CN118340773A

CN118340773A - Itsa1在制备抗肿瘤药物增敏剂中的应用和一种肿瘤化疗药物组合物

Info

Publication number: CN118340773A
Application number: CN202410500695.3A
Authority: CN
Inventors: 赵宝生; 刘玉珍; 杨文倩; 齐鹏举; 齐博; 霍书华
Original assignee: First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University
Current assignee: First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University
Priority date: 2024-04-24
Filing date: 2024-04-24
Publication date: 2024-07-16

Abstract

本发明涉及ITSA1在制备抗肿瘤药物增敏剂中的应用和一种肿瘤化疗药物组合物，属于细胞生物学和医药技术领域。本发明发现ITSA1在抗肿瘤药物治疗肿瘤细胞之后用药，能够增强抗肿瘤药物对肿瘤细胞的敏感性，进而有效抑制肿瘤细胞的增殖，所述ITSA1的结构式为所述抗肿瘤药物为顺铂、紫杉醇或5‑氟尿嘧啶。进一步地，经实验证明，ITSA1和顺铂组合用药在体内和体外均使顺铂的药物作用增强，增加了食管鳞癌细胞对顺铂的敏感性并增强其抑制食管鳞癌细胞增殖的效果，为临床医学治疗食管鳞癌提供了更多的用药选择。

Description

ITSA1在制备抗肿瘤药物增敏剂中的应用和一种肿瘤化疗药物组合物

技术领域

本发明涉及ITSA1在制备抗肿瘤药物增敏剂中的应用和一种肿瘤化疗药物组合物，属于细胞生物学和医药技术领域。

背景技术

食管癌(esophageal carcinoma，ES)是我国最常见的致死性消化道肿瘤之一，以食管鳞癌为主，大部分食管癌发现时已进入中晚期，预后较差。虽然手术切除为食管癌的主要治疗手段，但是对于已经转移的食管癌患者及术前新辅助治疗和术后巩固治疗的食管癌患者仍然需要化疗、放疗或同期放化疗。

半个世纪以来，肿瘤化疗迅速发展，各种抗肿瘤药物如阿霉素、柔红霉素、顺铂、5-氟尿嘧啶、紫杉醇等相继应用于临床。顺铂(cisplatin，DDP)又名顺-双氯双氨络铂，是一代铂类化疗药物，为一种周期非特异性抗肿瘤药物，是食管癌化疗一线药物。另外，顺铂具有广谱抗肿瘤作用，在临床上是多种肿瘤的一线化疗药物。5-氟尿嘧啶(5-Fiuorouracil，5-Fu)是目前应用最广的抗嘧啶类药物，对消化道肿瘤及其他实体瘤有良好的疗效，在肿瘤治疗中占有重要地位。紫杉醇(Paclitaxel)是一种四环二萜化合物，来源于红豆杉，主要用于治疗卵巢癌和乳腺癌，对食管癌、肺癌、大肠癌、黑色素瘤、头颈部瘤、淋巴瘤、脑瘤等也都有一定疗效。尽管上述肿瘤化疗药物治疗效果显著，但是其毒副作用强，另外在临床上，随着化疗时间的增加，肿瘤细胞会对药物的敏感性下降，产生耐药性。因此，联合用药，增加药物化疗敏感性以及提高药物的作用效果显得十分重要。

曲古霉素A(trichostatin A，TSA)是组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，HDAC)的抑制剂，HDAC可以催化组蛋白的去乙酰化，抑制基因的转录。为了探究TSA抑制HDAC作用的上下游信号分子，哈佛大学Dr.Schreiber团队通过化学遗传学修饰方法，在9600个小分子化合物中鉴定出了23个TSA抑制剂(inhibitor of TSA，ITSA)，其中ITSA1(inhibitor of TSA 1)又称为ITSA-1，具有较好的溶解度和抑制效。ITSA1是一种苯并三唑类小分子化合物，分子式为C_l3H₇Cl₂N₃O，分子量为292.12g/mol，能够渗透进入细胞。最先被发现是作为TSA的抑制剂ITSA1拮抗TSA诱导的细胞周期停滞、组蛋白和微管蛋白的乙酰化及转录激活；此外，ITSA1逆转了TSA对HDAC活性的抑制作用。基于美国哈佛大学的化学与生物化学实验室的Kathryn M.Koeller团队的结果，ITSA1抑制TSA作用具有以下特征：1)ITSA1不是通过与TSA直接结合抑制其功能，因为它们之间并不发生直接的化学反应；2)ITSA1的靶点需要TSA诱导后才会出现，而组蛋白乙酰化可能是ITSA1与靶点结合的触发条件；3)ITSA1不共价修饰组蛋白或HAT，也不破坏HAT或其底物。相关文献报道ITSA1在无TSA得作用下，激活HDAC的活性，包括HDAC1/2，HDAC3和HDAC6。

