CN1186073C - 一种治疗生殖器疱疹的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗生殖器疱疹的药物，它以中药大黄、连翘、苦参、蛇床子、白屈菜、赤芍、冰片为原料，经过提取、精制而成的中药药剂。本发明药物具有清热解毒，燥湿止痛的功效，主治生殖器疱疹，中医辨证属湿热下注者。经药效试验表明，本发明药物具有较好的抑杀疱疹病毒作用和抗炎、镇痛作用，并且无毒副作用。

Description

一种治疗生殖器疱疹的药物及其制备方法

所属技术领域

本发明涉及一种治疗生殖器疱疹的药物，具体涉及一种以中草药为原料制备的中成药，本发明还涉及该药物的制备方法。

背景技术

现代医学认为生殖器疱疹是由单纯疱疹病毒(HSV)感染所致的一种病毒性性传播病，是最常见的性传播疾病之一。现有的抗病毒药物的疗效并不理想，仅能减轻疾病的临床症状，有些药物因其副作用明显和禁忌症较多，临床使用受到限制。

发明内容

本发明的目的在于提供一种疗效显著、疗程短、起效迅速、无毒副作用的治疗生殖器疱疹的药物。

本发明的另一目的在于提供该药物的制备方法。

本发明提供的用于治疗生殖器疱疹的药物，是由下述重量配比的原料制成的药剂：

大  黄10～30   连  翘10～30  苦  参7～20  蛇床子7～20

白屈菜8～20    冰  片0.5～6  赤  芍5～15

上述用于治疗生殖器疱疹的药物，可以制成药剂学上所说的多种剂型，如软膏剂、搽剂、涂膜剂或乳剂等。

将上述重量配比的原料制成本发明药物的方法，包括以下步骤：

(1)取连翘、蛇床子加水煎煮2～4次，每次1～3小时，同时收集挥发油，药渣备用，水煎液合并，滤过，滤液减压浓缩，加乙醇至含醇量达70～85％，静置12～48小时，滤过，滤液备用；

(2)取大黄、苦参、赤芍粉碎成粗粉，白屈菜切成小段与步骤(1)中获得的药渣，加5～12倍量70～85％乙醇，加热回流提取2～4次，每次1～4小时，醇提液与步骤(1)中获得的滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.15，得浸膏，备用；

(3)取甘油，尼泊金乙酯、三乙醇胺以热水溶解，与浸膏混合保温80～85℃，滤过，水溶液作为水相；水不溶部分浸膏，用少量乙醇溶解，加入硬脂酸，羊毛脂，液体石蜡，加热融化，混匀，滤过，保温80～85℃左右作为油相；将油相缓缓加入水相中，边加边搅拌，冷至40～45℃左右时加入冰片和挥发油，搅拌至冷却，制得软膏剂。

本发明药物具有清热解毒，燥湿止痛的功效。主治生殖器疱疹，症见患处簇集性水疱，糜烂渗出或溃疡，灼热疼痛及瘙痒难忍，小便黄赤，口干口苦，舌质红，苔黄腻，脉旋滑等，中医辨证属湿热下注者。本发明的药物可以直接涂抹于病变部位，具有作用直接、起效迅速、标本兼治，不易复发、疗效显著、无毒副作用等特点，可有效治疗生殖器疱疹。

下面结合实施例及药效学试验对本发明作进一步说明。

实施例1

(1)取连翘130g、蛇床子120g加水煎煮2次，第一次3小时，第二次2小时，同时收集挥发油，药渣备用，水煎液合并，滤过，滤液减压浓缩，加乙醇至含醇量达85％，静置12小时，滤过，滤液备用；

(2)取大黄180g、苦参90g、赤芍150g粉碎成粗粉，白屈菜110g切成1～2cm的小段与步骤(1)中获得的药渣，加10倍量75％乙醇，加热回流提取3次，每次2小时，醇提液与步骤(1)中获得的滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)，得浸膏，备用；

(3)取甘油40ml，尼泊金乙酯1.5g、三乙醇胺22ml以热水溶解，与浸膏混合保温85℃，滤过，水溶液作为水相；水不溶部分浸膏，用少量乙醇溶解，加入硬脂酸190g，羊毛脂22g，液体石蜡80ml，加热融化，混匀，滤过，保温82℃左右作为油相。将油相缓缓加入水相中，边加边搅拌，冷至40℃左右时加入冰片10g(适量乙醇溶解)和挥发油，搅拌至冷却，制得本发明的软膏。

