CN1211278A - 多肽缀合 - Google Patents

多肽缀合 Download PDF

Info

Publication number
CN1211278A
CN1211278A CN97192294A CN97192294A CN1211278A CN 1211278 A CN1211278 A CN 1211278A CN 97192294 A CN97192294 A CN 97192294A CN 97192294 A CN97192294 A CN 97192294A CN 1211278 A CN1211278 A CN 1211278A
Authority
CN
China
Prior art keywords
molecule
conjugate
enzyme
composition
polymer support
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN97192294A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1273589C (zh
Inventor
H·比斯加德－弗兰茨
A·A·奥尔森
A·普伦托
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novozymes AS
Original Assignee
Novo Nordisk AS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novo Nordisk AS filed Critical Novo Nordisk AS
Publication of CN1211278A publication Critical patent/CN1211278A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1273589C publication Critical patent/CN1273589C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/089—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q9/00—Preparations for removing hair or for aiding hair removal
    • A61Q9/02—Shaving preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A61K8/66—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/84—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds obtained by reactions otherwise than those involving only carbon-carbon unsaturated bonds
    • A61K8/88—Polyamides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/10—Washing or bathing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q5/00—Preparations for care of the hair
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q5/00—Preparations for care of the hair
    • A61Q5/02—Preparations for cleaning the hair
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q5/00—Preparations for care of the hair
    • A61Q5/06—Preparations for styling the hair, e.g. by temporary shaping or colouring
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q5/00—Preparations for care of the hair
    • A61Q5/10—Preparations for permanently dyeing the hair
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q5/00—Preparations for care of the hair
    • A61Q5/12—Preparations containing hair conditioners
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/384—Animal products
    • C11D3/3845—Antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • C12N11/082—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
    • C12N11/087—Acrylic polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/57—Compounds covalently linked to a(n inert) carrier molecule, e.g. conjugates, pro-fragrances

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Abstract

本发明涉及具有减弱的变应原性的多肽缀合物,该缀合物包括具有与之连接的两个或两个以上多肽分子的聚合物载体分子。本发明的目的还在于提供一种用于生产所述具有减弱的变应原性的多肽缀合物的方法,含有这种具有减弱的变应原性的多肽缀合物的组合物,将所述多肽缀合物用于诸如个人护理用品和洗涤组合物中的多种工业目的的用途。

