CN1218399A - 用于治疗与aisd病毒(hiv－1)感染有关的痴呆的苯甲酰胺 - Google Patents

Abstract

披露了苯甲酰胺为主的组合物,其用于治疗HIV－1病毒感染相关病症,指恶化阶段的HIV感染相关痴呆症或HIV痴呆且具有治疗及预防活性。

Description

用于治疗与AISD病毒(HIV-1)感染 有关的痴呆症的苯甲酰胺

本发明涉及与AISD病毒(HIV-1)感染有关的痴呆症的治疗。特别涉及预防或治疗该症状的组合物及方法。

背景信息分成两部分。第一部分提供了本发明治疗的病症信息，亦即与AIDS病毒感染有关的痴呆症。第二部分提供苯甲酰胺及其用作药物，苯甲酰胺在于本发明方法及组合物中作为活性剂。

HIV痴呆症(AIDS痴呆复合症)

后天免疫缺乏症候群(AIDS)于疾病末期经常伴随有神经并发症。约有三分之一成人及半数儿童AIDS病人最终出现此种并发症。神经病症包括认知、运动及行为功能异常的复合症状态，合称为“AIDS痴呆复合症”(ADC)或更适当称为“HIV-相关痴呆症”或“HIV痴呆症”。多达50％病童出现神经缺陷作为发育延迟的标志。HIV感染相关神经疾病包含骨髓病变，周边神经病变，及肌肉病变、HIV感染伴随的CNS神经病理改变包括髓鞘质苍白，星形细胞增加，神经元损失及树状突树状分支损失，以及神经突触前区减少。造成的神经功能失调会妨碍日常工作，工作生产力，严重病症甚至需要昂贵的营养照顾。虽然智力早期损失不视为痴呆完全爆发，但反应出HIV-1相关的神经元损害。HIV痴呆并无有效治疗方法。此处所述药物可减少神经元损害，防止神经元损害的进行，因此延长患者的工作能力，因而节省大量社会成本。

单单在美国HIV患者就超过100万人，其中约有三分之一患有AIDS。如此，抗HIV痴呆治疗处理的潜在目标族群目前大于每年100,000位病人，而由预防性HIV痴呆处理所能明确获益的目标族群约为数十倍。预期需要HIV痴呆治疗的患者希望更有效的治疗，以使AIDS病人寿命延长。

目前并没有AIDS的真正治愈方法，没有有效治疗可由患者体内完全清除病毒，故目前不可能有任何HIV痴呆的完全有效治疗方法。齐多夫定(AZT)广泛用于治疗感染。虽然目前对此种治疗的长期疗效有怀疑，原因为病毒的突变频率高，但无疑地AZT可短时间内有效治疗HIV痴呆。HIV痴呆的相关神经症状可使用一些药物治疗。例如HIV痴呆相关的精神病可使用氟哌丁苯及硫利达嗪治疗。吗茚酮曾经用于治疗HIV痴呆病人的精神病及谵妄。哌醋甲酯曾经用于治疗HIV痴呆引起的抑郁。电脉冲治疗曾经用于HIV诱发的昏迷。所有这些治疗皆用来改善HIV痴呆症状。但都无法治疗HIV痴呆本身。

HIV的包封膜糖蛋白gP120与HIV痴呆的病因有关。此种蛋白质由感染细胞大量产生，发现于培养中于极低浓度对神经元具有神经毒性，损伤学习能力，诱生细胞激素及减少脑葡萄糖的利用率。hill et al.(Hill,J.M.,Merivis,R.R.,Avidor,R.,Moody,T.W.and Brenneman,D.E.(1993)脑研究.,63:222-233)显示新生大鼠服用gP120可引起脑部形态伤害以及延迟复合运动行为的发展。

目前无批准的治疗方法。使用钙通道拮抗剂及NMDA拮抗剂曾由Lipton提出作为可能的治疗。市面上目前有多种钙通道拮抗剂，例如尼莫地平，但NMDA拮抗剂仍在许多许多公司临床研究当中，主要是用于急性中风，或长期用于癫痫及巴金森氏病。金刚烷胺于市面上作为抗病毒剂，已知具有NMDA拮抗剂性质。金刚烷胺的近亲美金刚烷胺于欧洲已经上市，由Lipton提议作为HIV痴呆的可能治疗方法。另一种已在试验的药剂是硝化甘油。一些情况下，硝化甘油产生的NO可保护神经元不会被NMDA受体过度刺激结果导致钙及肤胺酸盐的刺激性毒性。然而，硝化甘油具有心血管作用且药动学极度不规则，因而此种方法成问题。

发明人与Robert Floyb一起从事本发明的相关研究时发现，一些硝酮化合物(nitrone compounds)具有抗HIV痴呆的活性。此不同发明含在于同时提出申请的另一个专利申请中。

苯甲酰胺类用做药物

本发明使用一苯甲酰胺类似物作为活性剂来治疗HIV痴呆。同属发明人拥有的美国专利案5,472,777记载了一些苯甲酰胺及其用于治疗神经疾病。同属发明人拥有的专利合作条约申请PCT/US96/04538记载了此处使用的化合物及用于病症但未特别包含HIV痴呆的药物组成物。

参者文献

其他相关的参考文献包括：

Lipton,SA,Gendelman,HE(1995)Dementia associatcd with theacquired immunodeficiency syndrome，新英格兰医药杂志，332(14):934-940.

Simpson,DM,Tagliati,M(1994)Neurologic manifestations ofHIV infection，国际医药年报，121(10):769-785.

Lipton,SA(1994) Neuronal injury associated with HIV-1 andpotential treatment with calcium-channel and NMDA antagonists,神经科学进展，16(3-4):145-151.

Danysz,W,Parsons,CG,Bresink,I,Quack,G(1995)Glutamate inCNS disorders，药物研究和前景，8:261-277.

Lipton,SA Choi,YB,Pan,ZH,Lei,SZ,Chen,HSVet al.(1993)Aredox-based mechanism for the neuroprotective and ncurodestructiveeffects of nitric oxide and related nitroso-compounds，自然，364:626-632.

Dawson,VL,Dawson,TM,Uhl,GR,Synder,SH(1993)Humanimmunodeficiency virus type1coat protein neurotoxicity mediated bynitric oxide in primary cortical cultures，国家科学院院报，90:3256-3259.

Mollace,V,Colasanti,M.Persichini,Bagetta,G,Lauro,GM,Nistico,G(1993)HIV gp 120 glycoprotein stimulates the inducibleisoform of NO synthase in human cultured astrocytoma cells，生化生理研究通讯194:439-445.