综上，ITSA1不仅仅是TSA抑制剂，而且在特定条件下还表现出除了TSA抑制作用之外的功能，且目前尚未有关ITSA1具有抗肿瘤药物增敏剂功能的报道。

发明内容

本发明的第一个目的是提供ITSA1在制备抗肿瘤药物增敏剂中的应用，为现有技术提供一种新的、副作用小的用于抗肿瘤药物的增敏剂。

本发明的第二个目的是提供一种肿瘤化疗药物组合物，以解决现有技术中随着化疗时间的增加，肿瘤细胞会对药物的敏感性下降的问题。

为了实现上述目的，本发明中ITSA1在制备抗肿瘤药物增敏剂中的应用的技术方案是：

ITSA1在制备抗肿瘤药物增敏剂中的应用，所述ITSA1的结构式为所述抗肿瘤药物为顺铂、紫杉醇或5-氟尿嘧啶。

上述技术方案的有益效果在于：本发明ITSA1在制备抗肿瘤药物增敏剂中的应用为开拓性发明。本发明通过实验证明，无论在体内动物实验还是体外细胞实验，ITSA1均可以用作肿瘤细胞化疗药物顺铂的增敏药物抑制食管鳞癌细胞的生长；然而，体外细胞实验显示，单独给予ITSA1并不影响食管癌细胞增殖；当与顺铂、紫杉醇或5-氟尿嘧啶联用时，ITSA1剂量依赖性的增强顺铂、紫杉醇或5-氟尿嘧啶对食管癌细胞增殖的抑制作用。这充分说明ITSA1能作为抗肿瘤药物的增敏剂，为之后抗肿瘤药的联合应用提供了有力的证据和基础。

进一步地，现有技术表明ITSA1的毒副作用极小，基本无明显影响，是一种潜在的高效低毒的抗肿瘤药物增敏剂。

作为进一步地改进，所述肿瘤为食管癌。

优选地，所述肿瘤为食管鳞癌。

作为进一步地改进，所述抗肿瘤药物为顺铂。

上述技术方案的有益效果在于：顺铂是一种作用强且为临床治疗肿瘤患者的一线化疗药物，同时也是食管癌患者的化疗首选药，但是对机体的毒副作用强，患者不易耐受。而本发明通过实验证明ITSA1可以增强食管癌细胞对顺铂的敏感性，这意味着，当ITSA1和顺铂联合使用时，需要较低的顺铂量即可达到肿瘤细胞较高的死亡率，这减少了顺铂的使用量，相对应也降低了顺铂的毒副作用，能减轻患者化疗时机体的负担，有重要的临床意义。

为了实现上述目的，本发明中一种肿瘤化疗药物组合物的技术方案是：

一种肿瘤化疗药物组合物，所述肿瘤化疗药物组合物包括ITSA1和抗肿瘤药物；所述ITSA1的结构式为所述抗肿瘤药物为顺铂、紫杉醇或5-氟尿嘧啶。

上述技术方案的有益效果在于：本发明首次发现ITSA1能够增强食管癌细胞抗肿瘤药物化疗的敏感性，将ITSA1与抗肿瘤药物联合使用，可使用较小量的抗肿瘤药物即能达到对癌细胞的抑制，为肿瘤化疗提供了一种新的研究方向。

