CN118401255A - 紫杉醇缀合化合物、包含所述化合物的药物组合物及它们的使用方法 - Google Patents

Abstract

本文提供了紫杉醇转运体化合物、药物组合物，它们的制备方法以及它们在增殖性、皮肤或眼科疾病或障碍的治疗或预防中的使用方法。

Description

紫杉醇缀合化合物、包含所述化合物的药物组合物及它们的 使用方法

技术领域

本申请要求2021年8月19日提交的美国临时申请号63/235,073的权益，出于所有目的将其整体通过引用并入本文。

本文提供例了紫杉醇缀合化合物；包含所述化合物的药物组合物；产生所述化合物的方法；以及使用所述化合物和组合物进行疗法的方法。所述化合物和组合物可用于例如治疗和预防增殖性、皮肤或眼科疾病或病症的方法、检测增殖性、皮肤或眼科疾病或病症的方法，以及诊断增殖性、皮肤或眼科疾病或病症的方法。

背景技术

尽管多年来取得了许多进展，但是癌症仍然是全球健康问题。癌症是全世界的主要死因之一。在2018年，全世界有1810万例新的癌症病例和950万例癌症相关的死亡。到2040年，每年新的癌症病例的数量预期上升至2950万，并且癌症相关死亡的数量上升至1640万。参见国家癌症研究所(US)(National Cancer Institute)和世界卫生组织(WorldHealth Organization)。

肝癌在撒哈拉以南非洲和东南亚常见。在许多这些国家中，它是最常见的癌症类型。全世界每年有超过800,000人被诊断为患有这种癌症。肝癌也是全世界癌症死亡的主要原因，每年导致超过700,000人死亡。

卵巢癌是女性癌症死亡的第五大原因，在美国估计有22,000名女性确诊，导致15,500人死亡。

胃癌是全世界第4常见的癌症，并且是癌症死亡的第二大原因。40％的胃癌死亡具有肝转移，而53％-60％具有腹膜癌扩散。全身性化疗提供7个月的中位存活期；然而，在腹膜扩散的情况下，中位存活期仅为1-3个月。

结直肠癌是在美国诊断的第三常见的癌症。它每年导致约49,700人死亡，使其成为癌症死亡的第二常见的原因。在诊断时，大约10％的患者具有腹膜扩散，并且这是患有结直肠癌的患者的第二大死因。患有结直肠癌伴腹膜播散的患者的中位总存活期是24个月。

目前，没有化学治疗剂被明确批准用于腹膜内(IP)化疗。目前所有IP化疗临床研究都是通过设计用于静脉内(IV)应用的药物的标签外(off-label)使用进行的。

在全球范围内，皮肤疾病在所有疾病中是第四常见的，其影响世界上近三分之一的人口。Flohr,2021,Brit.J.Dermatol.184(2):189-190。截至2013年，皮肤疾病贡献全球疾病负担的1.79％。Karimkhani等人,2017,JAMA Dermatol.153(5):406-412。

截至2021年，世界上估计有22亿人受到眼科病症的影响。这些病例中几乎有一半是原本可以预防的，或者尚未通过治疗得到解决。如在Ono等人,2010,Am.J.Public Health100(9):1784-1788中所报道，2013年，全球眼病负担估计占全球总疾病负担的4.0％。

需要用于治疗增殖性、皮肤或眼科疾病和病症的另外的疗法。还需要有效用于腹膜内施用以治疗增殖性、皮肤或眼科疾病和障碍的新疗法。

发明内容

本文提供了式(I)的紫杉醇转运体缀合化合物及其子式、包含所述化合物的组合物、产生所述化合物的方法以及在治疗和诊断中使用所述化合物和组合物的方法。所述式(I)的化合物及其子式和实施方案可用于治疗或预防增殖性、皮肤或眼科障碍。在某些实施方案中，所述化合物可以经由腹膜内施用用于治疗或预防增殖性、皮肤或眼科障碍。在某些实施方案中，所述化合物可以经由口服施用用于治疗或预防增殖性障碍。所述式(I)的化合物及其子式和实施方案可用于检测增殖性、皮肤或眼科疾病或病症，以及用于诊断增殖性、皮肤或眼科疾病或病症。

在一个方面，提供了一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：

其中n是1-20的整数。

所述化合物包含与(D-Arg)_n键合的乙酰化L-半胱氨酸氨基酸残基。本说明书至少部分基于如下发现：与在相同位置处包含D-半胱氨酸的相应化合物相比，这种化合物的特性显著改善。在某些实施方案中，与D-半胱氨酸化合物相比，所述化合物提供了改善的水溶性。在某些实施方案中，与D-半胱氨酸化合物相比，所述化合物提供了降低的P-糖蛋白相互作用。在某些实施方案中，与D-半胱氨酸化合物相比，所述化合物提供了延长的药物释放。如生物学实施例2、3和4中所述，这是特别令人惊讶的，因为已知非天然D-氨基酸对蛋白酶切割具有抗性。在某些实施方案中，与D-半胱氨酸化合物相比，所述化合物提供了改善的靶向药物释放。在某些实施方案中，与D-半胱氨酸化合物相比，所述化合物提供了针对癌细胞系的改善的效力。例如，如生物学实施例6中所述，当以9.6mg/kg施用时，化合物3(所述L-半胱氨酸化合物)的肿瘤抑制率为90％±8％，而当以相同剂量施用时，化合物5(所述D-半胱氨酸化合物)的肿瘤抑制率仅为79％±11％。进一步地，在所述剂量和实验条件下，化合物3对实验小鼠没有明显的急性毒性作用，而化合物5导致动物死亡。在某些实施方案中，与D-半胱氨酸化合物相比，所述化合物提供针对耐药的癌细胞系的改善的效力。这在生物学实施例2中例示，其中化合物3针对多药耐药的乳腺癌(MCF7/ADR)细胞系展现出437.5nM的IC₅₀值，而化合物5展现出IC₅₀>1000nM。在某些实施方案中，所述化合物提供这些改善的组合或所有这些改善。在某些方面，所述化合物可用于治疗和预防增殖性、皮肤或眼科疾病的方法中。

在另一个方面，提供了包含式(I)的化合物的组合物。在一些实施方案中，所述组合物是药物组合物。可以使用任何合适的药物组合物。在又一个方面，本文提供了一种包含式(I)的化合物、或其实施方案、或其药物组合物的试剂盒。

在另一个方面，本文提供了使用本文所述的化合物或组合物的方法。在一些实施方案中，所述方法用于治疗。在一些实施方案中，所述方法是诊断方法。在一些实施方案中，所述方法是分析方法。在一些实施方案中，本文所述的化合物或组合物用于治疗疾病或障碍。在一些方面，所述疾病或障碍选自增殖性、皮肤或眼科疾病和病症。在某些实施方案中，所述疾病是癌症。在某些实施方案中，所述疾病是皮肤病。在某些实施方案中，所述疾病是眼科疾病。

本文还提供了本文所述的化合物及其组合物用于疗法的用途。本文还提供了本文所述的化合物及其组合物用于治疗增殖性、皮肤或眼科疾病或障碍的用途。本文还提供了本文所述的化合物及其组合物用于制造药剂的用途。本文还提供了本文所述的化合物及其组合物用于制造用于治疗增殖性、皮肤或眼科疾病或障碍的药剂的用途。在某些实施方案中，所述疾病是脑癌、肝癌、卵巢癌、胃癌或结直肠癌。在某些实施方案中，所述疾病是头颈癌、口腔癌或颌面癌。

附图说明

图1提供了如生物学实施例1中所述的在MCF7/MBA-MD-231细胞中TAX(紫杉醇)、化合物5和化合物3的抗增殖细胞杀伤百分比与浓度的关系。

图2A提供了如生物学实施例1中所述的在Hep 3B细胞中TAX(紫杉醇)、化合物5和化合物3的抗增殖细胞杀伤百分比与浓度的关系。

图2B提供了如生物学实施例1中所述的在Hep G2细胞中TAX(紫杉醇)、化合物5和化合物3的抗增殖细胞杀伤百分比与浓度的关系。

图2C提供了如生物学实施例1中所述的在MCF7/ADR细胞中紫杉醇、化合物5和化合物3的抗增殖细胞杀伤百分比与浓度的关系。

图2D提供了如生物学实施例1中所述的在DLD-1细胞中紫杉醇、化合物5和化合物3的抗增殖细胞杀伤百分比与浓度的关系。

图2E提供了如生物学实施例1中所述的在HCT116细胞中紫杉醇、化合物5和化合物3的抗增殖细胞杀伤百分比与浓度的关系。

图2F提供了如生物学实施例1中所述的在CNE1细胞中紫杉醇、化合物5和化合物3的抗增殖细胞杀伤百分比与浓度的关系。

图2G提供了如生物学实施例1中所述的在22Rv1细胞中紫杉醇、化合物5和化合物3的抗增殖细胞杀伤百分比与浓度的关系。

图3是如生物学实施例5中所述的在21天实验的过程内，与媒介物相比，施用化合物5和化合物3的小鼠的重量变化的图。

图4是在施用化合物5或化合物3期间和之后肿瘤的荧光面积(其为肿瘤生长的指标)的图。在如通过箭头所指示的时间点0、5和10施用化合物5或化合物3并且与媒介物进行比较，如生物学实施例6中所述。

图5是在施用化合物5或化合物3之后第21天的平均肿瘤重量的图。如生物学实施例6中所述，将所述肿瘤重量与媒介物进行比较。

图6A是从施用媒介物、紫杉醇(10mg/kg)或化合物3(9.6mg/kg，与2.5mg/kg等摩尔)的小鼠中取出的肿瘤的图像。如生物学实施例6中所述，在21天实验的第21天从每组中的六只小鼠中取出肿瘤。

图6B是从施用媒介物、紫杉醇(10mg/kg)或化合物5(9.6mg/kg，与2.5mg/kg等摩尔)的小鼠中取出的肿瘤的图像。如生物学实施例6中所述，在21天实验的第21天从每组中的六只小鼠中取出肿瘤。

图7是肿瘤重量比较图。所有肿瘤是在实验的最后一天后获得。如生物学实施例6中所述，将施用化合物5和化合物3的小鼠与施用紫杉醇和媒介物的小鼠进行单独比较。图7是将施用媒介物的小鼠、施用紫杉醇的小鼠和施用化合物5的小鼠与施用化合物3的小鼠进行比较的图。

图8是如生物学实施例6中所述比较施用化合物5和化合物3的小鼠的肿瘤抑制率(IR)的图。

图9是如生物学实施例7中所述的雌性BALB/c裸鼠中化合物3处理的、媒介物处理的和紫杉醇处理的NCI-H460-luc2颅内模型的卡普兰-迈耶存活曲线。

图10是在施用化合物3期间和之后肿瘤的荧光面积(其为肿瘤生长的指标)的图。在如通过箭头所指示的时间点0、5和10施用化合物3并且与媒介物进行比较，如生物学实施例8中所述。

图11是如生物学实施例8中所述，与媒介物相比，比较施用化合物3的小鼠在第17天的肿瘤的荧光面积的图。

图12是在施用化合物3之后第17天的平均肿瘤重量的图。如生物学实施例8中所述，将所述肿瘤重量与媒介物进行比较。

图13是在施用化合物3期间和之后肿瘤的荧光面积(其为肿瘤生长的指标)的图。在如通过箭头所指示的时间点0、5和10施用化合物3并且与媒介物进行比较，如生物学实施例9中所述。

图14是如生物学实施例9中所述，与媒介物相比，比较施用化合物3的小鼠在第21天的肿瘤的荧光面积的图。

图15是在施用化合物3之后第21天的平均肿瘤重量的图。如生物学实施例9中所述，将所述肿瘤重量与媒介物进行比较。

图16是如生物学实施例10中所述，在注射SKOV-3-GFP细胞(6x10⁶/120μL/小鼠)之后，施用媒介物(PBS)的小鼠中腹水形成的图像。

图17A是如生物学实施例10中所述，在注射SKOV-3-GFP细胞(6x10⁶/120μL/小鼠)之后，施用化合物3(9.6mg/kg)的小鼠的图像。未观察到血性腹水。

图17B是如生物学实施例10中所述，在注射SKOV-3-GFP细胞(6x10⁶/120μL/小鼠)之后，施用化合物3(9.6mg/kg，与2.5mg/kg的紫杉醇等摩尔)的小鼠的图像。未观察到血性腹水。