Description

多肽缀合
本发明涉及一种具有减弱的变性原性的多肽缀合物，一种用于生产所述具有减弱的变性原性的多肽缀合物的方法，含有所述具有减弱的变应原性的多肽缀合物的组合物，将所述多肽缀合物用于减弱多种工业制品的变应原性的用途，以及用于诸如个人护理用品和洗涤剂组合物中的多种目的的用途。
越来越多的多肽，包括蛋白和酶，如蛋白酶目前是用微生物以工业方法生产，以将其用于工业、家用、食品/饲料、化妆品或药品中。在某些场合下，所述多肽可以对从事生产含有这种多肽的制品的人员造成潜在的危害，并会在某种程度上对这种产品的用户，如发型师及化妆和美容制品的直接用户等造成伤害。
上述潜在危害有必要加以控制和/或消除。多肽的变性原性
一般，多肽是潜在的抗原，人体免疫系统在接触后会产生特异抗体。当获得了临床上的有益反应后，这一过程被称为“免疫”，而这一反应如果导致了超敏性，则称之为“致敏”。在首次接触时，可以引发特异B-细胞克隆的克隆筛选和扩增，这意味着保护反应或变态反应将只是后继接触时的临床表现。可将变态反应定义为由低浓度的无害物质引起的病理免疫反应。导致Ⅰ型超敏性的致敏过程的特征是生成特异IgE抗体。目前，尚不完全了解控制亚型转变的机制。
由激活的B-细胞而分泌的IgE可以结合在位于肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的Fcε受体上，其含有多种由诸如组胺的化学介体包装的胞质颗粒(J.Klein，“免疫学”，Blackwell科学出版社，伦敦，1990；E.Benjamini & S.Leskowitz“免疫学”，Wiley Liss,N.Y.1991)。
在特应性个体中，上述每一个细胞均可以有大量的IgE分子与其表面结合，在这里它们仍然可以与变应原相互作用数周时间。在与变应原接触以后，所述表面结合的IgE可以与该变应原交叉结合，可导致胞质颗粒释放到所述细胞附近，从而导致炎性变态反应。
业已证实IgE的作用与天然免疫防御系统相关，所述系统是针对寄生虫感染的，并且已证实变态反应的发生是该防御系统的不利副产品。
可以按照其接触方式对能引起由IgE介导超敏性的天然变应原进行分类：吸入型变应原(花粉、尘螨等)，摄入型变应原(奶、蛋等)；接触型变应原(如来自胶乳的变应原)和来自叮咬型昆虫(如蜜蜂、火蚁等)的变应原。气源性变应原是临床上最大的一类，突出表现为工业多肽的高潜在危险领域。
对变态反应的试验可以通过体内刺激方法进行，最常见的是通过多种体外试验进行的皮肤穿刺试验，主要是基于外周血中的IgE含量。尽管对后一领域作了大量研究，但诊断变态反应的最可靠的方法依然是体内刺激，该方法根据特定的靶器官而具有不同的灵敏度。
例如，用变应原性蛋白进行的鼻内刺激可以引起变态反应，尽管皮肤试验及放射变应原吸附测定(RAST)时特异血清IgE呈阴性(IvanRoitt，“基础免疫学”第5版，p.152和p.240,1984)。减弱多肽的变应原性
目前，是通过固定、颗粒化、涂覆或溶解工业多肽制品来避免针对所述制品而出现的变态反应，特别是避免空气传播材料的形成。总之，上述方法在处理和加工期间仍有形成粉尘或气溶胶的危险，并因而产生变态致敏的危险。
总之，仍然存在出现气溶胶形式的多肽粉尘或溶解的多肽的危险。因此，某些酶释放的发生有可能导致致敏作用和随之而来的变态反应。
克服上述问题的另一种方法是选择人源多肽，以便在诸如细菌、真菌、酵母或哺乳动物细胞培养物中生产。而且，在很多场合下不可能找到具有理想特性的人源多肽，因此，不得不考虑其它来源。所述其它来源可以是人类多肽，在其分子的一个或几个位置上有所改变，以产生所需的性能。它还可以是来自其它物种的分子，包括细菌、霉菌等。后一类的产物的每一种都具有在哺乳动物中引起免疫刺激的效力。
用于降低变应原性的另一种方法是降低蛋白分子的大小(例如，参见日本专利公开No.4,112,753,或研究公开号(Research DisclosureNo.)335,102)。不过，这种解决方案仅可用于所述蛋白的活性并不重要的场合，或是用于在该蛋白降解后仍能保持该蛋白活性的罕见场合。
已有人提出通过表位作图和随后的变应原表位的改变，用蛋白质工程方法减弱蛋白的变应原性(参见WO 92/10755(Novo NordiskA/S))。这种方法通常需要投入大量的工作和开发。
可用于减弱所述免疫系统对多肽的反应的另一种方法是“聚乙二醇化”方法，该方法包括通过共价结合将聚乙二醇(PEG)链与多肽分子连接在一起对多肽进行修饰。这种方法20年以前便已公开(例如，参见US专利4,179,337号)，但当今仅用于药用多肽。因此，其主要目的是减少免疫系统所产生的IgM和/或IgG。
图1表示通过气管内方法用1.0μg单体过氧化物酶和1.0μg葡聚糖-过氧化物酶A和B处理之后表现为酶特异阳性的Dunkin Hartley豚鼠数量，作为从处理日起算的周数的函数。
图2表示通过气管内方法用1.0μg脂酶和1.0μg葡聚糖-脂酶处理之后表现为酶特异阳性的Dunkin Hartley豚鼠的数量，作为从处理日起算的周数的函数。
图3表示通过气管内方法用1.0μg纤维素酶和1.0μg葡聚糖-纤维素酶处理之后表现为酶特异阳性的Dunkin Hartley豚鼠的数量，作为从处理日起算的周数的函数。
本发明的目的是提供具有减弱的变应原性的多肽缀合物。
可以理解的是，就多肽的工业应用而言，它主要是可引起变态反应危险的吸入变应原。因此，本发明的重要优点之一是，本发明人已解决了由变应原引起的呼吸刺激问题，而现有技术的解决方案主要涉及由证实的免疫原进行的皮肤刺激。呼吸刺激是一个更为敏感的问题。
下面将给对于理解本发明重要的几个术语下定义，因为这些术语在用于描述针对多肽的免疫系统反应时常会用到，以不清楚的形式表述，即使是很多科学家也是如此。免疫原性，抗原性和变应原性
“免疫原性”是一个比“抗原性”和“变应原性”更广义的术语，表示免疫系统对外源物质存在的反应。根据其所引发的免疫反应的类型，分别将所述外源物质称作“免疫原”、“抗原”和“变应原”。
“免疫原”是一种在进入动物和人的循环系统之后可激发免疫反应的物质。
“抗原”一词是指这样一种物质，其本身在被识别为非自身分子之后可以产生抗体。
“变应原”是一种抗原，它会因为IgE抗体的生成(在人体中，而在动物中是具有相当作用的分子)而引起变态致敏或变态反应。
上文所使用的人和动物体的“循环系统”一词在本发明的说明书中是指主要由心脏和血管组成的系统。由心脏供给用于维持血液在血管系统中循环所需的能量。循环系统的作用是作为生物的转运系统，将O2、营养物质、激素和其它对于细胞调节起着重要作用的物质转运(通过血液)到组织中。而且，由血液将CO2从组织中清除到肺部，并将残余物质清除到诸如肾脏的器官中。另外，对于体温调节和包括免疫系统在内的防御机制来说，血液起着重要作用。
在本发明的上下文中，具有“减弱的变应原性”的多肽缀合物是指相对于相应的亲代多肽分子而言，在吸入本发明的多肽缀合物时所产生的能导致变应状态的IgE(在人体中，而在特定动物中为具有相当作用的分子)显著减少。
如上文所述，至少在本发明多肽的含义范围内有必要区分通过皮肤接触由皮肤变应原介导的变态反应和通过与支气管树中的细胞结合的IgE接触而由呼吸变应原引起的变态反应，因为众所周知的事实是，即使在吸入试验中能引起变态反应，但皮肤试验仍可能呈阴性。
因此，变性原性测定可以通过吸入试验完成，在试验中比较气管内施用亲代多肽和相应的具有减弱的变应原性的本发明多肽的效果。
现有多种用于评价多肽变应原性的体外动物模型。这些模型中的一些可以提供用于人类危害评价的适当基础。合适的模型包括豚鼠模型和大鼠模型。这些模型试图根据在前述敏化动物中引发的反应鉴定呼吸变应原。根据上述模型将推定的变应原通过气管内方法导入动物体内。
合适的豚鼠品系-Dunkin Hartley品系-不是像人那样在变态反应时产生IgE。不过，它们能产生另一种类型的抗体IgG1A和IgG1B(例如，参见Prentφ,ATLA,19,p.8-14,1991)，上述抗体决定着针对包括酶在内的吸入多肽的变态反应。因此，当使用Dunkin Hartley动物模型时，IgG1A和IgG1B的相对量是衡量变应原性水平的尺度。
适于气管内接触多肽和酶的大鼠品系是Brown Norway品系。Brown Norway品系在变态反应中可产生IgE。
还可将诸如兔的其它动物用于对比研究。
在例1中所披露的本发明的惊人发现证实，相对于相应的单体过氧化物酶(Mr大约为39kDa)而言，通过气管内方法引入与葡聚糖结合的纯化野生型灰盖鬼伞(Coprinus cinerea)过氧化物酶(Mr约为1,000kDa)的变应原性减弱了。
例2和3证实，脂酶和纤维素酶的变性原性也分别减弱了。
第一方面，本发明涉及一种具有减弱的变应原性的多肽缀合物，该缀合物包括一个具有两个或两个以上与之共价结合的多肽分子的聚合物载体分子。
可以用任何方法将多肽分子与聚合物载体分子结合在一起。本领域技术人员熟知，可将多肽上的化学基团，如游离羟基、游离巯基、游离酸基、游离氨基与大量聚合物(载体)分子的羟基结合在一起。
在本发明的一种实施方案中，所述聚合物载体分子通过在二乙烯基砜的两个烯基之一之间所形成的共价键与两个或两个以上的多肽分子结合在一起。
在本发明的上下文中，“多肽”一词是指一切类型的多肽，如蛋白、酶、配体、抗体、抑制剂、受体，它可以构成一种商品的较大或较小部分。特别考虑的多肽是这样的，它作为一种商品的成分，不想使它进入人体或动物体的循环系统。
第二方面，本发明涉及一种生产具有减弱的变应原性的多肽的方法，该方法包括以下步骤：
ⅰ)激活聚合物载体分子，和
ⅱ)在适于缀合的条件下让两个或两个以上的多肽分子与所述激活的聚合物载体分子反应，和
ⅲ)封闭所述缀合物上的残余活性基团。
在本发明方法的一种优选实施方案中，将所述聚合物载体分子直接与两个或两个以上多肽分子连接或通过活性接头分子连接。
步骤ⅰ)中的聚合物载体分子的激活可以用本领域任何已知方法进行。下面将介绍上述合适连接方法的例子。
在本发明的一种实施方案中，通过二乙烯基砜将两个或两个以上的多肽分子与所述聚合物载体分子连接在一起。
本发明的第三个目的是提供含有本发明多肽缀合物的组合物。
上述组合物还可以包括多肽，如蛋白和/或酶和/或常用于下列产品中的成分：诸如洗涤剂、家庭用品、农用化学品、个人护理用品，化妆品、美容品、口腔用品、护肤和护发用品、用于处理织物的组合物、用于清洗硬表面的组合物、用于生产食品、饲料、果汁、酒和饮料的组合物、以及口服和外用药物。
上述类型产品有时被称作“工业产品”。在下文中，这一术语被用于本发明特别考虑的一类产品。
最后一方面，本发明涉及将本发明的多肽缀合物用于多种工业产品的用途，如用于个人护理用品和用于洗涤组合物。
本发明的目的是提供具有减弱的变性原性的多肽缀合物。
如上文所述，在现有技术中广为人知的是通过共价结合将一个或几个聚合物分子与诸如多肽载体分子的氨基连接使一个或几个聚合物分子与一个多肽载体分子结合。尽管业已证实用于实现这一目的的技术可以减弱免疫系统对多肽的反应，但该技术存在某些缺陷；-由于用作工业产品成分的许多多肽分子(即分子量约为10-200kDa的普通多肽分子)上的可及结合基团(如氨基)的数量有限，可以与每一个多肽载体分子缀合的聚合物分子的数量也是有限的。-由于位阻(即底物对诸如酶的多肽分子的活性位点的低可及性)，具有与每一个多肽载体分子连接的多个聚合物分子的多肽缀合物(如酶缀合物)的活性(如催化活性)与相应的亲代多肽分子相比明显降低。
本发明人业已发现，可造成两个或两个以上多肽分子与每一个聚合物载体分子结合的缀合技术可以减弱适用于工业产品的多肽分子的变性原性。
而且，所述多肽缀合物也比相应的亲代多肽分子更为稳定。
与有几个聚合物分子与每一个多肽载体分子结合的多肽缀合物相比，本发明的多肽缀合物还具有以下优点：-缀合过程所需要的过剩多肽分子的数量少于相应的将几个聚合物分子与每一个多肽载体分子缀合的现有技术中需要量，因为只需要所述多肽分子上的一个结合基团。-与现有技术中有几个聚合物分子与每一个多肽载体分子结合的多肽缀合物相比，本发明的多肽缀合物的活性(如催化活性)在更大程度上得以保留。本发明的缀合物
因此，第一方面，本发明涉及具有减弱的变应原性的多肽缀合物，该缀合物包括一个具有两个或两个以上与之共价结合的多肽分子的聚合载体分子。
可以用本领域中任何已知方法将所述两个或两个以上多肽分子与所述聚合物载体分子连接。
在本发明的一种实施方案中，所述缀合物包括一个具有一个或几个与之结合的多肽分子的聚合物载体分子，上述分子间的结合是通过二乙烯基砜的两个乙烯基团之一间所形成的共价键形成的。
所述多肽缀合物的总分子量(Mr)范围为50-40,000kDa，优选为100-1000kDa，特别是200-500kDa。
而且，本发明的缀合物有1-60，优选2-40，尤其是3-20个多肽分子与每一个聚合物载体分子结合。
将两个或两个以上不同的多肽分子与每一个聚合物载体分子连接属于本发明范畴。所述不同多肽可以表现有不同活性，如两种不同的酶活性。另外，所述多肽分子的功能也可以不同。
功能不同的多肽分子的例子包括酶分子、配体分子、抑制剂分子、受体分子和抗体分子。
另外，还可以提供具有与之结合的例如酶分子，如氧化酶和效应分子(即增强子)的缀合物。由于所述两个分子的近似性，可以得到一种十分有效的缀合物。聚合物载体分子
与所述多肽分子结合的所述聚合物载体分子可以是具有两个以上结合基团的任何聚合物。其中包括天然的或合成的均聚物，如多元醇(即多-OH)、多胺(即多-NH2)和多羧酸(即多-COOH)，还包括杂聚物，即至少具有两个不同结合基团，如羟基和胺基的聚合物。
所述合成的均聚物和杂聚物载体分子包括星形PEGs(Star-PEGs)、支化PEGs(Branched PEGs)、聚乙烯醇(PVA)、聚羧酸酯、聚-(乙烯吡咯烷酮)和聚-D,L-氨基酸。
星形PEGs是通过源于交联的二乙烯基苯核心的环氧乙烷分子的聚合而制成的多分支聚乙二醇分子(Gnanou等，(1988),Makromol.Chem.198.2885；Rein等(1993),Acta Polymer,44,225)。星形PEGs以及支化PEGs均可获自美国的Shearwater公司。
合适天然均聚物和杂聚物的例子有包括羧甲基葡聚糖在内的葡聚糖，诸如甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素和羟丙基纤维素的纤维素、脱乙酰壳多糖的水解产物，淀粉如羟乙基淀粉和羟丙基淀粉，糖原，琼脂糖，瓜耳胶，菊粉，支链淀粉，呫吨胶，角叉菜胶，果胶，藻酸等。
在本发明的一种实施方案中，所述聚合物载体分子的分子量为1-10,000kDa，优选为2-5,000kDa，尤其是5-500kDa。
要指出的是，本发明中所涉及的所有聚合物分子量均为平均分子量。多肽分子
与所述聚合物载体分子连接的多肽分子可以是任何类型的多肽分子。不过，理想的是所述多肽分子有某种类型的功能。
待按照本发明方法加以修饰的多肽可源于植物、动物或微生物，不过，优选源于诸如细菌或真菌(即源于丝状真菌或酵母)的微生物来源的多肽分子。
特别理想的多肽分子是具有抗微生物、生物学或酶促活性的蛋白。
当所述蛋白是酶时，这种酶可以选自下列一组：诸如蛋白酶、脂酶和纤维素酶、转移酶、糖酶的水解酶，诸如漆酶和过氧化物酶的氧化还原酶，或肌醇六磷酸酶。
用于工业产品中的大部分酶的分子量范围大约为4-200kDa,优选15-150kDa,特别是20-100kDa。
本发明所涉及的配体在大多数情况下的分子量范围为100-2,000Da。
本发明人业已发现，本发明酶缀合物的酶促活性基本上得以保留。
在本发明上下文中“大体上”得以保留的活性是指与其亲代未修饰的多肽分子的活性相比，其活性至少为20-30％，优选为30-40％，更优选为40-60％，较好为60-80％，更好为80-大约100％。本发明的方法
第二方面，本发明涉及一种适于大规模处理多肽分子以获得具有减弱的变应原性的多肽缀合物的方法。
根据本发明，通过以下步骤将一个或几个多肽子连接在每一个聚合物载体分子上：
ⅰ)激活所述聚合物载体分子，和
ⅱ)在适于缀合的条件下让一个或几个多肽分子与所述激活的聚合物载体分子反应，和
ⅲ)封闭所述缀合物上的残余活性基团。
在步骤ⅰ)中对聚合物载体分子的激活可以用本领域任何已知方法实现。下面将介绍这些方法的例子。聚合物载体分子的激活
激活多肽分子和缀合多肽的方法和化学在文献中作过充分介绍。常用于激活不可溶的聚合物分子的方法包括用溴化氰、高碘酸、戊二醛、双环氧化物、表氯醇、二乙烯基砜、碳化二亚胺、磺酰卤、三氯三嗪等激活官能团(参见R.F.Taylor,(1991)，“蛋白质固定化。功能及应用”，Marcel Dekker,N.Y.；S.S.Wong(1992),“蛋白质缀合和交联化学”，CRC出版社，Boca Raton；G.T.Hermanson等(1993)，“固定化亲和配体技术”，学术出版社，N.Y.)。上述一些方法涉及激活不溶性聚合物分子，但也可应用于激活可溶性聚合物分子，例如，高碘酸、三氯三嗪、磺酰卤、二乙烯基砜、碳化二亚胺等。官能团是所述聚合物分子上的氨基、羟基、硫羟基、羧基、醛或巯基，在选择激活和缀合化学时，必须考虑选择所述多肽分子上的结合基团。