实施例2

(1)取连翘150g、蛇床子100g，加水煎煮3次，每次2小时，同时收集挥发油，药渣备用，水煎液合并，滤过，滤液减压浓缩，加乙醇至含醇量达80％，静置40小时，滤过，滤液备用；

(2)取大黄130g、苦参120g、赤芍100g，粉碎成粗粉，白屈菜130g切成1～2cm的小段与步骤(1)中获得的药渣，加7倍量85％乙醇，加热回流提取3次，每次1.5小时，醇提液与步骤(1)中获得的滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.15(60℃)，得浸膏，备用；

(3)取甘油50ml，尼泊金乙酯1g、三乙醇胺18ml以热水溶解，与浸膏混合保温83℃，滤过，水溶液作为水相；水不溶部分浸膏，用少量乙醇溶解，加入硬脂酸180g，羊毛脂20g，液体石蜡90ml，加热融化，混匀，滤过，保温85℃左右作为油相。将油相缓缓加入水相中，边加边搅拌，冷至45℃左右时加入冰片14g(适量乙醇溶解)和挥发油，搅拌至冷却，制得本发明的软膏。

以上实施例仅为了对本发明作进一步的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。

本发明提供的是一种治疗生殖器疱疹的天然药物，为证明其治疗生殖器疱疹的效果，发明者使用按上述实施例中提供的方法制备得到的软膏进行了药效学试验，研究结果如下：

13.1试验目的

根据本发明软膏的功能主治，选用不同的动物模型，较全面的评价本发明软膏对感染II型疱疹病毒小鼠的治疗作用、对豚鼠感染II型疱疹病毒的预防作用、本发明软膏的抗炎镇痛作用，以及本发明软膏的体外抗II型疱疹病毒作用、对病毒感染力的影响和本发明软膏的细胞毒性作用。以便确定本发明软膏的药效作用，以及药物的作用强度，为其临床研究提供依据。

13.2本发明软膏的细胞毒性实验及体外抗病毒实验

13.2.1实验材料

13.2.1.1药物

①受试药物：本发明软膏药膏由广州欧华医药生物技术有限公司提供，研究批号：001218-1。

②阳性对照药物：阿昔洛韦，由武汉爱民制药厂生产，批号：20010304，生产批文：国药准字XF19990949。主治单纯疱疹病毒引起的皮肤和粘膜感染等。

13.2.1.2细胞及病毒：Hep-2细胞和HSV-II病毒由武汉大学医学院病毒研究所提供。

13.2.2实验方法

13.2.2.1病毒感染性滴度的测定：将不同稀释度的病毒接种Hep-2细胞，每孔0.1ml，每个稀释度3孔，37℃吸附1h后，加2％小牛血清的MEM培养基，置37℃培养，每日检查病毒生长情况，观察特征性细胞病变(CPE)，2～7天后记录结果。CPE记录方法：(-)为无CPE；(+)为25％的细胞出现CPE；(++)为50％细胞出现CPE；(+++)为75％细胞出现CPE：(++++)为100％细胞出现CPE。计算病毒的半数感染量(TCID₅₀)

13.2.2.2药物细胞毒性测定：在已长成单层的Hep-2细胞中，分别加入不同浓度的药物，每一浓度的药物均重复四孔，并设置未加药液的细胞做正常对照。置37℃，5％CO₂培养箱中培养。用MTT法检测细胞存活率。

13.2.2.3药物抗病毒实验：在24孔板上，另0.8×10⁵/ml浓度的Hep-2细胞1ml/孔，37℃，5％CO₂培养箱中培养24h，弃上清，加1000TCID₅₀/ml的HSV-II，0.1ml/孔，37℃，5％CO₂，吸附90min，弃上清，加含药维持液待检，阳性药物浓度为5、10、20、40、80μg/ml；37℃，5％CO₂培养33h，观察CPE，然后以MTT法检测病毒抑制率，每一药物剂量均重复4孔。

