CN1200403A - 蛹虫草菌高产栽培方法 - Google Patents

Abstract

本发明是一种蛹虫草菌的高产栽培方法,采用蛹草拟青霉菌种[Paecilomyces mlitaris (Kob.)Br.etSm],通过母种选育,子实体选用优质稻米加营养液合成培养基,在pH8—8.5、温度23±2℃,避光培养7—10天,菌丝长满培养基后,进行表面搔菌与温差刺激,温度降至21±2℃,散射光照射并通风保湿,经过20—25天子实体成熟,可连续采收2—4茬,成活率及出子实体率100%,生物转化率高达160%,降低成本40%以上。

Description

蛹虫草菌高产栽培方法

本发明涉及一种药用食用真菌的栽培方法，特别是蛹虫草菌高产栽培方法。

在专利号为93105056.1的专利中，公开了一种“北冬虫夏草菌人工栽培子实体的方法”，其菌种为蛹草头孢霉Cepnalosporl-um C868，由于该菌种退化现象比较严重，且培养基营养不足，不能充分满足子实体生长需要，故栽培效果不太理想，一般转化率60-70％，达不到高产的目的。

本发明的目的是提供一种选用新菌种源人工栽培蛹虫草菌的方法，采用合成培养基以达到高产的目的。

本发明的目的是这样实现的：选用蛹草拟青霉菌种[Paecilom-yces militaris(Kob.)Br.etSm]定名为Pm66，保藏号为CGMCC NO 0301，其栽培方法包括以下步骤：

1、菌种选育：将采集的野生蛹虫草菌按常规方法在无菌条件下进行菌种分离，菌种在平皿培养基中进行插片培养7天后，显微镜下观察菌丝及分生孢子形态，蛹草拟青霉特征是菌丝无色，丝状，具有隔膜，直径2微米，分生孢子梗有两种类型：一是从营养菌丝上生单根的分生孢子梗，顶端链生成迭瓦状孢子链；二是从营养菌丝上生的分生孢子梗，顶端分枝呈拟青霉状的产孢细胞，其上也链生迭瓦状孢子链，分生孢子近球形，卵圆形，单胞，无色，大小为1.5-2.5×1-2微米，将纯化后的该菌种Pm66接种到液体培养基中，在23±2℃，避光条件下静止培养2天，摇瓶培养5天，再在散射光(3000lux左右)照射下静止培养2-3天，其菌苔表面呈淡黄色，菌丝绒毛状，有凸凹不平，呈不规则的龟裂纹。

2、子实体培养：将上述选育的菌种接种到含水量55-60％的优质稻米加营养液的合成培养基中，PH8-8.5，常规灭菌后接入菌种，在洁净环境下，控制温度23±2℃，避光培养7-10天，当菌丝长满培养基后，温度降至21±2℃，给于散射光照射并通风保湿，经过20-25天，子实体成熟，肉质，橙黄色，全长5-120毫米，有的可达150毫米以上，顶端子座呈棍棒状，长30-80毫米，粗3-9毫米。

由于本发明选用了蛹草拟青霉菌种，其栽培成活率及出子实体率均达到100％，所以为稳产、高产奠定了良好的基础。因采用了优质稻米加营养液的合成培养基，在适合的温度、光照、PH等条件下栽培一次可连续采收2-4茬子实体，使生物转化率高达160％以上，从而实现了稳产、高产，显著降低成本40％以上。经中国科学院沈阳应用生态研究所及辽宁中医测试结果表明：本发明所选用的蛹草拟青霉菌种Pm66所含氨基酸总量及其它几种营养与药用成份均高于93105056.1专利中采用的蛹草头孢霉菌种的C868。所以用Pm66菌种栽培的子实体是一种更为理想的应用广泛的药品和保健品。它不仅用于治疗肺肾两虚引起的咳嗽气喘、肾虚乏力等疾病，还可用于癌症的辅助治疗，如与环磷酰胺合用，能明显抑制癌细胞生长，具有增效减毒、提高生存质量、明显延长寿命的功效。另外，由于它不含兴奋剂，对恢复运动疲劳、增强体力有明显效果。可广泛应用于运动领域。

