CN118416054A - 天名精内酯酮在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及天名精内酯酮在制备抗肿瘤药物中的应用，所述天名精内酯酮的结构如下所示：。本发明研究发现并首次提出，天名精内酯酮能够显著杀死肺癌、宫颈癌、肝癌和乳腺癌细胞，抑制肿瘤细胞在小鼠模型体内的增殖、迁移，并促进肿瘤细胞的凋亡。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及天名精内酯酮在制备抗肿瘤药物中的应用。
背景技术
天名精内酯酮是菊科天名精属植物的主要化学成分，常温下为无色粉末，m.p.90-92℃，在常温下易溶于三氯甲烷、乙醚、丙酮等有机溶剂，分子式为C15H20O3，属于倍半萜内酯类化合物，化学结构通式如下所示：
。
前期研究表明天名精内酯酮对中枢神经系统有较显著的作用，给予小鼠后，小鼠在短暂兴奋后即转入神经抑制状态，四肢肌肉松弛，并呈麻醉状态。天名精内酯酮具有较好的抑菌活性，对小麦白粉病、小麦全蚀病、小麦条锈病等几种病害有较好的防治效果。天名精内酯酮对小麦白粉病菌孢子萌发无明显的抑制作用，但对菌落的扩展存在显著的抑制作用，并呈现明显的浓度依赖性，对小麦白粉病菌菌落扩展的抑制中浓度(EC50)为105.4314mg/L。天名精内酯酮对小麦全蚀病菌的生物氧化过程存在明显影响，可能是通过对呼吸电子传递链复合酶活性的影响降低了ATP的合成量，致使菌体能量供应不足。尚没有现有技术研究过天名精内酯酮与肿瘤之间的关系。
发明内容
本发明的目的在于提供天名精内酯酮在制备抗肿瘤药物中的应用。
为了实现上述技术效果，本发明的技术方案如下：
天名精内酯酮在制备抗肿瘤药物中的应用，所述天名精内酯酮的结构如下所示：
。
在其中一个优选的实施例中，所述肿瘤包括肺癌、宫颈癌、肝癌和乳腺癌。
在其中一个优选的实施例中，肿瘤细胞包括HepG2肿瘤细胞、HeLa肿瘤细胞、A549肿瘤细胞和MCF-7肿瘤细胞。
所述天名精内酯酮能够显著杀伤肺癌、宫颈癌、肝癌、乳腺癌细胞，在体内外抑制肿瘤细胞的增殖、迁移，并诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞在小鼠体内的生长。
在其中一个优选的实施例中，所述药物包括所述天名精内酯酮以及其它药学上可接受的成分所构成的组合物或复合物或混合物或亚硫酸钠加成物，其可以与其他药物联合作用。
本发明中，“其他药学上可接受的成分”是指包括但不限于与天名精内酯酮没有拮抗作用的药物或其他成分，也可以是药学上允许或可接受的任意一种或多种辅料或其他载体。
本发明还提出了所述天名精内酯酮在制备抑制肿瘤细胞的增殖、迁移或促进肿瘤细胞凋亡的药物中的应用。
一种治疗肿瘤的组合物，所述组合物含有有效剂量的天名精内酯酮。
在其中一个优选的实施例中，所述组合物的产品剂型包括胶囊剂、片剂、口服制剂、微囊制剂、注射剂、软膏剂、喷雾剂或栓剂。
在其中一个优选的实施例中，所述组合物的给药方式为注射、口服、胃肠外、吸入式喷雾或透皮给药。
在其中一个优选的实施例中，所述天名精内酯酮占所述组合物总干重的0.001-100wt %。
本发明研究发现并首次提出，天名精内酯酮能够显著杀伤肺癌、宫颈癌、肝癌、乳腺癌细胞，抑制肿瘤细胞在小鼠模型体内的生长。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是天名精内酯酮的体外抗肺癌肿瘤细胞毒性检测结果；
图2是天名精内酯酮的体外抗肝癌肿瘤细胞毒性检测结果；
图3是天名精内酯酮的体外抗乳腺癌肿瘤细胞毒性检测结果；
图4是天名精内酯酮的体外抗宫颈癌肿瘤细胞毒性检测结果；
图5是天名精内酯酮的体外降低肺癌肿瘤细胞迁移能力检测结果；
图6是天名精内酯酮的体外降低肺癌肿瘤细胞克隆斑点生成检测结果；
图7是天名精内酯酮的体外阻滞肺癌肿瘤细胞凋亡水平检测结果；
图8是天名精内酯酮的抗肺癌肿瘤荷瘤小鼠体内实验结果；
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
实施例1
天名精内酯酮的体外抗肿瘤细胞实验
HepG2、HeLa、A549、MCF-7细胞从北京协和医学院细胞资源中心获得，HepG2、HeLa、MCF-7在含有10 %胎牛血清（FBS）、链霉素（100 g/mL）和青霉素（100 U/mL）的DMEM高糖培养基中5 %CO2培养箱、37 ℃培养，A549培养基为1640培养基中5 %CO2培养箱、37 ℃培养。
