CN118453709A - 一种治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中医药领域，具体是一种治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂及其制备方法和应用。本发明在中医传统理论的指导下，根据临床实体肿瘤(早、中、晚期)患者的证候表现，采用动物类中药壁虎、海螵蛸、水蛭，植物类中药三七、茜草、红花、甘草按一定比例制成的中药复方制剂，对恶性肿瘤血瘀证患者进行治疗，能够明显提高患者生存质量，减轻放化疗的毒副反应，延长患者生存期，改善患者的血瘀证的症状。
Description
技术领域
本发明涉及中医药领域，具体地说，是一种治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂及其制备方法和应用。
背景技术
临床上实体肿瘤(如：食管癌、肺癌、肝癌、胃癌、胰腺癌、大肠癌、肾癌、前列腺癌、乳腺癌等)常见的症状有异常肿块、饮食减少、消瘦、低热、乏力、疼痛等，唇甲紫暗，舌下络脉迂曲等。此类症状与临床上中医学所描述的血瘀证的症状相似，可归属于血瘀证的范畴。实体肿瘤与血瘀的关联性，历代文献多有阐述。《内经》中记载“百病皆生于气”、“血滞则不通”、“血凝则不流”、“喜怒不适……寒温不时……积聚以留。”最早论及积、伏梁、石瘕与血瘀证的关系。《古今医统》认为：“凡食下有碍，觉屈曲而下，微作痛，此必有死血。”指出了食道癌的病理因素为瘀血。《医林改错》中曰：“肚腹结块，必有形之血”。
血瘀证存在并贯穿于实体肿瘤的整个病理过程，即从肿瘤的无侵袭转移到肿瘤的侵袭转移存在着微观血瘀证。现代肿瘤学研究表明，瘀血体质的人有癌变的倾向，癌变后恶性转移率明显较高，复发率亦较高，预后欠佳。大量临床观察表明，血液流变学异常是肿瘤患者中普遍存在的一种病理改变，血液粘滞性越高，肿瘤血瘀越明显，血液处于黏、聚状态，且高粘滞血症的存在对肿瘤转移的形成有着重要的影响。恶性肿瘤存在血瘀证表现的另一证据就是血液凝固性异常，其特点表现为凝血机制被激活，血小板活化，抗凝功能被减弱，导致血液处于高凝状态，易于形成血栓。肺癌患者血小板聚集、黏附功能增强，特别是肺癌发生转移后尤为突出，肿瘤早期凝血功能增强，处于高凝状态，有血栓形成的倾向，且预后不良。
中西医学己认同血瘀或血液高凝状态是肿瘤和癌性转移共同病机和临床表现，活血化瘀应当为防治癌症及恶性转移的基本策略。但是关于一种可有效解决临床上实体肿瘤血瘀证患者的中药复方制剂目前还未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗实体肿瘤血瘀证的活血化瘀中药复方制剂，可有效解决临床上实体肿瘤血瘀证患者的中药治疗，尤其是对于中晚期实体恶性肿瘤(如：食管癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、胰腺癌、大肠癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌等)血瘀证患者治疗效果明显。
本发明课题组经过长期的临床实践和基础研究，证实活血化瘀中药对于肿瘤具有良好的治疗作用，可能是通过抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、逆转肿瘤细胞耐药、调节肿瘤细胞免疫、抑制肿瘤血管新生和防止肿瘤转移等机制相关。
本发明的中药复方制剂中：
壁虎：祛风定惊，解毒散结；
三七：散瘀止血，消肿定痛；
海螵蛸：收敛止血，涩精止带，制酸止痛，收湿敛疮；
茜草：凉血祛瘀，止血通经；
水蛭：破血通经，逐瘀消癥；
红花：活血通经，散瘀止痛；
甘草：补脾和胃，益气生津，调营卫，解药毒。
此方以壁虎、海螵蛸为君药，三七、茜草为臣药，佐以水蛭、红花，甘草调和诸药，此七药合用，共凑理血化瘀，散结止痛之功效。
本发明的第一方面，提供一种治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，由以下重量份的原料药制成：
壁虎：30-500份
三七：30-500份
海螵蛸：30-500份
茜草：30-500份
水蛭：30-500份
红花：30-500份
甘草：30-500份。
进一步地，所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，由如下重量份的中药原料药制成：
壁虎：50-300份
三七：50-300份
海螵蛸：50-300份
茜草：50-300份
水蛭：50-300份
红花：50-300份
甘草：50-300份。
在本发明的一个优选的实施方式中，所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，由如下重量份的中药原料药制成：
壁虎：300份
三七：100份
海螵蛸：300份
茜草：100份
水蛭：300份
红花：100份
甘草：200份。
在本发明的一个优选的实施方式中，所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，由如下重量份的中药原料药制成：
壁虎：200份
三七：100份
海螵蛸：200份
茜草：100份
水蛭：200份
红花：100份
甘草：200份。
在本发明的一个优选的实施方式中，所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，由如下重量份的中药原料药制成：
壁虎：100份
三七：100份
海螵蛸：100份
茜草：100份
水蛭：100份
红花：100份
甘草：200份。
在本发明的一个优选的实施方式中，所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，由如下重量份的中药原料药制成：
壁虎：100份
三七：200份
海螵蛸：100份
茜草：200份
水蛭：100份
红花：200份
甘草：200份。
在本发明的一个优选的实施方式中，所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，由如下重量份的中药原料药制成：
壁虎：100份
三七：300份
海螵蛸：100份
茜草：300份
水蛭：100份
红花：300份
甘草：200份。
进一步地，所述的中药复方制剂可采用本领域常规制备方法，辅以常规药用辅料，制备成药剂学上的常见剂型。