Schultz,JB Henshaw,R,Siwek,D.Jenkins,BG.Ferrante,RJ,Cipolloni,PB,Kowall,NW,Rosen,BR and Beal,MF(1995)Involementof free radicals in excitotoxicity in-vivo。神经化学杂志．64:2239-2247.

Winrow,VR,Winyard,PG,Morris,CJ,Blake,DR(1993)Feeradicals in inflammation:Second messengers and mediators of tissuedestruction，英国医药杂志49:506-522.

Lofon-Cazal,M,Pietri,S,Culcasi,M.Bockaert,J(1993)NMDA-dependent superoxide production and ncurotoxicity，自然，364:535-537.

Olanow,CW(1992)An introduction to the free radical hypothesisin parkinson’sdisease，神经学年报，32(增刊)：53-59.

Floyd,R.A.and Carney,J.,Nitrone radical traps(NRTs)protectin experimental neurodegenerative diseases,in Neuroprotectiveapproaches to the treatment of Parkinson’s disease and otherneurodegenerative disorders(Olanow,C.W.Jenner,P.and Youssim,Eds)科学评论，New York,New York,in press.

Cao,X.and Phillis,J.W.(1994)a-Phenyl-N-tert-butyl-nitroneReduces Cortical Infarct and Edema in Rats Subjected to FocalIschemia．脑研究644:267-272

Zhao,Q.,Pahlark,K.,smith,M.-J.,and Siesjo,B.(1994)Delayedtreatment with the spin trap aphenyl-n-tert-butyl nitrone(PBN)reducesinfarct size following transient middle cerebral artery occlusion in rats伦敦物理学会会报。152:349-350.

Oliver,CN,Starke-Reed,PE,Stadtman,ER,Carney,Jm andFloyd,RA(1990)Oxidative damage to brain proteins,loss of glutaminesynthetase activity and production of free radicals during ischemiainduced injury to gerbil brain。美国国家科学院院报87:5144-5147.

Carney,JM,Starke-Reed,PE Oliver,CN,Landrum,RW,Cheng,MS,Wu,JF and Floyd,RA(1991)Reversal or age-related increase inbrain protein oxidation in enzyme activity,and loss in temporal andspatial memory by chronic administration of the spin-trappingcompound N-tert-butyl-α-phenyinitrone国家科学院院报，88:3633-3636.

McKechnie,K,Furman,BL,Paratt,JR(1986)Modification byoxygen free radical scavengers of metabolic and cardiovascular effectsof endotoxin infusion in conscious rats，循环休克，19:429-439.

Hamburger,SA,McCay,PB(1989)Endotoxin-induced mortalityin rats is reduccd by nitrones，循环休克，29:329-384.

Pogrebniak,HW,Merino,MJ,Hahn,SM,Mitchell,JB,Pass,Hl(1992)Spin trap salvage from endotoxemia:The role of cytokine downregulation，外科学，112:130-139.

Edamatsu,R,Mori,A.,Packer,L(1995)The spin trap N-tert-α-phenyl-butylnitrone prolongs the life span of the senescence acceleratedmouse，生化生理研究杂志211:847-849.

Achim,C,Heyes,MP,Wiley,CA(1993)Quantitation of humanimmunodefficiency virus,immune activation facyors, and quinolinicacid in AIDS brains，临床研究杂志91:2769-2775。

Wesselingh,SL,Power,C,Glass,JD,Tyor,WR et al.(1993)Intracereberal cytokine messengcr RNA expression in aquiredimmuniodeficiency syndrome dementia，神经学年报，33:576-582.

Gelbard,HA,Dzenko,KA,DiLoreto,D,delCero,C,delCerro,M,Epstein,LG(1994)Neurotoxic effects of.tumor necrosis factor alpha inprimary human neuronal cultures are mediated by activation of thegalutamateAMPAreceptor subtype:Implications forAIDSneuropathogenesis，神经科学进展，15:417-422.

Selmaj,K.Raine,CS,Farocq,M.Norton,WT,Brosnan,CF(1991)Cytokine cytotoxicity against oligodendrocytes.Apoptosis induced byLymphotoxins，免疫杂志，147:1522-1529.

Yeung,MC,Pulliam,L.,Lau,AS(1995)TheHIVenvelope proteingp120is toxic to human brain-cell cultures through the induction ofinterleukin-6 and tumor necrosis factor-α, AIDS9:137-143.

PulliamL.,Berens,ME,Rosenblum,ML1988.A Normal humanbrain cell aggregate model for neurobiological studies，神经科学研究杂志21:521-530.

Pulliam,L,West,D,Haigwood,N,Swanson,RA(1993)HIV-1envelope gp 120 alters astrocytes in human brain cultures,AIDS研究及人类逆病毒，9:439-444.

Pulliam,L,Herndier,B,McGrath,MS(1991)Purified,trichosanthin(GLQ223^) exacerbation of indirect HIV-associatedneurotoxicity in vitro,AIDS,5:1237-1242.

Robinson,C(1995)N-acetylcysteine，未来药物，20(6):559-563.

Sandstrom,PA,Roberts,B,Folks,TM,Buttke,TM(1993)HIVgene expression enhances T-cell susceptibility to hydrogen peroxideinduced apoptosis,AIDS研究及人类逆病毒，9:1107-1113.

Staal,FJ,Roederer,M,Raju,PA,Anderson,MT et al.(1993)Antioxidants inhibit simulation of HIV transcription,AIDS研究及人类逆病毒，9:299-306.

Floyd,RA,Watson,JJ,Wong,PK(1984)Sensitive assay ofhydroxyl free radical formation utilizing high pressure liquidchromatography and electrochemical detection of phenol and salicylatehydroxylation products，生化生理方法杂志，10:221-235.

Floyd,RA,Henderson,R,Watson,JJ,Wong,PK(1986)Use ofsalicylate with high pressure liquid chromatography and elecrochemicaldetection(LCED)as a sensitive measure of hydroxyl free radical inadriamycin treated rats，游离基生物医药，2:13-18.