图18是如生物学实施例10中所述，在注射SKOV-3-GFP细胞(8x10⁶/120μL/小鼠)之后，施用媒介物(PBS)的小鼠中腹水形成的图像。

图19是比较从施用媒介物的小鼠和施用化合物3的小鼠中取出的腹水的图像。如生物学实施例10中所述，在注射SKOV-3-GFP细胞(6x10⁶/120μL/小鼠或8x10⁶/120μL/小鼠)之后向小鼠施用媒介物，或在注射SKOV-3-GFP细胞(6x10⁶/120μL/小鼠)之后，向小鼠施用化合物3(9.6mg/kg，与2.5mg/kg的紫杉醇等摩尔)。与从施用化合物3的小鼠中取出的腹水相比，从施用媒介物的小鼠中取出的腹水更多并且是血性的。

具体实施方式

本文描述了可用于治疗增殖性、皮肤或眼科疾病或病症的紫杉醇缀合化合物。

定义

除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语、符号和其他科学用辞旨在具有本公开文本所属领域的技术人员通常理解的含义。在一些情况下，为了清楚和/或便于参考，本文定义了通常理解含义的术语。本文描述或提及的技术和程序通常是本领域技术人员很好理解的并且通常由本领域技术人员使用常规方法加以采用。视情况而定，除非另有说明，否则通常根据制造商定义的方案和条件进行涉及市售试剂盒和试剂的使用的程序。

除非上下文明确指示其他含义，否则如本文所用的单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述”包括复数指示物。

术语“约”指示并涵盖所示的值，以及所述值上下的范围。在某些实施方案中，术语“约”指示指定值±10％、±5％或±1％。在某些实施方案中，术语“约”指示指定值±所述值的一个标准差。在某些实施方案中，例如，在对数尺度(例如，pH)中，术语“约”指示指定值±0.3、±0.2或±0.1。

当提及本文提供的化合物时，除非另外指出，否则以下术语具有以下含义。除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本领域普通技术人员通常所理解相同的含义。在本文中的术语存在多个定义的情况下，除非另有陈述，否则以本部分中的那些定义为准。

除非另有说明，否则如本文所用的术语“保护基团”是指添加至氧、氮或磷原子以防止其进一步反应或用于其他目的的基团。多种氧和氮保护基团是有机合成领域的技术人员已知的。(参见例如，Greene等人,Protective Groups in Organic Synthesis,JohnWiley and Sons,第四版,2006，将所述文献通过引用并入本文)。

“药学上可接受的盐”是指本文提供的化合物的任何盐，所述盐保留所述化合物的生物学特性，并且是无毒的或在其他方面对于药物用途并非是不希望的。此类盐可以源自本领域熟知的多种有机和无机反荷离子。此类盐包括但不限于(1)与以下有机酸或无机酸形成的酸加成盐：如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、氨基磺酸、乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、丙酸、己酸、环戊基丙酸、乙醇酸、戊二酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、山梨酸、抗坏血酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、苦味酸、肉桂酸、扁桃酸、苯二甲酸、月桂酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸、葡庚糖酸、3-苯丙酸、特戊酸、叔丁基乙酸、十二烷基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、环己基氨基磺酸、奎尼酸、粘康酸等；或(2)当存在于母体化合物中的酸性质子发生以下情况时形成的盐：(a)被金属离子(例如，碱金属离子、碱土金属离子或铝离子)或者碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物(如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、氢氧化铝、氢氧化锂、氢氧化锌和氢氧化钡)或氨替代；或(b)与有机碱配位，所述有机碱如脂肪族、脂环族或芳族有机胺，包括但不限于、氨、甲胺、二甲胺、二乙胺、甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、乙二胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、N,N'-二苄基乙-二胺、氯普鲁卡因、普鲁卡因、N-苄基苯乙胺、N-甲基葡糖胺哌嗪、三(羟甲基)-氨基甲烷、四甲基氢氧化铵等。

药学上可接受的盐进一步包括例如但不限于钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、铵盐和四烷基铵盐等，以及当化合物含有碱性官能团时，无毒有机酸或无机酸的盐，如氢卤化物(例如，盐酸盐和氢溴酸盐)、硫酸盐、磷酸盐、氨基磺酸盐、硝酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、三氯乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、环戊基丙酸盐、乙醇酸盐、戊二酸盐、丙酮酸盐、乳酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、山梨酸盐、抗坏血酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸盐、苦味酸盐、肉桂酸盐、扁桃酸盐、苯二甲酸盐、月桂酸盐、甲磺酸盐(methanesulfonate或mesylate)、乙磺酸盐、1,2-乙烷-二磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate或besylate)、4-氯苯磺酸盐、2-萘磺酸盐、4-甲苯磺酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、4-甲基双环[2.2.2]-辛-2-烯-1-甲酸盐、葡庚糖酸盐、3-苯基丙酸盐、特戊酸盐、叔丁基乙酸盐、十二烷基硫酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、羟基萘甲酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、环己基氨基磺酸盐、奎尼酸盐、粘康酸盐等。

关于组合物的术语“基本上不含”或“基本上不存在”是指组合物包含按重量计至少50％、60％、70％、75％、80％、85％或90％，在某些实施方案中，按重量计95％、98％、99％或100％；或在某些实施方案中，95％、98％、99％或100％的化合物的指定对映异构体或非对映异构体。在某些实施方案中，在本文提供的方法和化合物中，化合物基本上不含两种对映异构体之一。在某些实施方案中，在本文提供的方法和化合物中，化合物基本上不含两种非对映异构体之一。在某些实施方案中，在本文提供的方法和化合物中，化合物基本上不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。

术语“差向异构体”是在至少两个立体异构源中心或手性中心中的仅一个处具有相反构型的一对非对映异构体中的一种。例如，式(I)的化合物与包含D-半胱氨酸氨基酸的相应化合物是差向异构体。

类似地，关于组合物的术语“分离的”是指如下组合物，其包含：按重量计至少50％、60％、70％、75％、85％、90％、95％、98％或99％至100％的化合物，含有其他化学种类、对映异构体或非对映异构体的剩余部分。

如本文所用，“对映体过量(ee)”是指描述含有例如单个立体异构源中心的手性物质的纯度的无量纲摩尔比。例如，对映体过量为零将指示外消旋(例如，对映异构体的50:50混合物，或一种对映异构体相对于另一种不过量)。进一步举例，对映体过量为九十九将指示几乎立体纯的对映异构体化合物(即，一种对映异构体相对于另一种显著过量)。对映体过量百分比％ee＝([(R)-化合物]-[(S)-化合物])/([(R)-化合物]+[(S)-化合物])x 100，其中所述(R)-化合物>(S)-化合物；或％ee＝([(S)-化合物]-[(R)-化合物])/([(S)-化合物]+[(R)-化合物])x 100，其中所述(S)-化合物>(R)-化合物。

如本文所用，“非对映体过量(de)”是指描述含有多于一个立体异构源中心的手性物质的纯度的无量纲摩尔比。例如，非对映体过量为零将指示非对映异构体的等摩尔混合物。进一步举例，非对映体过量为九十九将指示几乎立体纯的非对应异构体化合物(即，一种非对映异构体相对于另一种显著过量)。非对映体过量可以经由与ee类似的方法计算。如技术人员将理解的，de通常报告为de百分比(％de)。％de可以以与％ee类似的方式计算。

“溶剂合物”是指进一步包括化学计量或非化学计量量的通过非共价分子间力结合的溶剂的本文提供的化合物或其盐。当溶剂是水时，溶剂合物是水合物。

“同位素组成”是指对于给定原子存在的每种同位素的量，并且“天然同位素组成”是指对于给定原子的天然存在的同位素组成或丰度。含有其天然同位素组成的原子在本文中也可以称为“非富集的”原子。除非另有指定，否则本文列举的化合物的原子意在表示该原子的任何稳定的同位素。例如，除非另有陈述，否则当位置被明确指定为氢(H)时，所述位置应理解为以其天然同位素组成具有氢。

“同位素富集”是指在分子中的给定原子处掺入一定量的特定同位素代替该原子的天然同位素丰度的百分比。例如，在给定位置处氘(D)富集为1％意指，在给定样品中1％的分子在指定位置处含有氘。因为氘的天然存在的分布为约0.0156％，所以在使用非富集的起始材料合成的化合物中的任何位置处的氘富集为约0.0156％。本文提供的化合物的同位素富集可以使用本领域普通技术人员已知的常规分析方法来确定，所述方法包括质谱法和核磁共振光谱法。

“同位素富集的”是指原子具有的同位素组成不同于该原子的天然同位素组成。“同位素富集的”还可以指化合物含有至少一个如下原子，所述原子具有的同位素组成不同于该原子的天然同位素组成。

如本文所用，术语“EC₅₀”是指特定测试化合物以所述特定测试化合物诱导、激发或增强的特定反应的最大表达的50％引发剂量依赖性反应的剂量、浓度或量。

如本文所用，并且除非另有说明，否则术语“IC₅₀”是指特定测试化合物在测量反应的测定中实现对最大的这种反应的50％抑制的量、浓度或剂量。

如本文所用，术语“受试者”和“患者”可互换使用。术语“受试者(subject)”和“受试者(subjects)”是指动物，如哺乳动物，包括非灵长类动物(例如，牛、猪、马、猫、犬、大鼠和小鼠)和灵长类动物(例如，猴(如食蟹猴)、黑猩猩和人))，并且在某些实施方案中是指人。在某些实施方案中，受试者是农场动物(例如，马、牛、猪等)或宠物(例如，犬或猫)。在某些实施方案中，受试者是人。

如本文所用，术语“治疗剂(therapeutic agent)”和“治疗剂(therapeuticagents)”是指可用于障碍或其一种或多种症状的治疗或预防的任何一种或多种药剂。在某些实施方案中，术语“治疗剂”包括本文提供的化合物。在某些实施方案中，治疗剂是已知可用于、或已经用于、或当前正在用于障碍或其一种或多种症状的治疗或预防的药剂。

“治疗有效量”是指化合物或组合物在被施用至受试者用于治疗病症时，足以实现对所述病症的这种治疗的量。“治疗有效量”尤其可以根据化合物、疾病或障碍及其严重程度以及待治疗的受试者的年龄、体重等而变化。

在某些实施方案中，任何疾病或障碍的“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”是指改善受试者中存在的疾病或障碍。在另一个实施方案中，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括改善受试者可能无法辨别的至少一种身体参数。在又另一个实施方案中，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括在身体上(例如，可辨别的症状的稳定化)或在生理上(例如，身体参数的稳定化)或在两方面调节疾病或障碍。在又另一个实施方案中，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括延迟或预防疾病或障碍的发作，或者延迟或预防疾病或障碍的复发。在又另一个实施方案中，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”不包括预防疾病或障碍的发作，或者预防疾病或障碍的复发。在又另一个实施方案中，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括减少或消除疾病或障碍，或延缓疾病或障碍或疾病或障碍的一种或多种症状的进展，或降低疾病或障碍或疾病或障碍的一种或多种症状的严重程度。

如本文所用，如所使用的术语“预防剂(prophylactic agent)”和“预防剂(prophylactic agents)”是指可用于预防障碍或其一种或多种症状的任何一种或多种药剂。在某些实施方案中，术语“预防剂”包括本文所述的化合物。在某些其他实施方案中，术语“预防剂”不是指本文提供的化合物。例如，预防剂是已知可用于、或已经用于、或当前正在用于预防或阻碍障碍的发作、发展、进展和/或严重程度的药剂。

如本文所用，短语“预防有效量”是指疗法(例如，预防剂)足以导致预防或减少与障碍相关的一种或多种症状的发展、复发或发作，或足以增强或改善另一种疗法(例如，另一种预防剂)的一种或多种预防效果的量。

式(I)-(II)的化合物

本文提供了可用于治疗或预防增殖性、皮肤或眼科疾病或障碍的紫杉醇缀合化合物。所述化合物可以如本文所述制备并用于疗法或诊断。在某些实施方案中，所述疗法是增殖性、皮肤或眼科疾病或障碍的治疗。

