Napríklad môže byť úžitok z podávania látok podľa tohto vynálezu pri hyperparatyreoidizme, Pagetovej chorobe, hyperkalcémii zhubného nádoru, osteolytických léziách spôsobených metastázami kosti, strate kosti spôsobenej znehybnením alebo nedostatkom pohlavného hormónu, Behcetovej chorobe, osteomalácii, hyperostóze a osteopetróze.
Okrem toho, pretože látky podľa tohto vynálezu inhibujú receptory vitronektínu na množstve rôznych typov buniek, môžu tieto látky byť užitočné pri liečení zápalových ochorení, ako sú napríklad reumatoidná artritída a psoriáza, a kardiovaskulárnych ochorení, ako sú napríklad ateroskleróza a restenóza. Látky podľa tohto vynálezu môžu byť užitočné pri liečbe alebo prevencii ďalších ochorení, ktoré zahrnujú, ale neobmedzujú sa na ne, tromboembolické poruchy, astmu, alergie, syndróm respiračnej nedostatočnosti dospelých, ochorenia transplantát proti hostiteľovi, odmietnutie transplantovaných orgánov, septický šok, ekzémy, kontaktnú dermatitídu, zápalové ochorenie čreva a ďalšie autoimunitné ochorenia. Látky podľa tohto vynálezu môžu byť tiež užitočné pri hojení poranení.
Látky podľa tohto vynálezu sú tiež užitočné pri liečbe, vrátane prevencie, angiogenetických porúch. Pojem angiogenetické poruchy, ako je používaný v tomto dokumente, zahŕňa stavy, v ktorých je zahrnutá abnormálna neovaskularizácia. Tam kde rast nových krvných ciev je príčinou alebo prispieva k patológii spojenej s ochorením, bude inhibícia angiogenézy znižovať zhubné účinky ochorenia. Ako príklad takéhoto cieleného ochorenia je diabetická retinopatia. Tam kde je potrebný
-6rast nových krvných ciev na podporu rastu zhubného tkaniva, inhibícia angiogenézy bude znižovať prívod krvi do tkaniva a tým bude prispievať k redukcii hmoty tkaniva na základe požiadaviek na prívod krvi. Príklady zahŕňajú rast tumorov, kde neovaskularizácia je kontinuálnou požiadavkou rastu tumoru a vzniku tuhých tumorových metastáz. Látky podľa tohto vynálezu teda inhibujú angiogenézu tumorového tkaniva, tým zabraňujú metastázam tumoru a rastu tumoru.
Teda podľa metód tohto vynálezu, inhibícia angiogenézy použitím látok podľa tohto vynálezu môže zlepšiť symptómy ochorenia a v niektorých prípadoch môže ochorenie liečiť.
Ďalšie terapeutické ciele pre látky podľa tohto vynálezu sú očné ochorenia charakterizované neovaskularizáciou. Takéto očné ochorenia zahŕňajú korneálne neovaskulárne ochorenia, ako sú napríklad korneálna transplantácia, herpetická keratitída, luetická keratitida, pterýgium a neovaskulárny panus spojený s používaním kontaktných šošoviek. Ďalšie očné ochorenia tiež zahŕňajú makulárne degenerácie spojené s vekom, predpokladané očné histoplasmózy, retinopatiu nedonosených detí a neovaskulárny glaukóm.
Tento vynález ďalej poskytuje spôsob inhibície rastu tumoru, ktorý zahŕňa postupné podávanie alebo podávanie vo fýzickom spojení, látky podľa tohto vynálezu a antineoplastického činidla, ako je napríklad topotekan a cisplatina.
Vo vzťahu ku všeobecnému vzorcu I:
Y je výhodne .hL -NRR1 kde R' znamená H, C14alkyl, OCMalkyl, SC1.4alkyl, NRR alebo Cl a každý R' znamená nezávisle H alebo C1.4alkyl.
Y je alternatívne
R’RN
-7kde každý R je H alebo CMalkyl. Y je alternatívne
OS\/NR kde každý R” je nezávisle H alebo CMalkyl, a s je 1.
Y je alternatívne
kde G je S a každý R je nezávisle H alebo CMalkyl. Y je alternatívne
kde R je H alebo CMalkyl.
Reprezentatívne nové látky podľa tohto vynálezu sú tieto: kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[2-(6-aminopyridín-2-yl)-1-etoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklo heptén-10-octová;
kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[4-(pyridín-2-ylamino)-1-butyl]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (+)-10,11-dihydro-3-[3-(4-etoxypyridin-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo [a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)-5/-/-dibenzo[a,d]cy kloheptén-10-octová;
-8kyselina (R)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)-5H-dibenzo[a,d]cy kloheptén-10-octová;
kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[3-(3,4,5,6-tetrahydropyrimidín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-1O-octová;
kyselina (±)-1O,11-dihydro-3-[2-[2-(etylamino)tiazol-4-yl]-1-etoxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (±)-10,11 -dihydro-3-[3-(izochinolín-1 -ylamino)-1 -propyloxy)-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (±)-10,11-dihydro-7-fluór-3-(3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5Ay-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (S)-10l11-dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylannino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-etoxypyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (±)-10,11-dihydro-6-metyl-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (±)-10,11-dihydro-2-(dimetylamino)metyl-7-fluór-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-[4-(2-propyloxy)pyridín-2-ylamino]-1-propyloxy]-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[2-[6-(metylamino)pyridín-2-yl]-1-etoxy]-5A7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-[4-(dimetylamino)pyridín-2-ylamino]-1-propyloxy]5A7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[3-[4-(etyltio)pyridin-2-ylamino]-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-chlórpyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
kyselina (±)-10,11-dihydro-2-metyl-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
-9kyselina (S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-aminopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5A7-dibenzo[a,d]cykloheptén-1O-octová;
kyselina (±)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy)dibenzo[b,f]oxepín-10-octová;
kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[2-[6-(metylamino)pyridín-2-yl]-1-etoxy]dibenzo[b,f]oxepín-10-octová; a kyselina (±)-10,11 -dihydro-3-[3-(2-aminopyridín-4-yl)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
alebo ich farmaceutický prijateľné soli.
V prípadoch kde látky podľa tohto vynálezu môžu mať jedno alebo viaceré chirálne centrá, ak to nie je špecifikované inak, tento vynález zahrnuje každú jednotlivú neracemickú látku, ktorá sa môže syntetizovať a rozdeliť pomocou konvenčných techník. Podľa tohto vynálezu je výhodná (S) konfigurácia vzorca I látky.
V prípadoch, v ktorých látky majú nenasýtené uhlík-uhlík dvojité väzby, aj cis (Z) aj trans (E) izoméry sú zahrnuté v rozsahu podľa tohto vynálezu. Význam ktoréhokoľvek substituenta pri ktoromkoľvek výskyte je nezávislý od významu ktorýchkoľvek iných významov substituentov, pri ktoromkoľvek ďalšom výskyte.
V tomto vynáleze sú tiež zahrnuté prekurzory látok podľa tohto vynálezu. Za prekurzory sa považujú všetky kovalentne viazané nosiče, ktoré uvoľňujú účinné základné liečivo všeobecného vzorca I in vivo. Teda ďalej vynález poskytuje prekurzory, ktoré sú tiež medziprodukty všeobecného vzorca II pri príprave látok všeobecného vzorca I:
(II)
CO2C,.6alkyl
-10kde
A znamená CH2 alebo O;
R1 znamená H, halogén alebo CMalkyl;
R2 znamená H, C^alkyl alebo CH2NRR; X znamená O alebo CH2;
Y znamená
alebo
G znamená NR“, S alebo O;
R' znamená H, C^alkyl, OC^alkyl, SC^alkyl, NR“R alebo halogén; každý R je nezávisle H alebo C^alkyl; a s je 0, 1 alebo 2;
alebo ich farmaceutický prijateľné soli.
Ďalej vynález poskytuje nové medziprodukty všeobecného vzorca III:
(NI)
-11 kde
A znamená CH2 alebo O;
R1 znamená H, halogén alebo C14alkyl;
R2 znamená H, CMalkyl alebo CH2NR“R;
X znamená O alebo CH2;
R' znamená H, CMalkyl, OC^alkyl, SC^alkyl, NR“R alebo halogén; a každý R je nezávisle H alebo CMalkyl;
alebo ich farmaceutický prijateľné soli.
Skratky a symboly bežne používané v peptidovom a chemickom odbore sa v tomto dokumente používajú na opis látok podľa tohto vynálezu. Vo všeobecnosti sledujú skratky aminokyselín dokument IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature uvedený v Eur. J. Biochem., 158, 9 (1984).
CMalkyl, ako sa používa v tomto dokumente, znamená voliteľne substituovanú alkylovú skupinu s 1 až 4 uhlíkovými atómami a zahrnuje metyl, etyl, npropyl, izopropyl, n-butyl, izobutyl a ŕerc-butyl. CMalkyl okrem toho zahrnuje pentyl, n-pentyl, izopentyl, neopentyl a hexyl a ich jednoduché alifatické izoméry. C0.4alkyl a C0.6alkyl okrem toho značí, že nemusí byť prítomná žiadna alkylová skupina (napríklad, že je prítomná kovalentná väzba).
Ktorýkoľvek CMalkyl alebo CMalkyl môže byť voliteľne substituovaný so skupinou Rx, ktorá môže byť na ktoromkoľvek uhlíkovom atóme, čo vedie k stabilnej štruktúre a je dostupný pomocou konvenčných techník syntézy. Vhodné skupiny pre Rx sú CMalkyl, OR, SR, CMalkylsulfonyl, C1.4alkylsulfoxyl, -CN, N(R“)2, CH2N(R“)2, -NO2, -CF3i -CO2R“, -CON(R)2, -COR, -NRC(O)R, F, Cl, Br, I, alebo CF3S(O)r, kde r je 0, 1 alebo 2.
Halogén znamená F, Cl, Br, a I.
Ar alebo aryl, ako sa používa v tomto dokumente, znamená fenyl alebo naftyl, alebo fenyl alebo naftyl substituovaný jedným až tromi substituentami, ako je napríklad substituent definovaný vyššie pre alkyl, zvlášť CMalkyl, CMalkoxyl, C,, „alkyltio, CF3, NH2, OH, F, Cl, Br alebo I.
Niektoré radikálové skupiny sú v tomto dokumente označené skratkami. terc-Bu zodpovedá terciárnemu butylovému radikálu, Boe zodpovedá ŕerc-butyloxy-12karbonylovému radikálu, Fmoc zodpovedá fluórenylmetoxykarbonylovému radikálu, Ph zodpovedá fenylovému radikálu, Cbz zodpovedá benzyloxykarbonylovému radikálu, Bn zodpovedá benzylovému radikálu, Me zodpovedá metylu, Et zodpovedá etylu, Ac zodpovedá acetylu, Alk zodpovedá Cwalkylu, Nph zodpovedá
1- alebo 2-naftylu a cHex zodpovedá cyklohexylu. Tet zodpovedá 5-tetrazolylu.
Niektoré činidlá sú v tomto dokumente označené skratkou. DCC znamená dicyklohexylkarbodiimid, DMAP znamená dimetylaminopyridín, DIEA znamená diizopropyletylamin, EDC znamená hydrochlorid /V-etyl-/V,-(dimetylaminopropyl)karbodiimidu. HOBt znamená 1-hydroxybenzotriazol, THF znamená tetrahydrofurán, DIEA znamená diizopropyletylamin, DEAD znamená dietylazodikarboxylát, PPh3 znamená trifenylfosfín, DIAD znamená diizopropyl-azodikarboxylát, DME znamená dimetoxyetán, DMF znamená dimetylformamid, NBS znamená /V-brómsukcínimid, Pd/C znamená katalyzátor paládium na uhlíku, PPA znamená kyselinu polyfosforečnú, DPPA znamená difenylfosforylazid, BOP znamená benzotriazol-1yloxytris(dimetylamino)fosfóniumhexafluórfosfát, HF znamená kyselinu fluorovodíkovú, TEA znamená trietylamin, TFA znamená kyselinu trifluóroctovú, PCC znamená pyridíniumchlórchromát.
Látky všeobecného vzorca I sa všeobecne pripravujú tak, že sa na látku všeobecného vzorca IV pôsobí látkou všeobecného vzorca V:
kde R1, R2, Y a A sú určené pre všeobecný vzorec I, s chránenými reaktívnymi funkčnými skupinami a L1 je OH alebo halogén;
a potom sa odstráni ochranná skupina, a voliteľne sa vytvorí farmaceutický prijateľná soľ.
*13Niektoré látky všeobecného vzorca I sa výhodne pripravujú tak, že sa na látku všeobecného vzorca IV pôsobí látkou všeobecného vzorca VI:
O-
R' (VI) kde R1, R2, R', R a A sú určené pre všeobecný vzorec I, s chránenými reaktívnymi funkčnými skupinami;
a potom sa odstráni ochranná skupina, a voliteľne sa vytvorí farmaceutický prijateľná soľ.
Reakcia medzi látkou všeobecného vzorca IV a látkou všeobecného vzorca VI sa výhodne uskutočňuje v prítomnosti dietyl-azodikarboxylátu a trifenylfosfínu v aprotickom rozpúšťadle.
Okrem toho, niektoré látky všeobecného vzorca I sa pripravujú tak, že sa na látku všeobecného vzorca IV pôsobí látkou všeobecného vzorca VII;
kde R1, R2, R a A sú určené pre všeobecný vzorec I, s chránenými reaktívnymi funkčnými skupinami;
a potom sa odstráni ochranná skupina, a voliteľne sa vytvorí farmaceutický prijateľná soľ.
Reakcia medzi látkou všeobecného vzorca IV a látkou všeobecného vzorca VII sa výhodne uskutočňuje v prítomnosti dietyl-azodikarboxylátu a trifenylfosfínu v aprotickom rozpúšťadle.
-14Látky všeobecného vzorca I sa pripravujú pomocou metód opísaných v Bondinell a spol., PCT Publikácia č. WO 97/01540 (Medzinárodná Prihláška č. PCT/US96/11108), publikovaná 16. januára 1997, ktorej úplné zistenia sú tu uvedené ako odkaz.
Okrem toho sa látky všeobecného vzorca I pripravujú spôsobmi analogickými k spôsobom opísaným v schémach, ktoré sú podrobne uvedené ďalej v tomto dokumente.
Schéma I
a) 10 % Pd/C, HOAc; b) SOCI2, toluén; c) AICI3 CH2CI2
Schéma I uvádza podrobnosti prípravy medziproduktu užitočného pri príprave látky všeobecného vzorca I.
Schéma II
θ’) (Ό
-15Schéma II - pokračovanie
a) LiN(TMS)2, etylbrómacetát; b) Jonesovo činidlo, OsO4; c) H2,10 % Pd/C, HOAc;
d) C2O2CI2, DMF; e) AICI3, CH2CI2, laboratórna teplota; f) H2,10 % Pd/C, HOAc
Schéma II tiež uvádza podrobnosti prípravy medziproduktu užitočného pri príprave látky všeobecného vzorca I.
Schéma III
cn (2)
(4) (3)
(5)
16Schéma III - pokračovanie
(a) EtOAc/LiHMDS, THF; (b) H2l 10 % Pd/C, kone. HCI, AcOH; (c) EtSH, AICI3. CH2CI2; (d) 2-[(3-hydroxy-1-propyl)amino]-4-nitropyridín-/V-oxid, DEAD, (Ph)3P; (e) NaOEt, EtOH; (f) cyklohexén, 10 % Pd/C, EtOH; (g) 1,0 mol/l NaOH, EtOH; (h) HCI.
Schéma III uvádza podrobnosti prípravy látky všeobecného vzorca I. Reakcia látky 111-1 (čo je látka Schéma I-3) v aldolovom type reakcie s enolátom etylacetátu, ktorý môže byť generovaný z etylacetátu expozíciou príslušnou amidovou zásadou, napríklad dilzopropylamid lítny (LDA) alebo bis(trimetylsilyl)amid lítny (LiHMDS), poskytne III-2. THF sa často vyberá ako rozpúšťadlo pre aldolovú reakciu, hoci sa často používa THF v prítomnosti rôznych prídavkov, napríklad HMPA alebo TMEDA. Redukcia látky III-2, ktorá poskytne III-3 (ktorá je látkou „Schéma II-6“) môže byť uskutočnená pomocou hydrogenolýzy na príslušnom katalyzátore, napríklad kovovom paládiu na aktívnom uhlí (Pd/C), v príslušnom rozpúšťadle, ako je napríklad kyselina octová, v prítomnosti minerálnej kyseliny, ako je napríklad HCI. Alternatívne sa táto redukcia môže uskutočniť
-17pomocou opracovania látky III-2 s trietylsilánom v prítomnosti éterátu fluoridu boritého podľa všeobecného spôsobu od Orfanopoulos a Smonou (Synth. Commun. 1988, 833). Odstránenie metyléteru z III-3, čím sa poskytne ill-4, sa môže uskutočniť s BBr3 v inertnom rozpúšťadle, napríklad CH2CI2, alebo pomocou reakcie s etántiolom a AICI3 v inertnom rozpúšťadle, výhodne CH2CI2. Ďalšie užitočné spôsoby na odstránenie metyléteru sú opísané v Greene, Protective Groups in Organic Synthesis (publikovaná John Wiley and Sons). Látka 4 zo Schémy 3 (ill-4) reaguje s 2-[(3-hydroxy-1-propyl)amino]-4-nitropyridín-A/-oxidom v kopulačnej reakcii Mitsunobuovho typu (Organic Reactions 1992, 42, 335 - 656; Synthesis 1981, 1 - 28), čím poskytne látku III-5. Reakcia je sprostredkovaná komplexom tvoreným medzi dietyl-azodikarboxylátom a trifenylfosfínom a robí sa v aprotickom rozpúšťadle, napríklad THF, CH2CI2, alebo DMF. Látka III-5 reaguje so soľou alkalického kovu s príslušným alkoholom, čím poskytne látku ill-6. Vhodné alkalické kovy zahrnujú lítium, sodík, draslík a cézium, a ako rozpúšťadlo sa pre reakciu nahradenia všeobecne používa alkohol. Spôsoby tvorby solí alkalického kovu s alkoholmi sú dobre známe odborníkom v tejto oblasti. Skupina pyridín-A/oxidu látky ill-6 sa redukuje na zodpovedajúci pyridin III-7 za podmienok prenosovej hydrogenácie za použitia paládiového katalyzátora, výhodne kovovým paládiom na aktívnom uhlí, v inertnom rozpúšťadle, napríklad metanole, etanole alebo 2-propanole. Cyklohexén, 1,4-cyklohexadién, kyselina mravčia a soli kyseliny mravčej, ako je napríklad mravčan draselný alebo mravčan amónny, sa bežne používajú v tomto type reakcie ako činidlo prenosu vodíka. Etylester látky III-7 sa hydrolyzuje použitím vodného roztoku zásady, napríklad LiOH v vodnom THF alebo NaOH vo vodnom metanole alebo etanole, a medziproduktová karboxylátová soľ sa okyslí s vhodnou kyselinou, napríklad TFA alebo HCI, čím sa poskytne karboxylová kyselina III-8. Alternatívne sa ak sa to požaduje medziproduktová karboxylátová soľ môže izolovať, alebo sa karboxylátová soľ voľnej karboxylovej kyseliny môže pripraviť pomocou spôsobov dobre známych odborníkom v tejto oblasti.
18Schéma IV
(a) NaH, 2-[/V-(3-metánsulfonyloxy-1 -propyl)-A/-(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-pyridin/V-oxid, DMSO; (b) TFA, CH2CI2; (c) pozri Schéma III.
Schéma IV opisuje alternatívny spôsob prípravy látky všeobecného vzorca
I. Látka IV-1 reaguje so zásadou, výhodne hydridom alkalického kovu, ako je napríklad hydrid sodný alebo hydrid draselný, v polárnom, aprotickom rozpúšťadle, všeobecne THF, DMF, DMSO, alebo ich zmesi, čim poskytne zodpovedajúci fenoxid alkalického kovu. Alternatívne sa na deprotonizáciu môže použiť amid alkalického kovu, napríklad LDA, alebo lítna, sodná alebo draselná soľ hexametyldisilazánu. Medziproduktový fenoxid sa všeobecne neizoluje, ale reaguje in situ s príslušným elektrofilom, napríklad 2-[/V-(3-metánsulfonyloxy-1-propyl)-/\/-(ŕercbutoxykarbonyl)amino)pyridín-/V-oxidom, čím poskytne kopulovaný produkt IV-2. Terc-butoxy-karbonylová ochranná skupina v látke IV-2 sa odstráni za kyslých podmienok, ako je napríklad 4 mol/l HCI v 1,4-dioxáne alebo TFA v CH2CI2, čím sa
-19poskytne látka IV-3. Podmienky na odstránenie ŕerc-butoxykarbonylovej ochrannej skupiny sú dobre známe odborníkom v tejto oblasti a viaceré užitočné spôsoby sú opísané v štandardných príručkách, ako je napríklad Greene „Protective Groups in Organic Synthesis Látka IV-3 sa následne konvertuje na látku IV-4 podľa postupu vyznačeného na Schéme III.
Schéma V
(a) PhOH, Cu, K2CO3; (b) síra, morfolín; (c) KOH, H2O, /-PrOH; (d) SOCI2, benzén;
(e) AICI3, CH2CI2; (C) EtOAc, LiN(TMS)2, TMEDA, THF; (g) Et3SiH, BF3.OEt2. CH2CI2; (h) H2, Pd/C, EtOH; (i) BBr3, CH2CI2.
Komerčne dostupný 2-fluór-4-metoxyacetofenón (V-1) reaguje s alkoholom, napríklad fenolom, v prítomnosti kovovej medi a vhodnej zásady, napríklad K2CO3,
-20čím poskytne diaryléter V-2. Opracovaním so sírou a príslušným primárnym alebo sekundárnym amínom, výhodne morfolínom, podľa všeobecného spôsobu od Harrisa (J. Med. Chem. 1982, 25, 855), sa látka V-2 konvertuje na látku V-3 v klasickej Willgerodt-Kindlerovej reakcii. Takto získaný tioamid sa hydrolyzuje na zodpovedajúcu karboxylovú kyselinu V-4 pomocou reakcie s hydroxidom alkalického kovu, vhodne KOH, vo vodnom roztoku alkoholického rozpúšťadla, ako je napríklad vodný roztok MeOH, EtOH, alebo i-PrOH. Karboxylová kyselina V-4 sa konvertuje na zodpovedajúci chlorid kyseliny buď pomocou reakcie s SOCI2 alebo oxalylchloridom podľa podmienok dobre známych odborníkom v tejto oblasti. Opracovanie tohto chloridu kyseliny s príslušným Friedel-Craftsovým katalyzátorom, ako je napríklad AICI3 alebo SnCI4, v inertnom rozpúšťadle, ako je napríklad CH2CI2 alebo CS2, poskytuje cyklický ketón V-5. Alternatívne môže byť kyselina V-4 konvertovaná priamo na ketón V-5 za kyslých podmienok, napríklad s kyselinou polyfosforečnou. Reakcia V-5 v aldolovom type reakcia s enolátom etylacetátu, ktorý môže byť generovaný z etylacetátu exponovaním príslušnou amidovou zásadou, napríklad diizopropylamid lítny (LDA) alebo bis(trimetylsilyl)-amid lítny (LiHMDS), poskytne látku V-6. Pre aldolovú reakciu sa THF často vyberá ako rozpúšťadlo, hoci sa často používa THF v prítomnosti rôznych prídavkov, napríklad HMPA alebo TMEDA. Redukcia látky V-6, čím sa poskytne látka V-7, môže byť uskutočnená pomocou opracovania látky V-6 s trietylsilánom v prítomnosti éterátu fluoridu boritého podľa všeobecného spôsobu Orphanopoulosa a Smonua (Synth. Commun. 1988, 833). Akékoľvek olefinické vedľajšie produkty, ktoré pochádzajú z eliminácie alkoholu sa redukujú hydrogenáciou na príslušnom katalyzátore, napríklad kovovom paládiu na aktívnom uhlí (Pd/C), v príslušnom rozpúšťadle, ako je napríklad MeOH alebo EtOH. Alternatívne sa môže redukcia látky V-6, čím sa poskytne látka V-7, uskutočniť pomocou hydrogenolýzy v prítomnosti minerálnej kyseliny, ako je napríklad HCl. Typicky je táto reakcia katalyzovaná pomocou Pd/C, a je voliteľne uskutočňovaná v kyseline octovej. Odstránenie metyléteru z látky V-7, čím sa poskytne V-5, môže byť uskutočnené s BBr3 v inertnom rozpúšťadle, napríklad CH2CI2, alebo reakciou s etántiolom a AICI3 v inertnom rozpúšťadle, výhodne CH2CI2. Ďalšie užitočné spôsoby na odstránenie metyléteru sú opísané v
-21 Greene, Protective Groups in Organic Synthesis (publikovaná John Wiley and Sons). Látka V-5 sa následne konvertuje na látku všeobecného vzorca I podľa postupu vyznačeného na Schéme III.
Kyslé adičné soli látok sa pripravujú štandardným spôsobom vo vhodnom rozpúšťadle z materskej látky a prebytku kyseliny, ako napríklad kyseliny chlorovodíkovej, bromovodíkovej, fluorovodíkovej, sírovej, fosforečnej, octovej, trifluóroctovej, maleínovej, jantárovej alebo metánsulfónovej. Niektoré z týchto látok tvoria vnútorné soli alebo zwitterióny, ktoré môžu byť prijateľné. Kationové soli sa pripravujú opracovaním materskej látky s prebytkom alkalického činidla, ako napríklad hydroxidu, uhličitanu alebo alkoxidu, obsahujúceho príslušný katión; alebo s príslušným organickým amínom. Katióny, ako napríklad Li+, Na+, K+, Ca++ Mg++ a NH4 +, sú konkrétnymi príkladmi katiónov prítomných vo farmaceutický prijateľných soliach.
Tento vynález tiež poskytuje farmaceutický prostriedok, ktorý zahrnuje látku všeobecného vzorca I a farmaceutický prijateľný nosič. Podľa toho sa látky všeobecného vzorca I môžu používať na výrobu liečiv. Farmaceutické prostriedky látok všeobecného vzorca I, pripravené ako je uvedené skôr v tomto dokumente, môžu byť upravené ako roztoky alebo ako lyofilizované prášky na parenterálne podávanie. Prášky sa môžu pred použitím rekonštituovať pridaním vhodného zrieďovadla alebo iného farmaceutický prijateľného nosiča. Kvapalné prípravky môžu byť upravené ako pufrované izotonické vodné roztoky. Príklady vhodných zried’ovadiel sú normálny izotonický soľný roztok, štandardný roztok 5 % hmotnostných dextrózy vo vode alebo pufrovanom roztoku octanu sodného alebo amónneho. Takéto prípravky sú zvlášť vhodné na parenterálne podávanie, ale môžu sa tiež použiť na orálne podávanie alebo, ak sú zahrnuté v odmeranej dávke inhalátora alebo rozprašovača, na insufláciu. Môže byť žiadúce pridať vehikulá, ako napríklad polyvinylpyrolidón, želatínu, hydroxycelulózu, arabskú gumu, polyetylénglykol, manitol, chlorid sodný alebo citran sodný.
Alternatívne sa tieto látky môžu zapuzdriť, tabletovať alebo sa môžu pripraviť v emulzii alebo sirupe na orálne podávanie. Môžu sa pridať farmaceutický prijateľné tuhé alebo kvapalné nosiče na zlepšenie alebo stabilizáciu zmesi alebo
-22na uľahčenie prípravy kompozície. Tuhé nosiče zahrnujú škrob, laktózu, dihydrát síranu vápenatého, sádrovec, stearan horečnatý alebo kyselinu stearovú, mastenec, pektín, arabskú gumu, agar alebo želatínu. Kvapalné nosiče zahrnujú sirup, podzemnicový olej, olivový olej, soľanku a vodu. Nosič môže tiež zahrnovať materiál na spomalené uvoľňovanie, ako napríklad glycerylmonostearát alebo glyceryldistearát, samotný alebo s voskom. Množstvo tuhého nosiča sa mení, ale výhodne bude medzi okolo 20 mg až okolo 1 g na dávkovú jednotku. Farmaceutické prípravky sa vyrábajú podľa konvenčných techník farmácie zahrnujúc mletie, zmiešavanie, granuláciu a lisovanie, ak je potrebné, na tabletové formy; alebo mletie, zmiešavanie a plnenie do formy tvrdých želatínových kapsúl. Keď sa používa kvapalný nosič, prípravok bude vo forme sirupu, elixíru, emulzie alebo vodnej alebo nevodnej suspenzie. Takéto kvapalné prípravky sa môžu podávať priamo p.o. alebo plnené do mäkkej želatínovej kapsuly.