现已发现一些苯甲酰胺化合物在治疗AIDS痴呆复合症中(HIV痴呆)具有活性。

该发现可认为是苯甲酰胺为主的药物组合物具有抗HIV痴呆活性。该组合物包含式Ⅰ乙酰氨基苯甲酰胺，氨基苯甲酰胺或硝基苯甲酰胺化合物的一或多个作为活性剂及药用载剂。

式Ⅰ中，R′为含3至5个碳原子的饱和烷基，各个R独立为-NH-CO-CH₃,-NO₂或-NH₂，及n为1或2，但条件如下：1)当n为1而R为位于环4位的-NO₂时，R′不为叔丁基，异丁基或丙基；2)当n为1及R为位于环2位的-NO₂时，R′不为异丁基或丙基；及3)当n为2及R′为叔丁基且两个R皆为-NO₂时，R不位于环的3及5位。优选载体为口服载体但也可为注射载体。该药物组合物可为散装剂型，但更典型的为单位剂型。

本发明另一方面提供一种治疗患有HIV痴呆的患者的治疗方法。该方法包括对给患者服用HIV痴呆治疗有效量的一种或多种前述药物组合物。

本发明另一方面提供一种保护可能患有HIV痴呆的患者的预防方法。该方法包括给患者使用HIV痴呆预防有效量的一种或多种前述药物组合物。

参照附图进一步叙述本发明，其中：

图1为柱状图，其表示在HIV痴呆相关细胞培养试验中苯甲酰胺的保护作用。

图2为柱状图，其表示在HIV痴呆相关细胞培养试验中苯甲酰胺的保护作用。

图3为柱状图，其表示在使用苯甲酰胺进行细胞凝集试验中观察的细胞程序性死亡反应。

图4为苯甲酰胺的生物利用度随时间函数的作图。苯甲酰胺

本发明的治疗使用一种或多种苯甲酰胺作为活性剂。本发明使用一些乙酰氨基苯甲酰胺，氨基苯甲酰胺及硝基苯甲酰胺作为活性药物剂。苯甲酰胺可用式Ⅰ表示。式中，R′为含3至5个碳原子的饱和烷基及n为1或2。

乙酰氨基，氨基或硝基可出现在环上任何位置。优选具体例包括当n为1时乙酰氨基在环的2,3或4位，及当n为2时乙酰氨基在环的2和3,2和4,2和5,2和6,3和4，或3和5位。

至于烷基取代基R′，以其中R′为烷基且于α碳不含氢，即碳与环上氮原子键合的化合物优选。R′基的优选实例为叔丁基及叔戊基。

特别优选的式Ⅰ乙酰氨基苯甲酰胺为：N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺，N-异丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺，N-叔戊基-4-乙酰氨基苯甲酰胺，N-叔丁基-3-乙酰氨基苯甲酰胺，及N-甲基环丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。

以N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺为最优选乙酰氨基苯甲酰胺。

用作活性剂的氨基苯甲酰胺及硝基苯甲酰胺为如式Ⅰ所示，其中R为氨基或硝基。式中，R′为含3至5个碳原子的饱和烷基及n为1或2同样为优选且它们的位置参照乙酰氨基苯甲酰胺，但进一步条件：1)当n为1则R为在环4位的-NO₂时，R′不为叔丁基，异丁基或丙基；2)当n为1及R为在环2位的-NO₂时，R′不为异丁基或丙基；及3)当n为2及R′为叔丁基且两个R皆为-NO₂时，R不位于环的3及5位。

特别优选的作为活性剂的式Ⅰ氨基苯甲酰胺及硝基苯甲酰胺有：N-异丙基-4-硝基苯甲酰胺，N-叔丁基-3-硝基苯甲酰胺，N-叔丁基-2-硝基苯甲酰胺，N-正丁基-4-硝基苯甲酰胺，N-正丙基-4-硝基苯甲酰胺，N-叔丁基-3,5-二硝基苯甲酰胺，N-1-甲基丙基-4-硝基苯甲酰胺，N-叔丁基-4-氨基苯甲酰胺及N-叔丁基-3-氨基苯甲酰胺。

当苯甲酰胺化合物含有一个氨基，例如N-叔丁基-3-氨基苯甲酰胺及N-叔丁基-4-氨基苯甲酰胺时，氨官能基可以盐形式存在。当呈盐形式时，氨基被质子化呈阳离子形式而与药用阴离子结合，例如，氯，溴，碘阴离子，羟基，硝酸根，磺酸根，甲磺酸根，乙酸根，酒石酸根，草酸根，丁二酸根，或palmoate酸根。当述及氨基苯甲酰胺时须了解，也包含这些盐。

前述同属发明人拥有的美国专利NO5,472,983披露了若干苯甲酰胺，基于其对巴金森氏病的MPTP小鼠模型的保护作用而可用于治疗神经变性病。本发明化合物N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺为这些苯甲酰胺(N-叔丁基-4-硝基苯甲酰胺)之一的体内生物转化产物，大鼠及小鼠口服给予N-叔丁基-4-硝基苯甲酰胺时，血液中可出现该种化合物。药物组合物

苯甲酰胺化合物可配成适合经口或经肠外，例如静脉或肌肉注射给药的药物组合物。

口服给药的组合物呈液体溶液或悬浮液，散剂，锭剂，胶囊剂等。此该组合物中，硝酮或其盐通常为小量成份(0.1至50％重量比)，其余为多种载体及有助于形成所需剂型的加工助剂。液体剂型可包括适当水或非水载体与缓冲剂，悬浮分散剂，着色剂，矫味剂等。

固体剂型例如包含下列任一种成份或具有类似性质的化合物：粘合剂例如微晶纤维素，西黄蓍胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖；崩解剂如藻酸，Primogel，或玉米淀粉；润滑剂如硬脂酸镁；滑动剂如胶体二氧化硅；甜味剂如蔗糖及糖精，或矫味剂如薄荷，糖，甲基水杨酸酯，或橙香料。

以注射组合物为例，常基于注射用无菌盐水或磷酸盐缓冲水，或其它本领域已知的注射载体。活性硝酮典型为小量成份，经常占约0.05至10％重量比而其余为注射用载体等。

这些口服或注射给药的组合物的成份仅为代表性的。其它材料及加工技术等叙述于Remington’s药物学第8部分，17版，1985年，Mack出版公司，Pennsylvania(在此插入供参考)。也可将本发明化合物以持续释放剂型或由持续释放的药物输送系统给药、代表性持续释放材料的叙述参见Remington’s药物学。治疗病情及治疗计划

使用含苯甲酰胺组合物治疗的病情通常包含HIV痴呆及多种属于HIV痴呆定义范围内的症状。可给予含苯甲酰胺组合物来达到疗效并减慢或对抗HIV痴呆的进行，或者可以预防方式给予尚未出现HIV痴呆但已经暴露于HIV-1病毒的病人。含苯甲酰胺组合物计划以使药物进入病人血流且通过血脑屏障进入病人脑部的方式给药。一种最佳给药方式为静脉给药。治疗这种病情的静脉给药剂量为约0.01毫克/千克/小时至约10毫克/千克/小时的范围，共计约1至约120小时，特别1至96小时。预载大剂量约10至约500毫克也可给药来获得适宜稳定浓度。其他肠外给药形式，例如肌肉注射也可使用。此种情况下，使用类似的剂量。