本文所述的实施方案包括所列举的化合物以及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物。

在某些实施方案中，提供了一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物：

其中n是选自1-20的整数。在某些实施方案中，n是1。在某些实施方案中，n是2。在某些实施方案中，n是3。在某些实施方案中，n是4。在某些实施方案中，n是5。在某些实施方案中，n是6。在某些实施方案中，n是7。在某些实施方案中，n是8。在某些实施方案中，n是9。在某些实施方案中，n是10。在某些实施方案中，n是11。在某些实施方案中，n是12。在某些实施方案中，n是13。在某些实施方案中，n是14。在某些实施方案中，n是15。在某些实施方案中，n是16。在某些实施方案中，n是17。在某些实施方案中，n是18。在某些实施方案中，n是19。在某些实施方案中，n是20。在某些实施方案中，n是6-10的整数。在优选的实施方案中，n是8。

在某些实施方案中，提供了一种式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物：

在某些实施方案中，本文所述的化合物具有大于零的de或％de。例如，在某些实施方案中，本文所述的化合物具有约十的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有约二十五的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有约五十的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有约七十五的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有约八十的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有约八十五的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有约九十的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有约九十五的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有约九十七的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有约九十八的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有约九十九的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有一百的de或％de。

在某些实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物按重量计至少约50％不含、至少约60％不含、至少约70％不含、至少约75％不含、至少约80％不含、至少约85％不含、至少约90％不含、至少约95％不含、至少约97％不含、至少约99％不含或100％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物约85％-95％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物约90％-95％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物至少约85％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物至少约90％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物至少约95％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物至少约97％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物100％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。

在某些实施方案中，式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物按重量计至少约50％不含、至少约60％不含、至少约70％不含、至少约75％不含、至少约80％不含、至少约85％不含、至少约90％不含、至少约95％不含、至少约97％不含、至少约99％不含或100％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物约85％-95％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物约90％-95％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物至少约85％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物至少约90％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物至少约95％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物至少约97％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，式(II)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物100％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。

在某些实施方案中，提供了一种式(X)的化合物或其药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、互变异构体和/或混合物：

其中与式(X)的所有立体异构体的总重量相比，所述式(X)的化合物按重量计包含至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或100％的式(I)的化合物：

其中n是选自1-20的整数。

在某些实施方案中，与式(X)的所有立体异构体的总重量相比，式(X)的化合物按重量计包含至少约50％或更多的式(I)的化合物。在某些实施方案中，与式(X)的所有立体异构体的总重量相比，式(X)的化合物按重量计包含至少约75％或更多的式(I)的化合物。在某些实施方案中，与式(X)的所有立体异构体的总重量相比，式(X)的化合物按重量计包含至少约80％或更多的式(I)的化合物。在某些实施方案中，与式(X)的所有立体异构体的总重量相比，式(X)的化合物按重量计包含至少约85％或更多的式(I)的化合物。在某些实施方案中，与式(X)的所有立体异构体的总重量相比，式(X)的化合物按重量计包含至少约90％或更多的式(I)的化合物。在某些实施方案中，与式(X)的所有立体异构体的总重量相比，式(X)的化合物按重量计包含至少约95％或更多的式(I)的化合物。在某些实施方案中，与式(X)的所有立体异构体的总重量相比，式(X)的化合物按重量计包含至少约97％或更多的式(I)的化合物。在某些实施方案中，与式(X)的所有立体异构体的总重量相比，式(X)的化合物按重量计包含至少约98％或更多的式(I)的化合物。在某些实施方案中，与式(X)的所有立体异构体的总重量相比，式(X)的化合物按重量计包含至少约99％或更多的式(I)的化合物。在一个实施方案中，式(X)的化合物按重量计是100％的式(I)的化合物。

在某些实施方案中，本文所述的化合物具有范围为约五十至一百的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有范围为约六十至一百的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有范围为约七十至一百的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有范围为约七十五至一百的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有范围为约八十至一百的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有范围为约八十五至一百的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有范围为约九十至一百的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有范围为九十五至一百的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有范围为约九十七至一百的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有范围为约九十八至一百的de或％de。在某些实施方案中，本文所述的化合物具有范围为约九十九至一百的de或％de。

在一些实施方案中，本文提供了式(I)-(II)中的任一式的化合物的组合物，其基本上不含该化合物的指定的立体异构体。在一些实施方案中，本文提供了式(I)-(II)中的任一式的化合物的组合物，其基本上不含该化合物的指定的立体异构体，其中所述指定的立体异构体是相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在某些实施方案中，在本公开文本的方法和化合物中，化合物基本上不含其他立体异构体。在某些实施方案中，在本公开文本的方法和化合物中，化合物基本上不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一些实施方案中，组合物包含化合物，所述组合物按重量计是至少约50％、60％、70％、75％、85％、90％、95％、98％或99％至100％的所述化合物，剩余部分包含其他化学种类或立体异构体。在一些实施方案中，组合物包含式(I)或(II)的化合物，所述组合物按式(I)或(II)的化合物的重量计至少约50％、60％、70％、75％、85％、90％、95％、98％或99％至100％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一些实施方案中，本文提供了式(I)-(II)中的任一式的化合物的组合物，其基本上不含该化合物的指定的立体异构体。在某些实施方案中，在本公开文本的方法和化合物中，化合物基本上不含其他立体异构体。在一些实施方案中，组合物包含化合物，所述组合物按重量计包含至少约50％、60％、70％、75％、85％、90％、95％、98％或99％至100％的所述化合物，剩余部分包含其他化学种类或立体异构体。

同位素富集的化合物

本文还提供了同位素富集的化合物，其包括但不限于式(I)-(II)中任一式的同位素富集的化合物。

先前已经在一些类别的药物中证明了药物的同位素富集(例如，氘化)可改善药代动力学(“PK”)、药效学(“PD”)和/或毒性特征。参见例如，Lijinsky等人,FoodCosmet.Toxicol.,20:393(1982)；Lijinsky等人,J.Nat.Cancer Inst.,69:1127(1982)；Mangold等人,Mutation Res.308:33(1994)；Gordon等人,Drug Metab.Dispos.,15:589(1987)；Zello等人,Metabolism,43:487(1994)；Gately等人,J.Nucl.Med.,27:388(1986)；Wade D,Chem.Biol.Interact.117:191(1999)。

药物的同位素富集可用于例如(1)减少或消除不需要的代谢物；(2)增加母体药物的半衰期；(3)减少实现期望效果所需的剂量数；(4)减少实现期望效果所必须的剂量的量；(5)增加活性代谢物的形成(如果有任何形成的话)；和/或(6)减少特定组织中有害代谢物的产生。药物的同位素富集也可以用于产生用于组合疗法的更有效和/或更安全的药物，无论所述组合疗法是否是有意的。

用原子替代其同位素中的一种通常将导致化学反应的反应速率变化。这种现象被称为动力学同位素效应(“KIE”)。例如，如果在化学反应的速率决定步骤(即，具有最高过渡态能量的步骤)期间C-H键断裂，则用(更重的)同位素取代该反应性氢将导致反应速率降低。氘动力学同位素效应(“DKIE”)是最常见的KIE形式。(参见例如，Foster等人,Adv.DrugRes.,第14卷,第1-36页(1985)；Kushner等人,Can.J.Physiol.Pharmacol.,第77卷,第79-88页(1999))。

DKIE的大小可以表示为C-H键断裂的给定反应的速率与氘取代氢并且C-D键断裂的相同反应的速率之间的比率。DKIE的范围可以为约一(无同位素效应)至非常大的数字，如50或更大，这意味着当氘取代氢时，反应可以慢五十倍或更多倍。

用氚(“T”)取代氢导致比氘还要更强的键，并且给出数值更大的同位素效应。类似地，用同位素取代其他元素(包括但不限于碳的¹³C或¹⁴C；硫的³³S、³⁴S或³⁶S；氮的¹⁵N；以及氧的¹⁷O或¹⁸O)可能导致类似的动力学同位素效应。

哺乳动物身体表达多种酶，目的是从其循环系统中消除外来物质(如治疗剂)。此类酶的例子包括细胞色素P450酶(“CYP”)、酯酶、蛋白酶、还原酶、脱氢酶和单胺氧化酶，以与这些外来物质反应并且将其转化为极性更大的中间体或代谢物以供肾排泄。药物化合物的一些最常见的代谢反应涉及将碳-氢(C-H)键氧化成碳-氧(C-O)或碳-碳(C＝C)π键。所得代谢物在生理条件下可以是稳定的或不稳定的，并且相对于母体化合物可以具有显著不同的PK/PD以及急性和长期毒性特征。对于许多药物，此类氧化是快速的。因此，这些药物通常需要施用多次剂量或高的每日剂量。

因此，与具有天然同位素组成的类似的化合物相比，在本文提供的化合物的某些位置处的同位素富集将产生可检测的KIE，这将影响本文提供的化合物的药理学、PK、PD和/或毒理学特征。

组合物和用途

药物组合物和施用方法

使用本领域可用的方法和本领域公开的那些方法，可以将本文提供的化合物配制成药物组合物。本文提供的化合物中的任一种可以在适当的药物组合物中提供，并且通过合适的施用途径施用。在一个实施方案中，提供了一种包含式(X)的化合物以及一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物，其中所述组合物包含与式(X)的所有立体异构体的总重量相比，按重量计至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或100％的式(I)的化合物。

在一个实施方案中，提供了一种包含式(I)的化合物以及一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物，其中所述组合物按重量计至少约50％不含、至少约60％不含、至少约70％不含、至少约75％不含、至少约80％不含、至少约85％不含、至少约90％不含、至少约95％不含、至少约99％不含或100％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(I)的化合物的药物组合物按重量计约85％-95％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(I)的化合物的药物组合物按重量计约90％-95％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(I)的化合物的药物组合物按重量计约85％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(I)的化合物的药物组合物按重量计约90％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(I)的化合物的药物组合物按重量计约95％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(I)的化合物的药物组合物按重量计约97％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(I)的化合物的药物组合物按重量计100％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。

在一个实施方案中，提供了一种包含式(II)的化合物以及一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物，其中所述组合物按重量计至少约50％不含、至少约60％不含、至少约70％不含、至少约75％不含、至少约80％不含、至少约85％不含、至少约90％不含、至少约95％不含、至少约99％不含或100不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(II)的化合物的药物组合物按重量计约85％-95％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(II)的化合物的药物组合物按重量计约90％-95％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(II)的化合物的药物组合物按重量计约85％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(II)的化合物的药物组合物按重量计约90％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(II)的化合物的药物组合物按重量计约95％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(II)的化合物的药物组合物按重量计约97％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。在一个实施方案中，包含式(II)的化合物的药物组合物按重量计100％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。

本文提供的方法涵盖施用如下药物组合物，所述药物组合物包含至少一种本文提供的化合物和一种或多种相容的且药学上可接受的载体。在此背景中，术语“药学上可接受的”意指由联邦政府或州政府的管理机构批准的或者在美国药典或其他公认药典中列示的用于动物，并且在某些实施方案中用于人的。术语“载体”包括与治疗剂一起施用的稀释剂、佐剂(例如，弗氏佐剂(完全和不完全))、赋形剂或媒介物。此类药物载体可以是无菌液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当静脉内施用药物组合物时，水可用作载体。盐水溶液以及水性右旋糖和甘油溶液也可以用作液体载体，特别是用于可注射溶液。合适的药物载体的例子描述于Martin,E.W.,Remington’s Pharmaceutical Sciences中。

在临床实践中，本文提供的药物组合物或化合物可以通过本领域已知的任何途径施用。示例性施用途径包括但不限于口服、吸入、舌下、含服、动脉内、皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内、鼻、肠胃外、肺部和皮下途径。在一些实施方案中，肠胃外施用本文提供的药物组合物或化合物。在一些实施方案中，口服施用本文提供的药物组合物或化合物。

用于肠胃外施用的组合物可以是乳液或无菌溶液。肠胃外组合物可以包括例如丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射的有机酯(例如，油酸乙酯)。这些组合物还可以含有润湿剂、等渗剂、乳化剂、分散剂和稳定剂。灭菌可以以几种方式进行，例如使用细菌过滤器，经由辐射或经由加热。肠胃外组合物也可以以无菌固体组合物的形式制备，所述无菌固体组合物可以在使用时溶解在无菌水或任何其他可注射的无菌介质中。

在一些实施方案中，本文提供的组合物是药物组合物或单一单位剂型。本文提供的药物组合物和单一单位剂型包含预防或治疗有效量的一种或多种预防性或治疗性化合物。

药物组合物可以包含一种或多种药物赋形剂。可以使用任何合适的药物赋形剂，其中本领域普通技术人员能够选择合适的药物赋形剂。合适的赋形剂的非限制性例子包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂乳粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。特定赋形剂是否适合于掺入到药物组合物或剂型中取决于本领域熟知的多种因素，所述因素包括但不限于将剂型施用至受试者的方式和剂型中的具体化合物。如果需要，组合物或单一单位剂型还可以含有少量的润湿剂或乳化剂或pH缓冲剂。因此，下文提供的药物赋形剂旨在是说明性的而非限制性的。另外的药物赋形剂包括例如在Handbook of Pharmaceutical Excipients,Rowe等人(编辑)第6版(2009)中描述的那些，将所述文献通过引用以其整体并入本文。