13.2.3实验结果

13.2.3.1实验测得病毒的半数感染量TCID50为10^-5，本实验用病毒浓度为1000TCID50/ml。

13.2.3.2不同浓度的本发明软膏软膏对细胞存活率的影响

药物对Hep-2细胞毒性作用表现为细胞折光性改变，壁厚，变圆，破碎，脱落，并且吸光值明显下降。药物浓度在2000μg/ml以内未见明显的细胞毒性，但经较高药物浓度作用后，细胞死亡数增加，药物有细胞毒性。见附图。结果经统计软件SPSS 10.0分析，药物的细胞毒性与药物浓度有直线相关关系。结果详见表13-1。

               表13-1不同浓度的本发明软膏软膏对细胞存活率的影响

本发明软膏(μg/ml) 200  1000   2000   4000   8000  16000 24000 32000 48000  62000

细胞存活率(％)     100  94.7   83.1   70.2   50.0  36.2  24.5  11.7  4.3    0

阿昔洛韦(μg/ml)   10   20     40     60     80    100   120   40    160

细胞存活率(％)     100  90.5   85.7   81     61.9  61.9  42.9  14.3  4.8

13.2.3.3不同浓度的本发明软膏软膏对II型疱疹病毒增殖的抑制作用

通过对CPE的观察发现，当本发明软膏浓度达到6400μg/ml时，病毒的抑制率已经超过90％，而且随着本发明软膏药物浓度的增加，其抗病毒活性也增强。见附图。结果经统计软件SPSS 10.0分析，药物对病毒的抑制作用与药物浓度有直线相关关系。结果详见表13-2。

   表13-2不同浓度的本发明软膏软膏对II型疱疹病毒增殖的抑制作用

本发明软膏浓度(μg/ml)   400     800     1600    3200    6400

病毒抑制率(％)           1.7     7.5     48.3    65.0    91.7

阿昔洛韦浓度(μg/ml)     5       10      20      40      80

病毒抑制率(％)           26.3    53.3    63.3    85.2    93.3

13.3本发明软膏对感染II型疱疹病毒小鼠的治疗作用

13.3.1实验材料

13.3.1.1药物

①受试药物：本发明软膏药膏和对照用基质由广州欧华医药生物技术有限公司提供，研究批号：001218-1。分别将本发明软膏药膏与基质以1∶0、1∶1和1∶3的比例混合，制备成不同浓度药膏备用，其本发明软膏浓度倍比关系为4∶2∶1。

②阳性对照药物：阿昔洛韦，由武汉爱民制药厂生产，批号：20010304，生产批文：国药准字XF19990949。主治单纯疱疹病毒引起的皮肤和粘膜感染等。阿昔洛韦用量为每只小鼠约50mg，若阿昔洛韦临床每天使用6次，共计用量为2g，则实验用剂量为临床用量的11.3倍。

13.3.1.2动物

雌性清洁级昆明种小鼠，体重17±1g，动物质量合格证号：医动字第19-052号(TJLA-2001-60)。由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，检疫后备用。

13.3.2实验方法

取雌性清洁级昆明种小白鼠140只，随机分为正常对照组(N＝20)、模型对照组(N＝20)、西药对照组(N＝20)、基质对照组(N＝20)、本发明软膏高剂量组(N＝20)、本发明软膏中剂量组(N＝20)、本发明软膏低剂量组(N＝20)。受试各组小鼠除正常对照组外，分别取50μl II型疱疹病毒(由武汉大学病毒研究所提供)用3mm×3mm×3mm大小海绵吸附，用眼科镊小心塞入小鼠阴道，每日1次，连续7天。造模成功后，开始分别给药治疗，药物用小棉签小心塞入小鼠阴道，每日给药两次。治疗7天后，眼眶取血，无菌分离血清，-20℃冻存备检。其中半数血清检测IFN-γ(ELISA法，试剂盒由北京帮定生物技术公司提供)，半数血清检测IgG含量(ELISA法，试剂盒由武汉大学医学院病毒研究所提供)。实验结果用统计软件SPSS 10.0进行统计分析。完整分离小鼠阴道，半数用4％多聚甲醛固定送病检，半数-20℃冻存，用于病毒分离(正常组小鼠阴道粘膜不做病毒分离实验)。

