CN1242768C - 一种治疗肝炎的药物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗肝炎的药物及其制备方法，该药物的配方组成为柴胡、黄芩、黄芪、茵陈、茜草、栀子、蟅虫、白术、凤尾草。该药物遵仲景肝病传脾之论，在总结大量临床经验的基础上合理配伍而成，以疏肝健脾、清利湿热、活血软坚于一体，对肝郁脾虚、湿热内蕴、络脉瘀阻所致诸病症，都具有显著综合疗效，并且无毒副作用，适合临床长期服用。

Description

一种治疗肝炎的药物及其制备方法
技术领域
本发明属于中药领域，涉及一种治疗肝炎的药物及其制备方法。
背景技术
目前，肝炎已成为严重威胁人类健康的世界性疾病，也是我国当前流行最为广泛、危害性最严重的一种传染病，严重地影响了生产、工作和学习，必须积极地进行防治。
用于肝炎治疗的药物品种甚多，如干扰素、阿糖腺苷、拉米夫定、甘草甜素等。同时，利用中药治疗各类型急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和胆道疾病也取得了一定的效果，在改善病症、恢复肝功能、抑制病毒复制及抗肝纤维化等方面具有自身优势，而且毒副作用小、不易复发。例如中国专利CN 1100642A是一种治疗乙型病毒性肝炎的中药制剂，由羚羊角、珍珠母、黄芩、焦栀子、泽泻、龙胆草等29味中药组成；中国专利1179953是一种配套服用的中药乙肝病毒转阴剂，通过配套服用甲、乙、丙三种配方组成的中药而治愈各种急、慢性肝炎；以及中国专利1253830为治疗肝炎、胆管炎、胰腺炎、肝硬化的中药配方的专利等都公开了不同的治疗乙型肝炎的中药配方、制备方法和服用方法。但是，对于目前治疗肝炎的中成药，患者长期服用后会出现脾虚、寒冷等诸多不适症状，导致营养障碍、水液失于布散而生湿酿痰。由于这些原因，患者不能全疗程用药，导致疗效欠佳。另外，许多复方中药只是诸多单味药简单的拼凑堆积，没有一定数量的临床验证，也没有中医理论的支持，其临床疗效尚待评价。
发明内容
本发明的目的是克服目前治疗肝炎的中药普遍存在的导致患者脾虚、寒冷，疗效不佳，多味药的简单拼凑的问题，提供一种配伍精当、疗效显著、长期服用无毒副作用且药价低廉的治疗肝炎的药物，该药物是著名中医的几十年临床经验与中医理论的结晶。
本发明的另外一个目的是提供了该药物的制备方法。
本发明药物遵仲景肝病传脾之论，集取经方小柴胡汤、茵陈蒿汤、大黄蟅虫丸、黄芪建中汤和、清、消、补之法之主药，结合长期临床实践经验而独创。
本发明药物由下列组分制成(用量为重量份)：
柴胡6        黄芩3～9        黄芪3～9
茵陈3～9     茜草3～9        栀子3～9
蟅虫3～9     白术2～8        凤尾草3～12
制备本发明药物的配方优选重量(份)配比范围是：
柴胡6          黄芩3～9          黄芪3～9
茵陈4～8       茜草4～8          栀子4～8
蟅虫3～8       白术4～8          凤尾草3～12
本发明药物的最佳重量(份)配比是：
柴胡6          黄芩6              黄芪6
茵陈5          茜草5              栀子6
蟅虫4          白术4              凤尾草5
本发明药物可以采用中药制剂的常规方法制备成任何常规口服制剂。但是为了使该药物的各原料药更好的发挥药效，优选对栀子、茜草、凤尾草用乙醇提取。
将上述各组分制成本发明药物的生产方法是：
a)将所述重量配比的栀子粉碎，与所述重量配比的茜草、凤尾草混合，加70～80％乙醇进行回流提取，将提取液回收乙醇，得浸膏1；
b)取所述重量配比的柴胡、黄芪、黄芩、茵陈、蟅虫、白术，加入水煎煮两次，合并两次的水煎液，过滤得滤液2；
c)将浸膏1和滤液2合并，浓缩成相对密度为1.01～1.30的浸膏，就制成了本发明药物的活性组分。