在一些实施方案中，药物组合物包含消泡剂。可以使用任何合适的消泡剂。在一些方面，消泡剂选自醇、醚、油、蜡、硅酮、表面活性剂及其组合。在一些方面，消泡剂选自矿物油、植物油、乙撑双硬脂酰胺、石蜡、酯蜡、脂肪醇蜡、长链脂肪醇、脂肪酸皂、脂肪酸酯、硅二醇(silicon glycol)、氟代有机硅、聚乙二醇-聚丙二醇共聚物、聚二甲基硅氧烷-二氧化硅、醚、辛醇、辛醇(capryl alcohol)、脱水山梨醇三油酸酯、乙醇、2-乙基-己醇、二甲硅油、油醇、西甲硅油及其组合。

在一些实施方案中，药物组合物包含助溶剂。助溶剂的说明性例子包括例如乙醇、聚乙二醇、丁二醇、二甲基乙酰胺、甘油和丙二醇。

在一些实施方案中，药物组合物包含缓冲剂。缓冲剂的说明性例子包括例如乙酸盐、硼酸盐、碳酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐、氢氧化物、二乙醇胺、单乙醇胺、甘氨酸、甲硫氨酸、古尔胶和味精。

在一些实施方案中，药物组合物包含载体或填充剂。载体或填充剂的说明性例子包括例如乳糖、麦芽糖糊精、甘露糖醇、山梨糖醇、壳聚糖、硬脂酸、黄原胶和古尔胶。

在一些实施方案中，药物组合物包含表面活性剂。表面活性剂的说明性例子包括例如d-α生育酚、苯扎氯铵、苄索氯铵、溴棕三甲铵、西吡氯铵、多库酯钠、山嵛酸甘油酯、单油酸甘油酯、月桂酸、macrogol 15羟基硬脂酸酯、肉豆蔻醇、磷脂、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧甘油酯(polyoxylglyceride)、月桂基硫酸钠、脱水山梨醇酯和维生素E聚乙二醇琥珀酸酯。

在一些实施方案中，药物组合物包含抗结剂。抗结剂的说明性例子包括例如磷酸钙(三元)、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素和氧化镁。

可以与药物组合物一起使用的其他赋形剂包括例如白蛋白、抗氧化剂、抗菌剂、抗真菌剂、可吸收生物聚合物、螯合剂、控释剂、稀释剂、分散剂、溶解增强剂、乳化剂、胶凝剂、软膏基质、透皮吸收促进剂、防腐剂、增溶剂、溶剂、稳定剂和糖。这些试剂中每一种的具体例子描述于例如Handbook of Pharmaceutical Excipients,Rowe等人(编辑)第6版(2009),The Pharmaceutical Press中，将所述文献通过引用以其整体并入本文。

在一些实施方案中，药物组合物包含溶剂。在一些方面，溶剂是盐水溶液，如无菌等渗盐水溶液或右旋糖溶液。在一些方面，溶剂是注射用水。

在一些实施方案中，药物组合物是颗粒形式，如微粒或纳米颗粒。微粒和纳米颗粒可以由任何合适的材料(如聚合物或脂质)形成。在一些方面，微粒或纳米颗粒是胶束、脂质体或聚合物囊泡(polymersome)。

本文进一步提供了包含化合物的无水药物组合物和剂型，因为在一些实施方案中，水可以促进一些化合物的降解。

本文提供的无水药物组合物和剂型可以使用无水或低含水成分以及低水分或低湿度条件制备。如果预期在制造、包装和/或储存期间与水分和/或湿气发生实质性接触，则包含乳糖和至少一种包含伯胺或仲胺的活性成分的药物组合物和剂型可以是无水的。

可以制备和储存无水药物组合物，从而保持其无水性质。因此，可以使用已知防止暴露于水的材料包装无水组合物，使得它们可以包含在合适的配方试剂盒中。合适的包装的例子包括但不限于气密密封的箔、塑料、单位剂量容器(例如，小瓶)、泡罩包装和条形包装(strip pack)。

本文提供的不含乳糖的组合物可以包含本领域熟知的并且例如在美国药典(USP)SP(III)/NF(XVI)中列出的赋形剂。通常，不含乳糖的组合物以药学上相容的且药学上可接受的量包含活性成分、粘合剂/填充剂和润滑剂。示例性的不含乳糖的剂型包含活性成分、微晶纤维素、预糊化淀粉和硬脂酸镁。

还提供了包含一种或多种赋形剂的药物组合物和剂型，所述赋形剂降低化合物的分解速率。在本文中称为“稳定剂”的此类赋形剂包括但不限于抗氧化剂(如抗坏血酸)、pH缓冲剂或盐缓冲剂。

肠胃外剂型

在某些实施方案中，提供了肠胃外剂型。可以通过多种途径将肠胃外剂型施用至受试者，所述途径包括但不限于皮下、静脉内(包括团注)、吸入、肌肉内和动脉内。因为它们的施用通常绕过受试者对污染物的天然防御，所以肠胃外剂型通常是无菌的或能够在施用至受试者之前进行灭菌。肠胃外剂型的例子包括但不限于准备好注射的溶液、准备好溶解或悬浮在药学上可接受的注射用媒介物中的干产品、准备好注射的混悬剂、乳剂和准备好吸入的雾化液滴。

可用于提供肠胃外剂型的合适的媒介物是本领域技术人员熟知的。例子包括但不限于注射用水USP；水性媒介物，例如但不限于氯化钠注射液、林格氏注射液、右旋糖注射液、右旋糖和氯化钠注射液以及乳酸林格氏注射液；水混溶性媒介物，例如但不限于乙醇、聚乙二醇和聚丙二醇；以及非水性媒介物，例如但不限于玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和苯甲酸苄酯。

用于经由吸入递送药物的剂型包括推进剂、非水性吸入器、干粉吸入器和喷射或超声雾化器。

也可以将增加本文公开的一种或多种化合物的溶解度的赋形剂掺入肠胃外剂型中。

口服剂型

在某些实施方案中，提供了口服剂型。可以通过多种途径将口服剂型施用至受试者，所述途径包括但不限于舌下、唇下和含服。用于口服施用的典型的剂型包括丸剂、片剂、胶囊、凝胶帽、溶液、混悬剂或乳剂。所述剂型还可以以区室化为特征。例如，当所述剂型是丸剂、片剂或胶囊时，其可以具有不同的材料层，所述材料层具有不同的赋形剂或不同浓度的赋形剂。例如，肠溶包衣口服片剂可用于增强用于口服施用途径的化合物的生物利用度。肠溶包衣将是一层赋形剂，其允许片剂耐受胃酸。在一个实施方案中，口服剂型是口腔崩解片。在一个实施方案中，口服剂型是咀嚼片。

剂量和单位剂型

在人类治疗学中，医生将根据预防性或治愈性治疗以及根据待治疗的受试者特有的年龄、体重、状况和替他因素来确定他认为最合适的剂量。

在某些实施方案中，本文提供的组合物是药物组合物或单一单位剂型。本文提供的药物组合物和单一单位剂型包含预防或治疗有效量的一种或多种本文所述的预防性或治疗性化合物。

将在障碍或其一种或多种症状的预防或治疗方面有效的化合物或组合物的量将随疾病或障碍的性质和严重程度以及化合物的施用途径而变化。频率和剂量也将根据每名受试者特有的因素而变化，这取决于施用的特定疗法(例如，治疗剂或预防剂)、障碍的严重程度、疾病或障碍、和施用途径，以及受试者的年龄、体重、反应和既往病史。可以从源自体外或动物模型测试系统的剂量-反应曲线外推有效剂量。

在某些实施方案中，组合物的示例性剂量包括毫克或微克量的化合物/千克受试者或样品重量(例如，约10微克/千克至约50毫克/千克、约100微克/千克至约25毫克/千克或约100微克/千克至约10毫克/千克)。在某些实施方案中，基于化合物的重量，为预防、治疗、管理或改善受试者的障碍或其一种或多种症状而施用的本文提供的化合物的剂量是0.1mg/kg受试者体重、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、10mg/kg或15mg/kg或更多。在另一个实施方案中，为预防、治疗、管理或改善受试者的障碍或其一种或多种症状而施用的组合物或本文提供的组合物的剂量是0.1mg至200mg、0.1mg至100mg、0.1mg至50mg、0.1mg至25mg、0.1mg至20mg、0.1mg至15mg、0.1mg至10mg、0.1mg至7.5mg、0.1mg至5mg、0.1至2.5mg、0.25mg至20mg、0.25至15mg、0.25至12mg、0.25至10mg、0.25mg至7.5mg、0.25mg至5mg、0.25mg至2.5mg、0.5mg至20mg、0.5至15mg、0.5至12mg、0.5至10mg、0.5mg至7.5mg、0.5mg至5mg、0.5mg至2.5mg、1mg至20mg、1mg至15mg、1mg至12mg、1mg至10mg、1mg至7.5mg、1mg至5mg或1mg至2.5mg。

可以根据合适的方案施用剂量，例如，每周一次、每周两次、每周三次或每周四次。在一些情况下，可能需要使用超出本文公开的范围的化合物的剂量，这对于本领域普通技术人员而言将是清楚的。此外，应注意，临床医生或治疗医师将结合受试者反应了解如何以及何时中断、调节或终止疗法。

不同的治疗有效量可适用于不同的疾病和病症，这是本领域普通技术人员将容易地知道的。类似地，足以预防、管理、治疗或改善此类障碍，但是不足以造成或足以减少与本文提供的化合物或组合物相关的不良影响的量也涵盖在本文所述的剂量量和剂量频率方案中。进一步地，当向受试者施用多个剂量的本文提供的组合物时，并非所有剂量都一定是相同的。例如，可以增加施用至受试者的剂量，以改善组合物的预防或治疗效果，或可以降低所述剂量以减少特定受试者正在经历的一种或多种副作用。

在某些实施方案中，治疗或预防可以以本文提供的化合物或组合物的一个或多个负荷剂量开始，随后是一个或多个维持剂量。

在某些实施方案中，可以施用本文提供的化合物或组合物的剂量，以在受试者的血液或血清中实现化合物的稳态浓度。稳态浓度可以通过根据技术人员可用的技术测量来确定，或者可以基于受试者的身体特征(如身高、体重和年龄)。

在某些实施方案中，相同组合物的施用可以重复进行，并且所述施用可以相隔至少一天、两天、三天、五天、十天、十五天、三十天、四十五天、两个月、七十五天、三个月或六个月。在其他实施方案中，相同预防剂或治疗剂的施用可以重复进行，并且所述施用可以相隔至少一天、两天、三天、五天、十天、十五天、三十天、四十五天、两个月、七十五天、三个月或六个月。

治疗性应用

对于治疗性应用，将化合物以适合于施用形式的药学上可接受的剂量施用至哺乳动物(在某些实施方案中，施用至人)，所述施用形式如本领域已知的那些和本文讨论的那些，静脉内如团注或通过连续输注一段时间，通过肌肉内、腹膜内、脑脊髓内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、吸入或瘤内途径。化合物还通过瘤周、病灶内或病灶周途径合适地施用，以发挥局部以及全身治疗效果。在某些实施方案中，将化合物以适合于口服施用形式的药学上可接受的剂量施用至哺乳动物(在某些实施方案中，施用至人)，所述口服施用形式如本领域已知的那些和本文讨论的那些，例如舌下。例如，可以将本公开文本的化合物以液体或固体形式口服施用至人。固体剂型包括例如胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，将化学实体与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合，所述赋形剂如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或：a)填充剂或增量剂，例如像淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸，b)粘合剂，例如像羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂，例如像甘油，d)崩解剂，例如像琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e)溶液阻滞剂，例如像石蜡，f)吸收促进剂，例如像季铵化合物，g)润湿剂，例如像鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸附剂，例如像高岭土和膨润土，以及i)润滑剂，例如像滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，所述剂型还可包含缓冲剂。相似类型的固体组合物也可作为填充剂用于使用如乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中。在一个实施方案中，口服剂型是口腔崩解片。