优选地，所述肿瘤化疗药物组合物包括药学上可接受的载体或赋形剂。

优选地，所述ITSA1的用药量为10～20mg/kg。

作为进一步地改进，所述抗肿瘤药物为顺铂，顺铂与ITSA1的摩尔比为1：(2～8)。

作为进一步地改进，所述抗肿瘤药物为紫杉醇，紫杉醇与ITSA1的摩尔比为0.0025：(10～40)。

作为进一步地改进，所述抗肿瘤药物为5-氟尿嘧啶，5-氟尿嘧啶与ITSA1的用量比为0.25g：(10～40)mol。

作为进一步地改进，所述肿瘤为食管癌。

优选地，所述肿瘤为食管鳞癌。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

1、本发明首次发现ITSA1可以增强食管癌细胞对抗肿瘤药物化疗的敏感性。通过实验证明在食管鳞癌细胞中，ITSA1联合顺铂、紫杉醇或5-氟尿嘧啶抑制肿瘤细胞的增殖：单独给与ITSA1无明显作用，ITSA1在给与顺铂、紫杉醇或5-氟尿嘧啶后加入，检测食管鳞癌细胞的增殖情况，发现顺铂、紫杉醇或5-氟尿嘧啶联合ITSA1抑制食管鳞癌细胞增殖作用呈现了剂量和时间依赖性。ITSA1联合顺铂使食管鳞癌细胞周期阻滞在G2/M期。同时，ITSA1联合顺铂使用增加了食管鳞癌细胞的凋亡，这些为ITSA1作为肿瘤细胞化疗药物顺铂增敏药物提供了作用机制。ITSA1联合顺铂使用明显抑制了食管鳞癌细胞的迁移能力，其联合抑制迁移的能力与ITSA1的剂量也呈现了剂量依赖性抑制。ITSA1联合顺铂使用明显抑制了动物肿瘤的生长，并减轻了肿瘤的重量。同时，肿瘤增殖标志物Ki-67的表达明显下降。

2、ITSA1是一个小分子化合物，其单独使用并无毒副作用，为治疗肿瘤细胞提供了保障。但是，这样的联合应用需要进一步试验和临床机制。本发明为以后的临床研究提供了有力的证据和基础。

附图说明

图1为本发明实施例1中顺铂抑制食管鳞癌细胞增殖和ITSA1对食管鳞癌细胞增殖的影响；

图2为本发明实施例2中ITSA1联合顺铂剂量与食管鳞癌细胞增殖能力的关系图(MTT法，其中，A代表KYSE-150细胞，B代表KYSE-450细胞，***代表P<0.001，**代表P<0.01，*代表P<0.05)；

图3为本发明实施例2中ITSA1联合顺铂剂量与食管鳞癌细胞增殖能力的关系图(结晶紫染色法，其中A代表KYSE-150细胞和KYSE-450细胞克隆形成能力，B代表细胞克隆数的统计，***代表P<0.001，**代表P<0.01，*代表P<0.05)；

图4为本发明实施例3中ITSA1联合顺铂阻滞食管鳞癌细胞周期图(其中，A代表KYSE-150细胞，B代表KYSE-450细胞，***代表P<0.001，**代表P<0.01)；

图5为本发明实施例3中ITSA1联合顺铂促进食管鳞癌细胞凋亡图(其中，A代表KYSE-150细胞，B代表KYSE-450细胞，***代表P<0.001，**代表P<0.01)；

图6为本发明实施例4中ITSA1联合顺铂抑制食管鳞癌细胞迁移的Transwell小室染色图(其中，其中A代表KYSE-150细胞和KYSE-450细胞的迁移能力，B代表细胞迁移统计分析结果，***代表P<0.001，**代表P<0.01，NS代表无显著性差异)；

图7为本发明实施例5中ITSA1联合顺铂抑制食管鳞癌细胞移植瘤的生长情况(其中，A代表给药后BALB/c裸鼠体重的变化，B代表给药后食管鳞癌细胞移植瘤体积的变化，C代表给药后食管鳞癌细胞移植瘤的直观图，D代表给药后食管鳞癌细胞移植瘤的重量变化，***代表P<0.001，**代表P<0.01，*代表P<0.05，NS代表无显著性差异)；

图8为本发明实施例6中ITSA1联合顺铂组与单独顺铂组中Ki-67的表达情况；

图9为本发明实施例7中ITSA1联合5-氟尿嘧啶或紫杉醇对食管鳞癌细胞增殖的影响(其中，A代表ITSA1与紫杉醇联合用药的检测结果，B代表ITSA1与5-氟尿嘧啶联合用药的检测结果，***代表P<0.001，**代表P<0.01)。