进一步地，所述的中药复方制剂的剂型为散剂、粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液或丸剂。
进一步地，所述的中药复方制剂中还包括药学上可接受的辅料。
本发明的第二方面，提供一种如上所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂的制备方法，包括以下步骤：
(A)按重量份数配比称取中药原材料；
(B)水提醇沉：将所述的中药原材料中的植物药(三七、海螵蛸、茜草、红花、甘草)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍95％乙醇，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍95％乙醇，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍95％乙醇，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状；再加入等量的水，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)；
(C)醇提水沉：将所述的中药原材料中的动物药(壁虎、水蛭)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍水，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍水，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍水，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状；再加入等量的无水乙醇，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)；
(D)最后将醇沉液和水沉液在-50℃中真空干燥，得粉状中药复方提取物，即得所述的中药复方制剂。
本发明的第三方面，提供一种如上所述的中药复方制剂在制备治疗实体肿瘤的药物中的应用。
进一步地，所述的药物为治疗实体肿瘤血瘀证的药物。
进一步地，所述的实体肿瘤为结直肠癌、食管癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、胰腺癌、大肠癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌等。
进一步地，所述的实体肿瘤为中晚期实体恶性肿瘤。
本发明优点在于：
本发明在中医传统理论的指导下，根据临床实体肿瘤(早、中、晚期)患者的证候表现，采用动物类中药壁虎、海螵蛸、水蛭，植物类中药三七、茜草、红花、甘草按一定比例制成的中药复方制剂，对恶性肿瘤血瘀证患者进行治疗，能够明显提高患者生存质量，减轻放化疗的毒副反应，延长患者生存期，改善患者的血瘀证的症状。
附图说明
图1.HCT116细胞CCK-8折线图；
图2.HepG2细胞CCK-8折线图；
图3.A549细胞CCK-8折线图；
图4.动物实验示意图；
图5.皮下瘤变化图；
图6.皮下瘤变化折线图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1：本发明的中药复方制剂的制备1
按下述重量份数配比称取中药原材料(克)：
壁虎300份，三七100份，海螵蛸300份，茜草100份，水蛭300份，红花100份，甘草200份。
水提醇沉：将上述中药中的植物药(三七、海螵蛸、茜草、红花、甘草)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍95％乙醇，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍95％乙醇，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍95％乙醇，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状。再加入等量的水，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)。
醇提水沉：将上述中药中的动物药(壁虎、水蛭)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍水，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍水，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍水，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状。再加入等量的无水乙醇，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)。
最后将醇沉液和水沉液在-50℃中真空干燥，得粉状中药复方提取物，即的本发明的中药复方制剂。
实施例2：本发明的中药复方制剂的制备2
按下述重量份数配比称取中药原材料(克)：
壁虎200份，三七100份，海螵蛸200份，茜草100份，水蛭200份，红花100份，甘草200份。
水提醇沉：将上述中药中的植物药(三七、海螵蛸、茜草、红花、甘草)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍95％乙醇，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍95％乙醇，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍95％乙醇，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状。再加入等量的水，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)。