本文提供的化合物可用于治疗本文所述的任何疾病或障碍(例如，增殖性、皮肤或眼科疾病或障碍)。

在某些实施方案中，疾病或障碍是癌症。在某些实施方案中，疾病或障碍是脑癌、肝癌、卵巢癌、胃癌或结直肠癌。在某些实施方案中，疾病或障碍是脑癌。在某些实施方案中，疾病或障碍是肝癌。在某些实施方案中，疾病或障碍是卵巢癌。在某些实施方案中，疾病或障碍是胃癌。在某些实施方案中，疾病或障碍是结直肠癌。

在某些实施方案中，疾病或障碍是头颈癌、口腔癌或颌面癌。

合适的癌症的例子包括乳腺癌(例如，浸润性导管乳腺癌、非浸润性导管乳腺癌、炎性乳腺癌)、前列腺癌(例如，激素依赖性前列腺癌、非激素依赖性前列腺癌)、胰腺癌(例如，导管胰腺癌)、胃癌(例如，乳头状腺癌、粘液腺癌、腺鳞癌)、肺癌(例如，非小细胞肺癌、小细胞肺癌、恶性间皮瘤)、结肠癌(例如，胃肠道间质瘤)、直肠癌(例如，胃肠道间质瘤)、结直肠癌(例如，家族性结直肠癌、遗传性非息肉性结直肠癌、胃肠道间质瘤)、小肠癌(例如，非霍奇金淋巴瘤、胃肠道间质瘤)、食道癌、十二指肠癌、舌癌、咽癌(例如，鼻咽癌、口咽癌、下咽癌)、唾液腺癌、脑肿瘤(例如，松果体星形细胞瘤、毛细胞型星形细胞瘤、弥漫性星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤)、神经鞘瘤、肝癌(例如，原发性肝癌、肝外胆管癌)、肾癌(例如，肾细胞癌、肾盂和输尿管移行细胞癌)、胆管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢癌(例如，上皮性卵巢癌、性腺外生殖细胞肿瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、低恶性潜能卵巢肿瘤)、膀胱癌、尿道癌、皮肤癌(例如，眼内(眼)黑色素瘤、梅克尔细胞癌)、血管瘤、恶性淋巴瘤、恶性黑色素瘤、甲状腺癌(例如，甲状腺髓样癌)、甲状旁腺癌、鼻腔癌、窦癌、骨肿瘤(例如，骨肉瘤、尤因瘤、子宫肉瘤、软组织肉瘤)、血管纤维瘤、视网膜肉瘤、阴茎癌、睾丸肿瘤、儿童实体瘤(例如，肾母细胞瘤、儿童肾肿瘤)、卡波西肉瘤、由AIDS引起的卡波西肉瘤、上颌窦肿瘤、纤维性组织细胞瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤和白血病(例如，急性髓系白血病、急性淋巴母细胞白血病)。

在某些实施方案中，所述疾病是皮肤病。在某些实施方案中，所述疾病选自痤疮瘢痕、光线性角化病、老年斑(黄褐斑)、特应性皮炎(湿疹)、自身免疫性疾病、基底细胞癌、大疱性类天疱疮、灼口综合征、钙过敏、癌症、口腔溃疡、慢性荨麻疹、结缔组织障碍、接触性皮炎、皮肤狼疮、皮肤T细胞淋巴瘤、皮炎、皮肌炎、埃勒斯-当洛综合征、大疱性表皮松解症、红斑性肢痛症、遗传皮肤障碍、移植物抗宿主病、环状肉芽肿、格雷夫斯病、毛发疾病、脱发、血管瘤、化脓性汗腺炎、高嗜酸性粒细胞增多综合征、多汗、皮肤瘙痒(瘙痒)、瘢痕疙瘩、静脉畸形骨肥大综合征、扁平苔藓、唇癌、淋巴瘤、黑色素瘤、梅克尔细胞癌、痣、硬斑病、黏膜疾病、指甲疾病、肾源性全身性纤维化、神经纤维瘤病、非黑色素瘤皮肤癌、口腔扁平苔藓、脂膜炎、天疱疮、色素沉着障碍、多形性日光疹、原发性胆汁性胆管炎、银屑病、坏疽性脓皮病、酒渣鼻、硬皮病、皮肤癌、皮肤感染、蜘蛛状血管病、皮肤的鳞状细胞癌、史-约综合征、皮下脂肪病、阳光过敏、静脉曲张、血管畸形、血管炎、白癜风、外阴皮肤障碍和皱纹。

在某些实施方案中，所述疾病是眼科疾病。在某些实施方案中，所述疾病选自年龄相关性黄斑变性、弱视(弱视眼)、无眼和小眼、散光、白塞病(disease)、Bietti结晶样角膜视网膜营养不良(Bietti's crystalline dystrophy)、睑缘炎、眼睑痉挛、白内障、脑性视觉障碍(CVI)、眼缺损、色盲、会聚功能不全、角膜病症、糖尿病性视网膜病变、白涩症、远视眼(远视)、飞蚊症(floater)、青光眼、特发性高颅压、低视力、黄斑水肿、黄斑裂孔、黄斑皱褶、近视眼(近视)、眼组织胞浆菌病综合征(OHS)、结膜炎、老视、罕见病、屈光不正、视网膜脱离、视网膜色素变性、视网膜母细胞瘤、早产儿视网膜病变、眼底黄色斑点症、厄舍综合征、葡萄膜炎和玻璃体脱离。

在某些实施方案中，本文提供了治疗方法，所述方法包括施用有效量的本文提供的化合物或其药学上可接受的盐。在某些实施方案中，所述方法涵盖向有需要的受试者施用有效治疗疾病或障碍的量的本文所述的化合物与有效治疗或预防所述疾病或障碍的第二药剂组合的步骤。在某些实施方案中，如本文别处所述，化合物呈药物组合物或剂型的形式。

在某些实施方案中，受试者是未经治疗的受试者。在其他实施方案中，受试者先前已经接受了疗法。例如，在某些实施方案中，受试者对单一药剂治疗方案没有反应。

在某些实施方案中，受试者是由于与一些其他疗法相关的一种或多种不良事件而中断所述其他疗法的受试者。在某些实施方案中，受试者已经接受了一些其他疗法，并且在施用本文提供的方法之前中断该疗法。在其他实施方案中，受试者已经接受了疗法，并且伴随本文提供的化合物的施用继续接受该疗法。根据本领域技术人员的判断，本文所述的化合物可以与用于治疗疾病或障碍的其他疗法共同施用。在某些实施方案中，本文提供的方法或组合物可以与减少剂量的用于治疗疾病或障碍的其他疗法共同施用。

诊断性应用

在一些实施方案中，将本文提供的化合物用于诊断性应用。这些应用可用于例如对疾病或障碍(如增殖性、皮肤或眼科疾病或障碍)进行诊断和/或预后。

在一些诊断性和预后性应用或实施方案中，化合物可以用可检测部分标记。合适的可检测部分包括但不限于放射性同位素、荧光标记和酶-底物标记。在另一个实施方案中，化合物不需要被标记，并且化合物的存在可以使用与所述化合物特异性结合的标记的抗体或其抗原结合片段来检测。

试剂盒

在一些实施方案中，本文提供的化合物以试剂盒(即，已包装的预定量的试剂组合，具有用于进行程序的说明书)的形式提供。在一些实施方案中，所述程序是诊断性测定。在某些实施方案中，所述程序是治疗性程序。

在一些实施方案中，试剂盒进一步包含用于化合物重构的溶剂。在一些实施方案中，化合物以药物组合物的形式提供。

在一些实施方案中，试剂盒可以包括本文提供的化合物或组合物、任选的第二药剂或组合物以及向医疗服务人员提供关于用于治疗障碍的使用的信息的说明书。说明书可以以印刷形式或以电子介质(如软盘、CD或DVD)形式或以可以获得此类说明书的网址的形式提供。本文提供的化合物或组合物或第二药剂或组合物的单位剂量可以包括这样的剂量，使得当施用至受试者时，可以在受试者中维持所述化合物或组合物的治疗或预防有效血浆水平至少一天。在一些实施方案中，化合物或组合物可以作为无菌水性药物组合物或干粉(例如，冻干的)组合物包含在内。

在一些实施方案中，提供了合适的包装。如本文所用，“包装”包括固体基质或通常用于系统中的材料，并且能够将本文提供的化合物和/或第二药剂保持在适合于施用至受试者的固定限制内。此类材料包括玻璃或塑料(例如，聚乙烯、聚丙烯和聚碳酸酯)瓶、小瓶、纸、塑料、塑料箔层压封套(plastic-foil laminated envelope)等。如果采用电子束灭菌技术，则包装应具有足够低的密度以允许对内容物进行灭菌。

制备和合成程序

在一些实施方案中，本文所述的化合物如方案1中所概述来制备。本申请中化合物的合成不限于本文所说明的这些通用反应方案。对于每种单独化合物的详细合成，请查看实施例部分。

方案1

紫杉醇-S-S-LG+HS-CH₂-C(AcNH-)-CO-(D-Arg)_n-NH₂

方案1.式I或式II的化合物可以通过硫代肽(例如，4-巯基丁酸酯-(D-Arg)_n-NH₂)与二硫代-紫杉醇衍生物的反应来制备。在方案1中，LG是离去基团，并且n是1-20的整数(例如，8)。下文实施例中提供了示例性反应条件。

实施例

化合物的制备

根据本领域技术人员已知的有机合成技术，从可商购化学品和/或从化学文献中描述的化合物开始，制备在本文描述的反应中使用的化合物。“可商购化学品”获自标准商业来源，如Acros Organics(宾夕法尼亚州匹兹堡)、Advanced ChemBlocks,Inc(加利福尼亚州伯灵格姆)、Aldrich Chemical(威斯康星州密尔沃基，包括Sigma Chemical和Fluka)、AK Scientific(加利福尼亚州联合市)、AstaTech,Inc.(宾夕法尼亚州布里斯托尔)、AurumPharmatech LLC(新泽西州富兰克林公园)、Combi-Blocks,Inc.(加利福尼亚州圣迭戈)、Enamine(新泽西州蒙茅斯Jct.)、Fisher Scientific Co.(宾夕法尼亚州匹兹堡)、Frontier Scientific(犹他州洛根)、TCI America(俄勒冈州波特兰)和VWR(宾夕法尼亚州拉德诺)。特定和类似的反应物任选地通过美国化学学会的化学文摘社制备的已知化学品的索引来鉴定，所述索引在大多数公共和大学图书馆中以及通过在线数据库可获得。

详细描述可用于制备本文所述的化合物的反应物的合成或提供描述其制备的文章的参考的合适的参考书包括例如“Synthetic Organic Chemistry”,John Wiley&Sons,Inc.,New York；S.R.Sandler等人,“Organic Functional Group Preparations,”第2版,Academic Press,New York,1983；“T.L.Gilchrist,“Heterocyclic Chemistry”,第2版,John Wiley&Sons,New York,1992；和J.March,“Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms and Structure”,第4版,Wiley-Interscience,New York,1992；R.C.Larock“Comprehensive Organic Transformations:A Guide to Functional GroupPreparations”第2版(1999)Wiley-VCH,ISBN:0-471-19031-4；“Organic Reactions”(1942-2000)John Wiley&Sons,在超过55卷中；以及“Chemistry of Functional Groups”John Wiley&Sons,在73卷中。一些化合物需要应用保护基团。对这种保护的需要在本领域技术范围内。对于保护基团及其使用一般描述，参见T.W.Greene、P.G.M.Nuts和ProtectiveGroups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1999。

分析方法和仪器

通过本文所述的反应制备的化合物根据本领域技术人员已知的分析技术表征。高效液相色谱法(HPLC)是一种用于分离、鉴定和定量混合物中的每种组分的分析化学技术。反相高效液相色谱法(RP-HPLC)是一种使用疏水固定相的HPLC技术。制备级高效液相色谱法(HPLC)(制备型HPLC)是一种用于产生一定量的纯化合物的分离技术。液相色谱-质谱法(LC-MS)是一种将高效液相色谱法(HPLC)的物理分离能力与质谱法(MS)的质量分析能力相结合的分析化学技术。

详细描述本文所述的分析技术的合适的参考书包括例如Lloyd R.Snyder等人,“Practical HPLC Method Development”第2版,Wiley-Interscience；New York,1997；Michael W.Dong,“HPLC and UHPLC for Practicing Scientists”第2版,Wiley；2019；Marvin C.McMaster,“LC/MS:A Practical User's Guide”,Wiley-Interscience,2005andStavros Kromidas,“The HPLC-MS Handbook for Practitioners”第1版,Wiley-VCH,2017。

