CZ2000979A3

CZ2000979A3 - Antagonista vitronektinového receptoru

Info

Publication number: CZ2000979A3
Application number: CZ2000979A
Authority: CZ
Inventors: William E. Bondinell; William H. Miller; Dirk Heerding; James Martin Samanen
Original assignee: Smithkline Beecham Corporation
Priority date: 1998-09-18
Filing date: 1998-09-18
Publication date: 2000-11-15

Abstract

Řešení popisuje sloučeniny obecného vzorce I, které jsou antagonisty vitronektinového receptoru a jsou vhodné pro léčbu osteoporózy, ve kterých Aje CH2 nebo atom kyslíku; R1 je atom vodíku, atom halogenu nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhláku; r2 je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo CH2NR"R"; X je atom kyslíku nebo CH2; Y je a), b) c), d), e), f) nebo g); G je NR", atom síry nebo atom kyslíku, R'je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, O-alkylová skupina a 1 až 6 atomy uhlíku, Salkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, NR"R" nebo atom halogenu; každá R" skupina je nezávisle na sobě atom vodíku , nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku; asje 0,1 nebo 2; nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

Description

Antagonista vitronektlnového receptorů

Oblast techniky

Tento vynález se týká farmaceuticky účinných sloučenin, které inhibují vitronektinový receptor a jsou použitelné pro léčbu zánětu, nádorového bujení a kardiovaskulárních . chorob, jako například atherosklerozy a restenozy, a onemocnění, u kterých dochází k resorpci kosti, jako například u osteoporozy.

Dosavadní stav techniky

Integriny patří do nadskupiny buněčných adhezních receptorů, což jsou transmembránové glykoproteiny exprimované na různých buňkách. Mezi tyto povrchové adhezní receptory patří gpIIb/IIIa (receptor pro fibrinogen) a α_υβ₃(vitronektinový receptor) : Receptor pro fibrinogen gpIIb/IIIa je exprimován na povrchu krevních destiček a zprostředkovává agregaci destiček a tvorbu hemostatického krevního koagula v místě krvácejícího poranění, Philips a kol.-, Blood, -71.,.- 831 (.1988) .Vitronektinový receptor a_vá₃ je exprimován na četných buňkách, včetně buněk endotheliálních, hladkých svalových buněk,, osteoklastů a nádorových buněk, a proto má různé funkce. Receptor α_οβ₃ exprimovaný na membráně osteoklastů zprostředkovává adhezi osteoklastů ke kostní základní hmotě, což je klíčový krok v procesu kostní 'resorpce, Ross a kol., J. Biol. Chem., 262, 7703 (1987). Příkladem onemocnění charakterizovaným nadměrnou kostní resorpci je osteoporóza. Receptor α_οβ₃ exprimovaný na lidských aortálních hladkých svalových buňkách zprostředkovává jejich migraci do neointimy a tento proces může vést k restenóze po perkutánní koronární angioplastice,

Brown a kol., Cardiovascular Res., 28, 1815 (1994). Brooks a • · • · '· » kol., Cell, 7 9, 1157 (1994) navíc prokázal, že antagonista α_υβ3 může navodit regresi tumoru prostřednictvím indukce apoptózy angiogenních krevních cév. Proto by prostředky, které blokují vitronektinový receptor, mohly být účinné v léčbě onemocnění jako je osteoporóza, restenóza a zhoubné tumory.

Nyní je známo, že vitronektinový receptor se týká třech různých integrinů, označovaných jako α_υβι, α_υβ3 a α_υβ5 (Horton a kol., Int. J. Exp. Pathol., 71, 741 (1990)). α_υβι vážefibronektinavitronektin. α_υβ3 'νέζe veTký^^očet“ ligandů zahrnující.fibrin, fibrinogen, laminin, thrombospondin, vitronektin, von Willebrandův faktor, osteopontin a kostní sialoprotein I. α_υβ5 váže vitronektin. Ukázalo se, že se vitronektinový receptor α_υβ5 účastní buněčné adheze různých buněčných typů, včetně mikrovaskulárních endotheliálních buněk (Davis a kol., J. Cell: Biol., 51, 206 (1993)), a potvrdila se jeho role v angiogenezi, Brooks a kol., Science, 2 64, 569 (1994) . , Tento integrin je exprimován v krevních cévách lidské granulační. tkáně rány, ale ne v normální kůži.

Je známo, že se vitronektinový receptor váže na proteiny kostní základní hmoty, které obsahují tripeptidový vzorec Arg-Gly-Asp (nebo RGD). Publikace Horton a kol., Exp. Cell Res., 195, 368 (1991) popisuje, že peptidy obsahující RGD a protilátka proti vitronektinovému receptoru (23C6) inhibují resorpci dentinu a rozdělování buněk osteoklasty. Navíc v publikaci Sáto a kol., J. Cell Biol., 111, 1713 (1990), se popisuje, že echistatin, peptid obsažený v hadím jedu, který obsahuje RGD sekvenci, je účinný inhibitor kostní resorpce v tkáňové kultuře a inhibuje přichycení osteoklastů ke kosti.

• · · · · · • · • · > ·

Nyní bylo nalezeno, že určité sloučeniny jsou účinné inhibitory α_υβ3 a α_υβ5 receptorů. Konkrétně se zjistilo, že tyto sloučeniny jsou účinnější inhibitory vitronektinového receptorů než receptorů pro fibrinogen.

Podstata vynálezu

Tento vynález se týká sloučenin obecného vzorce I, jak je popsáno dále, které jsou farmakologicky účinné __v inh.i b i c.i vit roně kt i nového receptorů a . j sou ~ vhodné pro — léčbu zánětu, zhoubného bujení a kardiovaskulárních onemocnění, jako atherosklerozy a restenozy, a chorob, u kterých se uplatňuje kostní resorpce, jako je osteoporóza.

Tento vynález se také týká farmaceutického prostředku, který obsahuje sloučeninu obecného vzorce I a farmaceutický nosič.

Tento vynález dále popisuje způsob léčby chorob, které jsou zprostředkovány vitronektinovým receptorem. Sloučeniny podle tohoto vynálezu...j sou obzvláště vhodné, .pro... léčbu atherosklerozy, restenozy, zánětu, zhoubného bujení a chorob, u kterých se uplatňuje kostní resorpce, jako je osteoporóza.

Podrobný popis vynálezu . Tento vynález zahrnuje nové sloučeniny, které jsou účinnějšími inhibitory vitronektinového receptorů než inhibitory receptorů pro fibrinogen. Nové sloučeniny mají dibenzocykloheptenové jádro, ve kterém je na jednom z aromatických šestičlenných kruhů dibenzocykloheptenu přítomen substituent obsahující atom dusíku, a na to · · · · · « · · to···········» • · · ··· ···· · ·» ·. ·· *· ·· ·* sedmičlenném kruhu dibenzocykloheptenu je alifatický substituent obsahující kyselou část. Věří se, že dibenzócykloheptenová kruhová soustava orientuje substituentové postranní řetězce na šesti- a sedmičlenných kruzích tak, že mohou příznivě interagovat s vitronektinovým receptorem. Je výhodné, že v průběhu nej kratší intramolekulární cesty bude přítomno přibližně 12 až 14 intervenujících kovalentních vazeb mezi kyselou částí na alifatickém substituentu sedmičlenného kruhu dibenzocykloheptenu a atomem dusíku dusík-obsahujícího substituentu na aromatickém šestičlenném _____kruhu dibenzocykloheptenu._________:__________

Přítomný vynález zahrnuje sloučeniny obecného vzorce

I ,

kde

A .je CH₂ nebo atom kyslíku;

R¹ je atom vodíku, atom halogenu nebo alkylová skupina až 6 atomy uhlíku;

R² je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo CH₂NR''R'';

X je atom kyslíku nebo CH₂;

je

RR“N—

Ν '/

N KIR”-i.

0.^ -NR

RW .N /Ν NR«-

R’R’N

je NR'', atom síry nebo atom kyslíku;'

R' je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, O-alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, Salkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, NR''R'' nebo atom halogenu;

každá R'' skupina je nezávisle na sobě atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku; a s je O, 1 nebo 2;

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Přítomný vynález rovněž zahrnuje farmaceuticky přijatelné adiční soli a komplexy sloučenin podle přítomného vynálezu. V případech, kdy sloučeniny podle vynálezu mohou mít jedno nebo více chirálních center, pokud není upřesněno jinak, zahrnuje tento vynález každou jednotlivou nerace9 '· 9 ···· 9 9 9 * • 9' 9 · · · · 9 9 9 · · «

9 9 · 9 9 · 9 · · 9 • 9 9 9· 9 9 9 9 «9 mickou sloučeninu, kterou lze připravit a štěpit běžnými postupy. V případech, kdy sloučeniny obsahují nenasycené vazby mezi dvěma atomy uhlíku, jsou rámce přítomného vynálezu zahrnuty jak cis (Z) tak trans (E) izomery.

V případech, kdy sloučeniny mohou existovat v tautomerních formách, jako jsou například tautomery keton-enol, jako

O ' OŘ’

A.

a každá tautomerní forma..je považována za součást přítomného_______ vynálezu, ať se vyskytuje v rovnovážné formě či je stabilizována j jediné formě příslušnou substitucí prostřednictvím R'.

Sloučeniny obecného vzorce I inhibují vazbu vitronektinu a jiných RGD-obsahujících peptidů na vitronektinový receptor. Inhibice vitronektinového receptoru na osteoklastech inhibuje kostní resorpci zprostředkovanou osteoklasty, a je vhodná pro léčbu chorob, kde je kostní resorpce patologická, jako u osteoporózy a osteoartritidy.

V dalším aspektu je tento vynález způsobem stimulace novotvorby kosti, který zahrnuje podání sloučeniny působící zvýšení uvolňování kalcitoninu. Zvýšení tvorby kosti přináší jasný užitek u těch stavů, u kterých je nedostatek mineralizované kostní hmoty, nebo tam, kde je žádoucí remodelace kosti, jako u hojení a prevence zlomenin kostí. V případě onemocnění a metabolických poruch, které vedou ke ztrátě kostní struktury, by také tato léčba byla užitečná.

Například hyperparathyreóza, Pagetova nemoc, hyperkalcemie u maligního onemocnění, osteolytická ložiska kostních metastáz, ztráta kosti v důsledku imobilizace nebo deficitu pohlavních hormonů, Behgetova choroba, osteomalácie,

41' ··.···· · · · · *· ·* , · β β · · . » · · 9 V « '* · · '*> · · · * • ·· · · · · *.·« · · · '« ,· · · · · ··· '« ·· · «· <· · ·« hyperostóza a osteopetróza'jsou stavy, u kterých by podání sloučeniny podle vynálezu mohlo být užitečné.

Protože sloučeniny podle přítomného vynálezu inhibují vitronektinové receptory na množství různých typů buněk, byly by navíc uvedené sloučeniny vhodné pro léčbu zánětlivých onemocnění jako revmatoidní artritidy a psoriázy, a kardiovaskulárních chorob jako atherosklerózy a restenózy. Sloučeniny obecného vzorce I mohou být vhodné pro léčení a prevenci jiných chorob včetně, ale ne pouze, tromboémbo___lických poruch, astmatu, alergií, ARDS (adult respirátory distress syndrom), reakce štěpu proti hostiteli (graft versus host disease), rejekce orgánového transplantátu, septického 'šoku, ekzému, kontaktní dermatitidy, zánětlivých střevních onemocnění a jiných autoimunriích chorob.

Sloučeniny podle přítomného vynálezu mohou být také vhodné pro zlepšení hojení ran..

Sloučeniny podle přítomného vynálezu jsou také vhodné pro léčbu a prevenci angiogenních poruch. Název angiogenní poruchy, jak jezde používán, zahrnuje stavy vyznačující se abnormální neovaskularizací. V případech, kdy růst nových cév zapříčiňuje nebo přispívá k patologii spojené s onemocněním, bude inhibice angiogeneze snižovat zhoubné účinky onemocnění. Příkladem takového onemocnění je diabetická retinopatie. Tam, kde je růst nových' krevních cév vyžadován pro udržení růstu zhoubné tkáně, bude inhibice

- angiogeneze snižovat dodávku krve do této tkáně, a tím . přispěje k redukci tkáňové hmoty, která je na dodávce krve závislá. Příklady zahrnují růst nádorů· tam, kdy je neovaskularizace kontinuálním požadavkem pro růst nádoru a pro vznik solidních nádorových metastáz. Proto sloučeniny podle přítomného vynálezu inhibují angiogenezi v nádorové tkáni a tím zabraňují nádorovému metastazování a nádorovému růstu.

Φ’Φ φφφφ · · ·· · * φ φ φ · · φ · · · φ · φ · • · φ φφφφ φ φ φ φ'

ΦΦ ’ΦΦ ΦΦ ΦΦ· φ · · • ΦΦ Φ Φ Φ Φ ΦΦΦΦ ·· Φ ΦΦ φΦ ΦΦ ΦΦ

Proto podle způsobů podle přítomného vynálezu může inhibice angiogeneze použitím sloučenin podle přítomného vynálezu ovlivnit symptomy onemocnění, a v některých případech může onemocnění vyléčit.

Dalším terapeutickým cílem sloučenin podle přítomného vynálezu jsou oční choroby charakterizované neovaskularizací. Mezi tyto oční choroby patří rohovkové neovaskularizační procesy, například při transplantaci rohovky, dále h erpeti c ká keratitis, 1ueti c ká kerati tis,__pterygium a____________ nevaskuiární pannus spojený s používáním kontaktních čoček. Další oční choroby také zahrnují makulární degeneraci spojenou s věkem, předpokládanou oční histoplazmozu, retinopatii z nezralosti a neovaskulární glaukom.

Tento vynález dále poskytuje způsob inhibice nádorového růstu, který zahrnuje podání postupně nebo ve fyzikální kombinaci sloučeniny obecného vzorce I a protinádorového léčiva jako topotekanu a cisplatiny.

Ke sloučenině obecného vzorce I

Y .je vhodně . ·

kde

R' je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, O-alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, S« · · · · to toto · to ·· ·· * to . · · · to · * ·' « ·' • · · · to ·· · · · · · ·· ·· · ·' ·· · ·· · to ·· ···· to to · · toto · toto · · toto toto alkylová skupina s 1 až 4' atomy uhlíku, NR^{Z Z}R^Z' nebo atom chloru a každý R^zzje nezávisle atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku.

Alternativně je Y

RR“hk JK / kde každá R^zzje atom vodíku nebo alkylová'skupina s 1 až 4 atomy uhlíku.

Alternativně je Y ,N

O_s

NR .NR kde každá R^z' je nezávisle na sobě atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku a s je 1.

Alternativně je Y

RRN kde

·· 4444 ·· ·· • 4 · · · • 4 4 4 4 4 · 4 4 4

4 4 44 4.4 4 4 44

G je atom síry; a každá R^zzje nezávisle atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku.

Alternativně je Y ,NRR^z' je atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku.

Representativními příklady nových sloučenin podle přítomného vynálezu jsou následující sloučeniny:

kyselina (±)-10,ll-dihydro-3-[2- ( 6-amino-2-pyridyl)-1ethoxy]-5H-dibenzo[a, d]cykloheptenoctová;

kyselina (±) -10, l.l-dihydro-3-[4- (2-pyridylamino) -l-butyl]-5Hdibenzo[a, d]cy klohept en-10-octová;

kyselina (±)-10,ll-dihydro-3-[3- (4-ethoxy-2-pyridylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová; kyselina (S)-10,ll-dihydro-3-[3- (2-pyridylamino)-1-propoxy]5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (R)-10,ll-dihydro-3-[3- (2-pyridylamino)-1-propoxy]5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (±)-10,ll-dihydro-3-[3- (3,4,5,6-tetrahydro-2pyrimidylamino) -1 -propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cy klohepten-10octová;

kyselina (±) -10, ll-dihydro-3-[2- [2-ethylamino) -4-thiazolyl] ·· ···· ·· ·· ·· ·· • · · 9 9 9 9 9 9· 9 >·9' ‘9 9 9 9 99 9 · φ ·· • · · · ' · ·· · · 9 · · 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 '· ·· 9 ' -9 9 9 9 9 9 '99

1-ethoxy]5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (±) -10, ll-dihydro-3-[3- (1-izochinolylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (±) -10, ll-dihydro-7-fluoró-3-[3- (2-pyridylamino) -1propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (S) -10, ll-dihydro-3-[3- (4-methyl-2-pyridylamino) -1propoxy]-5H-dibenzo[a, djcyklohepten-10-octová;

kyselina (S) -10, ll-dihydro-3-[3- (4-ethoxy-2-pyridylamino) -1propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

-kyselina (±) -10/ ll-dihydro-6-methyl-3-[3- (2-pyridylamino) -1 propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (±)-10,ll-dihydro-2-(dimethylamino)methyl-7-fluor3-[3- (2-pyridylamino) -1-propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklo-hepten10-octová;

kyselina (S)-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(2-propoxy)-2pyridylamino]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová; kyselina (S) -10,11-dihydro-3-[2- [6- (methylamino) -2-pyridyl]1-ethoxy] -5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-'10-octová; kyselina (S)-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(dimethylamino)-2pyridylamino]-1-propoxy] -5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10octová; ' .

kyselina (±)-10, ll-dihydro-3-[3-[4-(ethylthio)-2pyridylamino]-l-propoxy] -5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10octová;

kyselina (S) -10, ll-dihydro-3-[3- [4-chlor-2-pyridylamino]-lpropoxy] -5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

-kyselina (±) -10,ll-dihydro-2-methyl-3-[3- (2-pyridylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (3) -10,-11-dihydro-3-[3- (4-amino-2-pyridylamino]-1propoxy] -5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (±) -10, ll-dihydro-3-[3- (4-methyl-2-pyridylamino) -112 • 9 9 99 9 • 9 · · 9 · 9 « · 9 · · · 9 9 99 9 9 9 » · 9 9 · ·9 · · · 9 · 9

999 9999 999 9

9 9 9 9 9 9 · ·· propoxy]dibenzo[b, f]oxepin-10-octová;

kyselina (±) -10, ll-dihydro-3-[2- [6- (methylamino) -2-pyridyl] 1-ethoxy]dibenzo[b, f]oxepin-10-octová; nebo kyselina (S)-10, ll-dihydro-3-[3-(2-amino-4-pyridyl]-lpropoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

V případech, kdy mohou mít sloučeniny podle přítomného vynálezu jedno nebo více chirálních center, zahrnuje tento vynález, pokud není specifikováno jinak, každou jednotlivou neracemickou formu sloučeniny, kterou lze syntetizovat a rozložit běžnými způsoby. (S) konfigurace obecného vzorce I je podle přítomného vynálezu konfigurace výhodná.

V případech, kdy sloučeniny obsahují nenasycené dvojné vazby mezi dvěma atomy uhlíku, jsou do rámce přítomného vynálezu zahrnuty jak cis(Z) tak i trans(E) izomery. Význam jakéhokoliv substituentu za jakékoliv okolnosti nesouvisí s jeho významem, nebo s významem jakéhokoliv jiného substituentu, za podmínek odlišných.

Do rámce přítomného vynálezu jsou rovněž zahrnuty prekurzory léčiv sloučenin podle přítomného vynálezu. Za prekurzory léčiv se považují jakékoliv kovalentně navázané nosiče, které in vivo uvolňují výchozí sloučeninu obecného vzorce I. Proto jsou v dalším aspektu podle přítomného vynálezu zahrnuty nové prekurzory léčiv, které jsou také intermediárními produkty v přípravě sloučenin obecného vzorce II

·· ···· kde

A je CH₂ nebo atom kyslíku;

R¹ je atom vodíku, atom halogenu nebo alkylová skupina s až 6 atomy uhlíku;

R^? je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo CH₂NR^ZZR^ZZ;

X je atom kyslíku nebo CH₂;

G je NR^ZZ, atom síry nebo atom kyslíku;

R' je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, O-alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, S14 alkylová skupina s 1 až atom Halogenu; · fe.· fefefe· ·· fefe ·· ·!.· • · '· · · · · fe · « · • · fe '· · '·· · fefe fe • fe · ·· · <· · · · fefe · fefefe · .· · · ··· · fefe · ·· fefe ·· ·· atomy uhlíku, NR''R'^Z nebo každá R'' skupina je nezávisle na sobě atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku; a s je 0, 1 nebo 2;

nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

V dalším aspektu podle přítomného vynálezu jsou zahrnuty nové intermediární sloučeniny obecného vzorce III

kde

A je CH₂ nebo atom kyslíku;

R² je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo CH₂NR''R';

X je atom kyslíku nebo CH₂;

R' je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy ·· ···· uhlíku, O-alkylová alkylová skupina s atom halogenu; a • · · ···· · · · · • · to · · · to · to · to · · ·· · · ·· · ·« · to·· ····. · ··· ·· · to· to· ·· ·· skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, S1 až 6 atomy uhlíku, NR^Z'R'^Z nebo je každý nezávisle atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku;

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.

Pro popis sloučenin podle přítomného vynálezu jsou používány v tomto spisu zkratky a symboly běžně používané

Ό37Ο DSOtidv chemické obory. Obecně, zkratky pro aminokyseliny se řídí IUPAC-IUB Joint Commisssion on Biochemical Nomenclature (Jednotící komise pro biochemickou nomenklaturu), tak, jak je popsáno v publikaci Eur. J. Biochem., 9, 158 (1984).

Zde používaný termín alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku znamená popřípadě substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a zahrnuje methylovou skupinu, ethylovou skupinu , n-propylovou skupinu, izopropylovou skupinu, nbutylovou skupinu, izobutylovou skupinu, terč.-butylovou skupinu, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku dále zahrnuje pentylovou skupinu, n-pentylovou skupinu, izopentylovou skupinu, neopentylovou skupinu a hexylovou skupinu,' a jejich jednoduché alifatické izomery. Alkylová skupina s 0 až 4 atomy uhlíku a alkylová skupina s 0 až 6 atomy uhlíku dále naznačuje, že nemusí být přítomna žádná alkylová skupina (tedy, že je přítomna kovalentní vazba).

Jakákoliv alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku může být popřípadě substituována skupinou R^x, která může být navázána na kterýkoliv atom uhlíku, a která vede ke stabilní struktuře a iv ·· ·««· ·« ·· ·· ·· ·· · · · · · ···* • · · · · ·· · · · · • · · · · · · · · · · · · • · · · · · · ···· ·· · ·· *· ·· ·· lze ji získat běžnými postupy syntézy. Vhodné skupiny pro R^xjsou alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, OR'', SR'', alkylsulfonylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylsulfonylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, -CN,

N(R'.')₂, CH₂N(R)₂, -N0₂, -CF₃, -CO₂R, -CON(R)₂, -COR, -NRC(O)R, atom fluoru, atom chloru, atom bromu, atom jodu nebo CF₃S(O)_r_, kde r je 0, 1 nebo 2.

Atom halogenu znamená atom fluoru, atom chloru, atom bromu nebo atom jodu.

Ar, neboli arylová skupina, jak je zde používáno, znamená fenylovou skupinu nebo naftylovou skupinu, nebo fenylovou skupinu nebo naftylovou skupinu substituovanou jedním až třemi substituenty, například těmi, které byly popsány výše, zejména alkylovou skupinou, obzvláště alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, alkylthioskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, CF₃, NH₂, OH, atomem fluoru, atomem chloru, atomem bromu nebo atomem jodu.

Některé ze skupin radikálů jsou zde zkráceny; t-Bu znamená terciární butylový radikál, Boc znamená terc.butoxykarbonylový radikál. Fmoc znamená fluorenylmethoxykarbonylový radikál.

Ph znamená fenylový radikál, Cbz znamená benzyloxykarbonylový radikál, Bn znamená benzylový radikál, Me znamená methylovou skupinu, Bn znamená benzylový radikál, Me znamená methylovou skupinu, Et znamená ethylovou skupinu. Ac znamená acetylovou skupinu, Alk znamená alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, Nph znamená 1-naftylovou skupinu nebo 2-naftylovou skupinu a cHex znamená cyklohexylovou skupinu. Tet znamená 5-tetrazolylovou skupinu.

i i 0« 00«0 0« ·· »· ·· • 0 · 0 000 000 0

0 ' 0 0 0 00 0 ·0 '»

00 00 00 00 0 00 0

00 0 00 0 0 0 0 0

0 0« 00 00 00

Namísto názvů určitých činidel jsou v tomto spisu používány zkratky. DCC znamená dicyklohexylkarbo-diimid, DMAP znamená dimethylaminopyridin, DIEA znamená diizopropylethylamin, EDC znamená 1-(3-(dimethylaminopropýl)-3-ethylkarbodiimid. HOBt znamená 1-hydroxybenzotriazol, THF znamená tetrahydrofuran, DEAD znamená diethylazodikarboxylat, PPh₃ znamená trifenylfosfin/ DIAD znamená diizopropylazodikarboxylat, DME znamená dimethoxyethan, DMF znamená dimethylformamid, NBS znamená N-bromsukcimid, Pd/C znamená palladium na uhlí jako katalyzátoru, PPA znamená kyselinu polyfosforečnou, DPPA . znamená. difenylfosforylazid, BOP znamená benzo-l-triazolyloxy-tris(dimethylamino)fosfoniumhexafluorfosfat, HF znamená kyselinu fluorovodíkovou, TEA znamená triethylamin, TFA znamená kyselinu trifluoroctovou, PCC znamená pyridiniumchlorchromat.

Sloučeniny.obecného vzorce I se obecně připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce IV se sloučeninou obecného vzorce V

kde

Y a A mají význam popsaný v obecném vzorci I, s libovolnými reaktivními funkčními chráněnými skupinami, a

L¹ je atom halogenu;

a následovným sejmutím jakýchkoliv ochranných skupin a popřípadě se připraví jejich farmaceuticky přijatelná sůl.

Určité sloučeniny obecného vzorce I se vhodně připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce IV se sloučeninou obecného vzorce VI

O-

kde '

R¹, R², R', R'' a A mají význam popsaný v obecném vzorci I, s libovolnými reaktivními funkčními chráněnými skupinami;

Reakce mezi sloučeninou obecného vzorce IV a sloučeninou obecného vzorce VI se vhodně provede za přítomnosti diethylazodikarboxylatu a trifenylfosfinu v aprotickém rozpouštědle.

Dále se určité sloučeniny obecného vzorce I připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce IV se sloučeninou obecného vzorce VII ·· ···· · · to· • · · · · · · • ♦ to · · ·· to toto · ? *· · to · · · · · · ·· 'to to* β' ·

(CH₂),.₃—OH • · kde

R¹, R², R^z' a A mají význam popsaný v obecném vzorci I, s libovolnými reaktivními funkčními chráněnými skupinami;

a následovným sejmutím jakýchkoliv ochranných skupin a popřípadě se připraví jejich farmaceuticky přijatelná sůl

Reakce mezi sloučeninou obecného vzorce IV a sloučeninou obecného vzorce VII se provede za přítomnosti diethylazodikarboxylatu a trifenylfosfinu v aprotickém rozpouštědle.

Sloučeniny obecného vzorce I se připraví způsoby popsanými v publikaci Bondinell a kol., PCT publikace č. WO 97/01540 (Mezinárodní přihláška č. PCT/US96/11108), publikovaná 16. ledna 1997, jejíž kompletní popis je v tomto spise zahrnut do odkazu.

Sloučeniny obecného vzorce I se dále připraví způsoby analogickými těm, které jsou popsány ve schématech, která jsou podrobně v tomto spisu uvedena dále.

Schéma I • ·· ·

a) 10% Pd/C, HOAc;

b) SOC1₂, toluen;

c) AICI3, CH₂C1₂;

Schéma 1 uvádí produktu použitelného v detailech přípravu intermediárního pro přípravu sloučenin obecného vzorce

I.

a) LiN(TMS)₂, ethylbromacetat;

b) Jonesovo činidlo, OsO₄;

·'·

C)	H₂, 10% Pd/C,	HOAc;
d)	C2O2CI2, DMF;
e)	AICI3, CH₂C1₂,	RT;
f)	H₂, 10% Pd/C,	HOAc.

V · · * · · · · · · · • · « · · · · · i · ♦ λ · · » · · · 4 '· · 4 · 4 • · .· · · · · · · · »· · »· · · A · · ·

Také schéma 2 uvádí podrobně přípravu intermediárního produktu pro přípravu sloučenin obecného vzorce I.

2

g.h • e · * · ·

• · · · • · · Φ ·>’ Φ • « · Φ · ·Φ • · φ · · · Φ • · · · · · φφ *

a) EtOAc/LiHMDS, THF;

b) H₂, 10% Pd/C, koncentrovaná HCI, AcOH;

c) EtSH, A1C1₃, CH₂C1₂;

d) 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]-4-nitropyridin-N-oxiď,

DEAD, (Ph)₃P; ·

e)	NaOEt, EtOH;
f)	cyklohexen, 10% Pd/C, EtOH;
g)	1,0 N NaOH, EtOH; ’
h)	HCI.

Schéma III podrobně popisuje přípravu sloučeniny obecného vzorce I. Reakce sloučeniny III-l (což je sloučenina 1-3) v reakci aldolového typu s enolátem ethylacetátu, který může být získán z ethylacetátu jeho vystavením příslušné amidové bázi, napříkladlithiumdiizopropylamidu (LDA) nebo lithium-bis(trimethylsilyl)amidu (LiHMDS), se získá sloučenina III-2. THE je často rozpouštědlem volby pro aldolovou reakci, i když často se používá THF za přítomnosti různých přídatných přípravků, například HMPA nebo TMEDA. Redukce sloučeniny III-2 na sloučeninu III-3 (což je sloučenina II—6) může být provedena hydrogenolýzou s příslušným katalyzátorem, například kovovým palladiem na aktivním uhlí (Pd/C), v příslušném rozpouštědle, například kyselině octové, za přítomnosti anorganické kyseliny, jako HCI. Alternativně může být tato redukce provedena zpracováním sloučeniny III-2 s triethylsilanem, za přítomnosti bor-trifluoridetheratu, obecným způsobem podle autorů Orphanopoulos a Smonou (Synth. Cqmmun., 833 (1988)). Odstranění methyletheru sloučeniny III-3, aby vznikla sloučenina III-4, může být provedeno reakcí BBr₃ v inertním rozpouštědle, například CH₂C1₂, s ethanethiolem a AICI3 v inertním rozpouštědle, s výhodou CH₂C1₂. Ostatní vhodné způsoby odstraňování methyletheru jsou popsány v publikaci Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis, vyd. John Wiley and Sons. Sloučenina 4 ze schématu III (III-4), reaguje 5 2-[(3-hydroxy-lpropylj amino]-4-nitropyridin-N-oxidem v kondenzační reakci typu podle Mitsunobu (Organic Reactions, 42, 335 až 656 (1992); Synthesis, 1 až 28 (1981)), aby se dostala sloučenina III-5. Reakce je zprostředkována komplexem vytvořeným mezi diethylazodikarboxylatem a trifenylfosfinem a je prováděna v aprotickém rozpouštědle, například v THF, CH₂C1₂ nebo DMF. Sloučenina ΊΙΙ-5 reaguje se solí alkalického kovu příslušného alkoholu, aby se dostala sloučenina III-6. Vhodné alkalické kovy zahrnují lithium, sodík, draslík a cesium, a alkohol použitý.pro odstraňovači reakci se obecně použije v rozpouštědle. Způsoby přípravy solí alkalických kovů a alkoholů jsou odborníkovi v oboru dobře známy. Pyridin-N-oxidová část sloučeniny III-6 se redukuje na příslušný pyridin III-7 za podmínek hydrogenace přenosem za použití kovového palladia na aktivním uhlí jako katalyzátoru, v inertním rozpouštědle, například v methanolu, ethanolu nebo 2-propanolu. Jako činidlo přenášející atom vodíku v tomto typu reakce se běžně používají cyklohexen, 1,4-cyklohexadien, kyselina mravenčí a její soli, jako jsou mravenčan draselný nebo mravenčan amonný. Ethyester sloučeniny III-7 se hydrolyzuje za použití vodné báze, jako je například LiOH ve vodném THF nebo NaOH • · · · to toto w to — ^w ♦· to ·'· ** ·· ve vodném methanolu nebo ethanolu, a intermediární karboxylatová sůl se okyselí vhodnou kyselinou, například TFA nebo HCI, aby se dostala karboxylová kyselina III-8. Alternativně lze, pokud je to požadováno, intermediární karboxylatovou sůl izolovat, nebo je možné připravit karboxylatovou sůl volné karboxylové kyseliny, způsoby odborníkovi v oboru známými.