Pre rektálne podávanie sa látky podľa tohto vynálezu môžu tiež kombinovať s takými vehikulami, ako je napríklad kakaové maslo, glycerín, želatína alebo polyetylénglykoly, a formovať na čapíky.
Látky opísané v tomto dokumente sú antagonistami receptora vitronektínu a sú užitočné na liečenie chorôb, pri ktorých základná patológia je priraditeľná ligandu alebo bunke, ktoré interagujú s receptorom vitronektínu. Tieto látky sú napríklad užitočné na liečenie chorôb, pri ktorých vytvára patológiu strata kostnej matrice. Teda tieto látky sú užitočné na liečenie ostoeporózy, hyperpara-tyreoidizmu, Pagetovej choroby, hyperkalcémie pri malignite, osteolytických lézií tvorených kostnými metastázami, straty kosti v dôsledku nepohyblivosti alebo nedostatku pohlavného hormónu. Predpokladá sa, že látky podľa tohto vynálezu majú tiež použitie ako antitumorové, anti-angiogenetické, protizápalové a anti-metastázové činidlá a sú užitočné na liečenie aterosklerózy a restenózy.
Tieto látky sa podávajú buď orálne alebo parenterálne pacientovi takým spôsobom, že koncentrácia liečiva je dostatočná na inhibovanie resorpcie kostí, alebo inej takejto indikácie. Farmaceutická zmes obsahujúca túto látku sa podáva v orálnej dávke medzi asi 0,1 až asi 50 mg/kg spôsobom konzistentným so stavom pacienta. Výhodne by orálne dávky boli asi 0,5 až asi 20 mg/kg. Na akútnu terapiu
-23je výhodné parenterálne podávanie. Intravenózna infúzia peptidu v roztoku 5 % hmotnostných dextrózy vo vode alebo normálnom soľnom roztoku, alebo podobnom prípravku s vhodnými vehikulami, je najúčinnejšia, hoci intramuskulárna bolusová injekcia je tiež užitočná. Typicky bude parenterálna dávka asi 0,01 až asi 100 mg/kg; výhodne medzi 0,1 a 20 mg/kg. Tieto látky sa podávajú jeden až štyri krát denne s hladinou na dosiahnutie celkovej dennej dávky asi 0,4 až asi 400 mg/kg/deň. Presná hladina a spôsob, ktorým sa tieto látky podávajú, sa ľahko určí odborníkom v tejto oblasti pomocou porovnania hladiny činidla v krvi s koncentráciou požadovanou na to, aby mala terapeutický účinok.
Tento vynález ďalej poskytuje spôsob liečenia osteoporózy alebo inhibovania straty kosti, ktorý zahrnuje postupné podávanie alebo podávanie vo fyzickom spojení látky podľa tohto vynálezu a iných inhibítorov resorpcie kostí, ako napríklad bisfosfonátov (t.j. alendronát), hormonálnej terapie, anti-estrogénov, alebo kalcitonínu. Okrem toho tento vynález poskytuje spôsob liečenia za použitia látky podľa tohto vynálezu a anabolického činidla, ako napríklad kostného morfogenického proteínu, iproflavónu, užitočného na prevenciu straty kosti a/alebo na zvýšenie kostnej hmoty.
Okrem toho tento vynález poskytuje spôsob inhibovania rastu tumoru, ktorý zahrnuje podávanie postupne alebo podávanie vo fyzickom spojení látky všeobecného vzorca I a antineoplastického činidla. Látky triedy kamptotecínových analógov, ako napríklad topotekan, irinotekan a 9-aminokamptotecín, a platinové koordinačné komplexy, ako napríklad cisplatina, ormaplatina a tetraplatina, sú dobre známou skupinou antineoplastických činidiel. Látky triedy kamptotecí nových analógov sú opísané v U.S. patentoch č. 5,004,758, 4,604,463, 4,473,692, 4,545,880 4,342,776, 4,513,138, 4,399,276, v EP patentových prihláškach č. 0418099 a 0088 642, Wani, a spol., J. Med. Chem, 1986, 29, 2358, Wani, a spol., J. Med. Chem., 1980, 23, 554, Wani, a spol., J. Med. Chem, 1987, 30, 1774, a Nitta, a spol., Proc. 14th International Congr. Chemotherapy, 1985, Anticancer Section 1, 28, ktorých úplný opis je tu včlenený pomocou odkazu. Platinový koordinačný komplex, cisplatina, je dostupný pod menom Platinol® od Bristol Myers-Squibb Corporation. Užitočné prípravky cisplatiny sú opísané v U.S.
-24patentoch č. 5,562,925 a 4,310,515, ktorých úplný opis je tu včlenený pomocou odkazu.
Pri spôsobe inhibovania rastu tumoru, ktorý zahrnuje podávanie postupne alebo podávanie vo fyzickom spojení látky podľa tohto vynálezu a antineoplastického činidla, sa platinová koordinačná látka, napríklad cisplatiny, môže podávať za použitia pomalej intravenóznej infúzie. Výhodným nosičom je roztok dextróza/soľanka obsahujúci manitol. Dávkový rozvrh platinovej koordinačnej látky môže byť na základe od asi 1 do asi 500 mg na štvorcový meter (mg/m2) plochy povrchu tela na beh liečenia. Infúzie platinovej koordinačnej látky sa môžu dávať jeden až dva krát týždenne a týždenné liečenia sa môžu opakovať niekoľko krát. Za použitia látky triedy analógov kamptotecínu pri parenterálnom podávaní, všeobecne použitý beh terapie je od asi 0,1 až asi 300,0 mg/m2 plochy povrchu tela na deň počas asi päť postupne nasledujúcich dní. Najvýhodnejšie je použitý beh terapie pre topotekan od asi 1,0 do asi 2,0 mg/m2 plochy povrchu tela na deň počas asi päť postupne nasledujúcich dní. Výhodne sa beh liečenia opakuje najmenej jedenkrát po asi sedem dňovom až asi dvadsaťdňovom intervale.
Farmaceutická zmes môže byť upravená tak, že aj látka všeobecného vzorca I aj antineoplastické činidlo sú v rovnakom kontajneri, ale výhodné sú prípravky s rôznymi kontajnermi. Keď sa obe činidlá poskytujú v roztokovej forme, môžu byť obsahom infúzneho/injekčného systému pre simultánne podávanie alebo v tandemovom usporiadaní.
Na pohodlné podávanie látky všeobecného vzorca I a antineoplastíckého činidla v rovnakom alebo v rôznych časoch sa pripravuje kit, obsahujúci v jednom kontajneri, ako je napríklad krabica, kartón alebo v inom kontajneri, individuálne fľašky, vrecká, liekovky alebo iné kontajnery, pričom každý má účinné množstvo látky všeobecného vzorca I na parenterálne podávanie, ako je opísané vyššie, a účinné množstvo antineo-plastického činidla na parenterálne podávanie, ako je opísané vyššie. Takýto kit môže obsahovať napríklad obe farmaceutické činidlá v oddelených kontajneroch alebo v tom istom kontajneri, voliteľne ako lyofilizovanú tabletu, a kontajnery roztokov na rekonštitúciu. Variáciou je zahrnutie roztoku na rekonštitúciu a lyofilizovanej tablety v dvoch komorách jediného kontajnera, pričom
-25môžu byť privedené k zmiešaniu pred použitím. Pri takomto usporiadaní sa antineoplastické činidlo a látka podľa tohto vynálezu môžu baliť oddelene, ako v dvoch kontajneroch, alebo lyofilizované spolu ako prášok a poskytnuté v jedinom kontajneri.
Keď sú obe činidlá poskytnuté v roztokovej forme, môžu byť obsahom infúzneho/injekčného systému pre simultánne podávanie alebo v tandemovom usporiadaní. Napríklad môže látka všeobecného vzorca I byť v i.v. injektovateľnej forme, alebo v infúznom vrecku spojenom do série pomocou hadičky s antineoplastickým činidlom v druhom infúznom vrecku. Za použitia takéhoto systému môže pacient dostať počiatočnú injekciu bolusového typu alebo infúziu látky všeobecného vzorca I, po čom nasleduje infúzia antineoplastického činidla.
Látky sa môžu testovať v jednej z viacerých biologických skúšok, aby sa určila koncentrácia látky, ktorá sa vyžaduje na to, aby mala daný farmakologický účinok.
Inhibícia viazania vitronektínu
Viazanie tuhá-fáza [3H]-SK&F-107260 na ανβ3; αυβ3 ľudskej placenty alebo ľudských krvných doštičiek (0,1 - 0,3 mg/ml) v pufri T (obsahujúcom 2 mmol/l CaCI2 a 1 % hmotnostné oktylglukozidu) sa zriedil s pufrom T obsahujúcim 1 mmol/l CaCI2, 1 mmol/l MnCI2, 1 mmol/l MgCI2 (pufer A) a 0,05 % hmotnostného NaN3, a potom sa ihneď pridal do 96-kalíškových ELISA platní (Corning, New York, NY) s 0,1 ml na kalíšok. Pridalo sa 0,1 až 0,2 pg ανβ3 na kalíšok. Platne sa inkubovali počas noci pri 4 °C. V čase experimentu sa kalíšky premyli jeden raz s pufrom A a inkubovali sa s 0,1 ml 3,5 % albumínom hovädzieho séra v rovnakom pufri počas 1 hodiny pri laboratórnej teplote. Po inkubácii sa kalíšky úplne odsali a premyli sa dva krát s 0,2 ml pufra A.
Látky sa rozpustili v 100 % DMSO, čím sa poskytol 2 mmol/l zásobný roztok, ktorý sa zriedil s viazacím pufrom (15 mmol/l Tris-HCl (pH 7,4), 100 mmol/l NaCl, 1 mmol/l CaCI2l 1 mmol/l MnCI2l 1 mmol/l MgCI2) na konečnú látkovú koncentráciu 100 pmol/l. Tento roztok sa potom zriedil na požadovanú konečnú látkovú
-26koncentráciu. Do kalíškov sa pridali rôzne koncentrácie neoznačenej antagonistickej látky (0,001 až 100 pmol/l) v troch opakovaniach, nasledovalo pridanie 5,0 nmol/l [3H]-SK&F- 107260 (2,40 .1012 až 3,18.1012 Bq/mmol (65 až 86 Ci/mmol)).
Platne sa inkubovali počas 1 hodiny pri laboratórnej teplote. Po inkubácii sa kalíšky úplne odsali a premyli sa jeden krát s 0,2 ml ľadovo studeného pufra A v usporiadaní kalíšok po kalisku. Receptory sa solubilizovali s 0,1 ml 1 % SDS a viazaný [3H]-SK&F-107260 sa určil pomocou detekcie kvapalným scintilátorom s pridaním 3 ml roztoku Ready Safe v Beckman LS kvapalnom scintilačnom detektore so 40 % účinnosťou. Nešpecifické viazanie [3H]-SK&F-107260 sa určilo v prítomnosti 2 pmol/l SK&F-107260 a bolo konzistentne menej než 1% z celkového vstupného rádioligandu. Hodnota IC50 (koncentrácia antagonistickej látky na inhibovanie 50 % viazania [3H]-SK&F-107260) sa určila pomocou programu nelineárnej metódy najmenších štvorcov na spracovanie kriviek, ktorý sa modifikoval z LUNDON-2 programu. Hodnoty Kf (disociačná konštanta antagonistickej látky) sa vypočítali podľa rovnice: K, = IC50(1 + L/Kd), kde L a Kd boli koncentrácia a disociačná konštanta [3H]-SK&F-107260.
Látky podľa tohto vynálezu inhibujú viazanie vitronektínu s SK&F-107260 v koncentračnom rozsahu asi 2,5 až asi 0,001 mikromol/l.
Látky podľa tohto vynálezu sa tiež testovali na in vitro a in vivo resorpciu kostí v skúške štandardnej v tejto oblasti na vyhodnotenie inhibície tvorby kostí, ako napríklad skúška tvorby jamky opísaná v EP 528587, ktorá sa môže tiež uskutočniť za použitia ľudských osteoklastov namiesto potkaních osteoklastov, a model ovarektomizovaných potkanov, opísaný Wronskim a spol., Celí and Materials 1991, Sup. 1,69-74.
Skúška migrácie vaskulárnych buniek hladkého svalstva
Použili sa bunky potkanieho alebo ľudského aortického hladkého svalstva.
Migrácia buniek sa monitorovala v Transwell-komore na bunkové kultúry za použitia polykarbonátovej membrány s pórmi 8 pm (Costar). Nižší povrch filtra sa pokryl s vitronektínom. Bunky sa suspendovali v DMEM doplnenom s 0,2 % hovädzím
-27sérovým albumínom pri koncentrácii 2,5 až 5,0.106buniek/ml, a predopracovali sa s testovanou látkou pri rôznych koncentráciách počas 20 minút pri 20 °C. Rozpúšťadlo samotné sa použilo na kontrolu. 0,2 ml bunkovej suspenzie sa umiestnilo v hornom oddelení komory. Dolné oddelenie obsahovalo 0,6 ml DMEM doplneného s 0,2 % hovädzieho sérového albumínu. Inkubácia sa uskutočnila pri 37 °C v atmosfére 95 % hmotnostných vzduch/5 % hmotnostných CO2 počas 24 hodín. Po inkubácii sa nemigrované bunky na hornom povrchu filtra odstránili pomocou jemného zoškrabania. Filter sa potom fixoval v metanole a vyfarbil sa s 10 % Giemsa farbivom. Migrácia sa merala buď pomocou a) sčítania počtu buniek, ktoré migrovali na dolný povrch filtra alebo pomocou b) extrahovania vyfarbených buniek s roztokom 10 % hmotnostných kyseliny octovej, po čom nasledovalo určenie absorbancie pri 600 nm.
Model tyroparatyroidektomizovaných potkanov
Každá experimentálna skupina pozostáva z 5 až 6 dospelých samcov
Sprague-Dawley potkanov (250 až 400 g telesná hmotnosť). Potkany sa tyroparatyroidektomizovali (predajcom, Taconic Farms) 7 dní pred použitím. Všetky potkany obdržali náhradnú dávky tyroxínu každé 3 dni. Po obdržaní potkanov sa merali hladiny obehového ionizovaného vápnika v krvi ihneď po tom, ako bola odobratá do heparinizovaných skúmaviek pomocou napichnutia chvostovej žily. Potkany sa zahrnujú do pokusu, ak hladina ionizovaného Ca (merané s Ciba-Corning model 634 analyzátorom vápnik pH) je <1,2 mmol/l. Každý potkan je vybavený s trvalo prítomným žilným a arteriálnym katétrom na dodávanie testovaného materiálu a na vzorkovanie krvi. Potom sa potkany dajú na bezvápnikovú diétu a deionizovanú vodu. Odmerali sa základné línie Ca hladín a každému potkanovi sa podávajú buď kontrolné vehikulá alebo ľudský paratyroidný hormón 1-34 peptid (hPTH1-34, dávka
1,25 μg/kg/hod. v zmesi soľanka/1% hmotnostné hovädzieho sérového albumínu, Bachem, Ca) alebo zmes hPTH1-34 a testovaného materiálu, pomocou kontinuálnej intravenóznej infúzie cez žilný katéter za použitia externej piestovej pumpy. Kalcemická odozva potkanov sa merala v dvojhodinových intervaloch počas infúzie po dobu 6 až 8 hodín.
-28Skúška resorpcie a adhézie ľudských osteoklastov
Vyvinuli sa jamková resorpčná a adhézna skúška a štandardizovali sa za použitia normálnych ľudských osteoklastov získaných z osteoklastómového tkaniva. Skúška 1 sa vyvinula na meranie objemov jamky osteoklastov pomocou laserovej konfokálnej mikroskopie. Skúška 2 sa vyvinula ako výkonnejšia kontrolná metóda, pri ktorej sa kolagénové fragmenty (uvoľnené počas resorpcie) merali pomocou konkurenčnej ELISA-metódy.
Skúška 1 (za použitia laserovej konfokálnej mikroskopie) • Alikvóty suspenzie ľudských osteoklastómových buniek sa odobrali z uskladnenia v kvapalnom dusíku, rýchlo sa zahriali na 37 °C a premyli sa x1 v RPMI-1640 médiu pomocou centrifugácie (1000 ot/min, 5 minút pri 4 °C).
• Médium sa odsalo a nahradilo sa myšacou anti-HLA-DR protilátkou, potom sa zriedilo 1:3 s RPML-1640 médiom. Suspenzia sa inkubovala počas 30 minút na ľade a často sa premiešavala.
• Bunky sa premyli x2 so studeným RPMI-1640, po čom nasledovala centrifugácia (1000 ot./min., 5 minút pri 4 °C) a bunky sa potom preniesli do sterilnej 15 ml centrifugačnej skúmavky. Počet mononukleárnych buniek sa spočítal v zlepšenej Neubauerovej počítacej komore.
• Dostatok magnetických perličiek (5 I mononukleárnych buniek), pokrytých s kozím anti-myším IgG (Dynal, Great Neck, NY) sa odobral z ich zásobnej fľaše a umiestnil sa do 5 ml čerstvého média (tieto sa premyli od toxickej azidovej konzervačnej látky). Médium sa odstránilo pomocou imobilizovania perličiek na magnete a nahradilo sa čerstvým médiom.
• Perličky sa zmiešali s bunkami a suspenzia sa inkubovala počas 30 minút na ľade. Suspenzia sa často miešala.
• Bunkami pokryté perličky sa imobilizovali na magnete a zostávajúce bunky (frakcia bohatá na osteoklasty) sa dekantovali do sterilnej 50 ml centrifugačnej skúmavky.
• K bunkami pokrytým perličkám sa pridalo čerstvé médium na uvoľnenie
-29zachytených osteoklastov. Tento premývací proces sa opakoval x10. Bunkami pokryté perličky sa vyhodili.
• Životaschopné osteoklasty sa spočítali v sčítacej komore, za použitia fluoresceíndiacetátu na označenie živých buniek. Na pridanie vzorky do komory sa použila plastová Pasteurova pipeta s veľkým vypúšťacím otvorom.
• Osteoklasty sa peletovali pomocou centrifugácie a hustota sa nastavila na príslušný počet v EMEM médiu (počet osteoklastov je variabilný od tumoru k tumoru), doplnenom s 10 % fetálnym teľacím sérom a 1,7 g/liter hydrogenuhličitanu sodného.
• 3 mi alikvóty bunkovej suspenzie (na sledovanú látku) sa dekantujú do 15 ml centrifugačných skúmaviek. Bunky sa peletovali pomocou centrifugácie.
• Do každej skúmavky sa pridali 3 ml príslušnej sledovanej látky (zriedenej na 50 μιτιο!/Ι v EMEM médiu). Zahrnuli sa tiež príslušné vehikulové kontrolné vzorky, pozitívna kontrola (myšacia monoklonálna protilátka [87MEM1] pre anti-receptor vitronektínu zriedená na 100 ug/ml) a izotypová kontrola (lgG2a zriedený na 100 pg/ml). Vzorky sa inkubovali pri 37 °C počas 30 minút.
• 0,5 ml alikvóty buniek sa naočkovali na sterilné dentínové plátky v 48kalíškovej platni a inkubovali sa pri 37 °C počas 2 hodín. Každé opracovanie sa sledovalo štvormo.
• Plátky sa premyli šiestimi výmenami teplého PBS (10 ml/kalíšok v 6kalíškovej platni) a potom sa umiestnili do čerstvého média obsahujúceho vzorku sledovanej látky alebo kontrolnú vzorku. Vzorky sa inkubovali pri 37 °C počas 48 hodín.
Metóda vínan-rezistentnej kyslej fosfatázy (TRAP) (selektívne vyfarbenie pre bunky osteoklastového pôvodu) • Plátky z kosti obsahujúce naviazané osteoklasty sa premyli vo fosfátom pufrovanej soľanke a fixovali sa v roztoku 2 % hmotnostné glutaraldehydu (v 0,2 mol/l kakodyláte sodnom) počas 5 minút.
• Potom sa premyli s vodou a inkubovali sa počas 4 minút v TRAP pufri pri 37
-30°C (0,5 mg/ml naftol AS-BI fosfát rozpustený v A/,/V-dimetylformamide a zmiešaný s 0,25 mol/l citranovým pufrom (pH 4,5), obsahujúcom 10 mmol/l vínanu sodného.
• Po premytí studenou vodou sa plátky ponorili do studeného octanového pufra (0,1 mol/l, pH 6,2) obsahujúceho 1 mg/ml farbiva „fast red garnet“ a inkubovali sa pri 4 °C počas 4 minút.
• Prebytok pufra sa odsal a plátky sa po premytí vo vode vysušili na vzduchu.
• TRAP pozitívne osteoklasty (tehlovo-červená/purpurová zrazenina) sa vyčíslili pomocou mikroskopie s ostrým sveteľným poľom a potom sa odstránili z povrchu dentínu pomocou opracovania ultrazvukom.
• Objemy jamky sa určili za použitia konfokálneho mikroskopu Niko/Lasertec ILM21W.
Skúška 2 (za použitia odčítania typu ELISA)
Ľudské osteoklasty sa obohatili a pripravili na sledovanie látok tak, ako je opísané v počiatočných 9 krokoch Skúšky 1. Na objasnenie sú tieto kroky opakované nižšie v tomto dokumente.
• Alikvóty bunkových suspenzií získaných z ľudských osteoklastov sa odobrali z uskladnenia v kvapalnom dusíku, rýchlo sa zahriali na 37 °C a premyli sa x1 v RPMI-1640 médiu pomocou centrifugácie (1000 ot./min., 5 minút pri 4 °C ).
• Médium sa odsalo a nahradilo sa myšacou anti-HLA-DR protilátkou, potom sa zriedilo 1:3 s RPML-1640 médiom. Suspenzia sa inkubovala počas 30 minút na ľade a často sa premiešavala.
• Bunky sa premyli x2 so studeným RPMI-1640, po čom nasledovala centrifugácia (1000 ot./min., 5 minút pri 4 °C) a bunky sa potom preniesli do sterilnej 15 ml centrifugačnej skúmavky. Počet mononukleárnych buniek sa spočítal v zlepšenej Neubauerovej počítacej komore.
• Dostatok magnetických perličiek (5 I mononukleárnych buniek), pokrytých s kozím anti-myším IgG (Dynal, Great Neck, NY) sa odobral z ich zásobnej fľaše a umiestnil sa do 5 ml čerstvého média (tieto sa premyli od toxickej azidovej konzervačnej látky). Médium sa odstránilo pomocou imobilizovania perličiek na
-31 magnete a nahradilo sa čerstvým médiom.
• Perličky sa zmiešali s bunkami a suspenzia sa inkubovala počas 30 minút na ľade. Suspenzia sa často miešala.
• Bunkami pokryté perličky sa imobilizovali na magnete a zostávajúce bunky (frakcia bohatá na osteoklasty) sa dekantovali do sterilnej 50 ml centrifugačnej skúmavky.
• K bunkami pokrytým perličkám sa pridalo čerstvé médium na uvoľnenie zachytených osteoklastov. Tento premývací proces sa opakoval x10. Bunkami pokryté perličky sa vyhodili.
• Životaschopné osteoklasty sa spočítali v sčítacej komore, za použitia fluoresceíndiacetátu na označenie živých buniek. Na pridanie vzorky do komory sa použila plastová Pasteurova pipeta s veľkým vypúšťacím otvorom.
• Osteoklasty sa peletovali pomocou centrifugácie a hustota sa nastavila na príslušný počet v EMEM médiu (počet osteoklastov je variabilný od tumoru k tumoru), doplnenom s 10 % fetálnym teľacím sérom a 1,7 g/liter hydrogenuhličitanu sodného.
V kontraste so spôsobom opísaným vyššie v Skúške 1, sa látky sledujú pri 4 dávkach, čim sa získajú lC50, ako je uvedené nižšie:
• Preparáty osteoklastov sa predinkubovali počas 30 minút pri 37 °C s testovanou látkou (4 dávky) alebo kontrolnými vzorkami.
• Potom sa očkovali na plátky hovädzej kortikálnej kosti v kalíškoch 48-kalíškovej tkanivovej kultivačnej platne a inkubovali sa počas ďalších 2 hodín pri 37 °C.
• Plátky kosti sa premyli sa šiestimi výmenami teplej fosfátom pufrovanej soľanky (PBS), čím sa odstránili nezachytené bunky, a potom sa vrátili do kalíškov 48 kalíškovej platne obsahujúcich čerstvú sledovanú látku alebo kontrolné vzorky.
• Tkanivové kultivačné platne sa potom inkubovali počas 48 hodín pri 37 °C • Supernatanty z jednotlivých kalíškov sa odsali do individuálnych skúmaviek a sledovali sa v konkurenčnom ELISA teste, ktorý deteguje c-telopeptid kolagénu typu I, ktorý sa uvoľnil počas resorpčného procesu. To je komerčne dostupná ELISA (Osteometer, Dánsko), ktorá obsahuje králičie protilátky, ktoré špecificky
-32reagujú s 8-člennou aminkyselinovou sekvenciou (Glu-Eys-Ala-His-Asp-Gly-GlyArg), ktorá je prítomná na karboxy-terminálovom telopeptide a 1-reťazca kolagénu typu I. Výsledky sú vyjadrené ako % inhibície resorpcie v porovnaní s vehikulovou kontrolnou vzorkou.
Skúška adhézie ľudských osteoklastov
Ľudské osteoklasty sa obohatili a pripravili na sledovanie látok tak, ako je opísané v počiatočných 9 krokoch Skúšky 1. Pre objasnenie sú tieto kroky opakované nižšie v tomto dokumente.
• Alikvóty bunkových suspenzií získaných z ľudských osteoklastov sa odobrali z uskladnenia v kvapalnom dusíku, rýchlo sa zahriali na 37 °C a premyli sa x1 v RPMI-1640 médiu pomocou centrifugácie (1000 ot./min., 5 minút pri 4 °C).
• Médium sa odsalo a nahradilo sa myšacou anti-HLA-DR protilátkou, potom sa zriedilo 1:3 s RPML-1640 médiom. Suspenzia sa inkubovala počas 30 minút na ľade a často sa premiešavala.
• Bunky sa premyli x2 so studeným RPMI-1640, po čom nasledovala centrifugácia (1000 ot./min., 5 minút pri 4 °C) a bunky sa potom preniesli do sterilnej 15 ml centrifugačnej skúmavky. Počet mononukleárnych buniek sa spočítal v zlepšenej Neubauerovej počítacej komore.
• Dostatok magnetických perličiek (5 / mononukleárnu bunku), pokrytých s kozím anti-myším IgG (Dynal, Great Neck, NY) sa odobral z ich zásobnej fľaše a umiestnil sa do 5 ml čerstvého média (tieto sa premyli od toxickej azidovej konzervačnej látky). Médium sa odstránilo pomocou imobilizovania perličiek na magnete a nahradilo sa čerstvým médiom.
• Perličky sa zmiešali s bunkami a suspenzia sa inkubovala počas 30 minút na ľade. Suspenzia sa často miešala.
• Bunkami pokryté perličky sa imobilizovali na magnete a zostávajúce bunky (frakcia bohatá na osteoklasty) sa dekantovali do sterilnej 50 ml centrifugačnej skúmavky.
• K bunkami pokrytým perličkám sa pridalo čerstvé médium na uvoľnenie
-33zachytených osteoklastov. Tento premývací proces sa opakoval x10. Bunkami pokryté perličky sa vyhodili.
• Životaschopné osteoklasty sa spočítali v sčítacej komore, za použitia fluoresceíndiacetátu na označenie živých buniek. Na pridanie vzorky do komory sa použila plastová Pasteurova pipeta s veľkým vypúšťacím otvorom.
• Osteoklasty sa peletovali pomocou centrifugácie a hustota sa nastavila na príslušný počet v EMEM médiu (počet osteoklastov je variabilný od tumoru k tumoru), doplnenom s 10 % fetálnym teľacím sérom a 1,7 g/liter hydrogenuhličitanu sodného.
• Osteoklasty získané z osteoklastómu sa predinkubovali počas 30 minút pri 37 °C s testovanou látkou (4 dávky) alebo kontrolnými vzorkami.
• Bunky sa potom naočkovali na plátky pokryté osteopontínom (ľudský alebo potkaní osteopontín, 2,5 pg/ml) a inkubovali sa počas 2 hodín pri 37 °C.
• Nezachytené bunky sa odstránili pomocou rázneho premytia plátkov vo fosfátom pufrovanej soľanke a bunky zostávajúce na plátkoch sa fixovali v acetóne.
• Osteoklasty sa vyfarbili na vínan-rezistentnú kyslú fosfatázu (TRAP), selektívny marker pre bunky tohto fenotypu (pozri kroky 15 až 17), a spočítali sa pomocou svetelnej mikroskopie. Výsledky sú vyjadrené ako % inhibície adhézie v porovnaní s vehikulovou kontrolou.