分别将HepG2、HeLa、A549、MCF-7细胞置于96孔板中并加入不同浓度梯度的天名精内酯酮（每种细胞中加入的浓度梯度设置不同，其中HepG2、HeL加入的浓度梯度为：0、14.6、21.9、32.9、49.4、74.1、111.1、166.7、250.0μM；MCF-7加入的浓度梯度为：0、9.8、14.6、21.9、32.9、49.4、74.1、111.1、166.7、250.0μM；A549加入的浓度梯度为0、0.05、0.1、0.5、1、5、10、50、100、200μM），孵育48小时后，将细胞与CCK-8试剂再孵育2小时。然后在酶标仪（Bio-Tek）采取分光光度法测定450nm处的吸光度。每种药物的50%抑制浓度（IC50）由代表X轴上的所用药物浓度（对数尺度）和Y轴上的生存能力（线性尺度）的剂量-生存曲线确定。细胞毒性的测试结果如图1-4所示，天名精内酯酮对肿瘤代表细胞株HepG2、HeLa、A549、MCF-7细胞均具有抑制作用，其中对HepG2的抑制浓度IC50≈40μM，对HeLa的抑制浓度IC50≈35μM，对MCF7的抑制浓度IC50≈33μM，对A549的抑制浓度IC50最低，IC50在10μM以下。这表明天名精内酯酮对多种肿瘤都有细胞毒性，且对肺癌细胞A549抑制效果最好。
对细胞集落生长形成测定，将A549细胞接种在6孔板中，用5μM、10μM的天名精内酯酮处理10天，并用结晶紫溶液染色，计数超过50个细胞的细胞集落，使用克隆斑形成实验，检测药物对肿瘤细胞聚集生长的影响，结果如图5所示，结果表明天名精内酯酮对肿瘤细胞A549的克隆斑形成随着药量的增加逐渐减少，呈现显著性差异（P<0.05）量效关系明确。
使用细胞划痕实验检测天名精内酯酮对肿瘤细胞的迁移能力的作用，A549细胞贴壁80%左右时，用移液枪枪头划出等距离的划痕，设置空白对照、天名精内酯酮5μM，10μM药物组，在含有10 %胎牛血清（FBS）、链霉素（100 g/mL）和青霉素（100U/mL）的DMEM培养基中5% CO2培养箱、37℃培养24小时后，拍照记录划痕，比较划痕宽度。如图 6所示，结果表明天名精内酯酮对A549细胞的迁移具有抑制作用，用药组和对照组之间呈现显著性差异（P<0.05）。
Calcein-AM是一种常用的对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，发出绿色荧光（Ex=490 nm, Em=515 nm），能够检测早期的细胞凋亡。如上述所述将A549细胞铺96孔板，5μM和10μM刺激12小时后，洗去培养基，用2μM探针染色在缓冲液中染色20 min后，荧光显微镜拍照（Ex=490 nm, Em=515 nm）。结果如图7所示，5μM、10μM下A549活细胞数量明显降低，且呈现量效关系，表明天名精内酯酮具有对A549细胞的抑制作用，能够促进肿瘤细胞凋亡（图7）。
实施例2
天名精内酯酮对A549小鼠移植瘤生长的影响
免疫缺陷小鼠分为两组，每组5只，6周龄雌鼠，每只注射等量A549细胞成细胞瘤。当肿瘤大小达到约100 mm3时，小鼠每天腹腔注射天名精内酯酮(10mg/Kg组和50mg/Kg组)或0.9%生理盐水作为对照组，持续28天。每周通过测量肿瘤的两个垂直直径并使用公式V=长度（mm）×宽度（mm）2/2来确定肿瘤体积V，每周记录体重。在治疗结束时，按照动物伦理要求处死小鼠，切除其肿瘤和主要器官以进行实验。实验结果如图8所示，天名精内酯显著降低了小鼠肿瘤重量，具有显著的统计差异（P<0.05）。
Claims (8)
1.天名精内酯酮在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述天名精内酯酮的结构如下所示：
。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括肺癌、宫颈癌、肝癌和乳腺癌。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包括天名精内酯酮以及其它药学上可接受的成分。
4.天名精内酯酮在制备抑制肿瘤细胞的增殖、迁移或促进肿瘤细胞凋亡的药物中的应用。
5.一种治疗肿瘤的组合物，其特征在于，所述组合物含有有效剂量的天名精内酯酮。
6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，组合物的产品剂型包括胶囊剂、片剂、口服制剂、微囊制剂、注射剂、软膏剂、喷雾剂或栓剂。
7.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，所述组合物的给药方式为注射、口服、胃肠外、吸入式喷雾或透皮给药。
8.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，天名精内酯酮占组合物总干重的0.001-100wt％。
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