Schéma IV

a) NaH, 2-[N-(3-hydroxymethansulfonyloxy-l-propyl) -N-(terč.·« ·· ·· ·· » · · « ♦ ·' » *

I · ·· · · · butoxykarbonyl)amino]pyridin-N-oxid, DMSO;

b) TFA, CH₂C1₂;

c) viz Schéma III.

Schéma IV popisuje alternativní způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I. Sloučenina IV-1 reaguje s bází, s výhodou s hydridem alkalického kovu, jako s hydridem Sodným nebo hydridem draselným, v polárním, aprotickém rozpouštědle, obecně v THF, DMF, DMSO, nebo jejich směsích, aby se dostal příslušný fenoxid alkalického kovu.

Alternativně lze pro deprotonaci použít amid alkalického kovu, například LDA, nebo lithnou, sodnou nebo draselnou sůl hexamethyldisilazanu. Intermediární fenoxid se obecně neizoluje, ale reaguje na místě s příslušným elektrofilním činidlem, například s 2-[N-(3-hydroxymethansulfonyloxy-1propyl)-N-(terč.-butoxykarbonyl)amino]pyridin-N-oxidem, aby se dostal kondenzovaný produkt IV-2. Terč.-butoxykarbonylová ochranná skupina sloučeniny IV-2 se sejme v kyselém prostředí, například v 4 M HCI v 1,4-dioxanu nebo v TFA v CH₂C1₂, aby se dostala sloučenina IV-3. Podmínky sejímání terč.-butoxykarbonylové ochranné skupiny jsou odborníkovi v oboru známy a několik vhodných postupů je popsáno v běžných odkazových publikacích, jako v publikaci Greene, „Protective Gro.ups in Organic Synthesis. Sloučenina IV-3 se následně konvertuje na sloučeninu IV-4, přičemž se sleduje postup popsaný ve schématu III.

Schéma V

a)	PhOH, Cu, K₂CO₃;
b)	síra, morfolin;
c)	KOH, H₂0, i-PrOH;
d)	SOCI2, benzen;
e)	AICI3, CH₂C1₂;
f)	EtOAc, LiN(TMS)₂,	TMEDA,
g)	Et₃SiH, BF₃, OEt₂,	CH₂C1₂;
h)	H₂, Pd/C, EtOH;
i)	BBr3, CH₂C1₂ ·

Komerčně dostupný 2-fluor-4-methoxyacetofenon (sloučenina V-l) reaguje s alkoholem, například s fenolem, za přítomnosti kovové mědi a vhodné báze, například K2CO3, aby se dostal diarylether V-2. Zpracováním se sírou a příslušným primárním nebo sekundárním aminem, s výhodou • to ···· toto ·· ··' ·· • 9 « to to · · · 'to¹' · · • to to · · ·· toto· · · · · · toto ··'· · · · ·· · ···· ··· · • to ·, · * ·· · ♦ · · morfolinem, podle obecného způsobu podle Harrise (J. Med. Chemistry, 25, 855 (1982)), se sloučenina V-2 konvertuje na sloučeninu V-3 klasickou reakcí podle Willgerodt-Kindlera.

Takto získaný thioamid se hydrolyzuje na příslušnou karboxylovou kyselinu V-4 reakcí s hydroxidem alkalického kovu, vhodně KOH, ve vodném alkoholickém rozpouštědle, jako je vodný MeOH, EtOH nebo i-PrOH. Karboxylová kyselina V-4 se konvertuje na příslušný kyselý chlorid reakcí buď s SOCI2 nebo s oxalylchloridem podle podmínek odborníkovi v oboru známých. Zpracováním tohoto kyselého chloridu s příslušným Friedel-Craftsovým katalyzátorem, například s A1C1₃ nebo SnCl₄, v inertním rozpouštědle, jako je CH2CI2 nebo CS₂, se dostane cyklický keton V-5. Alternativně lze kyselinu V-4 přímo konvertovat na keton V-5 v kyselém prostředí, například s kyselinou polyfosforečnou. Reakcí sloučeniny V-5 v reakci aldolového typu s enolatem ethylacetátu, který lze získat expozigí příslušné amidové bázi, například lithiumdiizopropylamidu (LDA) nebo lithium-bis(trimethylsilyl)amidu (LiHMDSj, se dostane sloučenina V-6. Často je THF rozpouštědlem volby pro reakci aldolového typu, ačkoliv se často používá THF za přítomnosti různých přídatných látek, například HMPA. nebo TMEDA. Redukce sloučeniny V-6 na sloučeninu V-7 může být provedena zpracováním sloučeniny V-6 s triethylsilanem, za přítomnosti bor-trifluoridetheratu, obecným způsobem podle autorů Orphanopoulos a. Smonu (Synth. Commun., 833 (1988)). Jakékoliv olefinové vedlejší produkty vznikající při eliminaci alkoholu se redukují hydrogenací na příslušném katalyzátoru, jako je například kovové palladium na aktivním uhlí (Pd/C), v příslušném rozpouštědle, například jako je MeOH nebo EtOH. Alternativně lze redukci sloučeniny V-6 na sloučeninu V-7 provést hydrogenolýzou za přítomnosti anorganické kyseliny, jako HCI. Obvykle je reakce katalyzována kovovým palladiem na aktivním uhlí (Pd/C), a obvykle se provede v.kyselině octové. Odstranění _ _ ' « a β ·ι

methyletheru sloučeniny V-7, aby se dostala sloučenina V-8, se provede BBr₃ v inertním rozpouštědle, například v CH₂C1₂, nebo reakcí s ethanthiolem a A1C1₃ v inertním rozpouštědle, s výhodou CH₂C1₂. Další vhodné způsoby sejmutí methyletheru jsou popsány v publikaci Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis, vyd. John Wiley a Sons, Sloučenina V-8 je následně konvertována na sloučeniny obecného vzorce I postupem popsaným ve schématu III.

Adiční soli sloučenin s kyselinou se připraví standardním způsobem ve vhodném rozpouštědle, z výchozí sloučeniny a přebytku kyseliny, například kyseliny chlorovodíkové, bromovodíkové, fluorovodíkové, sírové, fosforečné, octové, trifluoroctové, maleinové, jantarové nebo methansulfonové. Určité ze sloučenin tvoří vnitřní soli neboli obojetné ionty, které mohou být přijatelné.

Kationtové soli se připraví zpracováním výchozí sloučeniny s přebytkem alkalického činidla, jako například hydroxidu, uhličitanu nebo alkoxidu, které obsahuje příslušný kationt; nebo s příslušným organickým aminem. Kationty jako Li⁺, Na⁺, K⁺, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺ a NH₄ ⁺ jsou konkrétní příklady kationtů přítomných ve farmaceuticky přijatelných solích.

Tento vynález také poskytuje farmaceutický prostředek, který obsahuje sloučeninu obecného vzorce I a farmaceuticky přijatelný nosič. Podle toho mohou být sloučeniny obecného vzorce I použity pro výrobu léčiva. Farmaceutické prostředky sloučenin podle tohoto vynálezu, připravené jak zde bylo dříve popsáno, mohou být formulovány jako roztoky nebo lyofilizované práš“ky pro parenterální podání. Prášky mohou být před použitím rekonstituovány přidáním vhodného ředidla nebo jiného farmaceuticky přijatelného nosiče. Kapalný prostředek může být pufrovaný izotonický vodný roztok. Mezi příklady vhodných ředidel • · to · · ’· · · · · · «· to ·· ·· ·· patří běžný izotonický fyziologický roztok, standardní 5%. glukóza ve vodě nebo pufrovaný roztok octanu sodného nebo amonného. Takový prostředek je obzvláště vhodný pro parenterální podání, ale lze jej také použít pro perorální podání, nebo může být obsažen v inhalátoru s odměřením dávky nebo nebulizátoro pro insuflaci. Může být žádoucí přidat excipienty jako polyvinylpyrrolidon, želatinu, hydroxycelulózu, arabskou gumu, polyethylenglykol, mannitol, chlorid sodný nebo citrát sodný.

Alternativně mohou být tyto sloučeniny enkapsulovány, tabletovány nebo připraveny jako emulze nebo sirup pro perorální podání. Mohou být přidány farmaceuticky přijatelné pevné nebo kapalné nosiče, za účelem posílení nebo stabilizace prostředku, nebo pro usnadnění přípravy prostředku. Pevné nosiče zahrnují škrob, laktózu, dihydrát síranu vápenatého, bílou hlinku, stearat hořečnatý nebo kyselinu stearovou, mastek, pektin, arabskou gumu, agar nebo želatinu. Kapalné nosiče zahrnují sirup, arašídový olej, olivový olej, fyziologický roztok nebo vodu. Nosič může také zahrnovat látku pro trvalé uvolňování, jako je glycerylmonostearat nebo glyceryl-distearat, samotný nebo s voskem. Množství pevného nosiče může být různé, ale s výhodou bude od zhruba 20 mg do asi 1 g na dávkovou jednotku. Farmaceutické prostředky se připravují běžnými farmaceutickými postupy, které zahrnují, pro tabletové formy, drcení, míšení, granulování a stlačování, pokud· je nezbytné; nebo drcení, míchání a plnění do formy tvrdé želatinové kapsle. Pokud se používá kapalný nosič, prostředek bude ve formě ve formě sirupu, elixíru, emulze nebo vodné nebo nevodné suspenze. Takový kapalný prostředek může být přímo podán perorálně nebo naplněn do měkké želatinové kapsle. ·

·· · ·· ·· ··

Pro rektální podání mohou být také sloučeniny podle tohoto vynálezu kombinovány s excipienty, jako s kakaovým máslem, glycerinem, želatinou nebo polyethylenglykoly, a nality do čípku.

Sloučeniny zde popsané jsou antagonisté vitronektinového receptoru, a jsou vhodné pro léčení onemocnění, u kterých je základní patologie připisována ligandu nebo buňce, které interagují s vitronektinovým receptorem.' Tyto sloučeniny jsou například vhodné pro léčbu chorob, jejichž patologie je způsobena úbytkem kostní základní hmoty. Proto jsou přítomné sloučeniny užitečné pro léčbu osteoporózy, hyperparathyreózy, Pagetovy nemoci, hyperkalcemie u maligních onemocnění, osteolytických ložisek způsobených kostními metastázami, kostního úbytku v·důsledku imobilizace nebo deficitu pohlavních hormonů. Věří se také, že sloučeniny podle tohoto vynálezu naleznou využití jako protinádorové, antiangiogenní, protizánětlivé a protimetastatické přípravky, a budou využity se pro léčbu atherosklerózy a restenózy.

Sloučenina se pacientovi podá perorálně nebo parenterálně, takovým způsobem, aby byla koncentrace léčiva dostatečná k inhibici kostní resorpce nebo jinou podobnou indikaci. Farmaceutický prostředek obsahující sloučeninu se podává v perorální dávce asi 0,1 až zhruba 50 mg/kg, takovým způsobem, který je adekvátní stavu pacienta. S výhodou bude perorální dávka přibližně 0,5 až asi 20 mg/kg. Pro léčbu akutních stavů se dává přednost léčbě parenterální. Nejúčinnější je intravenózní infuze peptidu v 5% glukóze ve vodě nebo v normálním fyziologickém roztoku, nebo podobný prostředek obsahující vhodné excipienty, ačkoliv injekce intramuskulárního bolusu je také účinná. Parenterální dávka je obvykle asi 0,01 až asi 100 mg/kg; s výhodou 0,1 až 20

ΦΦ ·· ·· ·· * · · · φ φ φ · ·· · · · φφ ···'· • · · ·· · · · · · φ φ. φ • · · . · φ φ · · φ φ φ φ ·· · φφ φφ ·· ·· mg/kg. Sloučeniny se podávají jednou až čtyřikrát za den v takovém množství, aby se dosáhlo celkové denní dávky asi 0,4 až asi 400 mg/kg za den. Přesná hladina a způsob, kterým jsou sloučeniny podány, se snadno stanoví odborníkem v oboru, a to porovnáním hladiny látky v krvi a koncentrace požadované pro léčebný účinek.

Tento vynález dále popisuje způsob léčby osteoporózy nebo inhibice kostní ztráty, který zahrnuje podání postupně nebo ve fyzikální kombinaci, sloučeniny podle tohoto vynálezu a jiných inhibitorů kostní resorpce, například bifosfonatů (např. allendronatu), hormonální substituční léčby, antiestrogenů nebo kalcitonínu. Navíc popisuje tento vynález způsob léčby použitím sloučeniny podle tohoto vynálezu a anabolického přípravku, například kostního morfogenního proteinu, iproflavonu, účinného pro prevenci kostní ztráty a/nebo zvýšení kostní hmoty. . '

Tento vynález navíc popisuje způsob inhibice růstu nádoru, který zahrnuje podání postupně nebo ve fyzikální kombinaci sloučeniny podle tohoto vynálezu a protinádorového léčiva. Sloučeniny patřící do třídy analog kamptothecinu, jako topotekan, irinotekan a 9-aminokamptothecin, a koordinačních komplexů platiny, jako je cisplatina,. ořmapíatina á tetraplatina,' jsou dobře známé skupiny protinádorových léčiv. Sloučeniny třídy analog kamptothecinu jsou popsány v US patentech-č. 5 004 758, 4 604 463, 4 473 692,

545 880, 4 342 776, 4 513 138, 4 399 276, EP patentových přihláškách č. 0 418 099 a 0 088 642, Wani a kol., J. Med.

Chem., 29, 2358 (1986), Wani a kol., J. Med. Chem., 23, 554 (1980), Wani a kol., J. Med. Chem., 30, 1774 (1987) a Nitta a kol., Proč. 14^th International Congr. Chemotherapy,

Anticancer Sečtion 1, 28 (1985), jejichž kompletní popis je v tomto spisu zahrnut odkazem. Platinový koordinační ·· ···· ·· ·· • · • · · • · • ·· ··

komplex, cisplatina, je dostupný pod názvem Platinol® od společnosti Bristol Myers-Squibb Corporation. Vhodné prostředky cisplatiny jsou popsány v U.S. patentech č. 5 562 925 a 4 310 515, jejichž popis je v tomto spisu zahrnut odkazem.

Ve způsobu inhibice růstu nádoru, který zahrnuje podání postupně nebo ve fyzikální kombinaci sloučeniny podle tohoto vynálezu a protinádorového léčiva, může být koordinační sloučenina platiny, například cisplatina, podána v pomalé intravenózní infuzi. Výhodný nosič je roztok dextrózy ve fyziologickém roztoku obsahující mannitol.

Rozvrh dávkování platinové koordinační sloučeniny může být na základě asi 1 až asi 500 mg na 1 m² (mg/m²) tělesného povrchu na jeden cyklus léčby. Infuze platinové koordinační sloučeniny mohou být podány jednou až dvakrát za týden, a týdenní léčebné cykly mohou být několikrát zopakovány. Při použití sloučeniny třídy analog kamptothecinu pro parenterální podání, se běžně používá léčebný režim od asi 0,1 do asi 300,0 mg/m² tělesného povrchu za den v průběhu pěti po sobě jdoucích dnů. Nejvýhodněji je režim léčby používaný pro topotekan od asi 1,0 do asi 2,0 mg/m² tělesného povrchu za den v průběhu pěti po sobě jdoucích dnů. Cyklus léčby se s výhodou zopakuje nejméně jednou se sedmidenní až jednadvacetidenní přestávkou.

Farmaceutický prostředek může být formulován s oběma látkami, tedy sloučeninou obecného vzorce I a protinádorovým léčivem, ve stejném zásobníku, ale přednost se dává prostředkům, kde jsou tyto látky obsaženy v oddělených zásobnících. V případě, že jsou obě látky ve formě roztoků, mohou být obsaženy systému infuze/injekce pro simultánní podávání nebo v tandemovém uspořádání.

• · ··· · ·· ·· ·· ·· • · · · · · · • · · · · · · • « · · · .· · · ·· · ·· ·.· ·♦

Pro pohodlné podání sloučeniny podle vynálezu a protinádorového léčiva současně nebo zvlášť je připraven kit, který obsahuje v jednom zásobníku (kontejneru), například v krabičce, kartónu nebo jiném zásobníku, jednotlivé láhve, pytle, lékovky nebo jiné zásobníky, z nichž každý obsahuje účinné množství sloučeniny obecného vzorce I pro parenterální podání jak je popsáno výše, a účinné množství protinádorového léčiva pro parenterální podání, jak je popsáno výše. Tento kit může například obsahovat oba farmaceutické přípravky v oddělených nebo v jediném zásobníku, popřípadě jako lyofilizované zátky, a zásobníky roztoků pro rekonstituci. Variantou předchozího může být uskladnění roztoku pro rekonstituci a lyofilizované zátky do dvou oddílů jediného- zásobníku,’ které se před použitím nechá smísit. U tohoto uspořádání může být protinádorové léčivo a sloučenina podle vynálezu baleny zvlášť, ve dvou zásobnících, nebo lyofilizovány společně jako prášek a předloženy jako zásobník jediný.

Pokud jsou obě látky předloženy ve formě roztoku, mohou být obsaženy v systému pro infuzi/injekci pro simultánní podávání, nebo v tandemovém uspořádání.

Sloučenina podle vynálezu může například být obsazena ve formě pro intravenózní injekci nebo v infúzním pytli, které jsou prostřednictvím kanyly'spojeny v sérii s druhým pytlem obsahujícím protinádorové léčivo. Při použití takového systému může pacient dostat počáteční injekci jako bolus nebo infuzi sloučeniny obecného vzorce I, což je následováno infuzí protinádorového léčiva.

Pro určení takové koncentrace sloučeniny, která je nutná pro dosažení určitého farmakologického účinku mohou být sloučeniny testovány několika biologickými stanoveními.

• 0 ····

Inhibice vazby vitronektinu

00 » · · « » 0 0 0 » · 0 « » 0 0 fl ·· 0«

Pevná fáze [³H]-SK&F-107260 vázající se na αιβ₃: Lidský α₂β₃(0,1 až 0,3 mg/ml) z placenty nebo krevních destiček v pufru

T (obsahuje 2 mM CaČl₂ a 1 % oktylglukosidu) se naředí rvi f rcm T* nhcabiTi i r i τη Ί mM Papi _Λ Ί mM ΜηΠ _n Ί mM C* 1 ~ Z r>i τ *F v '-A X J- S— * 11 -i- ·—» C< xx x* _J X. 11U1 -X 1LU.Í -J- AIUL4 \ W X. X

A) a 0,05 % NaN₃, a pak se ihned přidá do ELISA ploten o 96 jamkách (Corning, New York, N.Y.) v množství 0,1 ml na jamku. Přidá se 0,1 až 0,2 pg α₂β ₃ na jamku. Plotny se inkubují přes noc při teplotě 4 °C. V průběhu experimentu se jamky jednou promyjí pufrem A, a inkubují s 0,1 ml 3,5% bovinního sérového albuminu ve stejném pufru, po dobu 1 hodiny, při teplotě místnosti. Po inkubaci se jamky úplně odsají a dvakrát se promyjí 0,2 ml pufru A.

Sloučeniny se rozpustí ve 100% DMSO tak, aby vzniklo 2 mM zásobního roztoku, který se ředí vazebným pufrem (15 mM Tris-HCl s pH 7,4, 100 mM NaCl, 1 mM CaCl₂, 1 mM MnCl₂, 1 mM MgCl₂) na konečnou koncentraci sloučeniny 100 μΜ. Tento roztok se pak ředína požadovanou konečnou koncentraci sloučeniny. Do jamek se ve třech provedeních přidají různé koncentrace neznačených antagonistů (0,001 až 100 μΜ), a to je následováno přidáním 5,0 mM [³H]-SK&F-107260 (aktivita 240-10^-6 až 318 · 10⁶ s^_1/mmol) .

Plotny se inkubují po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Po inkubaci se jamky úplně odsají a jednou jamka po jamce promyjí 0,2 ml ledového pufru A. Receptory se solubilizují s 0,1 ml 1% SDS a stanoví se vazba [³H]-SK&F107260 kapalinovým scintilačním čítáním po přidání 3 ml prostředku Ready Safe do Beckmanova LS čítače scintilace kapaliny (Beckman LS Liquid Scintillation Counter), se 40% účinností. Nespecifická vazba [³H]-SK&F-107260 se stanoví za přítomnosti 2 μΜ SK&F-107260, a je opakovaně méně než 1 % • to to*toto * · i* .· .toto ·· · · · · · * · ; · · · · ·«· · ·· 2 • · * ·· ·· ’ · · · · í ··· «toto· « ·«· • to to ·· «· ·· celkového množství původního radioaktivně značeného ligandu. IC₅o (koncentrace antagonisty potřebná pro inhibici 50 % vazeb [³H]-SK&F-107 2 60) se určí běžným nelinárním vynesením křivky metodou nejmenších čtverců, která je .

modifikací LUNDON-2 programu. K₄ (disociační konstanta antagonisty) se vypočítá podle rovnice:

Ki = IC₅₀/ (1 + L/K_d) kde

L je koncentrace a K_d je disociační konstanta [³H]SK&F-107260.

Sloučeniny podle přítomného vynálezu inhibují vazbu vitronektinu na SK&F-107260 v koncentraci v rozmezí zhruba

2,5 až asi 0,001 mikromol.

Sloučeniny podle vynálezu se také testují na kostní resorpci in vitro a in vivo, a to ve stanoveních, která jsou v oboru běžná pro určování inhibice novotvorby kosti, jako je stanovení tvorby důlků, které je popsané v EP 528 587, a které může takébýt provedeno za použití lidských osteoklas-. tů namísto krysích osteoklastů, a model ovarektomizované krysy, který je popsán v publikaci Wronski a kol., Cells and · Materials., Sup.· 1, 69 až 74 (1991).

Stanovení migrace buňky hladké svaloviny cévy

Použijí se krysí nebo lidské aortální hladké svalové buňky. Migrace buněk se monitoruje v Transwéllově komoře pro buněčné kultury, za použití polykarbonatové membrány s póry o velikosti 8 pm (Costar). Nižší plocha filtru se povleče vitronektinem. Buňky se suspendují v DMEM obohaceném 0,2% bovinním sérovým albuminem v koncentraci 2,5 až 5,0 x 10⁶jamek/ml, a předem se zpracovávají s testovanou sloučeninou v různých koncentracích po dobu 20 min při teplotě 20 °C.

·· · · · · · · * · · • · « 0 0 00 · 0 · « • · · 0« 0 · · '» * · · · • · · · 0 · · · · · · ·· 0 9 9 · 0 · · ··

Rozpouštědlo jako takové se použije jako kontrola. 0,2 ml buněčné suspenze se umístí do horního oddílu komory. Nižší oddíl obsahuje 0,6 ml DMEM obohaceného 0,2% bovinním sérovým albuminem. Inkubace probíhá při teplotě 37 °C, v atmosféře směsi 95 % vzduchu a 5 % CO₂ po dobu 24 hodin. Po inkubaci se buňky na horním povrchu filtru, které nemigrovaly, odstraní jemným seškrábnutím. Filtr se pak fixuje methanolem a obarví 10% Giemsou. Migrace se měří buď

a) počítáním počtu buněk, které migrovaly na nižší povrch filtru, nebo

b) extrakcí obarvených buněk 10% kyselinou octovou a následným určením absorbance při 600 nM.

Model thyroparaidektomizované krysy

Každá experimentální skupina sestává z 5 až 6 dospělých samců krys kmene Sprague-Dawley (tělesná hmotnost 250 až 400 g) .' U krys se provede thyroparaidektomie’ (od prodejce, Taconic Farms) 7 dní před použitím. Všechny krysy dostávají substituční dávku thyroxinu každé 3 dny. Při příjmu krys ze změří hladiny cirkulujícího ionizovaného vápníku v plné krvi, ihned poté, co byla odebrána venepunkcí z ocasu do heparinizovaných zkumavek. Krysy jsou použity pokud je hladina ionizovaného vápníku menší než 1,2 mM/litr (měřeno na Ciba-Corningově modelu 634 pH analyzátoru vápníku). Každé kryse se zavede permanentní venózní a arteriální katetr pro dodávání zkoumané látky a pro odebírání vzorků krve. Krysy jsou pak udržovány na dietě, kdy dostávají krmivo bez vápníku a deionizovanou vodu. Měří se základní hladiny vápníku a každá krysa dostává buď kontrolní vehikulum nebo lidský parathormon 1-34 peptid (hPTHl-34, dávka 1,25 pg/kg/h ve fyziologickém roztoku s 0,1% bovinním sérovým albuminem, Bachem, Ca) nebo směs hPTHl-34 a testované látky, kontinuální intravenózní infuzí do venózního katetru použitím zevní infuzní pumpy. Odpověď • · · · * · · · « ·

A · · 9··· A · A « · β *; A 4·'** · * * · ·· A A A · ··· <| » A · A · · A A kalcémie každé krysy se měří ve dvouhodinových intervalech v průběhu infuzního období trvajícího 6 až 8 hodin.

Stanovení resorpce a adheze lidských osteoklastů

Stanovení důlkové resorpce a adheze byla vyvinuta a standardizována za použití normálních lidských osteoklastů odvozených od tkáně osteoklastomu. Stanovení 1 bylo vyvinuto pro měření důlkových objemů osteoklastů laserovou konfokální mikroskopií. Stanovení 2 bylo vyvinuto jako třídění s vyšším obratem, kde se měří fragmenty kolagenu (uvolněné během resorpce) kompetitivní ELISA metodou.

Stanovení 1 (použití laserové konfokální mikroskopie) • Ze zásoby skladované v tekutém dusíku se odeberou alikvoty suspenzí buněk odvozených od lidského osteoklastomu, rychle se ohřejí na 37 ^QC a jednou se promyjí centrifugací RPMI1640 médiem (frekvence otáček 1000 za min, 5 min při teplotě 4 °C) .

• Médium se odsaje a nahradí se myší.anti-HLA-DR protilátkou, pak se v poměru 1:3 zředí RPMI-1640 médiem. Suspenze se inkubuje po dobu 30 min na ledu, za častého míchání.

•Buňky se dvakrát promyjí studeným RPMI-1640 médiem, následuje centrifugace (frekvence otáček 1000 za min, 5 min při teplotě 4 °C), a pak se buňky přenesou do sterilní centrifugační zkumavky o objemu 15 ml. Mononukleární buňky se spočítají ve zdokonalené Neubauerově sčítací komoře.

• Dostatečný počet magnetických kuliček (5 na mononukleární buňku) povlečených husím anti-myším IgG (Dynal, Great Neck,

N.Y.) se odebere z jejich zásobní nádoby a umístí do 5 ml • · čerstvého média (tím se odplaví toxická azidová konzervační látka). Médium,se pak odstraní imobilizací kuliček magnetem a nahradí se čerstvým médiem.

t • Kuličky se smísí s buňkami a suspenze se inkubuje na ledu po dobu 30 min. Suspenze se často promíchává.

• Buňky obalené kuličkami se imobilizují magnetem a zbývající buňky (frakce bohatá na osteoklasty) se dekantují do sterilní centrifugační zkumavky o objemu 50 ml.

• K buňkám obaleným kuličkami se přidá čerstvé médium, aby se uvolnily jakékoliv zachycené osteoklasty. Tento promývací postup se zopakuje lOx. Buňky obalené kuličkami se odstraní.

. z · ' • Životaschopné osteoklasty se spočítají v čítači komořé za·, použití fluorescein-diacetatu pro označení živých buněk. Pro zavedení vzorku do komory se použije umělohmotná pasteurova pipeta se širokým kalibrem pro jedno použití. , • Osteoklasty se peletují centrifugací a jejich,hustota se přizpůsobí na příslušný počet do EMEM média (počet osteoklastů se nádor od nádoru·liší) obohaceného 10% fetálním telecím sérem a 1,7 g/litr hydrogenuhličitanem sodným.

• Alikvoty buněčné suspenze o objemu 3 ml (na zpracovanou sloučeninu) se dekantují do centrifugačních zkumavek o objemu 15 ml. Buňky se peletují centrifugací.

• Do každé zkumavky se přidá 3 ml příslušného vzorku zpracované sloučeniny (ředěné do 50 μΜ EMEM médiem). Jsou zahrnuty také příslušné kontroly vehikulem, pozitivní kontrola (myší monoklonální protilátka proti • · · · · · · · · fl ·· ·· ««« · · · • ···· · · · · « · · ti ·» '··

100 pg/ml) a ,·.^-·· # · • · • · '#· vitronektinovému receptoru [87MEM1] ředěná na izotypová kontrola (IgG_2a ředěná na 100 pg/ml) inkubují při teplotě 37 °C po dobu 30 min.

·' ·

Vzorky se • Díly buněk o objemu 0,5 ml se naočkují na sterilní plátky dentinu na plotnu o 48 jamkách se inkubují při teplotě 37 °C podobu 2 h. Každé zpracování se sleduje ve čtyřech vyhotoveních.

• Plátky se promyjí šestkrát vyměněným teplým PBS (10 ml/jamka na plotně o 6 jamkách), a pak se umístí do čerstvého média, které obsahuje vzorek zpracovávané sloučeniny nebo kontrolní vzorky. Vzorky se inkubují při teplotě 37 °C po dobu 48 hodin.

Postup s kyselou fosfatázou rezistentní na tartarat (TRAP) (selektivní barvení buněk osteoklastické linie) • Plátky kosti obsahující přichycené osteoklasty se promyjí fyziologickým.roztokem pufrovaným fosfátem a fixují 2% glutaraldehydem (v 0,2M kakodylatu sodném) po dobu 5 min.

• Poté se promyjí vodou a inkubují po dobu 4 min v TRAP pufru při teplotě 37 °C (0,5 mg/ml naftol-AS-BI-fosfátu rozpuštěného v N,N-dimethylformamidu a smíchaného s 0,25 M citrátového pufru.o pH 4,5, obsahující 10 mM tartaratu sodného).

• Po promytí ledovou vodou se plátky ponoří do chladného acetatového. pufru (0,1 M, pH 6,2), který obsahuje 1 mg/ml látky fast red garnet, a inkubují při teplotě 4 °C podobu 4 minut.

• Přebytečný pufr se odsaje a plátky se po promytí vodou «to · ···· · · to · * ·*·· ·· *to • ·· to, · ·· ··· ·· · ··· ···· ···· «· to to to O· · · · · vysuší na vzduchu.