醇提水沉：将上述中药中的动物药(壁虎、水蛭)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍水，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍水，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍水，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状。再加入等量的无水乙醇，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)。
最后将醇沉液和水沉液在-50℃中真空干燥，得粉状中药复方提取物，即的本发明的中药复方制剂。
实施例3：本发明的中药复方制剂的制备3
按下述重量份数配比称取中药原材料(克)：
壁虎100份，三七100份，海螵蛸100份，茜草100份，水蛭100份，红花100份，甘草200份。
水提醇沉：将上述中药中的植物药(三七、海螵蛸、茜草、红花、甘草)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍95％乙醇，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍95％乙醇，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍95％乙醇，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状。再加入等量的水，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)。
醇提水沉：将上述中药中的动物药(壁虎、水蛭)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍水，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍水，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍水，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状。再加入等量的无水乙醇，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)。
最后将醇沉液和水沉液在-50℃中真空干燥，得粉状中药复方提取物，即的本发明的中药复方制剂。
实施例4：本发明的中药复方制剂的制备4
按下述重量份数配比称取中药原材料(克)：
壁虎100份，三七200份，海螵蛸100份，茜草200份，水蛭100份，红花200份，甘草200份。
水提醇沉：将上述中药中的植物药(三七、海螵蛸、茜草、红花、甘草)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍95％乙醇，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍95％乙醇，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍95％乙醇，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状。再加入等量的水，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)。
醇提水沉：将上述中药中的动物药(壁虎、水蛭)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍水，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍水，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍水，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状。再加入等量的无水乙醇，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)。
最后将醇沉液和水沉液在-50℃中真空干燥，得粉状中药复方提取物，即的本发明的中药复方制剂。
实施例5：本发明的中药复方制剂的制备5
按下述重量份数配比称取中药原材料(克)：
壁虎100份，三七300份，海螵蛸100份，茜草300份，水蛭100份，红花300份，甘草200份。
水提醇沉：将上述中药中的植物药(三七、海螵蛸、茜草、红花、甘草)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍95％乙醇，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍95％乙醇，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍95％乙醇，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状。再加入等量的水，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)。
醇提水沉：将上述中药中的动物药(壁虎、水蛭)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍水，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍水，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍水，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状。再加入等量的无水乙醇，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)。
最后将醇沉液和水沉液在-50℃中真空干燥，得粉状中药复方提取物，即的本发明的中药复方制剂。
实施例6：片剂/胶囊的制备
按照上述实施例制备得到粉状中药复方提取物，加入制药辅料，压制成片剂或填充装胶囊。
实施例7：散剂/粉剂/颗粒剂的制备
按照上述实施例制备得到粉状中药复方提取物，加入制药辅料，制成散剂、粉剂或颗粒剂。
实施例8：丸剂的制备