也可以使用通过亲电子方法将激活的多元醇与细胞溶素上的氨基连接在一起的方法。很多用于醇的离去基团可以产生胺键。例如，可以使用诸如tresylates的烷基磺酸盐(Nilsson等(1984)，酶学方法，第104卷，Jacoby,W.B.著，学术出版社：Orlando,p.56-66；Nilsson等(1987)，酶学方法，第135卷；Mosbach,K.,著；学术出版社：Orlando,p.65-79；Scouten等(1987)，酶学方法，第135卷，Mosbach,K.，著，学术出版社：Orlando,1987；p.79-84；Crossland等，(1971),J.Amr.Chem.Soc.1971,93,p.4217-4219)，甲磺酸盐(Harris,(1985),JMS-REV.Macronol.Chem.Phys.C25,325-373；Harris等(1984),J.Polym.Sci.Polym.Chem.第22版，p.341-352)，诸如甲苯磺酸盐和对硝基苯磺酸盐的芳基苯磺酸盐。
诸如Tresyl chloride的磺酰氯，可将多种聚合物分子上的羟基有效转化为良好的离去基团(磺酸盐)，该基团在与诸如多肽链上的氨基的亲核试剂反应时可在聚合物分子和多肽分子之间形成稳定的键。除了高缀合率之外，反应条件一般是温和的(中性或弱碱性pH，以避免变性和很少或不破坏活性)，并满足多肽分子的非破坏性要求。
还可以用环氧乙烷基团和其它环氧化物基团产生胺键。
用碳酰氯将诸如多元醇的聚合物载体分子转化成氯甲酸酯，可使多肽链上的细胞溶素基产生氨基甲酸酯键。这一方案可以多种变形实施，用N-羟基-琥珀酰亚胺、咪唑、对硝基苯酚、DMAP取代氯。所述衍生物通常是通过让氯甲酸酯与需要的离去基团反应制成的。所以这些基团均可使所述多肽产生氨基甲酸酯键。
而且，可分别用异氰酸酯和异硫氰酸酯产生脲和硫脲。
可以用与上述相同的离去基团和环状imid throne由多羟基酸获得酰胺。还可以使用通过与琥珀酐的反应而获得的多羟基琥珀酸酯。因此其包括使所述缀合物更易于水解的酯基。该基团可以由N-羟基琥珀酰亚胺激活。
而且，可以引入一种特殊的接头。使用最久的接头是氰尿酰氯(Abuchowski等，(1977)，生物化学杂志，252,3578-3581；Shafer等，(1986),J.Polym.Sci.Polym.Chem.等，第24版，375-378)。
与芳族胺的聚合物载体分子连接，随后再进行重氮化，可产生一种十分活跃的重氮盐，该盐可在原位与多肽分子反应。还可以通过多元醇的吖内酯衍生物的反应产生酰胺键，从而引入另一个酰胺键。
多肽分子的氨基还可以通过氨基甲酸酯键与多元醇连接。可将赖氨酸残基用作骨架。
在一种具体实施方案中，通过以下步骤将两个或两个以上多肽分子连接在每一个聚合物载体分子上：
a)通过连接上一个活性部分激活所述聚合物载体分子，和
b)让两个或两个以上多肽分子与所述激活的聚合物载体分子反应。
在本发明的一种实施方案中，步骤a)中的激活是通过将源于二乙烯基砜的一个活性部分与其共价结合而实现的。
例如在丹麦的Immunodex K/S公司所拥有的WO 93/01498中详细披露了如何用二乙烯基砜作为结合基团，将一个或几个多肽分子缀合到每一个聚合物载体分子上。组合物
本发明还涉及含有本发明多肽缀合物的组合物。
所述组合物还可以含有多肽，如蛋白和/或酶和/或常用于下列物质中的成分：诸如洗涤剂(包括皂条)，家用制品，农用化学品，个人护理用品，如清洗制剂，例如，用于隐眼眼镜的清洗制剂，化妆品，美容品，口服和外用药物，用于处理织物的组合物，用于清洗硬表面的组合物，用于生产食品(如烘烤)的组合物，和饲料等。
作为酶的多肽的例子包括蛋白酶、脂酶、氧化还原酶、糖酶、转移酶、如转谷氨酰胺酶、抗微生物多肽和肌醇六磷酸酶。洗涤组合物
本发明的多肽缀合物，如酶缀合物通常可以是诸如洗衣洗涤组合物或洗碟洗涤组合物的洗涤组合物的一种成分。这样，所述酶在洗涤组合物中的形式可以是无尘颗粒、稳定化液体或保护酶的形式。无尘颗粒可以用诸如披露于US 4,106,991和US4,661,452(均为Novo Industri A/S所拥有)中的方法生产，并可以选择性地用本领域已知方法包衣。蜡质包衣材料的例子有平均分子量为1000-20000的聚(环氧乙烷)产物(聚乙二醇，PEG)；具有16-50个环氧乙烷单位的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中的醇含有12-20个碳原子，而且，其中有15-80个环氧乙烷单位；脂肪醇；脂肪酸；和脂肪酸的单、双和三甘油酯。在GB1483591号专利中披露了适用于流化床技术的成膜包衣材料的例子。举例来说，可以按照已建立的方法通过添加诸如丙二醇的多元醇、糖或糖醇、乳酸或硼酸稳定液体酶制剂。其它酶稳定剂为本领域所熟知。可按照披露于EP238,216中的方法制备保护酶。
本发明的洗涤组合物可以为任何常见形式，如粉剂、颗粒、糊剂或液体。液体洗涤剂可以是含水的，通常含有高达70％的水和0-30％的有机溶剂，或是无水的。
所述洗涤组合物含有一个或几种表面活性剂，其中，每一种表面活性剂可以是阴离子型的、非离子型的、阳离子型的或两性离子型的。所述洗涤剂通常含有0-50％的阴离子型表面活性剂，如直链烷基苯磺酸盐(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烷基硫酸盐(脂肪醇硫酸盐)(AS)、醇乙氧基硫酸盐(AEOS或AES)、仲链烷磺酸盐(SAS)、α-磺基脂肪酸甲酯、烷基或链烯基琥珀酸或皂。它还可以含有0-40％的非离子型表面活性剂，如醇乙氧基化物(AEO或AE)、醇丙氧基化物、羧基化醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、烷基聚糖苷、烷基二甲基氧化胺、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺、或多羟基烷基脂肪酸酰胺(例如，在WO 92/06154中所披露的)。
所述洗涤组合物还可以含有一种或几种酶，如淀粉酶、支链淀粉酶、酯酶、脂酶、角质酶、蛋白酶、纤维素酶、过氧化物酶或氧化酶，例如，漆酶，和抗微生物多肽。可以按照本发明对诸如酶的所述多肽的一种、几种或全部进行修饰(即缀合)。
通常，所述洗涤剂含有1-65％的洗涤助剂，但某些洗碟洗涤剂甚至可以含有高达90％的洗涤助剂，或配位剂，如沸石、二磷酸盐、三磷酸盐、膦酸盐、柠檬酸盐、次氮基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTMPA)、烷基-或链烯基琥珀酸、可溶性硅酸盐或层状硅酸盐(例如，购自Hoechst的SKS-6)。
所述洗涤助剂可分为含磷型和无磷型。含磷无机碱性洗涤助剂的例子包括水溶性盐，特别是碱金属焦磷酸盐、正磷酸盐、多磷酸盐和膦酸盐。无磷型无机助剂的例子包括水溶性碱金属碳酸盐、硼酸盐和硅酸盐，以及层状二硅酸盐和各种类型水不溶性结晶或非晶形硅铝酸盐，其中，已知的最著名的代表是沸石。
合适的有机助剂的例子包括琥珀酸、丙二酸、脂肪酸丙二酸、脂肪酸磺酸、羧甲氧基琥珀酸、聚乙酸、羧酸、聚羧酸、氨基聚羧酸和聚乙酰羧酸的碱金属盐、铵盐或取代铵盐。
所述洗涤剂还可以是未复配的，即，基本上没有洗涤助剂。
所述洗涤剂可以包括一种或几种聚合物。其例子有羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚羧酸酯如聚丙烯酸酯，聚马来酸酯、马来酸/丙烯酸共聚物和异丁烯酸月桂基酯/丙烯酸共聚物。
所述洗涤剂组合物可以含有氯/溴型或有氧型漂白剂。所述漂白剂可以是包衣型的或非胶囊型的。无机氯/溴型漂白剂的例子有次氯酸或次溴酸锂、钠或钙，或氯化磷酸三钠。该漂白系统还可以含有H2O2源，如过硼酸盐或过碳酸盐，它可以与诸如四乙酰亚乙基二胺(TAED)或壬酰氧基苯磺酸盐(NOBS)的成过酸漂白激活剂组合。
有机氯/溴型漂白剂的例子有杂环N-溴和N-氯酰亚胺，如三氯异氰脲酸、三溴异氰脲酸、二溴异氰脲酸和二氯异氰脲酸，及其与水溶性阳离子如钾和钠的盐。乙内酰脲化合物也适用。所述漂白系统还可以包括过氧酸，如酰胺、酰亚胺和砜型。
在洗碟洗涤剂中，优选所述有氧漂白剂，如无机过酸盐形式的漂白剂，优选使用漂白剂前体或过氧酸化合物。常见的合适过氧漂白化合物的例子有碱金属过硼酸盐的四水合物和一水合物，碱金属过碳酸盐、过硅酸盐和过磷酸盐。优选的激活剂材料有TAED或NOBS。
本发明的洗涤组合物的酶可以用常规稳定剂稳定，例如，诸如丙二醇或甘油的多元醇，糖或糖醇、乳酸，硼酸，或硼酸衍生物，如芳族硼酸酯，而且，所述组合物可以按照诸如披露于WO 92/19709和WO92/19708中的方法制备。本发明的酶还可以通过加入可逆的酶抑制剂，如披露于EP 0544777B1中的蛋白类抑制剂加以稳定。
所述洗涤剂还可以含有其它的常规洗涤剂成分，如织物调节剂，包括粘土、抗絮凝材料、泡沫促进剂/泡沫抑制剂(在洗碟洗涤剂中为泡沫抑制剂)、抑泡剂、防腐剂、污垢悬浮剂、抗污垢再沉积剂、染料、脱水剂、杀菌剂、荧光增白剂或香料。
其pH(在使用浓度下在水溶液中测定)通常为中性或碱性，例如在7-11范围内。
本发明范围内的洗衣洗涤组合物的具体形式包括：
1)制成堆积密度至少为600g/l的颗粒的洗涤组合物，其含有：
直链烷基苯磺酸盐(以酸计)         7-12％
醇乙氧基硫酸盐(例如，C12-18醇，1-2EO)或烷基硫酸盐(例如C16-18)         1-4％
醇乙氧基化物(例如，C14-15醇，7EO)         5-9％
碳酸钠(如Na2CO3)        14-20％
可溶性硅酸盐(如Na2O,2SiO2)         2-6％
沸石(如NaAlSiO4)        15-22％
硫酸钠(如Na2SO4)         0-6％
柠檬酸钠/柠檬酸(如C6H5Na3O7/C6H8O7)         0-15％
过硼酸钠(如NaBO3.H2O)        11-18％
TAED         2-6％
羧甲基纤维素         0-2％
聚合物(如马来酸/丙烯酸共聚物，PVP,PEG)         0-3％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(例如，抑泡剂、香料、荧光增白剂、光学漂白剂)         0-5％
2)制成堆积密度至少为600g/l的颗粒的洗涤组合物，其含有
直链烷基苯磺酸盐(以酸计)       6-11％
醇乙氧基硫酸盐(例如，C12-18醇，1-2EO)或烷基硫酸盐(例如，C16-18)       1-3％
醇乙氧基化物(如，C14-15醇，7EO)       5-9％
碳酸钠(如Na2CO3)       15-21％
可溶性硅酸盐(如Na2O,2SiO2)       1-4％
沸石(如NaAlSiO4)       24-34％
硫酸钠(如Na2SO4)       4-10％
柠檬酸钠/柠檬酸(如C6H5Na3O7/C6H8O7)       0-15％
羧甲基纤维素       0-2％
聚合物(例如，马来酸/丙烯酸共聚物，PVP,PEG)       1-6％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(例如，抑泡剂、香料)        0-5％
3)制成堆积密度至少为600g/l的颗粒的洗涤组合物，其含有
直链烷基苯磺酸盐(以酸计)        5-9％
醇乙氧基化物(例如，C12-15醇，7EO)        7-14％
皂，如脂肪酸(例如，C16-22，脂肪酸)        1-3％
碳酸钠(如Na2CO3)        10-17％
可溶性硅酸盐(如Na2O,2SiO2)        3-9％
沸石(如NaAlSiO4)        23-33％
硫酸钠(如Na2SO4)        0-4％
过硼酸钠(如NaBO3.H2O)        8-16％
TAED        2-8％
磷酸盐(如EDTMPA)        0-1％
羧甲基纤维素        0-2％
聚合物(例如，马来酸/丙烯酸共聚物，PVP,PEG)        0-3％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(例如，抑泡剂、香料、荧光增白剂)         0-5％
4)制成堆积密度至少为600g/l的颗粒的洗涤组合物，其含有
直链烷基苯磺酸盐(以酸计)         8-12％
醇乙氧基化物(例如，C12-15醇，7EO)         10-25％
碳酸钠(如Na2CO3)         14-22％
可溶性硅酸盐(如Na2O,2SiO2)         1-5％
沸石(如NaAlSiO4)         25-35％
硫酸钠(如Na2SO4)         0-10％
羧甲基纤维素         0-2％
聚合物(例如，马来酸/丙烯酸共聚物，PVP,PEG)         1-3％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(例如，抑泡剂、香料)         0-5％
5)含水液体洗涤组合物，其含有
直链烷基苯磺酸盐(以酸计)        15-21％
醇乙氧基化物(例如，C12-15醇，7EO或C12-15醇，5EO)        12-18％
皂，如脂肪酸(例如，油酸)        3-13％
链烯基琥珀酸(C12-14)        0-13％
氨基乙醇        8-18％
柠檬酸        2-8％
膦酸盐        0-3％
聚合物(例如，PVP,PEG)        0-3％
硼酸盐(如B4O7)        0-2％
乙醇        0-3％
丙二醇        8-14％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(例如，分散剂，抑泡剂，香料，荧光增白剂)        0-5％
6)水结构的液体洗涤组合物，其含有
直链烷基苯磺酸盐(以酸计)         15-21％
醇乙氧基化物(例如，C12-15醇，7EO，或C12-15醇，5EO)         3-9％
皂，如脂肪酸(例如，油酸)         3-10％
沸石(如NaAlSiO4)         14-22％
柠檬酸钾         9-18％
硼酸盐(如B4O7)         0-2％
羧甲基纤维素         0-2％
聚合物(例如，PEG,PVP)         0-3％
结合聚合物，如异丁烯酸十二烷基酯/丙烯酸共聚物；摩尔比25∶1；MW 3800         0-3％
甘油         0-5％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(例如，分散剂，抑泡剂，香料，荧光增白剂)         0-5％
7)制成堆积密度至少为600g/l的颗粒的洗涤组合物，其含有
脂肪醇硫酸盐         5-10％
乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺         3-9％
皂，如脂肪酸         0-3％
碳酸钠(如Na2CO3)         5-10％
可溶性硅酸盐(如Na2O,2SiO2)         1-4％
沸石(如NaAlSiO4)         20-40％
硫酸钠(如Na2SO4)         2-8％
过硼酸钠(如NaBO3.H2O)         12-18％
TAED         2-7％
聚合物(如，马来酸/丙烯酸共聚物，PEG)         1-5％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(例如，荧光增白剂，抑泡剂，香料)         0-5％
8)制成颗粒的洗涤组合物，其含有
直链烷基苯磺酸盐(以酸计)        8-14％
乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺        5-11％
皂，如脂肪酸        0-3％
碳酸钠(如Na2CO3)        4-10％
可溶性硅酸盐(如Na2O,2SiO2)        1-4％
沸石(如NaAlSiO4)        30-50％
硫酸钠(如Na2SO4)        3-11％
柠檬酸钠(如C6H5Na3O7)        5-12％
聚合物(如PVP、马来酸/丙烯酸共聚物，PEG)        1-5％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(例如，抑泡剂，香料)        0-5％
9)制成颗粒的洗涤组合物，其含有
直链烷基苯磺酸盐(以酸计)         6-12％
非离子型表面活性剂         1-4％
皂，如脂肪酸         2-6％
碳酸钠(如Na2CO3)         14-22％