• TRAP pozitivní osteoklasty (cihlově červená/fialová sraženina) se spočítají mikroskopií v jasném poli a poté se odstraní z povrchu.dentinu sonikací.

·. Objemy důlků se určí Nikon/Lasertec ILM21W konfokálním mikroskopem.

Stanovení 2 (použití odečtení prostřednictvím ELISA)

Lidské osteoklasty se obohatí a připraví pro sledování sloučeniny tak, jak je popsáno v počátečních 9 krocích ve stanovení 1. Pro názornost jsou tyto kroky zopakovány níže.

• Ze zásoby skladované.v tekutém dusíku se odeberou alikvoty suspenzí buněk odvozených od lidského osteoklastomu, rychle se ohřejí na 37 °C a jednou se promyjí centrifugací RPMI1640 médiem (frekvence otáček 1000 za min, 5 min při teplotě °C).

• Médium se odsaje a nahradí myší anti-HLA-DR protilátkou, pak se v poměru 1:3 naředí RPMI-1640 médiem. Suspenze se inkubuje po dobu 30 min na ledu, za častého míchání.

• Buňky se dvakrát promyjí studeným RPMI-1640 médiem, následuje centrifugace (frekvence otáček 1000 za min, 5 min při teplotě 4 °C), a pak se buňky přenesou do sterilní centrifugační zkumavky o objemu 15 ml. Mononukleární 'buňky se spočítají ve zdokonalené Neubauerově počítací komoře.

• Dostatečný počet magnetických kuliček (5/mononukleární buňku) povlečených husím anti-myším IgG (Dynal, Great Neck, • · ·.. · ♦ · · ·

N.Y.) se odebere z jejich zásobní nádoby a umístí do 5 ml čerstvého média (tím se odplaví toxická azidová konzervační látka). Médium se pak odstraní imobilizací kuliček magnetem a nahradí se čerstvým médiem.

• Kuličky se smísí s buňkami a suspenze se inkubuje na ledu po dobu 30 min. Suspenze se často promíchává.

• Životaschopné osteoklasty se spočítají v čítači komoře za použití fluorescein-diacetatu.pro označení živých buněk. Pro zavedení vzorku do komory se použije umělohmotná pasteurova pipeta se širokým kalibrem pro jedno použití.

• Osteoklasty se peletují centrifugací a jejich hustota se přizpůsobí příslušnému počtu do EMEM média (počet. .... osteoklastů se nádor od nádoru liší) obohaceného 10% fetálním telecím sérem a 1,7 g/litr hydrogenuhličitanem sodným.

Naproti způsobu ze stanovení 1 popsaném výše, se sloučeniny sledují ve 4 dávkách proto, aby se získala IC50, způsobem, jak je upřesněno níže.

• Přípravky osteoklastů se předem inkubují po dobu 30 min při teplotě 37 °C s testovanou sloučeninou (4 dávky) nebo s kontrolami • Potom se naočkují na plátky bovinní kortikální kosti do jamek na plotně pro tkáňové kultury o 48 jamkách, a inkubují se po dobu dalších 2 hodin při teplotě 37 °C.

• Plátky kosti se promyjí šestkrát vyměněným fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem (PBS), aby se odstranily neadherující buňky, poté se vrátí do jamek plotny se 48 jamkami, které obsahují čerstvou sloučeninu nebo kontroly.

• Plotna s tkáňovou kulturou se poté inkubuje po dobu 48 hodin při teplotě 37 °C.

• Supernatanty z každé jamky se odsají do jednotlivých zkumavek a testují se kompetitivní ELISA metodou, která, detekuje c-telopeptid kolagenu typu I, který se v průběhu procesu resorpce uvolňuje. Použije se komerčně dostupná ELISA (Osteometer, Denmark), která obsahuje králičí protilátku specificky reagující se sekvencí 8 aminokyselin (Glu-Lys-Ala-His-Asp-Gly-Gly-Arg), která je přítomna v karboxy-terminálním telopeptidu al-řetězce kolagenu typu I. Výsledky se vyjádří jako % inhibice resorpce při porovnání s kontrolním vehikulem.

Stanovení adheze lidských osteoklastů

Lidské osteoklasty jsou obohaceny a připraveny pro sledování sloučeniny podle výše uvedeného popisu počátečních 9 kroků stanovení 1. Pro názornost jsou dále tyto kroky zopakovány.

• Ze zásoby skladované v tekutém dusíku se odeberou alikvoty suspenzí buněk odvozených od lidského osteoklastomu, rychle ·· ♦··· • · se ohřejí na 37 °C a jednou se promyjí centrifugací RPMI1640 médiem (frekvence otáček 1000 za min, 5 min při teplotě • Médium se odsaje a nahradí myší anti-HLA-DR protilátkou, p3.k ss v poiuširu 1:3 risřscii Ρ.ΡΜΣ“·1640 iriédisrn. Susp-Θπζθ' ss inkubuje po dobu 30 min na ledu, za častého míchání.

• Buňky se dvakrát promyjí studeným RPM.I-1640 médiem, následuje centrifugace (frekvence otáček 1000 za min, 5 min při teplotě 4 °C), a pak se buňky přenesou do sterilní centrifugační zkumavky o objemu 15 ml. Mononukleární buňky se spočítají ve zdokonalené Neubauerově počítací komoře.

• Dostatečný počet magnetických kuliček (5/mononukleární buňku) povlečených husím anti-myším IgG (Dynal, Great Neck, N.Y.) se odebere z jejich zásobní nádoby a umístí do 5 ml čerstvého'média (tím se odplaví toxická azidová konzervační látka). Médium se pak odstraní imobilizací kuliček magnetem a nahradí se čerstvým médiem.

• Buňky obalené>kuličkami se imobilizují magnetem a zbývající buňky (frakce bohatá na osteoklasty) se dekantují do sterilní centrifugační zkumavky o objemu 50 ml.

• Životaschopné osteoklasty se spočítají v čítači komoře za použití fluorescein-diacetatu pro označení živých buněk. Pro ·· • · · · · · · · · ·· * ·« ·· ·· ^u zavedení vzorku do komory se použije umělohmotná pasteurova pipeta se širokým kalibrem pro jedno použití.

• Osteoklasty se peletují centrifugací a jejich hustota se přizpůsobí příslušnému počtu do EMEMmédia (počet osteoklastů se nádor od nádoru liší) obohaceného 10% fetálním telecím sérem a.1,7 g/litr hydrogenuhličitanem sodným.

•Osteoklasty odvozené od osteoklastomu se předem inkubují se sloučeninou (4 dávky) nebo s kontrolami, při teplotě 37 °C po dobu 30 min.

• Buňky se poté naočkují na podložní sklíčka povlečená ostěopontinem (lidský nebo krysí osteopontin, 2,5 pg/ml) a inkubují se po dobu 2 hodin při teplotě 37 °C.

• Neadherující buňky se odstraní důkladným promýváním sklíček fyziologickým roztokem pufrovaným fosfátem a buňky, které zůstanou na sklíčku, se fixují acetonem.

• Osteoklasty se barví na kyselou fosfatázu rezistentní na vinan (TRAP) , selektivní markér, buněk s tímto fenotypem (viz kroky 15 až 17), a spočítají se mikroskopií v jasném poli. Výsledky se vyjádří jako % inhibice adhěze při porovnání s kontrolou vehikulem.

Stanoveni adheze buněk

Buňky a buněčná kul tura

Lidské embryonální buňky ledviny (HEK293 buňky) se získají od ATCC (katalogové číslo CRL 1573). Buňky se pěstují v Earlově minimálním esenciálním médiu (EMEM) , které obsahuje Earlovy soli, 10 % fetálního bovinního séra, 1 % ·· · ·'* ·· ·· glutaminu a 1 % penicilinu/streptomycinu.

Konstrukty a transfekce

3,2 kb EcoRI-KpnI fragment podjednotky β₃ a 2,4 kb Xbal-Xhol fragment podjednotky á₃ se vloží do míst pCDN vektoru klonujících EcoRI-EcoRV (Aiyar a kol., 1994), který obsahuje CMV promotor a G418 selektabilní markér prostřednictvím ligace tupého konce. Pro stabilní expresi se 80 x 10⁶ HEK 293 buněk elektrotransformuje a β₃ konstrukty (20 ěg DNA do každé podjednotky), použitím Gene Pulseru (Hensley a kol., 1994), a naočkuje se do 100 mm ploten (5 x 10⁵ buněk/plotnu). Po 48 hodinách se růstové médium obohatí 450 pg/ml Geneticinu (G418 sulfát, GIBCO-BRL, Bethesda, MD). Buňky se udržují ve selekčním médiu, až j.sou jejich kolonie dostatečně velké, aby mohly být použity pro stanovení.

Imunocytochemická analýza tranfekovaných buněk

Pro určení, zdali transfekty exprimova.ly HEK 29, se buňky imobilizují na skleněných mikroskopických podložních sklíčkách imobilizují centrifugací, fixují acetonem po dobu 2 min při teplotě místnosti, a vysuší vzduchem. Specifická reaktivita s 23C6 se demonstruje použitím monoklonálni protilátky specifické pro komplex α_χβ₃, použitím standardní metody nepřímé imunofluorescence.

Studie buněčné adheze

Corningovy ELISA plotny o 96 jamkách se přes noc při teplotě 4 °C předem povlékají 0,1 ml lidského vitronektinu (0,2 pg/ml v RPMI médiu). V průběhu experimentu se plotny jednou promyjí RPMI médiem a blokují 3,5% BSA v RPMI médiu po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Transfekované buňky • to ···* • to · · ··· ··

293 se resuspendují v. RPMI médiu, obohaceném 20 mM Hepes o pH 7,4, a 0,1% BSA v hustotě 0,5 x 10⁶ buněk/ml. Do každé jamky se přidá 0,1 ml buněčné suspenze a inkubuje po dobu 1 hodiny při teplotě 37 °C, za přítomnosti nebo nepřítomnosti různých antagonistů α₃β₃. Po inkubaci se přidá 0,025 ml 10% a 1 P 1 Δ a )-\n rn lz \ j σ o -P ί νη-ί ί

Λ-V í. X X j IA XX ¹ f ** f O* U1X j O C X. Λ 04 J místnosti po dobu 10 min. Plotny se třikrát promyjí 0,2 ml RPMI média a adherující buňky se barví 0,1 ml 0,5% toluidinové modři, po dobu 20 min při teplotě místnosti. Nadbytečné barvivo se odstraní důkladným promýváním deionizovanou vodou. Toluidinová modř inkorporovaná do buněk se eluuje přidáním 0,1 ml 50% ethanolu, který obsahuje 50 mM HCI. Adheze buněk se kvantifikuje na čítači mikrotitrační plotny při optické hustotě 600 nm-(Titertek Multiscan MC, Sterling, VA) .·

Stanoveni pevné fáze vazby άιβδ

Vitronektinový receptor αχβδ se čistí, z lidské placenty. Přípravek receptorů se· naředí 50 mM Tris-HCl o pH 7,5, 100 mM NaCI, 1 mM CaCl2, 1 mM MnCl2, 1 mM MgCl2 (pufr A), a'ihned se přidá do ELISA ploten o 96 jamkách, v množství 0,1 ml na jamku. Do každé jamky se přidá 0,1 až 0,2 pg α₃β₃. Plotny se inkubují přes noc při teplotě 4 °C. V průběhu experimentu se jamky jednou promyjí pufrem A, a inkubují se s 0,1 ml 3,5% bovinního sérového albuminu ve stejném pufru,, po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Po inkubaci se jamky kompletně odsají a dvakrát promyjí 0,2 ml pufru A.

Během stanovení kompetice [³H]-SK&F-107260 se přidávají dó jamek různé koncentrace neznačených antagonistů (0,001 až 100 μΜ) , a to je. následováno přidáním 5,0 nM [³H]SK&F-107260. Plotny se inkubují po dobu 1 hodiny při teplotě

4 4444 • 4 44 místnosti. Po inkubaci se jamky kompletně odsají a jednou se jamka po jamce promyjí 0,2 ml ledově chladného pufru A. Receptory se solubilizují 0,1 ml 1% SDS a vazba [³H]-SK&F107260 se stanoví kapalinovým scintilačním čítáním po přidání 3 ml prostředku Ready Safe do Beckman LS 6800 čítače kapalinové scintilace, s účinností 40 %. Nespecifická vazba [³H]-SK&F-107260 se stanoví za přítomnosti 2 μΜ [³H]-SK&F107260 a je konzistentně méně než 1 % celkového původního množství radioaktivně značeného ligandu. IC50 (koncentrace antagonisty potřebná pro inhibici 50 % vazeb [³H]-SK&F107260) se stanoví běžným nelineárním vynesením křivky metodou nejmenších čtverců, která je modifikací LUNDON-2 programu. K± (disociační konstanta antagonisty) se vypočítá z Cheng a Prusoffovy rovnice:

Ki = ICso/d + L/K_d) kde

L- je koncentrace a K_d je disociační konstanta pro [³H]-SK&F107260. Inhibice vazby GPIIb-IIIa zprostředkované RGD

Čištění GPIIb-IIIa jednotek prošlých promytých lidských krevních destiček (získaných od Červeného kříže) se lyžuje opatrným mícháním v 3% oktylglukosidu, 20 mM Tris-HCl o pH 7,4, 140 mM NaCl, 2 mM CaCA, při teplotě 4 °C po dobu 2 hodin. Lyzát se centrifuguje při 100 000 g po dobu 1 hodiny. Získaný supernatant se aplikuje na 5 ml čoček ve sloupci s lektin sefarozou 4B (E. Y. Labs), který se předem ekvilibruje 20 mM Tris-HCl o pH 7,4, 100 mM NaCl, 2 mM CaCl₂ a 1% oktylglu48 • · ··· · • ...... · ϊ í i • · · to* ·· ··· ·· · «·· ···· · · · · • to · ·· toto toto ·· kosidu (pufr A). Po inkubaci trvající 2 hodiny se sloupec promyje 50 ml studeného pufru A. Lektinem zadržený GPIIbIIIa se eluuje pufrem A, který obsahuje 10 % dextrózu.

Všechny postupy se provádí při teplotě 4 °C. Získaný GPIIbIIIa má čistotu více než 95%, jak se ukáže při elektroforéze v SDS polyakrylamidovém gelu.

Inkorporace GPIIb-IIIa do lipozomů

Směs sestávající ze 70 % fosfatidylserinu a 30 % fosfatidylcholinu (Avanti Polar Lipids) se suší na stěnách skleněné zkumavky pod proudem dusíku. Čištěný GPIIb-IIIa se naředí na konečnou koncentraci 0,5 mg/ml a smísí s fosfolipidy v poměru protein:fosfolipid =1:3 (hmotnostně). Směs se resuspenduje a sonikuje v sonikační v lázni po dobu 5 min. Potě se směs přes noc dialyzuje za použití systému trubic k dialyzačnímu řezu o molekulové hmotnosti 12 000 až 14 000, proti 1000-násobnému nadbytku 50 mM Tris-HCl o pH 7,4, 100 mM NaCI, 2 mM CaCl₂ (se 2 výměnami). Lipozomy obsahující GPIIb-IIIa se centrifugují při 12 000 g po dobu 15 min, a resuspendují se v dialyzačním pufru na konečnou koncentraci proteinu přibližně 1 mg/ml. Lipozomy se skladují při teplotě -70 °C až do chvíle, kdy se použijí.

Kompetitivní vazba na GPIIb-IIIa

Vazba na fibrinogenový receptor (GPIIb-IIIa) se stanoví metodou nepřímé kompetitivní vazby, která používá [³H]-SK&F-107260 jako ligand typu RGD. Stanovení vazby se provede na souboru filtrační plotny o 96 jamkách (Millipore Corporation, Bedford, MA), za použití hydrofilních duraporových membrán s průměrem pórů 0,22 μιη. Jamky se předem povlečou 0,2 ml polylyzinu v koncentraci 10 ěg/ml ·· ···· ·· » « » « • · (Sigma Chemicals Co., St. Louis, MO), pri teplotě místnosti po dobu 1 hodiny, aby se blokovaly nespecifické vazby. Do jamek se přidají různé koncentrace neznačených benzazepinů ve čtyřech provedeních. Do každé jamky se přidá [³H]-SK&F107260 v konečné koncentraci 4,5 nM, a následuje přidání 1 pg čištěných destičkových lipozomů obsahujících GPIIb-IIIa. Směsi se inkubují po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. GPIIb-IIIa navázaný na [³H]-SK&F-107260 se oddělí od nenavázaného filtrací za použití filtrační soustavy Millipore, což je následováno promytím ledovým pufrem (dvakrát, pokaždé 0,2 ml). Vázaná radioaktivita, která zůstává na filtrech, se sčítá v 1,5 ml prostředku Ready to Solve (Beckmann Instruments, Fullerton, CA) v Beckmann čítači kapalinové scintilace (Model LS6800), s účinností 40 %. Nespecifická vazba se stanoví v přítomnosti 2 μΜ neznačeného SK&F-107260 a je konzistentně méně než 0,14 % celkové radioaktivity dodané do vzorků. Všechny údaje jsou průměrem výsledků stanovení ze čtyřech provedeních.

Údaje kompetitivní vazby se analyzují vynesením nelineární křivky metodou nejmenších čtverců. Tento způsob poskytne IC50 antagonisty (koncentrace antagonisty, která inhibuje specifickou vazbu [³H]-SK&F-107260 při 50% rovnováze). IC50 souvisí s rovnovážnou disociační konstantou (Ki) antagonisty získané výpočtem podle Cheng a Prusoffovy rovnice:

Ki = IC₅o/(l + L/Kd) kde

L je koncentrace [³H]-SK&F-107260 použitá ke stanovení kompetitivní vazby (4,5 nM) a K_d je disociační konstanta [³H]-SK&F-107260, což je 4,5 nM, jak se určí Scatchardovou

00·· analýzou.

«0 ·· ·· *· » ·0 · 0 *· *

0 ·0 0 0 0 * • · · · ··· ·· · • · · · · ·· · ·· ·· ·· ·«

Výhodné sloučeniny podle tohoto vynálezu mají afinitu k vitronektinovému receptoru v porovnání s afinitou k receptoru pro fibrinogen vyšší než 10:1. Nejvýhodnější sloučeniny mají poměr aktivity vyšší než 100:1.

Účinnost sloučenin podle tohoto vynálezu samotných nebo v kombinaci s protinádorovým léčivem může být určena použitím několika modelů myšího transplantabilního nádoru.

Pro detaily těchto viz US patenty č. 5 004 758 a 5 633 016.

Následující příklady nemají v žádném případě omezovat rámec tohoto vynálezu, ale jsou uvedeny proto, aby ilustrovaly přípravu a použití sloučenin podle tohoto vynálezu. Odborníkovi v oboru bude ihned zřejmé i mnoho jiných provedení.

Příklady provedení vynálezu

Obecné údaje

Spektra nukleární magnetické rezonance se zaznamenávají při frekvencích 250 nebo 400 MHz. Chemické posuny jsou udávány v částech na milion směrem dolů od vnitřního standardu tetramethylsilanu .(TMS). Zkratky pro hodnoty NMR jsou následující: s = singlet, d = dublet, t = triplet, q = kvartet, m = multiplet, dd = dvojitý dublet, dt = dvojitý triplet, app = zřejmý, br = široký. J znamená NMR kuplovací konstantu udávanou v Hertzech. CDCI3 znamená deuteriochloroform, DMSO-d6 znamená hexadeuteriodimethylsulfoxid a CD3OD znamená tetradeuteriomethanol. Infračervená (IR) spektra se zaznamenávají způsobem transmise, a polohy pásů jsou udávány v obrácených vlnových číslech (cm^-1).

• fe · · fe ·· · · · · • · · · · · · · · · · * fe • e · ···· ···· fefe · ·· wfe ·· ··

Hmotnostní spektra se zaznamenávají ionizačními metodami použití elektrosprchy (ES = electrospray) nebo FAB. Elementární anaylýzy se provedou buď na místě nebo prostřednictvím Quantitative Technologies Inc., Whitehouse, NJ. Teploty tání se měří na Thomas-Hoover přístroji pro měření teplot tání, a jsou nekorigované. Všechny teploty jsou uvedeny ve stupních celsia.

Pro chromatografií na tenké vrstvě se použijí plotny s tenkou vrstvou Analtech Silica Gel GF a E. Merck Silica Gel 60 F-254. Jak mžiková chromatografie, tak gravitační chromatografie se provedou na silikagelu E. Merck Kieselgel 60 (rozměr částice 0,038 až 0,0688 mm). Analytická a preparativní HPLC se provedou na Rainin nebo Beckmann chromatografech. ODS znamená chromatografický nosič z oktadecylsilyl derivatizovaného silikagelu. 5 μ Apex-ODS znamená chromatografický nosič ve formě oktadecylsilylem derivatizovaného silikagelu s nominální velikostí částice 5 μπι, vyrobené Jones Chromatography, Littleton, Colorado.

YMC ODS-AQ® je ODS chromatografický nosič, a je to registrovaná ochranná známka společnosti YMC Go. Ltd.,

Kyoto, Japonsko. PRP-1® je polymerní (styrendivinylbenzenový) chromatografický nosič, a je to registrovaná ochranná známka společnosti Hamilton Co., Reno, Nevada. Celíte® je filtrační pomůcka, která je složena z oxidu křemičitého na bázi rozsivkové zeminy promytého kyselinou, a je to registrovaná ochranná známka společnosti Manville Corp., Denver, Colorado.

Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat, ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat a ethyl-(±)-10,11-dihydro3-(trifluormethansulfonyloxy)-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat se připraví podle postupu z WO 9701540-A1. 2-[2-(452

• · ··· · • · · • · · « · · • · · »· 9

Methoxybenzylamino)-6-pyridyl]ethanol se připraví podle postupu z WO 95/32710. 6-Methoxy-l-indanon se připraví způsobem podle autorů House a Hudsona, J. Org. Chem., 35,

647 (1970).

Příprava 1

Příprava 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu

a) 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxid

Směs 16,6 g (0,1 mol) hydrochloridu 2-chlorpyridin-Noxidu, 15,3 ml (0,2 mol) 3-amino-l-propanolu, 42 g (0,5 mol) NaHCO3 a 100 ml terč.-amylalkoholu se zahřeje na teplotu zpětného toku. Po 21 hodinách se reakční směs ochladí, zředí 300 ml CH₂C1₂ a přefiltruje podtlakovou filtrací, aby se odstranily nerozpustné látky. Filtrát se odpaří a opětovně odpaří od toluenu., aby se dostal olej žluté barvy.

Chromatografii na silikagelu (20% směs MeOH a CHCI3) se dostane 15,62 g 93% sloučeniny pojmenované v nadpisu jako pevná látka žluté barvy.

TLC (20% MeOH/CHCl₃) Rf 0,48; XHNMR (250, CDC1₃) δ

8,07	(dd,	J =	6,6,	1,2 Hz, 1H)	, 7,34	(široký t, 1H)	, 7,10 až
7,30	(m,	1H) ;	6, 64	(dd, J = 8,	5, 1,4	Hz, 1H); 6,40	až 6,60
(m,	1H) ;	4,49	(široký s, 1H),	3,65 až	3,90 (m, 2H) ;	3,35 až
3, 60	(m,	2H) ;	1,75	až 2,00 (m,	2H) ;

MS (ES) m/e 169 (M + H)⁺.

Příprava 2

Příprava 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]-4-nitropyridin-Noxidu

a) '2-Chlor-4-nitropyridin-N-oxid ’ .

ml roztoku koncentrované H₂SO₄ a 54 ml dýmavé HNO₃se po kapkách přidá při teplotě O °C k roztoku 15,2 g (91,56 mmol) hydrochloridu 2-chlorpyridin-N-oxidu ve 30 ml koncentrované H₂SO₄. Reakční směs se zahřívá'na teplotu 90 °C po dobu 1 hodiny, pak se ochladí na teplotu místnosti a nalije se na 500 g ledu. Reakční směs se udržuje při teplotě místnosti přes noc, pak se ochladí v ledové lázni a pomalu po kapkách se přidá 50% NaOH, aby vznikla sraženina. Ta se sebere a vysuší, aby se dostalo 5,88 g 37% sloučeniny pojmenované v nadpisu jako pevná látka světle žluté barvy.

^NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 8,42 až 8,37 (m, 2H) ; 8,06 až 8,04 (m, 1H).

b) 2-[(3-Hydroxy-l-propyl)amino]-4-nitropyridin-N-oxid'

Postupuje se podobným způsobem jako v přípravě 1, .

s tou výjimkou, že se použije hydrochlorid 2-chlor-4nitropyridin-N-oxid namísto hydrochloridu 2-chlorpyridin-N-. oxidu, sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako prášek žluté barvy během chromatografie na silikagelu (směs MeOH a CH₂C1₂ v poměru 1:9). Opakovanou krystalizaci ze směsi MeOH a CH₂C1₂ a Et₂O se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu:

MS (ES) 214,1 (M + H)⁺.

• to

Příprava 3 • · to · · to • ·» * · · · · • ··· · r to · • · · r · · · · · e ·· · to ».· · ·· β* ·· ··

Příprava 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]-4-methylpyridin-Noxidu '

a) 2-Chlor-4-methylpyridin

13,88 g (200 mmol) nitritu sodného se při teplotě 0 °C pomalu přidává k roztoku 15,0 g (139 mmol) 2-amino-4pikolinu ve 200 ml koncentrované HCI. Reakční směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a míchá se po dobu 16 hodin, pak se nalije do 500 g ledu. Hodnota pH se upraví na 8,0 koncentrovaným NH₄OH a směs se třikrát extrahuje 300 ml etheru. Spojené etherové vrstvy se postupně promyjí dvakrát 200 ml vody a 200 ml roztoku chloridu sodného. Vysušením MgSO₄ a odpařením se dostane 10,3 g 58% sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako nažloutlého oleje:

MS (ES) m/e 127,8 (M + H)⁺.

b) Hydrochlorid 2-chlor-4-methylpyridin-N-oxid

Směs 10,0 g (78,3 mmol) 2-chlor-4-methylpyridinu a 76,05 g (91,0 mmol) 34% kyseliny peroctové v 10 ml ledového AcOH se zahřívá na teplotu 70' °C po dobu 3 hodin. Reakční směs se ochladí, přidá se 35 ml koncentrované HCI a směs se odpaří na rotační odparce. Opakovanou krystalizaci z nbutanolu následovanou rozetřením s etherem se dostane 7,16 g 51% sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bílá pevná látka:

MS (ES) m/e 143,9 (M + H)⁺.

c) 2-[(3-Hydroxy-l-propyl)amino]-4-methylpyridin-N-oxid ······ ·* ·· ·· · · ·· · · · ·, · ···· ·· (ř 0 · *· 0 0·· '·9 · 9 · · 9 9 9 · 9 9 9 9^9 ’ · ·· 0 * ·* ·

0 9 9 9 0 0 ·· ·'·

Směs 7,16 g (39 mmol) hydrochloridu 2-chlor-4methylpyridin-N-oxidu, 6,01 g (80 mmol) 3-aminopropanolu a

16,8 g (200 mmol) NaHCO₃ v 50 ml terč.-amylalkoholu se zahřívá při zpětném toku po dobu 19 hodin. Reakční směs se zředí 200 ml CH2CI2, přefiltruje se a filtrát se odpaří v rotační odparce. Opakovanou krystalizací ze směsi CH₂C1₂ a Et₂O se dostane 5,41 g 75% sloučeniny pojmenované v nadpisu jako žlutá pevná látka.

TLC (15% MeOH/CH₂Cl₃) R_f 0,44;

¹HNMR (400, CDC1₃) δ 7,92 (d, J = 6,7,.ÍH), 7,28 (široký t, 1H); 6,43 (s, 1H) ; 6,33 (dd,.J= 6,6, 2,1 H) ; 3,73 (široký t, 5,7 2H), 6,33 (dd, J = 6,6, 2,1 Hz, 2H); 3,73 (t, J =

5,7 Hz, 2H); 3,47 (q, H = 6,3 Hz, 2H), 2,29 (s, 3H) , 1 82 až 1,88 (m, 2H);

MS (ES) m/e 183 (Μ + H) ⁺ . , .'

Příprava 4

Příprava 6-(methylamino)-2-pyridylethanolu

a) 2-(terč.-Butoxykarbonylamino)-6-pikolin

Roztok 21,63 g (200 mmol) 2-amino-6-pikolinu a .52,38 g (240 mmol) di-terc.-butyldikarbonatu ve 200 ml CH₂C1₂ se odpaří na rotační odparce při. teplotě 50 °C a získaný odparek se nechá rotovat na rotační odparce ve vakuu při teplotě 50 °C. Po 21,5 hodinách se reakční směs zředí 400 ml hexanů a přefiltruje přes silikagel (hexany následované 20% směsí EtOAc v hexanech). Po odpaření zůstane 41,84 g (kvantitativně) sloučeniny pojmenované v nadpisu jako světle žlutý olej, který při stání pomalu tuhne:

·· ···· • · » · · · · 9 9 9 9 9 9 ··· .· toto · ♦ · · · to·' * ·> - toto ·· · ·· .

¹HNMR (250 MHz, CDC1₃) δ 7,71 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 7,40 až 7,65 (m, 2H); 6,80 (d, J = 7,5 Hz, 1H); 2,43 (š, 3H); 1,50 (s, 9H);

MS (ES) m/e 153 (Μ + H - C₄H₈)⁺.

b) 2-[(terc.-Butoxykarbonyl)methylamino]-6-pikolin

3,60 g (90 mmol) 60% NaOH v minerálním oleji se po částech přidá v průběhu několika minut k roztoku 15,62 g (75 mmol) 2-(terč.-butoxykarbonylamino)-6-pikolinu a 9,3 ml (150 mmol) jodmethanu v 75 ml bezvodého DMSO při teplotě 15 °C - v lázni s chladnou vodou. Vnitřní teplota stoupne na 35 °C. Po ukončení vyvíjení plynu se lázeň s chladnou vodou odstraní a reakční směs se nechá míchat při teplotě místnosti. Po 0,5 hodině se tmavě žlutá směs nalije do 300 ml směsi, ledu a. vody .a extrahuje se třikrát 300 ml Et₂O. Kombinované organické vrstvy se promyjí popořadě dvakrát 75 ml vody a 75 ml roztoku chloridu sodného. Vysušením (MgSO₄) a odpařením se dostane žlutý olej, který se chromatografuje na silikagelu (7% směs EtOAc/hexany). '

Dostane se 13,01 g (78%) sloučeniny pojmenované v nadpisu jako světle žlutý olej:

¹HNMR (250 MHz, CDC1₃) δ 7,51 (přibližně t, 1H) , 7,37 .(d, J =

8,2 Hz, 1H); 6,86 (d, J = 7,2 Hz, 1H); 3,38 (s, 3H) ; 2,49 (s, 3H) ; 1,50 (s, 9H).;·

MS (ES) m/e 223 (M + H)⁺.

c) Ethyl-6-[(terč.-butoxykarbonyl)methylamino]-2pyridylacetat • · i · 4 4 4 · · < «· 4· · • 4 4 «444 4 · · · ·· 4 « · ·. 4 C · · 4

Z 19,5 ml (139,14 mmol) di-izopropylaminu a 46,4 ml (115,95 mmol) 2,5M n-BuLi v hexanech ve 350 ml suchého THF. se při teplotě 0 °C pod argonem připraví LDA. Tento roztok se ochladí na teplotu -78°C a v průběhu 10 minut se po kapkách přidává roztok 10,31 g (46,38 mmol) 2-[(terc.butoxykarbonyl)methylamino]-6-pikolinu ve 46 ml suchého THF. Další 2 ml suchého THF se použijí pro přenos. Oranžový roztok se míchá po dobu 15 minut při teplotě -78 °C a potom se rychle přidá 6,2 ml (51,02 mmol) diethylkarbonatu. Roztok červené barvy se míchá po dobu 15 minut při teplotě -78 °C po dobu 15 minut a potom se reakce přeruší 175 ml z poloviny nasyceného NH₄C1. Směs se ohřeje na teplotu +5 °C a extrahuje se 175 ml EtOAc, pak dvakrát 100 ml CH2CI2.