Skúška bunkovej adhézie
Bunky a bunkové kultúry
Ľudské embryonálne obličkové bunky (HEK293 bunky) sa získali z ATCC (Katalógové č. CRL 1573). Bunky rástli v Earlovom minimálnom esenciálnom médiu (EMEM) médium obsahovalo Earlove soli, 10% fetálne hovädzie sérum, 1% hmotnostné glutaminu a 1 % hmotnostné zmesi penicilín-streptomycín.
Konštrukty a transfekcie
3,2 kb EcoRI-Kpnl fragment av podjednotky a 2,4 kb Xbal-Xhol fragment β3 subjednotky sa vložili do EcoRI-EcoRV klonujúcich miest pCDN vektora (Aiyar a
-34spol., 1994), ktorý obsahuje CMV promótor a G418 selektovateľný marker pomocou otupenia a ligácie. Na stabilnú expresiu sa 80x106 HEK293 buniek elektrotransformovalo s αν+β3 konštruktormi (20 pg DNA každej subjednotky) za použitia zariadenia Gen Pulser (Hensley a spol., 1994) a naniesli sa na 100 mm platne (5x105 buniek na platňu). Po 48 hodinách sa rastové médium doplnilo s 450 pg/ml Genetici n (G418 sulfát, GIBCO-BRL, Bethesda, MD). Bunky sa pestovali v selekčnom médiu, kým neboli kolónie dosť veľké na skúšky.
Imunocytochemická analýza transfekovaných buniek
Na určenie toho, či HEK293 transfektanty exprimovali receptor vitronektínu, sa bunky imobilizovali na mikroskopovacích sklíčkach pomocou centrifugácie, fixovali sa v acetóne počas 2 minút pri laboratórnej teplote a sušili sa na vzduchu. Špecifická reaktivita s 23C6 monoklonálnymi protilátkami špecifickými pre αυβ3 komplex sa demonštrovala za použitia štandardného nepriameho imunofluorescenčného spôsobu.
Štúdium adhézie buniek
Corningové 96-kalíškové ELISA platne sa vopred pokryli počas noci pri 4 °C s 0,1 ml ľudského vitronektínu (0,2 pg/ml v RPMI médiu). V čase experimentu sa platne premyli jeden krát s RPMI médiom a blokovali sa s 3,5 % BSA v RPMI médiu počas 1 hodiny pri laboratórnej teplote. Transfekované 293 bunky sa resuspendovali v RPMI médiu doplnenom s 20 mmol/l Hepes, pH 7,4 a 0,1% BSA pri hustote 0,5x106 buniek/ml. 0,1 ml suspenzie buniek sa pridalo do každého kalíška a inkubovali sa počas 1 hodiny pri 37 °C v prítomnosti alebo neprítomnosti rôznych ανβ3 antagonistických látok. Po inkubácii sa pridalo 0,025 ml roztoku 10 % hmotnostných formaldehydu, pH 7,4 a bunky sa fixovali pri laboratórnej teplote počas 10 minút. Platne sa premyli 3 krát s 0,2 ml RPMI média a zachytené bunky sa vyfarbili s 0,1 ml roztoku 0,5 % hmotnostného toluidínovej modrej počas 20 minút pri laboratórnej teplote. Prebytok farbiva sa odstránil pomocou extenzívneho premytia s deionizovanou vodou. Toluidínová modrá včlenená do buniek sa
-35eluovala pomocou pridania 0,1 mi roztoku 50 % hmotnostných etanolu obsahujúceho 50 mmol/l HCI. Adhézia buniek sa kvantifikovala podľa optickej hustoty pri vlnovej dĺžke 600 nm na zariadení na čítanie mikrotitračných platní (Titertek Multiskan MC, Šterling, VA).
Skúška viazania tuhá-fáza ανβ5
Receptor vitronektínu ανβ6 sa čistil z ľudskej placenty. Prípravok receptora sa zriedil s 50 mmol/l Tris-HCl, pH 7,5, 100 mmol/l NaCI, 1 mmol/l CaCI2, 1 mmol/l, MnCI2, 1 mmol/l MgCi2 (pufer A) a ihneď sa pridal do 96-kalíškových ELISA platní pri 0,1 ml na kalíšok. Pridalo sa 0,1 až 0,2 pg ανβ3 na kalíšok. Platne sa inkubovali počas noci pri 4 °C. V čase experimentu sa kalíšky premyli jeden krát s pufrom A a inkubovali sa s 0,1 ml 3,5 % hovädzieho sérového albumínu v rovnakom pufri počas 1 hodiny pri laboratórnej teplote. Po inkubácii sa kalíšky úplne odsali a premyli sa dva krát s 0,2 ml pufra A.
Pri [3H]-SK&F-107260 konkurenčnej skúške sa do kalíškov pridali rôzne koncentrácie neoznačenej antagonistickej látky (0,001 až 100 pmol/l), nasledovalo pridanie 5,0 nmol/l [3H]-SK&F-107260. Platne sa inkubovali počas 1 hodiny pri laboratórnej teplote. Po inkubácii sa kalíšky úplne odsali a premyli sa jeden krát s 0,2 ml ľadovo studeného pufra A v usporiadaní kalíšok po kalíšku. Receptory sa solubilizovali s 0,1 ml 1 % SDS a viazaný [3H]-SK&F-107260 sa určil pomocou detekcie kvapalným scintilátorom s pridaním 3 ml roztoku Ready Safe v Beckman LS kvapalnom scintilačnom detektore so 40 % účinnosťou. Nešpecifické viazanie [3H]-SK&F-107260 sa určilo v prítomnosti 2 pmol/l SK&F-107260 a bolo konzistentne menej než 1% z celkového vstupného rádioligandu. Hodnota IC50 (koncentrácia antagonistickej látky na inhibovanie 50 % viazania [3H]-SK&F107260) sa určila pomocou programu nelineárnej metódy najmenších štvorcov na spracovanie kriviek, ktorý sa modifikoval z LUNDON-2 programu. Hodnoty K, (disociačné konštanta antagonistickej látky) sa vypočítali podľa rovnice Chenga a Prusoffa: K, = IC50(1 + L/l·^), kde L a Kd boli koncentrácia a disociačné konštanta [3H]-SK&F-107260.
-36Inhibícia RGD-sprostredkovaného GPIIb-llla viazania
Čistenie GPIIb-llla
Desať jednotiek starých premytých ľudských krvných doštičiek (získaných od Red Cross) sa lýzovali pomocou jemného premiešavania v roztoku 3 % hmotnostné oktylglukozidu, 20 mmol/l Tris-HCl, pH 7,4, 140 mmol/l NaCl, 2 mmol/l CaCI2 pri 4 °C počas 2 hodín. Lyzát sa centrifugoval pri 100000g počas 1 hodiny. Získaný supernatant sa aplikoval na 5 ml kolónu s granulami lektín-sepharose 4B (E.Y. Labs) v rovnováhe s roztokom 20 mmol/l Tris-HCl, pH 7,4, 100 mmol/l NaCl 2 mmol/l CaCi2, 1 % oktylglukozidu (pufer A). Po 2 hodinách inkubácie sa kolóna premyla s 50 ml studeného pufra A. Lektínom zachytený GPIIb-llla sa eluoval s pufrom A obsahujúcim 10% hmotnostných dextrózy. Všetky procedúry sa uskutočnili pri 4 °C. Získané GPIIb-llla mali >95 % čistotu, ako vidno z SDS polyakrylamidovej gélovej elektroforézy.
Včlenenie GPIIb-llla do lipozómov
Zmes fosfatidylserínu (70 % hmotnostných) a fosfatidylcholínu (30 % hmotnostných) (Avanti Polar Lipids) sa vysušili na stenách sklenej skúmavky pod prúdom dusíka, čistený GPIIb-llla sa zriedil na konečnú koncentráciu 0,5 mg/ml a zmiešal sa s fosfolipidmi v pomere proteíníosfolipid 1:3 (hmotnostné). Zmes sa resuspendovala a opracovala sa ultrazvukom v ultrazvukovom kúpeli počas 5 minút. Zmes sa potom dialyzovala počas noci za použitia dialyzačných trubičiek na rez molekulovej hmotnosti 12000 až 14000 proti 1000-násobnému prebytku 50 mmol/l Tris-HCl, pH 7,4, 100 mmol/l NaCl, 2 mmol/l CaCI2 (s 2 výmenami). Lipozómy obsahujúce GPIIb-llla sa centrifugovali pri 12000g počas 15 minút a resuspendovali sa v dialyzačnom pufri na konečnú koncentráciu proteínu približne 1 mg/ml. Lipozómy sa uskladnili pri -70 °C, kým neboli potrebné.
Konkurenčné viazanie na GPIIb-llla
Viazanie na fibrinogénový receptor (GPIIb-llla) sa skúšalo pomocou spôsobu nepriameho konkurenčného viazania za použitia [3H]-SK&F-107260 ako Iigandu RGD-typu. Skúška viazania sa uskutočnila v 96-kalíškovej filtračnom
-37platňovom zariadení (Millipore Corporation, Bedford, MA) za použitia 0,22 um hydrofilných duraporových membrán. Kalíšky sa vopred pokryli s 0,2 ml 10 gg/ml polylyzínu (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO.) pri laboratórnej teplote počas 1 hodiny na blokovanie nešpecifického viazanie. Do kaiíškov sa pridali rôzne koncentrácie neoznačených benzazepínov pri štyroch opakovaniach. [3H]-SK&F107260 sa aplikoval do každého kalíška pri konečnej koncentrácii 4,5 nmol/l, po čom nasledovalo pridanie 1 gg čistených doštičiek GPIIb-lila-obsahujúcich lipozómov. Zmesi sa inkubovali počas 1 hodiny pri laboratórnej teplote. GPIIb-llla viazaný [3H]-SK&F-107260 sa separoval od neviazaného pomocou filtrácie za použitia zariadenia na filtráciu Millipore, po čom nasledovalo premytie s fadovostudeným pufrom (2 krát, každý 0,2 ml). Viazaná rádioaktivita zostávajúca na filtroch sa merala v 1,5 ml Ready Solve (Beckman Instruments, Fullerton, CA) v zariadení Beckman Kvapalina Scintillation Counter (Model LS6800) so 40 % účinnosťou. Nešpecifické viazanie sa určilo v prítomnosti 2 pmol/l neoznačeného SK&F-107260 a bolo konzistentne menej ako 0,14% z celkovej rádioaktivity pridanej do vzoriek. Všetky údajové body sú priemerom zo štyroch opakovaných stanovení.
Údaje o konkurenčnom viazaní sa analyzovali pomocou programu nelineárnej metódy najmenších štvorcov na spracovanie kriviek. Tento spôsob poskytuje hodnoty ICS0 antagonistických látok (koncentrácia antagonistickej látky, ktorá inhibuje špecifické viazanie [3H]-SK&F-107260 na 50% pri rovnováhe). Hodnota IC50 je vo vzťahu s rovnovážnou disociačnou konštantou (K,) antagonistickej látky založenom na Chengovej a Ptusoffovej rovnici: K, = IC50( 1 + L/Kd), kde L je koncentrácia [3H]-SK&F-107260 použitá v skúške konkurenčného viazania (4,5 nmol/l) a Kd je disociačná konštanta [3H]-SK&F-107260, ktorá je 4,5 nmol/l, podľa stanovenia pomocou Scatchardovej analýzy.
Výhodné látky podľa tohto vynálezu majú afinitu pre receptor vitronektínu v pomere ku fibrinogénovému receptoru vyššiu než 10:1, najvýhodnejšie látky majú a pomer aktivity väčší ako 100.Ί.
Účinnosť látky podľa tohto vynálezu samotnej alebo v kombinácii s
-38antineoplastickým činidlom sa môže určiť za použitia viacerých transplantovateľných myších tumorových modeloch. Pozri U.S. patenty č.. 5,004,758 a 5,633,016 pre podrobnosti týchto modelov.
Príklady, ktoré nasledujú, nie sú zamýšľané žiadnym spôsobom na obmedzenie rozsahu tohto vynálezu, ale sú poskytnuté na ilustrovanie ako vyrobiť a používať látky podľa tohto vynálezu. Pre odborníka z tejto oblasti budú jednoducho zrejmé mnohé iné uskutočnenia vynálezu.
Príkladv uskutočnenia vynálezu
Všeobecne
Spektrá protónovej nukleárnej magnetickej rezonancie (1H NMR) boli zaznamenané pri použití buď 250 alebo 400 MHz. Chemické posuny sú uvedené v jednotkách ppm (časti z milióna) (δ) vzhľadom na interný štandard tetrametylsilán. Skratky pre NMR údaje sú nasledujúce: s = singlet, d = dublet, t = triplet, q = kvartet, m = multiplet, dd = dublet dubletov, dt = dublet tripletov, app = zdanlivý, br = široký. J označuje NMR interakčnú konštantu meranú v Hertzoch. CDCľ, je deuteriovaný chloroform, DMSO-d6 je hexadeuteriovaný dimetylsulfoxid, a CD3OD je tetradeuteriovaný metanol. Infračervené (IR) spektrá boli merané v transmisnom móde a polohy pásov sú uvedené vo vlnočtoch (cm'1). Hmotnostné spektrá sa získali za použitia ionizačných techník bombardovania rýchlymi atómami (FAB) alebo elektrospreja (ES). Elementárne analýzy sa vykonali na pracovisku alebo u Quantitative Technologies Inc., Whitehouse, NJ. Teploty topenia sa merali na prístroji na meranie teplôt topenia Thomas-Hoover a sú nekorigované. Všetky teploty sú uvedené v stupňoch Celzia. Na tenkovrstvovú chromatografiu sa použili tenkovrstvové platne Analtech Silica Gel GF a E. Merck Silica Gel 60 F-254. Aj rýchla aj gravitačná chromatografia sa uskutočnili na silikagéli E. Merck Kieselgel 60 (230 až 400 mesh). Analytická a preparatívna HPLC sa uskutočnili na chromatografoch Rainin alebo Beckman. ODS zodpovedá oktadecylsilylderivatizovanému silikagélovému chromatografickému nosiču. 5 μ Apex-ODS
-39označuje oktadecylsilyl-derivatizovaný silikagélový chromatografický nosič, ktorý má nominálnu veľkosť častíc 5 μ, vyrobený Jones Chromatography, Littleton, Colorado. YMC ODS-AQ® je ODS chromatografický nosič a je registrovanou obchodnou značkou YMC Co. Ltd., Kyoto, Japonsko. PRP-1® je polymérny (styréndivinylbenzénový) chromatografický nosič a je registrovanou obchodnou značkou Hamilton Co., Reno, Nevada. Celíte® je filtračný prostriedok zložený z kyselinou premytého diatomického kremeňa a je registrovanou obchodnou značkou Manville Corp., Denver, Colorado.
Ety l-(±)-10,11 -dihydro-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-hydroxy-5/-/-dibenzo-[a,d]cykloheptén-10-acetát a etyl-(±)10,11-dihydro-3-(trifluórmetánsulfonyloxy)-5/-/-dibenzo-[a,d]cykloheptén-10-acetát boli pripravené podľa WO 9701540-A1. 2-[2-(4-Metoxybenzylamino)pyridín-6yljetanol bol pripravený podľa WO 95/32710. 6-Metoxy-1-indanón bol pripravený podľa spôsobu Housea a Hudsona (J. Org. Chem. 1970, 35, 647).
Príprava 1
Príprava 2-[(3-hydroxy-1-propyl)amino]pyridín-/V-oxidu
a) 2-[(3-Hydroxy-1 -propyl)amino]pyridín-/\/-oxid
Zmes 2-chlórpyridín-A/-oxid-hydrochloridu (16,6 g, 0,1 mol), 3-amino-1propanolu (15,3 ml, 0,2 mol), NaHCO3(42 g, 0,5 mol), a ŕerc-amylalkoholu (100 ml) sa zahrievala pod refluxom. Po 21 hodinách sa reakčná zmes ochladila, zriedila s CH2CI2 (300 ml) a odsávaním prefiltrovala, čím sa odstránili nerozpustné materiály. Filtrát sa skoncentroval a rekoncentroval z toluénu, čím sa poskytol žltý olej. Chromatografia na silikagéli (20 % hmotnostných MeOH/CHCI3) poskytla látku z názvu tohto odstavca (15,62 g, 93 %) ako žltú tuhú látku: TLC (20 % hmotnostných MeOH/CHCI3) R, 0,48; 1H NMR (250, CDCI3) δ 8,07 (dd, J = 6,6, 1,2 Hz, 1H), 7,34 (široký t, 1H), 7,10 - 7,30 (m, 1H), 6,64 (dd, J = 8,5, 1,4 Hz, 1H), 6,40 - 6,60 (m, 1H), 4,49 (široký s, 1H), 3,65 - 3,90 (m, 2 H), 3,35 - 3,60 (m, 2 H), 1,75 - 2,00 (m, 2 H): MS (ES) M/e 169 (M+H)+.
-40Príprava 2
Príprava 2-[(3-hydroxy-1-propyl )amino]-4-nitropyridín-/V-oxidu
a) 2-Chlór-4-nitropyridín-/\/-oxid
Roztok koncentrovanej H2SO4 (30 ml) a dymivej HNO3 (54 ml) sa pridal po kvapkách pri 0 °C do roztoku hydrochloridu 2-chlórpyridín-/V-oxidu (15,2 g, 91,56 mmol) v kone. H2SO4 (30 ml). Reakčná zmes sa zahrievala pri 90 °C počas 1 hodiny, potom sa ochladila na laboratórnu teplotu a vyliala sa do ľadu (500 g). Reakčná zmes sa držala pri laboratórnej teplote počas noci, potom sa ochladila v ľadovom kúpeli, a pomaly sa pridal roztok 50 % hmotnostných NaOH, čím sa poskytla zrazenina. Táto sa oddelila a vysušila, čím sa poskytla látku z názvu tohto odstavca (5,88 g, 37 %) ako bledá žltá tuhá látka: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 8,42 - 8,37 (m, 2 H), 8,06 - 8,04 (m, 1H).
b) 2-[(3-Hydroxy-1-propyl)amino]-4-nitropyridín-/\/-oxid
Podľa postupu z Prípravy 1, s výnimkou nahradenia 2-chlór-4-nitropyridín/V-oxidu za hydrochlorid 2-chlórpyridín-A/-oxid, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako žltý prášok, nasledovala chromatografia na silikagéli (1:9 MeOH/CH2CI2). Rekryštalizácia z MeOH/CH2CI2/Et2O poskytla látku z názvu tohto odstavca: MS (ES) 214,1 (M+H)+.
Príprava 3
Príprava 2-[(3-hydroxy-1 -propyl)amino]-4-metylpyridín-/\/-oxidu
a) 2-Chlór-4-metylpyridín
Dusitan sodný (13,88 g, 200 mmol) sa pridal pomaly pri 0 °C do roztoku 2amino-4-pikolínu (15,0 g, 139 mmol) v kone. HCI (200 ml). Reakčná zmes sa nechala zahriať sa na laboratórnu teplotu a premiešavala sa počas 36 hodín, potom sa vyliala do ľadu (500 g). Hodnota pH sa nastavila na 8,0 s kone. NH4OH, a zmes sa extrahovala éterom (3 x 300 ml). Spojené éterové vrstvy sa premyli postupne s H2O (2 x 200 ml) a soľankou (200 ml). Vysušenie (MgSO4) a skoncentrovanie
-41 poskytli látku z názvu tohto odstavca (10,3 g, 58 %) ako slabo žltý olej; MS (ES) m/e 127,8 (M+H)+
b) Hydrochlorid 2-chlór-4-metylpyridín-/V-oxidu
Zmes 2-chlór-4-metylpyridín (10,0 g, 78,3 mmol) a 34 % kyselina peroctová (76,05 g, 91,0 mmol) v ľadovej AcOH (10 ml) sa zahrievala pri 70 °C počas 3 hodín. Reakčná zmes sa ochladila, pridala sa kone. HCI (35 ml) a zmes sa skoncentrovala na rotačnej odparovačke. Re kryštalizácia z n-butanolu, nasledovaná rozotretím s éterom poskytli látku z názvu tohto odstavca (7,16 g, 51 %) ako bielu tuhú látku; MS (ES) m/e 143,9 (M+H)+.
c) 2-[(3-Hydroxy-1 -propyl)amino]-4-metylpyridín-/\/-oxid
Zmes hydrochloridu 2-chlór-4-metylpyridín-A/-oxidu (7,16 g, 39 mmol), 3aminopropanolu (6,01 g. 80 mmol), a NaHCO3 (16,8 g. 200 mmol) v ŕerc-amylalkohole (50 ml) sa zahrievala pod refluxom počas 19 hodín. Reakčná zmes sa zriedila s CH2CI2 (200 mi) a prefiltrovala sa, a filtrát sa skoncentroval na rotačnej odparovačke. Rekryštalizácia z CH2CI2/Et2O poskytla látku z názvu tohto odstavca (5,41 g, 75 %) ako žltú tuhú látku; TLC (15 % hmotnostných MeOH/CH2CI2) Rf 0,44; 1H NMR (400, CDCI3) 37,92 (d, J = 6,7, 1H), 7,28 (široký t, 1H). 6,43 (s, 1H), 6,33 (dd, J = 6,6, 2,1 Hz, 1H), 3,73 (t, J = 5,7 Hz, 2H), 3,47 (q, H = 6,3 Hz, 2H), 2,29 (s, 3H), 1,82 -1,88 (m, 2H); MS (ES) m/e 183 (M+H)+.
Príprava 4
Príprava 6-(metylamino)-2-pyridyletanolu
a) 2-(ŕerc-Butoxykarbonylamino)-6-pikolín
Roztok 2-amino-6-pikolínu (21,63 g, 200 mmol) a di-ŕerc-butyldikarbonátu (52,38 g, 240 mmol) v CH2CI2 (200 ml) sa skoncentroval na rotačnej odparovačke pri 50 °C, a výsledný zvyšok sa nechal rotovať na rotačnej odparovačke pri 50 °C za vákua. Po 21,5 hodinách sa reakčná zmes zriedila s hexánmi (400 ml) a prefiltrovala sa cez silikagél (hexány nasledované zmesou 20 % hmotnostných
-42EtOAc/hexány). Skoncentrovanie zanechalo látku z názvu tohto odstavca (41,84 g, kvantitatívne) ako svetlý žltý olej, ktorý pri státí postupne tuhne: 1H NMR (250 MHz, CDCI3) δ 7,71 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,40 - 7,65 (m, 2H), 6,80 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 2,43 (s, 3H), 1,50 (s, 9H); MS (ES) m/e 153 (M+H - C4H8)+.
b) 2-[(ŕerc-Butoxykarbonyl)metylamino]-6-pikolín
NaH (60 % hmotnostných v minerálnom oleji, 3,60 g, 90 mmol) sa pridal po častiach počas viacerých minút do roztoku 2-(terc-butoxykarbonylamino)-6-pikolínu (15,62 g, 75 mmol) a jódmetán (9,3 ml, 150 mmol) v bezvodom DMSO (75 ml) pri 15 °C (kúpeľ studenej vody). Vnútorná teplota vzrástla na 35 °C. Keď sa vývoj plynu utíšil, kúpeľ studenej vody sa odstránil a reakčná zmes sa nechala premiešavať pri laboratórnej teplote. Po 0,5 hodine sa tmavo žltá zmes vyliala do zmesi ľad/H2O (300 ml) a extrahovala sa s Et2O (3 x 300 ml). Spojené organické vrstvy sa premyli postupne s H2O (2 x 75 ml) a soľankou (75 ml). Vysušenie (MgSO4) a skoncentrovanie nechali žltý olej, ktorý sa chromatografoval na silikagéii (7 % hmotnostných EtOAc/hexány). Látka z názvu tohto odstavca (13,01 g, 78 %) sa získala ako slabo žltý olej: 1H NMR (250 MHz, CDCI3) δ 7,51 (zdanlivý t. 1H), 7,37 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,86 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 3,38 (s, 3H), 2,49 (s, 3H), 1,50 (s, 9H); MS (ES) m/e 223 (M+H)+
c) Etyl-6-[(ŕerc-butoxykarbonyl)metylamino)-2-pyridylacetát
LDA bol pripravený pri 0 °C pod argónovou atmosférou z diizopropylamínu (19,5 ml, 139,14 mmol) a 2,5 mol/l n-BuLi v hexánoch (46,4 ml, 115,95 mmol) v suchom THF (350 ml). Tento roztok sa ochladil na -78 °C a po kvapkách sa počas 10 minút pridal roztok 2-[(ŕerc-butoxykarbonyl)metylamino]-6-pikolínu (10,31 g, 46,38 mmol) v suchom THF (46 ml). Ďalší suchý THF (2 ml) sa použil na prenos. Oranžový roztok sa premiešaval pri -78 °C počas 15 minút, potom sa rýchlo pridal dietylkarbonát (6,2 ml, 51,02 mmol). Červený roztok sa premiešaval pri -78 °C počas 15 minút, potom sa reakcia zastavila s napolovicu-nasýteným NH4CI (175 ml). Zmes sa zahriala na +5 °C a extrahovala sa s EtOAc (175 ml) potom s CH2CI2
-43(2 x 100 ml). Spojené organické fázy sa premyli so soľankou (100 ml), vysušili sa (MgSO4) a skoncentrovali. Temný žltý olej sa chromatografoval na silikagéli (15 % hmotnostných EtOAc/hexány), čím poskytol látku z názvu tohto odstavca (10,72 g, 79 %) ako svetlý žltý olej: 1H NMR (250 MHz, CDCI3) δ 7,51 - 7,63 (m, 2H), 6,91 7,03 (m, 1H), 4,19 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,77 (s, 2H), 3,38 (s, 3H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H) 1,51 (s, 9H); MS (ES) m/e 295 (M+Hf
d) Etyl-6-(metylamino)-2-pyridylacetát
Roztok etyl-6-[(ŕerc-butoxykarbonyl)metylamino)-2-pyridylacetátu (10,72 g, 36,42 mmol) v bezvodom dioxáne (91 ml) sa ochladil na bod čiastočnej kryštalizácie rozpúšťadla, a pridal sa roztok 4 mol/l HCI/dioxán (91 ml, 364,2 mmol). Roztok sa zahrial na laboratórnu teplotu a premiešaval sa počas 17 hodín potom sa skoncentroval. Výsledná svetlo žltá tuhá látka sa upravila na kašu so zmesou CH2CI2/toluén a rekoncentrovala sa, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (8,48 g, kvantitatívne) ako svetlý žltý prášok; 1H NMR (250 MHz, CD3OD) δ 7,84 (dd, J = 9,0, 7,2 Hz, 1 H), 6,96 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 7,2 Hz, 1H). 4,22 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,93 (s, 2H), 3,05 (s, 3H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H); MS (ES) m/e 195 (M+H)+.
e) 6-(Metylamino)-2-pyridyletanol
Roztok 1,0 mol/l LiAIH4vTHF (95 ml, 95 mmol) sa pridal po kvapkách do mechanicky premiešavanej suspenzie etyl-6-(metylamino)-2-pyridylacetát (7,34 g 31,82 mmol) v suchom THF (64 ml) pri 0 °C pod argónovou atmosférou. Prídavok sa urobil pomaly, kým sa neutíšil vývoj plynu, potom sa zostávajúci roztok pridal rýchlo. Pridávanie vyžadovalo 5 až 7 minút. Reakčná zmes sa zahriala na laboratórnu teplotu a premiešavala sa počas 45 minút, potom sa zahrievala pod refluxom. Po 10 minútach sa reakčná zmes ochladila na 0 °C a spracovala sa postupne po kvapkách pridávaním H2O (3,6 ml), 15 % hmotnostných NaOH (3,6 ml) a H2O (10,8 ml). Zmes sa premiešavala počas 15 minút pri 0 °C a 15 minút pri laboratórnej teplote, potom sa prefiltrovaia cez Buchnerov lievik. Vrstva na filtri sa
-44premyla s veľkým množstvom THF a filtrát sa skoncentroval. Zvyšok sa rekoncentroval z toluénu, potom sa chromatografoval na silikagéli (5 % hmotnostných MeOH v zmesi 1:1 EtOAc/CHCI3), čím poskytol látku z názvu tohto odstavca (3,23 g, 67 %) ako žltý olej, ktorý tuhne na voskovitú tuhú látku; 1H NMR (250 MHz, CDCI3) δ 7,36 (dd, J = 8,3, 7,3 Hz, 1H), 6,42 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 6,26 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,93 - 5,28 (m, 1H), 4,38 - 4,60 (m, 1H), 3,96 (t, J = 5,4 Hz, 2H),
2,90 (d, J = 5,2 Hz, 3H), 2,84 (t, J = 5,4 Hz, 2H); MS (ES) m/e 153 (M+H)+
Príprava 5
Príprava 2-(etylamino)-4-tiazoletanolu
a) Etyl-2-acetylamino-4-tiazolacetát
Etyl-2-amino-4-tiazolacetát (3,72 g, 20 mmol) sa rozpustil v kyseline octovej (4 ml) a anhydrid kyseliny octovej (4 ml), a výsledná suspenzia sa zahrievala pod refluxom počas 3 hodín. Skoncentrovanie a rýchla chromatografia na silikagéli (5 % hmotnostných MeOH/CH2H2) poskytli látku z názvu tohto odstavca (4,1 g, 91 %) ako bielu tuhú látku: MS (ES) m/e 229 (M+H)+.
b) 2-(Etylamino)-4-tiazoletanol
Do premiešavaného roztoku 1,0 mol/l LiAIH4vTHF (179 ml, 179 mmol) sa pridal po kvapkách roztok etyl-2-acetylamino-4-tiazolacetátu (4,4 g, 17,9 mmol) v THF (50 ml). Po úplnom pridaní sa reakčná zmes zahrievala pod refluxom počas 3 hodín, potom sa spracovala postupným pridávaním H2O (0,7 ml), 10 % hmotnostných NaOH (0,7 ml), a H2O (2,1 ml). Výsledná zmes sa prefiltrovala cez Celíte® a filtrát sa skoncentroval. Čistenie pomocou rýchlej chromatografie na silikagéli (5 % hmotnostných MeOH/CH2H2) poskytla látku z názvu tohto odstavca (1,6 g 53 %) ako jantárový olej: MS (ES) m/e 173 (M+H)+.