13.3.3实验结果

13.3.3.1本发明软膏对II型疱疹病毒引起小鼠阴道组织学改变的影响

病理组织学检查结果显示：

(1)正常组小鼠阴道粘膜表面未见脓性分泌物，粘膜上皮光滑完整，结构清晰，粘膜下未见明显炎症细胞浸润，无明显充血。结果详见附图。

(2)模型组小鼠阴道粘膜表面见较多脓性分泌物，粘膜结构紊乱，粘膜上皮可见明显增生、缺损、水样变性，粘膜损伤深达基底层，粘膜下可见充血及大量炎症细胞浸润。

(3)基质组小鼠阴道粘膜病理改变与模型组相似。

(4)西药组小鼠阴道粘膜表面未见明显脓性分泌物，粘膜结构尚清楚，粘膜上皮可见增生、缺损、气球样变形，粘膜下层可见充血及炎症细胞浸润。

(5)中药大剂量组小鼠阴道粘膜表面无分泌物，粘膜结构清晰，粘膜上皮基本光滑，可见轻度缺损，粘膜增生不明显，粘膜下炎症细胞浸润明显较模型组、基质组和西药组为轻，未见明显充血。

(6)中药中剂量组小鼠阴道粘膜表面有少量脓性分泌物，粘膜结构清晰，粘膜欠光滑，有缺损，粘膜内可见脓腔，粘膜下炎症细胞浸润较模型组明显减轻，可见充血。

(7)中药小剂量组小鼠阴道粘膜表面有少许分泌物，粘膜上皮可见较明显缺损，可见气球样变形，粘膜显著增生，粘膜下可见明显炎性细胞浸润，显著充血。

13.3.3.2本发明软膏对II型疱疹病毒引起小鼠血清IFN-γ含量的影响

实验结果表明，经本发明软膏各剂量治疗的小鼠血清IFN-γ含量均与正常组有显著性差异，本发明软膏中剂量组和阿昔洛韦组与模型组有显著性差异，本发明软膏大剂量组、中剂量组和阿昔洛韦组与基质对照组有显著性差异。结果详见表13-3。

           表13-3本发明软膏对小鼠血清中INF-α含量的影响

       组别            动物数                 INF-α含量(pg/ml)

   正常对照组            10                     9.50±4.35

   模型对照组            10                     16.2±6.27※

   基质对照组            10                     15.5±4.01

   阿昔洛韦组            10                     24.2±6.68※●▲

   本发明软膏小剂量组    10                     21.8±7.45

   本发明软膏中剂量组    10                     22.8±8.55※●▲

   本发明软膏大剂量组    10                     22±10.23※▲

注：※与正常组比较p＜0.05●与模型组比较p＜0.05▲与基质组比较p＜0.05★与西药组比较p＜0.05

13.3.3.3本发明软膏对II型疱疹病毒引起小鼠血清IgG含量的影响

实验结果表明，经病毒感染后各组小鼠血清IgG含量较正常组明显升高，本发明软膏大剂量组小鼠血清中IgG含量与模型组、基质组有显著性差异，中剂量组小鼠血清中IgG含量与基质组有显著性差异。本发明软膏各剂量组小鼠血清中IgG含量与阿昔洛韦对照组无显著性差异。结果详见表13-4。

              表13-4本发明软膏对小鼠血清中IgG含量的影响

   组别                          动物数            IgG含量(P/N)

   正常对照组                      8               1.73±0.28

   模型对照组                      8               3.45±0.45※

   基质对照组                      8               3.30±0.51

   阿昔洛韦组                      8               4.15±0.56※●▲

   本发明软膏小剂量组              8               3.65±0.56※

   本发明软膏中剂量组              8               3.85±0.67※▲

   本发明软膏大剂量组              8               4.05±0.56※●▲

注：※与正常组比较p＜0.05●与模型组比较p＜0.05▲与基质组比较p＜0.05★与西药组比较p＜0.05

13.3.3.4小鼠阴道粘膜病毒分离

结果表明，经本发明软膏治疗后，本发明软膏大剂量组小鼠阴道粘膜病毒检出率显著低于模型组和基质对照组。结果详见表13-5。

      表13-5不同浓度本发明软膏对小鼠阴道粘膜病毒检出率的影响

   组别           动物数    检出病毒样本数      病毒检出率(％)