d)向步骤c)得到的本发明药物的活性组分中，加入制备不同剂型所需的各种常规辅料，如崩解剂、粘合剂、润滑剂等以常规的中药制剂方法制成任何一种常用口服剂型，如丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液等。
上述制备方法中，步骤b)中将原料药加水煎煮时，优选第一次加水8倍量，煎煮1.5小时，第二次加水6倍量，煎煮1小时。
本发明药物是在总结大量临床经验的基础上，谨慎择药，合理配伍组方而成，以温补为主，兼以疏肝健脾、清利湿热、活血软坚于一体，对肝郁脾虚、湿热内蕴、络脉瘀阻所致诸病症，都具有显著综合疗效。
具体实施方式
以下通过药效学实验具体说明本发明药物的有益效果。
实施例1
a)取500g栀子，进行粉碎，与400g的茜草、500g的凤尾草混合，加75％乙醇进行回流提取，将提取液回收乙醇，得浸膏1；
b)取600g柴胡、600g黄芪、300g黄芩、500g茵陈、400g蟅虫、300g白术，加入20L水煎煮1小时，过滤后，再加入16L水煎液1小时，过滤，合并两次的煎液，回收乙醇，得提取液2；
c)将浸膏1和提取液2合并，浓缩成相对密度为1.30的浸膏3，制成本发明药物的活性组分。
d)向浸膏3中，加入适量淀粉，混合均匀后，装入明胶硬胶囊，就制成胶囊剂。
取上述本发明药物的活性组分(浸膏3)，进行下述药效学实验。
①对乙型肝炎病毒表面抗原和e抗原具有显著的抑制作用
用乙型肝炎病毒基因转染人肝癌细胞系2.2.15细胞，以无毒浓度(TC0)，将药液加入2.2.15细胞培养板中，培养8天。测试对细胞HBsAg和HBeAg的分泌抑制情况，以及对细胞培养上清和细胞内HBV-DNA斑点杂交和Southern Blot实验情况。结果示于表1。
                  表1本发明药物对乙型肝炎病毒表面抗原和e抗原的作用
  阳性对照(拉夫米定)   本发明药物
  对细胞HBsAg   分泌抑制率   无明显抑制作用   60.13±2.65％
  半数有效浓度(IC50) -   3.36±1.02mg/ml
  选择指数(SI)   4.707±1.23
  对细胞HBeAg   分泌抑制率   无明显抑制作用   52.55±20.77％
  半数有效浓度(IC50)   -   6.054±1.39mg/ml
  选择指数(SI)   -   2.566±0.58
  对细胞培养上清和细胞内HBV-DNA斑点杂交   半数有效浓度(IC50)   0.103±0.015mg/ml   9.585±0.25mg/ml
  选择指数(SI)   11.75±1.70   1.565±0.035
  对细胞培养上清和细胞内HBV-DNA的Southem Blot   半数有效浓度(IC50)   0.096±0.002mg/ml   4.835±0.19mg/ml
  选择指数(SI)   8.34±0.16   3.105±0.12
注：剂量分别选无毒浓度(TC0)，本发明药物TC0为10mg/ml，阳性对照拉米夫定TCo为0.8mg/ml。
由表1可明显看出，本发明药物显著抑制人肝癌细胞HBsAg和HBeAg的分泌，并对细胞培养上清和细胞内HBV-DNA也具有一定抑制作用。
②在鸭体内对鸭乙型肝炎病毒感染的治疗效果显著
采用一日龄北京鸭静脉注射鸭乙型肝炎病毒，7天后开始给鸭口服本发明药物，试验选用剂量为250mg/kg，1天2次，给药10天。并设对照组，注射相同剂量的生理盐水。分别在给药后第5天(T5)、第10天(T10)及停药后第3天(P3)测试鸭血清DHBV-DNA的情况，结果示于表2。
                               表2本发明药物治疗组与病毒感染对照组鸭血清
                                          DHBV-DNA水平抑制率的比较
  鸭数(只)   T5   T10   P3
  OD值   抑制率(％)   OD值   抑制率(％)   OD值   抑制率(％)
  对照   6   0.961±0.15   -16.39   0.706±0.14   15.12   0.810±0.12   -0.19