按照上述实施例制备得到粉状中药复方提取物，加适当制药辅料(白糖、蜂蜜、苯甲丙酸或羟苯乙酯等)，制成丸剂。
实施例9：本发明的中药复方制剂对结直肠癌细胞株HCT116的生长抑制作用
供试品：HCT116细胞，购自中国科学院细胞库，由上海中医药大学附属曙光医院肿瘤实验室保存；本发明的中药复方制剂(处方和制备方法参见实施例3)；RPMI 1640完全培养基；CCK-8检测试剂盒，碧云天；
实验方法：将HCT116细胞以8×103/100μL接种于96孔板中，培养环境为37℃、5％CO2，单层生长，培养24h。待细胞完全贴壁后分别加入含不同浓度本发明的中药复方制剂的完全培养基(0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mg·L-1)和不加药物的完全培养基，以观察本发明的中药复方制剂对HCT116细胞增殖的影响，并确定半抑制浓度，即IC50。每组设6个复孔，分别孵育细胞24h、48h后，向每孔加入100μL完全培养基和10％CCK-8试剂，37℃孵育1h。使用全自动酶标仪检测450nm处各孔的光密度(OD)，计算生存率，并绘制效应曲线。重复3次。
如图1所示，与不加药的完全培养基组相比，加药组显微镜下观察HCT116细胞数明显减少，酶标仪检测分析后发现HCT116细胞存活率明显减少。且随着本发明的中药复方制剂浓度的升高，HCT116细胞的存活率明显降低，呈剂量依赖性。
与24h时相比，48h时HCT116细胞数明显减少，HCT116细胞存活率更低，呈时间依赖性。
实验结果表明，本发明的中药复方制剂可以抑制结直肠癌细胞株HCT116细胞的生长，在延长本发明的中药复方制剂时间后会进一步抑制HCT116细胞的生长。在24h、48h时本发明的中药复方制剂浓度分别为0.7961mg·L-1、0.519mg·L-1时，能半数抑制HCT116细胞。
实施例10：本发明的中药复方制剂对肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用
供试品：HepG2细胞，购自中国科学院细胞库，由上海中医药大学附属曙光医院肿瘤实验室保存；本发明的中药复方制剂(处方和制备方法参见实施例3)；RPMIDMEM完全培养基；Gibco MEM NEAA营养液；CCK-8检测试剂盒，碧云天；
实验方法：将HepG2细胞以5×103/100μL接种于96孔板中，培养环境为37℃、5％CO2，单层生长，培养24h。待细胞完全贴壁后分别加入含不同浓度本发明的中药复方制剂的完全培养基(0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mg·L-1)和不加药物的完全培养基，以观察本发明的中药复方制剂对HCT116细胞增殖的影响，并确定半抑制浓度，即IC50。每组设6个复孔，分别孵育细胞24h、48h后，向每孔加入100μL完全培养基和10％CCK-8试剂，37℃孵育1h。使用全自动酶标仪检测450nm处各孔的光密度(OD)，计算生存率，并绘制效应曲线。重复3次。
如图2所示，与不加药的完全培养基组相比，加药组显微镜下观察HepG2细胞数明显减少，酶标仪检测分析后发现HepG2细胞存活率明显减少。且随着本发明的中药复方制剂浓度的升高，HepG2细胞的存活率明显降低，呈剂量依赖性。
与24h时相比，48h时HepG2细胞数明显减少，HepG2细胞存活率更低，呈时间依赖性。
实验结果表明，本发明的中药复方制剂可以抑制肝癌细胞株HepG2细胞的生长，在延长本发明的中药复方制剂时间后会进一步抑制HepG2细胞的生长。在24h、48h时本发明的中药复方制剂浓度分别为2.549mg·L-1、0.2998mg·L-1时能半数抑制HepG2细胞。
实施例11：本发明的中药复方制剂对肺癌细胞株A549的生长抑制作用
供试品：A549细胞，购自中国科学院细胞库，由上海中医药大学附属曙光医院肿瘤实验室保存；本发明的中药复方制剂(处方和制备方法参见实施例3)；RPMI 1640完全培养基；CCK-8检测试剂盒，碧云天；
实验方法：将A549细胞以4×103/100μL接种于96孔板中，培养环境为37℃、5％CO2，单层生长，培养24h。待细胞完全贴壁后分别加入含不同浓度本发明的中药复方制剂的完全培养基(0.0625、0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mg·L-1)和不加药物的完全培养基，以观察本发明的中药复方制剂对HCT116细胞增殖的影响，并确定半抑制浓度，即IC50。每组设6个复孔，分别孵育细胞24h、48h后，向每孔加入100μL完全培养基和10％ CCK-8试剂，37℃孵育1h。使用全自动酶标仪检测450nm处各孔的光密度(OD)，计算生存率，并绘制效应曲线。重复3次。
如图3所示，与不加药的完全培养基组相比，加药组显微镜下观察A549细胞数明显减少，酶标仪检测分析后发现A549细胞存活率明显减少。且随着本发明的中药复方制剂浓度的升高，A549细胞的存活率明显降低，呈剂量依赖性。
与24h时相比，48h时A549细胞数明显减少，A549细胞存活率更低，呈时间依赖性。
实验结果表明，本发明的中药复方制剂可以抑制肺癌细胞株A549细胞的生长，在延长本发明的中药复方制剂时间后会进一步抑制A549细胞的生长。在24h、48h时本发明的中药复方制剂浓度分别为1.386mg·L-1、0.8345mg·L-1时能半数抑制A549细胞。
实施例12：本发明对结直肠癌细胞株HCT116皮下瘤小鼠瘤体的抑制作用
供试品：模型组：生理盐水，市购；
本发明的中药复方制剂低剂量组：处方和制备方法参见实施例3，低剂量组中药复方浓度为1.035g/ml；
本发明的中药复方制剂高剂量组：处方和制备方法参见实施例3，高剂量组中药复方浓度为2.07g/ml；
受试动物：15只6～8wBALB/c雌性裸鼠，体重18～20g，12只随机分为3组，每组4只进行试验，剩余3只进行瘤体传代，购自吉辉；
瘤株：KRAS突变人结肠癌细胞HCT116，购自中国科学院细胞库，由上海中医药大学附属曙光医院肿瘤实验室保存。