模型对照组          10            8                   80

基质对照组          9             7                   77.78

本发明软膏小剂量组  10            5                   50

本发明软膏中剂量组  8             4                   50

本发明软膏大剂量组  9             2                   22.22●▲

注：●与模型组比较p＜0.05▲与基质组比较p＜0.05

13.4本发明软膏对II型疱疹病毒感染豚鼠的预防作用

13.4.1实验材料

13.4.1.1药物

①受试药物：本发明软膏药膏和对照用基质由广州欧华医药生物技术有限公司提供，研究批号：001218-1。分别将本发明软膏药膏与基质以1∶0、1∶1和1∶3的比例混合，制备成不同浓度药膏备用，其本发明软膏浓度倍比关系为4∶2∶1。

13.4.1.2动物

雌性普通级清洁级豚鼠，体重300±20g，动物质量合格证号：医动字第19-023号(TJLA-2001-65)。由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，检疫后备用。

13.4.2实验方法

取雌性普通级清洁级豚鼠70只，随机分为正常对照组(N＝10)、模型对照组(N＝10)、基质对照组(N＝10)、本发明软膏高剂量组(N＝10)、本发明软膏中剂量组(N＝10)、本发明软膏低剂量组(N＝10)。本发明软膏各剂量组豚鼠给予不同浓度的本发明软膏药膏100mg，基质对照组给予等量的空白基质。药物均用小棉签小心塞入豚鼠阴道，连续用药7天。停止用药后，取100μl II型疱疹病毒(由武汉大学病毒研究所提供)用4mm×4mm×4mm大小海绵吸附，用眼科镊小心塞入豚鼠阴道，每日1次，连续7天后，完整分离阴道并纵向剖开，取一半4％多聚甲醛固定，送病检，另一半进行病毒分离。

13.4.3实验结果

13.4.3.1病理组织学改变

正常组豚鼠阴道粘膜表面未见脓性分泌物，粘膜上皮光滑完整，结构清晰，粘膜下未见明显炎症细胞浸润，无明显充血。

模型组、基质组、阿昔洛韦组、中药各剂量组豚鼠阴道粘膜表面均见大量脓性分泌物，粘膜结构紊乱，明显增生、缺损，损伤深达基底层，粘膜可见空泡样变形，粘膜下可见大量炎性细胞浸润，显著充血。

结果详见附图。

13.4.3.2不同浓度本发明软膏对豚鼠阴道粘膜病毒检出率的影响

结果表明，经本发明软膏治疗后，本发明软膏大剂量组豚鼠阴道粘膜病毒检出率显著低于模型组和基质对照组。结果详见表13-6。

表13-6不同浓度本发明软膏对豚鼠阴道粘膜病毒检出率的影响

   组别          动物数    检出病毒样本数    病毒检出率(％)

模型对照组          9             7               77.78

基质对照组          8             6               75

本发明软膏小剂量组  9             5               55.56

本发明软膏中剂量组  8             4               50

本发明软膏大剂量组  10            2               20●▲

注：●与模型组比较p＜0.05▲与基质组比较p＜0.05

13.5本发明软膏的抗炎作用

13.5.1实验材料

13.5.1.1药物

①受试药物：本发明软膏药膏和对照用基质由广州欧华医药生物技术有限公司提供，研究批号：001218-1。分别将本发明软膏药膏与基质以1∶0、1∶1和1∶3的比例混合，制备成不同浓度药膏备用，其本发明软膏浓度倍比关系为4∶2∶1。

②阳性对照药物：醋酸地塞米松软膏，由福建省沙县制药厂生产，批号20010301。批准文号：闽卫药准字(1996)第002253号。

13.5.1.2动物

清洁级SD大鼠，雌雄各半，体重200±20g，动物质量合格证号：医动字第19-053号(TJLA-2001-63)，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，检疫后备用。清洁级昆明种小鼠，雌性180只，雄性90只，体重20±2g，动物质量合格证号：医动字第19-052号(TJLA-2001-62)。由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，检疫后备用。