具体实施方式

现有技术中随着化疗时间的增加，肿瘤细胞会对药物的敏感性下降，产生耐药性，而联合用药、增加药物化疗敏感性以及提高药物的作用效果。本发明通过研究发现，在食管鳞癌细胞中，单独给与ITSA1无明显作用，而ITSA1在给与抗肿瘤药物(顺铂、紫杉醇和5-氟尿嘧啶)后加入，能显著抑制食管鳞癌细胞的增殖作用，且呈现了剂量和时间的依赖性。

进一步地，通过研究发现ITSA1联合顺铂使食管鳞癌细胞周期阻滞在G2/M期。同时，ITSA1联合顺铂使用增加了食管鳞癌细胞的凋亡，这些为ITSA1作为肿瘤细胞化疗药物顺铂增敏药物提供了作用机制。ITSA1联合顺铂使用明显抑制了食管鳞癌细胞的迁移能力，其联合抑制迁移的能力与ITSA1的剂量也呈现了剂量依赖性。ITSA1联合顺铂使用明显抑制了动物肿瘤的生长，并减轻了肿瘤的重量。且肿瘤增殖标志物Ki-67的表达明显下降。本发明的实验结果充分证明，无论在体内动物实验还是体外细胞实验，ITSA1可以用作肿瘤细胞化疗药物顺铂的增敏药物抑制食管鳞癌细胞的生长，并且在体外，当单独给与ITSA1时，其本身不会对肿瘤细胞产生毒性，其抗肿瘤作用伴随着ITSA1剂量的增加而增强。

下面结合具体实施方式对本发明作进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此；但这些实施例仅是个范例，并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂厂家购买得到的。

下述实施例及实验例中涉及到的部分生物材料、实验试剂、实验设备等情况简要介绍如下：

材料：

材料：人食管鳞癌细胞株KYSE-450及KYSE-150购于中科院上海生命科学研究院，RPMI1640培养基购自Corning公司；FBS购自BI公司；1％青霉素-链霉素混合液及DMSO购自Solarbio公司，胰酶购自Gibco公司。

药物配置：

顺铂溶于PBS中配置成10mM的母液备用，顺铂购于Selleck公司；ITSA1溶于DMSO中配置成50mM母液备用，ITSA1购于Selleck公司；5-氟尿嘧啶溶于DMSO中配置成1mg/mL的母液备用，紫杉醇溶于DMSO中配置成10μM母液备用，5-氟尿嘧啶和紫杉醇均购于Selleck公司。

本发明实施例中的细胞培养过程如下：KYSE-150及KYSE-450细胞培养于含10％胎牛血清及1％青霉素和链霉素的1640培养基。细胞置于体积分数5％ CO₂，37℃培养箱内培养，本实施例中取对数生长期细胞用于实验。

本发明实施例中数据处理过程如下：采用SPSS26.0软件进行统计学分析，实验数据以均值±标准差表示，采用独立样本t检验进行统计学分析。检验水准为α＝0.05，P<0.05具有统计学意义。

一、本发明ITSA1在制备抗肿瘤药物增敏剂中的应用的具体实施例：

本发明发现在食管鳞癌细胞中，ITSA1联合抗肿瘤药物可以抑制肿瘤细胞的增殖，并对ITSA1对顺铂的增敏功能进行进一步的研究，具体实施操作如下：

实施例1 MTT法检测顺铂和ITSA1单独用药对食管鳞癌细胞的影响

本实施例利用MTT法检测顺铂对四种常用的食管鳞癌细胞进行检测，以确定后续实施例所使用的食管鳞癌细胞模型，并利用ITSA1单独作用于食管鳞癌细胞，以确定ITSA1对食管鳞癌细胞的作用，具体操作如下：

1、食管鳞癌细胞的选择

在96孔板中，接种3000/孔的KYSE-450/150/140/510细胞，次日给与不同浓度(1、5、10、15、20μM)的顺铂处理肿瘤细胞。培养48h后，加入20μL MTT(5μg/mL)，培养箱培养2h。吸弃培养液，每孔加入150μL DMSO，采用酶标仪(A490nm/560nm吸光值)检测光密度。