药物组 6 0.741±0.15 9.16 0.702±0.16 14.67 0.625±0.15 24.38
结果显示对鸭血清DHBV-DNA有非常显著的抑制作用，说明对鸭乙型肝炎病毒感染的治疗效果显著。
③有效防治D-氨基半乳糖致大鼠急性肝损伤
以大鼠D-氨基半乳糖肝损伤模型(李仪奎.中药药理实验方法学，上海科学技术出版社，1991：460)(D-氨基半乳糖诱导肝损伤的过氧化机理及锌的保护作用，中国药理学及毒理学杂志，1993，7(2)：81)，应用肝功能生化检测及肝脏形态计量学方法，以联苯双酯为对照，观察本发明药物防治D-氨基半乳糖致大鼠急性肝损伤的疗效。结果示于表3～5。
              表3本发明药物对血清ALT和AST活性的影响
  组别   用药剂量   ni   ALT   AST
  模型组   10.0ml·kg-1   10   125.64±15.97   268.22±68.45
  联苯双酯组   150.0ml·kg-1   10   94.57±16.76   227.00±61.64
  本发明药物组   12.0g·kg-1   10   74.78±14.35   194.11±19.87
                         表4本发明药物对肝脏MDA含量和对肝脏SOD活性的影响
  组别   用药剂量   ni   MDA   SOD
  模型组   10.0ml·kg-1   10   0.1503±0.0375   238±42.68
  联苯双酯组   150.0ml·kg-1   10   0.0980±0.0172   479±81.32
  本发明药物组   12.0g·kg-1   10   0.0572±0.006   669±63.12
                表5本发明药物对肝脏系数的影响
  组别   用药剂量   ni   肝脏系数
  模型组   10.0ml·kg-1   10   0.053±0.004
  联苯双酯组   150.0ml·kg-1   10   0.052±0.004
  本发明药物组   12.0g·kg-1   10   0.040±0.005
结果显示本发明药物的保护作用体现在：(1)恢复肝功能：显著降低D-氨基半乳糖引起的血清ALT、AST含量(P＜0.01)，疗效优于联苯双酯(P＜0.05)；(2)抑制肝脏过氧化损伤：显著降低MDA含量(P＜0.01)、升高SOD活性(P＜0.01)，疗效优于联苯双酯(P＜0.01)；(3)减轻肝脏病变、缓和炎症反应：显著减轻肝脏大体/组织病变，降低肝脏系数(P＜0.01)优于联苯双酯(P＜0.01)，同时还能够增加存活肝细胞数和减少浸润炎性细胞。说明该药物对D-氨基半乳糖致大鼠急性肝损伤有明确的保护作用。
④防治大鼠胆汁瘀滞性黄疸
用肝功能生化检测，以联苯双酯为对照，观察本发明药物防治异硫氰酸-1-萘酯致胆汁瘀滞性黄疸(杨新波，黄正明，曹文斌，等.CCl4，D-Gal，ANIT致小鼠肝损伤模型的实验研究.华人消化杂志，1998，6(1)：19-20)的疗效。结果示于表6。
         表6本发明药物对血清TBil含量和对血清ALT活性的影响
  组别   用药剂量   ni   TBil   ALT
  模型组   10.0ml·kg-1   10   111.230±26.282   442.10±142.864
联苯双酯组 150.0ml·kg-1 10 33.460±10.064 187.30±25.096
  本发明药物组   12.0g·kg-1   10   16.342±7.374   76.70±22.126
结果显示本发明药物能显著降低血清总胆红素(TBil)含量(P＜0.01)和血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性(P＜0.01)，其疗效优于联苯双酯(P＜0.05)。说明本发明药物对胆汁瘀滞性黄疸具有退黄作用。