Príprava 6
Príprava 6-amino-2-pyridyletanolu
-45a) 6-Amino-2-pyridyletanol
Roztok 2-[2-(4-metoxybenzylamino)pyridín-6-yl]etanol (0,95 g, 3,7 mmol), pripravený podľa postupu z WO 95/32710, v 6 mol/l HCl sa zahrievala pri 60 °C. Po 16 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala za vákua a zvyšok sa upravil na alkalickú reakciu so suchým KOH. Výsledná zmes sa extrahovala s MeOH a MeOH extrakty sa vysušili (MgSO4) a skoncentrovali. Rýchla chromatografia na silikagéli (5 % hmotnostných MeOH/CH2H2) poskytla látku z názvu tohto odstavca (0,2 g, 40 %) ako bledý žltý olej: MS (ES) m/e 139 (M+H)+
Príprava 7
Príprava 3-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)-1 -propanolu
a) 3-(4-Nitrobenzyloxykarbonyl)amino-1 -propanol
Do suspenzie premiešavanej pod argónovou atmosférou pri laboratórnej teplote 4-nitrobenzylchlórmravčanu (5 g, 23 mmol) a trietylamínu (6,4 ml, 46 mmol) v THF (25 ml) sa pridal 3-amino-1 -propanol (1,9 ml, 26 mmol). Výsledná zmes sa premiešavala počas 72 hodín, potom sa skoncentrovala. Zvyšok sa čistil pomocou chromatografie na silikagéli (0,5 - 2 % hmotnostné MeOH/CH2CI2), čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (2 g, 34 %) ako bledý žltý olej; MS (ES) 255,3 (M+H)+.
Príprava 8
Príprava 1 -[(3-hydroxy-1 -propyl)amino]izochinolín-/\/-oxidu
a) l-Chlórizochinolín-N-oxid
1-Aminoizochinolín-/V-oxid hydrochlorid (Deady, L. W. Synthetic Communications 1977, 509 - 514) sa konvertoval na 1-chlórizochinolín-/\/-oxid použitím dusitanu draselného a koncentrovanej HCl podľa všeobecného spôsobu opísaného v literatúre (Brown. F.V. J. Amer. Chem. Soc. 1957, 79, 3565 - 3566). Látka z názvu tohto odstavca bola pripravená ako svetlá hnedá tuhá látka; MS (ES) m/e 179,9 (M+H)+.
-46b) 1-[(3-Hydroxy-1-propyl)amino]-izochinolín-A/-oxid
Podľa postupu z Prípravy 1 (a), s výnimkou nahradenia 1-chlórizochinolín-/\/oxidu za 2-chlórpyridín-A/-oxid hydrochlorid, bola pripravená látka z názvu tohto odstavca ako jantárová tuhá látka; MS (ES) m/e 219,1 (M+H)+.
Príprava 9
Príprava 2-[A/-(3-metánsulfonyloxy-1-propyl)-A/-(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]pyridín/V-oxidu
a) 2-[/V-(3-Hydroxy-1-propyl)-/V-(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]pyridín-/\/-oxid
Roztok 2-[(3-hydroxy-1-propyl)amino-pyridín-/\/-oxidu (8,0 g, 47,6 mmol) v ŕerc-BuOH (80 ml) sa opracoval s di-ŕerc-butyldikarbonátom (11,4 g, 55,3 mmol). Po 18 hodinách sa roztok skoncentroval a zvyšok sa rozotrel s hexánom. Výsledná tuhá látka sa vysušila za vákua, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (12,5 g, 98 %) ako špinavobiela tuhá látka: MS (ES) m/e 269,3 (M+H)+.
b) 2-[A/-(3-Metánsulfonyloxy-1-propyl)-/V-(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]pyridín-/V-oxid
Metánsulfonyichlorid (0,17 ml, 2,20 mmol) sa pridal po kvapkách do roztoku
2-(/V-(3-hydroxy-1-propyl)-/\/-(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]pyridín-/\/-oxidu (0,50 g, 1,86 mmol) a pyridínu (0,23 ml, 2,84 mmol) v CHCI3(5 ml, vysušeného nad K2CO3) pri 0 °C. Keď bola reakcia podľa TLC úplná, reakčná zmes sa zriedila s CHCI3, premyla sa s ľadovou vodou, vysušila (Na2SO4), a skoncentrovala sa. Chromatografia na silikagéli (10 % hmotnostných MeOH/CHCI3) poskytla látku z názvu tohto odstavca (0,41 g, 64 %) ako bezfarebný olej: 1H NMR (250 MHz, CDCI3) δ 8,25 (dd, J = 6,0, 1,9 Hz, 1H), 7,25 (m, 4 H), 4,35 (t, J = 6,2 Hz, 2H), 3,75 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 3,00 (s, 3H), 2,00 (m, 2H), 1,40 (s, 9H). Nezmenený 2-[Λ/-(3hydroxy-1-propyl)-/V-(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]pyridín-/V-oxid (0,18 g, 36 %) sa tiež mohol získať pomocou chromatografického čistenia.
-47Príprava 10
Príprava etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu
a) 6-Metoxy-1-fenylindén
Roztok 3,0 mol/l fenyl-magnéziumbromidu v Et2O (680 ml, 2,04 mol) pod argónovou atmosférou pri okolitej teplote sa zriedila s Et2O (700 ml) za premiešavania, a po kvapkách sa pridal počas 1 hodiny roztok 6-metoxy-1indanónu (277 g, 1,71 mol) v THF (1400 ml). Reakčná zmes sa premiešavala počas 2 hodín pri teplote okolia a potom sa vyliala za premiešavania do nasýteného NH4CI (2,8 I). Pridala sa H2O (1,4 I) a organická fáza sa oddelila. Vodná fáza sa extrahovala s Et2O (2x1 I), a spojené organické extrakty sa skoncentrovali, čím sa poskytne surový 6-metoxy-1-fenyl-1-indanol (445 g) ako hnedý olej. Tento olej sa rozpustil v toluéne (2,5 I), a pridala sa kyselina p-toluénsulfónová, monohydrát (12,3 g, 0,065 mol). Roztok sa premiešaval a zahrieval pod refluxom počas 16 hodín použitím Dean-Starkovho uzáveru s kondenzátorom. Zachytenie H2O bolo minimálne po 2 hodinách a bolo celkovo 28 ml. Roztok sa ochladil a extrahoval sa postupne s vodným roztokom 5 % hmotnostných Na2CO3 (1 I) a H2O (2x1 I). Organická vrstva sa skoncentrovala, čím sa poskytol tmavý hnedý olej (400 g). Tento olej sa destiloval za vákua, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (298,2 g 79 %) ako žltý olej: t.v. 152 - 190 °C/0,267 kPa (2,0 Torr); TLC (10 % hmotnostných EtOAc/hexány) Rf 0,75.
b) Kyselina 2-benzoyl-4-metoxyfenyloctová
Acetón (4,2 I) sa ochladil na 10 °C, a počas 1,5 hodiny sa pridal roztok 6metoxy-1-fenylindénu (271 g, 1,22 mol) v acetóne (1,8 I) súčasne s Jonesovým činidlom (1,8 I, pripravené z CrO3(470 g, 4,70 mol), H2O (1 I) a kone. H2SO4(405 ml)). Do výslednej zmesi sa pridal 4 % vodný roztok OsO4 (153 ml) v dvoch podieloch, jeden pri nábehu pridávania a druhý uprostred pridávania, za udržiavania teploty reakčnej zmesi pod 15 °C. Po pridávaní sa reakčná zmes zahriala na 22 °C a premiešavala sa počas 1,5 hodiny, počas tohto času mierna exotermia zvýšila teplotu na 28 °C. Reakčná zmes sa potom ochladila pod 20 °C a
-48pridal sa izopropanol (1 I), po kvapkách počiatočné a rýchlo potom ako sa počiatočný exotermický efekt zmenšil. V tejto fáze sa premiešavanie stalo ťažkým. Počas pridávania izopropanolu teplota dosiahla 32 °C. Pridala sa H2O (2 I) a zmes sa preniesla do oddeľovacieho lievika. Pridala sa ďalšia H2O, čím sa rozpustila vyzrážaná kyselina chrómová, a zmes sa extrahovala s CH2CI2 (2 I). Organická (horná) vrstva sa oddelila a vodná fáza sa extrahovala s CH2CI2 (2x1 I). Spojené CH2CI2 extrakty sa premyli postupne s H2O (2 I) a nasýtenou soľankou (2 I), a potom sa skoncentrovali, čím sa poskytla vlhká sivá tuhá látka (416 g). Táto sa rozotrela so zmesou acetónu a EtOAc a prefiltrovala sa a vysušila, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (225,4 g, 71 %) ako špinavobiela tuhá látka: t.t. 158 až 159 °C.
c) Kyselina 2-benzyl-4-metoxyfenyloctová
Kyselina 2-benzoyl-4-metoxyfenyloctová (215,5 g, 0,80 mol) sa rozdelila na dva rovnaké podiely a každý sa rozpustil v ľadovej AcOH (1,5 I) v 2,5 I tlakovej fľaši. Do každého podielu sa pridal 5 % Pd/C (10 g, 0,0048 mol), a zmesi sa pretrepávali pri teplote okolia pod vodíkovou atmosférou v Parrovom prístroji. Po 2,5 hodinách sa zmesi prefiltrovali, čím sa odstránil katalyzátor a vrstva na filtroch sa premyla s EtOAc. Spojené filtráty sa skoncentrovali, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (215 g, kvantitatívne) ako ťažký žltý olej, ktorý kryštalizoval pri státí: 1H NMR (250 MHz. CDCI3) δ 7,05 - 7,35 (m, 6 H), 6,77 (dd, J = 8,3, 2,7 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,00 (5, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,54 (s, 2H).
d) 10,11 -Dihydro-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-ón
Roztok kyseliny 2-benzyl-4-metoxyfenyloctovej (215 g surového materiálu, ktorý obsahoval 204,6 g (0,80 mol) čistého materiálu) v CH2CI2 (1 I) sa premiešaval pod argónovou atmosférou pri teplote okolia, pridal sa DMF (1 ml), nasledoval oxalylchlorid (400 ml, 4,59 mol). Oxalylchlorid sa pridal počas 1 hodiny spočiatku po kvapkách, čím sa riadil prudký vývoj plynu. Roztok sa premiešaval počas 16 hodín pri teplote okolia a potom sa skoncentroval, čím sa poskytol surový chlorid kyseliny (207,7 g, 0,756 mol, 95 %) ako žltá kvapalina. Táto kvapalina sa rozpustila v CH2CI2 na celkový objem 500 ml, a súbežne sa počas 1 hodiny pridal roztok AICI3 (100,8 g,
-490,756 mol) do CH2CI2 (3,7 I) za premiešavania pod argónovou atmosférou pri teplote okolia. Pri dokončení pridávania bola teplota 28 °C. Reakčná zmes sa premiešavala počas 16 hodín pri teplote okolia, počas tejto doby sa vyzrážala tuhá látka. Pridala sa H2O (1 I), počiatočné po kvapkách, počas doby 30 minút. Zmes sa potom oddelila a organická fáza sa premyla postupne s H2O (1 I) a 5 % vodným roztokom NaHCO3(1 I). CH2CI2 roztok sa potom skoncentroval, čím sa poskytla žltá tuhá látka (175,3 g). Rekryštaiizácia zo zmesi EtOAc/hexán poskytla látku z názvu tohto odstavca (128 g, 71 %): t.t. 107 až 109 °C.
e) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-10-hydroxy-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10acetát
1,0 mol/l roztok bis(trimetylsilyl)amidu lítneho v hexánoch (1282 ml, 1,282 mol) sa pridal do THF (4,0 I) pri -70 °C pod argónovou atmosférou, potom sa pridal po kvapkách počas 20 minút EtOAc (146 ml, 1,49 mol). Reakčná zmes sa nechala premiešavať počas 15 minút, potom sa pridal počas 20 minút Ν,Ν,Ν',Ν'tetrametyletyléndiamín (378 ml, 2,5 mol). Reakčná zmes sa premiešavala počas 10 minút, potom sa pridal po kvapkách počas 40 minút roztok 10,11-dihydo-3-metoxy5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-ónu (119,2 g, 0,50 mol) v bezvodom THF (1,26 I). Teplota sa udržiavala pod -65 °C počas všetkých týchto pridávaní. Reakčná zmes sa premiešavala počas 20 minút pri -65 až -70 °C a potom sa vyliala do nasýteného vodného roztoku NH4CI (6,2 I) za prudkého premiešavania. Organická vrstva sa oddelila a vodná fáza sa extrahovala s EtOAc (2x1 I). Spojené organické extrakty sa premyli s H2O (2 x I I) a potom sa skoncentrovali, čím sa poskytol svetlý hnedý olej (175 g). Tenkovrstvová chromatografia (20 % hmotnostných EtOAc/hexány) ukázala Rf 0,5 hlavný (požadovaný produkt) a R, 0,7 minoritná zložka (spätne získaný ketón). Surový produkt sa chromatografoval na silikagéli (2 kg, 10 % hmotnostných EtOAc/hexány), čím poskytol látku z názvu tohto odstavca (101 g, 61 %) ako žltý olej: 1H NMR (250 MHz, CDCI3) δ 7,63 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,00 - 7,30 (m, 4H), 6,80 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,69 (dd, J = 8,2, 2,6 Hz, 1H), 3,95 - 4,35 (m, 2H), 4,07 (s, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,68 (s, 1H), 3,64 (d, J = 14,2 Hz, 1H), 3,35 (d, J = 14,2
-50Ηζ, 1 Η), 2,79 (d, J = 16,0 Hz, 1H). 2,66 (d, J = 16,0 Hz, 1H). 1,22(t, J = 7,2 Hz, 3H).
f) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Etyl-(±)-10,11-dihydro-10-hydroxy-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén10-acetát (101 g, 0,31 mol) sa rozpustil v ľadovej kyseline octovej (1,8 I) a pridala sa 12 mol/l HCI (28,5 ml, 0,34 mol). Zmes sa umiestnila v 2,5 I tlakovej banke obsahujúcej 5 % Pd/C (20 g, 0,0094 mol), a výsledná zmes sa trepala pri 35 °C pod vodíkovou atmosférou v Parrovom hydrogenačnom prístroji vybavenom s plášťovým vyhrievaním. Po 18 hodinách sa reakčná zmes ochladila na teplotu okolia, a katalyzátor sa odstránil pomocou filtrácie. Filtrát sa skoncentroval, čím sa poskytol svetlý žltý olej (85,1 g). Tento sa chromatografoval na silikagéli (2 kg, krokovýgradient so zmesou 5 % až 10 % hmotnostných EtOAc/hexány), čím poskytol látku z názvu tohto odstavca (69,1 g, 72 %) ako olej: 1H NMR (250 MHz, CDCI3) δ 7,05 7,22 (m, 4H), 7,01 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,67 (dd, J = 8,2, 2,7 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 15,0 Hz, 1H). 4,11 - 4,25 (m, 2H), 3,85 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 3,70 - 3,90 (m, 1H). 3,77 (s. 3H), 3,31 (dd, J = 15,0, 4,1 Hz, 1 H), 2,93 (dd, J = 15,0,
9,2 Hz, 1H), 2,64 (dd, J = 15,6, 5,0 Hz, 1H), 2,52 (dd, J = 15,6, 9,3 Hz, 1H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H).
g) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-hydroxy-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Roztok etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10acetátu (8,5 g. 0,027 mol) v CH2CI2(150 ml) sa ochladil na -10 °C za premiešavania pod argónovou atmosférou. Pridal sa etántiol (10,7 ml, 0,144 mol), nasledovaný s AICI3(20,6 g, 0,154 mol) v dvoch podieloch počas 15 minút. Po týchto pridávaniach exotermická reakcia zvýšila teplotu na 0 °C a teplota sa potom zvýšila na 25 °C použitím vodného kúpeľa. Reakčná zmes sa premiešavala pri 25 až 30 °C počas
2,25 hodiny, keď sa vyliala do zmesi ľad-H2O. Organická vrstva sa oddelila, pridal sa metanol (100 ml) a zmes sa extrahovala s CH2CI2 (2 x 50 ml). Spojené CH2CI2 extrakty sa premyli s H2O (250 ml) a potom sa skoncentrovali, čím sa poskytol viskózny olej (8,6 g). Tento sa rozpustil v Et2O (150 ml) a éter sa odstránil varením
-51 pričom sa nahrádzal hexánom. Požadovaný fenol sa oddelil najprv ako olej, ktorý kryštalizoval za premiešavania pri teplote okolia. Odobrali sa dva výťažky tuhej látky, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (7,1 g, 89 %): t.t. 110 až 112°C.
Príprava 11
HPLC separácia enantiomérov etyl-(±)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu
a) Etyl-(/?)-(+)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát a etyl-(S)-(-)-10,11 -dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát sa rozdelil na svoje enantioméry použitím nasledujúcich podmienok: Daicel Chiralcel OJ® kolóna (21,2 x 250 minút), 20 % hmotnostných etanol v hexánovej mobilnej fáza, 15 ml/min rýchlosť prietoku, uv detekcia pri 254 nm, 140 mg injektované; tR pre etyl-(S)-(-)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohexén-10-acetát =
10,4 minúty.; tR pre etyl (/?)-(+)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohexén-10-acetát = 13,1 minút.
Príprava 12
Príprava etyl-(±)-10,11-dihydro-7-fluór-3-hydroxy-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10acetátu
a) 1 -(3-[Fluórfenyl)-6-metoxy-1 -indanol
Podľa postupu z Prípravy 10(a), s výnimkou nahradenia 3-[fluórofenylmagnéziumbromidu za fenylmagnéziumbromid sa získala látka z názvu tohto odstavca ako jantárový olej: MS (ES) m/e 276,0 (M+H)+.
b) 1 -(3-[Fluórfenyl)-6-metoxyindén
Podľa postupu z Prípravy 10(a), s výnimkou nahradenia 1-(3-[fluórofenyl)-6metoxy-1-indanolu za 6-metoxy-1-fenyl-1 -indanol, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako bezfarebný olej, nasledovala chromatografia na silikagéli (4 %
-52hmotnostné EtOAc/hexány): MS (ES) m/e 241,1 (M+H)+.
c) Kyselina 2-(3-[fluórbenzoyl)-4-metoxyfenyloctová
Podľa postupu z Prípravy 10(b), s výnimkou nahradenia 2-(3-[fluórofenyl)-6metoxyindénu za 6-metoxy-1-fenylindén, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako biela tuhá látka; MS (ES) m/e 289,2 (M+H)+.
d) Kyselina 2-(3-[fluórbenzyl)-4-metoxyfenyloctová
Podľa postupu z Prípravy 10(c), s výnimkou nahradenia kyseliny 2-(3[fluórbenzoyl)-4-metoxyfenyloctovej za kyselinu 2-benzoyl-4-metoxyfenyloctovú, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako bezfarebný olej; MS (ES-) m/e 273,2 (ΜΗ)·.
e) 10,11 -Dihydro-7-fluór-3-metoxy-5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-ón
Podľa postupu z Prípravy 10(d), s výnimkou nahradenia kyseliny 2-(3[fluórobenzyl)-4-metoxyfenyloctovej za kyselinu 2-benzyl-4-metoxyfenyloctovú, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako biela tuhá látka; t.t. 129 až 130 °C; MS (ES) m/e 279,2 (M+Na)+.
f) Etyl-(±)-10,11-dihydro-7-fluór-10-hydroxy-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén10-acetát
Podľa postupu z Prípravy 10(e), s výnimkou nahradenia 10,11-dihydro-7fluór-3-metoxy-5W-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-ónu za 10,11-dihydro-3-metoxy-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-ón, sa získala látka z názvu tohto odstavca po chromatografii na silikagéli (8 % hmotnostných EtOAc/hexány): MS (ES) m/e 362,2 (M+NH4)+.
g) Etyl-(±)-10,11-dihydro-7-fluór-3-metoxy-5/7-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Prípravy 10(f), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-7-fluór-10-hydroxy-3-metoxy-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu za ety l-(±)-10,11 -dihydro-10-hydroxy-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát,
-53sa získala látka z názvu tohto odstavca ako bezfarebný olej po silikagélovej chromatografií (10 % hmotnostných EtOAc/hexány): MS (ES) m/e 329,2 (M+H)+.
h) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-7-fluór-3-hydroxy-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Prípravy 10 (g), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-7-fluór-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu za etyl-(±)-10,11dihydro-3-metoxy-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako biela tuhá látka po chromatografií na silikagéli (1 % hmotnostné MeOH/CH2CI2): MS (ES) m/e 315,0 (M+H)+, 332,0 (M+NHJ+.
Príprava 13
Príprava etyl-(±)-10,11-dihydro-2-(dimetylamino)metyl-7-fluór-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu
a) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-2-(dimetylamino)metyl-7-fluór-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Do roztoku etyl-(±)-10,11-dihydro-7-fluór-3-hydroxy-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu (0,4 g, 1,33 mmol) v 95 % etanole obsahujúcom 2 mol/l dimetylamínu v MeOH (1,0 ml) sa pridal vodný roztok 37 % hmotnostných formaldehydu (0,5 ml) pri laboratórnej teplote pod argónovou atmosférou. Po 20 hodinách sa reakčná zmes zahrievala pod refluxom počas 5 hodín, potom sa skoncentrovala na rotačnej odparovačke. Zvyšok sa rozdelil medzi H2O a Et2O a vrstvy sa oddelili. Vodná vrstva sa extrahovala s Et2O a spojené organické vrstvy sa premyli so soľankou, vysušili sa (MgSO4) a skoncentrovali na rotačnej odparovačke, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (330 mg, 67 %) ako bezfarebný olej: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,20 (m, 1H), 6,88 (m, 2H), 6,67 (s, 2H), 4,25 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 4,18 (q, 2H), 3,78 (m, 1H), 3,74 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 3,55 (s, 2H), 3,20 (dd, 1H), 2,80 (dd, 1H). 2,60 (dd, 1H), 2,53 (dd, 1H), 2,29 (s, 6H), 1,27 (t, 3H); MS(ES) m/e 372,3 (M+H)+.
-54Príprava 14
Príprava etyl-(±)-10,11-dihydro-3-hydroxy-2-metyl-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10acetátu
a) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-2-formyl-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
POCI3 (17 ml) sa pridal po kvapkách do roztoku etyl-(±)-10,11-dihydro-3metoxy-5W-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu (1,0 g, 3 mmol) v suchom DMF (40 ml) pri laboratórnej teplote pod argónovou atmosférou, a tmavý roztok sa zahrieval pri 90 °C počas 48 hodín. Reakčná zmes sa skoncentrovala na rotačnej odparovačke a zvyšok sa rozdelil medzi H2O a EtOAc. Organická vrstva sa oddelila, vysušila (MgSOJ a skoncentrovala na rotačnej odparovačke. Zvyšok sa rekoncentroval z xylénov (na odstránenie zostávajúceho DMF), potom sa chromatografoval na silikagéli (7 % hmotnostných EtOAc v hexány), čím poskytol látku z názvu tohto odstavca (230 mg, 21 %) ako bezfarebný olej: MS (ES) m/e 339,3 (M+H)+.
b) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-metoxy-2-metyl-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
Zmes ety l-(±)-10,11 -dihydro-2-formyl-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu (220 mg, 0,65 mmol), 10 % Pd/C (90 mg), ľadovej HOAc (15 ml), a koncentrovanej HCI (2 ml) sa trepala pri laboratórnej teplote pod vodíkovou atmosférou (414 kPa (60 psi)). Po 20 hodinách sa zmes prefiltrovala cez Celíte®, a filtrát sa skoncentroval, čím poskytla látku z názvu tohto odstavca (200 mg, 95 %) ako bezfarebný olej: MS (ES) m/e 325,2 (M+H)+.
c) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-hydroxy-2-metyl-5/7-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
Do suchého CH2CI2 (30 ml) ochladeného v ľadovom kúpeli sa pridal dietylsulfid (0,38 ml, 3,3 mmol), nasledoval AICI3 (438 mg, 3,3 mmol). Do tohto roztoku sa pridal po kvapkách roztok etyl-(±)-10,11-dihydro-3-metoxy-2-metyl-5/-/dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát (200 mg, 0,6 mmol) v suchom CH2CI2 (6 ml) a výsledná zmes sa premiešavala pri laboratórnej teplote počas 2 hodín. Reakcia sa zastavila s 1,0 mol/l HCI (10 ml) a vrstvy sa oddelili. Organická vrstva sa vysušila
-55(MgSO„) a skoncentrovala na rotačnej odparovačke, čím poskytla látku z názvu tohto odstavca (100 mg, 56 %) ako bezfarebný olej: MS (ES) m/e 311,2 (M+H)+.
Príprava 15
Príprava etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-hydroxy-6-metyl-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10acetátu
a) 6-Metoxy-1 -(2-metylfenyl)-1 -indanol
Podľa postupu z Prípravy 10(a), s výnimkou nahradenia 2-metylfenylmagnéziumbromidu za fenylmagnéziumbromid, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako olej: MS (ES) m/e 277,0 (M+Na)+.
b) 6-Metoxy-1-(2-metylfenyl)indén
Podľa postupu z Prípravy 10(a), s výnimkou nahradenia 6-metoxy-1-(2metylfenyl)-1-indanol za 6-metoxy-1-fenyl-1 -indanol, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako bezfarebný olej po chromatografii na silikagéii (3 % hmotnostné EtOAc/hexány): MS (ES) m/e 237,2 (M+H)+.
c) Kyselina 4-metoxy-2-(2-metylbenzoyl)fenyloctová
Podľa postupu z Prípravy 10(b), s výnimkou nahradenia 6-metoxy-1-(2metylfenyl)indénu za 6-metoxy-1-fenylindén, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako viskózny olej; MS (ES) m/e 285,3 (M+NH4)+.
d) Kyselina 4-metoxy-2-(2-metylbenzyl)fenyloctová
Podľa postupu z Prípravy 10(a), s výnimkou nahradenia kyseliny 4-metoxy2-(2-metylbenzoyl)fenyloctovej za kyselinu 2-benzoyl-4-metoxyfenyloctovú, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako viskózny olej: MS (ES) m/e 288,2 (M+NH4)+.
e) 10,11 -Dihydro-3-metoxy-6-metyl-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-ón
Podľa postupu z Prípravy 10(d), s výnimkou nahradenia kyseliny 4-metoxy-562-(2-metylbenzyl)fenyloctovej za kyselinu 2-benzyl-4-metoxyfenyloctovú, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako biela tuhá látka po chromatografii na silikagéli (6 % hmotnostných EtOAc/hexány): MS (ES) m/e 253,0 (M+H)+.
f) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-10-hydroxy-3-metoxy-6-metyl-5B-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Prípravy 10(e), s výnimkou nahradenia 10,11-dihydro-3metoxy-6-metyl-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-ónu za 10,11-dihydro-3-metoxy5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-ón, sa získala látka z názvu tohto odstavca po chromatografii na silikagéli (8 % hmotnostných EtOAc/hexány): MS (ES) m/e 358,2 (M+NH4)+.
g) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-metoxy-6-metyl-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Prípravy 10(f), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-10-hydroxy-3-metoxy-6-metyl-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu za ety l-(±)-10,11 -dihydro-10-hydroxy-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako bezfarebný olej po chromatografii na silikagéli (5 % hmotnostných EtOAc/hexány); MS (ES) m/e 325,3 (M+Hf.
h) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-hydroxy-6-metyl-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Prípravy 10(g), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-3-metoxy-6-metyl-5H-díbenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu za ety l-(±)10,11-dihydro-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]-cykIoheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako biela tuhá látka po rozotretí s MeOH: MS (ES) m/e 311,2 (M+H)+.