顺铂是临床治疗食管鳞癌的一线用药，不同浓度的顺铂对食管鳞癌细胞增殖的抑制作用不同，随着顺铂浓度增加抑制食管鳞癌细胞增殖的作用越强。检测结果如图1所示(图1A)，顺铂抑制KYSE-450/150/140/510细胞的增殖，但是抑制作用不同，最终选择对顺铂相对较不敏感的KYSE-450和KYSE-150进行后续实验。

2、ITSA1单独作用食管鳞癌细胞

在96孔板中，接种3000/孔的KYSE-450/150细胞，次日给与不同浓度(10、20、40μM)的ITSA1处理肿瘤细胞(对照使用同等给药体积的DMSO)。培养48h后，加入20μL MTT(5μg/mL)，培养箱培养2h。吸弃培养液，每孔加入150μL DMSO，采用酶标仪(A490nm/560nm吸光值)检测光密度。

为了展示出后续ITSA1联合顺铂抑制食管鳞癌细胞增殖作用，使用ITSA1单独作用食管鳞细胞的检测结果如图1(图1B)，由图中可知ITSA1单独给药对食管鳞癌细胞无作用。

同时，根据图1(图1A和图1B)所示的结果，本发明选择大于顺铂药物半数致死率的顺铂浓度为5μM和ITSA1浓度为10μM、20μM、40μM进行后续实施例的验证。

实施例2 ITSA1联合顺铂对KYSE-450和KYSE-150细胞增殖影响的检测

本实施例利用MTT法和结晶紫染色法检测ITSA1联合顺铂对KYSE-450和KYSE-150细胞增殖的影响，具体操作如下：

在顺铂药物处理肿瘤细胞后4h加入不同浓度的ITSA1，培养24h、48h或72h后，加入20μL MTT(5μg/mL)培养箱培养2h。吸弃培养液，每孔加入150μL DMSO，采用酶标仪(A490nm/560nm吸光值)检测光密度。

为了说明ITSA1联合顺铂对KYSE-450和KYSE-150细胞增殖的影响，运用MTT实验，肿瘤细胞在给与顺铂后，分别给与不同浓度的ITSA1增敏药物，观察肿瘤细胞顺铂联合ITSA1治疗后食管鳞癌细胞的生长情况。检测结果见图2所示，由图中可以看出，ITSA1增强了顺铂的抑制食管鳞癌细胞的生长的能力并呈现了剂量依赖性。

另外运用结晶紫染色检测顺铂联合ITSA1细胞增殖的情况。分别接种KYSE-150、KYSE-450细胞于4×10⁴/孔在六孔板，第二天ITSA1在顺铂之后加入，培养48h，使用结晶紫染色，拍照。细胞生长检测采用细胞存活率＝加药组/对照组值×100％的方式计算细胞存活率。

为了说明ITSA1联合顺铂对KYSE-450和KYSE-150细胞增殖的影响，运用克隆形成实验，肿瘤细胞在给与顺铂后，分别给与不同浓度的ITSA1增敏药物，观察肿瘤细胞顺铂联合ITSA1治疗后食管鳞癌细胞的生长情况。检测结果见图3所示，由图中可以看出，ITSA1增强了顺铂的抑制食管鳞癌细胞的生长的能力并呈现了剂量依赖性。

实施例3细胞周期及细胞凋亡情况的检测

本实施例通过PI标记检测细胞周期变化和Annexin V和PI双染法检测细胞的凋亡情况，具体操作如下：

将对照组和实验组细胞接种到6孔板中，实验组加入顺铂+ITSA1处理细胞，对照组分别加入PBS+DMSO、顺铂+DMSO、PBS+ITSA1处理细胞，48h后收集细胞，细胞周期检测每孔中分别加入碘化丙啶(50μg/mL)5μL和400μL结合缓冲液染色30分钟，细胞凋亡检测每孔中加入碘化丙啶(50μg/mL)5μL、Annexin-V(20μg/mL)10μL和400μL结合缓冲液染色15分钟，并立即使用流式细胞仪器测量。