Spojené organické fáze se promyjí 100 ml roztoku chloridu sodného, vysuší MgSO₄ a odpaří se.'Kalný žlutý olej se chromatografuje na silikagelu (15% EtOAc a hexany), aby se dostalo 10,72 g 79% sloučeniny uvedené v nadpisu, jako lehký žlutý olej:

¹HNMR (250 MHz, CDC1₃) δ 7,51 až 7,63 (m, 2H) , 6,91 až 7,03 (m, IH); 4,19 (q, J = 7,1 Hz, 2H); 3,77 (s, 2H) , 3,38 (s, 3H); 1,27 (t, J= 7,1 Hz, 3H) , 1,51 (s, 9H)

MS (ES) m/e 295 (M + H)⁺.

d) Ethyl-6-(methylamino)-2-pyridylacetat

Roztok 10,72 g (36,42 mmol) ethyl-6-[(terč.-butoxykarbonyl)methylamino]-2-pyridylacetatu v 91 ml bezvodého dioxanu se ochladí na teplotu parciální krystalizace rozpouštědla a přidá se 91 ml (364,2 mmol) 4M směsi HC1 a dioxanu. Roztok se ohřeje na teplotu místnosti, míchá se po dobu 17 hodin a potom se odpaří. Výsledná světle žlutá pevná látka se suspenduje směsí CH₂C1₂ a toluenu a pak se znova ‘

··· ·······

..«·♦·'· Á# 4« ·· odpaří, aby se dostalo 8,48 g (kvantitativně) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutý prášek:

¹HNMR (250 MHz, CD₃OD) δ 7,84 (dd, J = 9,0, 7,2 Hz, 1H), 6,96 (d, J = 9,0 Hz, 1H); 6,78 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,22 (q, J = 7,1 Ήζ, 2H) ; 3,93 (s, 2H) , 3,05 (s, 3H) 1,27 (t, J = 7,1

Hz, 3H);

MS (ES) m/e 195 (M + H)⁺.

e) 6-(Methylamino)-2-pyridylethanol

Roztok 1,0 M LÍAIH4 v 95 ml (95 mmol) THF se po kapkách přidá k. automaticky míchané suspenzi 7,34 g (31,82 mmol) ethyl-6-(methylamino)-2-pyridylacetatu v 64 ml'suchého THF při teplotě 0 °G, pod argonem. Přidávání se provádí pomalu dokud se vyvíjí plyn, poté se zbývající roztok přidá rychle. Přidávání trvá 5 až 7 minut. Reakční směs se zahřeje na teplotu místnosti a míchá se po dobu 45 minut, potom se. zahřeje na teplotu zpětného toku. Po 10 minutách se reakční směs ochladí na teplotu 0 °C a zpracuje se postupným přidáním po kapkách 3,6 ml H₂Ó, 3,6 ml 15% NaOH a 10,8 jnl H₂O. Směs se míchá po dobu 10 minut při teplotě 0 °C a 15 · minut při teplotě-místnosti, poté se přefiltruje přes . Búchnerovu nálevku. Filtrační vložka se promyje dostatečným množstvím THF a filtrát se odpaří. Odparek se znova odpaří od toluenu a potom se chromatografuje na silikagelu (5% MeOH ve směsi EtOAc a CHCI3 v poměru ,1:1), aby se dostalo 3,23 g (67%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako žlutý olej, který tuhne na voskovitou pevnou látku:

¹HNMR (250 MHz, CDC1₃) δ 7,36 (dd, J = 8,3, 7,3 Hz, 1H), 6,42 (d, J = 7,3 Hz, 1H); 6,26 (d, J = 8,3 Hz, 1H) , 4,93 až 5,28 (m, 1H) , 4,38 až 4,60 (m, 1H) , 3,96 (t, J = 5,2 Hz, 3H) , • · · · * · * ·*'·♦ v · * · ·♦» ·· · ·· « »♦······

2,90 (t, J .= 5,2 Hz, 3H) , 2,84 (t, j’= 5,4 Hz, *2H) ; ”

MS (ES) m/e 153 (M + H) ⁺ .

Příprava 5

Příprava 2-(ethylamino)-4-thiazolethanolu

a) Ethyl-2-acetylamino-4-thiazolacetat

3,72 g (20 mmol) ethyl-2-amino-4-thiazolacetatu se vloží do 4 ml kyseliny octové a 4 ml acetanhydridu a výsledná suspenze se zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 3 hodin. Odpařením a mžikovou chromatografií na silikagelu ‘ (5% MeOH/CH₂H₂) se dostane 4,1 g (91%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bílá pevná látka:

MS (ES) m/e 229 (M + H)⁺.

b) 2-(Ethylamino)-4-thiazolethanol

K míchanému'roztoku 1,0 M LiAlH₄ v 179 ml (179 mmol) THF se po kapkách přidá roztok 4,4 g (17,9 mmol) ethyl-2acetylamino-4-thiazolacetatu v 50 ml THF. Poté, co je přidávání ukončeno, se reakční směs zahřívá po dobu 3 hodin na teplotu zpětného toku a pak se zpracuje postupným přidáním 0,7 ml H₂O, 0,7 ml 10% NaOH a 2,1 ml,H₂0. Výsledná směs se přefiltruje přes Celíte® a filtrát se odpaří. Čištěním mžikovou chromatografií na silikagelu (5% MeOH/CH₂H₂) se dostane 1,6 g (53%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako jantarově žlutý olej:

MS (ES) m/e 173 (M’ + H)⁺.

·· ···· ·· ·· ·· • · '· · · · · · · to · • to to · · ·* ···· • . · to ··'·· tototo' ·· · • · · ·«·· ···· ·· to ·· ·♦' ·· ··

Příprava 6

Příprava 6-amino-2-pyridylethanolu

a) 6-Amino-2-pyridylethanol

Roztok 0,95 g (3,7.mmol) 2-[2-(4-methoxybenzylamino)6-pyridyl]ethanolu, připraveného podle postupu z WO 95/32710, v 6N HCI se zahřívá na teplotu 60 °C. Po 16 hodinách se reakční směs odpaří ve vakuu a odparek se alkalizuje suchým KOH. Výsledná směs se extrahuje MeOH a MeOH extrakty se vysuší MgSO₄ a odpaří se. Mžikovou chromatografií na silikagelu (5% MeOH/CH₂H₂) se dostane 0,2 g (40%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutý olej :

MS (ES) m/e 139 (Μ + H) ⁺.

Příprava 7

Příprava 3-(nitrobenzyloxykarbonylamino)-1-propanolu

a) 3-(Nitrobenzyloxykarbonylamino)-1-propanol

K suspenzi 5 g (23 mmol) 4-nitrobénzylchlorformatu a

6,4 ml (46 mmol) triethylaminu v 25 ml THF, která se míchá pod argonem při teplotě místnosti, se přidá 1,9 ml (26 mmol) 3-amino-l-propanolu. Výsledná směs se míchá po dobu 72 hodin a potom se odpaří. Odparek se čistí chromatografií na silikagelu (0,5 až 2% MeOH/CH₂Cl₂) , aby se dostaly 2 g (34%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutý olej:

MS (ES) 255,3 (M + H)⁺.

• · • · · · · · · · · · · ·· · ·· ·· *· ··

Příprava 8

Příprava 1-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]izochinolin-N-oxidu

a) 1-Chlorizochinolin-N-oxid

Hydrochlorid 1-aminoizochinolin-N-oxidu (L. W. Deady, Synthetic Communications, 509 až.514 (1977)) se konvertuje na.1-chlorizochinolin-N-oxid za použití niťritu draselného a koncentrované HCl, obecným způsobem popsaným v literatuře (E. V. Brown, J. Amer. Chem. Soc., 3565 až 3566 (1957)).

Sloučenina pojmenovaná v nadpisu se připraví jako světle hnědý olej:

MS (ES) m/e 179,9. (M + H) ⁺ .

b) 1-[(3-Hydroxy-l-propyl)amino]izochinolin-N-oxid

Postupuje se podle způsobu popsaného v přípravě la) , kromě toho, že použije hydrochlorid 2-chlorpyridin-N-oxidu. místo hydrochloridu 1-chlorizochinolin-N-oxidu, sloučenina pojmenovaná v. nadpisu se připraví jako pevná látka jantarově žluté barvy: ¹ _ .

MS (ES) m/e 219,1 (M + H)⁺. ...

Příprava 9 ·

Příprava 2-[N- (3-methansulfonyl-l-propoxy)-N-(terč.butoxykarbonyl)amino]pyridin-N-oxidu

a) 2-[N-(3-Hydroxy-l-propyl)-N-(terč.-butoxykarbonyl)amino]pyridin-N-oxid ···· 4· ·· ·· - *· • ' · · β · · · · β · « • · · · '· ·· .· · · · · ·· * · · · · · · · · · • · « · · · . · * »·**,*

Roztok 8,0 g (47,6 mmol) 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu v 80 ml terc.-BuOH se zpracuje s

11,4 g (55,3 mmol) di-terc.-butyldikarbonatu. Po 18 hodinách se roztok odpaří a odparek se rozetře s hexanem. Výsledná pevná látka se vysuší ve vakuu, aby se dostalo 12,5 g (98%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako pevná látka ne zcela bílé barvy:

MS (ES) m/e 269,3 (M + H)⁺.

b) 2-[N- (3-Methansulfonyl-l-p'ropoxy) -N- (terč. -butoxykarbonyl) amino]pyridin-N-oxid

0,17 ml (2,20 mmol) methansulfonylchloridu se při · teplotě 0 °C po kapkách přidá k roztoku 0,50 g (1,86 mmol)

2-[N-(3-hydroxy-l-propyl)-N-(terč.-butoxykarbonyl) amino]pyridin-N-oxidu a 0,23 ml (2,84 mmol) pyridinu v 5 mlCHC1₃vysušeného na K₂CO₃. Po dokončení prostřednictvím.TLC se reakční směs zředí CHC1₃, promyje ledovou vodou, vysuší Na₂SO₄ a odpaří. Chromatografií na silikagelu (10%

MeOH/CHCl₃) se dostane 0,41 g (64%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbarvý olej:

¹HNMR (250 MHz, CDC1₃) δ 8,25 (dd, J = 6,0, 1,9' Hz, 1H) , 7,25 (m, ,4H) , 4,35 (t, J = 6,2 Hz, 2H) , 3,75 (t, J=6,6 Hz, 2H) , 3,00 (s, 3H), 2,00 (m, 2H), 1,40-(s, 9H).

0,18 g (36%) 2-[N-(3-hydroxy-l-propyl)-N-(terč.-butoxykarbonyl) amino] pyridin-N-oxidu lze v nezměněné podobě rovněž obnovit chromatografickým čištěním.

9·9· • 9 9 · 9 · 9 · · 9 9 • '9 9 9 · 9 9 9 9-9 9 • 9 9 99 99 9 9 9 99 9 • 99 · 9 9 9 9···

9 99 99 99 99

Příprava 10

Příprava ethyl-(+)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-aeetatu

a) 6-Methoxy-l-fenylinden

Roztok 3,0 M fenylmagnesiumbromidu v 680 ml (2,04 mol) Et₂O se pod argonem při teplotě místnosti, za míchání zředí 700 ml Et₂O a po kapkách se v průběhu 1 hodiny přidá roztok 277 g (1,71 mol) 6-methoxy-l-indanonu ve 400 ml THF. Reakční směs se míchá po dobu 2 hodin při teplotě místnosti a potom se za míchání vlije do 2,8 litru nasyceného NH₄C1. Přidá se 1,4 litru vody a organická fáze se oddělí. Vodná fáze se extrahuje dvakrát 1 litrem Et₂O a spojené organické extrakty se odpaří, aby se dostalo 445 g 6-methoxy-l-fenyl1-indanolu, jako. hnědého oleje. Tento olej se rozpustí ve

2,5 litru toluenu a přidá se 12,3 g (0,065 mol) monohydratu kyseliny para-toluensulfonové. Roztok se míchá při zahřívání na teplotu zpětného toku po dobu 16 hodin za použití ĎeanStarkova lapače s kondenzorem (chladičem). Množství sebrané vody je po 2 hodinách minimální a celkem činí 28 ml. Roztok se ochladí a extrahuje popořadě 1 litrem 5% vodného Na₂CO3 a dvakrát 1 litrem vody. Organická vrstva se odpaří, aby se dostalo 400 g tmavě hnědého oleje. Tento olej se destiluje ve vakuu, aby se dostalo 298,2 g (79%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako žlutý olej:

Teplota tání: 152 až 190 °C při tlaku 2,0 kPa;

TLC (10% EtOAc/hexany) R_f 0,75.

b) Kyselina 2-benzoyl-4-methoxyfenyloctová ·· ···· • · · ···· · · to to • · · « · ·· · · · · • · · · · ·· · · -to ·· · • toto · to · . · · · · . ·

4,2 litru acetonu'se vychladí na teplotu 10 °C a v průběhu 1,5 hodiny se přidává souběžně roztok 271 g (1,22 mol) β-methoxy-l-fenylidenu v 1,8 litru acetonu a 1,8 litru Jonesova činidla (připraví se z 470 g (4,70 mol) CrO₃, litru vody a 405 ml koncentrované H2SO4) . K výsledné směsi se ve dvou částech přidá 153 ml’4% vodného OsO₄, jedna část při začátku přidávání a druhá část v polovině přidávání, tak, aby se teplota reakční směsi udržela pod teplotou 15 °C. Po ukončení přidávání se reakční směs ohřeje na teplotu 22 °C a míchá se po dobu 1,5 hodiny, během této doby probíhá mírně exotermická reakce a teplota vzroste na 28 °C. Reakční směs se potom ochladí na teplotu nižší než 20 °C a přidá se 1 litr izopropanolu, zpočátku po kapkách a poté, co skončí počáteční exotermická reakce, se přidává rychle.

V této fázi se míchání stane obtížné. V průběhu přidávání izopropanolu dosáhne teplota 32 °C. Přidají se 2 litry vody a směs se přenese do dělící nálevky. Pro rozpuštění vysrážené kyseliny chromnaté .se přidá další voda a směs se extrahuje 2 litry CH2CI2. Organická (horní) vrstva se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dvakrát 1 litrem CH2CI2. Spojené CH₂C1₂ extrakty se promyjí popořadě 2 litry vody a 2 litry nasyceného roztoku chloridu sodného, a potom se odpaří, aby se dostalo 416 g vlhké šedé pevné látky. Ta se rozetře se směsí acetonu a EtOAc, přefiltruje se a vysuší, aby se dostalo 225,4 g (71%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako pevné látky ne zcela bílé barvy.

Teplota tání: 158 až 159 °C.

c) Kyselina 2-benzyl-4-methoxyfenyloctová

215,5 g (0,80 mol) kyseliny 2-benzoyl-4-methoxyfenyloctové se rozdělí do dvou stejných částí a každá z těchto částí se rozpustí v 1,5 litru ledově chladného AcOH »4 4444 v tlakové nádobě o objemu 2,5 litru. Ke každé části se přidá 10 g (0,0048 mol) .5% Pd/C a obě směsi se protřepávají při teplotě místnosti, v atmosféře vodíku, na Parrově přístroji. Po 2,5 hodinách se směsi přefiltrují za účelem odstranění katalyzátoru a filtrační vložky se promyjí EtOAc. Spojené filtráty se odpaří, aby se dostalo 215 g (kvantitativně) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako hustý žlutý olej, který při stání krystalizuje.

¹HNMR (250 MHz, CDC1₃) δ 7,05 až 7,35 (m, 6H), 6,77 (dd, J = 8,3, 2,7 Hz, IH), 6,71 (d, J = 2,7 Hz, IH), 4,00 (s, 2H), 3,76 (s, 3H),3,54 (s, 2H).

d) 10, ll-Dihydro-3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]-10-cykloheptenon

Roztok 215 g surové (obsahující 204,6 g (0,80 mol) čisté) kyseliny 2-benzyl-4-methoxyfenyloctové v- 1 litru CH2CI2 se míchá pod argonem při teplotě místnosti a přidá se 1 litr DMF, což je následováno 400 ml (4,59 mol) oxalylchloridu. Oxalylchlorid se přidává v průběhu 1 hodiny, zpočátku po kapkách, pro kontrolu vydatného vyvíjení plynu. Roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 16 hodin a potom se odpaří, aby se dostalo 207,7 g (0,756 mol, 95%) surového kyselého chloridu jako žluté kapaliny. Tato kapalina se rozpustí v CH2CI2 do celkového objemu.500 ml a přidává se souběžně s roztokem 100,8 g (0,756 mol) AICI3. k

3,7 litrům CH2CI2, při míchání, pod argonem, při teplotě místnosti. Po ukončení přidávání je teplota 28 °C. Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při. teplotě místnosti, a během této doby se vysráží pevná látka. V průběhu 30 minut se přidá 1 litr vody, zpočátku po kapkách. Směs se potom oddělí a organická fáze se promyje popořadě 1 litrem vody, a 1 litrem 5% vodného NaHCO₃. Roztok CH₂C1₂ se potom odpaří, aby se dostalo 175,3 g žluté pevné látky. Rekrystalizaci ze ·· ···· ··

128 směsi EtOAc a hexanu se dostane pojmenované v nadpisu.

·· ·· • · · · 9

99 9 9-9 9

9 9 9 9 9 9 · • · · · · · · · ·· 99 99 -99 sloučeniny

Teplota tání: 107 až 109 °C.

e) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-10-hydroxy-3-methoxy-5Hdibenzo[a,d]cyklóhepten-10-acetat

1.0 M roztoku lithium-bis-(trimethylsilyl)amidu ve 1282 ml (1,282 mol) hexanů se pod argonem přidá ke 4 litrům THF, při teplotě -70 °C, potom se během 20 minut po kapkách přidá 146 ml (1,49 mol) EtOAc. Reakční směs se nechá míchat po dobu 15 minut a potom se v průběhu 20 minut přidává 378 ml (2,5 mol) Ν,Ν,Ν',N'-tetramethylethylendiaminu.

Reakční směs se míchá 10 minut a potom se v průběhu 40 minut po kapkách přidává roztok 119,2 g (0,50 mol) 10,11-dihydro3-methoxy-5H-dibenžo[a>d]-10-cykloheptenonu v 1,26 litru bezvodého THF. Teplota se v průběhu všech těchto přidání udržuje nižší než -65 °C. Reakční směs se míchá po dobu 20 minut při teplotě -65 až -70 °C a potom se za důkladného míchání vlije do 6,2 litrů nasyceného vodného NH₄C1. Organická vrstva se oddělí a vodná fáze se extrahuje dvakrát jedním litrem EtOAC. Spojené organické extrakty se promyjí dvakrát 1 litrem vody a potom se odpaří, aby se dostalo 175 g světle hnědého oleje. Chromatografií na tenké vrstvě (20% EtOAc/hexany) se získá hodnota R_f 0,5 hlavního (žádaný . produkt) a hodnota R_f 0,7 vedlejšího (obnovený keton) produktu. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu (2 kg, 10% EtOAc/hexany), aby se dostalo 101 g (61%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako žlutý olej.

¹HNMR (250 MHz, CDC1₃) δ 7,63 (d, J = 7,7 Hz, 1H) , 7,00 až 7,30 (m, 4H) , 6,80 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,69 (dd, J = 8,2,

2,6 Hz, 1H), 3,95 až 4,35 (m, 2H), 4,07 (s, 2H), 3,76 (s, ·· 00·· •0 ·· ·· ·· • ···· ····

3H), 3,68 (s, 14,2 Hz, 1H), Hz, 1H), 1,22

1H) , 3, 64 (d, J = 14,2 Hz, 2,79 (d, J = 16,0 Hz, 1H), (t, J = 7,2 Hz, 3H).

• ···· 00 0 0 • 00 00 ·· ··

1H), 3,35 (d, J = 2,66 (d, J = 16,0

f) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-methoxy-5H-dibenzo[a, d] cyklohepten-10-acetat

101 g (0,31 mol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-10-hydroxy3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu se rozpustí v 1,8 litru ledově chladné kyseliny octové a přidá se 28,5 ml (0,34 mol) 12N HC1. Směs se vloží do tlakové nádoby o objemu 2,5 litru, která obsahuje 20 g (0,0094 mol) 5% Pd/C, a výsledná směs se protřepává při teplotě 35 °C ve vodíkové atmosféře v Parrově hydrogenačním přístroji vybaveném plášťovým ohřívačem. Po 18 hodinách se reakční směs ochladí na teplotu místnosti a katalyzátor se odstraní filtrací. Filtrát se odpaří·, aby se dostalo 85,1 g světle žlutého oleje. Ten se chromatografuje na silikagelu (2 kg, stupňový gradient vytvořený 5% až 10% směsí EtOAc/hexany), aby se dostalo 69,1 g (72%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako olej .

¹HNMR (250 MHz, CDC1₃) δ 7,05 až 7,22 (m, 4H) , 7,01 (d, J =

8,2 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 6,67 (dd, J = 8,2,

2,7 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 4,11 až 4,25 (m,

2H) , 3,85 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 3,70 až 3,90 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,31 (dd, J = 15,0 Hz, 1H), 2,93 (dd, J = 15,0, 9,2

Hz, 1H), 2,64 (dd, J = 15,6, 5,0 Hz, 1H), 2,52 (dd, J =

15,6, 9,3 Hz, 1H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H).

g) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Roztok 8,5 g (0,027 mol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3• to • to.

toto to « to to to · to to to to· to « · ·· ···· • ·· ·· ·· ·· > toto to • ·· · t · · · · · ·

9 99 99 99 99 methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu ve 150 ml CH2CI2 se ochladí za míchání pod argonem na teplotu -10 °C. Přidá se 10,7 ml (0,144 mol) ethanthiolu a potom 20,6 g (0,154 mol) AICI3 ve dvou částech během 15 minut.

Exotermickou reakcí po přidáních stoupne teplota na 0 °C a následovně se teplota zvýší na 25 °C použitím vodné lázně. Reakční směs se míchá při teplotě 25 až 30 °C po dobu 2,25 hodin, a v tento moment se vlije na směs ledu a vody. Organická vrstva se oddělí, přidá se 100 ml methanolu a směs se extrahuje dvakrát 50 ml CH₂C1₂. Spojené CH₂C1₂ extrakty se promyjí 250 ml vody a potom se odpaří, aby se dostalo 8,6 g viskozního oleje. Ten se vloží do 150 ml Et₂O a ether se odpaří, zatímco se nahradí hexanem. Požadovaný fenol se odděluje· prvý jako olej, který krystalizuje za míchání při teplotě místnosti. Seberou se dvě várky pevné látky, aby se dostalo 7,1 g (89%) sloučeniny pojmenované v nadpisu.

Teplota tání: 110 až 112 °C.

Příprava 11

HPLC oddělení enantiomerů ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-hydroxy5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu

a) Ethyl-(R)-(+)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat 'a ethyl- (S)·- (-)-10, ll-dihydro-3hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Ethyl-(+)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]- cyklohepten-10-acetat se rozštěpí na jeho enantiomery za následujících podmínek: sloupec s Daicel Chiralcel OJ® (21,2 x 250 mm), 20% ethanol v hexanové mobilní fázi, rychlost průtoku 15 ml za minutu, detekce UV záření vlnové délky 254 nm, injekce 140 mg; t_R pro ethyl-(S)-(-)-10,ll-dihydro-369 • t> - · ««···· hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat = 10,4 minuty; t_R pro ethyl-(R)-(+)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat = 13,1 minuty.

Příprava 12

Příprava ethyl-(±)-10,ll-dihydro-7-fluor-3-hydroxy-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu

a) 1-(3-Fluorfenyl)-6-methoxy-l-indanol

Postupuje se podle postupu z přípravy 10a), kromě toho, že se použije 3-fluor-fenyl-magnesiumbromid místo fenyl-magnesiumbromidu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako jantarově žlutý olej.

MS (ES) m/e 276,0 (M + H) ⁺ .

b) 1-(3-Fluorfenyl)-6-methoxyinden

Postupuje se podle postupu z přípravy 10a), kromě toho, že se použijé 1-(3-fluorfenyl)-6-methoxy-l-indanol místo 6-methoxy-l-fenyl-l-indanolu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane po chromatografii na silikagelu (4% EtOAc/hexany), jako bezbarvý olej.

MS (ES) m/e 241,1 (M + H)⁺.

c) Kyselina 2-(3-fluorbenzoyl)-4-methoxyfenyloctová

Postupuje se podle postupu z přípravy 10b), kromě toho, že se použije 2-(3-fluorfenyl)-6-methoxyinden' místo 6methoxy-l-fenylindenu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako bílá pevná látka. *-—--- • · • · to · «

9, 9 9 to . * to :

MS (ES) m/e 289,2 (M +H)⁺.

d) Kyselina 2-(3-fluorbenzyl)-4-methoxyfenyloctová

Postupuje se podle postupu z přípravy 10c), kromě toho, že se použije kyselina 2-(3-fluorbenzoyl)-4methoxyfenyloctová místo kyseliny 2-benzoyl-4methoxyfenyloctové, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako bezbarvý olej.

MS (ES^-) m/e 273,2 (Μ - H).

e) 10,ll-Dihydro-7-fluor-3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]-10cykloheptenon . '

Postupuje se podle postupu z přípravy 10d), kromě toho, že se použije kyselina 2-(3-fluorbenzyl)-4methoxyfenyloctová místo kyseliny 2-benzyl-4methoxyfenyloctóvé, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako bílá’pevná látka.

Teplota tání: 129 až 130 °C.

MS (ES) m/e 279,2 (M + Na)⁺.

f) Ethyl-(+)-10,ll-dihydro-7-fluor-10-hydroxy-3-methoxy-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Postupuje se podle postupu z přípravy lOe), kromě toho, že se použije 10,ll-dihydro-7-fluor-3-methoxy-5Hdibenzo[a, d]-10-cykloheptenon místo 10,ll-dihydro-3-methoxy5H-dibenzo[a,d]-10-cykloheptenonu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane po chromatografií na silikagelu (8% »· ···· 99 ·· 99 • · 9 9-99«· ···.

*. ·., 9 · - · · · η · · · . · · ·· 9 · * 99 9

.. Q · 9 9· · « · · I '» · * 9-'9 ' »'ů ' « ·

EtOAc/hexany).

MS (ES) m/e 362,2 (M + NH₄) ⁺ .~

g) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-7-fluor-3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Postupuje se podle postupu z přípravy lOf), kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10,ll-dihydro-7-fluor-10hydroxy-3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl- ( + ) -.10, ll-dihydro-10-hydroxy-3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane chromatografii na silikagelu (10% EtOAc/hexany), jako bezbarvý olej. ,

MS (ES) m/e 329,2 (M + H)⁺.

h.) Ethyl- (±) -10, ll-dihydro-7-fluor-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Postupuje se podle postupu z přípravy lOg), kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10,ll-dihydro-7-fluor-3methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl(±)-10, ll-dihydro-3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetatu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane chromatografii na silikagelu (1% MeOH/CH₂Cl₂) , jako bílá pevná látka.

MS (ES) m/e 315,0 (M + H)⁺, 332,0 (M + NH₄) ⁺ .

Příprava 13

Příprava ethyl-(±)-10,ll-dihydro-2-(dimethylamino)methyl-7fluor-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu • to í i

a) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-2-(dimethylamino)methýl-7-fluor3-hydroxy-5H-dibenzo-[a,d]cyklohepten-10-acetat

K roztoku 0,4 g (1,33 mmol) ethyl-(±)-10,11-dihydro7-fluor-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu v 95% ethanolu, který obsahuje 2 M dimethylaminu v 1,0 ml MeOH, se při teplotě místnosti pod argonem přidá 0,5 ml 37% vodného roztoku formaldehydu. Po 20 hodinách se reakční směs zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 5 hodin a potom se odpaří na rotační odparce. Odparek se rozdělí mezi vodu a Et2O a vrstvy se oddělí. Vodná vrstva se extrahuje Et2O a spojené organické vrstvy se promyjí roztokem chloridu sodného, vysuší MgSO₄ a odpaří na rotační odparce, aby se dostalo 330 mg (67%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbarvý olej.

¹HNMR (400 MHz, CDC1₃) δ. 7,20 (m, 1H) , 6,88 (m, 2H) , 6,67 (s, 2H), 4,25 (d, J= 15,1 Hz, 1H), 4,18 (q, 2H) , 3,78 (m, 1H) , 3,74 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 3,55 (s, 2H), 3,20 (dd, 1H), 2,80 (dd, 1H), 2,60 (dd, 1H), 2,53 (dd, 1H), 2,29 (S, 6H) , 1,27 (t, 3H) . '

MS (ES) m/e 372,3 (M + H)⁺.

Příprava 14

Příprava ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-2-methyl-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu

a) Ethyl-(+)-10,ll-dihydro-2-formyl-3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat ml POC1₃ se po kapkách přidá k roztoku 1,0 g • · · · • · 9 9 99 ·· • · · ·. · · e · »· 4' ι : fr· . : : .*·. _t * * · g • '· « · · · · · 9 9., # '·♦ · ό «· '·'« 'k· (3 mmol) ethyl-(±)-10,ll-ďihydro-3-methoxy-5H-dibenzo{a,d]cyklohepten-10-acetatu ve 40 ml suchého DMF, při teplotě místnosti pod argonem, a tmavý roztok se zahřívá na teplotu °C po dobu 48 hodin. Reakční směs se odpaří na rotační odparce a -odparek se rozdělí mezi vodu a EtOAc. Organická vrstva se oddělí, vysuší MgSO₄ a odpaří na rotační odparce. Odparek se znova odpařuje od xylenů (aby se odstranil jakýkoliv zbylý DMF) a potom se chromatografuje na silikagelu (7% EtOAc v hexanech), aby se dostalo 230 mg (21%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbarvý olej.

MS (ES) m/e 339,3 (M + H)⁺.

b) Ethyl-(+)—10,ll-dihydro-3-methoxý-2-methyl-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Směs 220 mg (0,65 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-2formyl-3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, 90 mg 10% Pd/C, 15 ml ledové HOAc a 2 ml koncentrované HC1 se protřepává při. teplotě místnosti v atmosféře vodíku (při tlaku 412,2 kPa). Po 20 hodinách se směs přefiltruje přes Celíte® a. filtrát se .odpaří, aby .se dostalo 200 mg (95%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbarvý olej.