13.5.2实验方法

13.5.2.1本发明软膏对蛋清引起的大鼠足肿胀的影响

取清洁级SD大鼠60只，雌雄各半。随机分为模型对照组(N＝10)、醋酸地塞米松组(N＝10)、基质对照组(N＝10)、本发明软膏高剂量组(N＝10)、本发明软膏中剂量组(N＝10)、本发明软膏低剂量组(N＝10)。将受试大鼠右侧后肢绒毛仔细剪干净，并在其踝关节突起处划线标记，参照陈奇方法^[1]制作测量装置，测量鼠爪初始体积，连续测2次，取平均值视为大鼠足跖体积。分别给予每只大鼠足跖部注射新鲜鸡蛋清0.05ml，注射后立即分组给药，本发明软膏各剂量组分别取等体积不同浓度的本发明软膏药膏均匀涂在大鼠右后肢，基质对照组给予同等体积的纯基质，醋酸地塞米松组每只大鼠给予醋酸地塞米松软膏外涂。所有外用药膏用量每次均约为0.5g。在造模1h后，用温水洗净残留的药膏，用吸水纸吸干足跖部残余的水分，连续两次测量大鼠足跖体积，测量后再次给药。在造模3h后再次测量大鼠足跖体积并给药，在造模6h后再次测量大鼠足跖体积。分别计算大鼠足跖肿胀率，公式如下。

实验结果用统计软件SPSS 10.0进行统计分析。

13.5.2.2本发明软膏对二甲苯引起小鼠耳廓肿胀的影响

取清洁级昆明种小白鼠60只，雌雄各半。随机分为模型对照组(N＝10)、西药对照组(N＝10)、基质对照组(N＝10)、本发明软膏高剂量组(N＝10)、本发明软膏中剂量组(N＝10)、本发明软膏低剂量组(N＝10)。给予各实验组小鼠以二甲苯0.1ml均匀涂布右耳上下两面，随后立即分组给药，本发明软膏各剂量组分别取不同浓度的本发明软膏药膏均匀涂在小鼠右侧耳廓上下两面，每只小鼠给药量约为100mg，基质对照组给予等量纯基质，醋酸地塞米松组每只小鼠给予醋酸地塞米松软膏100mg外涂。给药2h后用φ6mm打孔器在小鼠两侧耳廓正中各取一片耳片，用电子精密分析天平(Denver Instrument Compony出品，型号：AA-200)称重，计算肿胀度和肿胀率，公式如下。实验结果用统计软件SPSS 10.0进行统计分析。

耳廓肿胀度＝右侧耳片重-左侧耳片重

13.5.3实验结果

13.5.3.1本发明软膏对蛋清引起的大鼠足肿胀的影响

在给药1h时段，本发明软膏大、中、小剂量组与空白组、基质组大鼠足肿胀率无显著性差异。而在给药后3h、6h时段，本发明软膏大、中、小剂量组大鼠足肿胀率明显低于空白组和基质对照组。西药醋酸地塞米松组在各时段抗蛋清引起大鼠足肿胀效应显著优于本发明软膏各剂量组和空白组、基质组。结果详见表13-7。

      表13-7本发明软膏对蛋清引起大鼠足肿胀的影响( x±s，n＝10)

    组别              1h肿胀率(％)       3h肿胀率(％)         6h肿胀率(％)

模型对照组            86.36±11.16       82.59±9.88          65.58±6.74

基质对照组            87.88±8.57        83.80±8.56          64.00±7.72

西药对照组            44.92±7.72※▲    37.80±5.55※▲      27.40±4.45※▲

本发明软膏小剂量组    83.55±4.61        75.72±3.88※▲★    59.05±3.19※▲★

本发明软膏中剂量组    82.53±7.95        66.63±5.05※▲★    42.44±3.57※▲★

本发明软膏大剂量组    82.33±8.05        63.23±5.42※▲★    40.22±3.37※▲★

注：※与模型组比较p＜0.05▲与基质组比较p＜0.05★与西药组比较p＜0.05

13.5.3.2本发明软膏对二甲苯引起小鼠耳廓肿胀的影响

在给药2h后，本发明软膏大、中、小剂量组小鼠耳廓肿胀率显著低于空白组和基质组，西药醋酸地塞米松组抗二甲苯引起小鼠耳廓的效应显著优于本发明软膏大、中、小剂量组和空白组与基质对照组。结果详见表13-8。

