CN1197564C - 海狗油在制备治疗脂代谢紊乱药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及的是将海狗油作为制备治疗脂代谢紊乱(高血脂)药的应用，研究人员发现，将本发明所述的海狗油在2.2-8.6ml/kg口服剂量下，连续灌胃给药，对高脂饲料导致的大鼠、家兔的脂代谢紊乱(高血脂)，可明显降低其血清胆固醇、甘油三酯(TG)水平，升高HDL水平，从而证实将所述的海狗油作为药的情形下，在较大剂量时有明显的治疗脂代谢紊乱(高血脂)的作用。
Description
技术领域
本发明涉及的是将海狗油作为制备治疗脂代谢紊乱(高血脂)药物中的应用，具体地讲，本发明涉及的是将海狗油作为制备治哺乳动物以及人的治疗脂代谢紊乱(高血脂)药的应用。
背景技术
众所周知，糖尿病、肝病、前列腺、高血脂等疾病的患者数量是很巨大的，而实际应用中，具有特别明显效果而几乎没有副作用的药物却很难确认。
通常认为，爱斯基摩人和日本沿海渔民患此类疾病的患者数量比一般人群要明显的低，研究人员相信这种现象和与他们食用富含不饱和脂肪酸的海狗肉、油有关。
但是，至今并未有具体动物实验或者临床结果加以证明。
在本发明中所述的海狗通常是指生活纽芬兰、北大西洋地区、北极的一种哺乳动物，它们体内脂肪中不饱和脂肪酸含量高达25％，而且其分子结构与人体内的脂肪酸分子结构相似。
本发明所述的海狗油(又称海豹油)是指由上述海狗的皮下脂肪提炼而成的纯天然产品。
研究结果表明，海狗油中含有大量的人体必需的体内不能自行合成的ω-3系长碳链多烯不饱和脂肪酸以及少量的角鳖烯(SPUALENE)。
发明内容
本发明的目的在于提供一种将海狗油作为制备治疗脂代谢紊乱(高血脂)药的应用。
本发明的药理学实验采用的海狗油为海狗体内提取而成的微黄色油状液体，由加拿大的大西洋卫生食品有限公司以软胶囊(0.5g/粒)方式提供，批号为11656，所述的海狗油在实验室采用室温保存。
为了进一步明确上述海狗油的成份和含量，以下对本发明所使用的海狗油的成份进行分析和确认。
现有技术已经表明，从海狗油中提取的ω-3系多烯不饱和脂肪酸的化学主成份为EPA、DHA和DPA，其中：
EPA是指二十碳五烯酸；
DPA是指二十二碳五烯酸；
DHA是指二十二碳六烯酸；
本发明的研究人员对上述获得的海狗油进行紫外吸收光谱、红外吸收光谱、气相色谱、气-质联用色谱等项目的测定，对所述样品的化学结构进行了确认，具体如下：
本发明采用的海狗抽样品的检测结果是：
(1)紫外吸收光谱
用氯仿(分析纯)把样品配成5.9mg/ml溶液后进行全波长紫外扫描，所使用的仪器的型号是U-3210spectrophotometer(Japan制造)；参见附图1，其结果表明样品在249.8nm处有最大吸收，可以证明样品中含有大量的不饱和键；
(2)红外吸收光谱
参见附图2，其结果表明，在3010cm-1和1745cm-1处的强吸收分别是不饱和＝C-H和＞C＝O伸缩振动的特征吸收；1655cm-1处的弱吸收符合顺式双键(R1-C＝C-R2)的伸缩振动特征吸收(1665-1635cm-1，反式为1675-1665cm-1)，H/ \H722cm-1处的吸收峰符合顺式双键＝C-H弯曲振动的特征吸收(730-665cm-1，反式为980-960cm-1)。
综合红外和紫外光谱分析，可以认为样品中主要为顺式非共轭脂肪酸。
(3)气相色谱
在本项检测中，采用的标准品由SIGMA公司提供，分别为：
Cis-5，8，11，14，17-EICOSAPENTAENOIC ACID METHYL ESTER，二十碳五烯酸甲酯；
Cis-4，7，10，13，16，19-DOCOSAHEXAENOIC ACID ETHYL ESTER，二十二碳六烯酸乙酯；
Cis-7，10，13，16，19-DOCOSAPENTAENOIC ACID METHYL ESTER，二十二碳五烯酸甲酯；
样品为上述获得的海狗油，用GC法分析脂肪酸需要将其乙酯化以利气化，具体是取所述的样品80μl，加0.5ml/l的NaOH-乙醇液1ml，充N2，加塞，于50摄氏度水浴中振摇至小油滴完全消失，加三氟化硼乙醇液1.5ml。混合均匀，于50度水浴中放5min，取出冷却，加正庚烷1ml、饱和NaCl为2ml混合均匀，分层。取上层液于另一试管中，加少量无水NA2SO4，充N2，于4度放置待GC分析。
所使用的仪器为HP6890；