MS (ES) m/e' 325,2 (Μ + H)⁺.

c) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-2-methyl-5Hdibenzo[a,’d]cyklohepten-10-acetat

Ke 30 ml suchého CH2CI2 chlazeného v ledové lázni se přidá 0,38 ml (3,3 mmol) diethylsulfidu a potom 438 mg (3,3 mmol) AICI3. K tomuto roztoku se po kapkách přidá roztok 200 mg (0,6 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-methoxy2-methyl-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu v 6 ml «· ·· 00 • 0 0 * · * .· ·' i* » ϊ i 0* «: z ♦**. 0· ϊ · ι ‘· 0 · · 0 0 · ' '0 '· · '· ‘0 · ’* 0. 9^0 '0 · 0 · suchého CH₂C1₂ a výsledná směs se při teplotě v místnosti míchá po dobu 2 hodin. Reakce se přeruší 10 ml l,0N HCl a vrstvy se oddělí. Organická vrstva se vysuší MgSO₄ a odpaří se na rotační odparce, «aby se dostalo 100 mg (56%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbarvý olej.

MS - (ES) m/e 311,2 (M + H) ⁺ .

Příprava 15

Příprava ethyl-(+)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-6-methyl-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu

a) β-Methoxy-l-(2-methylfenyl)-1-indanol

Připraví se podle postupu z příkladu 10a), kromě toho, že se použije 2-methylfenylmagnesiumbromid místo fenylmagnesiumbromidu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako olej. ¹ , MS (ES) m/e 277,0 (M + Na)⁺.

b) 6-Methoxy-l-(2-methylfenyl)inden

Připraví se podle postupu z příkladu 10a), kromě' toho, že se použije 6-methoxy-l-(2-methylfenyl)-1-indanol místo 6-methoxy-l-fenyl-l-indanolu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane chromatografií na silikagelu (3% EtOAc/hexany) jako bezbarvý olej.

MS (ES) m/e 237,2 (M + H)⁺.

c) Kyselina 4-methoxy-2-(2-methylbenzoyl)fenyloctová •fe ···· ηε · · · · · · · « * / Σ> · © «», ···,·· • fe .· ' fe ' 9 · · '« >· fe · 9 > · · ·

Připraví se podle postupu z příkladu 10b), kromě toho, že se použije 6-methoxy-l-(2-methylfenyl)inden místo

6-methoxy-l-fenylindenu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako viskózní olej.

MS (ES) m/e 285,3 (M + NH⁴)⁺.

d) Kyselina 4-methoxy-2-(2-methylbenzyl)fenyloctová

Připraví se podle postupu z příkladu 10c), kromě toho, že se použije kyselina 4-methoxy-2-(2-methylbenzoyl)fenyloctová místo kyseliny 2-benzoyl-4-methoxyfenyloctové, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako viskózní olej. ' ·

MS (ES) m/e 288,2 (M + NH⁴) ⁺ .

e) 10, ll-Dihydro-3-methoxy-6-methyl-5H-dibenzo[a,ď]-10cykloheptenon

Připraví se podle postupu z příkladu lOd), kromě toho, že se použije.kyselina 4-methoxy-2-(2-methylbenzyl)fenyloctová místo kyseliny 2-benzyl-4-methoxyfenyloctové, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane chromatografií na silikagelu (6% EtOAc/hexany) jako bílá pevná látka.

MS (ES) m/e 253,0 (M + H)⁺.

f) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-10-hydroxy-3-methoxy-6-methyl-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Připraví se podle postupu z příkladu lOe), kromě toho, že se použije 10,ll-dihydro-3-methoxy-6-methyl-5Hdibenzo[a,d]-10-cykloheptenon místo 10,ll-dihydro-3-methoxy• ·· 0 • · · » · · · · »<► 0 * · .9’ · · · 0 0 · 0 * • · · <> 0 · · · ♦· 0 · · · ··· 0 · · t · · 0 9 ·· · · 0 ·0 0· 0 0 5H-dibenzo[a,d]-10-cykloheptenonu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane chromatografii na silikagelu (8% EtOAc/hexany).

MS (ES) m/e 358,2 (M + NH⁴)⁺.

g) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-methoxy-6-methyl-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Připraví se podle postupu z příkladu lOf), kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10,ll-dihydro-10-hydroxy-3methoxy-6-methyl-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl-(±)-10,ll-dihydro-10-hydroxy-3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane chromatografii na silikagelu (5% EtOAc/hexany) jako bezbarvý olej.

MS (ES) m/e 325,3 (M + H)⁺. ·.

h) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-6-methyl-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat ·

Připraví se podle postupu z příkladu lOg), kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-methoxy-6methyl-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl-(±)10,ll-dihydro-3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetatu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane po rozetření s MeOH jako bílá pevná látka.

MS (ES) m/e 311,2 (M + H)⁺.

' φ · φ φ «· * φ φφ φφ φ φ · 4 φ 4 ». ρ · φ ϊ • φ · φφφ φ φ φ · • »' φ © φ ·'· · φφφ ^:φ é‘ φ • · φ « · φ φ φ φ ·· φ . · φ·¹ φ Φ·* »Φ -«'Φ φφ

Příprava 16

Příprava ethyl-(i)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-nitro-l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetatu

a) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-nitro-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Roztok 0,85 g (4 mmol) 2-[3-(hydroxy-l-propyl)amino]4-nitropyridin-N-oxidu a 0,63 ml (4 mmol) diethylazodikarboxylatu v 10 ml bezvodého DMF se po kapkách přidá k roztoku 0,59 g (2 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-hydroxy5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu a 1,10 g (4,2 mmol) trifenylfosfinu v 10 ml bezvodého DMF, při teplotě-místnosti pod argonem. Po 23 hodinách se reakční směs. odpaří a odparek se znova dvakrát odpaří od xylenů. Chromatografií. na silikagelu (gradient: EtOAc/hexany v poměru 1:1, potom \. EtOAc, potom 5% MeOH ve směsi EtOAc a CHCI3 s poměrem .1:1) se dostane surová sloučenina. Nezměněný (±)-10,ll-dihydro-3hydroxy-5H-‘dibenzo [a, d] cyklohepten-10-acetat může být obnoven z frakcí směsí EtOAc a hexanů· v poměru 1:1.

Opakovanou chromatografií surové sloučeniny pojmenované v nadpisu (3% MeOH ve směsi EtOAc a CHC1₃ v poměru 1:1) se dostane 0,72 mg (73%) čisté sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako žlutá pěna.

TLC (10% MeOH ve směsi EtOAc a CHCI3 v poměru 1:1) Rf 0,59;

¹HNMR (250 MHz, CDC1₃) δ 8,19 (d, J = 7/1 Hz, 1H) , 7,46 (d, J = 2,9 Hz, 1H), 7,35 (dd, J = 7,1, 2,9 Hz, 1H), 7,00 až 7,30 (m, 5H), 7,00 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,81 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,70 (dd, J = 8,2, 2,6 Hz, 1H), 4,29 (d, J = 15,1 Hz, 1H),

4,18 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 4,08 (t, J = 5,5 Hz, 2H) , 3,86 (d, • · « · · · '· * · • · '· · · » · ·'··'' 9 ··' · ·· ·· *'· ··

J = 15,1 Hz, 1H), 3,72 až 3,90 (m, 1H), 3,59 (q, J = 6,3 Hz, 2H), 3,30 (dd, J = 15,0, 4,2 Hz, 1H), 2,93 (dd, J = 15,0,

9,3 Hz, 1H) , 2,64 (dd,’J = 15,6, 5,1 Hz, 1H), 2,51 (dd, J = 15,6, 9,3 Hz, 1H), 2,10 až 2,30 (m, 2H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H).

MS (ES) m/e 4 92 (Μ + H)⁺ .

Příprava 17

Příprava ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-nitro-l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetatu

a) Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-nitro-l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat

Postupuje se podle postupu z přípravy 16, kromě toho, že se použije ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl-(±)-10,11dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-lÓ-acetatu a připraví se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

MS (ES) m/e 492 (Μ + H)⁺.

Příprava 18

Příprava 10,ll-dihydro-3-methoxy-5H-dibenzo[a, d]-10cykloheptenonu

a) Kyselina 2-benzyl-4-methoxyfenyloctová

Roztok 13,0 g (0,048 mol) kyseliny 2-benzoyl-479 • to to··» '·· ·· to · toto • to · to -· ·' to ·. » to • ·V ft . · · toto · to · ·' » · ·. ··' · · · · · > · · · • · · ·*·· ···· • ·· '· ·· · · to · ·· methoxyfenyloctové připravené způsobem uvedeným v J. Med.

Chem., 24, 998 (1981) v 600 ml ledově chladné kyseliny octové se zpracuje pod argonem se 4,3 g 10% Pd/C a hydrogenuje se při tlaku 343,5 kPa po dobu 17 hodin. Směs se přefiltruje přes Celíte® a filtrát se znova odpaří od toluenu a methylenchloridu, aby se dostalo 14,2 g sloučeniny pojmenované v nadpisu.

^NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 3,52 (s, 2H) , 3,75 (s, 3H) , 4,0 (s,

3H), 6,7 (m, 2H), 7,15 (m, 6H).

bj 10, ll-Dihydro-3-met.h’oxy-5H-dibenzo [a,d] -10-cykloheptenon .Roztok 14,2 g- (0,05.5 mol) kyseliny 2-benzyl-4methoxyfenyloctové ve 120 ml benzenu a 28 ml thionylchloridu se zahřívá při zpětném toku po dobu 1 hodiny a odpaří se. Kyselý chlorid se rozpusti v 40 ml· suchého methylenchloridu a roztok se pod argonem po kapkách přidá k roztoku 14,7 g (0,11 mmol) A1C1₃ v 600 ml’methylenchloridu. Reakční směs se míchá pod argonovou atmosférou po dobu 2,5 hodin při teplotě místnosti a potom se reakce přeruší 200 ml směsi ledu a vody. Vrstvy se oddělí a organická fáze se‘postupně promyje 10% roztokem NaOH a vody a zředěnou kyselinou Chlorovodíkovou; Výsledný’ roztok se zředí 200 ml etheru, vysuší MgSO₄ a odpaří se. Pevný odparek se rozetře se směsí etheru a hexanu v poměru 1:1 a filtrací se zachytí 9,35 g sloučeniny pojmenované v nadpisu.

Teplota tání 105 až 106 °C.

¹HNMR (400 MHz, CDCI3) δ 3,72 (s, 3H) , 4,1 (s, 2H) , 4,2 (s,

2H), 6,7 (d, 1H), 6,82 (s, 1H), 7,30 (m, 4H), 8,1 (d, 1H).

• to '·'·'·φ to'·' to· to* ' ·· * · · « « · · ί·' ·» · '^rr * β.Η, · 9i · · ·· 9 '9 9- ·' to »·»' »*i «> · · · « ·> Λ· * to · to to'· · · * · ·

9 · *· ·· toto'

Příprava 19

Příprava ethyl-(+)-10,ll-dihydro-3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklo.hepten-lO-acetatu

a) Ethyl-(±)-(3-methoxyfenyl)indenacetat

K chladnému roztoku 4,0 g (18 mmol) 3-(3-methoxyfenyl)indenu v 15 ml THF připraveného způsobem uvedeným v J. Med. Chem., 24, 998 (1981) se při teplotě 0 °C během 5 minut po kapkách přidává 20 ml 1M roztoku LiN(TMS)2 v THF.

Výsledný roztok sé po kapkách přidává k roztoku 3,34 g (20 mmol) ethylbromacetatu v 15 ml THF při teplotě -78 °C, během 30 minut. Po 2,5 hodinách se reakce přeruší nasyceným roztokem chloridu amonného a vrstvy se oddělí. Organická vrstva se ..vysuší MgSO₄ a odpaří se, aby se, aby se dostal surový produkt, který se čistí sloupcovou chromatografií (SiO₂/2 až 4% EtOAc v hexanu), aby se dostalo 1,1 g . .

sloučeniny pojmenované v nadpisu.'

ÁHNMR. (400 MHz, CDC1₃) δ 1,30 (t, 3H) , 2,50 (m, 1H) , 2,85 (m, .

1H), 3,85 (s, 3H), 4,0 (m, 1H), 4,20 (q, 2H) , 6/6 (s, 1H),

6,9 (ni, 1H), 7,2 (s, 1H) , 7,35 (m, 6H) .

b) Ethyl-(±)-3-[(3-methoxybenzoyl)]fenylsukcinat

Roztok 1,1 g (3,6 mmol) ethyl-(±)-3-(3-methoxyfenyl)indenacetatu ve 30 ml acetonu se zpracuje s 0,5 ml 4% roztoku oxidu osmičelého a následně se po kapkách přidá

1,2 M (5 ml, 6 mmol) Jonesova činidla, způsobem popsaným v literatuře (J. Org. Chem., 58, 4745 (1993)). Po míchání přes noc při teplotě místnosti se reakce tmavé reakční směsi přeruší 2,5 ml izopropanolu, což je následováno 0,9 ml bisiřičitanu sodného a 30 ml vody. Produkt se extrahuje

ethylacetátem, promyje roztokem chloridu sodného, vysuší MgSO₄ a odpaří, aby se dostal odparek jako pevná látka. Rozetřením se směsí etheru a hexanu v poměru 1:1 se dostane 0,76 g sloučeniny pojmenované v nadpisu.

¹HNMR (400 MHz, CDC1₃) δ 1,18 (t, 3H) , 2,90 (m, 1H) , 3,3 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 4,1 (q, 2H), 4,4 (m, 1H), 4,4 (d, 1H),

7,25 (m, 2H), 7,5 (m, 6H).

c) Ethyl-(±)-3-[(3-methoxybenzyl)]fenylsukcinat

Směs 0,76 g (2,1 mmol). ethyl- (±)-3-[ (3-methoxybenzoyl)]fenylsukcinatu a 0,6 g 10% Pd/C v 35 ml ledově chladné kyseliny octové se hydrogenuje při tlaku 343,5 kPa po dobu 17 hodin. Směs se přefiltruje přes Celíte® a filtrační vložka se promyje kyselinou octovou. Filtrát se odpaří a znovu odpaří od toluenu a methylenchloridu, aby se dostalo 0,65 g sloučeniny pojmenované v nadpisu.

^XHNMR (400 MHz, CDC1₃) δ 1,20 (t, 3H) , 2,20 (m, 1H)’, 3,0 (m, 1H), 3,74 (s, '3H), 4,1 (q, 2H) ,. 4,18 (q, 2H) , 4,4 (d, 1H) ,

6,2 (m, 2H) , 7,22 (m, 6H.) .

d) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-methoxy-ll-pxo-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

K automaticky míchanému roztoku 0,65 g (1,9 mmol) ethyl-(+)-3-[(3-methoxybenžyl)]fenylsukcinatu v 10 ml suchého methylenchloridu se přidá 0,2 ml DMF a 0,2 ml (2,28 mmol) oxalylchloridu, Po 1,5 hodině se roztok po kapkách přidá k suspenzi 0,6 g (4,5 mmol) chloridu hlinitého v 15 ml suchého methylenchloridu. Po 2 hodinách.se reakce přeruší ledově chladnou vodou, vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje methylenchloridem. Spojené organické vrstvy se

vysuší MgSO₄ a odpaří se. Odparek se čistí sloupcovou chromatografií (SiO₂/2 až 4% EtOAc/hexan), aby se dostalo 0,3 g sloučeniny pojmenované v nadpisu. , ^NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 1,28 (t, 3H) , 2,88 (m, 1H) , 3,55 (m, 1H)‘, 3,84 (s, 3H) , 3,88 (d, 1H) , 4,18 (q, 2H) , 4,85 (d, 1H) , '4,95 (m, 1H) , 5,8 (m, 2H) , 7,22 (m, 4H) , 8,1 (s, . 1H) .

e) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-methoxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Směs 0,3 g (0,93 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihýdro-3methoxy-ll-oxo-5H-dibenzo[a,d]-cyklohepten-10-acetatu a

0,3 g 10%' Pd/C v 25 _;ml ledově chladné kyseliny octové se hydrogenuje při tlaku '343,5 kPa po dobu 18 hodin. Směs se přefiltruje, přes. Celíte® a promyje kyselinou octovou.

Filtrát se odpaří a znovu odpaří od toluenu a methylenchloridu, aby se dostalo 0,25.g; sloučeniny pojmenované v nadpisu. ·’ ^XHNMR (400 MHz/ CDCI3) δ 1,28 (t, 3H) , 2,60 (m, 2H), 2,90 (m, 1H), 3,30 (m, 1H),;3,8O (s, 3H), 3,85 (d, 1H) , 4,18 (q, 2H), 4,30 (d, 1H) , 6,70 (m, 2H) , 7,0 (d, 1H), 7,22. (m, 4H) .

f

Příprava 20

Příprava ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-dibenzo[b,f]oxepin-10-acetatu

a) 4-Methoxy-2-fenoxyacetofenon

Postupuje se způsobem podle T. W. Harrise a kol., J. Med. Chem., 25(7), 855 až 858 (1982), 1,00 g (5,95 mmol)

2-fluor-4-methoxyacetofenonu reaguje s fenolem, aby se

A A

A A AAAA ··

A * · · · · A · «' A '·

A A O. 4' A · AA « A · ;A

A A A (A A ^ř A A A « A · A A

A A A A A Ά A A A A A

AA A AA A· AA AA dostalo 1,27 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako oleje.

XlNMR (300 MHz, C.DC1₃) δ 7,90 (d, J = 8,8 Hz, 1H) , 7,35 (m,

2H) , 7,20 (m, 1H) , 7,05 '(m, 2H) , 6,70 (dd, J=2,4, 8,8 Hz,

1H), 6,35 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 3,75 (s, 3H), 2,61 (s, 3H).

b) 2-(4-Methoxy-2-fenoxyfenyl)-1-(4-morfolinyl)-1-ethanthion

Postupuje se způsobem podle T. W. Harrise a kol., J.

Med. Chem., 25(7), 855 až 858 (1982), 1,69 g (6,98 mmol) 4methoxy-2-fenoxyacetofenonu reaguje s 0,36 g (11,2 mmol) síry a 0,98 ml (11,2 mmol) morfolinu, aby se dostalo 1,24 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bílé pevné látky.

MS (ES) m/e 344,0 (M + H)⁺.

c) Kyselina 2-(4-methoxy-2-fenoxyfenyl)octová

K roztoku 0,35 g (1,02 mmol) 2-(4-methoxy-2- fenoxyfenyl)-1-(4-morfolinyl)-1-ethanthionu v 15 ml i-PrOH’a ‘ 15 ml vody se přidá 0,57 g (10,2 mmol) KOH. Reakční směs se zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 18 hodin, potom se ochladí na teplotu místnosti, zředí vodou a promyje Et₂O.

Vodná vrstva se okyselí na pH = 4 koncentrovanou HCI a extrahuje se CHC1₃. 'Spojené extrakty se vysuší MgSO₄ a odpaří se, aby se dostalo 0,22 g sloučeniny pojmenovanév nadpisu, jako bílé pevné látky. Ta se.použije bez dalšího čištění.

MS (ES) m/e 259,0 (M + H)⁺.

d) 3-Methoxydibenzo[b,f]-10-oxepinon ·· ··

Roztok 594 mg (2,3.mmol) kyseliny 2-(4-methoxy-2fenoxyfenyl)octové v 10 ml thionylchloridu se zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 30 minut, potom se odpaří do sucha a odparek se znova odpaří od toluenu. Výsledný odparek se rozpustí ve 3 ml suchého CH2CI2 a roztok se po kapkách, při teplotě místnosti, přidá k suspenzi 673 mg (5,06 mmol) AICI3 ve 4 ml suchého CH2CI2 v plamenem, vysušené nádobě, pod argoném. Po míchání po dobu 2,5 hodin se směs zředí 10 ml CH2CI2 a promyje se popořadě l,0N NaOH a roztokem chloridu sodného. Vysušením MgSO₄, odpařením a mžikovou chromatografií na silikagelu (5% EtOAc/hexany) se dostane 264 mg (48%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutého oleje.

^XHNMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,80 (s, 3H), 4,02 (s, 2H), 6,74 až 8,08' (m, 7H) .

e) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-10-hydroxy-3-methoxydibenzo[b,f]oxepin-10-acetat ·

0,94 ml (9,6 mmol) bezvodého EtOAc se po kapkách přidá k roztoku l,0M lithium-bis(trimethylsilyl)amidu v 7 ml (7 mmol) suchého THF v plamenem vysušené nádobě, při teplotě - 78 °C, pod argonem. Po 0,5 hodině se přidá 2,.4 ml (16 mmol) látky TMEDA. Po dalších 5 minutách se během 3 minut přidá roztok 760 mg (3,2 mmol) 3-methoxydibenzo[b,f]-10oxepinonu ve 2 ml THF. Pro přenos se použije další 0,4 ml suchého THF. Reakční směs se míchá při'teplotě -78 °C až -40 °C po dobu 1 hodiny a potom se reakce přeruší 10 ml nasyceného NH₄C1. Směs se zahřeje na teplotu místnosti a extrahuje se EtOAc. Vysušením MgSO₄, odpařením a mžikovou chromatografií na silikagelu (10% EtOAc/hexany) se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu, jako čirý olej.

·· ···· ··, '· · '· · ·· • · '· · · '· · 9- · ·^:· · · fe . · ;Α.· 9 9 99 9 9 9.-9 fe ^fe fe fe fe fe fe «.fefe 9

9'9 9 fefefe · ·'· · · ¹HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 1,14 až 1,20 (t, 3H) , 1,21 až 1,30 (m, 1H)_, 2,62 až 2,68 (dd, 1H) , 2,94 až 3,02 (dd, 1H) , 3,24 až 3,30 (dd, 1H), 3,40 až 3,46 (dd, 1H), 3,78 (s, 3H), 4,08 až 4,18 (m, 2H), 6,60 až 7,26 (m, 6H), 7,64 až 7,68 (dd,

1H) .

f) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-methoxydibenzo[b,f ]óxepin-10acetat

0,48 ml (3,0 mmol) bor-trifluoridetheratu se přidá k roztoku 690 mg (1,95 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-10hydroxy-3-methoxydibenzo[b,f]oxepin-10-acetatu a 0,62 ml (3,9 mmol) triethylsilanu v suchém OH2CI2. při teplotě 0 °C, pod argonem.. Po 20 minutách se reakce přeruší 5% NaHCO₃ a směs se extrahuje CH₂C1₂. Vysušením MgSO.4 a odpařením se dostane žlutý olej. Ten se rozpustí ve 20 ml bezvodého ethanolu a přidá se 413.mg (0,39 mmol) 10% Pd/C. Směs se po dobu 3 hodin hydrogenuje při tlaku 3,43,5 kPa v Parrově .

hydrogenačním přístroji·. Katalyzátor se odstraní filtrací přes Celíte® a filtrát' se odpaří, aby se dostalo .523 mg (86%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako čirého oleje.

¹HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7,18 až 6,58 (m, 7H), 4,18 až 4,08 (m, 2H) ,.3,80 (s, 3H) , · 3,80, až' 3,74 (m, 1H) , 3,40 až 3,30. (dd, 1H), 2,98 až 2,84 (dd, 1H), 2,74 až 2,62 (dd; 1H), 2,60 až 2,52 (m, 1H), 1,32 až 1,20 (t, 3H).

g) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-hydroxydibenzo[b,f]oxepin-10acetat

Roztok 523 mg (1,68 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3methoxydibenzo[b,f]oxepin-10-acetatu v 6,8 ml CH₂C1₂ se při teplotě 0 °C pod argonem po kapkách přidává ke chladnému roztoku BBr₃ v 6,7 ml (6,7 mmol) l,0M CH₂C1₂. Reakční směs se '·· · ·· · · * · · '·· ·· • ».·,·- χ«/·. Λ ·* *' · .· • · · · · · · · · « '· • «, · · · · · · ♦'· · · · · • · · ' · . · · -· · · · . ι· · · ·· · ··, ·· ·.· ·· míchá po dobu 20 minut a potom se opatrně přidá 7 ml CH₃OH. Směs se odpaří a odparek se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (15 až 20% EtOAc/hexany), aby se dostalo 407 mg (89%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutého oleje.

MS (ES) m/e 299 (M + H)⁺.

Příprava 21

Příprava hydrobromidu 2-[ (3-brom-l-propyl)amino]-4-methylpyridin-N-oxidu

a) Hydrobromid 2-[(3-brom-l-propyl)amino]-4-methylpyridin-Noxidu

Roztok 5,0 ml (64,5 mmol.) SOBr₂ ve 20 ml CH2CI2 se po kapkách během 15 až 20 minut při teplotě 0 °C přidává k roztoku 10,0 g (54,87 mmol) 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]4-methyl-pyridin-N-oxidu ve 100 ml CH2CI2. Reakční směs se ohřeje na teplotu místnosti a míchá se po dobu 2 hodin, potom se pomalu přidá 200 ml Et₂O. Rozpouštědla se dekantují od gumovité sraženiny a sraženina se několikrát promyje další směsí CH2CI2 a Et₂O. Výsledný hnědavě žlutý zbytek tuhne přes noc při stání v lednici¹. Tato pevná látka se sebere a promyje se Et₂O, aby se dostalo 15,07 g sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako žluté pevné látky. Další 2,05 g sloučeniny pojmenované v nadpisu se získají jako bílé jehlice odpařením spojených organických vrstev. Celkový výtěžek sloučeniny pojmenované v nadpisu je 17,89 g (96%).

MS (ES) m/e 245 a 247 (M + H)⁺.

Následující příklady ilustrují způsoby přípravy biologicky ¢/ « · · · toto ·. · · · • to · · · ·· · · · · • toto · · toto · · · ·· · • · · to to to to ·.· to · ·« to toto ·· ·· ·· aktivních sloučenin podle'přítomného vynálezu z intermediárních sloučenin popsaných v· předchozích přípravách.

Příklad 1

Příprava kyseliny (±)-10,ll-dihydro-3-[4-(2-pyridylamino)-1butyl]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octové

a) 4-(2-Tetrahydropyranyloxy)-1-tributylstanyl-l-butin

18,8 ml (30 mmol) 1,6M roztoku n-butyllithia v hexanech se v průběhu 2 minut přidá do proudu 4,7 ml (30 mmol) roztoku 2-(3-butynyloxy)tetrahydro-2H-pyranu v 60 ml suchého THF, při teplotě 0 °C, pod argonem. Po 0,5 hodině se najednou přidá 8,1' ml (30 mmol)' tributyltinchloridu a reakční směs se zahřeje na teplotu 'místnosti. Po 3 hodinách se reakční směs zředí 300 ml hexanů a promyje se postupně dvakrát 60 ml vody, dvakrát 30 ml 10%.KF a 60 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Vysušením Na₂SO₄, odpařením a chromatografií na silikagelu (3%,EtOAc/hexany) se dostane 3,58 g (27%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako téměř bezbarvého.oleje. .

TLC (5% EtOAc/hexany) R_f 0,37.

>

¹HNMR (400 MHz, CDCI3) δ 4,66 (úzký t, 1H), 3,75 až 3,96 (m,

2H), 3,49 až 3,62 (m, 2H), 2,56 (přibližně t, 2H) , 1,76 až 1,91 ’ (m, 1H), 1,65 až 1,78 (m, 1H), 1,42 až 1,65 (m, 10H), 1,22 až 1,41 (m, 6H), 0,82 až 1,08 (m, 15H),

b) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[4-(2-tetrahydropyranyloxy)-1(1-butinyl]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat • · • e ··»· *· ·9 » ·-· « • · 9»

Směs 1,34 g (3,13 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3(trifluormethansulfonyloxy)-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetatu, 1,66 g (3,76 mmol) 4-(2-tetrahydropyranyloxy ),-ltributylstanyl-l-butinu, 398 mg (9,39 mmol) LiCl, 110 mg (0,094 mmol) bis-(trifenylfosfin)palladium-dichloridu a 31 ml bezvodého dioxanu se pod argonem zahřívá na teplotu zpětného toku. Po 1,5 hodině se reakční směs odpaří, aby se odstranila většina dioxanu a odparek se vyjme do 100 ml Et₂O.Přidá se 50 ml 10% KF a směs se rychle míchá po dobu 0,5 hodiny.. Vodná vrstva se oddělí a Et₂O vrstva se přefiltruje přes Celíte® a MgSO₄. Filtrát se odpaří a odparek se chromatografuje na silikagelu (10% EtOAc/hexany), aby se dostalo 1,12 g (83%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutého oleje.

TLC (20% EtOAc/hexany) R_f 0,40.

¹HNMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7,21 až 7,30 (m, 1H), 7,06 až 7,20 (m, 5H) , 7,00 (d, J = 7,8 Hz, 1H),4,69 (t, J = 3,6 Hz, 1H), 4,31 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 4,-11 až 4,23 (m, 2H) , 3,76 až 3,97 (m, 4H), 3,59 až ,3,68 (m, 1H), 3,48 až 3,57 (m, 1H), 3,34 (dd, J = 15,2, 4,1 Hz, 1H),.2,97 (dd, J = 15,2, 9,5 Hz,

1H), 2,70 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,65 (dd, J = 15,7, 4,8 Hz, 1H), 2,51 (dd, J = 15,7, 9,5 Hz, 1H), 1,78 až 1,92 (m, 1H), 1,68 až 1,78 (m, 1H), 1,44 až 1,68 (m, 4H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H).

MS (ES) m/e 455 (M '+ Na)⁺.

c) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[4-(2-tetrahydropyranyloxy)-1butyl]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Směs 1,2 g (2,77 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[4(2-tetrahydropyranyloxy)-1- (1-butinyl]-5H-dibenzo[a, d]cyklo~89 toto ·· • · » 9 · • · · ·· 9 β to * · ·· ·· ·· ·· • · · 9 • to · « • toto · • ·· · «· ·· hepten-10-acetatu, 0,3 g (0,28 mmol) 10% Pd/C a 28 ml EtOAc se protřepává při teplotě místnosti v atmosféře vodíku (tlak

343,5 kPa) v Parrově hydrogenačním přístroji. Po 3 hodinách se reakční směs přefiltruje přes Celíte® a filtrát se odpaří. Chromatografií na silikagelu (10% EtOAc/hexany) se dostane 1,06 g (88%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbarvého oleje.

TLC (20% EtOAc/hexany) Rf 0,51.

¹HNMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,05 až 7,20 (m, 4H) , 6,92 až 7,03 (m, 3H), 4,53 až 4,60 (m, 1H), 4,34 (d, J - 15,1 Hz, 1H) , 3,80 až 3,90 (m, 3H), 3,71 až 3,80 (m, 1H) , 3,44 až 3,53 (m, 1H), 3,35 až 3,44 (dd, J = 15,1, 4,1 Hz, 1H), 2,95 (dd, J = 15,1, 9,4 Hz, 1H), 2,65 (dd, J = 15,5, 4,9 Hz, 2H), 2,49 až 2,61 (m, 3H) , 1,77 až 1,90 (m, 1H), 1,45 až 1,77 (m, 9H), 1,27 (t, J = 7,1 Hz, 3H).

MS (ES) m/e 459 (M + Na)⁺.

d) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-(4-hydroxy-1-butyl]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Roztok 456,0 mg (1,04 mmol) ethyl-(±)-10,11-dihydro3-[4-(2-tetrahydropyranyloxy)-1-butyl]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-acetatu a 60 mg (0,31 mmol) monohydrátu kyseliny para-toluensulfonové v 10 ml bezvodého-EtOH se míchá při teplotě místnosti. Po 2 hodinách se reakce přeruší 1 ml 5% NaHCO3 a odpaří se, aby se odstranil EtOH. Odparek se zředí 2 ml vody a extrahuje se CH2CI2. Vysušením MgSO₄, odpařením a chromatografií na silikagelu (směs EtOAc a hexany v poměru 1:1) se dostane 342,4 mg (93%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbarvého oleje.

... 90

TLC (směs EtOAc a hexanů v poměru 1:1) Rf 0,49.