    表13-8  本发明软膏对二甲苯引起小鼠耳廓肿胀的影响( x±s，n＝10)

组别                动物数      肿胀度(mg)        肿胀率(％)

模型对照组            10        12.37±1.01       88.41±6.65

基质对照组            10        12.16±1.02       88.23±10.28

西药对照组            10        6.45±0.65        46.61±4.91※▲

本发明软膏小剂量组    10        9.91±0.83        71.77±4.89※▲★

本发明软膏中剂量组    10        8.14±0.93        59.70±10.31※▲★

本发明软膏大剂量组    10        7.94±0.88        57.64±8.98※▲★

注：※与模型组比较p＜0.05▲与基质组比较p＜0.05★与西药组比较p＜0.05

13.6本发明软膏的镇痛作用

13.6.1实验材料：

13.6.1.1药物

①受试药物：本发明软膏药膏和对照用基质由广州欧华医药生物技术有限公司提供，研究批号001218-1。分别将本发明软膏药膏与基质以1∶0、1∶1和1∶3的比例混合，制备成不同浓度药膏备用，其本发明软膏浓度倍比关系为4∶2∶1。0.6％的乙酸溶液。

②阳性对照药物：阿司匹林片，由武汉制药厂生产，批号20000603。将阿司匹林溶于适量的生理盐水中，制成浓度为20mg/ml的混悬液备用。

13.6.1.2动物

清洁级昆明种小鼠，雌雄各半，体重20±2g，动物质量合格证号：医动字第19-052号(TJLA-2001-62)。由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，检疫后备用。

13.6.2实验方法：

13.6.2.1扭体法

取清洁级昆明种小鼠120只，雌雄各半，随机分为模型对照组(N＝20)、西药对照组(N＝20)、基质对照组(N＝20)、本发明软膏高剂量组(N＝20)、本发明软膏中剂量组(N＝20)、本发明软膏低剂量组(N＝20)。用脱毛膏(硫化钡25g、滑石粉35g、淀粉35g、肥皂粉5g，加水调成糊状)将基质对照组，本发明软膏小、中、大剂量组小鼠腹部各脱去一1.5cm×2.5cm的区域，分别取0.5g基质和不同浓度的本发明软膏药膏均匀涂在各小鼠脱毛区域，用纱布和胶布外固定。阿司匹林组小鼠给予阿司匹林1g/kg剂量灌胃，模型对照组不予其他处理。给药180min后，给予每只小鼠腹腔注射0.6％的乙酸溶液0.2ml，随即观察并记录15min内小鼠扭体的次数。小鼠应分别放置不同的鼠笼进行观察，以防止小鼠相互拥挤，计数不准确。同时，实验中只能记录小鼠标准的扭体动作：腹部收缩内凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行。实验结果用统计软件SPSS 10.0进行统计分析。

13.6.2.2热板法

实验前先对小鼠进行预筛，对于热板耐受时间小于5s，或大于60s的小鼠应弃去。取符合实验要求的清洁级昆明种雌性小鼠90只，随机分为空白对照组(N＝15)、阿司匹林对照组(N＝15)、基质对照组(N＝15)、本发明软膏高剂量组(N＝15)、本发明软膏中剂量组(N＝15)、本发明软膏低剂量组(N＝15)。分别将约50mg不同浓度的本发明软膏药膏和对照组基质均匀涂布于各小鼠后足掌侧，阿司匹林组小鼠给予阿司匹林1g/kg剂量灌胃，模型对照组不予其他处理。30min后用无菌棉签将残余药膏去除，并将小鼠置于热板上，热板温度控制在55±0.5℃，记录小鼠上热板至首次舔后足的时间。以此热板耐受时间的变化反映小鼠痛阈的变化，耐热超过1min的小鼠按1min记。分别记录用药后30min、60min、90min各小鼠热板耐受时间，并计算痛阈提高率。公式如下。实验结果用统计软件SPSS 10.0进行统计分析。

13.6.3实验结果

13.6.3.1本发明软膏对乙酸引起小鼠扭体次数的影响

在给药2h后，本发明软膏大、中、小剂量组小鼠在腹腔注射乙酸后引起的扭体次数显著低于模型对照组和基质对照组，阿司匹林组小鼠扭体次数显著低于本发明软膏各剂量组。结果详见表13-9。