沸石(如NaAlSiO4)         18-32％
硫酸钠(如Na2SO4)         5-20％
柠檬酸钠(如C6H5Na3O7)         3-8％
过硼酸钠(如NaBO3.H2O)         4-9％
漂白激活剂(如NOBS或TAED)         1-5％
羧甲基纤维素         0-2％
聚合物(例如，聚羧酸酯或PEG)         1-5％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(例如，荧光增白剂，香料)         0-5％
10)含水液体洗涤组合物
直链烷基苯磺酸盐(以酸计)         15-23％
醇乙氧基硫酸盐(例如，C12-15醇，2-3EO)         8-15％
醇乙氧基化物(例如，C12-15醇，7EO，或C12-15醇，5EO)         3-9％
皂，如脂肪酸(例如，月桂酸)         0-3％
氨基乙醇         1-5％
柠檬酸钠         5-10％
水溶助长剂(如甲苯磺酸钠)         2-6％
硼酸盐(如B4O7)         0-2％
羧甲基纤维素         0-1％
乙醇         1-3％
丙二醇         2-5％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(例如，聚合物、香料、荧光增白剂)         0-5％
11)含水液体洗涤组合物，其含有
直链烷基苯磺酸盐(以酸计)         20-32％
醇乙氧基化物(例如，C12-15醇，7EO，或C12-15醇，5EO)         6-12％
氨基乙醇         2-6％
柠檬酸         8-14％
硼酸盐(以B4O7计)         1-3％
聚合物(例如马来酸/丙烯酸共聚物，结合聚合物，如异丁烯酸月桂基酯/丙烯酸共聚物)         0-3％
甘油         3-8％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(例如，水溶助长剂、分散剂、香料、荧光增白剂)         0-5％
12)制成堆积密度至少为600g/l的颗粒的洗涤组合物，其含有
阴离子型表面活性剂(直链烷基苯磺酸盐，烷基硫酸盐、α-烯烃磺酸盐、α-磺基脂肪酸甲酯、链烷磺酸盐、皂)         25-40％
非离子型表面活性剂(例如，醇乙氧基化物)         1-10％
碳酸钠(如Na2CO3)         8-25％
可溶性硅酸盐(如Na2O,2SiO2)         5-15％
硫酸钠(如Na2SO4)         0-5％
沸石(如NaAlSiO4)         15-28％
过硼酸钠(如NaBO3.4H2O)         0-20％
漂白激活剂(TAED或NOBS)         0-5％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(如香料、荧光增白剂)         0-3％
13)如上述1)-12)的洗涤制剂，其中，全部或部分直链烷基苯磺酸盐被(C12-C18)烷基硫酸盐所替代。
14)制成堆积密度至少为600g/l的颗粒的洗涤组合物，其含有
(C12-C18)烷基硫酸盐        9-15％
醇乙氧基化物        3-6％
多羟基烷基脂肪酸酰胺        1-5％
沸石(如NaAlSiO4)        10-20％
层状二硅酸盐(例如，购自Hoechst的SK56)        10-20％
碳酸钠(Na2CO3)        3-12％
可溶性硅酸盐(如Na2O,2SiO2)        0-6％
柠檬酸钠        4-8％
过碳酸钠        13-22％
TAED        3-8％
聚合物(如，聚羧酸酯和PVP)        0-5％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(例如，荧光增白剂、光学漂白剂、香料、抑泡剂)        0-5％
15)制成堆积密度至少为600g/l的颗粒的洗涤组合物，其含有
(C12-C18)烷基硫酸盐         4-8％
醇乙氧基化物         11-15％
皂         1-4％
沸石MAP或沸石A         35-45％
碳酸钠(Na2CO3)         2-8％
可溶性硅酸盐(如Na2O,2SiO2)         0-4％
过碳酸钠         13-22％
TAED         1-8％
羧甲基纤维素         0-3％
聚合物(如，聚羧酸酯和PVP)         0-3％
包括修饰酶的酶(以纯酶蛋白计)     0.0001-0.5％
微量成分(如荧光增白剂，膦酸盐、香料)         0-3％
16)如在1)-15)中所述的洗涤制剂，其含有一种稳定化的或包胶的过酸，或者作为一种额外成分或作为已阐明的漂白系统的替代物。
17)如在1)、3)、7)、9)和12)中所述的洗涤组合物，其中，过硼酸盐为过碳酸盐所替代。
18)如在1)、3)、7)、9)、12)、14)和15)中所述的洗涤组合物，其还额外含有一种锰催化剂。例如，该锰催化剂可以是在“用于低温漂白的有效锰催化剂”一文中所坡露的化合物之一(自然，369,(1994),p.637-639)。
19)制成无水洗涤液体组合物的洗涤组合物，其含有液体非离子表面活性剂，如直链烷氧基化伯醇、助剂系统(例如，磷酸盐)、酶和碱。所述洗涤剂还可以含有阴离子型表面活性剂和/或漂白系统。
本发明范围内的洗碟洗涤组合物的具体形式包括：
1)粉状自动洗磲组合物
非离子型表面活性剂        0.4-2.5％
硅酸钠        0-20％
二硅酸钠        3-20％
三磷酸钠        20-40％
碳酸钠        0-20％
过硼酸钠        2-9％
四乙酰亚乙基二胺(TAED)        1-4％
硫酸钠        5-33％
包括修饰酶的酶     0.0001-0.5％
2)粉状自动洗碟组合物
非离子型表面活性剂(例如，醇乙氧基化物)        1-2％
二硅酸钠        2-30％
碳酸钠        10-50％
磷酸钠        0-5％
柠檬酸三钠二水合物        9-30％
次氮基三乙酸钠(NTA)        0-20％
过硼酸钠一水合物        5-10％
四乙酰亚乙基二胺(TAED)        1-2％
聚丙烯酸聚合物(例如，马来酸/丙烯酸共聚物)        6-25％
包括修饰酶的酶     0.0001-0.5％
香料        0.1-0.5％
水        5-10％
3)粉状自动洗碟组合物
非离子型表面活性剂        0.5-2.0％
二硅酸钠        25-40％
柠檬酸钠        30-55％
碳酸钠        0-29％
碳酸氢钠        0-20％
过硼酸钠一水合物        0-15％
四乙酰亚乙基二胺(TAED)        0-6％
马来酸/丙烯酸共聚物        0-5％
粘土        1-3％
聚(氨基酸)        0-20％
聚丙烯酸钠        0-8％
包括修饰酶的酶     0.0001-0.5％
4)粉状自动洗碟组合物
非离子型表面活性剂         1-2％
沸石MAP         15-42％
二硅酸钠         30-34％
柠檬酸钠         0-12％
碳酸钠         0-20％
过硼酸钠一水合物         7-15％
四乙酰亚乙基二胺(TAED)         0-3％
聚合物         0-4％
马来酸/丙烯酸共聚物         0-5％
有机膦酸盐         0-4％
粘土         1-2％
包括修饰酶的酶     0.0001-0.5％
硫酸钠         余量
5)粉状自动洗碟组合物
非离子型表面活性剂         1-7％
二硅酸钠         18-30％
柠檬酸三钠         10-24％
碳酸钠         12-20％
单过硫酸盐(2KHSO5·KHSO4·K2SO4)         15-21％
漂白稳定剂         0.1-2％
马来酸/丙烯酸共聚物         0-6％
二亚乙基三胺五乙酸，五钠盐         0-2.5％
包括修饰酶的酶     0.0001-0.5％
硫酸钠，水         余量
6)具有清洁表面活性剂系统的粉状和液体洗碟组合物
非离子型表面活性剂       0-1.5％
十八烷基二甲基胺N-氧化物二水合物       0-5％
十八烷基二甲基胺N-氧化物二水合物和十六烷基二甲基胺N-氧化物二水合物的80∶20wt.C18/C16混合物       0-4％
无水十八烷基二(羟乙基)胺N-氧化物和无水十六烷基二(羟乙基)胺N-氧化物的70∶30wt.C18/C16混合物       0-5％
平均乙氧基化度为3的C13-C15烷基乙氧基硫酸盐       0-10％
平均乙氧基化度为3的C12-C15烷基乙氧基硫酸盐       0-5％
平均乙氧基化度为12的C13-C15乙氧基化醇       0-5％
平均乙氧基化度为9的C12-C15乙氧基化醇混合物       0-6.5％
平均乙氧基化度为30的C13-C15乙氧基化醇混合物       0-4％
二硅酸钠       0-33％
三磷酸钠       0-46％
柠檬酸钠       0-28％
柠檬酸       0-29％
碳酸钠       0-20％
过硼酸钠一水合物       0-11.5％
四乙酰亚乙基二胺(TAED)       0-4％
马来酸/丙烯酸共聚物       0-7.5％
硫酸钠       0-12.5％
包括修饰酶的酶      0.0001-0.5％
7)无水液体自动洗碟组合物
液体非离子型表面活性剂(例如，醇乙氧基化物)       2.0-10.0％
碱金属硅酸盐       3.0-15.0％
碱金属磷酸盐       20.0-40.0％
选自高级二醇、聚乙二醇、多氧化物和乙二醇醚的液体载体       25.0-45.0％
稳定剂(例如，磷酸和C16-C18链烷醇的偏酯)       0.5-7.0％
泡沫抑制剂(例如，硅氧烷)       0-1.5％
包括修饰酶的酶     0.0001-0.5％
8)无水液体洗碟组合物
液体非离子表面活性剂(例如，醇乙氧基化物)       2.0-10.0％
硅酸钠       3.0-15.0％
碱金属碳酸盐       7.0-20.0％
柠檬酸钠       0.0-1.5％
稳定系统(如细碎硅氧烷和低分子量二烷基聚乙二醇醚的混合物)       0.5-7.0％
低分子量聚丙烯酸聚合物       5.0-15.0％
粘土凝胶增稠剂(如，膨润土)       0.0-10.0％
羟丙基纤维素聚合物       0.0-0.6％
包括修饰酶的酶     0.0001-0.05％
选自高级二醇、聚乙二醇、多氧化物和乙二醇醚的液体载体         余量
9)触变性液体自动洗碟组合物
C12-C14脂肪酸        0-0.5％
嵌段共聚物表面活性剂        1.5-15.0％
柠檬酸钠        0-12％
三磷酸钠        0-15％
碳酸钠        0-8％
三硬脂酸铝        0-0.1％
枯烯磺酸钠        0-1.7％
聚丙烯酸增稠剂        1.32-2.5％
聚丙烯酸钠        2.4-6.0％
硼酸        0-4.0％
甲酸钠        0-0.45％
甲酸钙        0-0.2％
氧化n-癸基二苯基二磺酸钠        0-4.0％
单乙醇胺(MEA)        0-1.86％
氢氧化钠(50％)        1.9-9.3％
1,2-丙二醇        0-9.4％
包括修饰酶的酶     0.0001-0.5％
抑泡剂、染料、香料、水         余量
10)液体自动洗碟组合物
醇乙氧基化物        0-20％
脂肪酸酯磺酸酯        0-30％
十二烷基硫酸钠        0-20％
烷基聚糖苷        0-21％
油酸        0-10％
二硅酸钠一水合物        18-33％
柠檬酸钠二水合物        18-33％
硬脂酸钠        0-2.5％
过硼酸钠一水合物        0-13％
四乙酰亚乙基二胺(TAED)        0-8％
马来酸/丙烯酸共聚物        4-8％
包括修饰酶的酶     0.0001-0.5％
11)含有保护漂白颗粒的液体自动洗碟组合物
硅酸钠        5-10％
焦磷酸四钾        15-25％
三磷酸钠        0-2％
碳酸钾        4-8％
保护漂白颗粒，如氯        5-10％
聚合增稠剂        0.7-1.5％
氢氧化钾        0-2％
包括修饰酶的酶     0.0001-0.5％
水        余量
11)如1)、2)、3)、4)、6)和10)中所述的自动洗碟组合物，其中，过硼酸盐被过碳酸盐所替代。
12)如1)-6)所述的自动洗碟组合物，其额外含有一种锰催化剂。例如，该锰催化剂可以是在“用于低温漂白的有效锰催化剂”一文中所披露的化合物之一(自然，369,(1994),p.637-639)。个人护理用途
本发明的具有减弱的变应原性的酶缀合物还可用于个人护理用品。蛋白酶
蛋白酶是众所周知的用于清洗隐形眼镜的蛋白酶。它可以水解镜片上的蛋白质污垢，并因此将其溶解。对于使用舒适感来说，蛋白污垢的清除是必须的。
蛋白酶还是皮肤清洁制品的有效成分，它可以清除死的角蛋白类表皮细胞，因而使得皮肤看上去更白、更嫩。
还可将蛋白酶用于口腔护理用品，尤其是用于清洁假牙，但也可用于牙粉中。
而且，蛋白酶可用于美容、洗浴和淋浴制品中，包括洗发水、调节剂、洗液、乳膏、皂条、美容香皂和液体皂。脂酶
可将脂酶用作皮肤清洁制品和抗痤疮制品的活性成分用于化妆品中，以清除多余的皮脂，并用于诸如乳膏和洗液的洗浴和淋浴制品中作为活性成分，用于皮肤护理。
还可将脂酶用于洗发制品中(例如洗发水)，以有效清除毛发表面的皮脂和其它脂质物质。
脂酶还是用于清洁隐形眼镜的制品的有效成分，它可以清除镜片表面的脂质沉积物。氧化还原酶
用于个人护理目的的最常见的氧化还原酶是氧化酶(常为葡糖氧化酶)，具有能确保产生H2O2的底物(如葡萄糖)，然后由过氧化物酶(常为乳过氧化物酶)将诸如SCN-或I-氧化成抗微生物剂(SCNO-或I2)。该酶复合物本身是已知的，如源于乳和唾液。
它被作为口腔护理制品(漱口水、牙粉、口香糖)的抗微生物系统加以商业化应用，其中，还可将其与淀粉葡糖苷酶混合，以产生葡萄糖。已知该系统还可用于化妆制品中，用于防腐目的。
已知含有一种氧化酶和一种过氧化物酶的组合的抗微生物系统可用于清洗隐形眼镜。
氧化还原酶的另一种用途是用氧化酶、过氧化物酶和漆酶进行氧化性毛发染色。
已知皮肤(和毛发)表面上所生成的自由基与皮肤的老化过程(毛发变坏)相关。
所述自由基可激活可导致脂肪膜、胶原和细胞破坏的链式反应。将诸如超氧化物歧化酶的自由基清除剂用于化妆品是众所周知的(R.L.Goldemberg,DCI,Nov.93,p.48-52)。
蛋白质二硫键异构酶(PDI)也是一种氧化还原酶。可将其用于烫发(waving of hair)(将毛发里的二硫键还原和再氧化)并修复受损的毛发(其中，所述损伤主要是还原现有的二硫键)。糖酶
在牙齿表面上所形成的齿斑主要是由多糖组成。这些多糖粘着在牙齿和微生物表面。所述多糖主要是α-1,6结合葡萄糖(葡聚糖)和α-1,3结合葡萄糖(齿斑葡聚糖)。诸如齿斑葡聚糖酶和葡聚糖酶的不同类型的葡聚糖酶有助于水解齿斑的粘性基质，使其易于通过机械作用清除。
在葡聚糖酶的作用下，还可以清除生成在诸如隐形眼镜上的生物膜的其它类型的生物膜。抗微生物多肽
抗微生物多肽具有广泛的用途，如用于化妆品、抗痤疮制品、除臭剂和洗发剂的防腐。这类多肽还可用于隐形眼镜制品。具体的产品配方
具体个人护理组合物的例子披露于“化妆品和美容品”(WilfriedUmbach著，Ellis Horwood有限公司出版，英格兰(1991))和“消费产品中的表面活性剂”(J.Falbe著，Spring-Verlag出版(1987))。
下面给出的是非穷举性指导配方。这些配方构成了本发明涉及的重要个人护理制品配方的概览。
 香皂