在实施例中使用的缩写包括：

除非另有说明，否则试剂和溶剂均以从商业供应商处获得的形式使用。对于对水分和/或氧敏感的合成转化，使用无水溶剂和烘干的玻璃器皿。反应时间和产率未经优化。实施例编号和化合物编号是相同的。

实施例1.Ac-L-半胱氨酸(紫杉醇-4-巯基丁酸酯)-D-精氨酸₈-NH₂(1)

步骤A.Ac-L-半胱氨酸-D-精氨酸₈-NH₂(1)

使用Rink酰胺MBHA树脂(2.0mmol，0.383mmol/g，5.23g)作为固体支持物，在肽合成器上通过Fmoc策略制备化合物1。在所需序列完成后，获得14.4g的肽树脂，然后将其用TFA混合物(TFA:茴香硫醚:苯酚:EDT:H₂O＝87.5:5:2.5:2.5:2.5)处理3h，以从固体支持物上切割肽并且除去所有侧链保护基团。将所得悬浮液过滤以除去固体树脂，并且将含有肽的滤液沉淀到10倍的冷乙醚中。将沉淀物通过离心收集，用冷乙醚洗涤两次，并且在真空下干燥，得到1.74g的粗化合物。将粗化合物1通过制备型HPLC用TFA缓冲液(缓冲液A：在H₂O中的0.1％ TFA；缓冲液B：在80％ ACN+20％ H₂O中的0.1％ TFA)纯化，得到1.04g的呈TFA盐的纯化合物1(Ac-L-半胱氨酸-D-精氨酸8-NH₂)(90％纯度，59.6％产率)。

步骤B.Ac-L-半胱氨酸(紫杉醇-4-巯基丁酸酯)-D-精氨酸₈-NH₂(3)

向化合物1(1.3当量，1.00g，0.430mmol)和化合物2(1当量，0.353g，0.331mmol；Rodrigues等人,1995,Chem Biol 2:223-227；Dubikovskaya等人,2008,Proc Natl AcadSci.105:12128-12133)在DMF(70ml)中的溶液中添加DIPEA(5.2当量，0.30ml，1.72mmol)，同时搅拌。将反应混合物在室温下搅拌过夜，通过HPLC和MS监测，直到化合物1完全被消耗。在用H₂O淬灭后，将反应混合物再搅拌2h。将化合物3的粗产物用ACN/H₂O稀释，随后上样到RP-HPLC上，用TFA缓冲液(缓冲液A：在H₂O中的0.1％ TFA；缓冲液B：在80％ ACN+20％ H₂O中的0.1％ TFA)纯化。将含有所需肽的级分收集，并且冻干，得到543mg的呈灰白色粉末的化合物3(Ac-L-半胱氨酸(紫杉醇-4-巯基丁酸酯)-D-精氨酸₈-NH₂)(98.3％纯度)。基于化合物2，在缀合并纯化后的产率是69.5％。LCMS：计算值：2365.7；实测值：2365。

实施例2.Ac-D-半胱氨酸(紫杉醇-4-巯基丁酸酯)-D-精氨酸₈-NH₂(5)

步骤A.Ac-D-半胱氨酸-D-精氨酸₈-NH₂(4)

使用Rink酰胺MBHA树脂(10.0mmol，0.316mmol/g，32.7g)作为固体支持物，在肽合成器上通过Fmoc策略制备化合物4。在所需序列完成后，获得71.3g的肽树脂，然后将其用TFA混合物(TFA:茴香硫醚:苯酚:EDT:H₂O＝87.5:5:2.5:2.5:2.5)处理3h，以从固体支持物上切割肽并且除去所有侧链保护基团。将所得悬浮液过滤以除去固体树脂，并且将含有肽的滤液沉淀到冷乙醚中。将沉淀物通过离心收集，用冷乙醚洗涤两次，并且在真空下干燥，得到13.4g的粗化合物4。将粗化合物4通过制备型HPLC用TFA缓冲液(缓冲液A：在H₂O中的0.1％ TFA；缓冲液B：在80％ ACN+20％ H₂O中的0.1％ TFA)纯化，随后使用HCl缓冲液(缓冲液A：在H₂O中的0.05％ HCl；缓冲液B：在80％ ACN+20％ H₂O中的0.05％ HCl)离子交换成HCl盐，得到4.49g的呈HCl盐的纯化合物4(Ac-D-半胱氨酸-D-精氨酸8-NH₂)(95％纯度，33.4％产率)。

步骤B.Ac-D-半胱氨酸(紫杉醇-4-巯基丁酸酯)-D-精氨酸₈-NH₂(5)

向化合物4(1.3当量，0.930g，0.546mmol)和化合物2(1当量，0.447g，0.420mmol)在DMF(50ml)中的溶液中添加DIPEA(5.2当量，0.382ml，2.19mmol)，同时搅拌。将反应混合物在室温下搅拌过夜，通过HPLC和MS监测，直到化合物4完全被消耗。在用H₂O淬火后，将反应混合物再搅拌2h。将化合物5的粗产物用ACN/H₂O稀释，随后上样到RP-HPLC上，用TFA缓冲液(缓冲液A：在H₂O中的0.1％ TFA；缓冲液B：在80％ACN+20％ H₂O中的0.1％ TFA)纯化。将含有所需肽的级分收集，并且冻干，得到818mg的呈灰白色粉末的化合物5(Ac-D-半胱氨酸(紫杉醇-4-巯基丁酸酯)-D-精氨酸8-NH₂)(97.9％纯度)。基于化合物2，在缀合并纯化后的产率是82％。LCMS：计算值：2365.7；实测值：2365.5。

生物学实施例1

细胞毒性测定-CCK8癌细胞

应用CCK-8测定研究肽药物缀合物的细胞毒性及其对癌细胞增殖的抑制。首先，将2～10×10³个细胞(取决于不同细胞系的生长速率)与100μL DMEM培养基接种到96孔板的每个孔的正常培养基中。然后将细胞在37℃下与4～5％ CO₂下培养过夜。添加不同剂量(对于Hep3B、Hep G2和MCF7/MBA-MD-231，4000、2000、1000、500nM；对于MCF7/ADR、22Rv1、CNE1、HCT116、DLD-1，1000、333.3、100.0、33.33、3.333、1.000、0.333nM)的紫杉醇和肽药物。在48～72小时孵育后，将CCK-8溶液添加至每个孔中。然后将细胞在37℃下孵育4小时。使用multiscan光谱仪(PerkinElmer’s EnSpire多标记读板仪)在450/650nm下测量光密度。光密度与样品中的活细胞数量成线性比例：

MCF7/ADR、22Rv1、CNE1、HCT116、DLD-1细胞系的板布局示于下文中。

发现在MCF7/MBA-MD-231和肝癌Hep 3B细胞中观察到在肽药物缀合物化合物3(L-半胱氨酸接头)和化合物5(D-胱氨酸接头)的抗增殖与浓度之间存在良好的相关性。未观察到随紫杉醇浓度增加的抑制变化。在高缀合物浓度下观察到显著强的癌细胞抑制。两种肽药物缀合物均提供比紫杉醇更好的癌细胞杀伤特性。对于乳腺癌MCF7/MBA-MD-231(图1)和肝癌Hep 3B细胞(图2A)二者，在所有的测试浓度下，与化合物5相比，化合物3的癌细胞抑制显著更优。在4μM的剂量下，紫杉醇仅抑制肝癌Hep3B细胞11.5％，而化合物5(D-半胱氨酸接头)具有23.2％的抗增殖。与化合物5(D-半胱氨酸接头)和紫杉醇相比，化合物3(L-半胱氨酸接头)提供显著更高的功效，具有36.0％的癌细胞抑制(表1A)。

表1A.在4μM下肝癌Hep 3B细胞的抑制

化合物	抗增殖％
		紫杉醇	11.5
化合物5(D-半胱氨酸接头)	23.2
		化合物3(L-半胱氨酸接头)	36.0

化合物5和化合物3在Hep G2细胞中的抑制在图2B中示出。在2000nM的浓度下，化合物3的抗增殖作用大于紫杉醇和化合物5的抗增殖作用。

在MCF7/ADR、22Rv1、CNE1、HCT116、DLD-1中的增殖实验结果在表1B和图2C-图2G中示出。在所有测试的细胞系中，与化合物5相比，化合物3展现出更低的IC₅₀值。重要的是，化合物3针对多药耐药的乳腺癌(MCF7/ADR)细胞系展现出437.5nM的IC₅₀值，而化合物5和紫杉醇二者展现出IC₅₀>1000nM。

表1B.MCF7/ADR、22Rv1、CNE1、HCT116、DLD-1细胞细胞系的抑制

生物学实施例2

在缓冲液中的稳定性

制备化合物5(1mM)和化合物3(1mM)的工作溶液。制备缓冲溶液(199μL)，并且分到十四个孵育管中。然后将管在37℃下预热15分钟。将1mM化合物5工作溶液添加至七个孵育管中(每管1μL)，最终浓度为5μM，并且将1mM化合物3工作溶液添加至七个孵育管中(每管1μL)，最终浓度为5μM。对于化合物5，有机溶剂的最终浓度是0.5％。将每个样品在37℃下孵育0、4、8、24、48、72或120小时。测定一式两份地进行。在孵育0、4、8、24、48、72或120小时后，通过添加1000μL含有内标物和2％FA的甲醇(在4℃下预冷处理)淬灭反应。将所有样品涡旋10分钟。将来自每个样品的150μL的上清液转移至新的板中。将150μL的纯水添加至每个样品中以供通过LC-MS/MS(冷却器温度：15℃)进行分析。使用Microsoft Excel进行所有计算。从提取离子色谱图确定峰面积比。通过以下公式计算每个时间点剩余的化合物百分比：

剩余百分比_{t min}(％)＝(峰面积比_{t min}/峰面积比_{0 min})×100

其中

峰面积比_{t min}是测试化合物在t min时的峰面积比；并且

峰面积比_{0 min}是测试化合物在零时间点的峰面积比。

通过母体药物的剩余百分比的自然对数与孵育时间曲线的线性回归来确定斜率值k。

从斜率值确定体外半衰期(体外t_1/2)：

体外t_1/2＝(0.693/k)

紫杉醇显现浓度(nM)＝

峰面积比t min/峰面积比(紫杉醇:5μM)×5000

％紫杉醇显现＝

峰面积比_{t min}/峰面积比(紫杉醇:5μM)×100

数据处理规则在表2中示出。

表2.数据处理的处理规则

在不同pH下研究了化合物5和化合物3在缓冲水溶液中的稳定性，并且结果在表3中示出。出乎意料地，在所有测试的pH中，化合物3的半衰期都更长，在pH 5.5的溶液中具有最长的半衰期。数字表示两个平行实验的平均值。在缓冲水溶液中被L-Cys-D-arg8取代的化合物3的更长半衰期是针对接头水解的更高稳定性的出乎意料的发现。预测具有D-Cys-D-arg8的化合物5比化合物3更稳定，因为已知非天然氨基酸的存在对蛋白酶切割更具抗性。

表3.与化合物5相比，化合物3在不同pH的缓冲溶液中的稳定性

生物学实施例3

在血浆中的稳定性

在PBS(pH 7.4)中制备测试化合物的工作溶液。在测定中，将丙胺太林用作人、猴、犬和小鼠血浆的阳性对照。在本测定中，将美维诺林(Mevinolin)用作大鼠血浆的阳性对照。在乙腈中制备1mM的丙胺太林工作溶液。在DMSO中制备1mM的美维诺林工作溶液。将每个细胞的475μL血浆的孵育缓冲液添加到孵育板中，并且在37℃下预热15分钟。在预孵育后，将25μL的工作溶液(测试化合物或对照化合物)掺加至血浆中。对于化合物5和化合物3，有机浓度的最终浓度是0％。对于紫杉醇，有机溶剂的最终浓度是0.25％。测定一式两份地进行。将反应样品在37℃下孵育。在0、0.25、0.5、1、2、4、6、8和24小时，从反应样品中取出50μL的等分试样。通过添加450μL冰冷的淬灭溶液(含有内标物和2％ FA的甲醇)停止反应。将所有样品涡旋10分钟，随后以3,220g离心30分钟以沉淀蛋白质。将来自每个孔的100μL的上清液转移至新的板中。将上清液用超纯水稀释。通过LC-MS/MS分析样品。使用MicrosoftExcel进行所有计算。从提取离子色谱图确定峰面积比。通过以下公式计算每个时间点剩余的化合物百分比：