            表13-9本发明软膏对乙酸引起小鼠扭体次数的影响

   组别               动物数                  扭体次数

模型对照组              20                    23±5.44

基质对照组              20                    22.10±5.78

阿司匹林组              20                    15.50±6.03※▲

本发明软膏小剂量组      20                    19.80±4.23

本发明软膏中剂量组      20                    20.65±9.22※

本发明软膏大剂量组      20                    18.50±5.60※

注：※与模型组比较p＜0.05▲与基质组比较p＜0.05★与西药组比较p＜0.05

13.6.3.2本发明软膏对各组小鼠热板耐受时间的影响

本发明软膏在给药后30min、60min、90min等各个时间段对小鼠热板耐受时间均有显著的提高，其中，在给药后30min时段和90min时段，本发明软膏大剂量组与阿司匹林组疗效无显著性差异，在60min时段，阿司匹林对小鼠痛阈提高效果显著优于本发明软膏各剂量组。结果详见表13-10。

            表13-10本发明软膏对小鼠痛阈的影响( x±s，n＝15)

组别                30min痛阈提高率(％) 60min痛阈提高率(％) 90min痛阈提高率(％)

模型对照组          4.07±20.61         -2.56±17.83        2.09±17.92

基质对照组          3.40±29.46         2.08±20.65         2.52±15.87

阿司匹林组          94.26±41.51※▲    87.77±24.13※▲    74.98±19.04※▲

本发明软膏小剂量组  41.58±23.20※▲★  42.76±27.25※▲★  36.92±16.18※▲★

本发明软膏中剂量组  67.56±45.40※▲★  63.85±23.21※▲★  60.38±23.15※▲★

本发明软膏大剂量组  69.67±45.08※▲    70.36±20.38※▲★  65.18±13.48※▲

注：※与模型组比较p＜0.05▲与基质组比较p＜0.05★与西药组比较p＜0.05

结论：

通过抗II型疱疹病毒、抗炎、镇痛的研究，结果表明本发明软膏具有抗II型疱疹病毒、抗炎、镇痛的作用。本发明软膏软膏在体外实验有较好的抗病毒作用，且其对病毒的抑制作用与药物浓度呈正相关；在体抗病毒试验，可提高INF-α与IgG的含量，病理组织学检查显示，经本发明软膏治疗后，小鼠阴道粘膜上皮因感染II型疱疹病毒引起的病毒性炎症、上皮缺损、上皮增生、细胞空泡样变性等病理变化均显著减轻；预先给予本发明软膏能降低给予病毒后豚鼠阴道粘膜的病毒检出率；有良好的抗炎及镇痛作用。

Claims (3)

1、一种治疗生殖器疱疹的药物，其特征在于是由下述重量配比的原料制成的药剂：

大黄10～30    连翘10～30   苦参7～20   蛇床子7～20

白屈菜8～20   冰片0.5～6   赤芍5～15。

2、根据权利要求1所述的治疗生殖器疱疹的药物，其特征在于所述的药剂是软膏剂、搽剂、涂膜剂或乳剂。

3、权利要求2所述的治疗生殖器疱疹的软膏剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)取连翘、蛇床子加水煎煮2～4次，每次1～3小时，同时收集挥发油，药渣备用，水煎液合并，滤过，滤液减压浓缩，加乙醇至含醇量达70～85％，静置12～48小时，滤过，滤液备用；

(2)取大黄、苦参、赤芍粉碎成粗粉，白屈菜切成小段与步骤(1)中获得的药渣，加5～12倍量70～85％乙醇，加热回流提取2～4次，每次1～4小时，醇提液与步骤(1)中获得的滤液合并，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.10～1.15，得浸膏，备用；

(3)取甘油，尼泊金乙酯、三乙醇胺以热水溶解，与浸膏混合保温80～85℃，滤过，水溶液作为水相；水不溶部分浸膏，用少量乙醇溶解，加入硬脂酸，羊毛脂，液体石蜡，加热融化，混匀，滤过，保温80～85℃左右作为油相；将油相缓缓加入水相中，边加边搅拌，冷至40～45℃左右时加入冰片和挥发油，搅拌至冷却，制得软膏剂。