虽然由药物输送观点看来，肠外给药有其吸引力，但须了解HIV感染的过程可能由数个月甚至数年，故口服给药对病人的方便性及忍受性而言为最优选。采用口服给药时，每日一至三次，每次约0.02至约50毫克/千克，优选剂量为约0.04至约10毫克/千克。此种剂量及用法亦适用于预防性治疗。

任一种治疗计划中，医护专业人员必须评估病人的情况，决定病人是否可由苯甲酰胺治疗获益。必须进行某种程度的实验来决定最佳剂量与给药方式。

已观察到阳性剂量-反应关系。由此须牢记副作用的严重程度与提供最高可能的保护与改善效果的优点，一些医疗机构可能希望给予大量苯甲酰胺，例如前述者。化合物的制法

此处使用的苯甲酰胺化合物可使用常用起始物料且方便的反应制备。

代表性的制备途径为以叔丁胺举例说明，但也可使用任一种烷基胺，包括下述反应：(A)

其中X为卤原子，例如碘，溴，氟或氯。(B)

(C)

步骤(A)中N-叔丁基硝基苯甲酰胺(Ⅲ)。此种反应须于低于10℃的温度下进行。

步骤(A)获得苯甲酰胺(Ⅲ)，亦即其中R为-NO₂的本发明化合物。

步骤(B)中一-或二-硝基苯甲酰胺(Ⅲ)的硝基被还原。通常用还原剂如肼和适当催化剂例如非均匀铂，氧化铁氢氧化物，钯或镍催化剂，典型支撑于载体上，或使用氢气及催化剂进行。

步骤(B)获得苯甲酰胺(Ⅳ)，其中R为NH₂的本发明化合物。

制造(C)中氨基苯甲酰胺化合物Ⅳ经与乙酰基卤如乙酰氯反应转成乙酰氨基苯甲酰胺Ⅴ。该反应于弱碱存在下在低于周围温度如-20℃至20℃进行。产生其中R为乙酰氨基的本发明化合物。

如此获得其中R为乙酰氨基的本发明化合物。其他合成路线也可用来制备化合物。替代路线范例例举如下，使用N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺作为代表化合物。其它化合物可使用此替代方法制备而以适当的起始物料开始，例如2-或3-氨基或硝基苯甲腈，或2,3-,2,4-,2,5-,2,6-,3,4-或3,5-二氨基或二硝基苯甲腈及适当醇(替代路线1)或类似的取代甲苯化合物或适当烷基胺(替代路线3)。替代路线1

本路线使用标准方法乙酰化，例如4-氨基苯甲腈(A)至化合物(B)。于4-乙酰氨基苯甲腈(B)存在下，酸性水解叔丁醇可提供合成N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺的灵活合成路线。

A                     B替代路线2

使用标准方法乙酰化廉价起始材料PABA(C)得一种生产4-乙酰氨基苯甲酰胺(D)的廉价方法。使用标准方法(SOCl₂)将(D)转成酰氯(E)及随后使用标准方法酰胺化，例如前述，可用廉价原料生产N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。

替代路线3

另一种化合物的制法始于使用标准方法乙酰化，例如对甲苯胺(F)至4-乙酰氨甲苯(G)合成中间体(G)可用常规氧化剂(例如KMnO₄)转成4-乙酰氨基苯甲酸(D)及随后转型为N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺，概述于替代路线2。

实例

下列实施例进一步说明本发明。这些实施例仅提供举例说明本发明的优选实施方案，但绝非视为限制其范围，其范围由随附的权利要求书界定。实施例1至19说明乙酰氨基苯甲酰胺及硝基-及氨基苯甲酰胺的制备，其为用于本发明的组合物及方法的苯甲酰胺化合物的代表。实施例20至24说明基于该化合物的药物组合物的制备。其后，生物试验结果示例说明本发明组合物的活性。

                         实施例1

              N-叔丁基-4-氨基苯甲酰胺的制备

叔丁胺(14.6克，0.200摩尔)于乙酸乙酯(150毫升，以5％碳酸钠溶液，饱和氯化钠溶液洗涤纯化，以无水硫酸镁干燥及通过有槽纹滤纸过滤)内搅拌及以冰浴冷却至5℃。4-硝基苯甲酰氯(18.6克，0.100摩尔)于纯乙酸乙酯(75毫升)被逐滴添加而其添加速率以将温度维持低于10℃为准。苯甲酰氯的溶液添加完成时，移开冰浴然后反应搅拌4小时。然后反应混合物于布克那漏斗过滤，滤液以5％盐酸洗三次，以饱和氯化钠洗一次，用无水硫酸镁干燥，通过有槽纹滤纸过滤，及气提去除溶剂留下白色结晶产物。产物于真空烘箱在24mm及45℃干燥14小时。此过程产生17.13克N-叔丁基-4-硝基苯甲酰胺结晶(77％产率)，mp 162-163℃。质子核磁共振光谱(89.55 MHz于CDCl₃)显示吸收位于8.257ppm(d,8.8Hz,2:3,5-芳基H)；7.878ppm(d,8.8Hz,2H:2,6-芳基H)；6.097ppm(bs,1H；N-基H)；1.500ppm(s,9H；叔丁基H)。

钯/碳(5％，75毫克)于55℃加至N-叔丁基-4-硝基苯甲酰胺(5克，22.5毫摩尔)于95％乙醇。以30分钟时间逐滴加入肼(1.2毫升)于95％乙醇(10毫升)的溶液及又加入Pd/C(75毫克)。反应回流3小时，加入肼(0.5克)于95％乙醇(5毫升)且反应又回流1小时。反应于布克那漏斗过滤，真空缩小溶剂体积且用二氯甲烷萃取。合并萃取物，用硫酸镁干燥及汽提去除溶剂，留下3.90克N-叔丁基-4-氨基苯甲酰胺(90％产率)，熔点125-127℃。90MHz质子NMR(于CDCl₃)显示吸收于7.290ppm(2H,d,8.8Hz；2.6芳基H)；6.38ppm(2H,d.8.8Hz；3.5芳基H)；5.45ppm(1H,bs；NHC=O)；3.727ppm(2H,bs；芳基-NH₂)；1.186ppm(9H,S；叔丁基H)。