细胞周期检测结果如图4所示，ITSA1联合顺铂使用可以阻滞食管鳞癌细胞的生长周期，且可以使更多的KYSE-150，KYSE-450细胞阻滞在G2/M期。

而且由图5细胞周期凋亡检测结果可知，ITSA1增加顺铂的治疗作用，可以使食管鳞癌细胞凋亡的数量增加，从而抑制了食管鳞癌细胞的生长。

实施例4细胞迁移情况的检测

本实施例通过Transwell实验检测顺铂联合ITSA1细胞迁移的情况，具体操作如下：

取对数生长期细胞，采用无血清RPIM 1640培养基重悬细胞，调整细胞密度为5.0×10⁵/mL，下室加600μL含10％胎牛血清培养基，将小室放入培养板中，取200μL加入Transwell上室，放入37℃、体积分数5％ CO₂培养箱中培养。40h后使用4％多聚甲醛固定15min，0.1％的结晶紫染色8min，应用棉签轻擦去上室面未迁移细胞。最后于显微镜下观察细胞，取5个不同视野进行拍照记数，统计细胞数量。

ITSA1联合顺铂使用可以抑制食管鳞癌细胞的迁移，并且对ITSA1的剂量呈现了依赖性。如图6所示，在使用ITSA1 40μM时抑制食管鳞癌细胞迁移的作用最强。

实施例5裸鼠皮下异种移植瘤增殖的测定

本实施例将KYSE-150细胞于裸鼠构建小鼠肿瘤模型，研究顺铂联合ITSA1在体内对肿瘤的作用情况，具体操作如下：

将8×10⁶个对数生长期的KYSE-150细胞接种于7周龄的雌性裸鼠的右后肢外侧，皮下注射200μL，每天观察肿瘤的形成情况。当检测到所有裸鼠的肿瘤体积平均长到100mm³，随机的将动物分组，每10只一组，共4组。给药第一组为溶剂对照组DMSO组，第二组为DDP组2mg/kg，第三组为ITSA1 10mg/kg，第四组为DDP+ITSA1组(DDP 2mg/kg+ITSA110mg/kg)，两者的剂量比为1：5。腹腔注射，每4天一个疗程，疗程的第一天上午注射顺铂，下午注射ITSA1，疗程的第二、三天注射ITSA1，第四天不注射。共治疗4个疗程。每周测量瘤体积，裸鼠体重两次。每天观察裸鼠的精神状态。当对照组肿瘤体积长到1000mm³，麻醉致死，保存血液，并剥离肿瘤。储存并固定。肿瘤体积的计算公式为：肿瘤体积(V)＝abc×π/6(a是瘤体最长直径，b是瘤体最短直径，c是瘤体垂直轴)。

在体内实验，严格按照体外实验方法顺铂给药之后给与ITSA1，设计实验选择顺铂2mg/kg、ITSA1 10mg/kg。结果如图7所示，顺铂和ITSA1对荷瘤裸鼠自身的体重不影响。较单独顺铂组，顺铂联合ITSA1组明显抑制肿瘤的生长并减轻肿瘤的重量，而单独的ITSA1给药组对肿瘤基本没有影响。

实施例6移植瘤中肿瘤标志物的检测

本实施例通过免疫组化的方法检测实施例5中各处理组裸鼠中取出肿瘤中的肿瘤标志物Ki-67，具体操作如下：

将肿瘤组织切片进行脱蜡和脱水处理，1×枸橼酸钠微波修复，然后3％ H₂O₂去除内源性过氧化酶，0.2％ Triton通透15min，将组织与10％山羊血清封闭1h，滴加Ki-67(1:300)，4℃过夜，室温孵育二抗30min，DAB显色45s，所有切片均在显微镜下观察拍照。

检测结果如图8所示，由图中可以看出，相比较单独顺铂给药组，顺铂联合ITSA1组Ki-67的表达量明显下降，揭示了顺铂联合ITSA1明显抑制肿瘤细胞的增殖。

综上，顺铂在加入治疗肿瘤细胞后加入增敏药物ITSA1，使顺铂的作用增强，这种联合方法可以明显抑制食管鳞癌细胞的生长，抑制食管鳞癌细胞周期的进程和促进凋亡，另外，还抑制了食管鳞癌细胞的迁移。因此，本发明在顺铂治疗食管鳞癌的同时，给与增敏药物ITSA1，可以有效提高顺铂抑制肿瘤的作用，从而提高化疗药物顺铂的治疗效果。最重要的是，ITSA1不会增加其毒副作用，为临床治疗肿瘤的用药方案提供了新思路。