Príprava 16
Príprava etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-nitro-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxyj5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu
-57a) Etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-nitro-1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
Roztok 2-[(3-hydroxy-1-propyl)aminoJ-4-nitropyridín-/V-oxidu (0,85 g, 4 mmol) a dietylazodikarboxylátu (0,63 ml, 4 mmol) v bezvodom DMF (10 ml) sa pridal po kvapkách do roztoku etyl-(±)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát (0,59 g, 2 mmol) a trifenylfosfínu (1,10 g, 4,2 mmol) v bezvodom DMF (10 ml) pri laboratórnej teplote pod argónovou atmosférou. Po 23 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala a zvyšok sa rekoncentroval z xylénov (2 x). Chromatografia na silikagéli (gradient: 1:1 EtOAc/hexány, potom EtOAc, potom 5 % hmotnostných MeOH v 1:1 EtOAc/CHCI3) poskytla surovú látku z názvu tohto odstavca. Nezmenený (±)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10acetát sa získal späť z frakcií 1:1 EtOAc/hexány. Opätovná chromatografia surovej látky z názvu tohto odstavca (3% hmotnostných MeOH v 1:1 EtOAc/CHCI3) poskytla čistú látku z názvu tohto odstavca (0,72 g, 73 %) ako žltú penu: TLC (10 % hmotnostných MeOH v 1:1 EtOAc/CHCI3) Rf 0,59; 1H NMR (250 MHz, CDCI3) δ 8,19 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 7,35 (dd, J = 7,1, 2,9 Hz, 1H), 7,00 7,30 (m, 5H), 7,00 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 6,81 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,70 (dd, J = 8,2, 2,6 Hz, 1H), 4,29 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 4,18 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,08 (t, J = 5,5 Hz, 2H), 3,86 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 3,72 - 3,90 (m, 1H), 3,59 (q, J = 6,3 Hz, 2H), 3,30 (dd, J = 15,0, 4,2 Hz, 1H), 2,93 (dd, J = 15,0, 9,3 Hz, 1H), 2,64 (dd, J = 15,6, 5,1 Hz, 1H), 2,51 (dd, J = 15,6, 9,3 Hz. 1H), 2,10 - 2,30 (m, 2H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H); MS (ES) m/e 492 (M+H)\
Príprava 17
Príprava etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-nitro-1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu
a) Etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-nitro-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Prípravy 16, s výnimkou nahradenia etyl-(S)-10,11-di-58hydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu za etyl-(±)-10,11 -dihydro3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát, bola pripravená látka z názvu tohto odstavca: MS (ES) m/e 492 (M+H)+.
Príprava 18
Príprava 10,11 -dihydro-3-metoxy-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-ónu
a) Kyselina 2-benzyl-4-metoxyfenyloctová
Roztok kyseliny 2-benzoyl-4-metoxyfenyloctovej (13,0 g, 0,048 mol), pripravený podľa spôsobu J. Med. Chem. 1981, 24, 998, v ľadovej kyseline octovej (600 ml) sa opracoval pod argónovou atmosférou s 4,3 g 10 % Pd/C a hydrogenoval sa pri 345 kPa (50 psi) počas 17 hodín. Zmes sa prefiltrovala použitím Celíte® a filtrát sa skoncentroval a rekoncentroval z toluénu a dichlórmetánu, čím sa poskytne
14,2 g látky z názvu tohto odstavca: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 3,52 (s, 2H), 3,75 (s, 3H), 4,0 (s, 3H). 6,7 (m, 2H), 7,15 (m, 6H).
b) 10,11-dihydro-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-ón
Roztok kyseliny 2-benzyl-4-metoxyfenyloctovej (14,2 g, 0,055 mol) v benzéne (120 ml) a tionylchloride (28 ml) sa refluxoval počas 1 hodiny a skoncentroval sa. Chlorid kyseliny sa rozpustil v suchom dichlórmetane (40 ml) a roztok sa pridal po kvapkách pod argónovou atmosférou do roztoku AICI3 (14,7 g, 0,11 mol) v dichlórmetáne (600 ml). Reakčná zmes sa premiešavala pod argónovou atmosférou počas 2,5 hodín pri laboratórnej teplote, potom sa reakcia zastavila so zmesou ľadvoda (200 ml). Vrstvy sa oddelili a organická fáza sa premyla postupne s roztokom 10 % hmotnostných NaOH, vodou a zriedenou HCI. Výsledný roztok sa zriedil s éterom (200 ml), vysušil sa nad MgSO4 a skoncentroval sa. Tuhý zvyšok sa rozotrel so zmesou éter/hexán (1:1) a 9,35 g látky z názvu tohto odstavca sa oddelilo pomocou filtrácie: t.t. 105 až 106 °C; 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 3,72 (s, 3H), 4,1 (s, 2H), 4,2 (s, 2H), 6,7 (d, 1H), 6,82 (s, 1H), 7,30 (m, 4H), 8,1 (d, 1H).
-59Príprava 19
Príprava etyl-(±)-10,11-dihydro-3-metoxy-5W-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu
a) Etyl-(±)-3-(3-metoxyfenyl)indénacetát
Do studeného roztoku 3-(3-metoxyfenyl)indénu (4 g, 18 mmol), pripravený podľa spôsobu J. Med. Chem. 1981, 24, 998, v THF (15 ml) pri 0 °C sa pridal po kvapkách roztok LiN(TMS)z (20 ml, 1 mol/l v THF) počas 5 minút. Výsledný roztok sa pridal po kvapkách do roztoku etylbrómacetátu (3,34 g, 20 mmol) v THF (15 ml) pri -78 °C počas 30 minút. Po 2,5 hodine sa reakcia zmesi zastavila s nasýteným roztokom chloridu amónneho a vrstvy sa oddelili. Organická vrstva sa vysušila nad MgSO4 a skoncentrovala sa, čím sa poskytol surový produkt, ktorý sa čistil pomocou kolónovej chromatografie (SiO2/2 až 4 % hmotnostné EtOAc/hexán), čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (1,1 g): 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 1,30 (t, 3H), 2,50 (m, 1H), 2,85 (m, 1H), 3,85 (s, 3H), 4,0 (m, 1H), 4,20(9, 2H), 6,6 (s, 1H),
6,9 (m, 1H), 7,2 (s, 1H), 7,35 (m, 6H).
b) Etyl-(±)-3-[(3-metoxybenzoyl)]fenyljantaran
Roztok etyl-(±)-3-(3-metoxyfenyl)indénacetátu (1,1 g, 3,6 mmol) v acetóne (30 ml) sa opracoval s vodným roztokom 4 % hmotnostné oxidu osmičelého (0,5 ml), nasledovalo pridávanie po kvapkách 1,2 mol/l Jonesovho činidla (5 ml, 6 mmol) podľa postupu z literatúry (J. Org. Chem. 1993, 58, 4745). Po premiešavaní počas noci pri laboratórnej teplote sa reakcia tmavej zmesi zastavila s izopropanolom (2,5 ml), nasledoval hydrogensiričitan sodný (0,9 g) a voda (30 ml). Produkt sa extrahoval etylacetátom, premyl sa soľankou, vysušil sa nad MgSO4, a skoncentroval sa, čím sa poskytol tuhý zvyšok. Rozotretie so zmesou 1:1 éter/ hexán poskytlo 0,76 g látky z názvu tohto odstavca: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 1,18 (t, 3H), 2,90 (m, 1H), 3,3 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,1 (q, 2H), 4,4 (m, 1H), 4,4 (d, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,5 (m, 6H).
c) Etyl-(±)-3-[(3-metoxybenzyl)]fenyljantaran
-60Zmes etyl-(±)-3-[(3-metoxybenzoyl)]fenyljantaran (0,76 g, 2,1 mmol) a 10 % Pd/C (0,6 g) v ľadovej kyseline octovej (35 ml) sa hydrogenovala pri 345 kPa (50 psi) počas 17 hodín. Zmes sa prefiltrovala použitím Celíte® a vrstva na filtri sa premyla s kyselinou octovou. Filtrát sa skoncentroval a rekoncentroval z toluénu a dichlórmetánu, čím sa poskytlo 0,65 g látky z názvu tohto odstavca: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 1,20 (t, 3H), 2,20 (m, 1H), 3,0 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 4,1 (q, 2H), 4,18 (q, 2H), 4,4 (d, 1H), 6,2 (m, 2H), 7,22 (m, 6H).
d) Etyl-(±)-10,11-dihydro-3-metoxy-11-oxo-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Do magneticky premiešavaného roztoku etyl-(±)-3-[(3-metoxybenzyl)]-fenyljantaranu (0,65 g, 1,9 mmol) v suchom dichlórmetáne (10 ml) sa pridal DMF (0,2 ml) a oxalylchlorid (0,2 ml, 2,28 mmol). Po 1,5 hodine sa roztok pridal po kvapkách do suspenzie chloridu hlinitého (0,6 g, 4,5 mmol) v suchom dichlórmetáne (15 ml). Reakcia zmesi sa zastavila po 2 hodinách s ľadovou vodou, vrstvy sa oddelil, a vodná vrstva sa extrahovala dichlórmetánom. Spojené organické vrstvy sa vysušili nad MgSO4 a skoncentrovali. Zvyšok sa čistil pomocou kolónovej chromatografie (SiOz/2 až 4 % hmotnostné EtOAc/hexán), čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (0,3 g): 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 1,28 (t, 3H), 2,88 (m, 1H), 3,55 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 3,88 (d, 1H), 4,18 (q,2H),4,85 (d, 1H), 4,95 (m, 1H), 5,8 (m, 2H), 7,22 (m, 4H), 8,1 (s, 1H).
e) Etyl-(±)-10,11-dihydro-3-metoxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Zmes etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-metoxy-11 -oxo-5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén10-acetátu (0,3 g, 0,93 mmol) a 10 % Pd/C (0,3 g) v ľadovej kyseline octovej (25 ml) sa hydrogenovala pri 345 kPa (50 psi) počas 18 hodín. Zmes sa prefiltrovala použitím Celíte® a premyla sa kyselinou octovou. Filtrát sa skoncentroval a rekoncentroval z toluénu a dichlórmetánu, čím sa poskytlo 0,25 g látky z názvu tohto odstavca: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 1,28 (t, 3H), 2,60 (m, 2H), 2,90 (m, 1H), 3,30 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 3,85 (d, 1H), 4,18 (q, 2H), 4,30 (d, 1H), 6,70 (m, 2H), 7,0 (d, 1H), 7,22 (m, 4H).
-61 Príprava 20
Príprava etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-hydroxy-dibenzo[b,f|oxepín-10-acetátu
a) 4-Metoxy-2-fenoxyacetofenón
Podľa postupu Harris, T. W. a spol. (J. Med. Chem. 1982, 25(7), 855 858), 2-fluóro-4-metoxyacetofenón (1,00 g, 5,95 mmol) reagoval s fenolom, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (1,27 g) ako olej: 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ
7,90 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,35 (m. 2H), 7,20 (m, 1 H), 7,05 (m, 2H), 6,70 (dd, J = 2A, 8,8 Hz, 1H), 6,35 (d, J = 2,4 Hz, 1H). 3,75 (s, 3H), 2,61 (s, 3H).
b) 2-(4-Metoxy-2-fenoxyfenyl)-1 -morfolín-4-yletán-1 -tión
Podľa postupu Harris, T. W., a spol. (J. Med. Chem. 1982, 25(7), 855 - 858) reagovali 4-metoxy-2-fenoxyacetofenón (1,69 g, 6,98 mmol), síra (0,36 g 11,2 mmol) a morfolín (0,98 ml, 11,2 mmol), čím sa poskytla látku z názvu tohto odstavca (1,24 g) ako biela tuhá látka: MS (ES) m/e 344,0 (M+H)+.
c) Kyselina 2-(4-metoxy-2-fenoxyfenyl)octová
Do roztoku 2-(4-metoxy-2-fenoxyfenyl)-1-morfolín-4-yletán-1-tión (0,35 g, 1,02 mmol) v i-PrOH (15 ml) a H2O (15 ml) sa pridal KOH (0,57 g, 10,2 mmol). Reakčná zmes sa zahrievala pod refluxom počas 18 hodín, potom sa ochladila na laboratórnu teplotu, zriedila sa s H2O a premyla sa s Et2O. Vodná vrstva sa okyslila na pH = 4 s kone. HCI a extrahovala sa s CHCI3. Spojené extrakty sa vysušili nad MgSO4 a skoncentrovali sa, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (0,22 g) ako biela tuhá látka. Táto sa použila bez ďalšieho čistenia: MS (ES) m/e 259,0 (M+H)+.
d) 3-Metoxydibenzo[b,f]oxepín-10-ón
Roztok kyseliny 2-(4-metoxy-2-fenoxyfenyl)octovej (594 mg, 2,3 mmol) v tionylchloride (10 ml) sa zahrieval pod refluxom počas 30 minút, potom sa skoncentroval do sucha a zvyšok sa rekoncentroval z toluénu. Výsledný zvyšok sa rozpustil v suchom CH2CI2 (3 ml) a roztok sa pridal po kvapkách pri laboratórnej
-62teplote do suspenzie AICI3 (673 mg, 5,06 mmol) v suchom CH2CI2 (4 ml) v plameňom vysušenej banke pod argónovou atmosférou. Po premiešavaní počas 2,5 hodiny sa zmes zriedila s CH2CI2 (10 ml) a premyla sa postupne s 1,0 mol/l NaOH a soľankou. Vysušenie (MgSO4), skoncentrovanie a rýchla chromatografia na silikagéli (5 % hmotnostných EtOAc/hexány) poskytli látku z názvu tohto odstavca (264 mg, 48 %) ako svetlý žltý olej: 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,80 (s, 3H), 4,02 (s, 2H), 6,74 - 8,08 (m, 7 H).
e) Ety 1-(+)-10,11 -dihydro-10-hydroxy-3-metoxydibenzo[b,f]oxepín-10-acetát
Bezvodý EtOAc (0,94 ml, 9,6 mmol) sa pridal po kvapkách do roztoku bis(trimetylsilyl)amidu lítneho (1,0 mol/l v THF, 7 ml, 7 mmol) v suchom THF (7 ml) v plameňom vysušenej banke pri -78 °C pod argónovou atmosférou. Po 0,5 hodine sa pridal TMEDA (2,4 ml, 16 mmol). Po ďalších 5 minútach sa pridal roztok 3metoxydibenzo[b,f]oxepín-10-ónu (760 mg, 3,2 mmol) v THF (2 ml) po kvapkách počas 3 minút. Ďalší suchý THF (0,4 ml) sa použil na prenos. Reakčná zmes sa premiešavala pri -78 °C až -40 °C počas 1 hodiny, potom sa reakcia zastavila s nasýteným roztokom NH4CI (10 ml). Zmes sa zahriala na laboratórnu teplotu a extrahovala sa s EtOAc. Vysušenie (MgSO4), skoncentrovanie a rýchla chromatografia na silikagéli (10 % hmotnostných EtOAc/hexány) poskytli látku z názvu tohto odstavca ako a číry olej: 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 1,14 - 1,20 (t, 3H), 1,21 - 1,30 (m, 1H), 2,62 - 2,68 (dd, 1H), 2,94 - 3,02(dd, 1H), 3,24 - 3,30 (dd, 1H), 3,40 - 3,46 (dd, 1H), 3,40 - 3,46 (dd, 1H), 3,78 (s, 3H), 4,08 - 4,18 (m, 2H), 6,60 - 7,26 (m, 6 H), 7,64 - 7,68 (dd, 1H).
f) Etyl-(±)-10,11-dihydro-3-metoxydibenzo[b,f]oxepín-10-acetát
Eterát fluoridu boritého (0,48 ml, 3,9 mmol) sa pridal do roztoku etyl-(±)10,11-dihydro-10-hydroxy-3-metoxydibenzo[b,f]oxepín-10-acetátu (690 mg, 1,95 mmol) a trietylsilánu (0,62 ml, 3,9 mmol) v suchom CH2CI2 pri 0 °C pod argónovou atmosférou. Po 20 minútach sa reakcia zastavila s roztokom 5 % hmotnostných NaHCO3 a zmes sa extrahovala s CH2CI2. Vysušenie (MgSO4) a skoncentrovanie
-63poskytli žltý olej. Tento sa rozpustil v absolútnom etanole (20 ml) a pridal sa 10 %
Pd/C (413 mg, 0,39 mmol). Zmes sa hydrogenovala počas 3 hodín pri 243 kPa (50 psi) v Parrovom hydrogenačnom prístroji. Katalyzátor sa odstránil pomocou filtrácie cez Celíte® a filtrát sa skoncentroval, čím poskytol látku z názvu tohto odstavca (523 mg, 86 %) ako číry olej; Ή NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,18 - 6,58 (m, 7 H), 4,18
- 4,08 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,80 - 3,74 (m, 1H), 3,40 - 3,30 (dd, 1H), 2,98 - 2,84 (dd, 1H), 2,74 - 2,62 (dd, 1 H), 2,60 - 2,52 (m, 1 H), 1,32 - 1,20 (t, 3H).
g) Etyl-(±)-10,11-dihydro-3-hydroxydibenzo[b,f]oxepín-10-acetát
Roztok etyl-(±)-10,11-dihydro-3-metoxydibenzo[b,f]oxepín-10-acetátu (523 mg, 1,68 mmol) v CH2CI2(6,8 ml) sa pridal po kvapkách do studeného roztoku BBr3 vCH2CI2(1,0 mol/l, 6,7 ml, 6,7 mmol) pri 0 °C pod argónovou atmosférou. Reakčná zmes sa premiešavala počas 20 minút, potom sa opatrne pridal CH3OH (7 ml). Zmes sa skoncentrovala a zvyšok sa podrobil rýchlej chromatografií na silikagéli (15
- 20 % hmotnostných EtOAc/hexány), čím poskytol látku z názvu tohto odstavca (407 mg, 89 %) ako bledý žltý olej: MS (ES) m/e 299 (M+Hf.
Príprava 21
Príprava hydrobromidu 2-[(3-bróm-1-propyl)amino]-4-metylpyridín-/V-oxidu
a) Hydrobromid 2-[(3-bróm-1-propyl)amino]-4-metylpyridín-W-oxid
Roztok SOBr2 (5,0 ml, 64,5 mmol) v CH2CI2 (20 ml) sa pridal po kvapkách počas 15-20 minút do roztoku 2-[(3-hydroxy-1-propyl)amino]-4-metylpyridín-/\/oxidu (10,0 g, 54,87 mmol) v CH2CI2(100 ml) pri 0 °C. Reakčná zmes sa zahriala na laboratórnu teplotu a premiešavala sa počas 2 hodín, potom sa pomaly pridal Et2O (200 ml). Rozpúšťadlá sa oddekantovali od gumovitej zrazeniny a zrazenina sa premyla s ďalším CH2CI2/Et2O (viackrát). Výsledný hnedasto-žltý zvyšok tuhol pri státí v chladničke počas noci. Tuhá látka sa oddelila a premyla s Et2O, čím poskytla látku z názvu tohto odstavca (15,07 g) ako žltú tuhú látku. Ďalšia látka z názvu tohto odstavca (2,05 g) sa získala ako biele ihlice pomocou skoncentrovania
-64spojených organických vrstiev. Celkový výťažok látky z názvu tohto odstavca bol
17,89 g (96 %): MS (ES) m/e 245 a 247 (M+H)+.
Nasledujúce látky ilustrujú spôsoby prípravy biologicky aktívnych látok podľa tohto vynálezu z medziproduktových látok, ako sú napríklad látky opísané v predchádzajúcich Prípravách.
Príklad 1
Príprava kyseliny (±)-10,11-dihydro-3-[4-(pyridín-2-ylamino)-1-butyl]-5H-díbenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) 4-(2-Tetrahydropyranyloxy)-1-tributylstannyl-1-butín
Roztok n-butyllítia v hexánoch (1,6 mol/l, 18,8 ml, 30 mmol) sa pridal prúdom počas 2 minút do roztoku 2-(3-butinyloxy)tetrahydro-2A7-pyránu (4,7 ml, 30 mmol) v suchom THF (60 ml) pri 0 °C pod argónovou atmosférou. Po 0,5 hodine sa pridal chlorid tributylcínu (8,1 ml, 30 mmol) všetok naraz, a reakčná zmes sa zahriala na laboratórnu teplotu. Po 3 hodinách sa reakčná zmes zriedila s hexánmi (300 ml) a premyla sa postupne s H2O (2 x 60 ml), 10 % KF (2 x 30 ml), a nasýtenou soľankou (60 ml). Vysušenie (Na2SO4), skoncentrovanie a chromatografia na silikagéli (3 % hmotnostné EtOAc/hexány) poskytla látku z názvu tohto odstavca (3,58 g, 27 %) ako takmer bezfarebný olej: TLC (5 % hmotnostných EtOAc/hexány) R, 0,37: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 4,66 (úzky t, 1H), 3,75 - 3,96 (m, 2H), 3,49 - 3,62 (m, 2H), 2,56 (zdanlivý t, 2H), 1,76 - 1,91 (m, 1H), 1,65 1,78(m, 1H), 1,42 -1,65 (m, 10H), 1,22 -1,41 (m, 6H), 0,82 - 1,08 (m, 15H).
b) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[4-(2-tetrahydropyranyloxy)-1 -butín-1 -yl]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Zmes etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-(trifluórometánsulfonyloxy)-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (1,34 g, 3,13 mmol), 4-(2-tetrahydropyranyloxy)-1-tributylstannyl-1-butínu (1,66 g, 3,76 mmol), LiCI (398 mg, 9,39 mmol), chloridu bis(trifenylfosfín)paladnatého (110 mg, 0,094 mmol), a bezvodého dioxánu (31 ml)
-65sa zahrievala pod refluxom pod argónovou atmosférou. Po 1,5 hodine sa reakčná zmes skoncentrovala, čím sa odstránila väčšina dioxánu, a zvyšok sa rozpustil v Et2O (100 ml); Pridal sa roztok 10 % hmotnostných KF (50 ml) a zmes sa premiešavala energicky počas 0,5 hodiny. Vodná vrstva sa odstránila a Et2O vrstva sa prefiltrovala cez zmes Celíte® a MgSO4. Filtrát sa skoncentroval a zvyšok sa chromatografoval na silikagéli (10 % hmotnostných EtOAc/hexány), čím poskytol látku z názvu tohto odstavca (1,12 g, 83 %) ako bledý žltý olej: TLC (20 % hmotnostných EtOAc/hexány) Rf 0,40; 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,21 - 7,30 (m, 1H), 7,06 - 7,20 (m, 5 H), 7,00 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 4,69 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 4,11 -4,23 (m, 2H), 3,76 - 3,97 (m, 4H), 3,59 - 3,68 (m, 1H), 3,48 3,57 (m, 1 H), 3,34 (dd, J = 15,2, 4,3 Hz, 1H), 2,97 (dd, J = 15,2, 9,5 Hz, 1H), 2,70 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,65 (dd, J = 15,7, 4,8 Hz, 1H), 2,51 (dd, J = 15,7, 9,5 Hz, 1H), 1,78 -1,92 (m, 1H) 1,68 -1,38 (m, 1H), 1,44 -1,68 (m, 4H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H); MS (ES) m/e 455 (M+Na)+.
c) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[4-(2-tetrahydropyranyloxy)-1 -butyl)-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Zmes etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[4-(2-tetrahydropyranyloxy)-1 -butín-1 -yl]-5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (1,2 g, 2,77 mmol), 10 % Pd/C (0,3 g, 0,28 mmol) a EtOAc (28 ml) sa trepala ph laboratórnej teplote pod vodíkovou atmosférou (345 kPa (50 psi)) v Parrovom prístroji. Po 3 hodinách sa reakčná zmes prefiltrovala cez Celite® a filtrát sa skoncentroval. Chromatografia na silikagéli (10 % hmotnostných EtOAc/hexány) poskytla látku z názvu tohto odstavca (1,06 g, 88%) ako bezfarebný olej: TLC (20 % hmotnostných EtOAc/hexány) Rf 0,51; 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,05 - 7,20 (m, 4H), 6,92 - 7,03 (m, 3H), 4,53 - 4,60 (m, 1H), 4,34 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 4,12 - 4,26 (m, 2H), 3,80 - 3,90 (m, 3H), 3,71 - 3,80 (m, 1H), 3,44 3,53 (m, 1H), 3,35 - 3,44 (m, 1H), 3,33 (dd, J = 15,1,4,1 Hz, 1 H), 2,95 (dd, J = 15,1,
9,4 Hz, 1H), ) 2,65 (dd, J = 15,5, 4,9 Hz, 1H), 2,49 - 2,61 (m, 3H), 1,77 - 1,90 (m, 1H), 1,45 -1,77 (m, 9H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H); MS (ES) m/e 459 (M+Naf.
-66d) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-(4-hydroxy-1 -butyl)-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10acetát
Roztok ety l-(±)-10,11 -dihydro-3-[4-(2-tetrahydropyranyloxy)-1 -butyl]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (456,0 mg, 1,04 mmol) a monohydrátu kyseliny p-toluénsulfónovej (60 mg, 0,31 mmol) v absolútnom EtOH (10 ml) sa premiešavala pri laboratórnej teplote. Po 2 hodinách sa reakcia zmesi zastavila s roztokom 5 % hmotnostných NaHCO3 (1 ml) a skoncentrovala sa, čím sa odstránil EtOH. Zvyšok sa zriedil s H2O (2 ml) a extrahoval sa s CH2CI2. Vysušenie (MgSOJ, skoncentrovanie a chromatografia na silikagéli (1:1 EtOAc/hexány) poskytli látku z názvu tohto odstavca (342,4 mg, 93 %) ako bezfarebný olej: TLC (1:1 EtOAc/hexány) Rf 0,49; 1H NMR (250 MHz, CDCI3) δ 6,85 - 7,25 (m, 7 H), 4,34 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 4,08 - 4,30 (m, 2H), 3,75 - 3,95 (m, 2H), 3,53 - 3,72 (m, 2H), 3,33 (dd, J = 15,1, 4,1 Hz, 1H), 2,95 (dd, J = 15,1, 9,4 Hz, 1H), 2,40 - 2,75 (m, 4H), 1,45 -1,80 (m, 4H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H); MS (ES) m/e 353 (M+H)+.
e) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[4-(A/-ftalidimido)-1 -butyI]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén10-acetát
Dietyl-azodikarboxylát (0,2 ml, 1,26 mmol) sa pridal po kvapkách do roztoku ety I-(±) -10,11 -d ihyd ro-3-(4-hyd roxy-1 -butyl)-5/7-d ibenzo[a ,d]cyklohepté n-10-acetátu (0,37 g, 1,05 mmol), trifenylfosfínu (0,33 g, 1,26 mmol) a ftalimidu (0,19 g 1,26 mmol) v bezvodom THF (10 ml) pri laboratórnej teplote pod argónovou atmosférou. Po 23 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala na rotačnej odparovačke. Chromatografia na silikagéli (30 % hmotnostných EtOAc/hexány) poskytla látku z názvu tohto odstavca (0,35 g, 70 %) ako bezfarebný olej: MS (ES) m/e 504,3 (M+Na)+.
f) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-(4-amino-1 -butyl)-5ŕ/-dibenzo(a,d]cykloheptén-10-acetát
Hydrazín monohydrát (0,11 g, 2,18 mmol) sa pridal do roztoku etyl-(±)10,11 -d ihyd ro-3-[4-(A/-ftalid imido)-1 -butyl)-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (0,35 g, 0,73 mmol) v absolútnom EtOH (10 ml) a toluénu (2 ml) pri laboratórnej
-67teplote. Reakčná zmes premiešavala sa pri laboratórnej teplote počas 17 hodín, potom sa prefiltrovala a vrstva na filtri sa premyla toluénom. Skoncentrovanie na rotačnej odparovačke poskytlo látku z názvu tohto odstavca (0,23 g, 90 %) ako bezfarebnú tuhú látku: MS (ES) m/e 352,3 (M+Hf.
g) Etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[4-(1-oxopyridín-2-ylamino)-1-butyl)-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Zmes hydrochloridu 2-chlórpyridín-/V-oxidu (0,31 g 1,88 mmol), etyl-(±)10,11-dihydro-3-(4-amino-1-butyl)-5H-dibenzo[a,d]-cycloheptén-10-acetátu (0,22 g, 0,63 mmol) a NaHCO3(0,26 g, 3,13 mmol) v ŕerc-amylalkohole (6 ml) sa zahrievala pod refluxom počas 21 hodín. Reakčná zmes sa zriedila s CH2CI2 (100 ml) a prefiltrovala sa a filtrát sa skoncentroval na rotačnej odparovačke. Chromatografia na silikagéli (1:9:5 MeOH/CH2CI2/EtOAc) poskytla látku z názvu tohto odstavca (82 mg, 30 %) ako žltý olej: MS (ES) m/e 445,2 (M+H)+.
h) Etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[4-(pyridín-2-ylamino)-1-butyl]-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
Zmes etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[4-(1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -butyl]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (0,07 g 0,16 mmol), 10 % Pd/C (0,08 g, 0,075 mmol), cyklohexén (0,16 ml, 1,6 mmol) a izopropanolu (4 ml) sa zahrievala pod refluxom pod argónovou atmosférou počas 14 hodín, potom sa katalyzátor odstránil pomocou filtrácie cez Celíte®. Vrstva na filtri sa premyla izopropanolom a MeOH a filtrát sa skoncentroval na rotačnej odparovačke, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (0,046 g, 69 %) ako číry olej: MS (ES) m/e 429,3 (M+Hf
I) Kyselina etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[4-(pyridín-2-ylamino)-1 -butyl)-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Zmes ety l-(±)-10,11 -dihydro-3-[4-(pyridín-2-ylamino)-1 -butyl]-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu (46 mg, 0,11 mmol) a 1,0 mol/l LiOH (0,66 ml, 0,66 mmol) v THF (3 ml) a H2O (3 ml) sa premiešavala pri laboratórnej teplote. Po 24 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala na rotačnej odparovačke a zvyšok sa
-68zriedil s H20 (5 ml). Roztok sa ochladil v ľadovom kúpeli a pomaly sa pridal 1,0 mol/l AcOH, čím sa poskytla biela zrazenina. Chromatografia na C-18 YMC (45 % hmotnostných CH3CN/H2O obsahujúci 0,1 % hmotnostného TFA) poskytla látku z názvu tohto odstavca (13 mg, 21 %) ako bielu tuhú látku; MS (ES) m/e 401,3 (M+Hf. Elementárna analýza: Vypočítané pre C26H28N2O2.0,75H2O.1,5CF3CO2H: C, 59,54; H, 5,31; N, 4,72, Nájdené: C, 59,69; H, 5,31; N, 4,72.