气相色谱条件：玻璃充填柱2m×3mm，10％DEGS酸洗，101白色担体，载气N2，流速25ml/min，检测器FID，柱温180度，气化室210度，检测器270度，进样量1ul。
将标准品用正己烷定容，配置成2.5mg/ml溶液，精密量取1ul进行气相含量测定，同样的方法对样品进行测定，结果是样品和对照品的保留时间一致。
可参见附图3-7。
(4)气-质联用法
采用的仪器为美国Trace 2000GC/Trace MS型气-质联用仪，所有试剂均为分析纯。
实验条件为：
气相色谱条件：PEG-20M玻璃毛细管柱(2m×0.32mm)；柱温40度保持1min，以10度/min升温至200度，保持5min，再以30度/min升温至210度，保持2min；载气N2，柱前压3.0kpa，分流比1∶30，进样口温度250度；离子源温度250度，电离电压70Ev，质量扫描范围350AmU.S-1；进样量1ml。
经质谱图分析，确定样品和标准品的分子量相符。
至此，对本发明采用的海狗油的分子量、成份、含量和结构已经得到确认。
实验例一
本实验例是采用高脂饲料致大鼠脂代谢紊乱模型检验本发明所述的海狗油对大鼠脂代谢紊乱的效果，对海狗油在2.2ml/KG剂量下连续灌胃二周的药效学作用进行了观察，结果发现，该药可使大鼠血清总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平明显降低，HDL水平明显升高，LDL+VLDL水平明显下降，使肝组织中胆固醇水平明显下降，说明该药有明显的降血脂及减肝脂作用。
试验材料：
(1)海狗油，为海狗体内提取而成的微黄色油状液体，山大西洋食品公司生产，本实验室室温保存，试验时按150g体重灌胃1.2ml(高剂量使用原液)或1ml(中、低剂量使用稀释药液)。
(2)阳性对照药，为脂必妥(0.35g/征片)，1.05g.Kg灌胃，1ml/只.批号20001024，成都地奥九泓制药厂。
(3)高脂饲料：4％胆固醇+10％猪油+0.2％丙基硫氧嘧啶+86％混合饲料；其中：胆固醇(普通型)由北京奥星生物技术有限责任有限公司生产销售；丙基硫氧嘧啶由第二军医大学朝晖制药厂提供(批号是990504)；橄榄油由北京芳草医药化工研制公司提供(批号是980428)
(4)试验动物，为清洁级wister大鼠，体重140-160g，动物合格证号：京动许字(2000)第012号，中国药品生物制品检定所实验中心提供。实验前观察两天，选健康、活泼的动物用于试验。
方法：取健康大鼠，按体重随机分组，每组8只
i.空白对照组：口服新鲜水1ml/只；
ii.溶剂对照组：口服橄榄油1ml/只；
iii.模型对照组：口服橄榄油1ml/只；
iv.阳药对照组：脂必妥1.05g/Kg，口服1ml/只；
v.海狗油高剂量组：8.6ml/Kg，口服1.2ml/只；
vi.海狗油中剂量组：4.3ml/Kg，口服1ml/只(用稀释药液)；
vii.海狗油高剂量组：2.2ml/Kg，口服1ml/只(用稀释药液)；
(2)-(7)组给予高脂饲料，每日罐胃一次，连续二周，末次给药一小时后，眼眶采血，测血脂水平(TC、TL、HDL及LDL+VLDL)，取肝测肝组织中总胆固醇(TC)。
结果：海狗油4.3ml/Kg-8.6ml/Kg口服，可明显降低大鼠血清胆固醇(TC)水平，甘油三酯(TG)水平，LDL+VLDL水平，升高HDL水平，并且还可明显降低肝组织中的胆固醇水平，具体可见见表1。
表1
| 组别 剂量 动物数 TC TG LDL+VLDL HDL 肝组织胆固醇(g/kg) (只) (mM/L) (mM/L) (mM/L) (mM/L) (uM/g湿重) |
| 1 8 4.21±2.3 0.5±0.1 0.42±0.2 0.45±0.1 23.64±10.52 8 11.32±3.1 1.1±0.4 0.84±0.1 0.61±0.28 68.88±8.253 8 12.52±4.2 1.3±0.2 0.82±0.3 0.59±0.21 64.84±7.3 |
| 4 1.05 8 8.12±2.1** 0.53±0.1** 0.5±0.1** 0.89±0.35**32.64±8.2**5 8.6 8 8.89±2.3** 0.67±0.2** 0.6±0.2** 0.91±0.42**44.28±6.8**6 4.3 8 9.85±3.4* 0.8±0.3* 0.72±0.3* 0.78±0.21* 58.24±5.6*7 2.2 8 10.84±3.2 1.2±0.45 0.81±0.2 0.6+0.1 65.32±4.5 |