¹HNMR (250 MHz, CDC1₃) δ 6,85. až 7,25 (m, 7H) , 4,34 (d, J =

15,1 Hz, 1H), 4,08 až 4,30 (m, 2H), 3,75 až 3,95 (m, 2H), 3,53 až 3,72 (m, 2H), 3,33 (dd, J = 15,1, 4,1 Hz, 1H), 2,95 (dd,- J = 15,1, 4,1 Hz, 1H) , 2,40 až 2,75 (m, 4H) , 1,27' (t, J =7,1 Hz, 3H).

MS.(ES) m/e 353 (M + H)⁺.

e) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[4-(N-ftalidimido)-1-butyl]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

0,2 ml (1,26 mmol) azodikarboxylatu se po kapkách přidá k roztoku 0,37 g (1,05 mmol) ethyl-(+)-10,11-dihydro3- (4-hydroxy-l-butyl] -5.H-dibenzo [a, d] cyklohepten-10-acetatu, 0,33 g (1,26 mmol) trifenylfosfinu a.0,19 g (1,26 mmol) ftalimidu v 10 ml bezvodého DMF, při teplotě místnosti, pod argonem. Po 23 hodinách se reakční směs odpaří na rotační odparce. Chromatografií na silikagelu (30% EtOAc/hexany) se dostane 0,35 g (70%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbarvého oleje.

MS (ES) m/e 504,3 (M + Na)⁺.

f) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-(4-amino-l-butyl]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

0,11 g (2,18 mmol) hydrazin-monohydratu se přidá k roztoku 0,35 g (0,73 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[4(N-ftalidimido)-1-butyl]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetatu v 10 ml bezvodého EtOH a 2 ml toluenu při teplotě místnosti. Reakční směs se míchá po dobu 17 hodin při teplotě místnosti, potom se přefiltruje a filtrační vložka

se promyje toluenem. Odpařením na rotační odparce se dostane 0,23 g (90%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbarvého oleje. ,

MS (ES) m/e 352,3 (M + H)⁺.

g) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[4-(l-oxo-2-pyridylamino)-1butyl]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Směs 0,31 g (1,88 mmol) hydrochloridu 2-chlorpyridinN-oxidu, 0,22 g (0,63 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-(4amino-l-butyl]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu a 0,26 g (3,13 mmol) NaHCO₃ v 6 ml, terč.-amylalkoholu se zahřívá při zpětném toku po dobu 21 hodin. Reakční směs se zředí 100 ml CH2CI2 a přefiltruje se a filtrát se odpaří na rotační odparce. Chromatografii na silikagelu (směs

MeOH/CH₂Cl2/EtOAc v poměru 1:9:5 ) se dostane 82 mg (30%) sloučeniny pojmenované v·nadpisu, jako žlutého oleje.

MS (ES) m/e 445,2 (M + H)⁺.

h) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[4-(2-pyridylamino)-1-butyl]5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Směs 0,07 g (0,16 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[4(l-oxo-2-pyridylamino)-1-butyl]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten10-acetatu, 0,08 g (0,075 mmol) 10% Pd/C, 0,16 ml (1,6 mmol) cyklohexenu a 4 ml izopropanólu se zahřívá při zpětném toku pod argonem po dobu 14 hodin. Potom se katalyzátor odstraní filtrací přes Celíte®. Filtrační vložka se promyje izopropanolem a MeOH a filtrát se odpaří na rotační odparce, aby se dostalo 0,046 g (69%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako čirého oleje.

· '92 : « ť · ί * 9 9 · · i · * • «· 9 9 9 9 ··· ·· to '· · « <··*···· 909, «· to O · · · ·

MS (ES) m/e 429,3 (M + H)⁺.

i) Kyselina ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[4-(2-pyridylamino)-1butyl]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-lCHoctová

Směs 46 mg (0,11 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[4(2-pyridylamino) -1-butyl] -5H-dib’enzo [a, d] cyklohepten-10acetatu a 0,66 ml (0,66 mmol) l,0N LiOH ve 3 ml THF a 3 ml vody se míchá při teplotě místnosti. Po 24. hodinách se reakční směs odpaří na rotační odparce a odparek se zředí 5 ml vody. Roztok se chladí v ledové lázni a pomalu se přidává l,0N AcOH, aby se dostala bílá sraženina. Chromatografií na C-18 YMC.(45% CHsCN/voda obsahující 0,1 % TFA) se dostane 13 mg (21%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako. bílá pevná 'látka.

MS (ES) m/e 401,3 (M + H)⁺.

Analýza:

Vypočítáno pro: C26H28N2O2 · 0,75 H2O · 1,5 CF3CO2H:

C 59,54

H 5,31 ' '

N 4,72.

Nalezeno: . ..

C 59,69 H 5,31 N 4,72.

- - 93 ·'··'·

Příklad 2 ' Příprava kyseliny (±)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-ethoxy-2pyridylamino)-1-propoxyJ-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octové

a) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-ethoxy-l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat

0,67 g (1,36 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3-(4nitro-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, 6,8 ml (6,8 mmol) l,0M NaOEt v ethanolu a 6,8 ml bezvodého ethanolu se spojí a směs se zahřívá v olejové lázni s teplotou předem nastavenou na 70 °C. Vznikne tmavý roztok, který se zahřívá po dobu .10 minut, potom se olejová lázeň odstraní a roztok, se míchá během dalších 5 až 7 minut, aniž.by byl ohříván zevně. Výsledný roztok se ochladí v ledu a se reakce přeruší 0,47 ml (8,2 mmol) ledové kyseliny octové. Směs se odpaří a odparek se rozdělí mezi 10 ml CH2CI2 a 10 ml zpola r

nasyceného roztoku NH4CI. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje dvakrát 10 ml CH₂C1₂. Spojené organické vrstvy se vysuší MgSO₄ a odpaří se, odparek se znova odpaří od toluenu, aby zůstal načervenale oranžový olej.

Chromatografii na silikagelu (5% MeOH/CHCl₃) se dostane

601,1 mg (90%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako žlutého oleje.

TLC (5% EtOAc/ CHC1₃) R_f 0,36.

^NMR (250 MHz, CDC1₃) δ 7,95 (d, J = 7,1 Hz, 1H) , 6,88 až 7,30 (m, 6H), 6,77 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 6,67 (dd, J = 8,2

2,6 Hz, 1H), 5,95 až 6,20 (m, 2H), 4,28 (d, J = 15,0 Hz,

4,04 (t, J = 5,6 Hz, 2H),

J = 6,5 Hz, 2H), 3,30 (dd, J. J = 15.0. 9.2 Hz. 1H). 2.65

1H), 4,18 (q, J = 7,2 Hz, 2H) ,

3,65 až 4,00 (m, 4H), 3,46 (q, = 15,0, 4,2 Hz, 1H), 2,93 (dd, (dd, J = 15,6, 5,0 Hz, 1H), 2,52 (dd, J = 15,6, 9,4 Hz, 1H) , 1,95 až 2,25 (m, 2H), 1,10 až 1,45 (m, 6H).

MS (ES) m/e 491 (M + H)⁺.

b) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-ethoxy-2-pyridylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Směs 601,1 mg (1,23 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3[3-(4-ethoxy-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]- 5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, 1,2 ml (12,3 mmol) cyklohexenu, 130 mg (0,012 mmol) 10% Pd/C a 12,3 ml bezvodého ethanolu se pod argonem zahřívá na teplotu zpětného toku. Po 23,5 hodinách se reakční směs přefiltruje za horka přes Celíte® a filtrační vložka se promyje ethanolem. Filtrát se odpaří a odparek se znovu odpaří od toluenu. Chromatografií na silikagelu (5% MeOH ve směsi EtOAc/CHCl₃ v poměru 1:1) se dostane 528,1 mg (90%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutého oleje.

TLC (10% MeOH ve směsi EtOAc/CHCl₃) R_f 0,67.

¹HNMR .(400 MHz, CDC1₃) δ 7,89 (d, J = 5,8 Hz, 1H) , 7,05 až 7,18 (m, 4H), 6,99 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,77 (d, J= 2,6 Hz, 1H), 6,66 (d, J = 8,2, 2,6 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 5,8, 2,1 Hz, 1H), 5,86 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 4,73 (široký t, 1H), 4,28 (d, J = 14,9 Hz, 1H), 4,11 až 4,25 (m, 2H), 4,04 (t, J = 5,9

Hz, 2H), 3,98 (q, J = 7,0 Hz, 1H), 3,83 (d, J = 14,9 Hz,

1H), 3,76 až 3,85 (m, 1H), 3,43 (q, J = 6,4 Hz, 2H), 3,30 (dd, J = 15,0, 4,1 Hz, 1H), 2,93 (dd, J = 15,0, 9,2 Hz, 1H), 2,64 (dd, J = 15,6, 4,8 Hz, 1H), 2,52 (dd, J = 15,6, 9,5 Hz, • ·» · toto to to · ·· to to to '·' * to « 9 · 9 · ' to ·, to toto · • toto «tototo to · · to ·♦ « · · to· ·· *·

1H), 2,01 až 2,11 (m, 2H), 1,37 (t, J = 7,0 Hz, 3H), 1,27 (t, J = 7,0 Hz, 3H).

MS (ES) m/e 475 (M + H)⁺.

c) Kyselina (±)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-ethoxy-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octová

1,7 ml (1,7 mmol) l,0N NaOH se při teplotě místnosti po kapkách přidá k roztoku 528,1 mg (1,11 mmol) ethyl-(±) 10, ll-dihydro-3-[3-(4-ethoxy-2-pyridylamino)-l-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]-cyklohepten-10-acetatu v 11 ml bezvodého ethanolu a roztok se zahřívá v olejové lázni s teplotou předem nastavenou na 45 °C. Po 20 hodinách se reakční směs odpaří a odparek se znovu odpaří od vody. Výsledný odparek se rozpustí v 10 ml vody a roztok se přefiltruje. Hodnota pH se 1,0 N HCI upraví na 7a směs se rychle míchá, aby se původně vytvořená gumovitá sraženina přeměnila na pevnou látku. Této přeměně napomůže rozetření skleněnou tyčinkou a špachtlí. Hodnota pH výsledné směsi se opět upraví na 7 a pevná látka se odebere a promyje dostatečným množstvím vody. Filtrát se odpaří a odparek se rozpustí ve vodě s pomocí malého množství 1,ON NaOH. Hodnota pH se upraví na 7, aby se dostala malá druhá várka. Obě várky se spojí a vysuší ve vakuu při teplotě'40 až 50 °C, aby se dostalo 453,7 mg (82%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako ne zcela bílé pevné látky.

HPLC (Hamilton TRP-1®, 45% CH₃CN/H₂O obsahující 0,1% TFA) k' = 1,32.

¹HNMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,78 (d, J = 6, 6 Hz, 1H) , 7,35 až 7,65 (m, 1H), 7,02 až 7,22 (m, 4H), 6,97 (d, J = 8,3 Hz,

1H), 6,82 (d, J = 2,4 Hz, IH), 6,68 (dd, J = 8,3, 2,4 Hz, IH), 6,29 (dd, IH), 6,15 (úzký d, IH) , 4,20 (d, J = 14,6 Hz, IH), 3,93 až 4,12 (m,' 4H), 3,89 (d, J = 14,6 Hz, 2H), 3,60 až 3,71 (m, IH), 3,30 až 3,50 (m, 2H), 3,20 (dd, ‘J = 6,4 Hz, 2H), 3,30 (dd, J = 15,0, 4,1 Hz, IH), 2,93 (dd, J = 15,1,

4,1 Hz, IH), 2,83 (dd, J = 15,1, 10,1 Hz, IH) , 2,60 (dd, J = 16,0, 5,3 Hz, IH), 2,48 (dd, J = 16,0, 8,9 Hz, IH, částečně rušeno signálem residuálního rozpouštědla), 1,90 až 2,05 (m, 2H),1,30 (t, J = 6,9 Hz, 3H).

MS (ES) m/e 447 (M + H)⁺.

Analýza:

Vypočítáno pro C27H30N2O4 · 1,5 HC1;

C 64,70

H 6,33 N 5,59. ·/·.'.

Nalezeno:

C 64,53 ..

H 6,14

N 5,31. . ,

Příklad 3

Příprava kyseliny ( + )-10, ll-dihydro-3-[2-[2-(ethylamino)-4- thiazolyl]-1-ethoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octové

a) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[2-[2-(ethylamino)-4-thiazolyl] -1-ethoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Roztok 0,33 g (1,9 mmol) 2-(ethylamino)-4-thiazol97 '0 0

0 0 0 0 0 · · ' · 0 · • 00 · · ·’ 0 00 00' ethanolu a 0,30 ml (1,9 mmol) diethylazodikarboxylatu v 5 ml bezvodého DMF se během 5 minut po kapkách přidá k roztoku

296,4 mg (1 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu a 525 mg' (2 mmol) trifenylfosfinu v 5 ml bezvodého DMF při teplotě místnosti. Reakční směs se během přidávání udržuje chladná při teplotě místnosti ve vodné lázni. Po 16 hodinách se reakční směs odpaří a odparek se znovu dvakrát odpaří od xylenů. Chromatografii na silikagelu (20% EtOAc/hexany) se dostane 145,0 mg (32%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako žlutého oleje.

TLC (EtOAc/hexany v poměru 1:1) Rf 0,60.

^XHNMR (250 MHz, CDC1₃)	δ 7,00 .až	7,30 (m, 4H	), 6,98 (d, J
8,2 Hz, 1H) , 6, 77 (d,	J =2,6 Hz	, 1H), 6,68	(dd, J = 8,2,
2,6 Hz, 1H), 6,21 (s,	1H), 5,00	až 5,25 (m,	1H) , 4,04 až
4,38 (m, 5H), 3,81 (d,	. J = 15,1	Hz,'1H), 3,	70 až 3,90 (m,
1H), 3,13 až 3,40 (m,	3H), 2,99	(t, J = 6,7	Hz, 2H), 2,92

(dd, J = 14,9, 9,3 Hz, 1H) , 2,64 (dd,. J =15,6, 5,0 Hz, 1H) , 2,51 (dd, J = 15,6, 9,3 Hz, 1H), 1,27 (t, J = 7,2 Hz, 3H).

MS (ES) m/e 451 (M + H)\ • b) Kyselina (±)-10,ll-dihydro-3-[2-[2-(ethyíamino)-4thiazolyl] -1-ethoxy] -5H-dibenzo [a, d] cyklohepten-10-o.ctová

0,32 ml (0,32 mmol) 1,0 N LiOH se po kapkách přidá . ’ k roztoku 145.mg (0,32 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[2[2-(ethyíamino)-4-thiazolyl]-1-ethoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu ve 2,4 ml THF a 0,48 ml vody při teplotě 0 ^QC. Výsledná dvoufázová směs růžovo-oranžové barvy se míchá při teplotě 0 °C po dobu 10 minut, během kterých barva vybledne na oranžovo-žlutou, a potom se směs zahřeje • · · · · · '· · · · '· •·> · ··' «'· .··> ·· na teplotu místnosti. Po 1,5 hodině se přidá menší množství vody (5 kapek), reakční směs se míchá po dobu 42 hodin, potom se ochladí na teplotu 0 °C a neutralizuje se 0,025 ml TFA. THF se odstraní v rotační odparce a výsledný olej ovitý odparek se zředí 0,1% směsí TFA a CH₃CN, aby sé dostal homogenní roztok. Chromatografií v ODS (gradient: 40% směs CH₃CN ve vodě obsahující 0,1% TFA, potom 45% směs CH₃CN ve vodě obsahující 0,1% TFA) se dostanou frakce obsahující sloučeninu pojmenovanou v nadpisu, ty se spojí a CH₃CN se odstraní na rotační odparce. Výsledná vodná směs se alkalizuje při teplotě 0 °C, aby se dostal homogenní roztok. Opatrným okyselením na pH 4 až 5 prostřednictvím l,0N HCI se dostane pevná sraženina, která se sebere, promyje dostatečným množstvím vody a vysuší, aby se dostalo 80,9 mg (51%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako pevné látky ne zcela bílé barvy.

HPLC (Hamilton PRP-1®, 45% CH₃CN/H₂O obsahující 0,1%· TFA) k' = 0,89.

¹HNMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7,02 až 7,18 (m, 4H) , 7,00 (d, J =

8,3 Hz, 1H) , 6,7 9 (d, J = 2,6 Hz, 1H) , 6,68 (dd, J = 8,3,.

2,6 Hz, 1H), 6,45 (s, 1H) , 4,26 (d, J = 14,9 Hz,. 1H)., 4,20 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,87 (d, J = 14,9 Hz, 1H), 3,68 až 3,80 (m, 1H), 3,34 (q, J = 7,3 Hz, 2H, částečně rušeno signálem residuálního rozpouštědla), 3,30 (dd, 1H, částečně rušeno signálem residuálního rozpouštědla), 2,99 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,92 (dd, J = 15,0,. 9,4 Hz, 1H), 2,62 (dd, J = 15,9,

5,0	Hz,	1H) ,	2,47	(dd, J = 15,9, 9,3 Hz, 1H) , 1,27 (t, J
7,3	Hz,.	3Hj .
MS	(ES)	m/e	423 (M	+ H) ⁺ .

Analýza:

♦ · · ♦ · · · · ♦ · · · - * · • · * '· · <· · · · ►'

Vypočítáno pro C24H26N2O3S · 0,67 CF3CO2H:

C .61,3

H 5,39

N 5,62.

Nalezeno:

C 61,21

H 5,36 .N 5,60.

Příklad 4

Příprava kyseliny (S)-10,ll-dihydro-3-[3-(2-pyridylamino)-lpropoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octové

a) Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(l-pxo-2-pyridylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-lO-acetat

K míchanému roztoku 35 g (118 mmol) ethyl-(S)-10,11dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-acetetu v

1,1 litru suchého THF a 600 ml suchého DMF se pod. argonem přidá 29,4 g (175 mmol) 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu a 45,9 (175 mmol) trifenylfosfinu. Poté, co se všechny pevné látky úplně rozpustí (asi 1 hodina), se reakční směs v ledové lázni ochladí na teplotu 0 °C, a stříkačkou se přidá 36,4 ml (175 mmol) 95% diizopropylazodikarboxylatu. Reakční směs se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti a míchá se po dobu 18 hodin. Odpařením a mžikovou chromatografií na silikagelu (CHCl₃/MeOH v poměru 95:5) následovanou druhým čištěním mžikovou chromatografií na silikagelu (CHCls/EtOAc/EtOH v poměru 80:20:5) se dostane 37,66 mg (71%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle

100 žluté pevné pěny.

¹HNMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8,08
7,29	(t,	1Ή), 7,19 až 7,06 (m,
1H),	6, 84	(d, J = 2,5 Hz, ' 1H) ,
1H) ,	6, 69	(dd, J = 8,3,2,6 Hz
J = 14,7	Hz, 1H), 4,13 až 4,07

	• · · · · · • · · · ·’· · , i · · • · ·	·♦ '99 9 i* · '· • · * · . • · · · • · . 9 9	• 9 ·> · • · · • · · <9 9i
(dd,	J = 6,3,	1,1 Hz,	1H)
5H) ,·	6,97 (d,	J = 8,3	Hz,
6,79	(dd, J =	8,5, 1,	6 Hz

(d, J = 14,7 Hz, 1H), 3,66 (m,

J = 15,1, 4,5 Hz, 1H), 2,85 (dd 2,65 (dd, J-= 15,8, 5,4 Hz, 1H)

1H), 6,57 (m, 1H), 4,17 (d, (m, 2H), 4,00 (t, 2H), 3,91 1H) , 3,39 (t, 2H) , 3,19 (dd, , J = 15,1, 10,0. Hz, 1H) , .

, 1,99 (m, 2H), 1,18 (t, 3H).

MS (ES) m/e 447,3 (M + H)⁺.

b) Ethyl-(S)-Ϊ0,ll-dihydro-3-[3-(2-pyridylámino)-1-propoxy]5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

K míchanému roztoku 37,66 g (84 mmol)· ethyl-(S)10, ll-dihydro-3-[3- (l-oxo-2-pyridylamino) -rl-propoxy] -5H- ₍ dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu v 700 ml izopropanolu se . přidá 18 g (16,9 mmol) 10% palladia na aktivním uhlí, pečlivě předem namočeného v izopropanolu pod argonem, a 85 mi (839 mmol) cyklohexenu. Reakční směs se potom zahřívá na teplotu zpětného toku pod argonem v olejové 'lázni s teplotou nastavenou na 90 °C. Po 6 hodinách se přidá dalších 18 g (84 mmol) 10% palladia na aktivním uhlí, pečlivě předem namočeného v izopropanolu pod argonem, a 85 ml (839 mmol) cyklohexenu. Po dalších 18 hodinách se reakce přefiltruje za horka přes Celite® a filtrační vložka se promyje 600 ml směsi MeOH a CHC1₃ v poměru 1:1. Filtrát se odpaří ve vakuu a odparek se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (CHCl₃/MeOH v poměru 95:5), aby se dostalo 29,2 g (81%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutého oleje.

ANMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,94 (dd, J = 5,4, 1,9 Hz, 1H) ,

101

7,35 až 7,31 (m, 1H), 7,18 (d, J = 7,2 Hz, 1H) , 7,14 až 7,06 (m, 3H), 6,97 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,83 (d, J = 2,6 Hz, 1H) , 6,68 (dd, J = 8,3, 2,6 Hz, 1H), 6,54 (t, 1H), 6,44 (m, 2H), 4,17 (d, J = 14,6 Hz, 1H) , 4,13 až 4,02 (rti, 2H) , 4,00 (t,

2H), 3,91 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 3,66 (m, 1H) , 3,35 (m, 2H), 3,19 (dd, J = 15,1, 4,4 Hz, 1H), 2,86 (dd, J = 15,1, 10,1 Hz, 1H), 2,65 (dd, J = 15,8, 5,4 Hz, 1H), 2,55 (dd, J =

15,8, 8,7 Hz, 1H),1,93 (m, 2H) , 1,18 (t, 3H) .

MS (ES) m/e 431,4 (M + H)⁺.

c) Kyselina (S)-10,ll-dihydro-3-[3-(2-pyridylamino)-1propoxy] -^ŠH-dibenzo [a, d] cyklohepten-10-octová

K míchanému roztoku 29,20 g (68 mmol). ethyl- (S)10,ll-dihydro-3-[3-(2-pyridylamino)-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu v.350 ml dioxanu se přidá 110 ml (110 mmol) vodného l,0N NaOH. Kalná reakční směs se potom míchá při teplotě 50 °G v olejové lázni.po dobu 24 hodin a potom se výsledný homogenní roztok neutralizuje 110 ml (110 mmol) l,0N vodné HCI. Roztok se odpaří téměř do sucha na rotační odparce, aby se produkt vysrážel. Supernatant se dekantuje a zbývající gumovitá pevná látka se vysuší ve vakuu a znova rozpustí ve směsi methanolu a CHCÍ3 v poměru 1:1. Čirý roztok se znova odpaří na rotační odparce a důkladně se vysuší ve vakuu. Zbývající pevná látka se rozetře s malým objemem vody, přefiltruje a vysuší ve vakuu, aby se dostalo 26,85 g (94%) sloučeniny.pojmenované v nadpisu, jako ne zcela bílého prášku.

HPLC (Hamilton PRP-1®, 35% CH3CN/H2O obsahující 0,1% TFA) k^z = 2,88.

^XHNMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7,94 (dd, J = 4,7, 1,6 Hz, 1H) ,

102 • fe ···· ·· '·· ·· ·· • · · · fefe '· · ». · fefe · · · fefe .· · · ’· fefefe fefe fefe fefe,··· '· fe fefe · fefe · · fe* · ·· · ·· -fefe .·· ··

7,38 (m, 1H), 7,18 (d, J =.7,3 Hz, 1H), 7,14 (d, J = 3,9 Hz, 2H), 7,08 (m, 1H) , 6,97 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,83 (d, J =

8.6 Hz, 1H) , 6,78 (široký s, 1H) , 6,68 (dd, J. = 8,3, 2,6 Hz, 1H), 6,5.0 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,47' (dd, 1H) , 4,20 (d, J =

14.6 Hz, 1H), 4,00 (t, 2H), 3,88 (d, J.= 14,6 Hz, 1H), 3,67 (m, 1H) , 3,37 (m, 1H), 3,20 (dd, J = 15,2, 4,4 Hz, 1H), 2,83 (dd, J = 15,2, 10,1 Hz, 1H) , 2,60 (dd, J = 15,9, 5,3 Hz,

1H), 2,50 (dd, 1H), 1,95 (m, 2H).

MS (ES) m/e 403,3 (M + H) ⁺ .

Analýza:

Vypočítáno pro C25H26N2O3 ’ H₂O:

C 71,41 H 6,71 N 6,66.

Nalezeno:

C 71,21 H 6,53. N 6,54.

Příklad 5

Příprava kyseliny (±)-10,ll-dihydro-3-[2-(6-ámino-2pyridyl)-1-ethoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octové

a) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[2-(6-amino-2-pyridyl)-1ethoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

103 ·»«· ·· ·· ·« 0·0

0 9 9 9 · 9 · · 0 · <0

Roztok 0,23 g (1,68 mmol) 6-amino-2-pyridylethanolu a 0,26 ml (1,68 mmol) diethyl-azodikarboxylatu-v 5 ml bezvodého DMF se při teplotě místnosti po. kapkách přidá k roztoku 0,48 g (1,82 mmol), ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu a 0,48 g (1,82 mmol) trifenylfosfinu v 5 ml bezvodého DMF. Po 1 hodině se reakční směs odpaří a odparek se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (EtOAc/hexany v poměru 1:1), aby se dostalo 0,030 g sloučeniny pojmenované v nadpisu.

MS (ES) m/e 417 (M + H)⁺.

b) Kyselina (±)-10,ll-dihydro-3-[2-(6-amino-2-pyridyl)-1ethoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octová

Roztok 0,030 g (0,072 mmol) ethyl-(±)-10,11-dihydro3 - [2 - (6-amino-2-pyridyl) -1-ethoxy] -5H-dibenzo [a, d] cyklohepten-10-acetatu a 0,14 ml (0>14 mmol) Ί,ON NaOH ve 2 ml MeOH se míchá.při teplotě místnosti přes noc a potom, se odpaří. Odparek se rozpustí ve vodě a pH roztoku se uzpůsobí na hodnotu 7 prostřednictvím l,0N HCl. Odpařením a .chromatografií ve sloupci z C-18 Bond Elute (směs CH3CN/H2O/TFA v poměru 10:9:1) se dostane 0,013 g sloučeniny pojmenované v nadpisu.

MS (ES) m/e 389 (M + H)⁺.

Příklad 6

Příprava kyseliny (R)-10,ll-dihydro-3-[3-(2-pyridylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octové

a) Ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-[3-(l-oxo-2-pyridylamino)-1104 ·· ··«· • to ···· ·· «· ·· • · ···.·· · · · * ·· .· · · ·· · ·· « propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Roztok 0,70 g (4 mmol) 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu a 0,65 ml (4 mmol) diethylazodikarboxylatu ve 20 ml bezvodého DMF se po kapkách během 10 minut přidává k roztoku 0,45 g (2 mmol) ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-hydroxy5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu a 1,2 g (4 mmol) trifenylfosfinu v 8 ml bezvodého DMF, při teplotě místnosti, pod argonem. Po 23,5 hodinách se reakční směs odpaří na rotační odparce a odparek se znova odpařuje od xylenů, aby se odstranil residuální DMF. Chromatografií na silikagelu (1 až 4% směs CH3OH/CH2CI2) se dostane 0,50 g (74%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako žlutý olej.

MS (ES) m/e 447 (M + H) ⁺ .

b) Ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-[3-(2-pyridylámino)-1-propoxy]5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat.

Směs 0,5 g (1 mmol) ethyl-(Ř)-10,lí-dihydro-3-[3-(1oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten10-acetatu, 0,25 g (0,2 mmol) 10% Pd/C, 2 ml (20 mmol) cyklohexenu a 10 ml izoprópanolu se zahřívá při zpětném toku podobu 18 hodin a potom se katalyzátor odstraní přefiltrováním přes Celíte®. Chromatografií na silikagelu (0,5 až 2% směs CH3OH/CH2CI2) , se dostane 0,4 g (83%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutého oleje.

MS (ES) m/e 431 (M + H)⁺.

c) Kyselina (R)-10,ll-dihydro-3-[3-(2-pyridylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octová

Směs 0,4 g (0,93 mmol) ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-[3105

444«

4.4 4 · • 4 · 4

4 44

44 '· 4 4 4 • 4 4 ·

4 4 4 • 4 4 4

4 4 4

44 (2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetatu a 1,1 ml (1,1 mmol) l,0N NaOH v 10 ml bezvodého EtOH se zahřívá v olejové lázni s teplotou nastavenou na 50. °C.

Po 18 hodinách se reakční směs odpaří na rotační odparce, a odparek se rozpustí ve vodě. pH vodného roztoku se uzpůsobí na hodnotu 4 použitím 3N HC1, pevná sraženina se odebere a promyje vodou. Tato látka se vysuší ve vysokém vakuu při teplotě 40 °C, aby se dostalo 0,36 g (96%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako téměř bezbarvé pevné látky.

[a]_D +50,8° (c = 0,12, CH₃OH).

MS (ES) m/e 403 (M + H)⁺.

Analýza:

Vypočítáno pro C25H26N2O3 · 0,5 H2O:

C 72,97 H 6,61 N 6,80.

Nalezeno:

C 73,09 H 6,38 N 6,58.

Příklad 7

Příprava kyseliny (Š)-10,ll-dihydro-3-[2-[6-(methylamino)-2pyridyl-l-ethoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octové

a) Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[2-[6-(methylamino)-2-pyridyl]106 ·· ···· toto ·· » ··* • · ·· • to ·· • · ♦ · «

1-ethoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Postupuje se podle postupu, z příkladu 6a), kromě toho, že se použije 6-(methylamino)-2-pýridylethanol místo 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]-pyridin-N-oxidu a ethyl-(S)10, ll-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-acetatu; sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane chromatografií na silikagelu (0,2 až 2% směs MeOH/CH₂Cl2) , jako bezbarvý olej.·

MS (ES) 431,2 (M + H)⁺.

b) Kyselina (S)-10,ll-dihydro-3-[2-[6-(methylamino)-2pyridyl]-1-ethoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octová mg (0,18 mmol) ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[2-[6(methylamino)-2-pyridyl]-1-ethoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetátu se rozpustí ve 4 ml THF a přidá se roztok 35 mg (0,84 mmol).LiOH · H₂O ve 4 ml vody. Roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 72 hodin a potom se zředí 10 ml etheru. Supernatant se dekantuje a pevná látka se suspenduje ve vodě. Opatrným okyselením prostřednictvím 3N HCI na pH 4 se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu, jako bílá pevná látka.

MS (ES) 403 (M + H)⁺.

Analýza:

Vypočítáno pro C25H26N2O3 · 0,75 H₂O:

C 72,18

107

Α· AAAA

A A A A AA ··

AA A AAAA A A A ·

AA A AAAA A A A *

A A.· AA AA AA· A A A

AAA AAAA AAAA

AA A AA A· «Α AA

H 6, 66

N 6,73.‘

Nalezeno:

C 72,44

H 6,52

N ‘6,71.

Příklad 8

Příprava kyseliny ( + )-10,ll-dihydro-3-[3-(3, 4,5, 6teťrahydro-2-pyrim'idylamino) -1-propoxy] -5H-dibenzo[a, d] cyklóhepten-10-octové·

a) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-nitrobenzyloxy^s 'karbonyl)amino-l-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat · ' .