⑤能够有效保护免疫性肝损伤小鼠的免疫功能
用肝功能生化检测肝脏功能，用免疫学方法检测巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞的主要功能，与联苯双酯比较，观察本发明药物对卡介苗/内毒素诱导免疫性肝损伤小鼠免疫功能(李仪奎.中药药理实验方法学，上海科学技术出版社，1991：460)的影响。
结果显示本发明药物免疫调节的保护作用体现在：(1)恢复肝功能：显著降低免疫性肝损伤小鼠的血清ALT、AST含量(P＜0.01)，疗效优于联苯双酯(P＜0.05)(见表7)；(2)恢复免疫功能：脾脏系数增加，巨噬细胞吞噬功能回升，NO生成量回升，淋巴细胞转化率回升，血清IFN-γ和IL-4含量回降，血清溶血素含量回升，作用优于联苯双酯。说明本发明药物能有效保护免疫性肝损伤小鼠的免疫功能。
表7本发明药物对免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST活性和脾脏系数的影响
  组别   用药剂量   ni   ALT   AST   脾脏系数
  模型组   10.0ml·kg-1   10   281.500±69.2391   470.200±107.1819   0.00559±0.00252
  联苯双酯组   150.0ml·kg-1   10   96.000±30.3827   273.000±57.0283   0.00430±0.00134
  本发明药物组   25.0g·kg-1   10   63.556±12.8658   232.889±68.4223   0.00489±0.00095
⑥具有防治大鼠CCl4损伤性肝纤维化的作用
用肝功能生化检测及肝脏形态学观察，以联苯双酯为对照，观察本发明药物防治CCl4致大鼠反复性损伤性肝纤维化(李仪奎.中药药理实验方法学，上海科学技术出版社，1991：460)的作用。
结果显示，本发明药物对CCl4大鼠损伤性肝纤维化的保护作用体现在：(1)恢复肝功能：显著回降CCl4引起的血清ALT、AST、Bil含量升高(P＜0.01)，恢复血清的蛋白含量，疗效优于联苯双酯(P＜0.05)。(2)降低肝脏胶原沉积：显著回降血清透明质酸含量(HA)(P＜0.01)，回降肝脏胶原蛋白含量(P＜0.01)，疗效优于联苯双酯(P＜0.05)(见表8)；(3)减轻肝纤维化程度：能明显降低造模大鼠肝细胞变性坏死程度、减少肝小叶内纤维增生所形成的间隔，降低肝纤维化肝脏病变评分(P＜0.01)，且疗效优于联苯双酯组(P＜0.05)。说明本发明药物可有效防治大鼠CCl4损伤性肝纤维化。
                  表8本发明药物对血清HA含量和对肝脏胶原蛋白的影响
  组别   用药剂量   ni   HA(ng/ml)   肝脏胶原蛋白
  模型组   10.0ml·kg-1   10   2332.6±268.8342   5.640±0.5392
  联苯双酯组   150.0ml·kg-1   10   1432.2±158.0301   3.611±0.3123
  本发明药物组   12.0g·kg-1   10   537.5±64.6035   2.240±0.1601
此外，毒理学试验结果也进一步证实本发明药物是一个可于临床长期服用的安全性复方中药。
①急性毒性试验
本实验观察灌胃本发明药物的一日一次急性毒性反应和死亡情况。采用按等比浓度梯度对小鼠一日一次灌胃给药，观察动物急性毒性反应和死亡情况；以动物可耐受的最大浓度和最大体积对小鼠一日多次灌胃给药，观察动物毒性反应和死亡情况，计算出最大耐受量等方法。研究结果显示：根据药物的急性毒性试验方法，找不出该药物一日一次灌胃引起小鼠死亡的剂量，故无法测出LD50。用最大耐受量测定法，计算出该药物一日最大耐受量(351.60g生药/kg体重)相当于临床用量(1.22g生药/kg体重)288.9倍。表明该药物毒性甚小，临床应用安全可靠。
②长期毒性试验