成分        例子                                          ％表面活性剂      皂(钠盐)                                     83-87螯合剂          乙二胺四乙酸                                 0.1-0.3稠度调节剂      NaCl                                         大约0.5染料                                                         ＜0.1荧光增白剂                                                   ＜0.1抗氧化剂        2,6-双(1,1-二甲基乙基)-4-甲基苯(BHT)         0.1-0.3增白剂          钛白                                         0.1-0.3芳香剂                                                       1.0-2.0酶             蛋白酶/脂酶                                   0-5水                                                           余量
合成洗涤剂
成分       例子                                            ％表面活性剂     十二烷基硫酸盐                                30-50
           十二烷基磺基琥珀酸盐                          1-12再脂化剂       脂肪醇                                        10-20增塑剂         硬脂酰单/双甘油酯                             0-10填料           淀粉                                          0-10活性剂         水杨酸                                        0-1染料                                                         ＜0.2芳香剂                                                       0-2酶             蛋白酶/脂酶                                   0-5水                                                           余量
泡沫洗液和淋浴洗液
成分           例子              ％泡沫洗液     ％淋浴洗液表面活性剂    月桂基醚硫酸盐            10-20          10-12
          可可氨丙基二甲基内铵盐    2-4            2-4
          乙氧基化脂肪酸            0.5-2          -再脂化剂      脂肪醇                    0.5-3
          乙氧基化脂肪醇            0.5-5          0-4酶            蛋白酶/脂酶               0-5            0-5
成分            例子             ％泡沫洗液  ％淋浴洗液泡沫稳定剂    脂肪酸链烷醇酰胺          0.2-2          0-4调节剂        季铵化羟丙基纤维素         -             0-0.5增稠剂        NaCl                      0-3            0-3珠光剂        硬脂酸乙二醇酯            0-2            -活性剂        植物提取物                0-1            0-1防腐剂        5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷    0.1            0.1染料                                    0.1-0.2        0.1芳香剂                                  0.3-3          0.3-2酶            蛋白酶/脂酶               0-5            0-5水                                      余量           余量
护肤霜(油包水型和水包油型)
成分            例子                ％油包水型   /水包油型乳化剂        倍半油酸脱水山梨醇酯       3-5           -
          硬脂酸铝                   1-2           -
          三乙醇胺硬脂酸酯            -            1-2
          十六烷基/十八烷酰基醇       -            1-3
          聚乙二醇醚脂肪衍生物    棕榈酸异丙酯               1-5           0-3
          十六烷基/十八烷酰基醇       -            0-2
      2-辛基十二烷醇        2-10      3-7
      硬脂酸/棕榈酸         -         0-3
      辛酸/癸酸甘油三酯     5-10      -
      硬脂酸甘油酯          -         0-5湿润剂    甘油                  1-5       1-5
      山梨醇                1-5       1-5
      多(羟基羧酸)          0.5-2     -
      丙二醇                -         0-3稳定剂    硫酸镁                0-0.8     -防腐剂    对羟基苯甲酸酯        0.2-0.4   0.2-0.4酶        蛋白酶/脂酶           0-5       0-5水                              余量      余量
用于湿性皮肤的洁体洗液(水包油型)和护肤洗液
成分                例子                    ％洁体洗液  ％护肤洗液乳化剂        十六烷基/十八烷酰基醇聚乙二醇醚   1-3          -
          单月桂酸脱水山梨醇酯              0.5-1        -
          硬脂酸钠                          -            1-2
          月桂基乙醚硫酸钠                  -            0.5-2脂肪衍生物    2-辛基十二烷醇                    1-3          0-5
          石蜡油                            -            20-25
          蜂蜡                              0.5-1        -
          硬脂酸异辛酯                      3-7          -
          棕榈酸异丙酯                      -            2-5润湿剂        甘油                              3-5          5-10
          山梨醇                            -            0-5增稠剂        聚丙烯酸酯                        0-0.3        0-1
          甲基羟丙基纤维素                  0-0.3        0-0.5防腐剂        对羟基苯甲酸酯                    0.2-0.4      0.2-0.4酶            蛋白酶/脂酶                       0-5          0-5水                                   余量      余量洗面液成分                例子                    ％表面活性剂          月桂基乙醚硫酸镁        0.2-0.5再脂化剂            己二酸二正丁酯          1-2加溶剂              蓖麻油聚乙二醇醚        0.1-1清洁和更新成分      乙醇                    0-15湿润剂              甘油                    0-5山梨醇                  0-5防腐剂              对羟基苯甲酸酯          0.2-0.4收敛剂              植物提取物              1-5抗刺激剂            泛酰醇                  0-1尿囊素                  0-0.2植物提取物              0.5-3酶                  蛋白酶/脂酶             0-5水                                          余量
洗发剂成分           例子                           ％表面活性剂    月桂基醚硫酸盐                  12-16
          可可脂肪酸氨丙基二甲基内铵盐    2-5
          脂肪酸聚乙二醇酯                0-2泡沫促进剂    脂肪酸乙醇酰胺                  0.5-2.5调节剂        季铵化羟乙基纤维素              0.4-1
          蛋白水解产物                    0.2-1再脂化剂      乙氧基化羊毛脂醇                0.2-1添加剂        抗头皮屑剂                      0-1防腐剂        5-溴-5-硝基-1,3-二噁烷          0.1-0.3珠光剂        硬脂酸乙二醇酯                  0-2染料                               ＜0.1pH调节剂        酸/碱              0.1-1芳香剂                             0.3-0.5酶              蛋白酶/脂酶        0-5水                                 余量
润发液(hair rinse)和毛发调节液成分          例子                        ％         ％
                                      润发液    毛发调节液表面活性剂    脂肪醇聚乙二醇醚            0.1-0.2    1.5-2.5
          十六烷基三甲基氯化铵        0.5-1      -
          二甲基苄基硬脂酰基氯化铵    -          0.5-1再脂化剂      十六烷基/十八烷酰基         0.5-1.5    1.5-2.5
          单/二甘油酯稠度调节剂    脂肪醇                      1-2.5      2.5-3.5增稠剂        甲基羟丙基纤维素            0.3-0.6    0.4-0.8调节剂        季铵化羟乙基纤维素          0.1-0.3    0.3-0.4防腐剂        对羟基苯甲酸酯              0.1-0.3    0.1-0.3染料                                      ＜0.1      ＜0.1pH调节剂      酸/碱                       0.1-1      0.1-1芳香剂                                    0.2-0.5    0.2-0.5酶            蛋白酶/脂酶                 0-5        0-5水                                        余量       余量
洗发液成分          例子                                   ％组分1：       碱性染色膏表面活性剂   月桂基醚硫酸盐                          1-4
         乙氧基化蓖麻油                          1-2稠度调节剂   脂肪醇                                  8-10还原剂        亚硫酸钠                 0.8-1.2缓冲液        氯化铵                   0.5-1螯合剂        1-羟基乙烷-1,1-二膦酸    0.1-0.2碱性剂        氨                       1.2-2氧化染料      显色剂                   1
          偶合剂                   1酶            漆酶                     0-5水                                     余量组分Ⅱ：      过氧化氢分散体表面活性剂    月桂基醚硫酸盐           0.5-1氧化剂        过氧化氢                 6-9稳定剂        1-羟基乙烷-1,1-二膦酸    1-1.5增稠剂        聚丙烯酸酯               3-5酶            漆酶                     0-5水                                     余量
剃须膏成分         例子                      ％皂           棕榈酸/硬脂酸             30-40
         氢氧化钾                  5-7
         氢氧化钠                  1-2脂肪成分     椰子油                    5-10
         聚乙二醇                  0-2稳定剂       四硼酸钠                  0-0.5
         硅酸钠                    0-0.5
         山梨醇                    0-3酶           蛋白酶                    0-5水                                     余量
剃须液成分                      例子              ％消毒和酚酸(phonic acid)   乙醇              40-80再脂化剂加溶剂                    己二酸二正丁酯    1-2收敛剂                    乙氧基化蓖麻油    0.5-1抗刺激剂                  植物提取物        1-10
                      泛酰醇            0-0.5稳定剂                    植物提取物        0-2
                      甘油              0-5
                      山梨醇            0-5酶                        丙二醇            0-3水                        蛋白酶            0-5