Postupuje se podle postupu z příkladu 6a), kromě toho, že se použije 3-(4-nitrobenzyloxykarbonylamino)-1propanol místo 2-[(3-hydřoxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu a_ethyl-(±)-10,11-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d] cyklohepten-10-acetat.místo ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5Hdibenzo[a,d]cyklohěpteh-10-aGetatu; sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako .jantarově, žlutý olej..

MS, (ES) 533,3 (M + H) ⁺ .

b) Ethyl-(±)-10,'ll-dihydro-3-(3-amino-l-propoxy)-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Směs 1,6 g (3 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3-(4nitrobenzyloxykarbonylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a, d] 108 •9 • · '· · · · · · » · · • · · · · · · » · · · • · « ·· · · ··* · · · b · ·,· ···· ···· • O ® ·· 99 9 9 9» cyklohepten-10-acetatu, 0,8 g (1 mmol) 10% palladia na aktivním uhlí a 50 ml ethanolu se protřepává v atmosféře vodíku při tlaku 330 kPa po dobu 3 hodin, potom se katalyzátor odstraní filtrací přes Celíte®. Filtrát se znova odpaří, aby se dostalo 1,2 g (100%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako žlutý olej.

MS (ES) 348,2 (M + H)⁺.

c) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3-(2-pyrimidylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Směs 0,4 g (1 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-(3amino-l-propoxy)-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, 0,5 g (6 mmol) hydrogenuhličitanu sodného, 0,34 g (2 mmol) 2brompyrimidinu a 10 ml ethanolu se zahřívá při zpětném toku pod argonem po dobu 18 hodin. Roztok se potom dekantuje a odpaří se. Odparek se čistí chromatografií na silikagelu (0,2 až 2% MeOH/CH₂Cl₂) , aby se dostalo 0,17 g (34%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutý olej.

MS (ES) 432,3 (M + H)⁺.

d) , Ethyl- (±)-10, ll-dihydro-3- [3- (3,4,5,6-tetrahydro-2pyrimidylamino)-l-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat

Směs 0,17 g (0,38 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3(2-pyrimidylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetatu, 0,085 g (0,08 mmol) 10% palladia na aktivním uhlí, 4M HCI v 0,1 ml (0,4 mmol) dioxanu a 5 ml ethanolu se protřepává v atmosféře vodíku při tlaku 330 kPa po dobu 6 hodin, potom še katalyzátor odstraní filtrací přes Celíte®. Filtrát se odpaří', aby se dostalo 0,19 g (100%) sloučeniny

109 • 9 fe· ·· ·· • · · · fe,·· · • · fefe · fe fe · © · fe · * fe · · J • · · · 4 · · · '· fe . · · · · · · pojmenované v nadpisu, jako žlutý olej.

MS (ES) 435,3 (M +H)⁺.

e) Kyselina (±)-10,ll-dihydro-3-[3-[3,4,5,6-tetrahydro-2pyrimidylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octová

Roztok 0,17 g (0,36 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3[3-(3,4,5,6-tetrahydro-2-pyrimidylamino)-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, 0,042 g (1 mmol) monohydratu hydroxidu lithného, 3 ml THF a 10 ml vody se míchá při teplotě místnosti po dobu 20 hodin a potom se odpaří. Odparek se rozpustí ve vodě a pH roztoku se upraví použitím 3N HCI na hodnotu 4. Výsledný roztok se uloží přes noc do lednice a potom se supernatant oddekantuje od pevné látky. Pevná látka se vysuší ve vakuu, aby se dostalo 0,145 g (91%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako pevné' látky.

MS (ES) 408,3 (M + H)⁺.

Analýza:

Vypočítáno pro C24H29N3O3 · 1,3 HCI:

C 63,37

H 6,71

N 9,23.

Nalezeno:

C 63,67 H 6,84

110

Μ 9 9 9 9 « · · · ·* · » • · · 4 9 9 · « ♦ · · • 9 · · · 99 9 · 9^έ · • 4 9 -9 · 9 9 9 4 9 9 · 9 • 49 '999· 0994

9 · U «9 »4 9 9

Ν 9,46.

Příklad 9

Příprava kyseliny (+)-10,ll-dihýdro-3-[3-(1-izochinolinylaminoj-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octové

a) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3-(1-oxo-l-izochinolinylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Postupuje se podle postupu z příkladu 6a), kromě toho, že se použije 1-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]izochinolin-N-oxid místo 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]pyridin-N-oxidu a ethyl-(+)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl-(R)-10,lldihydro-3 -hydroxy- 5 H-diben z o [a, d]-cyklohepten-10-acetátu; sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako světle žlutý olej.

MS (ES) m/e 497,2 (M + H)⁺.

b) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3-(1-izochinolinylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Postupuje se podle postupu z příkladu 6b), kromě toho, že se použije ethyl-(±)-1Ó,ll-dihydro-3-[3-(1-oxo-lizochinolinyl-amino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten10-acetat místo ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-[3-(l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetatu,· a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se připraví jako čirý olej.

MS (ES) m/e 481,3 (M + H)⁺.

111 «· ···· ·· ·· 44 *4 <«- 4 4444 4 · 4 · • « 4 · 444'4 «4,· « 4 · 4 4 44 4 4 · · 4 4 • 4 4 4 4 4 4 4 ... 4 4 . 4 »· 4 '44 ·· 4 4 4 4

c) Kyselina (±)-10,ll-dihydro-3-[3-(1-izochinolinylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octová

Postupuje se podle postupu z příkladu 6c), kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3-(1izochinolinylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten10-acetat místo ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-[3-(2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetatu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako jantarově žlutá pevná látka.

MS (ES) m/e 453,2 (M + H) ⁺ .

Analýza:

Vypočítáno pro C29H28N2O3 · 1,3 TFA · 0,25 H2O:

C 62,71

H 4,96 N 4,63.

Nalezeno:

C 62,45

H 4,92 ·. .

N 4,41.

Příklad 10

Příprava kyseliny (±)-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(ethylthio)-2pyridylamino]-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octové

112 ·· ···» *· ··

Φ Φ φ · φ · φ •·Φ.·»·· 'φφφ · ·· · φ φ φ> φ · * · ·

a) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(ethylthio)-l-oxo-2pyridylamino]-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10» ♦' · ·

acetat

Roztok 300 mg (0,61 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3[3-(4-nitro-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu a 145 mg (1,22 mmol) natrium-thioethylatu v 5 ml DMF se zahřívá na teplotu 70 °C po dobu 3 hodin. Rozpouštědlo se odpaří na rotační odparce a odparek se čistí chromatografií na silikagelu (2 až 6% CH₃OH/CH₂C1₂) , aby se dostalo 90 mg sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako oranžového oleje.

MS (ES) m/e 507,3 (M + H)⁺.

b) Ethyl-(+)-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(ethylthio)-2pyridylaminó]-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat

Směs 60 mg (0,119 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3[4-(ethylthio)-l-oxo-2-pyridylamino]-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, 70 mg práškového železa a 2 ml ledově chladné kyseliny octové se zahřívá na teplotu 100 °C pó dobu 1,5 hodiny. Směs se ochladí na teplotu místnosti', zředí se vodou a EtOAc, a pH se uzpůsobí na hodnotu 7 až 8 použitím pevného Na₂CO₃. Vrstvy se oddělí a vodná vrstva se extrahuje EtOAc. Spojené organické vrstvy se promyjí vodou, vysuší MgSO₄ a odpaří,' aby se dostalo 60 mg sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako žlutého oleje.

MS (ES) m/e 491,3 (M + H)⁺.

c) Kyselina (±)-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(ethylthio)-2pyridylamino]-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10113 • 0 0 00 0 ·'·' 0 0 0 0 »· • · · · 0 0 0 ♦ « 0 ·

0 0 0 0 0 0 0 0·· • · * 0 0 0 9 9 0 '< · · ^β

9 9 9 0 0 9 ' 9 · 9 ·

9 9 «· ·» ·» 0» octová

Postupuje se podle postupu z příkladu 6c), kromě toho, že se použije ethyl-(+)-10,ll-dihydro-3-[3-[4(ethylthio)-2-pyridylamino]-1-propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-acetat místo-ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-[3-(2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetatu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako žlutá pevná látka.

¹HNMR	(400 MHz, DMSO-d₆) δ 7	,77 až 7,76 (d,	1H), 7	,17	až 7,	15
(d, 1H)_, 7,13 až 7,12 (d, 2H) , 7,08 až 7,07	(m, 1H),	6, 96	až
6,94	(d, 1H), 6,81 až 6,80	(s, 1H) , 6, 68 až	6,67	(d,	1H) ,
6,52	(s> 1H), 6,35 až 6,33	(d, 2H), 6,30 (s	, 1H) ,	4,	20 až
4,16	(d, 1H) ,· 3‘, 99 až 3,96	(t, 2H), 3,89 až	3,85	(d,	1H) ,
3,65	až ‘3,63 (m, 1H) , 3,36	až 3,32 (m, 2H) ,	3,22	až	3,15 i	;m,
1H) ,	2,96 až 2,90 (m, 2H)	2,85 až 2,78 (m,	1H) ,.	2,62 až
2,56	(m, 2H) , 1,94' až 1,90	(m, 2H.)¹, 1,26 až	1,22	(t,	3H) .

MS (ES) m/e 463,4 (M + H)⁺. · . ·

Příklad 11.

Příprava kyseliny (±)-10,ll-dihydro-2-methyl-3-[3-(2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octové,

a) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-2-methyl-3-[3-[N-(terč.butoxykarbonyl)-N-(l-oxo-2-pyridyl)amino]-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

0,14 g (0,37 mmol) 60% disperze NaH v minerálním oleji se pod argonem přidá k roztoku 100 mg (0,32 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-2-methyl-5H114 • to • to toto toto * '· · · · to ♦ ♦ · ♦ • « · · ·· to · · · . to · ·· to* to to to toto · to · · · to · to to · · · «>· · toto ·· to· ·* dibenzo [a, d] cyk.lohepten-10-acetatu ve 2 ml DMSO a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 0,5 hodiny.

Potom se po kapkách přidá roztok 160 mg (0,4 mmol) 2—[N—(3— methansulfonyloxy-l-propyl)-N-(terč.-butoxykarbonyl)amino]pyridin-N oxidu v 1 ml DMSO. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 18 hodin, potom se reakce přeruší 20 ml vody .a extrahuje se EtOAc. Vysušením MgSO₄, odpařením a chromatografií na silikagelu (1% MeOH/CH2Cl2) se dostane 85 mg (42%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbarvý olej .

MS (ES) m/e 561,3 (M + H)⁺.

b) Ethyl-(±)—10,ll-dihydro-2-methyl-3-[3-(l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat . '

0,16 g. (1,4 mmol) TFA se po kapkách přidá k roztoku 80 mg (0,14 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-2-methyl-3-[3-[N(terc.-butoxykarbonyl)-N-(l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]5H-dibenzofa,d]cýklohepten-10-acetatu ve 3 ml suchého CH2CI2.. Reakční směs se míchá po dobu 5 hodin, potom se odpaří na rotační odparce,, aby se dostalo 60 mg (43%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbarvý olej.

MS. (ES) m/e 461,1 (M + Hj ⁺ . c) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-2-methyl-3-[3-(2-pyridylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Postupuje se podle postupu z příkladu 6b), kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10,ll-dihydro-2-methyl-3-[3(l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-[3-(1-oxo115 toto · ···

9 9' 9 9 9 9 9> 9· 9 · • to 'to·· 9 9 99 to · to · • ·· · · · « · · · · • to '· to to · > 9 '9 9 .9

9 9 '9 9 99 · to·* toto

2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetatu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako ne zcela bílá pevná látka.

MS (ES) m/e 417,3 (M + H)⁺.

d) Kyselina (±)-10,ll-dihydro-2-methyl-3-[3-(2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octová

Postupuje se podle postupu z příkladu 6c), kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10,ll-dihydro-2-methyl-3-[3(2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat místo ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-[3-(2-pyridylamino)1-propoxy]-5H-dibenzo(a,d]cyklohepten-10-acetatu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako ne zcela bílá pevná látka.

¹HNMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7,75 (d, 1H) , 7,65 (t, 1H), 7,15 (m,

3H) ,	7,05 (m,	1H) ,	6,83 (s, 1H), 6,	7 (d,	1H) ,	6, 65 (m,	1H) ,
6/60	(s, 1H),	4,25	(d, J = 15,1 Hz,	1H) ,	4,05	(t, 2H) ,	.3,80
(m,	1H), 3,75	(d,	J = 15,1 Hz, 1H),	3,50	(t,	2Ή), 3,25	(dd,
1H) ,	2,85 (dd,	1H)	, 2,68 (dd, 1H),	2,60	(dd,	1H), 2,15	(t,
2H) ,	2,10 (s,	3H) .

MS (ES) m/e 417,3 (M + H)⁺.

Příklad 12

Příprava kyseliny (±)-10,ll-dihydro-2-(dimethylamino)methyl-7-fluor-3-[3-(2-pyridylamino)-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-octové

a) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-2-(dimethylamino)methyl-7-fluor116 •» to to to · ·' · toto · · * ·' • · · · to O · to ♦ · · • « to to * ··> '···· to to ♦ to · ·· · · φ to ·· · to ·· 'toto· · · ·· to ·· to to·¹ to·¹ ·.·< ··

3-[3-(l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Postupuje se podle postupu z příkladu 6a), kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10,ll-dihydro-2-(dimethylamino) methyl-7-fluor-3-hydroxy-5H-dibenzo [a,d] -cyklohepten10-acetat místo ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5Hdibenzo[a,d]-cyklohepten-10-acetatu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane chromatografií na silikagelu (gradient: EtOAc/hexany v poměru 1:1, potom EtOAc, potom 20% MeOH/CH₂Cl₂, potom 30% MeOH/CH₂Cl₂) .

MS (ES) m/e 522,3 (M + H)⁺.

b) Ethyl- (±) -10, ll-dihydro-2- (dimethylamino) methyl-7-f ΙυοΓΟ-[3-(2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo [a, d] cyklohepten-10-acetat ' '· .

Postupuje se podle postupu z příkladu 6b), kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10, ll-dihydro-2-(dimethyl- ,, amino)methyl-7-fluor-3-[3-(l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]5H-dibenzo[a,d]-cyklohepten-10-acětat místo ethyl-(R)-10,lldihydro-3^[3-(l-oxp-2-pyridylamino)-l-přopoxy]-5Hdibenzo [a, d] cyklohepten-10-acetatu,' a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane chromatografií na'silikagelu (10% MeOH/CH₂Cl₂) . ' . ‘

MS (ES) m/e 506,2 (M + H)⁺.

c) Kyselina (±)-10,ll-dihydro-2-(dimethylamino)meťhyl-7fluor-3-[3-(2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová

Saponifikace se provede podle postupu z příkladu 6c), m·· ·♦*· ·« ·· ·· • · · · · · ( 9 9 · 4' • · · · 9 9 · 9 9 9 »

9 9 9 <i 9 9 9 9, 9 · · · » · · · 9 · 9 9 9 9 »

9 6 ·· ·· · ·· ·· kromě toho, že se použije'ethyl-(±)-10,ll-dihydro-2(dimethylamino)methyl-7-fluor-3-[3-(2-pyridylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl(R)-10, ll-dihydro-3-[3-(2-pyridylamino)-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu. Reakční směs se okyselí ledově chladnou HOAc a surový produkt se odsolí chromatografií na XAD-2 pryskyřici, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu jako bílá pevná látka.

MS (ES) m/e 478,3 (M + H)⁺.

Analýza:

Vypočítáno pro C30H36FN3O5 · 1,25 H₂O:

C 64,32

H 6,92

N 7,50.

Nalezeno:

C 63,87

H 6,47 ·._

N 7,96.

Příklad 13

Příprava kyseliny (S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-methyl-2pyridylamino) -1-propoxy] -5H-dibenzo [a, d] cyklohe.pten-10octové

a) Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-methyl-l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]-cyklohepten-10acetat i118

A ·'

Roztok 1,72 g (9,45 mmol) 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]-4-methylpyridin-N-oxidu a 1,49 ml (9,45 mmol) diethylazodikarboxylatu v 50 ml bezvodého DMF se během 10 minut, při teplotě místnosti, pod argonem, po kapkách přidá k roztoku 1,4 g (4,72 mmol) (S)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5Hdibeňzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu a 2,60 g (9,92 mmol) trifenylfosfinu v 50 ml bezvodého DMF. Po 19 hodinách se reakční směs odpaří na rotační odparce a odparek se znovu odpaří od· xylenů, aby se odstranil zbývající DMF. Chromatografii na silikagelu (gradient: 0,5 litru směsi 30% EtOAc/hexany, potom 1 litr EtOAc, potom 5% MeOH/CHCl₃) se dostane.1,31 g· (60%) sloučeniny pojmenované,v nadpisu, jako žlutý olej.

MS (ES) m/e 461,3 (M + H)⁺.

b) Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-methyl-2-pyridylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]-cyklohepten-10-acetat

Směs 0,86 g (1,87 mmol) ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3(4-methyl-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, 0,86 g (0,81 mmol) 10% Pd/C, 1,89 ml (18,7 mmol) cyklohexenu a 20 ml izopropanolu se pod argonem zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 19 hodin, potom se katalyzátor odstraní filtrací přes Celíte®. Chromatografii na silikagelu (směs MeOH/CH₂Cl₂/EtOAc v poměru 1:9:10) se dostane 0,65 g (78%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako čirý olej.

MS (ES) m/e 445,2 (M + H)⁺.

c) Kyselina (S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-methyl-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]-cyklohepten-10-octová

119

Směs 2,08 g (4,69 mmol) ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3(4-methyl-2-pyridylamino) -1-propoxy] -5H-dibenzo.[a, d] cyklohepten-10-acetatu a 7,0 ml (7,0.mmol) l,0N NaOH ve 45 ml bezvodého EtOH se zahřívá v olejové lázni s teplotou nastavenou na 45 °C. Po 18 hodinách-se reakční směs odpaří na rotační odparce a pH se upraví použitím l,0N HCl na hodnotu 7. Pevná sraženina se sebere a promyje se vodou,. Vysušením přes noc se dostane 1,61 g (82%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako téměř bezbarvý olej.

MS (ES) m/e 417,4 (M + H)⁺.

Analýza: '

Vypočítáno pro C₂6H₂8N₂O₃ · 1,0 H₂0: .

C 71,87 · . .

H 6,96 ' . . ...

N 6,4 5 . * . ·

Nalezeno: . . ¹ ' ·

C 71,63 . /

H 6,96 . ’ · . .

N 6,30. ' ·

Příklad; 14 , .

Příprava kyseliny (S)-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(2-propoxy)-2pyridylamino]-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octové

a) Izopropyl- (S) -10., ll-dihydro-3- [3- [4- (2-propoxy) -l-oxo-2120 • fe fefefe · fefe' fefe fefe fefe • fe · · fefefe fefefe· · · · fe ' fe · fefe · . '· · · fefe · fefe fefe fefe fefe pyridylamino]-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]-cykloheptěn-10acetat

Směs 0,2 g (0,4 mmol) ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3(4-nitro-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu a 0,067 g (0,8 mmol) natriumizopropoxidu v 5 ml izopropanolu se zahřívá na teplotu 80 °C po dobu 3,5 hodin, potom se přidá dalších 0,05 g (0,6 mmol) natrium-izopropoxidu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Odpařením a chromatografií na silikagelu (gradient: 5 až 15% ΜοΟΗ/ΟΗ₂01₂) se dostane 0,106 g (52%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle hnědý olej.

MS (ES) 519,3 (M + H) ⁺ .'

b) Izopropyl-(Sj-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(2-propoxy)-2pyridylamino]-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]-cyklohepten-10acetat

Postupuje se podle postupu z příkladu 13b), kromě toho, že se použije izopropyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(2γ propoxy)-1-oxo-2-pyridylamino]-1-propoxy]-5H-dibénzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl- (S)-10, ll-dihydr'o-3-[3-(4methyl-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako světle žlutý olej chromatografií' na silikagelu (5% MeOH/CH₂Cl₂)

MS (ES) m/e 503,4 (M + H)⁺.

c) Kyselina (S)-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(2-propoxy)-2pyridylamino]-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octová

121 , ·· *··· . ·· ·* <·· • 9 '9 9 9 9 9· · · · · * · '· ·'· '^ιι·'' · ·

Postupuje¹se podle postupu z. příkladu 13c), • · ··· · ·· ·· kromě toho, že se použije izopropyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(2propoxy)-2-pýridylamino]-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4methyl-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako bílý prášek. .

MS (ES) m/e 461,3 (M + H)⁺.

Analýza:

Vypočítáno pro C28H32N2O4 · 0,96 HC1:

C 67,86 H 6, 70 N 5,65.

Nalezeno:

C 68,26 ,···.·..···

H 6,8 6 . · N 5,25.. , · ' . ' /

Příklad 15

Příprava kyseliny (S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-čhlor-2- . pyridylaminó)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octové

a) Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-chlor-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cykÍohepten-10-acetat

Roztok 0,47 g (0,96 mmol) ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3122 • 9 9··· ·· 99 ·9 ··

9 9990 999 9

9 9 9 9 « · · · · 9

9' 9 9 99 9 · 99 9 9 · 19

9 9 9 .9 9 9 9 9 9 9

9^!9 9 9 9 9>'· ·9 ·9 [3-(4-nitro-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu v 7 ml (98 mmol) acetylchloridu se zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 1 hodiny. Reakční směs se vlije do 50 g ledu a pH se upraví na 8 použitím nasyceného NaHCCb (pozor: bouřlivě bublá!). Směs se extrahuje dvakrát 100 ml CH₂C1₂ a spojené organické vrstvy se promyjí popořadě 50 ml vody a 50 ml roztoku chloridu sodného. Vysušením MgSO₄ a odpařením se dostane sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

MS (ES) 481,2 (M + H)⁺. .

b) Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-chlor-2-pyridylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]-cyklohepten-10-acetat

Směs 0,13 g (0,27 mmol) ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3(4-chlor-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu a 2,0 M Pcl₃ v 8 ml (16 mmol) CH₂C1₂se zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 22 hodin.

Reakční směs se ochladí a vlije na 200 g ledu a pH se upraví na 12 použitím 40% NaOH. Extrakcí dvakrát 100 ml CH₂C1₂, vysušením MgSO₄, odpařením a chromatografii na silikagelu (4% MeOH/ CH₂Cl₂j se dostane 93 mg (74%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle žlutý olej.

MS (ES) 465,3 (M + H)⁺.

c) Kyselina (S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-chlor-2-pyridylamino)1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octová

Postupuje se podle postupu z příkladu 13c), kromě toho, že se použije ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-chlor-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]-cyklohepten-10acetat místo ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-methyl-2123 . ··♦ ·’··*· ··* ·· .<·» • ·ί ;· · ' · · · ·'··?·' ······ ·· '· ·· + ··· ·· pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo [a, d] cyklohepterí-10acetatu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako ne .zcela bílý prášek.

' . í

MS (ES) 437,2 (M + H)⁺.

Analýza:

Vypočítáno pro C25H25N2O3 · 1,0 HCI:

C 63,43 .

H 5,54 :

N 5,92. ?

Nalezeno: .

C 63,11 . ' -/ “

H 5,82 . , i '

N 5, 62. ' . ‘Z . . ^v. . .'· ’

Příklad 16.

Příprava kyseliny (S) -10, ll-dihydro-3-'[3- [4- (dimethylamino) 2-pyridylamino] -1-propoxy] -5H-dibenzo [a, d] cyklohepten-10octové

a).Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3“[3-(4-chloř-l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat . ·

Roztok 0,47 g (0,96 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3[3- (4-nitro-l-oxo-2-pyridylam'ino) -1-propoxy] -5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu v 7 ml (98 mmol)

124 φφ ΦΦΦ· ·· ·· φ'· • · l· · · Φ Φ Φ · · • Φ Φ · φφφ · · · φφφ φφφφ φφφ φ 'φ φ φφφφ .· φ acetylchloridu se zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 1 hodiny. Reakční směs se vlije do 50 g ledu a pH.se upraví na 8 použitím nasyceného NaHCÓ₃ (pozor: bouřlivě bublá!) . Směs se extrahuje dvakrát 100 ml CH₂Cl₂.a spojené organické vrstvy se promyjí popořadě 50 ml vody a 50 ml roztoku chloridu sodného. Vysušením MgSO₄ a odpařením se dostane surová sloučenina pojmenovaná v nadpisu, která se použije bez dalšího čištění.

MS (ES) 481,3 (M + H)⁺.

b) Ethyl- (S) -10, ll-dihydro-3- [3- [4- (dimethylamino) -l-oxo-2pyridylamino] -1-prop'oxy] -5H-dibenzo [a, d] cyklohepten-10acetat

Směs 0,96 mmol ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-chlorl-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten10-acetatu a 2,0 M dimethylaminu v 3 ml (6 mmol) MeOH se zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 16 hodin. Odpařením a chromatografií na silikagelu (7% směs MeOH/CH₂Cl₂) se' dostane 0,049 g (10%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako světle· hnědý prášek.

MS (ES) 490,3-(M + H)~.

Nezměněný ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-chlor-l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat může být rovněž obnoven v.průběhu chromatografického čištění.

c) Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(dimethylamino)-2pyridylamino]-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]-cyklohepten-10acetat .

125 »#···· ·« ·· ·· ·» • · · 0 · 0 0 0 0·· • 0 · · .· ·· 0 0 0 0 ' 0 · 0 · · · · · · 0 0 « •00 · .0 0 0 0 0 0 0

0 «0 00 00 00

Postupuje se podle postupu z příkladu 13b), kromě toho, že se použije ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-[4(dimethylamino)-l-oxo-2-pyridylamino]-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl-(S)-10,lldihydro-3- [3-(4-methyl-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu a_ sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane chromatografií na silikagelu (8% MeOH/ CH₂C1₂) , jako bílý prášek.

MS (ES) 474,3 (Μ + H)⁺.

d) Kyselina (S)-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(dimethylamino)-2pyridylámino]-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octová

Postupuje,se podle postupu z příkladu 13c), kromě toho, že se použije ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-[4(dimethylamino)-2-pyridylamino]-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl-(S)-10,11dihydro-3-[3-(4-methyl-2-pyridylaminoj-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-aeetatu, a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako bílý prášek. · ’

MS (ES) 446,2 (Μ + H)⁺.

Analýza: . ' .

Vypočítáno pro C27H31N3O3 · 0,5 H₂Ó · 1,0 HCl:

C 66,04

H 6,77

N 8,56.

Nalezeno:

126 • to ♦ ··· • · ·« to· ·· ·· • ·· · · ·· « • ···* · · · to ··· • · to • · · · · · · ·· ·· ·· ··

C 65,96

H 6,60

N 8,26. .

Příklad 17

Příprava kyseliny (S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-ethoxy-2-. pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octové

a) Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-ethoxy-l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat

Postupuje se podle způsobu z příkladu 2a), kromě toho., že se použije 496, 9 mg (1,01 mmol) ethyl-(S)-10, lldihydro-3- [3-(4-nitro-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5Hdibenzo [a, d] cykl.ohepten-10-acetatu místo ethyl-(,±)-10, lldihydro-3- [3-(4-nitro-l-oxo^2-pyridylamino)-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, a použije se 0,53 M (4,0 ml, 2,12 mmol.) NaOEt a 10.ml bezvodého ethanolu ve vytěsňovací reakci, čímž se dostane ’456,2 mg (92%) sloučeniny pojmenované v nadpisu. MS (ES) m/e 491 (M + H)⁺. .

b) Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-ethoxy-2-pyridylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat ( Postupuje se podle způsobu z příkladu 2b), kromě toho, že se použije 456,2 mg (0,93 mmol) ethyl-(S)-10,lldihydro-3- [3-(4-ethoxy-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklo-hepten-10-acetatu místo ethyl-(±)-10,11\2Í1 ··*♦ ···-···· 0 0 0 « 0..0 0 0.0 00 0000 0 · 0 0 0 0 ·- 0 0 0 0 0 0 ^•0* · *··* *0*5* * · * * dihydro-3-[3-(4-ethoxy-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-lO-acetatu, ’a‘připraví se 475,2 mg (kvantitativně) -sloučeniny pojmenované v -nadpisu.

MS (ES) m/e 475 (M + H)⁺.

c) Kyselina (S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-ethoxy-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10- ’ octová ‘

2,0 ml (2,0 mmol) l,0N NaOH se přidá k roztoku 475,2 mg (1,0 mmol) ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-ethoxy-2. pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10aceta.tu v 10 ml bezvodého ethanolu, a roztok se zahřívá na teplotu 50 .°C v olejové lázni. Po 20 hodinách se reakční směs odpaří a vodný'odparek se v ledové lázni ochladí na teplotu 0 °C. Pomalu sé během míchání přidá. 2,0 ml (2,0 mmol) -l,0N vodné HC1. Vysráží' se matná pevná látka, která se sebere nálevkou ze slinutého skla. Vysoušením ve vakuovém ' exsikátoru přes noc se dostane 452.,6 mg (83%) sloučeniny ,· pojmenované v nadpisu.

MS (ES) m/e 447 (M + H)⁺. .

Analýza :’ .

Vypočítáno pro C27H30N2O4 · 0,20 H₂O · 1,75 HC1:

C 63,10 H 6,30 N 5,45.

Nalezeno:

128 «· ······ ·· · · • · '· · · · · ' · · · · $ · 10 < · » · · · · · % «Α · · · · · · · · · · • · « ··· · · · · · «· · ·* ·· 9· ··

C 63,10

Η 5,98 .

Ν 5,38 . '

Příklad 18 .

Příprava kyseliny (+)-10,ll-dihydro-7-fluor-3-[3-(2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octové

a) Ethyl-(+)-10,ll-dihydro-7-fluor-3-[3-(l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat „Postupuje se způsobem z. příkladu 6a) , kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10,ll-dihydro-7-fluor-3-hydroxy-5H- . dibenzo[a,d]cyklphepten-10-acetat místo ethyl-(R)-10,11dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,ď]cyklohepten-10-acetatu a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako bezbarvý olej chromatografii na silikagelu (gradient: EtOAc/hexany v poměru 1:1, ‘potom EtOAc-, potom 4% MeOH/CH₂Cl₂) .

MS (ES) m/e 465,3 (M + H)⁺.

. b) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-7-fluor-3-[3-(2-pyridylamino)-1, propoxy] -5H-dibenzo [a, d].cyklohepten-10-acetat

Postupuje se způsobem z příkladu 6b), kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10,ll-dihydro-7-fluor-3-[3-(l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat místo ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-[3-(l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetatu, a připraví se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

129 • · · ' · ··.<- · ·· • · · · · ♦ '· · · · ·

MS (ES) m/e 449,2 (M + H)⁺.

c) Kyselina (±)-10., ll-dihydro-7-fluor-3-[3-(2-pyridylamino)1-propoxy]-5H-dibénzo[a,d]cyklohepten-10-octová

Postupuje se způsobem z příkladu 6c), kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10,ll-dihydro-7-fluor-3-[3-(2-’ pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat místo ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-[3-(2-pyridylamino)~ 1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu a dostane se sloučenina pojmenovaná v nadpisu.

MS (ES) m/e 421, Γ (M + H)⁺.