本实验观察大鼠长期灌胃给药对该药物所产生的毒性反应及其程度，从而判断和评价该药物的临床使用的安全性。于2002年12月28日～2003年08月05日期间，将清洁级Wistar大鼠(雌雄各半)随机分为高、中、低剂量组和正常对照组。高、中、低剂量组的给药剂量分别为63.44g·kg-1·d-1、31.72g·kg-1·d-1、15.86g·kg-1·d-1，对照组为蒸馏水18ml·kg-1·d-1。实验观察了该药物连续灌胃91天、182天对大鼠一般活动、饮食、粪便、生长曲线、肝功能、肾功能、糖代谢等影响。
结果显示，高、中、低剂量组大鼠外观行为、进食量均正常；实验中、末期各剂量组血常规和凝血时间均在正常变化范围内，与对照组未见明显差异；生化指标显示高、中、低剂量组的本发明药物对大鼠糖代谢及脂类代谢无明显影响，高剂量组可一过性影响大鼠肝脏功能和肾脏功能，停药后获得较快恢复。给药91天、182天和停药后28天的脏器系数，182天时段高剂量组能一过性增加大鼠甲状腺、肝脏、脾脏、肾脏的脏器系数，对其它器官的脏器系数无明显影响，给药91天和停药后28天的脏器系数各组间均无显著差异，各组大体结构及组织形态均未见明显病理改变。
因此，本发明药物通过抗病毒、护肝、退黄、免疫调节和抗纤维化等多方面的治疗作用，能对多种病毒性肝炎(例如甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎等)患者起到抗病、缓解病情、最终达到完全治愈的目的，显示了该复方中药多环节整合调节作用的优势，同时无毒副作用，适合临床长期服用。
实施例2
a)取400g栀子，进行粉碎，与300g的茜草、150g的凤尾草混合，加75％乙醇进行回流提取，将提取液回收乙醇，得浸膏1；
b)取300g柴胡、450g黄芪、250g黄芩、150g茵陈、250g蟅虫、350g白术，加入18L水煎煮1.5小时，过滤后，再加入10L水煎液1小时，过滤，合并两次的煎液，回收乙醇，得提取液2；
c)将浸膏1和提取液2合并，浓缩成相对密度为1.24的浸膏3。
d)向浸膏3中，加入乙醇作粘合剂，压制成颗粒剂。
实施例3
a)取200g栀子，进行粉碎，与450g的茜草、600g的凤尾草混合，加75％乙醇进行回流提取，将提取液回收乙醇，得浸膏1；
b)取300g柴胡、200g黄芪、350g黄芩、400g茵陈、350g蟅虫、100g白术，加入15L水煎煮2小时，过滤后，再加入10L水煎液1小时，过滤，合并两次的煎液，回收乙醇，得提取液2；
c)将浸膏1和提取液2合并，浓缩成相对密度为1.10的浸膏3。
d)向浸膏3中，加入辅料制成颗粒，压制成片。

Claims (4)

1.一种治疗肝炎的药物，其特征在于，它是由下述重量配比的原料
制成的药剂，其用重量份表示，
柴胡6     黄芩3～9   黄芪3～9
茵陈3～9  茜草3～9   栀子3～9
蟅虫3～9  白术2～8   凤尾草3～12。
2.根据权利要求1所述的治疗肝炎的药物，其中各原料的重量配比是，其用重量份表示，
柴胡6     黄芩3～9   黄芪3～9
茵陈4～8  茜草4～8   栀子4～8
蟅虫3～8  白术4～8   凤尾草3～12。
3.根据权利要求1所述的治疗肝炎的药物，其中各原料的重量配比是，其用重量份表示，
柴胡6     黄芩6      黄芪6
茵陈5     茜草5      栀子6
蟅虫4     白术4      凤尾草5。
4.权利要求1的一种治疗肝炎的药物的制备方法，该方法包括下列步骤：
a)将所述重量配比的栀子粉碎，与所述重量配比的茜草、凤尾草混合，加70～80％乙醇进行回流提取，将提取液回收乙醇，得到浸膏；
b)取所述重量配比的柴胡、黄芪、黄芩、茵陈、蟅虫、白术，加入水煎煮两次，合并两次的水煎液，过滤得滤液；
c)将步骤a)得到的浸膏和步骤b)得到的滤液合并，浓缩成相对密度为1.01～1.30的浸膏。
d)将步骤c)得到的浸膏制成任何常用口服剂型。
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