实施例2

N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺的制备

乙酰氯(0.45克，5.7毫摩尔)于乙酸乙酯中(25毫升)于3℃逐滴加至N-叔丁基-4-氨基苯甲酰胺(1.0克，5.2毫摩尔)以及三乙胺(0.58克，5.7毫摩尔)于乙酸乙酯而其添加速率以将温度维持低于10℃为准。将反应温热至室温，搅拌1 小时及以5％盐酸洗涤。由丙酮再结晶获得1.08克N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(89％产率)，熔点119-121℃；90MHz质子NMR(于DMSO-d6)显示吸收于9.726ppm(1H,bs,N-H)；7.715ppm(4H,dd,4.4Hz；芳基H)；7.295ppm(1H,bs；NH)；2.844ppm(3H,S；CH₃CO)；1.448ppm(9H,s；叔丁基H)。

                       实施例3

         N-叔丁基-3-硝基苯甲酰胺，N-叔丁基-3-氨基

苯甲酰胺及N-叔丁基-3-乙酰氨基苯甲酰胺的制备

使用3-硝基苯甲酰氯替代4-硝基苯甲酰氯按实施例1的酰胺化程序进行。获得N-叔丁基-3-硝基苯甲酰胺，92％产率，熔点123-125℃。质子NMR(于CDCl₃)显示吸收于8.517ppm(2-芳基H,S,1H)；8.337ppm(4-芳基H,d,8.8Hz,1H)；8.121ppm(6-芳基H,d,6.4Hz,1H)；7.618ppm(5-芳基H,m,1H)；6.032ppm(N-H,bs,1H)；1.484ppm(叔丁基H,s,9H)。

用铁(Ⅲ)氧化物氢氧化物催化肼还原反应产生N-叔丁基-3-氨基苯甲酰胺，产率53％，熔点118-120℃。质子NMR(于CDCl₃)显示吸收于7.088ppm(4-6-芳基H,m,3H)；6.794ppm(2-芳基H,s,1H)；5.902ppm(N-H,bs,1H)；3.145ppm(芳基N-H,bs,2H)；1.458ppm(叔丁基H,s,9H)。

如实施例2所述乙酰化N-叔丁基-3-氨基苯甲酰胺获得N-叔丁基-3-乙酰氨基苯甲酰胺，75％产率，熔点194-195℃。质子NMR(于CDCl₃)显示吸收于7.778ppm(4-6芳基H,m,3H)；7.392ppm(2-芳基H,s,1H)；6.08ppm(N-H,bs,1H)；2.174ppm(乙酰基CH3,s,9H)；1.500 ppm(叔丁基H,s,9H)。

                      实施例4

              N-叔丁基-2-硝基苯甲酰胺及

           N-叔丁基-2-乙酰氨基苯甲酰胺的制备

于酰胺化步骤使用2-硝基苯甲酰氯重复实施例3的方法。如此获得N-叔丁基-2-硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-叔丁基-2-硝基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得N-叔丁基-2-乙酰氨基苯甲酰胺

                  实施例5

         N-异丙基-4-硝基苯甲酰胺及

      N-异丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺的制备

于酰胺化步骤使用4-硝基苯甲酰氯及异丙胺重复实施例3的方法。如此获得N-异丙基-4-硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-异丙基-4-硝基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得N-异丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。

                  实施例6

           N-叔戊基-4-硝基苯甲酰胺及

         N-叔戊基-4-乙酰胺基苯甲酰胺的制备

于酰胺化步骤使用4-硝基苯甲酰氯及叔戊基胺重复实施例3的方法。如此获得N-叔戊基-4-硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-叔戊基-4-硝基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得N-叔戊基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。

                      实施例7

            N-异丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺的制备

于酰胺化步骤使用4-硝基苯甲酰氯及异丁胺重复实施例3的方法。如此获得N-异丁基-4-硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-异丁基-4-硝基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得N-异丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。

                        实施例8

                N-正丁基-4-硝基苯甲酰胺及

              N-正丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺的制备

于酰胺化步骤使用4-硝基苯甲酰氯正丁胺重复实施例3的方法。如此获得N-正丁基-4-硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-正丁基-4-硝基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得N-正丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。

                       实施例9

                N-正丙基-4-硝基苯甲酰胺及

             N-正丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺的制备

于酰胺化步骤使用4-硝基苯甲酰氯正丙胺重复实施例3的方法。如此获得N-正丙基-4-硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-正丙基-4-硝基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得N-正丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。

                       实施例10

            N-1,2-二甲基丙基-4-硝基苯甲酰胺及

      N-1,2-二甲基丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺的制备

于酰胺化步骤使用4-硝基苯甲酰氯及1,2-二甲基丙基胺重复实施例3的方法。如此获得N-1,2-二甲基丙基-4-硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-1,2-二甲基丙基-4-硝基苯甲酰胺。

乙酰化胺基苯甲酰胺获得N-1,2-二甲基丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。

                       实施例11

               N-正戊基-4-硝基苯甲酰胺及

            N-正戊基-4-乙酰氨基苯甲酰胺制备

于酰胺化步骤使用4-硝基苯甲酰氯及正戊胺重复实施例3的方法。如此获得N-正戊基-4-硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-正戊基-4-硝基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得的-正戊基-4-乙酰胺基苯甲酰胺。

                      实施例12

           N-2-甲基丁基-4-硝基苯甲酰胺及

        N-2-甲基丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺制备

于酰胺化步骤使用4-硝基苯甲酰氯及2-甲基丁基胺重复实施例3的方法。如此获得N-2-甲基丁基-4-硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N--2-甲基丁基-4-硝基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得N-2-甲基丁基-4-乙酰胺基苯甲酰胺。

                实施例13

       N-正戊基-2-硝基苯甲酰胺及

    N-正戊基-2-乙酰氨基苯甲酰胺制备

于酰胺化步骤使用2-硝基苯甲酰氯及正戊胺重复实施例3的方法。如此获得N-正戊基-2-硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-正戊基-2-硝基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得N-正戊基-2-乙酰胺基苯甲酰胺。

                      实施例14

          N-叔丁基-2,3-二乙酰氨基苯甲酰胺的制备

于酰胺化步骤使用2,3-二硝基苯甲酰氯重复实施例3的方法。如此获得N-叔丁基-2,3-二硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-叔丁基-2,3-二胺基苯甲酰胺。

乙酰化胺基苯甲酰胺获得N-叔丁基-2,3-二乙胺基苯甲酰胺。

                      实施例15

       N-叔丁基-2,4-二乙酰氨基苯甲酰胺的制备

于酰胺化步骤使用2,4-二硝基苯甲酰氯重复实施例3的方法。如此获得N-叔丁基-2,4-二硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-叔丁基-2,4-二氨基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得N-叔丁基-2,4-二乙酰氨基苯甲酰胺。