Analýza:

Vypočítáno pro C25H25FN2O3 · 0,5 -H₂O:

C 69,99

H 6,10

N 6,52.

Nalezeno:

C 69,86

H 5,90

N 6,35.

Příklad 19 '

Příprava kyseliny (±)-10,ll-dihydro-6-methyl-3-[3-(2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octové ·'·

130 '·· «ί · · · '9 9 9 9 9 • · 9 · · · · · .· » · • 9 · ’ » · · · 9 9 · ** ί

9 $ 9 99 9 · 9 0.9

9« · ·· 9· ·· ··

a) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-6-methyl-3-[3-(1-οχο-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat

Postupuje se způsobem z příkladu 6a) ,’ kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-6-methyl-5Hdibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl-(R)-10,11dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako bezbarvý olej chromatografii na silikagelu (gradient: EtOAc/hexany v poměru 1:1, potom EtOAc, potom 4% MeOH/CH₂Cl₂) .

MS. (ES) m/e 461,3 (M + H) ⁺ ..

b.) Ethyl- (±) -10, ll-dihydro-6-methyl-3- [3- (2-pyridylamino) -1propoxy]-5H-dÍbenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Postupuje se způsobem z příkladu 6b),· kromě toho, že se použije ethyl-(±.)-10, ll-dihydro-6-methyl-3-[3-(l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10acetat místo ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-[3-(l-oxo-2pyridylamino).-1-propoxy] -5H-dibenzo [a, d] cyklohepten-10acetatu, sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane chromatografii na silikagelu (1% MeOH/CH₂Cl₂) .

MS (ES) m/e 445,3 (M + H)⁺.

c) Kyselina (±)-10,ll-dihydro-6-methyl-3-[3-(2-pyridylamino) -1-propoxy] -5H-dibenzo’[a, d] cyklohepten-10-octová

Postupuje se způsobem z příkladu 6c), kromě toho, že se použije ethyl-(±)-10,ll-dihydro-6-methyl-3-[3-(2-pyridylamino) -1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat místo ethyl-(R)-10,ll-dihydro-3-[3-(2-pyridylamino)-1-propoxy]-5H131 • * 9 99 9 »♦ O «' · · · · ,' • · · · · · ·' · · · 9 fc 9 9 99 9,999

9 9 · 9 9 9 9 9 · 9 9 9 9 9 9 9 9 ···· « ·ι ^zě · · · · 9' ·' · · dibenžo[a,d]cyklohepten-10-acetatu a sloučenina pojmenovaná v nadpisu se dostane jako bílá pevná látka. .

MS (ES) m/e 417,3 (M + H)⁺.

Analýza: · · . ‘

Vypočítáno pro C₂'₆H28N₂O3 · 1,25 H₂0:

C 71,13

H 7,02

N 6,38.

Nalezeno

C 71,33 .

H 6,67 / ’ . . .

Ν' 6, 01. ₄ · . ·

Příklad 20 \ ' Příprava;kyseliny(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-amino-2pyridylamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[á,d]cyklohepten-10octové

a) .Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-nitro-l-oxo-2- , pyridylamino) -1-propoxy] -;5H-dibenzo [á, d] cyklohepten-lOacetat

Roztok 1,7 ml (8 mmol) diizopropyl-azodikarboxylatu v 10 ml THF se po kapkách přidá k roztoku 426,5 mg (1,5 mmol) ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-hydroxy-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, 1,7 g (8 mmol) 2-[(3-hydroxy-l-propyl)amino]-4-nitropyridin-N-oxidu a 2,5 g (8 nimol) trifenyl132 • · «····· ., · · · · . · · · '· · · · * · · • · ί ® · ·· * · · g « · · · ·· ,· · · · ·

S· ·· ·· ' '«· ·· fosfinu ve , 2 0 ml bezvodého DMF, při teplotě 0 °C pod argonem. Roztok žluté barvy se udržuje při teplotě 0 °C po dobu 10 minut a.potom-se ohřeje na teplotu místnosti. Po 23 hodinách se reakční směs odpaří. Chromatografií na silikagelu (gradient: 30 až 100% směs EtOAc/hexany) se dostane 2,7 g .(81%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako oranžové pěny.

MS (ES) m/e 491,8 (M + H)⁺.

b) Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-amino-2-pyridylamino)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

Směs 2,7 .g' (.6 mmol) ethyl-(S)-Ϊ0, ll-dihydro-3- [3- (4nitro-l-oxo-2-pyridyÍamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetatu, 6 ml (60 mmol) cyklohéxenu, 1,2 g (1,10 mmol) 10% Pd/C a 30 ml izopropanolu se pod argonem zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 20,5-hodin a potom se přefiltruje za horka přés Celíte®. Filtrační vložka se promyje horkým EtOAc a spojené filtráty se odpaří. Odparek . .

se chromatografuje na silikagelu (5% MeOH/CHCl₃) , aby se. dostalo 2,4 g (.98%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bezbaryé pěny. / .

MS (ES) -m/e 445,9 (M +,H) ⁺ . . . . . ..

c) Kyselina (S)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-amino-2-pyridylaminó)i ». *. <.

1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octová

Směs 2,4 g (5 mmol) ethyl-(S)-Γ0,ll-dihydro-3-[3-(4amino-2-pyridyíamino)-1-propoxy]-5H-dibenzo [a', d] cyklohépten-10-acetatu, 0,3 g (7- mmol) LiOH · H₂O, 30 ml THF a 10 ml vody se míchá při teplotě místnosti po dobu 48 hodin, a potom se odpaří. Odparek se zředí vodou a extrahuje Et₂O.

133 • · • · · · · · · ΐ · · ·· • · · · · · · ·' *• · · 9 Ο 99 9 .9' 9 9 • 9 9 9 9 · 9 9* 9 9 9 9

9 9 9 9 9 _r 9 9.9 9 9 tt 9 9 9 9 9 ··’ ·♦

Et₂O vrstvy se odstraní. Vodná vrstva se míchá za pozvolného ohřívání ve vakuu, aby se odstranila zbývající organická rozpouštědla a potom se přefiltruje. Výsledný vodný roztok se míchá při.teplotě místnosti, zatímco se pH pomalu a opatrně upraví na 5,5 až 6,0 použitím l,0N HCI. Směs se míchá po dobu 0,5 hodiny a pevná látka se sebere podtlakovou filtrací a promyje se dostatečným množstvím vody. Vysušením ve vysokém vakuu při teplotě 60 °C se dostane 1,0 g (42%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako sklovité pevné látky.

MS (ES) m/e 417,7 (M + H)⁺.

Analýza:

Vypočítáno pro C₂sH₂7N₃O₃ · 1,4 HCI (4 68,554):

C 64,08

H 6,11

S 8,97.

Nalezeno:

C 64,16

H 6,20

N 8,71.

Příklad 21

Příprava kyseliny (±)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-methyl-2pyridylamino)-1-propoxy]dibenzo[b,f]oxepin-10-octové

a) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-methyl-l-oxo-2pyridylamino)-1-propoxy]dibenzo[b,f]oxepin-10-acetat « · «····*· <··♦··· • · · · · · ·

- · 99 · *4 ··

Směs 257 mg (0,86 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3hydrOxydibenzo[b,f]oxepin-10-acetatu, 308 mg (0,94 mmol) hydrobromidu 2-[(3-brom-1-propyl)amino]-4-methylpyridin-Noxidu, 110 mg (2,75 mmol) pelet NaOH a 4 ml CH₃CN se míchá při teplotě místnosti pod argonem přes noc. Směs se přefiltruje a pevné látky se promyjí CH₃CN. Filtrát se odpaří a odparek se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (gradient: 1 až 25% směs CH3OH/CH2CI2) , aby se dostalo 190 mg (48%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako bílé pěny.

MS (ES) m/e

462,6 (M + H) ⁺ .

b) , Ethyl- ( + ) -10, ll-dihydro-3- [3- (4-methyl-2-pyridylamino) -lpropoxy]dibenzo[b,f]oxepin-10-acetat

Směs 183 mg (0,4 mmol) ethyl-(+)-10,ll-dihydro-3-[3(4-methyl-l-oxo-2-pyridylamino)-1-propoxy]dibenzo[b,f ]oxepin-10-acetatu, 85 mg (0,08 mmol) 10% Pd/C, 810 mg (8 mmol) cyklohexenu a 4 ml izopropanolu se zahřívá na teplotu zpětného toku'přes noc. Katalyzátor se odstraní filtrací přes Celite® a filtrační koláč se promyje etherem..Filtrát se odpaří, aby se dostalo 122 mg:(68%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako čirého oleje.

MS (ES) m/e 446,9 (M + H)⁺.

c) Kyselina (±)-10,ll-dihydro-3-[3-(4-methyl-2pyridylamino)-1-propoxy]dibenzo[b,f]oxepin-10-octová

Směs 119 mg (0,27 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[3(4-methy1-2-pyridylamino)-1-propoxy]dibenzo[b,f]oxepin-10acetatu a 0,545 ml (0,54 mmol) 0,991N NaOH ve 2 ml bezvodého EtOH se zahřívá v olejové lázni s teplotou nastavenou na

135 · '· to toto -«toto t . , . / ' · «to 'to to* ·.* °C. Po 20 hodinách se reakční směs odpaří na rotační·' odparce a odparek se rozpustí v 1,5 ml vody. Roztok se přefiltruje, aby se odstranily·nerozpustné látky a filtrát 'se opatrně neutralizuje přidáváním po kapkách 0,54 ml (0,54 mmol) l,0N HCI. Sraženina se sebere a vysuší ve vysokém vakuu, aby se dostálo 68 mg (58%) sloučeniny’ pojmenované'‘ v nadpisu, jako bílé pevné látky.

,MS (ES) m/e 418,9 (M + H)⁺.

Analýza:

Vypočítáno pro C25H26N2O4 · 0,45 HCI:

C 69,05 . '

H 6,13 ·; ' .

N 6, 44 . ' ' ' ·'- ⁴

Nalezeno:

C 69,25 - · · *.·'

H 6,27 ·· '

N 6,16. „ . ,

Příklad 21 . . ' 'Příprava kyseliny (±)-10,ll-dihydro-3-[2-[6-(methylamino)-2pyridyl]-1-ethoxy]dibenzo[b,f)oxepin-10-octové

a) Ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[2-[6-[N-terc.-butoxykarbonyl)N-methylamino]-2-pyridyl]-1-ethoxy]dibenzo[b,f]oxepin-10acetat

Roztok 397 mg (1,58 mmol) 6-[N-(terč.-butoxy136 • to toto»· to»· to· .·· ·· • to to toto·· *' to to to ·· · ··♦· · to to to 'to · ·· · ·. »·,·' · · * • to· · ·· to to'·· · • · · ·· »· · ♦' · · karbonyl)-N-methylamino]-2-pyridylethanolu, 0,31 ml (1,58 mmol) diizopropylazodikarboxylatu v 8 ml bezvodého CH₂C1₂ se během 10 minut po kapkách přidá k roztoku 186 mg (0,63 mmol) ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-hydroxydibenzo[b,f]oxepin-10acetatu a 413 mg (1,58 mmol) trifenylfosfinu ve 3,2 ml bezvodého CH2CI2, při teplotě místnosti pod argonem) Po 22 hodinách se reakční směs odpaří v rotační odparce a odparek se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (2 až 13% směs EtOAc/hexany), aby se dostalo 146 mg (44%) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako čirého oleje.

MS (ES) m/e 533,0 (M + H)⁺.

b) Kyselina ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[2-[6-(methylamino)-2pyridyl]-1-ethoxy]dibenzo[b,f]oxepin-10-octová.

N HCI v 1,3 ml (5,2 mmol) dioxanu 'se po kapkách přidá k roztoku 140 mg (0,26 mmol) ethyl-(+)-10,ll-dihydro-.

3-[2-[6-[N-terc.-butoxykarbonyl)-N-methylamino]-2-pyridyl]- 1-ethoxy]dibenzo[b,f]oxepin-10-acetatu v 1,3 ml CH₂Cl2· Po 12 hodinách se směs odpaří a odparek se rozetře s etherem, aby se dostala sloučenina pojmenovaná v nadpisu, jako bílá pevná látka.

MS (ES) m/e 432,9 (M + H)⁺.

c) Kyselina (±)-10,ll-dihydro-3-[2-[6-(methylaminó)-2pyridyl]-1-ethoxy]dibenzo[b,f]oxepin-10-octová

Směs 0,26 mmol kyseliny ethyl-(±)-10,ll-dihydro-3-[2[6-(methylamino)-2-pyridyl]-1-ethoxy]dibenzo[b,f ]oxepin-10octové a 0,525 ml (0,52 mmol) 0,991N NaOH ve 2 ml bezvodého EtOH se zahřívá v olejové lázni s teplotou nastavenou na 50 °C. Po 20 hodinách se reakční směs odpaří na rotační

137 ·* 9999 · · 9 9 9 9 9 · • « 9 9 9 9 9 < ť · 9

9 · '<··· · · · · • · · ·, · 9 9999 9 9 9

9.9-9 ... · · ·» · · · · · ·· 9 9 9 99 9'9> 9 9· odparce a odparek se rozpustí v 1,5 ml vody. Roztok se přefiltruje, aby se odstranily nerozpustné látky a filtrát se opatrně neutralizuje přidáváním po kapkách 1,ON HCI.

Sraženina se sebere a vysuší ve vysokém vakuu, aby se dostalo 72 mg (30%, ve dvou krocích) sloučeniny pojmenované v nadpisu, jako pevné látky ně zcela bílé barvy.

MS (ES) m/e 405, 0 (M + H) ⁺ .

Analýza:

Vypočítáno pro C24H24N2O4 * 1,25 HCI · 0,25 H₂O:

C 63,42 · ' .

H 5,71 '

N 6,16.

Nalezeno: .

C 63,35

H 5,9 _r

N 6, 16 . *

Příklad 23

Příprava kyseliny (S)-10., ll-dihydro-3-[3-(2-.amino-4pyridyl)-1-propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octové

a) 3-(2-Amino-4-pyridyl)-1-propanol

Suspenze 0,73 g (3,60 mmol) hydrochloridu kyseliny 3(2-amino-4-pyridyl)propanové, připraveného podle WO 94/14776, v 10 ml THF se při teplotě 0 °C během 45 minut přidá k 12 ml (12 mmol) 1M lithium-aluminium-hydridu v THF.

138 ·· «··,· ·♦ ·· ··. ·· • '· · ···· ·'·'·.· • · * · '· to · tototo*¹ to «· «« ·· toto*.·· · • «* · ·· 'to · ·· ·· • to . to toto · · ·. «to¹ to ·

Ledová lázeň se odstraní a reakční směs se při teplotě místnosti nechá míchat po dobu 4,5 hodiny. Reakční směs se ochladí na teplotu 0 °C, zředí se 22 ml toluenu a reakce se přeruší postupným přidáním 0,86 ml vody a 1,54 g.NaF.

Výsledná suspenze se míchá při teplotě 0 °C po dobu 45 minut. Reakční směs se přefiltruje á sraženina se promyje dalším 10% MeOH v CHCI3. Spojené filtráty se odpaří za sníženého tlaku. Mžikovou chromatografií (10% MeOH/CHCl3, silikagel) se dostane 0,25 g požadované látky, jako čirého oleje.

MS (ES+) m/z 152,7 [M + H]⁺.

b) Ethyl-(S)-10,ll-dihydro-3-[3-(2-amino-4-pyridyl)-1propoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-acetat

0,23 g (1,51 mmol) roztoku z příkladu la) a 0,29 ml (1,50 mmol) diizopropylazodikarboxylatu v 7,5 ml CH₂C1₂ se po kapkách přidá k roztoku 0,39 g (.1,50 mmol) trifenylfosfinu a 0,30 g (1,00 mmol) ethyl-2-[(10S)-3-hydroxy-10,11dihydro-5H-dibenzo[a,d]-10-cykloheptenyl]acetatu v 5 ml.

CH2CI2 při teplotě 0 °C. Ledová lázeň se odstraní a reakční směs se.nechá ohřát na teplotu místnosti. Po 18 hodinách se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku. Mžikovou . chromatografií (50% EtOAc/hexany až 100% EtOAc/hexany, silikagel) se dostane 0,32 g látky obsahující požadovaný produkt. Druhým čištěním mžikovou chromatografií (75 až 90% EtOAc/hexany, silikagel) se dostane 0,23 g požadované látky.

MS (ES+) m/z 430,9 [M + H]⁺.

c) Kyselina (S)-10,ll-dihydro-3-[3-(2-amino-4-pyridyl)-lpropoxy]-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10-octová

139

0000 ·· ·· ·· ·· • · 0 · · · · f »0 ·

0 0 0 0 00 0 0 0 0 • · · · · · 0 .0 » 0 . '0 ·0 0 • « « « 00 0 0 0« ·

0 β) '. 0 0 0 0 ·'·' ··

0,22 g (0,50 mmol) sloučeniny z příkladu lb) se rozpustí v 0,77 ml (0,77 mmol) IN NaOH, 3 ml EtOH a 3 ml THF. Po zahřívání reakční směsi na teplotu 50 °C podobu 18 hodin se rozpouštědlo odstraní za sníženého tlaku. Odparek se rozpustí ve 4 ml vody a přefiltruje se. Filtrát se okyselí 30% TFA ve vodě a výslednásraženina se sebere. Preparativní HPLC (Hamilton PRP-1®, 3% CH₃CN/H₂O - 0,1%. TFA) se dostane 10 mg požadované látky, jako hygroskopické pevné látky.

MS (ES+) m/z 402,6 [M + H]⁺.

Příklad 24

Prostředek ve formě parenterální jednotkové dávky

Přípravek obsahující 20 mg sloučeniny z příkladu 1, jako sterilní suchý prášek, se připraví následujícím způsobem:

mg sloučeniny se rozpustí v 15 ml destilované vody. Roztok se přefiltruje za sterilních podmínek do vícedávkové ampule.a lyofilizuje se. Prášek pro intravenózní a intramuskulární injekci se rekonstituuje přidáním 20 ml 5% dextrózy ve vodě (D5W). Dávka se následně určí objemem injekce. Další zředění semůže provést přidáním odměřeného objemu této jednotkové dávky k dalšímu objemu D5W pro injekce, nebo se odměřená dávka může přidat do jiného mechanismu dávkování léčiva, například do nádoby nebo pytle pro intravenózní kapací infuzi nebo jiného injekčního nebo infúzního systému.

Příklad 25

140

• ·· · · · · · ·· ·♦ ·· ·*

Perorální prostředek obsahující jednotkovou dávku

Kapsle pro perorální podání se připraví míšením a mletím 50 mg sloučeniny z příkladu 1 se 75 mg laktózy a 5 mg stearatu hořečnatého. Výsledný prášek se proseje a naplní do

Příklad 26

Perorální prostředek obsahující jednotkovou dávku

Tableta pro perorální podání se připraví míšením a granulováním 20 mg sacharózy, 150 mg dihydrogensíranu vápenatého a 50 mg * sloučeniny z příkladu 1 s 10% roztokem želatiny. Vlhké granule se prosejí, vysuší, smísí s 10 mg škrobu, 5 mg mastku a 3 mg. kyseliny stearové; a stlačí se do tablety. ‘ ,

Výše uvedený'popis úplně popisuje, jak připravit a použít přítomný vynález. Přítomný vynález.není omezen na příslušná výše popsaná provedení, avšak zahrnuje všechny jejich modifikace, které jsou v rámci následujících patentových nároků. Různé odkazy na časopisy, patenty a jiné , ... * * .

publikace, které jsou v tomto spisu citovány,. vyjadřují stav oboru, a jsou zde zahrnuty odkazem ve svém celku..

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY • · · · ·, ·; · · • A · A A · · · A • · A A A · Τ'.A A A A A A A ' A ' A A. A • · AA · ·' A A aooo- qVfy,

1. Sloučenina obecného vzorce I kde .

A je CH₂ nebo atom kyslíku;

R¹ je atom vodíku, atom halogenu nebo alkylová skupina s

1.až 6 atomy uhlíku;

R , oe atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo CH₂NR''R'';

X. je atom kyslíku nebo CH₂;

Y je

142 ·· ···· ·· ·· '·'· ·'· • « ι· · · · · · '· · · · • ♦ · · · ·· · · · · • · · · · · · · · · · · · • ·· · · · · · · · · ·· · ·· ·» ·· ··

G je NR'', atom síry nebo atom kyslíku;

R' je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, O-alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, S* alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, NR''R'' nebo atom halogenu;

každá R'' skupina je nezávisle na sobě atom vodíku . nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku; a s je 0, 1 nebo 2;

nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
2. Sloučenina podle nároku 1, kde Y je

R’ kde

R' je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, O-alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, Salkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku, NR''R'' nebo atom chloru a každý R''je nezávisle atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku.

143 :99 :99 » « 99 ’ 9 9 9

99 9
3, Sloučenina podle nároku 1, kde Y je

RRN kde každá skupina R -je atom-vodíku nebo alkylová skupina s 1 až
4 atomy uhlíku.

'4. Sloučenina podle nároku 1, kde Y je kde , . * .

každá skupina R'^z je nezávisle na sobě atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku;

a s j e 1. ; '
5. Sloučenina podle nároku 1, kde Y je

RR“N—

144 ······ ·· ·· ·· ·· • 0 · · · · ·. · 0 0 · ······· 0 0 0 0 • · · ·'· 0 0 0 0 0-0 0 · • ·· · 0 0 0 · · · 0

00 0 00 00 ·· 00 kde ’ každá G je atom síry a každá R^z' je nezávisle na sobě atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku.
6. Sloučenina podle nároku 1, kde Yje kde

R'' je atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku. ·
7. Sloučenina podle nároku 1, kterou je kyselina (±) -10, ll-dihydro-3-[2- (6-amino-2-pyridyl) -1ethoxy]-5H-dibenzo[a, d]cykloheptenoctová;

kyselina (±) -10, ll-dihydro-3-[4- (2-pyridylamino) -l-butyl]-5Hdibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (±) -10, ll-dihydro-3-[3- (4-ethoxy-2-pyridylamino) -1propoxy]-5H-dibenzo[a,.d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (S) -10, ll-dihydro-3-[3- (2-pyridylamino) -1-propoxy]5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (R) -10, ll-dihydro-3-[3- (2-pyridylamino) -1-propoxy]5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

145 ·« ·· • · · • · ·· ·· ·· • · · · • · · · kyselina (±) -10,ll-dihydro-3-[3- (3,4,5,6-tetrahydro-2pyrimidylamino) -l-propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10octová;

kyselina (±) -10, ll-dihydro-3-[2- [2-ethylamino) -4-thiazolyl]1-ethoxy]5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (±) -10, ll-dihydro-3-[3- (1-izochinolylamino) -1propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (±) -10, ll-dihydro-7-fluoro-3-[3- (2-pyridylamino) -1propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (S) -10, ll-dihydro-3-[3- (4-methyl-2-pyridylamino) -1propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (S) -10, ll-dihydro-3-[3- (4-ethoxy-2-pyridylamino) -1propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (+) -10, ll-dihydro-6-methyl-3-[3- (2-pyridylamino) -1propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (±)-10,ll-dihydro-2-(dimethylamino)methyl-7-fluor3-[3- (2-pyridylamino) -l-propoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklo-hepten10-octová; · kyselina (S)-10,ll-dihydro-3-[3-[4-(2-propoxy)-2pyridylamino]-5H-dibenzo[a, djcyklohepten-10-octová;

kyselina (S.) -10, ll-dihydro-3-[2-[ 6- (methylamino) -2-pyridyl]1-ethoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová; kyselina (S)-10, ll-dihydro-3-[3-[4-(dimethylamino)-2pyridylamino]-l-propoxy] -5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10octová;

kyselina ( + ) -10, ll-dihydro-3-[3-[4-(ethylthio)-2pyridylamino]-l-propoxy] -5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-10octová;

kyselina (S) -10, ll-dihydro-3-[3- [4-chlor-2-pyridylamino]-lpropoxy] -5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (±) -10, ll-dihydro-2-methyl-3-[3- (2-pyridylamino) -1146 • A Α«·Α

AA · A ·* ' AA • · A AAAA * · A A » A « AAA· A A A «

AAA A A A A A A A A • A· AAAA AAAA propoxy]'-5H-dibenzó[a, d]cyklohepten-10-octová;

kyselina (S) -10, ll-dihydro-3-[3- (4-amino-2-pyridylamino]-lpropoxy]-5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;. kyselina (±) -10, ll-dihydro-3-[3- (4-methyl-2-pyridylamino) -1própoxy] dibenzo[b, f]oxepin-10-octová,\' __ ___ kyselina (±) -10,11-dihydro-3-{2- [ 6- (methylamino) -2-pyridyl] 1-ethoxy] dibenzofb, f]oxepin-10-octová·; nebo kyselina (S) -10, ll-di-hydro-3-[3-(2-amino-4-pyridyl]-lpropoxy] -5H-dibenzo[a, d]cyklohepten-10-octová;

nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.
8. Farmaceutický prostředek, vyznačující se· t.í m, že obsahuje sloučeninu podle, nároku 1 a farmaceuticky přijatelný nosič. '
9. Farmaceutický prostředek, v .yznačující se t í m, že obsahuje sloučeninu podle nároku 1, _t ‘ .

proťinádorový přípravek a farmaceuticky přijatelný nosič. .
10. · Farmaceutický prostředek podle nároku 9, vyznačuj ící se- t í m, že protinádorový přípravek topotekan. ' ·
11. Farmaceutický prostředek podle nároku 9, v y značující se tím, že protinádorový přípravek cis-platina.
12. Způsob léčení chorobného stavu,' u kterého je vyjádřen antagonismus receptoru α_νβ₃, vyznačuj ící se t í m, že zahrnuje podání subjektu, který to potřebuje, sloučeniny podle nároku 1.

147 • · · · • ·
13. Způsob léčení chorobného stavu, u kterého je vyjádřen antagonismus receptoru a_vps, vyznačuj ící se ťí m, že zahrnuje podání subjektu, který to potřebuje, sloučeniny podle nároku 1.
14. Způsob léčby osteoporózy, vyznačující setím, že se· subjektu, který to potřebuje, podá sloučenina podle nároku 1.
15. Způsob inhibice angiogenese, vyznačuj ίο i se t i m, že se subjektu, který to potřebuje, podá sloučenina podle nároku 1.

,. ,
16. Způsob inhibice růstu nádoru nebo nádorové metastázy, vyznačující se t í m, že se subjektu, který to potřebuje, podá sloučenina podle nároku

1. ' .
17. Způsob léčby atherosklerosy nebo restenozy, vyznačující setí m, že se subjektu, který to. potřebuje, podá sloučenina podle nároku 1. '
18. Způsob léčby zánětu, vy z na č u jíc i s e tím, že se subjektu, který to potřebuje, podá sloučenina podle nároku 1.
19. Způsob inhibice růstu nádoru, vyznačuj Ιοί s e t i m, že zahrnuje podání v krocích nebo ve fyzikální kombinaci, sloučeniny podle nároku 1 a protinádorového léčiva.
20. Způsob podle nároku 19, vyznačuj i cí se t i m, že protinádorové léčivo je topotekan.

148 « ·
21.,Způsob podle nároku 19, vyznačuj ící setím, že protinádorové léčivo je cis-platina.
22. Sloučenina obecného vzorce II kde

A je CH₂ nebo atom kyslíku;

R¹ je atom vodíku, atom halogenu nebo alkylová skupina s

1 až 6 atomy uhlíku;

R² je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku nebo CH₂NR'.'R'^Z;

X je atom kyslíku nebo CH₂;

Y j e

RR“N

149 • ·

G je NR'', atom síry nebo atom kyslíku;

R' je atom vodíku, alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, O-alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, Salkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, NR''R'' nebo ¹ atom halogenu;

každá R'' skupina je nezávisle na sobě atom vodíku nebo'.alkylová skupina,s.l až 6 atomy uhlíku; a s je 0, 1 nebo 2; · nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
23. Sloučenina obecného vzorce III kde

150 alkylová skupina s

1 až 6 atomy

1 až 6 atomy 6 atomy uhlíku, SA je CH₂ nebo atom kyslíku;

R¹ je atom vodíku, atom halogenu nebo .1 až 6 atomy uhlíku;·

R² je atom vodíku, alkylová skupina s uhlíku nebo CH₂NR''R'';

X je atom kyslíku nebo CH₂;

R' je atom vodíku, alkylová skupina s uhlíku, O-alkylová skupina s 1 až alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, NRR nebo atom halogenu; a · každá R'' skupina je nezávisle na sobě atom vodíku nebo alkylová skupina -s 1 až 6 atomy uhlíku; a · nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl.
24. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, podle nároku 1, v .y z ..n a č u j i c i se tím, že zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce IV se sloučeninou obecného vzorce V

Y-íCH^-L¹ (V) kde R¹, R², Y a A mají význam uvedený v obecném vzorci I, s libovolnými reaktivními funkčními chráněnými skupinami a

151 • · · ···♦··· ··· ······· • ,..··· ··'·· . · ·

L je OH nebo atom halogenu; ' .

a poté sejmutí jakékoliv ochranné skupiny a popřípadě vytvoření farmaceuticky přijatelně soli. .
25. Způsob průpravy sloucenuny^-obecneho vzorec I, k podle nároku 1, v y. značujícíse tím, že zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce.IV se sloučeninou obecného vzorce VI · (VI) kde R , R , R', R'' a A mají význam uvedený v obecném vzorci I,> s libovolnými reaktivními funkčními chráněnými- skupinami; a poté sejmutí jakékoliv ochranné skupiny a popřípadě vytvoření farmaceuticky přijatelné soli.
26. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1, vy značujícíse t í m, že zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce IV se sloučeninou obecného vzorce VII

152 • · · · · · kde R¹, R², R'' a A mají význam uvedený v obecném vzorci I, s libovolnými reaktivními funkčními chráněnými skupinami;

a poté sejmutí 'jakékoliv ochranné skupiny a popřípadě vytvoření farmaceuticky přijatelné soli.
27. Sloučenina podle jakéhokoliv z nároků 1 až 7 pro 'použití jako léčivo..
28. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro léčení chorob, u kterých je vyjádřen, antagonismus 'receptoru α_νβ3·
29. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro léčení chorob, u kterých je vyjádřen antagonismus receptoru οί_νβ₅.
30. Použití sloučeniny obecného vzorce.I podle nároku 1 · pro výrobu, léčiva pro léčení osteoporózy.
31. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro inhibici angiogeneze.
32. Použití sloučeniny obecného vzorce I mající význam uvedený v nároku 1 pro výrobu léčiva pro inhibici růstu nádoru nebo nádorové metastázy.
33. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku

153 • to ···· toto ·· ·· ·· • · · · · · · • toto to · · · ·· ··· ·· · • · · · · · · ·· toto ·· ··

1 pro výrobu léčiva pro léčení atherosklerozy nebo restenozy.
34. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro léčení zánětu.
35. Použití sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 a protinádorového přípravku pro výrobu léčiva pro inhibici růstu nádoru, ve fyzikální kombinaci nebo pro podávání v krocích.
36. Použití podle nároku 35, kde.protinádorový přípravek je topotekan..
37. Použití podle nároku 35, kde protinádorový přípravek je cis-platina.
38. Použiti sloučeniny obecného vzorce I podle nároku 1 -a inhibitoru kostní resorpce pro výrobu léčiva pro léčení osteoporózy, ve fyzikální kombinaci nebo pro' podávání v krocích.