                                        余量
洗发香脂成分             例子                        ％稠度调节剂      脂肪醇                       4-5
            乙氧基化羊毛脂醇             3-6矿脂            凡士林                       45-52
            支链石蜡                     10-18抗氧化剂        2,6-双(1,1-二甲基乙基)       0.5-1
           -4-甲基苯酚(BHT)芳香剂                                       0.2-0.4染料                                         0.1酶              脂酶                          0-5软化剂          甘油                         余量
定型液(setting lotion)成分         例子                                      ％溶剂        异丙醇                                     12-20成膜成分    乙烯基吡咯烷酮/乙烯基乙酸酯共聚物          2-3.5软化剂      乙烯基吡咯烷酮/二甲基氨基乙基异丁烯酸酯    0.2-1调节剂      蛋白水解物                                 0.2-0.5抗静电剂    十六烷基三甲基氯化胺                       0.1-0.5乳化剂      乙氧基化蓖麻油                             0.1-0.5芳香剂                                                 0.1-0.2染料                                                   ＜0.1酶          脂酶                                       0-5水                                                     余量食品和饲料
另外，本发明的具有减弱的变应原性的缀合酶或多肽还可用于生产食品和饲料。蛋白酶
小麦面粉中的谷蛋白是决定面粉被用于焙烤食品中的能力的必须成分。为了将面团的谷蛋白相改性，有时需要蛋白水解酶，例如，用蛋白酶将硬质小麦面粉软化。
Neutrase是一种市售中性金属蛋白酶，可将其用于确保均匀的面团质量和面包质地，并改善风味。将谷蛋白适度地或更彻底地降解成肽，因此，为了避免面团的过度软化，必须进行严格控制。
还可将蛋白酶用于对乳蛋白进行改性。
在生产干酪时，为了让乳中的酪蛋白凝固，可以使用诸如粗制凝乳酶或凝乳酶的蛋白酶。
在酿酒业中，将蛋白酶用于酿制未发芽的谷物并控制氮含量。
在动物饲料制品中，将蛋白酶用于扩大动物的消化系统。脂酶
将脂酶应用于焙烤业是相当新颖的事物。添加脂酶可以改善面团的特性，并改善面包生产质量，体现在具有较大的体积、改善的面包瓤结构和更白的面包瓤颜色。所观察到的效果可以解释为这样一种机制：其中，在和面期间，脂酶改变了谷蛋白与某些脂质片段之间的相互作用。这样可以产生改善的谷蛋白结构。
属于某些意大利干酪类型的棕色(blue roan)干酪(如，Danablue)和其它含有乳脂肪的乳制品的风味形成取决于乳脂肪被降解成游离的脂肪酸。可将脂酶用于产生这类制品的风味。
在油类和脂肪生产业中，脂酶被用于诸如降低不希望的副产品的目的，以便通过酯交换对脂肪进行改性，并合成酯。氧化还原酶
另外，本发明具有减弱的变应原性的氧化还原酶可用于生产食品和饲料。
适用于焙烤的几种氧化还原酶为葡萄糖氧化酶、脂肪氧合酶、过氧化物酶、过氧化氢酶及其组合。通常，面包师是通过添加抗坏血酸和溴酸钾加强谷蛋白。可将某些氧化还原酶用于替代面团系统中的溴酸盐，方法是通过氧化谷蛋白中的巯基。从而形成二硫键，导致更强的、具有更大抗性的更有弹性的面团的形成。
GluzymeTM(NOVO Nordisk A/S)是具有过氧化氢酶活性的葡萄糖氧化酶制剂，可将其用于替代溴酸盐。面团筋力是通过更大的抗机械冲击力、更好的烘烤膨胀性和更大的面包体积等指标来衡量的。糖酶
面粉中淀粉酶含量的不同可导致焙烤质量的差异。为了使面粉统一，必须加入淀粉酶。淀粉酶和戊聚糖酶通常可提供用于酵母发酵的糖，改善面包体积，延缓老化，降低变陈速度，和由戊聚糖胶形成的粘度。下面将给出糖酶的例子。
某些生麦淀粉酶可用于将面包的货架寿命延长2或3天，而不会导致产品的粘性。通过从淀粉分子、低分子量糖和糊精的非还原端裂解，对糊化淀粉进行选择性改性。以这种方式改性的淀粉发生老化作用的可能性较小。所产生的低分子量是糖类可以改善焙烤食品的保水力，而不会产生可导致成品中的胶粘性的中等长度糊精。在面包焙烤期间所述酶被失活，因此，该酶可被视为不必在标签上标注的操作助剂。几乎可以排除Novamyl的过量。
用真菌α-淀粉酶可以改善面包体积，它可以进一步改善面包瓤良好而均匀的结构。所述α-淀粉酶是能产生麦芽糖、糊精和葡萄糖的内酶。高于淀粉糊化温度的温度会使谷类和某些细菌α-淀粉酶失活，因此，在加入小麦面团中时它可导致较小的面包体积和粘性面包内部。Fungamyl具有不耐热的优点，并在刚好低于糊化温度时失活。
含有若干种戊聚糖酶和半纤维素活性的酶制剂可以改善面团的加工和稳定性，并改善其新鲜度，面包瓤结构和面包体积。
通过水解面粉中的戊聚糖部分，可使其失去大部分水结合力，这部分水便可以供淀粉和谷蛋白使用。所述谷蛋白变得更有柔性和可延伸性，并使所述淀粉变得更易于糊化。可将戊聚糖酶与乳化剂组合使用或替代乳化剂。
另外，糖酶可用于由淀粉生产糖浆，它被广泛用于软饮料、甜食、肉制品、乳制品、冰淇淋、婴儿食品、果酱等。
淀粉的转化通常是分三步进行的。首先，用α-淀粉酶使淀粉液化。获得主要由寡糖和糊精构成的麦芽糖糊精。
然后用淀粉葡糖苷酶处理所述混合物，以便将所述寡糖和糊精水解成葡萄糖。这样可以得到增甜食品。如果需要高麦芽糖糖浆，可以单独使用β-淀粉酶或与支链淀粉酶(脱支酶)一起使用。
通过将葡萄糖混合物异构化成果糖可以使葡糖混合物变得更甜。
在制糖业中，加速蔗汁中淀粉的分解是常用的措施。由此降低粗糖中淀粉的含量，并有利于在精糖厂进行的过滤。
另外，可将葡聚糖酶用于分解粗糖汁和糖浆中的葡聚糖。
在制醇业中，α-淀粉酶适用于稀释蒸馏的发酵液中的淀粉。
在酿酒业中，将α-淀粉酶用于促进液化。
在乳品业中，可将β-半乳糖苷酶(乳糖酶)用于生产低乳糖乳，以供患有乳糖吸收障碍的患者使用。
当用经乳糖酶处理过的乳生产风味奶制饮料时，可以减少糖的添加量，但不会降低该制品的甜度。
在生产炼乳时，通过乳糖酶处理可避免乳糖结晶化，并因此而降低因乳糖结晶中酪蛋白凝固而造成的稠化的危险。
在用经乳糖酶处理过的乳(或乳清)生产冰淇淋时，不会产生乳糖结晶，而且不会出现缺陷、砂粒。
另外，正如在WO 94/21785(Novo Nordisk A/S)中所披露的。已知木聚糖酶可用于若干食品/饲料业目的。
将α-淀粉酶用于动物饲料业，以将其加至含有谷物的饲料中，改善淀粉的可消化性。抗微生物多肽
在肉类加工业中，可将某些细菌分解酶用于诸如清洗胴体的目的(参见美国专利US 5,354,681,Novo Industri A/S)。转移酶
本发明的具有减弱的变应原性的转谷氨酰胺酶适用于生产食品和饲料。
转谷氨酰胺酶具有交联蛋白的能力。
可将上述特性用于胶凝含有蛋白的水相。可将其用于生产涂抹食品(Novo Nordisk A/S的丹麦专利申请号1071/84)。
可将转谷氨酰胺酶用于改善面粉的烘烤品质，例如，通过对小麦面粉进行改性将其用于制成具有改进的特性的饼，如改善的风味、口劲、口感和较大的体积(参见JP1-110147)。
另外，可用于生产糊类食品材料，如用作诸如冰淇淋、糕点表面装饰物(toppings)、冷冻甜食、蛋黄酱和低脂肪涂抹食品(参见WO93/22930,Novo Nordisk A/S)。
另外，可以由乳和乳类制品制成用于酸牛乳、木斯、干酪、布丁、橙汁的凝胶，并与碎肉末结合，改善食品蛋白的口味和结构(参见WO94/21120和WO 94/21129,Novo,Nordisk A/S)。肌醇六磷酸酶
本发明的肌醇六磷酸酶适用于生产食品，如早餐谷物食品、饼、甜食、饮料、面包或汤等，以及动物饲料。
肌醇六磷酸酶可用于利用植物蛋白源中所存在的肌醇六磷酸酯/肌醇六磷酸中所结合的磷，或用于利用结合于肌醇六磷酸复合物中的有重要的营养价值的矿物质。
可将微生物的肌醇六磷酸酶加入单胃动物的饲料中，以免为这种饲料添加无机磷(参见US专利3,297,548)。
还可将肌醇六磷酸酶用于大豆加工。大豆粉可以含有高含量的抗营养因子肌醇六磷酸酯，它使得这种蛋白源不适用于婴儿食品、和鱼、牛犊和其它非反刍动物的饲料，因为肌醇六磷酸酯可以螯合其中所存在的必需矿物质(参见EP 0 420 358)。
肌醇六磷酸酶同样可用于烘烤目的，通过烘烤分割的含有小麦面粉等和肌醇六磷酸酶的面团，可以制成具有较高质量的面包(参见JP-0-3076529-A)。
已知具有高肌醇六磷酸酶活性的曲霉可用于生产精制日本清酒(参见JP-0-6070749-A)。织物应用蛋白酶
蛋白酶可用于丝绸的脱胶和砂洗。脂酶
在织物精整期间可以用脂酶清除含疏水酯的脂类物质(例如，甘油三酯)(例如，参见WO 93/13256,Novo Nordisk A/S)。氧化还原酶
在漂白清洗织物时，可以用过氧化氢酶清除过量的过氧化氢。糖酶
纤维素分解酶被广泛应用于精整粗斜布服装，以使织物的颜色密度发生局部变化(酶促“石洗”)。
还可将纤维素分解酶用于生物抛光工艺。生物抛光工艺是对纱线表面的一种特殊处理，它可以改善织物加工和外观方面的品质，而不会丧失织物的可湿性。可以用诸如披露于WO 93/20278中的方法进行生物抛光。
在纺织织物的过程中，纱线要承受相当大的机械张力。为了防止其断裂，通常要涂以(上浆)胶质物质(浆料)以将其加强。最常见的上浆剂是天然或改性形式的淀粉。只有在清除织物上的浆料之后(即脱浆)才可实现均匀而又持久的精整。优选用淀粉分解酶实现用含有淀粉或改性淀粉的浆料上浆的织物的脱浆。口服和外用药物蛋白酶
可将高度纯化的蛋白酶(例如，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶)的不同组合用于口服药物和外用药物中，以治疗诸如发炎、水肿和损伤的疾病。皮革生产转移酶
已知转谷氨酰胺酶可作为硬化剂用于皮革的酪蛋白精整(参见WO94/13839)。硬表面清洗
以食品业为例，硬表面的清洗通常是困难的，如用于生产乳制品、肉、海产品、饮料等的设备，通常具有复杂的形状。业已证实用含有酶的凝胶和泡沫形式的表面活性剂组合物可促进和改善硬表面的清洗。适于加入所述表面活性剂组合物中的酶特别是蛋白酶、脂酶、淀粉酶和纤维素酶。
所述含有酶的硬表面清洗组合物还适用于运输工具，例如，用于清洗汽车和一般车辆的清洗。
最后，本发明涉及本发明缀合物或本发明组合物在含有多肽的制品中的应用。
首先，本发明的缀合物或组合物可用于个人护理用品，如护发和毛发处理制品。其中包括例如下列产品：洗发水、香脂、毛发调理剂、烫发组合物、染发组合物、生发油、发液、发乳、洗发水、润发液和喷发剂。
其它用途是口腔护理制品，如牙粉、漱口水、口香糖。
还涉及皮肤护理用品和化妆品，如护肤霜、护肤乳、清洗霜、清洗液、清洗乳、冷霜、皂霜、营养香精、护肤洗液、乳状洗液、炉甘石洗剂、护手霜、皂粉、透明皂、防晒油、防晒剂、剃须泡沫、剃须膏、婴儿用油、口红、唇膏、乳性粉底(creamy foundation)、扑面粉、眼影粉、粉、粉底、化妆底(make-up base)、香粉、增白粉。
本发明的缀合物还适用于隐形眼镜卫生用品。所述用品包括隐形眼镜清洗和消毒用品。
还涉及在诸如清洁粉、皂、皂条、液体皂中的应用。材料和方法酶
源于野生型灰盖鬼伞的纯化过氧化物酶单体(Mr=39kDa)(购自Novo Noridsk A/S)。
脂酶：Lipolase(购自Novo Noridsk A/S)。
纤维素酶：按照Boisset，C.等所述方法(FEBS通讯，376，p.49-52,(1995))制备的Care zymecore。
葡聚糖-过氧化物酶A(由丹麦的Kem-En-Tech制备)。
葡聚糖-过氧化物酶B(由丹麦的Kem-En-Tech制备)。
葡聚糖-纤维素酶(由丹麦的Kem-En-Tech制备)。
葡聚糖-脂酶(由丹麦的Kem-En-Tech制备)。溶液
PBS Tween 20 Ausubel,F.M.等(编者),1994
兔抗山羊(Sigma A-4187)
碱性磷酸酶缓冲液(pH=9.0)
NaCl 5.844g
MgCl2,6H2O 1.02g
二乙醇胺 10.51g
用HCl将pH调至9.0，并加Milli-Q水至1升体积。终止液
EDTA，二钠74.44g
K2HPO4 174.2g
NAH3 0.2g
加Milli-Q水至1升，用大约22.5g KOH调pH至10。试验动物
Dunkin Hartley豚鼠(购自Charies River,DE)设备
ELISA读数器：Ceres 900 HDi制备抗脂酶和抗纤维素酶、抗过氧化物酶
使用白色新西兰兔。每种抗原接种2-4只兔。使用FCI(弗氏不完全佐剂)。每次注射每只兔使用50-100μg酶蛋白。为了生产单特异抗体，使用纯度很高的抗原。
在其颈部背面为每只兔注射(皮下)1ml新制备的1∶1的抗原和佐剂的稳定混合物。
每周注射一次，注射10周。
第5次免疫接种以后从所述兔采集一次血样，并在Quchtterrlony检验(Nils H Axelsen,(1983)，“凝胶免疫沉淀技术手册”，Blackwell科技出版社)当其滴度达到1/18-1/32时，抽取所述兔体内的血，并纯化抗体。用于确定IgG1阳性豚鼠的ELISA方法
分别用碳酸盐缓冲液中的兔抗过氧化物酶1∶8000、兔抗纤维素酶1∶8000和兔抗脂酶1∶6000对ELISA微量滴定板进行涂覆，并在4℃下培养过夜。次日用2％BSA对所述板进行1小时封闭，并用PBSTween 20洗涤3次。
将过氧化物酶、纤维素酶Core和脂酶加入相关的板上，其浓度为1μg酶蛋白/ml。
将所有豚鼠血清样品加至ELISA板上，对过氧化物酶使用10μl血清和90μlPBS，而将1∶50的血清稀释液用于纤维素酶和脂酶，培养1小时，并用PBS Tween 20洗涤3次。
然后将山羊抗豚鼠IgG1和0.5％BSA 1∶4000的PBS缓冲液(Nordic免疫学44-682)加至所述滴定板上，培养1小时，并用PBSTween 20洗涤。
加入用1∶8000的兔抗山羊标记的碱性磷酸酶，并培养1小时，在PBS Tween 20中洗涤2次，并用二乙醇胺洗涤1次。
在37℃下，用磷酸对硝基苯酯展开所述标记过的碱性磷酸酶30分钟，用含有EDTA的钙/钠缓冲液(pH10)终止上述过程，并用ELISA读数器在OD 405/650下读数。
在所有ELISA板上均含有双盲试验。
阳性和阴性血清值是以平均盲试值加上2倍标准偏差求出的。由此得到的精确度为95％。
所述试验在APR95255001、ED-9516670中有更完全的说明，这些资料可向Novo Nordisk A/S索取。实施例例1用修饰的过氧化物酶进行的变应原性试验
按照ED-9516670(可向Novo Nordisk A/S索取)中的说明，通过气管内剂量用1.0μg纯化的灰盖鬼伞过氧化物酶的纯化单体(豚鼠21-30)和1.0μg修饰的葡聚糖-过氧化物酶A(豚鼠31-40)和葡聚糖-过氧化物酶B(豚鼠41-50)处理Dunkin Hartley豚鼠。
在8周时间内用上述ELISA方法试验所有豚鼠的IgG1产量(表示变态反应)。
图1表示在所述试验期间表现为IgG1阳性的Dunkin Hartley豚鼠数量。
由图1可以看出，在试验期间的任何时间IgG1阳性的豚鼠数量，相对单体过氧化物酶而言，对于葡聚糖-过氧化物酶A和B均减少。这表明，通过与诸如葡聚糖的适当聚合物载体分子结合，可以减弱多肽的变应原性。例2用修饰的脂酶进行的变应原性试验
重复在例1中所述的试验，所不同的是，通过气管内方法用1μg纯化脂酶或1μg纯化的修饰脂酶刺激Dunkin Hartley豚鼠。
在10周时间内，用上述ELISA方法试验所有豚鼠的IgG1产量(指示变态反应)。
如图2所示，所述修饰的脂酶具有减弱的变应原性。例3用修饰的纤维素酶进行的变应原性试验
重复在例1中所披露的试验，所不同的是通过气管内方法用1μg纯化的纤维素酶或1μg纯化的修饰纤维素酶刺激Dunkin HartIey豚鼠。
在10周时间内用上述ELISA方法检验所有豚鼠所产生的IgG1(指示变态反应)。
如图3所示，修饰的脂酶具有减弱的变性原性。
通过以上说明本领域技术人员可以了解，在不超出本发明的构思或范围的前提下，在实施本发明时可以做出多种改变和改进。因此，本发明的范围被理解为由以下权利要求的实质限定。