本发明所选用的蛹草拟青霉菌种Pm66所含氨基酸总量及其它几种营养成份与药用成份均高于93105056.1专利中采用的蛹草头孢霉菌种的C868，细见下表：

Pm66与C868菌种有效成份对比项  目            Pm66               C868氨基酸种   ASP1705   ILE853    ASP1531    ILE722类与含量   THR1174   LEU1142   THP1184    LEU901(mg/100g)  SER933    TYR1157   SER1047    TYR862

       GLU3263   PHE823    GLU3120    PHE670

       GLY1146   LYS1160   GLY823     LYS962

       ALA1564   NH3245    ALA1256    NH3627

       CYS154    HIS385    CYS微量    HIS370

       VAL1210   APG1242   VAL1063    APG1104

       MET134    PRO1072   MET852     PRO772氨基酸          19,362      17,866总量(mg/100g)虫草多糖        13.2        3.1(mg/g)有机锗          4.157       0.030(PPM/g)SOD(鲜品)       154.5       54(U/mg蛋白)虫草素          0.23        0.15(纯品)(％)维       VA     1.25        0.347生(mg/g)VB1     0.182       0.130素

Pm66菌种与C868菌种显微镜形态比较：

图1是蛹草拟青霉Pm66显微观察菌丝及分生孢子形态。

图2是蛹草头孢霉C868显微观察菌丝及分生孢子形态。

根据图1-2显微观察结果表明，蛹草拟青霉Pm66的菌丝粗壮、清晰，分生孢子呈迭瓦状孢子链。而头孢霉C868的菌丝细弱，不清晰，分生孢子团聚呈头状。二者的菌丝有明显差异，因此其栽培成活率及出子实体率大不相同。

Pm66菌种与C868菌种栽培效果比较

                   Pm66    C868

出草率(％)         100    70-80

最高生物效率(％)   160    90-100

下面结合实施例对本发明作详细说明：

实施例1

将采集的野生蛹虫草菌按常规方法在无菌条件下进行菌种分离，然后将菌种接种在平皿培养基中，插入盖玻片，在23±2℃温度下培养7天，显微镜观察菌丝及分生孢子形态，符合蛹草拟青霉特征的即为Pm66纯菌种。该母种培养基为：胡萝卜汁10％、土豆汁10％、蔗糖3％、天门冬酰胺0.1％、氯化钾0.05％、硫酸镁0.05％、硫酸铁0.001％、硝酸钠0.05％、磷酸二氢钾0.1％、琼脂2％、PH7-7.5。

实施例2

将上述母种取豆粒大小的菌丝块接种到液体培养基中，在23±2℃，避光条件下，静止培养2天，然后摇瓶振荡5天，再在散射光(3000lux左右)照射下，静止培养2-3天，观察菌丝状态，由白色转为淡黄色，表面菌苔呈绒毛状，有凸凹不平，呈不规划的龟裂纹。此为优选栽培菌种。其液体培养基除不含琼脂外，其它成份同实施例1培养基。

实施例3

在500毫升广口玻璃瓶中装入优质稻米50克，填加含胡萝卜汁10％、土豆汁10％、蔗糖2％、蛋白胨0.5％、磷酸二氢钾0.3％、硫酸镁0.15％、活性氨基酸0.2％的营养液、二氧化锗0.01％的营养液40-60毫升，使培养基含水量为55-60％，调PH8-8.5，封口灭菌，1.5公斤/平方厘米灭菌50分钟，然后接种例2栽培菌种3-4毫升，在23±2℃，避光条件下，培养7-10天，当菌丝长至培养基表面90％，用散射光(3000lux左右)照射，当菌丝长满培养基表面，进行表面搔菌及温差刺激(5-7℃、3-4天)，促进子实体大量生成，并使其生长整齐、一致，为高产、稳产打下基础。瓶口覆盖一层细孔膜，控制温度在21±2℃，空气相对湿度80-90％，每天通风3-4次，每次20-30分钟，经过10天左右，长出橙黄色或橙红色子实体。