Príklad 2
Príprava kyseliny (±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-etoxypyridín-2-ylamino)-1-propyloxyj5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-etoxy-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Ety l-(±)-10,11 -d ihyd ro-3-[3-(4-n itro-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxyj5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát (0,67 g, 1,36 mmol), 3,0 mol/l NaOEt v etanole (6,8 ml, 6,8 mmol) a absolútny etanol (6,8 ml) sa spojili a zmes sa zahriala v olejovom kúpeli nastavenom na 70 °C. Vznikol tmavý roztok, ktorý sa zahrieval počas 10 minút, potom sa olejový kúpeľ odstránil a roztok sa nechal premiešavať počas ďalších 5 až 7 minút bez vonkajšieho vyhrievania. Výsledný roztok sa ochladil v ľade a reakcia zmesi sa zastavila s ľadovou kyselinou octovou (0,47 ml,
8,2 mmol). Zmes sa skoncentrovala a zvyšok sa rozdelil medzi CH2CI2 (10 ml) a napoly nasýteným NH4CI (10 ml). Vrstvy sa oddelili a vodná vrstva sa extrahovala s CH2CI2(2 x 10 ml). Spojené organické vrstvy sa vysušili (MgSO4) a skoncentrovali a zvyšok sa rekoncentroval z toluénu, čím sa poskytol a červenkastý-oranžový olej. Chromatografia na silikagéli (5 % hmotnostných MeOH/CHCI3) poskytla látku z názvu tohto odstavca (601,1 mg, 90 %) ako žltý olej: TLC (5 % hmotnostných MeOH/CHCI3) R, 0,36; 1H NMR (250 MHz, CDCI3) δ 7,95 (d, J = 7,1 Hz, 1H), 6,88 7,30 (m, 6 H), 6,77 (d, J = 2,6 Hz, 1 H), 6,67 (dd, J = 8,2, 2,6 Hz, 1H), 5,95 - 6,20 (m, 2H), 4,28 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 4,18 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 4,04 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 3,65 - 4,00 (m, 4H), 3,46 (q, J = 6,5 Hz, 2H), 3,30 (dd, J = 15,0, 4,2 Hz, 1H), 2,93
-69(dd, J = 15,0, 9,2 Hz, 1H), 2,65 (dd, J = 15,6, 5,0 Hz, 1H), 2,52 (dd, J = 15,6, 9,4 Hz, 1H), 1,95 - 2,25 (m, 2H), 1,10 -1,45 (m, 6 H); MS (ES) m/e 491 (M+H)+.
b) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-etoxypyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Zmes etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-etoxy-1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (601,1 mg. 1,23 mmol), cyklohexénu (1,2 ml, 12,3 mmol), 10 % Pd/C (130 mg, 0,012 mmol) a absolútneho etanolu (12,3 ml) sa zahrievala pod refluxom pod argónovou atmosférou. Po 23,5 hodine sa reakčná zmes za horúca prefiltrovala cez Celíte® a vrstva na filtri sa premyla s etanolom. Filtrát sa skoncentroval a zvyšok sa rekoncentroval z toluénu. Chromatografia na silikagéli (5 % hmotnostných MeOH v 1:1 EtOAc/CHCI3) poskytla látku z názvu tohto odstavca (528,1 mg, 90 %) ako svetlý žltý olej; TLC (10 % hmotnostných MeOH v EtOAc/CHCI3) Rf 0,67; ’H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,89 (d, J 5,8 Hz, 1H), 7,05 - 7,18 (m,4H), 6,99 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,66 (dd, J = 8,2, 2,6 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 5,8, 2,1 Hz, 1H), 5,86 (d, J =
2.1 Hz, 1H), 4,73 (široký t, 1H), 4,28 (d, J = 14,9 Hz, 1 H), 4,11 - 4,25 (m, 2H), 4,04 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 3,98 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,83 (d, J = 14,9 Hz, 1H), 3,76 - 3,85 (m, 1H), 3,43 (q, J = 6,4 Hz, 2H), 3,30 (dd. J =15,0, 4,1 Hz, 1H), 2,93 (dd, J = 15,0,
9.2 Hz, 1H), 2,64 (dd, J = 15,6, 4,8 Hz, 1H), 2,52 (dd, J = 15,6, 9,5 Hz, 1H), 2,01 2,11 (m, 2H), 1,37 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,27 (t, J = 7,0 Hz, 3H); MS (ES) m/e 475 (M+H)+.
c) Kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-etoxypyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
1,0 mol/l NaOH (1,7 ml, 1,7 mmol) sa pridal po kvapkách do roztoku etyl(±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-etoxypyridin-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo-[a,d]cykloheptén-10-acetátu (528,1 mg, 1,11 mmol) v absolútnom etanole (11 ml) pri laboratórnej teplote a roztok sa zahrieval v olejovom kúpeli nastavenom na 45 °C. Po 20 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala a zvyšok sa rekoncentroval z
-70H2O. Výsledný zvyšok sa rozpustil v H2O (10 ml) a roztok sa prefiltroval. Hodnota pH sa nastavila na 7 pomocou 1,0 mol/l HCl a zmes sa prudko premiešavala, čím sa konvertovala počiatočné tvorená gumovitá zrazenina na tuhú látku. Rozotretie so sklenou tyčinkou a špachtľou pomohlo pri tejto premene. Hodnota pH výslednej zmesi sa znova nastavila na 7 a tuhá látka sa oddelila a premyla s veľkým množstvom H2O. Filtrát sa skoncentroval a zvyšok sa rozpustil v HZO s pomocou malého množstva 1,0 mol/l NaOH. Hodnota pH sa nastavila na 7, čím sa poskytol malý druhý výťažok. Výťažky sa spojili a vysušili vo vákuu (40 až 50 °C), čím poskytli látku z názvu tohto odstavca (453,7 mg, 82 %) ako špinavobielu tuhú látku: HPLC (Hamilton PRP-1®- 45 % hmotnostných CH3CN/H2O obsahujúci 0,1 % hmotnostné TFA) k' = 1,32; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,78 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 7,35 - 7,65 (m, 1H), 7,02 - 7,22 (m, 4H), 6,97 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,82 (d, J =
2,4 Hz, 1H), 6,68 (dd, J = 8,3, 2,4 Hz, 1H), 6,29 (dd, 1H), 6,15 (úzky d, 1H), 4,20 (d, J = 14,6 Hz, 1H), 3,93 - 4,12 (m, 4H), 3,89 (d, J = 14,6 Hz, 1H), 3,60 - 3,71 (m, 1H),
3,30 - 3,50 (m, 2H), 3,20 (dd, J = 15,1, 4,1 Hz, 1H), 2,83 (dd, J = 15,1, 10,1 Hz, 1H), 2,60 (dd, J = 16,0, 5,3 Hz, 1H), 2,48 (dd, J = 16,0, 8,9 Hz, 1H, čiastočne skrytý signálom zvyšku rozpúšťadla), 1,90 - 2,05 (m, 2H), 1,30 (t, J = 6,9 Hz, 3H); MS (ES) m/e 447 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C27H30N2O4.1,5HCI: C, 64,70; H, 6,33; N, 5,59, Nájdené: C, 64,53; 14,6,14; N, 5,31.
Príklad 3
Príprava kyseliny (±)-10,11-dihydro-3-[2-[2-(etylamino)tiazol-4-yl]-1-etoxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) Ety l-(±)-10,11 -dihyd ro-3-[2-[2-(ety la m in o)tiazol-4-y I]-1 -etoxy]-5H-dibenzo-[a,d]cykloheptén-10-acetát
Roztok 2-(etylamino)-4-tiazoletanolu (0,33 g, 1,9 mmol) a dietylazodikarboxylátu (0,30 ml, 1,9 mmol) v bezvodom DMF (5 ml) sa pridal po kvapkách počas 5 minút do roztoku etyl-(±)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (296,4 mg, 1 mmol) a trifenylfosfínu (525 mg, 2 mmol) v
-71 bezvodom DMF (5 ml) pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa držala počas pridávania studená vo vodnom kúpeli pri laboratórnej teplote. Po 16 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala a zvyšok sa rekoncentroval z xylénov (2 x). Chromatografia na silikagéii (20 % hmotnostných EtOAc/hexány) poskytla látku z názvu tohto odstavca (145,0 mg, 32 %) ako žltý olej: TLC (1:1 EtOAc/hexány) R, 0,60; 1H NMR (250 MHz, CDCI3) δ 7,00 - 7,30 (m, 4H), 6,98 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,68 (dd, J = 8,2, 2,6 Hz, 1H), 6,21 (s, 1H), 5,00 - 5,25 (m, 1H), 4,04 - 4,38 (m, 5H), 3,81 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 3,70 - 3,90 (m, 1H), 3,13 - 3,40 (m, 3H), 2,99 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,92 (dd, J = 14,9, 9,3 Hz, 1H), 2,64 (dd, J = 15,6, 5,0 Hz, 1H), 2,51 (dd, J =15,6, 9,3 Hz, 1H), 1,27 (t, J = 7,2 Hz, 3H); MS (ES) m/e 451 (M+H)+.
b) Kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[2-[2-(etylamino)tiazol-4-yl]-1-etoxy]-5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
1,0 mol/l LiOH (0,32 ml, 0,32 mmol) sa pridal po kvapkách do roztoku etyl(±)-10,11 -dihydro-3-[2-[2-(etylamino)tiazol-4-yl)-1 -etoxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (145,0 mg, 0,32 mmol) v THF (2,4 ml) a H2O (0,48 ml) pri 0 °C. Výsledná ružovkasto-oranžová dvojfázová zmes sa premiešavala pri 0 °C počas 10 minút, počas tejto doby farba zbledla na oranžovo-žltú, potom sa zmes zahriala na laboratórnu teplotu. Po 1,5 hodine sa pridalo ešte trochu H2O (5 kvapiek) a reakčná zmes sa premiešavala počas 42 hodín, potom sa ochladila na 0 °C a neutralizovala sa s TFA (0,025 ml). THF sa odstránil na rotačnej odparovačke a výsledný olejovitý zvyšok sa zriedil s 0,1 % hmotnostného TFA/CH3CN, čím sa poskytol homogénny roztok. ODS chromatografia (gradient: 40 % hmotnostných CH3CN/H2O obsahujúci 0,1 % hmotnostného TFA, potom 45 % hmotnostných CH3CN/H2O obsahujúci 0,1 % hmotnostného TFA) poskytla frakcie obsahujúce látku z názvu tohto odstavca. Tieto sa spojili a CH3CN sa odstránil na rotačnej odparovačke. Výsledná vodná zmes sa alkalizovala pri 0 °C, čím sa poskytol homogénny roztok. Opatrné okyslenie na pH 4 - 5 s 1,0 mol/l HCI poskytlo tuhú zrazeninu, ktorá sa oddelila, premyla sa s veľkým množstvom H2O, a vysušila sa, čím poskytla látku z názvu
-72tohto odstavca (80,9 mg, 51 %) ako špinavobielu tuhú látku: HPLC (Hamilton PRP1®, 45 % hmotnostných CH3CN/H2O obsahujúci 0,1 % hmotnostného TFA) k' = 0,89; 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7,02 - 7,18 (m, 4H), 7,00 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,68 (dd, J = 8,3, 2,6 Hz, 1H), 6,45 (s, 1H), 4,26 (d, J =
14,9 Hz, 1H), 4,20 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,87 (d, J = 14,9 Hz, 1H), 3,68 - 3,80 (m, 1H), 3,34 (q, J = 7,3 Hz, 2H, čiastočne skrytý signálom zvyšku rozpúšťadla), 3,30 (dd, 1 H, skrytý signálom zvyšku rozpúšťadla), 2,99 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,92 (dd, J = 15,0, 9,4 Hz, 1H), 2,62 (dd, J = 15,9, 5,0 Hz, 1H), 2,47 (dd, J = 15,9, 9,3 Hz, 1H), 1,27 (t, J = 7,3 Hz, 3H); MS (ES) m/e 423 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C24H26N2O3S.0,67CF3CO2H: C, 61,03; 14, 5,39; N, 5,62, Nájdené: C, 61,21; H, 5,36; N, 5,60.
Príklad 4
Príprava kyseliny (S)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Do premiešavaného roztoku etyl-(S)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát (35 g, 118 mmol) v suchom THF (1,1 I) a suchom DMF (600 ml) sa pridal pod argónovou atmosférou 2-[(3-hydroxy-1-propyl)amino]pyridín/V-oxid (29,4 g, 175 mmol) a trifenylfosfín (45,9 g, 175 mmol). Keď sa všetky tuhé látky úplne rozpustili (asi 1 hodina), reakčná zmes sa ochladila na 0 °C v ľadovom kúpeli a pomocou striekačky sa pridal diizopropyl-azodikarboxylát (36,4 ml, 95 %, 175 mmol). Reakčná zmes sa nechala zahriať pomaly na laboratórnu teplotu a premiešavala sa počas 18 hodín. Skoncentrovanie a rýchla chromatografia na silikagéli (95:5 CHCľ/MeOH), po tom nasledovalo druhé čistenie pomocou rýchlej chromatografie na silikagéli (80:20:5 CHCI3/EtOAc/EtOH) a poskytlo látku z názvu tohto odstavca (37,66 g, 71 %) ako bledú žltú tuhú penu: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,08 (dd, J = 6,3, 1,1 Hz, 1H), 7,29 (t, 1H), 7,19 - 7,06 (m, 5H), 6,97 (d,
-73J = 8,3 Hz, 1H), 6,84 (d, J = 2,5, 1H), 6,79 (dd, J = 8,5, 1,6 Hz, 1H), 6,69 (dd, J = 8,3, 2,6 Hz, 1H), 6,57 (m, 1H), 4,17 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 4,13 - 4,07 (m, 2H), 4,00 (t, 2H), 3,91 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,39 (t, 2H), 3,19 (dd, J = 15,1, 4,5 Hz, 1H), 2,85 (dd, J = 15,1, 10,0 Hz, 1H) 2,65 (dd, J = 15,8, 5,4 Hz, 1H), 1,99 (m, 2H), 1,18 (t, 3H); MS (ES) m/e 447,3 (M+H)+
b) Etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Do premiešavaného roztoku etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(1-oxopyridín-2ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (37,66 g, 84 mmol) v izopropanole (700 ml) sa pridalo 10 % paládium na aktívnom uhlí (18 g, 16,9 mmol, pozorne vopred zvlhčené v izopropanole pod argónovou atmosférou) a cyklohexén (85 ml, 839 mmol). Reakčná zmes sa potom zahrievala pod refluxom pod argónovou atmosférou v olejovom kúpeli nastavenom pri 90 °C. Po 6 hodinách sa pridalo ďalšie množstvo 10 % paládia na aktívnom uhlí (18 g, 84 mmol, pozorne vopred zvlhčený v izopropanole pod argónovou atmosférou) a cyklohexén (85 ml, 839 mmol). Po ďalších 18 hodinách sa reakčná zmes za horúca prefiltrovala cez Celíte® a vrstva na filtri sa premyla s 1:1 MeOH/CHCI3 (600 ml). Filtrát sa skoncentroval za vákua a zvyšok sa čistil pomocou rýchlej chromatografie na silikagéli (95:5 CHCI3/MeOH), čím sa poskytne látka z názvu tohto odstavca (29,2 g, 81 %) ako bledý žltý olej: Ή NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,94 (dd, J = 5,4, 1,9 Hz, 1H), 7,35 - 7,31 (m, 1H), 7,18 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,14 - 7,06 (m, 3H), 6,97 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 2,6, 1H), 6,68 (dd, J = 8,3, 2,6 Hz, 1H), 6,54 (t, 1H), 6,44 (m, 2H), 4,17 (d, J = 14,6 Hz, 1H), 4,13 - 4,02 (m, 2H), 4,00 (t, 2H), 3,91 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,35 (m, 2H), 3,19 (dd, J = 15,1, 4,4 Hz, 1H), 2,86 (dd, J = 15,1, 10,1 Hz, 1H), 2,65 (dd, J = 15,8, 5,4 Hz, 1H), 2,55 (dd, J = 15,8, 8,7 Hz, 1H), 1,93 (m, 2H), 1,18 (t, 3H); MS (ES) m/e 431,4 (M+H)+.
c) Kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Do premiešavaného roztoku etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-741-propyloxy]-5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (29,20 g, 68 mmol) v dioxáne (350 ml) sa pridal vodný roztok 1,0 mol/l NaOH (110 ml, 110 mmol). Kalná reakčná zmes sa premiešavala pri 50 °C v olejovom kúpeli počas 24 hodín, potom sa výsledný homogénny roztok neutralizoval s vodným roztokom 1,0 mol/l HCI (110 ml, 110 mmol). Roztok sa skoncentroval takmer do sucha pomocou rotačnej odparovačky, čím sa vyzrážal produkt. Supernatant sa oddekantoval a zostávajúca gumovitá tuhá látka sa vysušila za vákua a znova sa rozpustila v zmesi 1:1 metanol/CHCI3. Číry roztok sa potom rekoncentroval pomocou rotačnej odparovačky a dôkladne sa vysušil za vákua. Zostávajúca tuhá látka sa rozotrela s malým objemom vody, prefiltrovala a vysušila za vákua, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (26,85 g, 94 %) ako špinavobiely prášok: HPLC (Hamilton PRP-1®, 35 % hmotnostných CH3CN/H2O obsahujúci 0,1 % hmotnostného TFA) k' = 2,88; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,94 (dd, J = 4,7, 1,6 Hz, 1H), 7,38 (m, 1H), 7,18 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 3,9 Hz, 2H), 7,08 (m, 1H), 6,97 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,78 (široký s, 1H), 6,68 (dd, J = 8,3, 2,6 Hz, 1H), 6,50 (d, J =
8,3 Hz, 1H), 6,47 (dd, 1H), 4,20 (d, J = 14,6 Hz, 1H), 4,00 (t, 2H), 3,88 (d, J = 14,6 Hz, 1H), 3,67 (m, 1H), 3,37 (m, 1H), 3,20 (dd, J = 15,2, 4,4 Hz, 1 H), 2,83 (dd, J = 15,2, 10,1 Hz, 1H), 2,60 (dd, J = 15,9, 5,3 Hz, 1H), 2,50 (dd, 1H), 1,95 (m, 2H); MS (ES) m/e 403,3 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C25H26N2O3.H2O: C, 71,41; H, 6,71; N, 6,66, Nájdené: C, 71,21; H, 6,53; N, 6,54.
Príklad 5
Príprava kyseliny (±)-10,11-dihydro-3-[2-(6-aminopyridín-2-yl)-1-etoxy]-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-octová
a) Etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[2-(6-aminopyridín-2-yl)-1-etoxy]-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
Roztok 6-amino-2-pyridyletanolu (0,23 g, 1,68 mmol) a dietylazodikarboxylátu (0,26 ml, 1,68 mmol) v bezvodom DMF (5 ml) sa pridal po kvapkách do roztoku etyl-(±)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5F/-dibenzo[a,d]-cyk-loheptén-10-acetátu a
-75trifenylfosfínu (0,48 g, 1,82 mmol) v bezvodom DMF (5 ml) pri laboratórnej teplote. Po 1 hodine sa reakčná zmes skoncentrovala a zvyšok sa čistil pomocou rýchlej chromatografie na silikagéli (1:1 EtOAc/hexány), čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (0,030 g); MS (ES) m/e 417 (M+H)+.
b) Kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[2-(6-aminopyridín-2-yl)-1-etoxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Roztok etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[2-(6-aminopyridín-2-yl)-1 -etoxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (0,030 g, 0,072 mmol) a 1,0 mol/l NaOH (0,14 ml, 0,14 mmol) v MeOH (2 ml) premiešaval pri laboratórnej teplote počas noci, potom sa skoncentroval. Zvyšok sa rozpustil v H2O a pH roztoku sa nastavilo na hodnotu 7 s 1,0 mol/l HCI. Skoncentrovanie a chromatografia na kolóne C-18 Bond Elute (10:9:1 CH3CN/H2O/TFA) poskytli látku z názvu tohto odstavca (0,013 g): MS (ES) m/e 389 (M+H)+.
Príklad 6
Príprava kyseliny (fi)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(R)-10,11-dihydro-3-[3-(1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Roztok 2-[(3-hydroxy-1-propyl)amino)pyridín-A/-oxidu (0,70 g, 4 mmol) a dietylazodikarboxylátu (0,65 ml, 4 mmol) v bezvodom DMF (20 ml) sa pridal po kvapkách počas 10 minút do roztoku etyl-(/?)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (0,45 g, 2 mmol) a trifenylfosfínu (1,2 g, 4 mmol) v bezvodom DMF (8 ml) pri laboratórnej teplote pod argónovou atmosférou. Po 23,5 hodine sa reakčná zmes skoncentrovala na rotačnej odparovačke a zvyšok sa rekoncentroval z xylénov, čím sa odstránil zvyšok DMF. Chromatografia na silikagéli (1 až 4 % CH3OH/CH2CI2) poskytla látku z názvu tohto odstavca (0,50 g 74 %) ako žltý olej: MS (ES) m/e 447 (M+H)+
-76b) Etyl-(/?)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Zmes ety 10,11 -d i hyd ro-3-[3-( 1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (0,5 g, 1 mmol), 10 % Pd/C (0,25 g, 0,2 mmol), cyklohexénu (2 ml, 20 mmol) a izopropanolu (10 ml) sa zahrievala pod refluxom počas 18 hodinách, potom sa katalyzátor odstránil pomocou filtrácie cez Celite®. Chromatografia na silikagéli (0,5 až 2 % hmotnostné CH3OH/CH2CI2) poskytla látku z názvu tohto odstavca (0,4 g, 83 %) ako svetlý žltý olej: MS (ES) m/e 431 (M+H)+.
c) Kyselina (R)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Zmes etyl-(/?)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-di-benzo[a,d]cykloheptén-10-acetát (0,4 g, 93 mmol) a 1,0 mol/l NaOH (1,1 ml, 1,1 mmol) v absolútnom EtOH (10 ml) sa zahrievala v olejovom kúpeli nastavenom na 50 °C. Po 18 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala na rotačnej odparovačke a zvyšok sa rozpustil v H2O. Vodný roztok sa nastavil na pH 4 s 3 mol/l HCI a tuhá zrazenina sa oddelila a premyla sa s H2O. Materiál sa vysušil vo vysokom vákuu pri 40 °C, čím poskytla látka z názvu tohto odstavca (0,36 g, 96 %) ako takmer bezfarebná tuhá látka: [a]D +50,8° (c = 0,12, CH3OH); MS (ES) m/e 403 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C2SH26N2O3.0,5H2O: C, 72,97; H, 6,61; N, 6,80, Nájdené: C. 73,09; H, 6,38; N, 6,58.
Príklad 7
Príprava kyseliny (S)-10,11-dihydro-3-[2-[6-(metylamino)pyridín-2-yl]-1-etoxy]-1-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[2-[6-(metylamino)pyridín-2-yl]-1 -etoxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 6(a), s výnimkou nahradenia 6-(metylamino)-2pyridyletanolu za 2-[(3-hydroxy-1-propyl)amino]pyridín-/\/-oxid, a etyl-(S)-10,11dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu za etyl-(/?)-10,11-dihyd-77ro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako bezfarebný olej po chromatografii na silikagéli (0,2 až 2 % hmotnostné MeOH/CH2CI2): MS (ES) 431,2 (M+Hf.
b) Kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[2-[6-(metylamino)pyridín-2-yl]-1-etoxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Ety l-(S)-10,11 -dihydro-3-[2-[6-(metylamino)pyridín-2-yl]-1 -etoxy]-5A7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát (80 mg, 0,18 mmol) sa rozpustil v THF (4 ml) a pridal sa roztok LiOH.H2O (35 mg, 0,84 mmol) v H2O (4 ml). Roztok sa premiešaval pri laboratórnej teplote počas 72 hodín potom sa zriedil s éterom (10 ml). Supernatant sa dekantoval a tuhá látka sa suspendovala v H2O. Pozorné okyslenie na pH 4 s 3 mol/l HCI poskytlo látku z názvu tohto odstavca ako bielu tuhú látku: MS (ES) 403 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C25H26N2O3.0,75H2O: C, 72,18; H, 6,66; N, 6,73, Nájdené: C, 72,44; H, 6,52; N, 6,71.
Príklad 8
Príprava kyseliny (±)-10,11-dihydro-3-[3-(3,4,5,6-tetrahydropyrimidín-2-ylamino)-1propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-nitrobenzyloxykarbonyl)amino-1-propyloxy]-5F/d ibenzo[a ,d]cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 6(a), s výnimkou nahradenia 3-(4-nitro-benzyloxykarbonylamino)-1-propanolu za 2-[(3-hydroxy-1-propyl)amino]pyridín-/\/-oxidu a etyl-(±)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu za etyl(/?)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako jantárový olej: MS (ES) 533,3 (M+H)+.
b) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-(3-amino-1 -propyloxy)-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10acetát
Zmes etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (1,6 g, 3 mmol), 10 % paládium na uhlí
-78(0,8 g, 1 mmol) a etanolu (50 ml) sa trepala pod H2 (331 kPa (48 psi)) počas 3 hodín, potom sa katalyzátor odstránil pomocou filtrácie cez Celíte®. Filtrát sa skoncentroval, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (1,2 g, 100 %) ako žltý olej: MS (ES) 348,2 (M+H)+.
c) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[3-(pyrimidín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5A7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Zmes etyl-(±)-10,11-dihydro-3-(3-amino-1-propyloxy)-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu (0,4 g, 1 mmol), hydrogenuhličitanu sodného (0,5 g, 6 mmol), 2brómpyrimidínu (0,34 g, 2 mmol) a etanolu (10 ml) sa zahrievala pod refluxom pod argónovou atmosférou počas 18 hodín. Roztok sa potom dekantoval a skoncentroval sa. Zvyšok sa čistil pomocou chromatografie na silikagéli (0,2 až 2 % hmotnostné MeOH/CH2CI2), čím sa poskytla látku z názvu tohto odstavca (0,17 g 34 %) ako bledý žltý olej: MS (ES) 432,3 (M+H)+.
d) Etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[3-(3,4,5,6-tetrahydropyrimidín-2-ylamino)-1-propyloxy]5H-d ibenzofa, d]-cykloheptén-10-acetát
Zmes etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[3-(pyrimidín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (0,17 g, 0,38 mmol), 10 % paládium na uhlí (0,085 g, 0,08 mmol), 4 mol/l HCI v dioxáne (0,1 ml, 0,4 mmol) a etanolu (5 ml) sa trepala pod H2 (331 kPa (48 psi)) počas 6 hodín, potom sa katalyzátor odstránil pomocou filtrácie cez Celíte®. Filtrát sa skoncentroval, čím sa poskytla látku z názvu tohto odstavca (0,19 g) ako žltý olej: MS (ES) 436,3 (M+H)+.
e) Kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[3-(3,4,5,6-tetrahydropyrimidín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/7-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-octová
Roztok etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[3-(3,4,5,6-tetrahydropyrimidín-2-ylamino)1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu (0,17 g, 0,36 mmol), monohydrátu hydroxidu lítneho (0,042 g, 1 mmol), THF (3 ml) a vody (10 ml) sa premiešavala pri laboratórnej teplote počas 20 hodín, potom sa skoncentrovala. Zvyšok sa
-79rozpustil vo vode a roztok sa upravil na pH 4 s 3 mol/l HCI. Výsledný roztok sa držal v chladničke počas noci, potom sa supernatant dekantoval od tuhej látky. Tuhá látka sa vysušila vo vákuu, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (0,145 g, 91 %) ako hnedá tuhá látka: MS (ES) 408,3 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C24H29N3O3.1,3HCI: C, 63,37; H, 6,71; N, 9,23, Nájdené: C, 63,67; H, 6,84; N, 9,46.