Claims (45)

1．一种具有减弱的变应原性的缀合物，包括具有两个或两个以上与之相连的多肽分子的一个聚合物载体分子。
2．如权利要求1的缀合物，包括直接与所述聚合物载体分子连接的多肽分子。
3．如权利要求2的缀合物，包括通过一个接头分子与所述聚合物载体分子连接的多肽分子。
4．如权利要求3的缀合物，包括一个聚合物载体分子，该聚合物载体分子上具有通过共价键与之连接的一个或几个多肽分子，所述共价键形成于二乙烯基砜的两个乙烯基中的一个之间。
5．如权利要求1-4的缀合物，其中，所述聚合物载体分子选自由天然和合成均聚和杂聚物组成的一组。
6．如权利要求5的缀合物，其中，所述聚合物载体分子选自包括星形PEGs、支化PEGs、聚乙烯醇(PVA)、聚羧酸、聚-(乙烯基吡咯烷酮)和聚-D,L-氨基酸的合成聚合物分子。
7．如权利要求5的缀合物，其中，所述聚合物载体分子选自包括以下物质的天然聚合物分子：葡聚糖，包括羧甲基葡聚糖，和诸如甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素的纤维素，和脱乙酰壳多糖的水解产物，诸如羟乙基淀粉、羟丙基淀粉的淀粉，糖原、琼脂糖、瓜耳胶、菊粉、支链淀粉、呫吨胶、角叉菜胶、果胶和藻酸。
8．如权利要求1-7中任一项的缀合物，其中，所述多肽是一种植物蛋白、动物蛋白或诸如细菌或真菌来源的微生物蛋白。
9．如权利要求1-8中任一项的缀合物，其中，所述多肽是一种抗微生物多肽。
10．如权利要求8和9的缀合物，其中，所述多肽具有生物学活性。
11．如权利要求8-10中任一项的缀合物，其中，所述多肽是一种酶。
12．如权利要求1l的缀合物，其中，所述酶是蛋白酶、脂酶、转移酶、糖酶、氧化还原酶或肌醇六磷酸酶。
13．如权利要求11和12的缀合物，其中，所述酶的分子量(Mr)大约为4-200kDa，优选为15-150kDa，尤其是20-100kDa。
14．如权利要求1-13中任一项的缀合物，其中，所述聚合物载体分子的分子量为1-10,000kDa，优选为2-5,000kDa，尤其是5-500kDa。
15．如权利要求1-14中任一项的缀合物，其中所述缀合分子的总分子量(Mr)为50-40,000kDa，优选为100-1,000kDa，尤其是200-500kDa。
16．如权利要求1-15的缀合物，其中，每一个聚合物载体与1-60个，优选2-40个，尤其是3-20个多肽分子结合。
17．如权利要求1-16的缀合物，其中，每一个聚合物载体分子与两个或两个以上不同的多肽分子结合。
18．如权利要求17的缀合物，其中，所述多肽至少表现两种不同的活性，如酶活性。
19．如权利要求17的缀合物，包括一个或几个酶分子和一个或几个配体分子。
20．如权利要求17的缀合物，包括一个或几个抗体分子和一个或几个抑制剂分子。
21．如权利要求17的缀合物，包括一个或几个受体分子和一个或几个抗体分子。
22．一种生产具有减弱的变应原性的多肽分子的方法，包括以下步骤：
ⅰ)激活一种聚合物载体分子，和
ⅱ)在适于缀合的条件下让一种或几种多肽分子与所述激活的聚合物载体分子反应，和
ⅲ)封闭所述缀合物上的残余活性基团。
23．如权利要求22的方法，包括以下步骤：
a)通过连接上一个活性部分激活一种聚合物载体分子，和
b)让两个或两个以上的多肽分子与所述激活的聚合物载体分子反应。
24．如权利要求23的方法，其中，步骤a)中所述聚合物载体分子的激活是通过共价连接上一个源于二乙烯基砜的活性部分而实现的。
25．如权利要求22-24中任一项的方法，其中，所述聚合物载体分子是权利要求5-7所述的分子。
26．如权利要求22-25中任一项的方法，其中，所述多肽分子是权利要求8-13中任一项所述的分子。
27．如权利要求22-26中任一项的方法，其中所述聚合物载体分子通过所述多肽分子上的氨基(-NH2)、羟基(-OH)、羧酸基(-COOH)或巯基与该多肽分子连接。
28．一种组合物，包括权利要求1-21中任一项的缀合物。
29．如权利要求28的组合物，其中，该组合物还包括多肽、蛋白和/或酶和/或常用于下列物质中的成分：包括皂条的洗涤剂，家庭用品，农用化学品，个人护理用品，包括隐形眼镜清洗制剂以及皮肤和毛发清洗制剂、化妆品、美容品，诸如口服和外用药物的药物，处理织物用的组合物，清洗硬表面用的组合物，和用于生产食品和饲料的组合物。
30．将权利要求1-21中任一项所述的缀合分子和权利要求28和29所述的组合物用于减弱工业制品的变应原性的用途。
31．如权利要求30的用途，其中，所述工业制品是个人护理用品。
32．如权利要求31的用途，将其用于护发或毛发处理的制品中，如洗发水、香脂、毛发调理剂、烫发组合物、染发组合物、生发油、发液、发乳、洗发水、润发液、喷发剂。
33．如权利要求31的用途，将其用于口腔护理制品中。
34．如权利要求33的用途，将其用于牙粉、漱口水和口香糖中。
35．如权利要求31的用途，将其用于皮肤护理制品中，如护肤霜、护肤乳、清洗霜、清洗液、清洗乳、冷霜、皂霜、营养香精、护肤洗液、乳状洗液、炉甘石洗液、护手霜、皂粉、透明皂、防晒油、防晒剂、剃须泡沫、剃须膏、和婴儿用油。
36．如权利要求31的用途，将基用于化妆品中，如口红、唇膏、乳性粉底、面部粉、眼影粉、粉、粉底、化妆底、香粉、增白粉。
37．如权利要求31的用途，将其用于诸如隐形眼镜清洗和消毒制品的隐形眼镜卫生制品。
38．如权利要求30的用途，将其用于诸如洗洁粉的洗涤剂中。
39．如权利要求38的用途，将其用于液体洗涤剂中。
40．如权利要求38的用途，将其用于洗碟洗涤剂中。
41．如权利要求38的用途，将其用于皂、皂条、液体皂中。
42．如权利要求30的用途，将其用于口服和外用药物中。
43．如权利要求30的用途，将其用于包括焙烤制品的食品或饲料中。
44．如权利要求30的用途，将其用于处理织物的制品中。
45．如权利要求30的用途，将其用于清洗硬表面的组合物中。
CNB971922942A 1996-02-15 1997-02-07 多肽缀合 Expired - Fee Related CN1273589C (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK0154/96 1996-02-15
DK15496 1996-02-15