实施例4

当虫草子实体长出2厘米左右时喷施0.2％活性氨基酸液，促使子实体粗壮，长至10厘米左右时，去掉封口膜，喷施1％蔗糖水，瓶口套上塑料薄膜筒，上盖细孔薄膜，使子实体向上生长至15厘米以上。经过20-25天，子实体成熟即可采收。

实施例5

采收一茬子实体后，整理好料面，加入营养液10-20毫升，在23±2℃避光条件下，10天左右给于散射光照射，温度降至21±2℃，约20天左右，第二茬子实体即可采收，同样方法还可采收第三茬、第四茬子实体。

Claims (6)

1、一种蛹虫草菌高产栽培方法，其特征是选用蛹草拟青霉菌种[Pae-ciomyces mlitaris(Kob.)Br.etSm]定名为Pm66，保藏号为CGMCC NO 0301，其栽培方法包括以下步骤：

(1)、菌种选育；将采集的野生蛹虫草菌按常规方法在无菌条件下进行菌种分离，菌种在平皿培养基中进行插片培养7天后，显微镜下观察菌丝及分生孢子形态，蛹草拟青霉特征是菌丝无色，丝状，具有隔膜，直径2微米，分生孢子梗有两种类型：一是从营养菌丝上生单根的分生孢子梗，顶端链生成迭瓦状孢子链；二是从营养菌丝上生的分生孢子梗，顶端分枝呈拟青霉状的产孢细胞，其上也链生迭瓦状孢子链，分生孢子近球形，卵圆形，单胞，无色，大小为1.5-2.5×1-2微米，将纯化后的该菌种Pm66接种到液体培养基中，在23±2℃，避光条件下静止培养2天，摇瓶培养5天，再在散射光(3000lux左右)照射下静止培养2-3天，其菌苔表面呈淡黄色，菌丝绒毛状，有凸凹不平，呈不规则的龟裂纹。

(2)、子实体培养：将上述选育的菌种接种到含水量55-60％的优质稻米加营养液的合成培养基中，PH8-8.5，常规灭菌后接入菌种，在洁净环境下，控制温度23±2℃，避光培养7-10天，当菌丝长满培养基后，温度降至21±2℃，给于散射光照射并通风保湿，经过20-25天，子实体成熟，肉质，橙黄色，全长5-120毫米，有的可达150毫米以上，顶端子座呈棍棒状，长30-80毫米，粗3-9毫米。

2、根据权利要求1所述的方法，其特征是在子实体长出前要及时进行表面搔菌，并进行昼夜温差刺激(5-7℃、3-4天)。

3、根据权利要求1所述的方法，其特征是在子实体长至2厘米左右时，喷施0.2％活性氨基酸营养液，可促使子实体粗壮。

4、根据权利要求1所述的方法，其特征是当子实体长至10厘米时，再喷施1％蔗糖水，瓶口套上塑料薄膜筒，上盖微孔膜，子实体可长至15厘米以上。

5、根据权利要求1所述的方法，其特征是采收一茬子实体后，整理好料面，每瓶加营养液10-20毫升，在相同条件下培养20天左右后可采收第二茬子实体，同样方法还可采收第三茬子实体或第四茬子实体。

6、根据权利要求1和3所述的方法，其特征是营养液配方为：胡萝卜汁10％、土豆汁10％、蔗糖2％、蛋白胨0.5％、磷酸二氢钾0.3％、硫酸镁0.15％、活性氨基酸0.2％、二氧化锗0.01％、。

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