剩余百分比_{t min}(％)＝峰面积比_{t min}/峰面积比_{0 min}×100

其中

峰面积比_{t min}是对照和测试化合物在t min时的峰面积比；并且

峰面积比_{0 min}是对照和测试化合物在零时间点的峰面积比。

通过母体药物的剩余百分比的自然对数与孵育时间曲线的线性回归来确定斜率值k。

从斜率值确定体外半衰期(体外t_1/2)：

体外t_1/2＝(0.693/k)

数据处理规则在表4中示出。

表4.数据处理的处理规则

结果在表5中示出。在人、犬、大鼠和小鼠血浆中，化合物3显示出比化合物5更长的半衰期。尽管化合物5的肽组分仅由已知对动物中的天然蛋白酶具有抗性的非天然氨基酸组成，但是化合物3出人意料地比化合物5更稳定。不同种类的化合物3在血浆中的更长半衰期表明，化合物3在体内可能比化合物5更稳定。

表5.与化合物5相比，化合物3在血浆中的稳定性

生物学实施例4

化合物3和化合物5的活体(In-Life)药代动力学

通用程序：在CD-1小鼠中进行单剂量研究。向各组(每组12只动物)施用腹膜内(IP)剂量的紫杉醇(10mg/kg)、化合物3(38.4mg/kg)或化合物5(38.4mg/kg)。在给药后预定时间从研究动物中收集系列或终末血浆样品(每个时间点n＝3)。每只小鼠进行2次连续放血(眼眶放血)和一次终末放血。对于所有步骤，将样品收集在预冷管中。在活体阶段完成后，使用LC-MS/MS分析样品。

测定程序：对于小鼠血浆中分析物的分析，将每个研究样品的50.0μL等分试样使用200μL在甲醇中的5％甲酸通过蛋白质沉淀萃取。通过添加含有250ng/mL甲苯磺丁脲和1000ng/mL紫杉醇-d5的25.0μL甲醇来添加内标物。

对于化合物5和化合物3分析，在以4000rpm离心10分钟之后，将150μL上清液转移至洁净96孔收集板中用于LC-MS/MS分析。

对于紫杉醇分析，在以4000rpm离心10分钟之后，将75.0μL上清液转移至含有75.0μL去离子水的洁净96孔收集板中。然后在LC-MS/MS分析之前，将板加盖并以1650rpm涡旋3分钟。

标准品和质量对照的制备：在空白小鼠血浆中在湿冰上以5.00、10.0、50.0、100、200、250、450和500ng/mL的浓度制备化合物3在小鼠血浆中的校准标准品。在空白小鼠血浆中制备低质量对照([LQC]，15.0ng/mL)、中等质量对照([MQC]，120ng/mL)和高质量对照([HQC]，400ng/mL)。

在空白小鼠血浆中在湿冰上以2.50、5.00、25.0、125、625、1250、2250和2500ng/mL的浓度制备紫杉醇在小鼠血浆中的校准标准品。在空白小鼠血浆中制备LQC(7.50ng/mL)、MQC(120ng/mL)和HQC(2000ng/mL)。

所有校准标准品溶液和QC溶液都是新鲜制备的，并且在使用后丢弃。

样品分析：从活体接受小鼠血浆样品，并且储存在设定为-80℃的冷冻器中。

分2个批次分析研究样品。除研究样品之外，每个批次至少包括以下：一组校准标准品、基质空白(空白小鼠血浆)、对照零样品(含有内标物的空白小鼠血浆)和3个浓度水平(低、中和高)的一式两份的QC样品。在每个批次内，研究样品由校准标准品或QC样品包围(bracketed)。

数据采集和处理：在与AB SCIEX API 6500+质谱仪偶联的Agilent 1290InfinityII HPLC系统上进行LC-MS/MS数据采集。使用Analyst 1.6.3软件整合色谱图。使用加权(1/x2，x＝浓度)线性回归来产生校正曲线，并且使用Analyst 1.6.3软件进行回归。基于校准曲线，使用分析物与内标物的峰面积比来计算样品中的分析物的浓度。

数据计算

用于计算校正曲线的线性公式如下：

y＝ax+b

其中

y表示峰面积比；

a表示线的斜率；

x表示浓度；并且

b表示y轴截距。

以百分比表示的准确度(或测量值与其标称值的接近程度)计算如下：

％准确度＝(测量值)/(标称值)×100

(测量值与其标称值的)以百分比表示的偏差或DEV计算如下：

％DEV＝(测量值-标称值)/(标称值)×100

标准差(SD)计算如下：

其中，

x表示样品浓度；

表示平均样品浓度；并且

n表示样品量。

以百分比表示的精密度或变异系数(CV)计算如下：

％CV＝(标准差)/平均值×100。

验收标准：如果校准标准品和QC数据符合下文和SOP BA-018(非监管研究的生物分析样品分析)中所述的验收标准，则接受分析批次。

校准标准品：对于待接受的校准标准品，每个标准品的反算浓度必须是其标称浓度的100％±25％。对于待接受的批次，最少67％的标准品必须符合这些标准。

质量对照样品：对于待接受的QC样品，其测量浓度必须为标称浓度的100％±25％。对于待接受的批次，曲线范围内所有QC(LQC、MQC和HQC)样品的至少三分之二和每个浓度水平(低、中和高)的QC样品的至少一半的测量浓度必须为它们各自的标称浓度的100％±25％。

在CD-1小鼠中，化合物3、化合物5和紫杉醇药代动力学的定量生物分析的结果在表6A和表6B中示出。结果是每组(化合物3、化合物5和紫杉醇)小鼠的平均值。

表6A.活体研究的PK结果

表6B.活体研究的PK结果

化合物3和化合物5具有不同的肽/接头结构。化合物3含有L-半胱氨酸作为接头-肽，并且化合物5含有D-半胱氨酸作为接头-肽。预期化合物5比化合物3更稳定，因为化合物被非天然D-半胱氨酸接头-肽取代，然而，如表6A和表6B中所示，化合物3出乎意料地更稳定。

在活体小鼠PK研究中，化合物5和化合物3表现不同；例如，观察到体内半衰期、母体化合物的C_max、AUC和AUC比率的值不同。从化合物3释放的紫杉醇的T_1/2比从化合物5释放的紫杉醇的T_1/2长33.3％。从化合物3释放的紫杉醇的AUC也远高于从化合物5释放的紫杉醇的AUC。进一步地，化合物3的T_1/2为21.675小时，而紫杉醇的T_1/2仅为2.99小时。紫杉醇/化合物3的AUC比率比紫杉醇/化合物5的AUC比率高20倍，这反映出化合物3的紫杉醇释放效率高于化合物5。另外，施用化合物3之后紫杉醇的AUC比施用紫杉醇之后紫杉醇的AUC高。

化合物5的C_max比化合物3的C_max高超过100倍，这可以至少部分地解释为什么在化合物5治疗的动物中存在急性毒性和动物死亡。

生物学实施例5

安全性：给药后的动物体重变化

方法

动物：在本研究中使用雌性无胸腺裸鼠。实验小鼠购自Shibefu(Beijing)Biotechnology Co.,Ltd.(QC编号：SCXK Beijing 2019-0010)，并且维持在高效微粒空气过滤器(HEPA)过滤的环境中，其笼子、食物和寝具通过辐照或高压蒸汽灭菌来灭菌。

人卵巢癌的腹膜播散性转移模型的建立：将处于对数生长期的人卵巢癌(SKOV-3-GFP)细胞用0.25％胰蛋白酶消化，用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗两次，离心并且用无血清RPMI1640培养基悬浮。将细胞悬浮液(6 x 10⁶/120μL/小鼠)注射到每只实验小鼠的腹膜腔中，用于建立人卵巢癌的腹膜播散性转移模型。

组、测试品和治疗方案：在细胞接种后第4天，使用FluorVivo Model-100(INDECbiosystems，美国加利福尼亚州)对所有小鼠进行全身成像。与平均肿瘤负荷有小偏差的小鼠入组研究。将所有动物随机分配到不同的研究组，每组6只小鼠。给药方案是Q5D(第0、5、10天)，给药体积是10μl/g，并且施用途径是腹膜内注射。化合物3或化合物5的每个剂量是9.6 mg/kg(与2.5 mg/kg紫杉醇等摩尔)，紫杉醇的每个剂量是10 mg/kg。从6mg/mL的储备溶液制备紫杉醇工作溶液，而将化合物溶解在PBS(pH 7.4)中，并且经由0.22μm过滤器过滤。

实验小鼠的监测：在研究期期间，每日检查所有实验小鼠的死亡率或发病体征。在研究期期间，用FluorVivo成像系统Model 100/Mag(INDEC BioSystems，美国加利福尼亚州)每周三次获取肿瘤进展的图像。在研究期期间，每周三次测量小鼠的体重。

研究终点：在施用后第21天，通过吸入过量的麻醉药使动物安乐死。将所有肿瘤暴露用于成像(在相同的暴露条件下)，之后取出肿瘤，并且用电子天平(Sartorius BS124 S，德国)称重。然后将肿瘤样品储存在福尔马林溶液中。媒介物组中的所有小鼠均产生腹水，将其收集并且储存在-80℃的冰箱中。

用于评价功效的统计方法：使用EXCEL T检验(α＝0.05(双侧))分析不同组中体重和肿瘤负荷的比较。

体重：体重变化率在图3中示出。表7A提供了化合物3的重量变化，并且表7B提供了化合物5的重量变化。如表7A和表7B所示，将两种化合物与紫杉醇进行单独比较。媒介物是对照。

表7A.施用化合物3的小鼠的重量变化

表7B.施用化合物5的小鼠的重量变化

如图3和表7A和表7B所示，在实验结束时，PBS组小鼠的体重在实验过程内降低了16％和3％。施用紫杉醇(10 mg/kg)的小鼠的组在实验过程内增加约7％-15％体重。化合物5(9.6 mg/kg，与2.5 mg/kg紫杉醇等摩尔)组在实验过程内没有体重变化。化合物3组(9.6mg/kg，与2.5 mg/kg紫杉醇等摩尔)中的小鼠的体重增加约13％。与媒介物(PBS)组中的那些小鼠相比，重量高约24％。

在评价38.4mg/kg化合物3和化合物5对体重的影响的单独实验中，在3次Q5D剂量后，用38.4mg/kg化合物3或化合物5治疗荷瘤小鼠。在第21天，化合物3治疗的小鼠的体重变化是+22.1％，而化合物5治疗的小鼠的体重变化是-2％。用化合物5治疗的小鼠不活泼，并且它们的随意活动减少。在施用完成后几小时，它们总体状态良好，并且具有正常的食欲。在第18天发现此组中的一只小鼠死亡。当用化合物3(38.4mg/kg)治疗小鼠时，在实验期间没有报告动物死亡。

化合物3的安全性特征优于化合物5。在用三个剂量的化合物5治疗动物后，小鼠显示体重几乎没有增加。然而，在化合物3治疗后，小鼠显示增加的体重，这表明这些动物的恢复或治疗反应更好。肿瘤的消除和/或减少越高，存活和重量增加的结局越好。用化合物3治疗后的体重的增加与已证实的药物紫杉醇(Taxol/paclitaxel)类似。

生物学实施例6

在转移性卵巢癌模型中的功效

方法：所述方法与生物学实施例4所述的相同。向12只动物的组(每组12只动物)施用腹膜内(IP)剂量的紫杉醇(10mg/kg)、化合物3(9.6mg/kg，与2.5mg/kg的紫杉醇等摩尔)或化合物5(9.6mg/kg，与2.5mg/kg的紫杉醇等摩尔)。

每组中的肿瘤进展：在研究期期间用FluorVivo成像系统Model 100/Mag(INDEC，美国加利福尼亚州)每周三次获取肿瘤生长和进展的图像，并且根据图像分析的结果计算每组的平均肿瘤面积。

每组的终点肿瘤负荷：在施用后第21天，通过解剖腹腔中的肿瘤并且称重来计算每组的肿瘤负荷。结果在表8A和表8B中示出。如表8A和表8B所示，将两种化合物与紫杉醇进行单独比较。媒介物是对照。