Príklad 9
Príprava kyseliny (±)-10,11-dihydro-3-[3-(izochinolín-1-ylamino)-1-propyloxy]-5Hd ibenzo[a .djcykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[3-( 1 -oxoizochinolín-1 -ylamino)-1 -propyloxy)-5W-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 6(a), s výnimkou nahradenia 1-[(3-hydroxy-1propyl)amino]-izochinolín-/\/-oxidu za 2-[(3-hydroxy-1-propyl)amino]pyridín-/V-oxid, a nahradenia etyl-(±)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu za etyl-(/?)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, bola pripravená látka z názvu tohto odstavca ako bledý žltý olej: MS (ES) m/e 497,2 (M+H)+.
b) Etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[3-(izochinolín-1-ylamino)-1-propyloxy]-5Hdibenzo-[a,djcykloheptén-1 0-acetát
Podľa postupu z Príkladu 6(b), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-3-[3-(1-oxoizochinolín-1-ylamino)-1-propyloxy]-5/7-dibenzo[a,djcykloheptén10-acetátu za etyl-(R)-10,11 -dihydro-3-[3-( 1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy)-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, bola pripravená látka z názvu tohto odstavca ako číry olej: MS (ES) m/e 481,3 (M+H)+.
c) Kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[3-(izochinolín-1-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
-80Podľa postupu z Príkladu 6(c), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-3-[3-(izochinolín-1 -ylamino)-1 -propyloxy]-5ŕ/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10acetátu za etyl-(/?)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, bola pripravená látka z názvu tohto odstavca ako jantárová tuhá látka: MS (ES) m/e 453,2 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C29H28N2O3,1,3TFA.0,25H2O: C, 62,71; H, 4,96; N, 4,63, Nájdené: C, 62,45; H, 4,92; N, 4,41.
Príklad 10
Príprava kyseliny (+)-10,11 -d i hyd ro-3-[3-[4-(ety ltio)py rid í η-2-y lami no]-1 -propyloxyj5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[3-[4-(etyItio)-1 -oxopyridín-2-ylamino]-1-propyloxy]-5/7d ibenzo[a ,d]cykloheptén-10-acetát
Roztok ety l-(±)-10,11 -d i hyd ro-3-[3-(4-n itro-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (300 mg, 0,61 mmol) a trietylátu sodného (145 mg, 1,22 mmol) v DMF (5 ml) sa zahrial pri 70 °C počas 3 hodín. Rozpúšťadlo sa odstránilo na rotačnej odparovačke a zvyšok sa čistil pomocou chromatografie na silikagéli (2 až 6 % hmotnostných CH3OH/CH2CI2), čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (90 mg) ako oranžový olej; MS (ES) m/e
507,3 (M+H)+.
b) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[3-[4-(etyltio)pyridín-2-ylamino]-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Zmes ety l-(±)-10,11 -d i hyd ro-3-[3-[-(ety Itio)-1 -oxopyridín-2-ylamino]-1 -propyloxy)-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (60 mg, 0,119 mmol), Fe prášku (70 mg) a ľadovej kyseliny octovej (2 ml) sa zahrievala pri 100 °C počas 1,5 hodiny. Zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu a zriedila s H2O a EtOAc a hodnota pH sa nastavila na 7 až 8 s tuhým Na2CO3. Vrstvy sa oddelili a vodná vrstva sa extrahovala s EtOAc. Spojené organické vrstvy sa premyli s H2O, vysušili (MgSOJ,
-81 a skoncentrovali, čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (60 mg, ako žltý olej: MS (ES) m/e 491,3 (M+H)+.
c) Kyselina (±)-10,11-dihydro-3-(3-[4-(etyltio)pyridín-2-ylamino]-1-propyloxy]-5/-/dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Podľa postupu z Príkladu 6(c), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-3-[3-[4-(etyltio)pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén10-acetátu za etyl-(R)-10,11-dihydro-3-(3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, bola pripravená látka z názvu tohto odstavca žltej farby; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,77 - 7,76 (d, 1H), 7,17 - 7,15 (d, 1H), 7,13 - 7,12 (d, 2H), 7,08 - 7,07 (m, 1H), 6,96 - 6,94 (d, 1H), 6,81 - 6,80 (s, 1H), 6,68
- 6,67 (d, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,35 - 6,33 (d, 2H), 6,30 (s, 1H), 4,20 - 4,16 (d, 1H), 3,99 - 3,96 (t, 2H), 3,89 - 3,85 (d, 1H), 3,65 - 3,63 (m, 1H), 3,36 - 3,32 (m, 2H), 3,22
- 3,15 (m, 1H), 2,96 - 2,90 (m, 2H); 2,85 - 2,78 (m, 1H), 2,62 - 2,56 (m, 2H), 1,94 1,90 (m, 2H), 1,26 -1,22 (t, 3H); MS (ES) m/e 463,4 (M+H)+.
Príklad 11
Príprava kyseliny (±)-10,11-dihydro-2-metyl-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-2-metyl-3-[3-[/V-(ŕerc-butoxykarbonyl)-/V-(1 -oxopyridín-2yl)amino]-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
NaH (60 % disperzia v minerálnom oleji (0,14 g, 0,37 mmol) sa pridal do roztoku ety l-(±)-10,11 -dihydro-3-hydroxy-2-metyl-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10acetát (100 mg, 0,32 mmol) v DMSO (2 ml) pod argónovou atmosférou a reakčná zmes sa premiešavala pri laboratórnej teplote počas 0,5 hodiny. Potom sa po kvapkách pridal roztok 2-[/V-(3-metánsulfonyloxy-1-propyl)-A/-(ŕerc-butoxykarbonyl)amino]-pyridín-/V-oxidu (160 mg, 0,4 mmol) v DMSO (1 ml). Reakčná zmes sa premiešavala pri laboratórnej teplote pod argónovou atmosférou počas 18 hodín, potom sa reakcia zastavila s vodou (20 ml) a extrahovala sa s EtOAc. Vysušenie
-82(MgSO4), skoncentrovanie a chromatografia na silikagéli (1 % hmotnostné MeOH/CH2CI2) poskytli látku z názvu tohto odstavca (85 mg, 42 %) ako bezfarebný olej: MS (ES) m/e 561,3 (M+H)+.
b) Etyl-(±)-10,11-dihydro-2-metyl-3-[3-(1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5Hd ibenzo[a.djcykloheptén-10-acetát
TFA (0,16 g, 1,4 mmol) sa pridal po kvapkách do roztoku ety 1-(+)-10,11dihydro-2-metyl-3-[3-[/V-(ŕera-butoxykarbonyl)-/V-(1-oxopyridín-2-yl)amino]-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát (80 mg, 0,14 mmol) v suchom CH2CI2 (3 ml). Reakčná zmes sa premiešavala počas 5 hodín, potom sa skoncentrovala na rotačnej odparovačke, čím poskytla látku z názvu tohto odstavca (60 mg, 43 %) ako bezfarebný olej: MS (ES) m/e 461,1 (M+H)\
c) Etyl-(±)-10,11-dihydro-2-metyl-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)-5F/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 6(b), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-2-metyl-3-[3-(1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu za etyl-(ft)-10,11-dihydro-3-[3-(1-oxopyridin-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, bola pripravená látka z názvu tohto odstavca ako špinavobiela tuhá látka: MS (ES) m/e 417,3 (M+H)+.
d) Kyselina (±)-10,11-dihydro-2-metyl-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Podľa postupu z Príkladu 6(c), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-2-metyl-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,djcykloheptén10-acetátu za etyl-(R)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako špinavobiela tuhá látka: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,75 (d, 1H), 7,65 (t, 1H), 7,15 (m, 3H), 7,05 (m, 1H), 6,83 (s, 1H), 6,7 (d, 1H), 6,65 (m, 1H), 6,60 (s, 1H), 4,25 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 4,05 (t, 2H), 3,80 (m, 1H), 3,75 (d, J = 15,1 Hz. 1H), 3,50 (t, 2H).
-833,25 (dd, 1H), 2,85 (dd, 1H), 2,68 (dd, 1H), 2,60 (dd, 1H), 2,15 (t, 2H), 2,10 (s, 3H); MS (ES) m/e 417,3 (M+H)+.
Príklad 12
Príprava kyseliny (±)-10,11-dihydro-2-(dimetylamino)metyl-7-fluór-3-[3-(pyridín-2ylamino)-1-propyloxy]-5/7-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-octovej
a) Ety l-(±)-10,11 -d i h y d ro-2-(d imetylamino)metyl-7-fluór-3-[3-( 1 -oxopyrid í η-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5W-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 6(a), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-2-(dimetylamino)metyl-7-fluór-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10acetát za etyl-(ŕ?)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca po chromatografii na silikagéii (gradient: 1:1 EtOAc:hexány, potom EtOAc, potom 20 % hmotnostných MeOH/CH2CI2, potom 30 % hmotnostných MeOH/CH2CI2): MS (ES) m/e 522,3 (M+H)+.
b) Etyl-(±)-10,11-dihydro-2-(dimetylamino)metyl-7-fluór-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1propyloxy]-5H-d ibenzo[a, d]-cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 6(b), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-2-(dimetylamino)-metyl-7-fluór-3-[3-(1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu za etyl-(R)-10,11-dihydro-3-[3-(1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca po chromatografii na silikagéii (10 % hmotnostných MeOH/CH2CI2): MS (ES) m/e 506,2 (M+H)+.
c) Kyselina (±)-10,11-dihydro-2-(dimetylamino)metyl-7-fluór-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-octová
Saponifikácia sa uskutočnila podľa postupu z Príkladu 6(c), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11-dihydro-2-(dimetylamino)metyl-7-fluór-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu za ety!-(/?)-10,11 -di-84hydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát. Reakčná zmes sa okyslila s ľadovou HOAc a surový produkt sa odsolil pomocou chromatografie na XAD-2 vymieňači iónov, čím poskytol látku z názvu tohto odstavca ako bielu tuhú látku: MS (ES) m/e 478,3 (M+Hf. Elementárna analýza: Vypočítané pre C30H36FN3O5.1,25H2O: C, 64,32; H, 6,92; N, 7,50, Nájdené: C, 63,87; H, 6,47; N, 7,96.
Príklad 13
Príprava kyseliny (S)-10,11 -dihydro-3-(3-(4-metyl-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5H-d ibenzo[a.djcykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-metyl-1 -oxopyridin-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Roztok 2-[(3-hydroxy-1-propyl)amino)-4-metylpyridín-/\/-oxidu (1,72 g, 9,45 mmol) a dietyl-azodikarboxylátu (1,49 ml, 9,45 mmol) v bezvodom DMF (50 ml) sa pridal po kvapkách počas 10 minút do roztoku etyl-(S)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5Hd ibenzoja,djcykloheptén-10-acetátu (1,4 g, 4,72 mmol) a trifenylfosfínu (2,60 g, 9,92 mmol) v bezvodom DMF (50 ml) pri laboratórnej teplote pod argónovou atmosférou. Po 19 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala na rotačnej odparovačke a zvyšok sa rekoncentroval z xylénov, čím sa odstránil zvyšný DMF. Chromatografia na silikagéli (gradient: 30 % hmotnostných EtOAc/hexány (0,5 I), potom EtOAc (1 I), potom 5 % hmotnostných MeOH/CHCI3) poskytla látku z názvu tohto odstavca (1,31 g, 60 %) ako žltý olej: MS (ES) m/e 461,3 (M+H)+.
b) Etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Zmes etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-metyl-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (0,86 g, 1,87 mmol), 10 % Pd/C (0,86 g, 0,81 mmol), cyklohexénu (1,89 ml, 18,7 mmol) a izopropanolu (20 ml) sa zahrievala pod refluxom pod argónovou atmosférou počas 19 hodín, potom sa katalyzátor odstránil pomocou filtrácie cez Celíte®. Chromatografia na silikagéli
-85(1:9:10 MeOH/CH2CI2/EtOAc) poskytla látku z názvu tohto odstavca (0,65 g, 78 %) ako číry olej: MS (ES) m/e 445,2 (M+H)+.
c) Kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Zmes etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy)5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (2,08 g, 4,69 mmol) a 1,0 mol/l NaOH (7,0 ml, 7,0 mmol) v absolútnom EtOH (45 ml) sa zahrievala v olejovom kúpeli nastavenom na 45 °C. Po 18 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala na rotačnej odparovačke a pH sa nastavilo na hodnotu 7 s 1,0 mol/l HCI. Tuhá zrazenina sa oddelila a premyla sa s H2O. Vysušenie počas noci poskytlo látku z názvu tohto odstavca (1,61 g, 82 %) ako takmer bezfarebnú tuhú látku: MS (ES) m/e 417,4 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C26H28N2O3.1,0H2O: C, 71,87; H, 6,96; N, 6,45, Nájdené: C, 71,63; H, 6,96; N, 6,30.
Príklad 14
Príprava kyseliny (S)-10,11-dihydro-3-[3-[4-(2-propyloxy)pyridín-2-ylamino]-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-octovej
a) lzopropyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-[4-(2-propyloxy)-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Zmes etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-nitro-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy)-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (0,2 g 0,4 mmol) a izopropoxidu sodného (0,067 g, 0,8 mmol) v izopropanole (5 ml) sa zahrievala na 80 °C počas
3,5 hodiny, potom sa pridal ďalší izopropoxid sodný (0,05 g, 0,6 mmol) a reakčná zmes sa premiešavala pri laboratórnej teplote počas noci. Skoncentrovanie a chromatografia na silikagéli (gradient: 5 % až 15 % hmotnostných MeOH/CH2CI2) poskytla látku z názvu tohto odstavca (0,106 g, 52 %) ako svetlý hnedý olej: MS (ES) 519,3 (M+H)+.
-86b) lzopropyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-[4-(2-propyloxy)pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]~ 5H-d ibenzo[a ,d]cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 13(b), s výnimkou nahradenia izopropyl-(S)10,11 -dihydro-3-[3-[4-(2-propyloxy)-1 -oxopyridín-2-ylamino]-1 -propyloxy]-5B-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu za etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-metyl-1 -oxopyridín2-ylamino)-1-propyloxy)-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako slabo žltý olej po chromatografii na silikagéii (5 % hmotnostných MeOH/CH2CI2): MS (ES) 503,4 (M+H)+.
c) Kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-[4-(2-propyloxy)pyridín-2-ylamino]-1-propyloxy]5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-octová
Podľa postupu z Príkladu 13 (c), s výnimkou nahradenia izopropyl-(S)10,11-dihydro-3-[3-[4-(2-propyloxy)pyridín-2-ylamino]-1-propyloxy)-5AY-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu za etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylamino)-1propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako biely prášok: MS (ES) 461,3 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C28H32N2O4 0.96HCI: C, 67,86; H, 6,70; N, 5,65, Nájdené: C, 68,26; H, 6,86; N, 5,25.
Príklad 15
Príprava kyseliny (S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-chlórpyridin-2-ylamíno)-1-propyloxy]-5/7dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-chlór-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5Hdibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetát
Roztok etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-nitro-1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát (0,47 g, 0,96 mmol) v acetylchloride (7 ml, 98 mmol) sa zahrievala pod refluxom počas 1 hodiny. Reakčná zmes sa vyliala do ľadu (50 g) a hodnota pH sa nastavila na 8,0 použitím nasýteného roztoku NaHCO3 (pozor: prudko šumí!). Zmes sa extrahovala s CH2CI2(2 x 100 ml) a spojené organické vrstvy sa premyli postupne s H2O (50 ml) a soľankou (50 ml).
-87Vysušenie (MgSOJ a skoncentrovanie poskytli látku z názvu tohto odstavca: MS (ES) 481,2 (M+H)+.
b) Etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-chlórpyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Zmes etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-chlór-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát (0,13 g, 0,27 mmol) a 2,0 mol/l PCI3 v CH2CI2(8 ml, 16 mmol) sa zahrievala pod refluxom počas 22 hodín. Reakčná zmes ochladila a vyliala do ľadu (200 g) a hodnota pH sa nastavila na 12 použitím 40 % hmotnostných NaOH. CH2CI2(2 x 100 ml) extrakcia, vysušenie (MgSOJ, skoncentrovanie a chromatografia na silikagéli (4 % hmotnostných MeOH/CH2CI2) poskytli látku z názvu tohto odstavca (93 mg, 74 %) ako svetlý žltý olej: MS (ES) 465,3 (M+H)+.
c) Kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-chlórpyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Podľa postupu z Príkladu 13(c), s výnimkou nahradenia etyl-(S)-10,11dihydro-3-[3-(4-chlórpyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén10-acetátu za etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako špinavobiely prášok: MS (ES) 437,2 (M+Hf. Elementárna analýza: Vypočítané pre C25H25N2O3.1,0HCI: C, 63,43; H, 5,54; N, 5,92, Nájdené: C, 63,11; H, 5,82; N, 5,62.
Príklad 16
Príprava kyseliny (S)-10,11-dihydro-3-[3-[4-(dimetylamino)pyridín-2-ylamino]-1propyloxy]-5ŕ/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-chlór-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5/-/dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Roztok etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-nitro-1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (0,47 g, 0,96 mmol) v acetylchloride (7
-88ml, 98 mmol) sa zahrievala pod refluxom počas 1 hodiny. Reakčná zmes sa vyliala do ľadu (50 g) a hodnota pH sa nastavila na 8,0 použitím nasýteného roztoku NaHCO3 (pozor: prudko šumí!). Zmes sa extrahovala s CH2CI2 (2 x 100 ml) a spojené organické vrstvy sa premyli postupne s H2O (50 ml) a soľankou (50 ml). Vysušenie (MgSO„) a skoncentrovanie poskytli surovú látku z názvu tohto odstavca, ktorá sa použila ďalej bez ďalšieho čistenia. MS (ES) 481,3 (M+H)+.
b) Ety l-(-S)-10,11 -dihydro-3-[3-[4-(dimetylamino)-1 -oxopyridín-2-ylamino]-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Zmes etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-chlór-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy)-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (0,96 mmol) a 2,0 mol/l dimetylamínu v MeOH (3 ml, 6 mmol) sa refluxoval počas 16 hodín. Skoncentrovanie a chromatografia na silikagéli (7 % hmotnostných MeOH/CH2CI2) poskytla látku z názvu tohto odstavca (0,049 g, 10 %) ako svetlý hnedý prášok: MS (ES) 490,3 (M+H)+. Nezmenený etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-chlór-1-oxopyridín-2-ylamino)-1propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát sa tiež získal z chromatografického čistenia.
c) Etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-[4-(dimetylamino)pyridín-2-ylamino]-1 -propyloxy]-5/-/dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 13(b), s výnimkou nahradenia etyl-(S)-10,11dihydro-3-[3-ú4-(dimetylamino)-1-oxopyridín-2-ylamino]-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu za etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-metyl-1-oxopyridín-2ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako biely prášok po chromatografii na silikagéli (8 % hmotnostných MeOH/CH2CI2); MS (ES) 474,3 (M+H)+.
d) Kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-[4-(dimetylamino)pyridín-2-ylamino]-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Podľa postupu z Príkladu 13(c), s výnimkou nahradenia etyl-(S)-10,11dihydro-3-[3-[4-(dimetylamino)pyridín-2-ylamino]-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]-cyk-89loheptén-10-acetátu za etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylamino)-1propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako biely prášok: MS (ES) 446,2 (M+Hf. Elementárna analýza:
Vypočítané pre C27H31N3O3.0,5H2O.1,0HCI: C, 66,04; H, 6,77; N, 8,56, Nájdené; C,
65,96; H, 6,60; N, 8,26.
Príklad 17
Príprava kyseliny (S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-etoxypyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-etoxy-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5Hdibenzo[a,b]cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 2(a), s výnimkou nahradenia etyl-(S)-10,11dihydro-3-[3-(4-nitro-1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5A7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (496,9 mg, 1,01 mmol) za etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-nitro-1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát a použitím 0,53 mol/l NaOEt (4,0 ml, 2,12 mmol) a absolútnom etanole (10 ml) v reakcii nahradenia, bola pripravená látka z názvu tohto odstavca (456,2 mg, 92 %): MS (ES) m/e 491 (M+Hf.
b) Etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-etoxypyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 2(b), s výnimkou nahradenia etyl-(S)-10,11dihydro-3-[3-(4-etoxy-1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (456,2 mg, 0,93 mmol) za etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-etoxy-1oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, bola pripravená látka z názvu tohto odstavca (475,2 mg, kvantitatívne): MS (ES) m/e 475 (M+Hf.
-90c) Kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-etoxypyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)-5/-/dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
1,0 mol/l NaOH (2,0 ml, 2,0 mmol) sa pridal do roztoku etyl-(S)-10,11dihydro-3-[3-(4-etoxypyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén10-acetátu (475,2 mg, 1,0 mmol) v absolútnom etanole (10 ml) a roztok sa zahrieval na 50 °C v olejovom kúpeli. Po 20 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala a vodný zvyšok sa ochladil na 0 °C v ľadovom kúpeli. Za premiešavania sa pomaly pridal 1,0 mol/l vodného roztoku HCI (2,0 ml, 2,0 mmol). Vyzrážal sa nepriehľadný tuhý zvyšok a oddelil sa pomocou filtračného lievika s fritou. Vysušenie vo vákuovom exsikátore počas noci poskytlo látku z názvu tohto odstavca (452,6 mg, 83 %): MS (ES) m/e 447 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C27H30N2O4 0,20H20.1,75HCI: C, 63,10; H, 6,30; N, 5,45, Nájdené: C, 63,10; H, 5,98;N,5,38.
Príklad 18
Príprava kyseliny (±)-10,11-dihydro-7-fluór-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-7-fluór-3-[3-( 1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5/7dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 6(a), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-7-fluór-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu za etyl-(/?)-10,11 dihydro-3-hydroxy-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako bezfarebný olej po chromatógrafii na silikagéli (gradient: 1:1 EtOAc/hexány, potom EtOAc, potom 4 % hmotnostné MeOH/CH2CI2): MS (ES) m/e
465,3 (M+H)+.
b) Etyl-(±)-10,11-dihydro-7-fluóro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 6(b), s výnimkou nahradenia Etyl-(±)-10,11dihydro-7-fluór-3-[3-(1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu za etyl-(R)-10,11-dihydro-3-[3-(1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyl-91 oxy]-5H-dibenzo[a,djcykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca: MS (ES) m/e 449,2 (M+H)+
c) Kyselina (±)-10,11-dihydro-7-fluór-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Podľa postupu z Príkladu 6(c), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-7-fluór-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén10-acetátu za etyl-(R)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca; MS (ES) m/e 421,1 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C25H25FN2O3.0,5H2O: C, 69,99; H, 6,10; N, 6,52, Nájdené: C, 69,86; H, 5,90; N, 6,35.
Príklad 19
Príprava kyseliny (±)-10,11-dihydro-6-metyl-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-6-metyl-3-[3-(1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5/-/d ibenzofa, djcykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 6(a), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11 dihydro-3-hydroxy-6-metyl-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu za etyl-(R)10,11dihydro-3-hydroxy-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako bezfarebný olej po chromatografii na silikagéli (gradient: 1:1 EtOAc/hexány, potom EtOAc, potom 4 % hmotnostné MeOH/CH2CI2): MS (ES) m/e
461,3 (M+H)+.
b) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-6-metyl-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Podľa postupu z Príkladu 6(b), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11dihydro-6-metyl-3-[3-(1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-acetátu za etyl-(R)-10,11-dihydro-3-[3-(1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca
-92po chromatografií na silikagéli (1 % hmotnostné MeOH/CH2CI2): MS (ES) m/e 445,3 (M+H)+.
c) Kyselina (±)-10,11-dihydro-6-metyl-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Podľa postupu z Príkladu 6(c), s výnimkou nahradenia etyl-(±)-10,11-dihydro-6-metyl-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10acetátu za etyl-(R)-10,11-dihydro-3-(3-(pyridln-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát, sa získala látka z názvu tohto odstavca ako biela tuhá látka: MS (ES) m/e 417,3 (M+H)\ Elementárna analýza: Vypočítané pre C26H28N2O3.1,25H2O: C, 71,13; H, 7,02; N, 6,38, Nájdené: C, 71,33; H, 6,67; N, 6,01.
Príklad 20
Príprava kyseliny (S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-aminopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) Etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-nitro-1 -oxopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy)-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetát
Roztok diizopropyl-azodikarboxylátu (1,7 ml, 8 mmol) v THF (30 ml) sa pridal po kvapkách do roztoku etyl-(S)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (426,5 mg, 1,5 mmol), 2-[(3-hydroxy-1-propyl)amino]-4-nitropyridín-W-oxidu (1,7 g, 8 mmol) a trifenylfosfín u (2,5 g, 8 mmol) v bezvodom DMF (20 ml) pri 0 °C pod argónovou atmosférou. Žltý roztok sa udržiaval pri 0 °C počas 10 minút, potom sa zahrial na laboratórnu teplotu. Po 23 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala. Chromatografia na silikagéli (gradient; 30 % až 100% hmotnostných EtOAc/hexány) poskytla látku z názvu tohto odstavca (2,7 g, 81 %) ako oranžovú penu: MS (ES) m/e 491,8 (M+H)+.
b) Etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-aminopyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy)-5Hdibenzo[a,d]cyklobeptén-10-acetát
-93Zmes etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-nitro-1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (2,7 g, 6 mmol), cyklohexénu (6 ml, 60 mmol), 10 % Pd/C (1,2 g 1,10 mmol) a izopropanolu (30 ml) sa zahrievala pod refluxom pod argónovou atmosférou počas 20,5 hodiny, potom sa za horúca prefiltrovala cez Celíte®. Vrstva na filtri sa premyla s horúcim EtOAc a spojené filtráty sa skoncentrovali. Zvyšok sa chromatografoval na silikagéli (5 % hmotnostných MeOH/CHCIg), čím poskytol látku z názvu tohto odstavca (2,4 g, 98 %) ako bezfarebnú penu; MS (ES) m/e 445,9 (M+H)+.
c) Kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-aminopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Zmes etyl-(S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-aminopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)5A7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-acetátu (2,4 g, 5 mmol), LiOH H2O (0,3 g, 7 mmol), THF (30 ml) a H2O (10 ml) sa premiešavala pri laboratórnej teplote počas 48 hodín, potom sa skoncentrovala. Zvyšok sa zriedil s H2O a extrahoval s Et2O. Et2O vrstvy sa vyhodili. Vodná vrstva sa premiešavala s jemným zahrievaním za vákua, čím sa odstránili zvyšné organické rozpúšťadlá, potom sa prefiltrovala. Výsledný vodný roztok sa premiešaval pri laboratórnej teplote, pričom sa hodnota pH pomaly a opatrne nastavila na 5,5 až 6,0 s 1,0 mol/l HCl. Zmes sa premiešavala počas 0,5 hodiny, potom sa tuhá látka oddelila filtráciou s odsávaním a premyla sa s veľkým množstvom H2O. Vysušenie vo vysokom vákuu pri 60 °C poskytlo látku z názvu tohto odstavca (1,0 g, 42 %) ako sklovitú tuhú látku: MS (ES) m/e 417,7 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C25H27N3O3.1,4HCI (468,554): C, 64,08; H, 6,11; N, 8,97, Nájdené: C, 64,16; H, 6,20; N. 8,71.