                      实施例16

         N-叔丁基-2,5-二乙酰氨基苯甲酰胺的制备

于酰胺化步骤使用2,5-二硝基苯甲酰氯重复实施例3的方法。如此获得N-叔丁基-2,5-二硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-叔丁基-2,5-二氨基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得N-叔丁基-2,5-二乙酰氨基苯甲酰胺。

                       实施例17

         N-叔丁基-2,6-二乙酰氨基苯甲酰胺的制备

于酰胺化步骤使用2,6-二硝基苯甲酰氯重复实施例3的方法。如此获得N-叔丁基-2,6-二硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-叔丁基-2,6-二氨基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得N-叔丁基-2,6-二乙酰氨基苯甲酰胺。

                      实施例18

      N-叔丁基-3,4-二乙酰氨基苯甲酰胺的制备

于酰胺化步骤使用3,4-二硝基苯甲酰氯重复实施例3的方法。如此获得N-叔丁基-3,4-二硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-叔丁基-3,4-二氨基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得N-叔丁基-3,4-二乙酰氨基苯甲酰胺。

                       实施例19

         N-叔丁基-3,5-二乙酰氨基苯甲酰胺的制备

于酰胺化步骤使用3,5-二硝基苯甲酰氯重复实施例3的方法。如此获得N-叔丁基-3,5-二硝基苯甲酰胺。

以肼还原硝基苯甲酰胺获得N-叔丁基-3,5-二氨基苯甲酰胺。

乙酰化氨基苯甲酰胺获得N-叔丁基-3,5-二乙酰氨基苯甲酰胺。

                      药物组合物的制备

                           实施例20

实施例1化合物与干明胶粘合剂以约1∶2的重量比混合成干粉。添加小量硬脂酸镁作为润滑剂。混合物于压片机上成形为240-270毫克片(80-90毫克活性苯甲酰胺)。若该片剂以每日一次、每日两次或每日三次的用法给予患有HIV痴呆病人，则可减缓病人疾病的进展。

                          实施例21

实施例2化合物呈干粉与淀粉稀释剂以约1∶1的重量比混合。混合物填充入250克胶囊(125毫克活性苯甲酰胺)。若胶囊以每日一次、每日两次或每日三次的用法给予怀疑患有HIV痴呆病人，则可减慢或预防HIV痴呆的发作。

                          实施例22

实施例3化合物悬浮于增甜矫味的水介质至浓度约50毫克/毫升。若5毫升液体以每日一次、每日两次或每日三次的用法给予患有HIV痴呆病人则可减慢病人疾病的进展。

                          实施例23

实施例4化合物与干明胶粘合剂以约1∶2的重量比混合成干粉。添加小量硬脂酸镁做为润滑剂。混合物在压片机上成形为450-900毫克片(150-300毫克活性苯甲酰胺)。若该片剂以每日一次、每日两次或每日三次的用法给予患有HIV痴呆病人，则可减慢病人疾病的进展。

                          实施例24

实施例14化合物溶解于经缓冲的无菌注射用盐水介质至浓度约5毫克/毫升。若50毫升液体物料以每日一次、每日两次或每日三次的用法给予患有HIV痴呆病人，则此剂量可减慢病人疾病的进展。

可将任一种式Ⅰ化合物用于这些任一种代表性配方中，任一种配方可以任一种这些方式给药，由此治疗本说明书叙述的HIV痴呆。

                   生物试验

此等试验利用两种神经细胞培养系统测定N-叔丁基-4-乙酰胺基苯甲酰胺(“化合物Ⅰ”)逆转模拟HIV痴呆的神经毒性的效果。两种测定分析中，人类神经细胞培养既可用双层(神经元于星形细胞层上)或也可用三维空间模式(脑细胞凝集物)。使用TNF-α(100夸克/毫升)做为神经毒素，培育时间72小时。相当大量证据证实TNF-α为HIV造成痴呆的神经毒素。在患有中度HIV痴呆的AIDS病人的深部灰质中TNF-α脑浓度升高。(Achim,C,Heyes,MP,Wiley,CA(1993)AIDS脑中人类免疫缺陷病毒，免疫活化因子，和吡啶-2.3-二羧酸的定量，J Clin Invest91:2769-2775)。表达TNF-α的信使RNA于脑部的分布遵照类似模式。Wesselingh,SL,Power,C,Glass,JD,Tyor,WR et al.(1993)后天免疫缺陷症候群痴呆的脑内细胞因子信使RNA表达，Annals of Neurology,33:576-582)。Gelbard等显示HIV-1感染在带有星形细胞培养物中的单核细胞可产生足够引发神经毒性的TNF-α浓度(＞200夸克/毫升)、(Gelbard,HA,Dzenko,KA,DiLoreto.D,delCero,C,delCerro,M,Epstein,LG(1994)肿瘤坏死因子α在原始人类神经元培养物中的神经毒性作用是由活化谷胺酸AMPA受体亚型介导的：AIDS神经病理的综述，神经科学进展，15:417-422)。据报道，TNF-α可通过引发细胞程序性死亡而引起神经毒性(Selmaj,K,Raine,CS,Farocq,M,Norton.WT,Brosnan,CF(1991)细胞因子对寡树状细胞的细胞毒性。淋巴毒素诱导细胞程序性死亡，JImmunol,147:1522-1529)。近来显示gp 120通过诱导IL-6及TNF-α产生毒性。(Yeung,MC,Pulliam,L.,Lau,AS(1995)HIV包封蛋白质gp 120通过诱导白介素-6-和肿瘤坏死因子-α而对人脑细胞培养物有毒性，AIDS,9:137-143。脑凝集程序

脑细胞凝集物是由前述由怀孕中期流产组织制备的(PulliamL.,Berens,ME,Rosenblum,ML1988。神经生物学研究用正常人脑细胞凝集物，JNeurosci Res21:521-530)。简言之，怀孕16-18周人脑组织温和通过尼龙筛解离获得单-细胞。于4毫升DME(补充有0.6％葡萄糖，50毫克/毫升庆大霉素及10％FCS)中的约4×10⁷细胞分配入25毫升DeLong烧瓶中。凝集物持续旋转并于37℃于10％二氧化碳气氛下培育。2至3日后，凝集物移至50毫升烧瓶并加入5毫升补充有15％FCS的DME(交换培养基)。各烧瓶含有数千个凝集产物可随时间而取样。每隔一日更换培养基中的5毫升培养基。10-12日后，培养基中的样品取出进行组织学及台盼蓝排除分析来测定存活率。筛选样品的HIV,A,B,C型肝炎及支原体。凝集物于培养基中可保持存活约40日。于采样时区别脑细胞凝集物是鉴定它们是否表达神经细胞的标记物。脑细胞凝集物含有全部CNS细胞：约40％神经元，40％星形细胞，10％寡树状细胞于髓鞘质及10％小神经胶质。神经细胞程序性死亡根据制造商指示(Boehringher Mannbeim)通过DNA片段Elisa技术测定。神经细胞双层程序