实施例7ITSA1联合紫杉醇或5-氟尿嘧啶对KYSE-450和KYSE-150细胞增殖影响的检测

本实施例利用MTT法检测ITSA1联合5-氟尿嘧啶、紫杉醇对食管鳞癌细胞增殖的影响，具体操作如下：

在5-氟尿嘧啶(0.25μg/ml)和紫衫醇(2.5nM)处理KYSE-150细胞4h加入不同浓度的ITSA1，培养48h后，加入20μL MTT(5μg/mL)培养箱培养2h。吸弃培养液，每孔加入150μLDMSO，采用酶标仪(A490nm/560nm吸光值)检测光密度。

为了说明ITSA1联合5-氟尿嘧啶或紫杉醇对食管鳞癌细胞增殖的影响，运用MTT实验，肿瘤细胞在给与5-氟尿嘧啶或紫杉醇后，分别给与不同浓度的ITSA1(10μM、20μM、40μM)增敏药物，观察肿瘤细胞5-氟尿嘧啶或紫杉醇联合ITSA1治疗后食管鳞癌细胞的生长情况。检测结果见图9所示，由图中可以看出，ITSA1增强了5-氟尿嘧啶和紫杉醇抑制食管鳞癌细胞的生长的能力并呈现了剂量依赖性。

二、本发明一种肿瘤化疗药物组合物的具体实施例：

实施例8

本实施例的肿瘤化疗药物组合物由ITSA1和顺铂组成，所述ITSA1的结构式为组合物中的ITSA1和顺铂的摩尔比分别为2:1，两者的比例由上述实施例2中获得。

实施例9

本实施例的肿瘤化疗药物组合物由ITSA1和顺铂组成，所述ITSA1的结构式为组合物中的ITSA1和顺铂的摩尔比分别为4:1，两者的比例由上述实施例2中获得。

实施例10

本实施例的肿瘤化疗药物组合物由ITSA1和顺铂组成，所述ITSA1的结构式为组合物中的ITSA1和顺铂的摩尔比分别为8:1，两者的比例由上述实施例2中获得。

当抗肿瘤药物为紫杉醇或5-氟尿嘧啶时，抗肿瘤药物与ITSA1的用量比例可通过实施例7相应确定。

最后说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims

1.ITSA1在制备抗肿瘤药物增敏剂中的应用，其特征在于：所述ITSA1的结构式为所述抗肿瘤药物为顺铂、紫杉醇或5-氟尿嘧啶。

2.根据权利要求1所述的ITSA1在制备抗肿瘤药物增敏剂中的应用，其特征在于：所述肿瘤为食管癌。

3.根据权利要求1或2所述的ITSA1在制备抗肿瘤药物增敏剂中的应用，其特征在于：所述抗肿瘤药物为顺铂。

4.一种肿瘤化疗药物组合物，其特征在于：所述肿瘤化疗药物组合物包括ITSA1和抗肿瘤药物；所述ITSA1的结构式为所述抗肿瘤药物为顺铂、紫杉醇或5-氟尿嘧啶。

5.根据权利要求4所述的肿瘤化疗药物组合物，其特征在于：所述ITSA1的用药量为10～20mg/kg。

6.根据权利要求4所述的肿瘤化疗药物组合物，其特征在于：所述抗肿瘤药物为顺铂，顺铂与ITSA1的摩尔比为1：(2～8)。

7.根据权利要求4所述的肿瘤化疗药物组合物，其特征在于：所述抗肿瘤药物为紫杉醇，紫杉醇与ITSA1的摩尔比为0.0025：(10～40)。

8.根据权利要求4所述的肿瘤化疗药物组合物，其特征在于：所述抗肿瘤药物为5-氟尿嘧啶，5-氟尿嘧啶与ITSA1的用量比为0.25g：(10～40)mol。

9.根据权利要求4～8中任一项所述的肿瘤化疗药物组合物，其特征在于：所述肿瘤为食管癌。