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1211278A true CN1211278A (zh) 1999-03-17
CN1273589C CN1273589C (zh) 2006-09-06

Family

ID=8090373

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB971922942A Expired - Fee Related CN1273589C (zh) 1996-02-15 1997-02-07 多肽缀合

Country Status (6)

Country Link
EP (1) EP0894128A1 (zh)
JP (1) JP2000506119A (zh)
CN (1) CN1273589C (zh)
AU (1) AU725287B2 (zh)
CA (1) CA2242488A1 (zh)
WO (1) WO1997030148A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101809136B (zh) * 2007-09-27 2013-01-16 宝洁公司 清洁和/或处理组合物

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6416756B1 (en) 1997-01-10 2002-07-09 Novozymes A/S Modified protease having 5 to 13 covalently coupled polymeric molecules for skin care
JP2002510963A (ja) * 1997-01-10 2002-04-09 ノボザイムス アクティーゼルスカブ スキンケア用酵素修飾体
US6908757B1 (en) 1998-03-26 2005-06-21 The Procter & Gamble Company Serine protease variants having amino acid deletions and substitutions
US6495136B1 (en) 1998-03-26 2002-12-17 The Procter & Gamble Company Proteases having modified amino acid sequences conjugated to addition moieties
EP1082442A1 (en) 1998-03-26 2001-03-14 The Procter & Gamble Company Serine protease variants having amino acid substitutions
US6835550B1 (en) 1998-04-15 2004-12-28 Genencor International, Inc. Mutant proteins having lower allergenic response in humans and methods for constructing, identifying and producing such proteins
US6838269B1 (en) 1998-04-15 2005-01-04 Genencor International, Inc. Proteins producing an altered immunogenic response and methods of making and using the same
US6936249B1 (en) 1998-04-15 2005-08-30 Genencor International, Inc. Proteins producing an altered immunogenic response and methods of making and using the same
US6642011B2 (en) 1998-04-15 2003-11-04 Genencor International, Inc. Human protease and use of such protease for pharmaceutical applications and for reducing the allergenicity of non-human proteins
US6468955B1 (en) 1998-05-01 2002-10-22 The Proctor & Gamble Company Laundry detergent and/or fabric care compositions comprising a modified enzyme
WO1999057250A1 (en) * 1998-05-01 1999-11-11 The Procter & Gamble Company Laundry detergent and/or fabric care compositions comprising a modified enzyme
US6638526B1 (en) 1998-06-23 2003-10-28 Novozymes A/S Polypeptides conjugated to copolymers of ethylene oxide and propylene oxide to reduce allergenicity
WO1999067370A1 (en) * 1998-06-23 1999-12-29 Novozymes A/S A polypeptide-polymer conjugate
BR9912158A (pt) * 1998-07-17 2001-04-10 Novozymes As Conjugado de polipeptìdeo-polìmero, composição industrial, uso de um conjugado, e, método para melhorar o desempenho de lavagem de um polipeptìdeo.
AU6078899A (en) * 1998-10-13 2000-05-01 Novozymes A/S A modified polypeptide with reduced immune response
US6461849B1 (en) 1998-10-13 2002-10-08 Novozymes, A/S Modified polypeptide
US7312062B2 (en) 1998-11-27 2007-12-25 Novozymes A/S Lipolytic enzyme variants
EP2716753A1 (en) * 1998-11-27 2014-04-09 Novozymes A/S Lipolytic enzyme variants
CN1399677A (zh) 1999-07-22 2003-02-26 宝洁公司 在确定表位区有氨基酸取代的枯草杆菌蛋白酶变体
US6946128B1 (en) 1999-07-22 2005-09-20 The Procter & Gamble Company Protease conjugates having sterically protected epitope regions
CA2379729A1 (en) 1999-07-22 2001-02-01 The Procter & Gamble Company Protease conjugates having sterically protected clip sites
BR0012693A (pt) 1999-07-22 2002-04-09 Procter & Gamble Variante, de protease tipo subtilisina; composição de limpeza; e composição de cuidado pessoal
DE10009252A1 (de) 2000-03-01 2001-09-06 Henkel Kgaa Wärmendes Hautreinigungsgel
DE10047481A1 (de) * 2000-09-26 2002-04-25 Henkel Kgaa Wasch- und Reinigungsmittel
ITMI20010347A1 (it) * 2001-02-21 2002-08-21 Grisotech S A Complessi di immunoglobuline e polisaccaridi per assorbimento orale etrans-mucosale
RU2311458C2 (ru) 2001-03-23 2007-11-27 Джененкор Интернэшнл, Инк. Белки, вызывающие измененную иммуногенную реакцию, и способы их получения и использования
WO2003057713A2 (en) 2001-12-31 2003-07-17 Genencor International, Inc. Proteases producing an altered immunogenic response and methods of making and using the same
DE10209821A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid
WO2003099242A1 (de) * 2002-05-29 2003-12-04 Henkel Kommanditgesellschaft Auf Aktien Kosmetische mittel mit protein-disulfidisomerase
DE10227238A1 (de) * 2002-06-19 2004-01-15 Wella Ag Hochaffine kosmetische Mittel
CN1668332A (zh) * 2002-07-09 2005-09-14 桑多斯股份公司 包含苯酚的含高浓度人生长激素的液体制剂
DE10242076A1 (de) * 2002-09-11 2004-03-25 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh HAS-Allergen-Konjugate
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
WO2005077319A2 (en) * 2004-02-12 2005-08-25 Unilever Plc Hair treatment compositions comprising a protein disulfide isomerase
EP2014406A3 (de) * 2004-11-02 2010-06-02 HID Global GmbH Verlegevorrichtung, Kontaktiervorrichtung, Zustellsystem, Verlege- und Kontaktiereinheit Herstellungsanlage, Verfahren zur herstellung und eine Transpondereinheit
WO2007123271A2 (en) * 2006-04-21 2007-11-01 Kao Corporation Composition of biofilm control agent
PT2197919E (pt) 2007-08-27 2014-07-17 Ratiopharm Gmbh Formulação líquida de conjugado de g-csf
EP2070950A1 (en) 2007-12-14 2009-06-17 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hydroxyalkyl starch derivatives and process for their preparation
WO2013093705A2 (en) * 2011-12-20 2013-06-27 Pfizer Inc. Improved processes for preparing peptide conjugates and linkers
WO2014067933A1 (en) * 2012-10-31 2014-05-08 C-Lecta Gmbh Bioactive carrier preparation for enhanced safety in care products and food

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) * 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
GB8430252D0 (en) * 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
DE3541186A1 (de) * 1985-11-21 1987-05-27 Boehringer Mannheim Gmbh Wasserloesliche, stabilisierte peroxidasederivate, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung zur bestimmung von wasserstoffperoxid
US5006333A (en) * 1987-08-03 1991-04-09 Ddi Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of superoxide dismutase coupled to high molecular weight polyalkylene glycols
US5230891A (en) * 1990-08-20 1993-07-27 Kanebo Limited Modified protease, method of producing the same and cosmetic products containing the modified protease
US5133968A (en) * 1990-08-20 1992-07-28 Kanebo, Ltd. Modified protease, method of producing the same and cosmetic products containing the modified protease
MX9704137A (es) * 1994-12-07 1997-09-30 Novo Nordisk As Polipeptidos de alergenicidad reducida.
WO1996040791A1 (en) * 1995-06-07 1996-12-19 Novo Nordisk A/S Modification of polypeptides

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101809136B (zh) * 2007-09-27 2013-01-16 宝洁公司 清洁和/或处理组合物

Also Published As

Publication number Publication date
WO1997030148A1 (en) 1997-08-21
AU725287B2 (en) 2000-10-12
CN1273589C (zh) 2006-09-06
CA2242488A1 (en) 1997-08-21
EP0894128A1 (en) 1999-02-03
JP2000506119A (ja) 2000-05-23
AU1540697A (en) 1997-09-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1273589C (zh) 多肽缀合
CN1059925C (zh) 应用ⅱ型糖苷内切酶的方法及配制剂
CN100335624C (zh) 一种被修饰多肽
CN1168694A (zh) 具有减弱的变应原性的多肽
CN1325443A (zh) 具有减弱的变应原性的糖基化蛋白
CN1027285C (zh) Ii型糖苷内切酶的应用方法
CN1052610A (zh) 应用ii型糖苷内切酶以及抗菌剂的抗菌方法及制剂
CN1163507C (zh) 蛋白酶缀合物
CN1200688C (zh) 槐糖类脂物的应用,化妆用组合物和护肤用组合物
CN1206237C (zh) 低免疫原性蛋白质变体
CN1253585A (zh) 一种用于皮肤护理的被修饰酶
US6106828A (en) Conjugation of polypeptides
CN1167503A (zh) 一种具有脂解活性的酶
CN106164236A (zh) 洗涤剂组合物
CN1662649A (zh) 具有改变的免疫原性的枯草杆菌酶和枯草杆菌酶变体
CN106164237A (zh) 洗涤剂组合物
CN1608129A (zh) 芽孢杆菌种(dsm 14392)的新型碱性蛋白酶以及包含该新型碱性蛋白酶的洗涤产品和清洁产品
CN106414698A (zh) 洗涤剂组合物
CN1606618A (zh) Bacillus gibsonii(DSM 14393)的新型碱性蛋白酶以及包含该新型碱性蛋白酶的洗涤产品和清洁产品
CN1082544C (zh) 氧化稳定的蛋白酶
CN1606619A (zh) Bacillus gibsonii (DSM 14391)的新型碱性蛋白酶以及包含该新型碱性蛋白酶的洗涤产品和清洁产品
CN1606626A (zh) 芽孢杆菌种(dsm 14390)的新型碱性蛋白酶以及包含该新型碱性蛋白酶的洗涤产品和清洁产品
CN1051299A (zh) 应用某些溶菌酶和糖苷内切酶的方法和组合物
CN1665843A (zh) 一种阳离子聚合物组合物及其在调理领域中的用途
CN1946841A (zh) 新型碱性蛋白酶以及含有该新型碱性蛋白酶的洗涤剂和清洁剂

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C53 Correction of patent of invention or patent application
COR Change of bibliographic data

Free format text: CORRECT: APPLICANT; FROM: NOVO NORDISK A/S TO: NUOWOQIMEIZI CO.,LTD.

CP03 Change of name, title or address

Address after: Denmark bagsvaerd

Applicant after: Novo Jymes A/S

Address before: The Danish Bagh division ward

Applicant before: Novo Nordisk A/S

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C17 Cessation of patent right
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20060906