脑凝集产物如前述制备。若干凝集物放置于多孔玻片(Nunc)的各孔内，各孔被涂有浓度20微克/毫升的CellTAK(CollaborativeResearch)。细胞于三日内由脑凝集物迁移。星形细胞形成单层，顶部具有神经元而罕见小神经胶质(小于1％)/寡树状细胞(小于1％)。培养物于一周内融合。单层可维持长达三周。细胞类型的特征是使用免疫组织化学及神经元的抗体神经元特异性烯醇酶(NSE,Dako)及鉴定星形细胞的神经胶质原纤维酸性蛋白质(GFAP,Dako)测定的。Confocal显微仪用来利用大小及形状目测检查及鉴别神经元及星形细胞。神经元存活性的测定是将经或未经不同处理的小室暴露于AO及乙基溴(EtBr)中。神经元及总细胞数目是通过AO染色及相位显微仪目测测定的。通过计算机软件计算细胞存活率是在用显微仪的同时进行的；此外，也经常伴随观察的打印数据。实验设计

实验编号      系统         TNF-α      化合物¹

                         (夸克/毫升)     (μM)

   1      神经细胞双层        0            0

                              0           100

                             100           0

                             100          100

   2      神经细胞双层         0            0

                             100           0

                             100          100

   3      脑凝集产物          0            0

                              0           100

                             100           0

                             100          100¹试验化合物为N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺结果

实验1(图1)：此乃人类神经细胞双层试验。N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺(“化合物Ⅰ”)显示相对于对照有一些毒性。TNF-α处理可产生高度细胞死亡，超过61％。N-叔丁基-4-；乙胺氨基苯甲酰胺处理可产生实质保护效果。

实验2(图2)：此试验是使用不同的脑制品的试验1重复。结果大体再现了第一次试验的结果，除TNF-α处理所得神经元毒性较低外。

实验3(图3)：本试验利用人脑凝集物。在本试验中，细胞程序性死亡是通过定量胞质组织酮相关DNA片段的免疫分析测定。试验中，N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺处理获得实质性保护效果，无论有或无TNF-α处理皆如此。图4的柱表示两份试验平均值。图中的误差柱表示单个值。物理/化学参数

研究N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺来决定物理/化学性质，其适用于本申请。获得下列结果：

                        N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺于盐酸水溶液(pH1)的        3000t_1/2(分钟)辛醇-水分配                 31

这表明N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺为亲脂性的，可由体内缓慢清除。N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺为治疗HIV痴呆特别令人感兴趣的化合物，原因为至少在大鼠中显示优良的大脑分布、生物利用率及药物学性质。N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺于胃部常见的pH下也十分稳定。N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺的脑渗透

30毫克/千克口服剂量后，由相同试验动物所得的血液及脑样品分别用于分析给药后4及8小时的N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺，结果如下：

给药后时间        平均脑浓度        平均血液浓度

  (小时)       (微克/克)±SEM     (微克/毫升)±SEM

    4             8.9±3.2             43±7.9

    8             9.1±1.7             39±4.2N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺口悬液的绝对生物利用率

N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺在大鼠中的绝对生物利用率是通过比较20毫克/千克剂量苯甲酰氨溶解于1％甲基纤维素后曲线下的面积测定的。血浓度于静脉给药后0,0.083,0.15,0.5,1,2,4,8及24小时或口服给药后0,0.5,1,2,4及8小时测定，并测量AUC。四个动物经口服给药而四个动脉经静脉给药。途径             平均AUC±SEM          绝对生物利用率

         (微克·小时·毫升^-1)静脉               252±73                   ---口服               130±33                   52％

图4表示以30mg/kg剂量给予Sprague Dawley大鼠的药物图。试验中N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺的表现t_1/2为8小时，此种t_1/2对大鼠而言很长，可预测做给予人类可采用每日一次的给药方式。剂量方案在临床上的治疗优点是很显然的。进一步脑凝集研究

进一步研究如下进行：实验编号           gp120         TNF-α       化合物¹

          (毫微克/毫升)   (毫微克/毫升)    (μM)4                   -               0            0

                -               1           0.1

                -               1           0.3

                -               1           3.05                   0               -            0

                1               -            3¹试验化合物为N-叔丁基-4-乙酰氨基甲酰胺

如下表所示，试验4显示在出乎意料的低浓度下，N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺可在人脑DNA片段凝集物中提供完整的保护，并检测由1毫微克TNF-α诱导的细胞程序性死亡。发现与剂量大小成比例。在全部试验化合物浓度下的结果通过Student t试验皆与仅使用TNF组比较有显著的统计学差异(p＜0.05)，但化合物处理组中，仅TNF±0.3μM试验化合物组与另外两处理组具有统计学意义。

                         表

                     试验4结果

试验                DNA片段             ％保护

                (吸光率±SF.n=3)

对照               0.663±0.048            --仅TNF               1.592±0.156            --TNF+0.1μM化合物¹      0.955±0.101            78TNF+0.3μM化合物¹     0.835±0.051            87TNF+3.0μM化合物¹     0.801±0.124            90

¹试验化合物为N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺

如上数据表明于约1μM及或更低浓度下可达到对程序性细胞死亡的保护。

1μM浓度的N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺的数量级为0.2微克/毫升。要在大鼠脑中达到此浓度，基于前述脑/血液比数据，仅需血浓度为1微克/毫升。若用更低剂量N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺可见一定程度的剂量比例，以6mg/kg剂量给予大鼠则于给药后24小时可达到此浓度(波谷浓度)。使用肝血流差异来观察大鼠到人体的药物清除率见Pulliam,L,Herndier,B,McGrath,MS(1991)体外纯trichosanthin(GLQ223)导致的间接HIV相关毒性的恶化，AIDS,5:1237-1242,1.5毫克/千克剂量给予人体，预测于给药后24小时可于脑部达到1μM的目标浓度，该浓度可保护不发生程序性细胞死亡。

与前述结果符合一致，N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺也提供了人脑凝集物免受1毫微克TNF-α诱导的毒性的完全保护，但所需苯甲酰胺浓度显然比阻止DNA片段的要高。数据如下：