Príklad 21
Príprava kyseliny (±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]dibenzo[b,f]oxepín-10-octovej
a) Etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-metyl-1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-dibenzo[b,f]oxepín-10-acetát
-94Zmes etyl-(±)-10,11-dihydro-3-hydroxydibenzo[b,f]oxepín-10-acetátu (257 mg, 0,86 mmol), hydrobromidu 2-[(3-bróm-1-propyl)amino]-4-metylpyridín-/\/-oxidu (308 mg, 0,94 mmol), NaOH peliet (110 mg, 2,75 mmol) a CH3CN (4 ml) sa premiešavala pri laboratórnej teplote pod argónovou atmosférou počas noci. Zmes sa prefiltrovala a tuhé látky sa premyli s CH3CN. Filtrát sa skoncentroval a zvyšok sa podrobil rýchlej chromatografii na silikagéli (1 až 2,5 % hmotnostného CH3OH/CH2CI2), čím poskytol látku z názvu tohto odstavca (190 mg, 48 %) ako bielu penu: MS (ES) m/e 462,6 (M+H)+.
b) Etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-dibenzo[b,f]oxepín-10-acetát
Zmes etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-metyl-1-oxopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]dibenzo[b,f]oxepín-10-acetátu (183 mg, 0,4 mmol), 10 % Pd/C (85 mg, 0,08 mmol), cyklohexénu (810 mg, 8 mmol) a izopropanolu (4 ml) sa zahrievala pod refluxom počas noci. Katalyzátor sa odstránil pomocou filtrácie cez Celíte® a filtračný koláč sa premyl éterom. Filtrát sa skoncentroval, čím poskytol látku z názvu tohto odstavca (122 mg, 68 %) ako číry olej: MS (ES) m/e 446,9 (M+H)+.
c) Kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)-dibenzo[b,f]oxepín-10-octová
Zmes etyl-(±)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy)-dibenzo[b,f]oxepín-10-acetátu (119 mg, 0,27 mmol) a 0,991 mol/l NaOH (0,545 ml, 0,54 mmol) v absolútnom EtOH (2 ml) sa zahriala v olejovom kúpeli nastavenom na 45 °C. Po 20 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala na rotačnej odparovačke a zvyšok sa rozpustil v H2O (1,5 ml). Roztok sa prefiltroval, čím sa odstránil nerozpustný materiál a filtrát sa opatrne neutralizoval pomocou pridávania po kvapkách 1,0 mol/l HCI (0,54 ml, 0,54 mmol). Zrazenina sa oddelila a vysušila vo vysokom vákuu, čím poskytla látku z názvu tohto odstavca (68 mg, 58 %) ako bielu tuhú látku: MS (ES) m/e 418,9 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C25H26N2O4.0,45HCI: C, 69,05; H, 6,13; N, 6,44, Nájdené: C, 69,25; H, 6,27; N, 6,16.
-95Príklad 22
Príprava kyseliny (±)-10,11-dihydro-3-[2-[6-(metylamino)pyridín-2-yl]-1-etoxy]dibenzo[b,f]oxepín-10-octovej
a) Etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[2-6-[A/-ŕerc-butoxykarbonyl)-A/-metylamino]pyridín-2-yl]1 -etoxy]dibenzo[b,f]oxepín-10-acetát
Roztok 6-[/V-(ŕerc-butoxykarbonyl)-/\/-metylamino]-2-pyridyletanolu (397 mg, 1,58 mmol) a diizopropyl-azodikarboxylátu (0,31 ml, 1,58 mmol) v bezvodom CH2CI2 (8 ml) sa pridal po kvapkách počas 10 minút do roztoku Etyl-(±)-10,11-dihydro-3hydroxydibenzo[b,f]oxepín-10-acetátu (186 mg, 0,63 mmol) a trifenylfosfínu (413 mg, 1,58 mmol) v bezvodom CH2CI2(3,2 ml) pri laboratórnej teplote pod argónovou atmosférou. Po 22 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala na rotačnej odparovačke a zvyšok sa podrobil rýchlej chromatografii na silikagéli (2 až 13 % hmotnostných EtOAc/hexány), čím sa poskytla látka z názvu tohto odstavca (146 mg, 44 %) ako číry olej: MS (ES) m/e 533,0 (M+ H)+.
b) Kyselina etyl-(±)-10,11-dihydro-3-(2-[6-(metylamino)pyridín-2-yl]-1-etoxy]dibenzo[b,f]-oxepín-10-octová mol/l HCI v dioxáne (1,3 ml, 5,2 mmol) sa pridala po kvapkách do roztoku Ety 1-(+)-10,11 -dihydro-3-[2-6-[/V-ŕerc-butoxykarbonyl)-/V-metylamino]pyridín-2-yl]-1 etoxy]dibenzo[b,f]oxepín-10-acetátu (140 mg, 0,26 mmol) vCH2CI2(1,3 ml). Po 12 hodinách sa zmes skoncentrovala a zvyšok sa rozotrel s éterom, čím poskytol látku z názvu tohto odstavca ako bielu tuhú látku: MS (ES) m/e 432,9 (M+H)+.
c) Kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[2-[6-(metylamino)pyridín-2-yl]-1-etoxy]dibenzo[b,f]oxepín-10-octová
Zmes kyseliny etyl-(±)-10,11-dihydro-3-[2-[6-(metylamino)pyridín-2-yl)-1etoxy]dibenzo-[b,f]-oxepín-10-octovej (0,26 mmol) a 0,991 mol/l NaOH (0,525 ml, 0,52 mmol) v absolútnom EtOH (2 ml) sa zahrievala v olejovom kúpeli nastavenom na 50 °C. Po 20 hodinách sa reakčná zmes skoncentrovala na rotačnej
-96odparovačke a zvyšok sa rozpustil v H2O (1,5 ml). Roztok sa prefiltroval, čím sa odstránil nerozpustný materiál a filtrát sa opatrne neutralizoval pomocou pridávania po kvapkách 1,0 mol/l HCI. Zrazenina sa oddelila a vysušila vo vysokom vákuu, čím poskytla látku z názvu tohto odstavca (72 mg, 30 % pre 2 kroky) ako špinavobielu tuhú látku: MS (ES) m/e 405,0 (M+H)+. Elementárna analýza: Vypočítané pre C24H24N2O4.1,25HCI.0,25H2O: C, 63,42; H, 5,7 1; N, 6,16, Nájdené: C, 63,35; H, 5,9; N, 6,16.
Príklad 23
Príprava kyseliny (S)-10,11-dihydro-3-[3-(2-aminopyridín-4-yl)-1-propyloxy]-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-octovej
a) 3-(2-Aminopyridín-4-yl)propán-1-ol
Suspenzia hydrochloridu kyseliny 3-(2-aminopyridín-4-yl)propánovej (0,73 g, 3,60 mmol, pripravenej podľa WO94/14776 v THF (10 ml) sa pridala počas 45 minút k hydridu hlinito-lítnemu (12 ml, 12 mmol, 1 mol/l v THF) pri 0 °C. Ľadový kúpeľ sa odstránil a reakčná zmes sa nechala premiešavať pri laboratórnej teplote počas 4,5 hodiny. Reakčná zmes sa ochladila na 0 °C, zriedila s toluénom (22 ml) a reakcia sa zastavila pomocou postupného pridávania H2O (0,86 ml) a NaF (1,54 g). Výsledná suspenzia sa premiešavala pri 0 °C počas 45 minút. Reakčná zmes sa prefiltrovala a zrazenina sa premyla s ďalším roztokom 10 % hmotnostných MeOH v CHCI3. Spojené filtráty sa skoncentrovali za zníženého tlaku. Rýchla chromatografia (10 % hmotnostných MeOH/CHCI3, silikagél) poskytla 0,25 g požadovaného materiálu ako číry olej: MS(ES+) m/z 152,7 [M+H)\
b) Etyl-(S)-10,11 -dihydro-3-[3-(2-aminopyridín-4-yl)-1 -propyloxy]-5Hdibenzo-[a,djcykloheptén-1 0-acetát
Roztok z Príkladu 1(a) (0,23 g, 1,51 mmol) a di-izopropylazadikarboxylát (0,29 ml, 1,50 mmol) v CH2CI2 (7,5 ml) sa pridal po kvapkách do roztoku trifenylfosfínu (0,39 g, 1,50 mmol) a etyl-2-[(10S)-3-hydroxy-10,11-dihydro-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-yl]acetátu (0,30 g, 1,00 mmol) v CH2CI2 (5 ml) pri 0 °C.
-97ľadový kúpeľ sa odstránil a reakčná zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu. Po 18 hodinách sa rozpúšťadlo odstránilo za zníženého tlaku. Rýchla chromatografia (50 % hmotnostných EtOAc/hexány až 100 % hmotnostných EtOAc, silikagél) poskytla 0,32 g materiálu, ktorý obsahoval požadovaný produkt. Druhé čistenie pomocou rýchlej chromatografie (75 % až 90 % hmotnostných EtOAc/hexány, silikagél) poskytlo 0,23 g požadovaného materiálu: MS(ES+) m/e
430,9 [M+Hf.
c) Kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-(2-aminopyridín-4-yl)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová
Látka z Príkladu 1(b) (0,22 g, 0,50 mmol) sa rozpustila v 1 mol/l NaOH (0,77 ml, 0,77 mmol), EtOH (3 ml) a THF (3 ml). Po zahrievaní reakčnej zmesi na 50 °C počas 18 hodín sa rozpúšťadlo odstránilo za zníženého tlaku. Zvyšok sa rozpustil v H2O (4 ml) a prefiltroval sa. Filtrát sa okyslil s 30 % TFA v H2O a výsledná zrazenina sa oddelila. Preparatívna HPLC (Hamilton PRP-1 ®, 3 % hmotnostné CH3CN/H2O-0,1 % hmotnostného TFA) poskytla 10 mg požadovaného materiálu ako hygroskopickú tuhú látku: MS(ES+) m/z 402,6 [M+H)+.
Príklad 24
Parenterálna kompozícia s jednotkovou dávkou
Prípravok, ktorý obsahuje 20 mg látky z Príkladu 1 ako sterilný suchý prášok sa pripravil nasledujúcim spôsobom: 20 mg látky sa rozpustilo v 15 ml destilovanej vody. Roztok sa prefiltroval za sterilných podmienok do 25 ml multidávkovej ampuly a lyofilizoval sa. Prášok sa rekonštituuje pridávaním 20 ml roztoku 5 % dextrózy vo vode (D5W) pre intravenózne alebo intramuskulárne injekcie. Dávka je teda určená objemom injekcie. Následné zriedenie sa môže urobiť pridávaním odmeraného objemu tejto dávkovej jednotky do ďalšieho objemu D5W pre injekcie, alebo sa odmeraná dávka môže pridať do iného mechanizmu na dávkovanie liečiva, ako napríklad fľaša alebo vak pre IV kvapkajúcu infúziu alebo iný injekčno-infúzny systém.
-98Príklad 25
Orálna kompozícia s jednotkovou dávkou
Kapsuly na orálne podávanie sa pripravili zmiešaním a mletím 50 mg látky z Príkladu 1 so 75 mg laktózy a 5 mg stearanu horečnatého. Výsledný prášok sa triedil a plnil do tvrdej želatínovej kapsuly.
Príklad 26
Orálna kompozícia s jednotkovou dávkou
Tableta pre orálne podávanie sa pripravila zmiešaním a granulovaním 20 mg sacharózy, 150 mg dihydrátu síranu vápenatého a 50 mg látky z Príkladu 1 s roztokom 10 % hmotnostných želatíny. Vlhké granuly sa triedili, vysušili, zmiešali s 10 mg škrobu, 5 mg mastenca a 3 mg kyseliny stearovej; a zlisovali sa na tabletu.
Vyššie uvedený opis úplne opisuje ako urobiť a používať tento vynález. Vynález však nie je obmedzený na konkrétne uskutočnenia opísané v tomto dokumente vyššie, ale zahrnuje všetky ich modifikácie v rozsahu nasledujúcich patentových nárokov. Rôzne odkazy na časopisy, patenty a iné publikácie, ktoré sú citované v tomto dokumente zahrnuje doterajší stav techniky a sú v tomto dokumente včlenené ako odkaz, aby bol úplne uvedený.

Claims (33)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Zlúčenina obsahujúca dibenzocyklohepténové jadro všeobecného vzorca I kde
    A znamená CH2 alebo O;
    R1 znamená H, halogén alebo C^alkyl;
    R2znamená H, C^alkyl alebo CH2NRR; X znamená O alebo CH2;
    Y znamená alebo
    G znamená NR, S alebo O;
    -100R' znamená H, CMalkyl, OCMalkyl, S CMalkyl, NRR alebo halogén; každý R je nezávisle H alebo CMalkyl; a s je 0, 1 alebo 2;
    alebo jej farmaceutický prijateľná soľ.
  2. 2. Zlúčenina podľa nároku 1, v ktorej Y je
    K -NR
    R’ kde R' je H, CMalkyl, OCMalkyl, SCMalkyl, NRR alebo Cl a každý R je nezávisle H alebo CMalkyl.
  3. 3. Zlúčenina podľa nároku 1, v ktorej Y je kde každý R je H alebo C1.4alkyl,
  4. 4. Zlúčenina podľa nároku 1, v ktorej Y je
    N -NR“NR kde kde každý R je nezávisle H alebo C1.4alkyl a s je 1.
    -101
  5. 5. Zlúčenina podľa nároku 1, v ktorej Y je kde G je S a každý R“ je nezávisle H alebo C14alkyl.
  6. 6. Zlúčenina podľa nároku 1, v ktorej Y je kde R je H alebo C^alkyl.
  7. 7. Zlúčenina podľa nároku 1, ktorá je vybraná zo skupiny: kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[2-(6-aminopyridín-2-yl)-1-etoxy)-5ŕY-dibenzo[a,djcykloheptén-10-octová;
    kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[4-(pyridín-2-ylamino)-1-butyl)-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-octová;
    kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-etoxypyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo [a,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/7-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (R)-10,11-dihydro-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[3-(3,4,5,6-tetrahydropyrimidín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/-/-d ibenzo[a ,d]-cy kloheptén-10-octová;
    kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[2-[2-(etylamino)tiazol-4-yl]-1-etoxy]-5H-dibenzo[a.d]cykloheptén-10-octová;
    -102kyselina (±)-10,11 -dihydro-3-[3-(izochinolín-1 -ylamino)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (±)-10,11-dihydro-7-fluór-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxyJ-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-etoxypyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)-5/7-dibenzo[a ,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (±)-10,11-dihydro-6-metyl-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5/7-dibenzo[a ,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (±)-10,11 -dihydro-2-(dimetylamino)metyl-7-fluór-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1 propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-octová;
    kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-[4-(2-propyloxy)pyridín-2-ylamino]-1-propyloxy]-5H dibenzo[a,d]-cykloheptén-10-octová;
    kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[2-[6-(metylamino)pyridín-2-yl]-1-etoxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-[4-(dimetylamino)pyridín-2-ylamino]-1-propyl-oxy]5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (±)-10,11-dihydro-3-(3-[4-(etyltio)pyridín-2-ylamino]-1-propyloxy]-5Hdibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (S)-10,11 -dihydro-3-[3-(4-chlórpyridín-2-ylamino)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (±)-10,11-dihydro-2-metyl-3-[3-(pyridín-2-ylamino)-1-propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (S)-10,11-dihydro-3-[3-(4-aminopyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
    kyselina (±)-10,11-dihydro-3-[3-(4-metylpyridín-2-ylamino)-1-propyloxy)dibenzo[b,f]oxepín-10-octová;
    kyselina (±)-10,11 -dihydro-3-[2-[6-(metylamino)pyridín-2-yl]-1 -etoxy]dibenzo[b,f]oxepín-10-octová;
    alebo
    -103 kyselina (S)-10,11 -dihydro-3-[3-(2-aminopyridín-4-yl)-1 -propyloxy]-5H-dibenzo[a,d]cykloheptén-10-octová;
    alebo ich farmaceutický prijateľné soli.
  8. 8. Spôsob výroby zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1, v y značujúci sa tým, že zahrnuje pôsobenie zlúčeniny všeobecného vzorca V na zlúčeninu všeobecného vzorca IV kde R1, R2, Y a A sú určené pre všeobecný vzorec I, s chránenými reaktívnymi funkčnými skupinami, a L1 je OH alebo halogén;
    a potom odstránenie ochrannej skupiny, a voliteľne tvorbu farmaceutický prijateľnej soli.
  9. 9. Spôsob výroby zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1, v y značujúci sa tým, že zahrnuje pôsobenie zlúčeniny všeobecného vzorca VI na zlúčeninu všeobecného vzorca IV o-
    R’ (VI) kde R1, R2, R', R a A sú určené pre všeobecný vzorec I, s chránenými reaktívnymi funkčnými skupinami;
    a potom odstránenie ochrannej skupiny a voliteľne tvorbu a farmaceutický prijateľnej soli.
    -104
  10. 10. Spôsob výroby zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1, vyzná č u j ú c i sa tým, že zahrnuje pôsobenie zlúčeniny všeobecného vzorca VII na zlúčeninu všeobecného vzorca IV kde R1, R2, R a A sú určené pre všeobecný vzorec I, s chránenými reaktívnymi funkčnými skupinami;
    a potom odstránenie ochrannej skupiny a voliteľne tvorbu farmaceutický prijateľnej soli.
  11. 11. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje zlúčeninu podľa nároku 1 a farmaceutický prijateľný nosič.
  12. 12. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa t ý m, že obsahuje zlúčeninu podľa nároku 1, antineoplastické činidlo a farmaceutický prijateľný nosič.
  13. 13. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 12, vyznačujúci sa t ý m, že antineoplastické činidlo je topotekan.
  14. 14. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 12, vyznačujúci sa t ý m, že antineoplastické činidlo je cisplatina.
  15. 15. Zlúčenina podľa nároku 1 na použitie na liečenie chorobného stavu, pri ktorom je indikovaný antagonizmus receptora ανβ3.
    -105
  16. 16. Zlúčenina podľa nároku 1 na použitie na liečenie chorobného stavu, pri ktorom je indikovaný antagonizmus receptora ανβ5.
  17. 17. Zlúčenina podľa nároku 1 na použitie na liečenie osteoporózy.
  18. 18. Zlúčenina podľa nároku 1 na použitie na inhibovanie angiogenézy.
  19. 19. Zlúčenina podľa nároku 1 na použitie na inhibovania rastu tumoru alebo metastázy tumoru.
  20. 20. Zlúčenina podľa nároku 1 na použitie na liečenie aterosklerózy alebo restenózy.
  21. 21. Zlúčenina podľa nároku 1 na použitie na liečenie zápalu.
  22. 22. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 7 na použitie ako liečivo.
  23. 23. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie choroby, pri ktorej je indikovaný antagonizmus ανβ3 receptora.
  24. 24. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie choroby, pri ktorej je indikovaný antagonizmus ανβ5 receptora.
  25. 25. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie osteoporózy.
  26. 26. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na výrobu liečiva na inhibovanie angiogenézy.
    -10627. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na výrobu liečiva na inhibovanie rastu tumoru a metastázy tumoru.
  27. 28. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie aterosklerózy alebo restenózy.
  28. 29. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie zápalu.
  29. 30. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a antineoplastického činidla na výrobu liečiva na inhibovanie rastu tumoru vo fyzickej kombinácii alebo na postupné podávanie.
  30. 31. Použitie podfa nároku 30, vyznačujúce sa tým, že antineoplastické činidlo je topotekan.
  31. 32. Použitie podľa nároku 30, vyznačujúce sa tým, že antineoplastické činidlo je cisplatina.
  32. 33. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1 a inhibitora resorpcie kostí na výrobu liečiva na liečenie osteoporózy vo fyzickej kombinácii alebo na postupné podávanie.
  33. 34. Medziprodukt všeobecného vzorca II kde
    Y— (CH2)2.3—X
    F
    CO2C,.6alkyl (II)
    -107 A je CH2 alebo O;
    R1 je H, halogén alebo CMalkyl;
    R2je H, CMalkyl alebo CH2NRR; X je O alebo CH2;
    Y je alebo
    G je NR“, S alebo O;
    R' je H, CMalkyl, OC^alkyl, SCMalkyl, NR“R alebo halogén; každý R je nezávisle H alebo CMalkyl; a S je 0,1 alebo 2;
    alebo jej farmaceutický prijateľné soli, na výrobu zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1.
    -108 kde
    AjeCH2alebo O;
    R1 je H, halogén alebo C^alkyl;
    R2 je H, C^alkyl alebo CH2NR“R;
    X je O alebo CH2;
    R'je H, CMalkyl, OC^alkyl, SC^alkyl, NR“R alebo halogén; a každý R je nezávisle H alebo C^alkyl;
    alebo jej farmaceutický prijateľné soli, na výrobu zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1.
SK408-2000A 1997-09-19 1998-09-18 COMPOUND CONTAINING DIBENZOCYCLOHEPTENE NUCLEUS, PROCESS FOR THEì (54) PRODUCTION THEREOF, PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTA SK4082000A3 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US5934297P 1997-09-19 1997-09-19
US6343897P 1997-10-29 1997-10-29
PCT/US1998/019466 WO1999015508A1 (en) 1997-09-19 1998-09-18 Vitronectin receptor antagonists

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK4082000A3 true SK4082000A3 (en) 2000-09-12

Family

ID=26738652

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK408-2000A SK4082000A3 (en) 1997-09-19 1998-09-18 COMPOUND CONTAINING DIBENZOCYCLOHEPTENE NUCLEUS, PROCESS FOR THEì (54) PRODUCTION THEREOF, PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTA

Country Status (26)

Country Link
EP (1) EP1025090A4 (sk)
JP (1) JP2001517658A (sk)
KR (1) KR20010024141A (sk)
CN (1) CN1278250A (sk)
AP (1) AP2000001766A0 (sk)
AR (1) AR015446A1 (sk)
AU (1) AU738433B2 (sk)
BG (1) BG104314A (sk)
BR (1) BR9812340A (sk)
CA (1) CA2303487A1 (sk)
CO (1) CO5011087A1 (sk)
DZ (1) DZ2609A1 (sk)
EA (1) EA200000336A1 (sk)
HU (1) HUP0003641A3 (sk)
ID (1) ID24162A (sk)
IL (1) IL135028A0 (sk)
MA (1) MA26547A1 (sk)
NO (1) NO20001407D0 (sk)
NZ (1) NZ503389A (sk)
OA (1) OA11341A (sk)
PE (1) PE122699A1 (sk)
PL (1) PL339381A1 (sk)
SK (1) SK4082000A3 (sk)
TR (1) TR200000721T2 (sk)
TW (1) TW513303B (sk)
WO (1) WO1999015508A1 (sk)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CO4920232A1 (es) * 1997-01-08 2000-05-29 Smithkline Beecham Corp Acidos aceticos dibenzo [a,d] cicloheptano con actividad antagonista del receptor de vitronectin
JP2002536370A (ja) 1999-02-03 2002-10-29 メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド α−Ｖインテグリン受容体拮抗薬としてのベンゾアゼピン誘導体
DE19936780A1 (de) * 1999-08-09 2001-02-15 Basf Ag Neue Antagonisten von Integrinrezeptoren
EG24179A (en) * 1999-09-07 2008-09-28 Smithkline Beecham Corp Vitronectin receptor antagonists
US6881736B1 (en) 1999-09-07 2005-04-19 Smithkline Beecham Corporation Vitronectin receptor antagonists
US6514964B1 (en) 1999-09-27 2003-02-04 Amgen Inc. Fused cycloheptane and fused azacycloheptane compounds and their methods of use
FR2806082B1 (fr) * 2000-03-07 2002-05-17 Adir Nouveaux composes bicycliques antagonistes des recepteurs de la vitronectine, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
US6720315B2 (en) 2000-06-15 2004-04-13 Pharmacia Corporation Dihydrostilbene alkanoic acid derivatives
US6943156B2 (en) * 2000-10-24 2005-09-13 Merck & Co., Inc Dibenzoxazepine αv integrin receptor antagonist
EP2292251A1 (en) 2001-04-24 2011-03-09 Merck Patent GmbH Combination therapy using anti-angiogenic agents and TNF-alpha
GB0215867D0 (en) * 2002-07-09 2002-08-14 Glaxosmithkline Spa Novel method and compounds
US20040224986A1 (en) 2002-08-16 2004-11-11 Bart De Corte Piperidinyl targeting compounds that selectively bind integrins
UA87854C2 (en) 2004-06-07 2009-08-25 Мерк Энд Ко., Инк. N-(2-benzyl)-2-phenylbutanamides as androgen receptor modulators
AU2007207465B2 (en) 2006-01-18 2012-12-06 Merck Patent Gmbh Specific therapy using integrin ligands for treating cancer
PT2101805E (pt) 2007-01-18 2013-01-31 Merck Patent Gmbh Terapia específica e medicamento usando ligandos integrina para tratar o cancro
NZ597339A (en) 2009-05-25 2013-10-25 Merck Patent Gmbh Continuous administration of cilengitide in cancer treatments
US10328082B2 (en) 2014-05-30 2019-06-25 Pfizer Inc. Methods of use and combinations
WO2023275715A1 (en) 2021-06-30 2023-01-05 Pfizer Inc. Metabolites of selective androgen receptor modulators

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH443281A (de) * 1964-02-18 1967-09-15 Hoffmann La Roche Verfahren zur Herstellung von Dibenzocycloheptatrienverbindungen
US3335148A (en) * 1966-02-17 1967-08-08 Lilly Co Eli 9(3-pyridyl)derivative of fluorene, 9-fluorenol, xanthene, 9-xanthenol and the corresponding nonphytotoxic acid addition salts thereof
US5698551A (en) * 1995-04-07 1997-12-16 Novo Nordisk A/S Heterocyclic compounds
WO1997001540A1 (en) * 1995-06-29 1997-01-16 Smithkline Beecham Corporation Integrin receptor antagonists
US5659033A (en) * 1995-09-13 1997-08-19 Neurogen Corporation N-aminoalkylfluorenecarboxamides; a new class of dopamine receptor subtype specific ligands
WO1998015278A1 (en) * 1996-10-07 1998-04-16 Smithkline Beecham Corporation Method for stimulating bone formation
CO4920232A1 (es) * 1997-01-08 2000-05-29 Smithkline Beecham Corp Acidos aceticos dibenzo [a,d] cicloheptano con actividad antagonista del receptor de vitronectin

Also Published As

Publication number Publication date
OA11341A (en) 2003-12-10
TR200000721T2 (tr) 2000-11-21
NO20001407L (no) 2000-03-17
PL339381A1 (en) 2000-12-18
NO20001407D0 (no) 2000-03-17
EP1025090A1 (en) 2000-08-09
PE122699A1 (es) 2000-02-12
CA2303487A1 (en) 1999-04-01
AP2000001766A0 (en) 1998-09-18
TW513303B (en) 2002-12-11
MA26547A1 (fr) 2004-12-20
BG104314A (en) 2001-01-31
NZ503389A (en) 2002-03-28
IL135028A0 (en) 2001-05-20
AR015446A1 (es) 2001-05-02
EP1025090A4 (en) 2000-11-08
HUP0003641A3 (en) 2002-10-28
ID24162A (id) 2000-07-13
HUP0003641A2 (en) 2001-03-28
CN1278250A (zh) 2000-12-27
KR20010024141A (ko) 2001-03-26
AU738433B2 (en) 2001-09-20
JP2001517658A (ja) 2001-10-09
WO1999015508A1 (en) 1999-04-01
EA200000336A1 (ru) 2000-10-30
AU9397298A (en) 1999-04-12
BR9812340A (pt) 2001-12-18
CO5011087A1 (es) 2001-02-28
DZ2609A1 (fr) 2003-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU733417B2 (en) Vitronectin receptor antagonists
SK92799A3 (en) Vitronectin receptor antagonists, process for their preparation, pharmaceutical composition them containing, their use and intermediates
SK4082000A3 (en) COMPOUND CONTAINING DIBENZOCYCLOHEPTENE NUCLEUS, PROCESS FOR THEì (54) PRODUCTION THEREOF, PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTA
AU9577498A (en) Vitronectin receptor antagonist
CA2304000A1 (en) Vitronectin receptor antagonist
US6495560B1 (en) Vitronectin receptor antagonist
US6576643B2 (en) Vitronectin receptor antagonists
US20020123487A1 (en) Vitronectin receptor antagonist
MXPA00002700A (en) Vitronectin receptor antagonists
CZ2000979A3 (cs) Antagonista vitronektinového receptoru
US20020128257A1 (en) Vitronectin receptor antagonist
MXPA00002895A (en) Vitronectin receptor antagonist
MXPA00002896A (en) Vitronectin receptor antagonist
CZ20001061A3 (cs) Antagonista receptoru pro vitronektin