X±S与模型组比：*p＜0.05 **p＜0.01
实验例二
本实验例是采用高脂饲料致家兔脂代谢紊乱模型检验本发明所述的海狗油对家兔脂代谢紊乱的效果，在海狗油为1.1ml/kg-4.5ml/kg的剂量下，连续灌胃二周的药效学作用进行了观察，结果发现，该药可使家兔血清总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平明显降低，HDL水平明显升高，LDL+VLDL水平明显下降，使肝组织中胆固醇水平明显下降，说明该药有明显的降血脂及减轻肝脂作用。
在本实验例中所使用的试验材料如下：
(1)海狗油，为海狗体内提取而成的微黄色油腔滑调状液体，山大西洋食品公司生产，本实验室室温保存，试验时按2Kg体重灌胃9ml(高剂量使用原液)或6ml(中、低剂量使用稀释药液)。
(2)阳性对照药，为脂必妥(0.35g/片)，0.53g/Kg灌胃，6ml/只。批号20001024，成都地奥九泓制药厂。
(3)高脂饲料：4％胆固醇+10％猪油+0.2％丙基硫氧嘧淀+86％混合饲料，其中，胆固醇(普通型)由北京奥星生物技术有限责任有限公司提供；丙基硫氧嘧啶由第二军医大学朝晖制药厂提供(批号是990504)；橄榄油由北京芳草医药化工研制公司提供(批号是980428)；
(4)试验动物为清洁级家兔，体重2-2.5Kg，动物合格证号：京动许字(2000)第012号，中国药品生物制品检定所实验中心提供。实验前观察两天，选健康、活泼的动物用于试验。
方法：取健康家兔，按体重随机分组，每组5只
(1)空白对照组：口服新鲜水6ml/只
(2)溶剂对照组：口服橄榄油6ml/只
(3)模型对照组：口服橄榄油6ml/只
(4)阳药对照组：脂必妥0.53/Kg 口服6ml/只
(5)海狗油高剂量组：4.5ml/Kg ml
(6)海狗油中剂量组：2.2ml/Kg 口服6ml/只(用稀释药液)
(7)海狗油中剂量组：1.1ml/Kg 口服6ml/只(用稀释药液)
(2)-(7)组给予高脂饲料，每日灌胃一次，连续二周，未次给药1小时后，心脏采血，测血脂水平(TC、Tl、HDL及LDL+VLDL)，取肝测肝组织中总胆固醇(TC)。
结果：海狗油2.2ml/Kg-4.5ml/Kg口服，可明显降低家兔血清胆固醇水平，甘油三酯(TG)水平，升高HDL水平，并且还可明显降低肝组织中的胆固醇水平。见
表2
| 组别 剂量 动物数 TC TG LDL+VLDL HDL 肝组织胆固醇(g/kg) (只) (mM/L) (mM/L) (mM/L) (mM/L) (uM/g湿重) |
| 1 5 4.8±1.3 0.54±0.1 0.41±0.2 0.47±0.1 25.64±8.82 5 10.89±2.3 1.25±0.3 0.83±0.15 0.59±0.14 67.83±7.283 5 11.53±3.8 1.29±0.2 0.9±0.2 0.54±0.19 66.53±6.74 0.53 5 7.8±2.9** 0.62±0.1**0.52±0.1**0.85±0.28** 29.8±7.8**5 4.5 5 7.92±3.2** 0.72±0.2**0.63± 0.84±0.21** 33.8±5.4**0.18**6 2.2 5 8.3±2.8* 0.93±0.3*0.72±0.2* 0.71±0.32* 56.92±4.8*7 1.1 5 9.92±3.6 1.18±0.45 0.82±0.4 0.58±0.1 65.32±4.5 |
X±S与模型组比：*p＜0.05 **p＜0.01
以上实验表明，海狗油具有良好的治疗脂代谢紊乱(高血脂)的作用。
附图说明
以下是本发明的附图说明，通过附图说明并结合上述的具体描述，可以更清楚地理解本发明，具体如下：
附图1是本发明所采用的海狗油的紫外吸收谱图；
附图2是本发明所采用的海狗油的红外吸收谱图；
附图3-5是本发明中使用的EPA甲酯、DHA乙酯、DPA甲酯的标准品的气相色谱图；
附图6-7是本发明所采用的海狗油的气相色谱图。
Claims (1)
1.一种主要成份为二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸以及二十二碳六烯酸的海狗油在制备治疗脂代谢紊乱药物中的应用。
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