试验             LDH释放             ％保护

              吸光率±SD(n=)

对照           0.875±0.022             --

 TNF           1.071±0.036             --TNF+0.1μM化合物¹ 1.114±0.023              0TNF+0.3μM化合物¹ 1.103±0.034              0TNF+3.0μM化合物¹ 0.864±0.028             100¹试验化合物为N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺试验5：

本试验中，N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺可提供人脑凝集物免受1毫微克gp120诱导的细胞毒性的明显保护。吸光率差异对各组皆具有统计学意义(p＜0.003)。

试验                  LDH释放            ％保护

                  吸光率±SD(n=)

对照               0.328±0.011            --

gp120              0.575±0.008            --gp120+3.0μM化合物¹   0.427±0.034           60％¹试验化合物为N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺本试验中未证实于此浓度的gp120可诱导DNA片段。试验6：使用基本如同前文测定TNF诱导导的LDH释放的步骤，用标准盒(Boehriger Mannheim)采用ELISA进行程序性细胞死亡(PCD)分析。结果如下：实验6A                     PCD对照                       0±0.359TNF                        1.18±0.759TNF-α+10.0μM化合物¹     1.5±0.125TNF-α+10.0μM化合物²     1.021±0.099TNF-α+10.0μM化合物³     0.34±0.029¹试验化合物为N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺²试验化合物为N-叔丁基-4-氨基苯甲酰胺³试验化合物为N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺实验6B                        PCD对照                          0±0.69TNF-α                                                         1.16±0.088TNF-α+10.0μM化合物¹        1.05±0.043TNF-α+10.0μM化合物²        0.567±0.026TNF-α+10.0μM化合物³        0.671±0.043¹试验化合物为N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺²试验化合物为N-叔丁基-4-氨基苯甲酰胺³试验化合物为N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺实验6C                       PCD对照                         0±0.032TNF-α                                                       0.674±0.058TNF-α+10.0μM化合物⁴       0.565±0.042⁴试验化合物为N-异丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺实验6D                       PCD对照                         0±0.018TNF-α                                                        0.0531±0.034TNF-α+10.0μM化合物⁴       0.016±0.03⁴试验化合物为N-异丙基-4-乙酰氨基苯甲酰胺

试验6A-D数据说明，多种本发明苯甲酰胺可对人脑凝集物提供保护以使其免受1毫微克TNF-α诱导的毒性，这可通过PCD分析验证。体内试验

为测定处理ADC的方法的效果，进行一系列体内生物试验。体内试验A材料及方法

N-甲基D-葡萄糖胺二硫代氨基甲酸钠(MGD)及硝酮，PBN，得自OMRFSpin Trap,Source，奥克拉荷马州奥克拉荷马市。gp120得自Intracel Corporation，麻省康桥。这些材料用于下述初步试验。

动物的处理：将Sprague-Dawley新生大鼠(第十六代)分成四组。于出生后第一天起始直到第六日，新生大鼠接受60微升下列处理的皮下注射。组1：磷酸盐缓冲液盐水(PBS)，组2：5毫微克gp120于PBS中，组3：5毫微克gp 120加PBN(50毫克/千克)于PBS中，及组4：PBN(50毫克/千克)于PBS中。大鼠每日称重并据此调整PBN的注射量。

行为评估：测定两种发育阶段所需时间经来决定给予的gp120对行为发育的副作用(如Hill等报告)及测定PBN对这些参数的可能保护作用。研究的行为参数是表面直立作用(动物以头向下放置于倾斜45度的网上，动物会翻转并爬上)。两个试验显示其为评估gp120处理引起神经病症的最敏感试验。此外，它们也可尽早地检查动物寿命(第三天进行表面直立测量，而第6日测量负趋地性)，这些测量不会干扰于动物寿命第一周结束时进行的脑部NO捕捉试验。动物于出生后第三及第四日测量表面直立所需时间(恰在接受注射前)，而于第6日(动物接受末次注射后2小时)及第7日(末次注射后20小时)测量进行负趋地性所需时间。选用来测量负趋地性的角度由45度(Hill等人施用的角度)降至35度，原因为使用的试验设备，动物无法停留在45度角的网上，并在再尝试向上翻转之前已经向下滑。体试验BN-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺对gp120诱导的行为改变的保护作用

使用PBN获得惊人的结果促成在相同试验模型中使用N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺进行初步试验。结果显示N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺有效，给出生3日后的新生动物这是从服用10mg/剂量gp 120获得的数据而证实的。N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺在给予gp 120前2小时以口服剂量35毫克/千克给药。每日持续进行N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺及gp120处理。负趋地性试验于第6天进行。处理                   负趋地性(秒)

                   末次给予gp120后3小时(第6日)载体                   8.89±3.74gp120                  18.0±13.8gp120+化合物¹         8.39±3.94化合物¹               8.56±5.11¹试验化合物为N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺

数据表明N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺具有保护作用。

Claims (14)

1．治疗HIV痴呆的药物组合物，其包括下式苯甲酰胺化合物：

其中R′为含3至5个碳原子的饱和烷基，每个R分别为-NH-CO-CH₃,-NO₂或-NH₂，及n为1或2，条件是：1)当n为1而R为位于环4位的-NO₂时，R′不为叔丁基，异丁基或丙基；2)当n为1及R为位于环2位的-NO₂时，R′不为异丁基或丙基；及3)当n为2及R′为叔丁基且两个R皆为-NO₂时，R不位于环的3及5位，及药用载体。

2．权利要求1的药物组合物，其中苯甲酰胺化合物为下式乙酰氨基苯甲酰胺：

其中R′为含3至5个碳原子的饱和烷基及n为1或2。

3．权利要求2的药物组合物，其中n为1。

4．权利要求3的药物组合物，其中R′为叔丁基。

5．权利要求3的药物组合物，其中，R′为叔戊基。

6．权利要求3的药物组合物，其中苯甲酰胺化合物为N-叔丁基-4-乙酰氨基苯甲酰胺。

7．权利要求1的药物组合物，其中载体为口服载体。

8．权利要求1的药物组合物，其中该载体为注射载体。

9．治疗HIV痴呆的方法，包括对需要此种治疗病人给予HIV痴呆复合症治疗有效量的权利要求1-8的组合物。

10．权利要求9的方法，其中给予指口服。

11．权利要求9的方法，其中给予给非肠道，

12．权利要求11的方法,其中给予指注射 。

13．权利要求9的方法，其中处理指治疗性。

14．权利要求9的方法，其中处理指预防性。

Images