实验方法：在一只小鼠左腋下接种人结直肠癌HCT116细胞株PBS悬液(悬液浓度1×107/mL，接种量0.1mL/只)。接种7天后观察瘤体大小，待瘤体为12cm×12cm大小，将瘤体从小鼠皮下剥离，分离出2块1cm×1cm，无血丝的圆形瘤体。分别置入两只麻醉后小鼠左腋皮下剪开的小口中，最后用5-0可吸收线缝合。瘤体传代7天后观察两只小鼠腋下瘤体大小，待瘤体为12cm×12cm大小，将瘤体从两只小鼠皮下剥离，分离出14块1cm×1cm大小，无血丝的圆形瘤体。分别置入14只麻醉后小鼠左腋皮下剪开的小口中，最后用5-0可吸收线缝合，瘤体传代次日，小鼠随机分组，称量体重，灌胃给药(如图4)，每只灌胃0.2ml中药复方，每日1次，连续14天，每隔一日记录小鼠体重和皮下瘤大小，并作折线图(实验方法见图4)。
如图5和图6所示，与模型组相比，本发明的中药复方制剂低剂量组和高剂量组可明显抑制小鼠皮下HCT116肿瘤的生长。且本发明高剂量组小鼠皮下HCT116肿瘤比低剂量组小鼠皮下HCT116肿瘤缩小更明显，呈剂量依赖性。
实验结果表明本发明的中药复方制剂可以抑制小鼠皮下HCT116肿瘤的生长，且效果与给药剂量相关，高剂量时效果最好。
以上已对本发明创造的较佳实施例进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本发明创造精神的前提下还可做出种种的等同的变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。
Claims (10)
1.一种治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，其特征在于，由以下重量份的原料药制成：
壁虎：30-500份
三七：30-500份
海螵蛸：30-500份
茜草：30-500份
水蛭：30-500份
红花：30-500份
甘草：30-500份。
2.根据权利要求1所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，其特征在于，由如下重量份的中药原料药制成：
壁虎：50-300份
三七：50-300份
海螵蛸：50-300份
茜草：50-300份
水蛭：50-300份
红花：50-300份
甘草：50-300份。
3.根据权利要求1所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，其特征在于，由如下重量份的中药原料药制成：
壁虎：300份
三七：100份
海螵蛸：300份
茜草：100份
水蛭：300份
红花：100份
甘草：200份。
4.根据权利要求1所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，其特征在于，由如下重量份的中药原料药制成：
壁虎：200份
三七：100份
海螵蛸：200份
茜草：100份
水蛭：200份
红花：100份
甘草：200份。
5.根据权利要求1所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，其特征在于，由如下重量份的中药原料药制成：
壁虎：100份
三七：100份
海螵蛸：100份
茜草：100份
水蛭：100份
红花：100份
甘草：200份。
6.根据权利要求1所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，其特征在于，由如下重量份的中药原料药制成：
壁虎：100份
三七：200份
海螵蛸：100份
茜草：200份
水蛭：100份
红花：200份
甘草：200份。
7.根据权利要求1所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂，其特征在于，由如下重量份的中药原料药制成：
壁虎：100份
三七：300份
海螵蛸：100份
茜草：300份
水蛭：100份
红花：300份
甘草：200份。
8.一种如权利要求1-7任一所述的治疗实体肿瘤的活血化瘀的中药复方制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(A)按重量份数配比称取中药原材料；
(B)水提醇沉：将所述的中药原材料中的植物药(三七、海螵蛸、茜草、红花、甘草)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍95％乙醇，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍95％乙醇，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍95％乙醇，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状；再加入等量的水，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)；
(C)醇提水沉：将所述的中药原材料中的动物药(壁虎、水蛭)按比例用量混全在一起置于中药煎煮锅中煎煮3次，第一次加入药物重量和的8倍水，煮沸后，文火煎50分钟，滤出药液；第二次加入药物重量和的7倍水，煮沸后，文火煎45分钟，滤出药液；第三次加入药物重量和的6倍水，煮沸后，文火煎40分钟，滤出药液；将三次所得药液合并，采用文火将药液蒸发浓缩至稠厚状；再加入等量的无水乙醇，充分混匀，放置过夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸馏回收乙醇，浓缩后静置24h，使沉淀完全过滤，将沉淀用旋转蒸发器80℃水浴浓缩至稠膏(相对比重为1.4/25℃)；
(D)最后将醇沉液和水沉液在-50℃中真空干燥，得粉状中药复方提取物，即得所述的中药复方制剂。
9.一种如权利要求1-7任一所述的中药复方制剂在制备治疗实体肿瘤的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的中药复方制剂在制备治疗实体肿瘤的药物中的应用，其特征在于，所述的实体肿瘤为结直肠癌、食管癌、肺癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、胰腺癌、大肠癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌。
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|---|---|---|---|
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