表8A.在施用化合物3之后的平均肿瘤面积

表8B.在施用化合物5之后的平均肿瘤面积

如表8A和表8B所示，在第21天，紫杉醇(10mg/kg)组的平均肿瘤荧光面积是媒介物(PBS)组的约8％-16％(在化合物5组实验中P＝0.000002，并且在化合物3组实验中P＝0.00050396)。施用9.6mg/kg的化合物5(与2.5mg/kg紫杉醇等摩尔)的组的平均肿瘤荧光面积分别是相应媒介物(PBS)组的10％，并且与媒介物(PBS)组相比存在统计学上显著的差异(P＝0.000002)。化合物5对腹膜播散性人卵巢癌小鼠模型显示出良好的肿瘤抑制作用，但是在实验结束前第18天一只动物死亡。

化合物3的组的平均肿瘤荧光面积是媒介物(PBS)组的约20％，并且在化合物3组与媒介物组之间存在统计学上显著的差异(P＝0.00000215)。施用化合物3(9.6mg/kg，与2.5 mg/kg紫杉醇等摩尔)的三组小鼠的平均肿瘤荧光面积是紫杉醇(10 mg/kg)组的约100％，并且在施用化合物3的三组中的小鼠的平均肿瘤重量与紫杉醇(10 mg/kg)组中的小鼠的平均肿瘤重量没有显著差异。平均荧光面积也在图4中示出。

化合物3(9.6 mg/kg，与2.5 mg/kg紫杉醇等摩尔)组的平均肿瘤重量是媒介物组的约10％，并且在紫杉醇(10 mg/kg)组的相同范围内。值得注意的是，与紫杉醇(10mg/kg)组相比，化合物3给药组(9.6 mg/kg，与2.5 mg/kg紫杉醇等摩尔)中小鼠的平均肿瘤重量不存在统计学上显著的差异。紫杉醇和化合物3显示出可比较的肿瘤抑制作用，而化合物5的效果比紫杉醇低约10％。化合物3显示出比化合物5高至少10％的肿瘤抑制作用。图5是化合物3给药组和化合物5给药组与其各自的媒介物相比在第21天的平均肿瘤重量的图。结果也在表9A和表9B中示出。

图6A和图6B是化合物3给药组和化合物5给药组与其各自的媒介物和紫杉醇相比的取出的肿瘤的摄影图像。来自每组中6只小鼠的肿瘤在图6A和图6B中示出。图7是比较化合物3和化合物5与其各自的紫杉醇和媒介物组的图。

表9A.在施用化合物3之后的平均肿瘤质量

表9B.在施用化合物5之后的平均肿瘤质量

肿瘤抑制率(IR)：基于最终平均肿瘤重量，根据以下公式计算肿瘤IR：

IR(％)＝(1-治疗(t)/对照(c))×100

图8和表10A和表10B示出了在实验结束时每组中的平均IR。

表10A.施用化合物3的小鼠的肿瘤抑制率

表10B.施用化合物5的小鼠的肿瘤抑制率

人卵巢癌的腹膜播散和转移模型的小鼠模型的功效结果显示，化合物3的肿瘤抑制作用显著优于化合物5。化合物5在9.6mg/kg的肿瘤抑制率是79±11％，而化合物3在9.6mg/kg的肿瘤抑制率是90±8％。在所述剂量和实验条件下，化合物3对实验小鼠没有明显的急性毒性作用，而化合物5导致动物死亡。

生物学实施例7

化合物3针对脑癌的功效

细胞培养：将萤光素酶标记的NCI-H460-luc2人颅内细胞在37℃下在空气中的5％CO₂气氛中在补充有10％热灭活的胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的ATCC配制的RPMI1640培养基中体外维持为单层培养。通过胰蛋白酶-EDTA处理将肿瘤细胞每周两次进行常规传代培养。收获在指数生长期生长的细胞，并且进行计数用于肿瘤接种。

肿瘤接种和动物分组：用阿佛丁(avertin，20μL/g)麻醉雌性BALB/c裸鼠。手术后30分钟，用10mg/kg的卡洛芬向动物腹膜内给药以缓解疼痛。

将麻醉的小鼠适当地定位。用70％乙醇溶液准备手术区域。使用无菌手术刀，在顶枕骨上切出大约1cm长的矢状切口。然后使用浸泡在0.9％盐水中的棉签清洁暴露的头骨表面。在肿瘤细胞注射之前，使用无菌25号尖针在前囟点右侧2mm和冠状缝前方1mm处刺穿头骨，从而产生用于注射肿瘤细胞的开口。在将细胞吸入注射器之前，通过用手指轻敲来混合细胞悬浮液的内容物。在注射器中加载所需量的细胞悬浮液，并且格外小心以避免气泡。然后用酒精棉球清洁注射器的外部，以擦拭外面使其无任何黏附细胞，这有助于预防颅外肿瘤的建立和生长。为了确保实现适当的注射深度，通过手术刀在P20移液器枪头的尖端上切下3mm长度。将枪头的这一部分安装在注射器上以限制注射深度，并且确保注射器针的尖端距离头骨下侧3mm。将注射器垂直于头骨放置在先前产生的孔中。并且缓慢注射细胞悬浮液(应当在1分钟时间内注射3μL在20％基质胶中含有1x 105个NCI-H460-luc2细胞的悬浮液)。通过注射器插入的适当角度来防止细胞的脑室内注射和随后的脊髓播散。在注射完成后，将针在原位再放置一分钟，然后缓慢抽出。用医用吻合胶(OB)封闭孔。使用镊子将头皮在头骨上拉在一起，并且用外科手术缝合线封闭切口。使小鼠保持温暖直到完全从麻醉中恢复。

在肿瘤植入后第4天选择动物并随机化(基于它们的生物发光密度)。如表11所示，根据预定方案开始治疗。

观察：在常规监测期间，每日检查动物的肿瘤生长和治疗对正常行为的任何影响，所述行为如活动性、食物和水消耗(仅通过看)、体重增加/减轻(每周或每日两次测量体重)、眼睛/毛发无光泽和方案中陈述的任何其他异常影响。根据每个子集内的动物数量记录死亡和观察到的临床体征。

生物发光测量和终点：将手术接种的小鼠称重，并且以150mg/kg的剂量腹膜内施用萤光素。在萤光素注射后十至十五分钟，用氧气和异氟烷的混合气体预麻醉动物。当动物处于完全麻醉状态时，将小鼠移入成像室，用IVIS(Lumina II)成像系统进行生物发光测量。

主要终点是确定肿瘤生物发光生长是否可以延迟、降低或消失。当小鼠显示出明显的发病时，每周两次或每天一次测量体重。根据方案每周一次测量和记录整个动物身体(包括原发性和转移性肿瘤)的生物发光(生物发光数据未示出)。将具有超过20％的明显体重减轻或无法正常饮食或瘫痪的显示垂死的动物定义为濒死。

基于治疗组和媒介物组内动物的存活时间来计算每组的中位存活时间(天数)，根据治疗组和媒介物组的中位存活时间来分析延长寿命(ILS)。

统计学分析：在分组之后第7天所有动物仍然存活，因此通过T检验对在给药后第7天获得的数据进行组间生物发光差异的统计学分析。所有数据均使用SPSS17.0进行分析。p<0.05被认为是统计学上显著的。

通过卡普兰-迈耶方法分析存活时间。关注的事件是动物死亡。存活时间定义为从给药开始到死亡的时间。对于每组，计算中位存活时间和相应的95％置信区间。还为每组构建卡普兰-迈耶曲线，并且使用对数秩检验来比较组之间的存活曲线。

存活时间：化合物3和紫杉醇(Paclitaxel/Taxol)治疗对雌性BALB/c裸鼠中NCI-H460-luc2人颅内模型的存活的影响在表11中示出。在结束点时，化合物3 38.4mg/kg组中的一只小鼠仍然存活。

每组中动物的存活期在图11和表11中示出。媒介物组的中位存活时间(MST)值是14天。紫杉醇(10mg/kg)和化合物3(38.4mg/kg)组的MST值分别是10天(95％置信区间：7.60-12.40天)和14天(95％置信区间：11.61-16.39天)。

表11.化合物3和紫杉醇对存活时间(MST)的影响

a.中位存活时间(MST)±SEM。

b.通过将治疗组与媒介物组进行比较来获得p值。

c.通过将治疗组与紫杉醇10mg/kg组进行比较来获得p值。

d.通过将治疗组与化合物3 9.6mg/kg组进行比较来获得p值。

e.通过将治疗组与化合物3 19.2mg/kg组进行比较来获得p值。

生物学实施例8

化合物3针对胰腺癌的功效

按照生物学实施例5中描述的程序，给小鼠注射人胰腺癌(BXPC-3)细胞，并且用化合物3(9.6mg/kg)QD5(在第0天、第5天和第10天给药)治疗以研究化合物3的功效。在研究过程期间内测量肿瘤的荧光面积，并且如图10所示，与施用化合物3的小鼠相比，在研究过程期间，施用媒介物的小鼠的荧光面积增加至更大的程度。图11是比较施用媒介物的小鼠和施用化合物3的小鼠在研究的第17天的荧光面积的图。图12是比较在第17天施用媒介物的小鼠和施用化合物3的小鼠的肿瘤重量的图。

生物学实施例9

化合物3针对胃癌的功效

按照生物学实施例5中所述的程序，给小鼠注射人胃癌(NUGC-4)细胞，并且用化合物3(9.6mg/kg，与2.5mg/kg紫杉醇等摩尔)QD5(在第0天、第5天和第10天给药)治疗，以研究化合物3的功效。在研究过程期间测量肿瘤的荧光面积(图13)。在施用PBS的小鼠中在大约第15天后，血性腹水的形成阻断了荧光读取。在施用化合物3的小鼠中，荧光在研究过程期间降低。图14是比较施用媒介物的小鼠和施用化合物3的小鼠在研究的第21天的荧光面积的图。图15是比较在第21天施用媒介物的小鼠和施用化合物3的小鼠的肿瘤重量的图。

生物学实施例10

腹水的消除

按照实施例5所述的程序，还研究了注射SKOV-3-GFP细胞(6x10⁶/120μL/小鼠或8x10⁶/120μL/小鼠的细胞悬浮液注射到腹膜腔中)的小鼠的腹水的形成。向小鼠施用媒介物(PBS)、紫杉醇(10mg/kg)或化合物3(9.6mg/kg)。在化合物3治疗的小鼠中，没有观察到血性腹水。PBS组和紫杉醇组观察到动物中恶性腹水的形成。

图16和图18是在注射SKOV-3-GFP细胞(分别为6x10⁶/120μL/小鼠或8x10⁶/120μL/小鼠)之后施用媒介物的小鼠的图像。如图所示，观察到血性腹水。图17A和图17B是在注射SKOV-3-GFP细胞(6x10⁶/120μL/小鼠)之后施用化合物3(9.6mg/kg，与2.5mg/kg紫杉醇等摩尔)的两只小鼠的图像。如图所示，未观察到血性腹水。图19是对从施用媒介物或化合物3的小鼠中取出的腹水的比较。如图19所示，从施用媒介物的小鼠中取出了血性腹水，但是从施用化合物3的小鼠中未取出血性腹水。

等同方案

上文阐述的公开文本可以涵盖具有独立效用的多个不同实施方案。尽管已经公开了这些实施方案中的每一个，但是如本文所公开和展示的其具体实施方案不应被认为是限制性的，因为许多变化是可能的。实施方案的主题包括本文公开的多种元件、特征、功能和/或特性的所有新颖且非显而易见的组合和子组合。以下权利要求特别指出了被认为是新颖且非显而易见的某些组合和子组合。在本申请中、在要求本申请的优先权的申请中或在相关申请中，可以要求保护如在特征、功能、元件和/或特性的其他组合和子组合中的可替代的实施方案。此类权利要求，无论是涉及不同的实施方案还是涉及相同的实施方案，并且无论与原始权利要求相比范围更宽、更窄、相等还是不同，也都被认为包括在本公开文本的主题内。

在不脱离本公开文本的范围的情况下，来自本文或附图中描述的任何实施方案的一个或多个特征可以与本文或附图中描述的任何其他实施方案的一个或多个特征组合。

本说明书中引用的所有出版物、专利和专利申请都通过引用并入本文，如同明确且单独地指出将每个单独的出版物或专利申请通过引用并入一样。尽管出于清楚理解的目的已经通过说明和实施例详细地描述了前述公开文本，但是根据本公开文本的教导，本领域普通技术人员将容易清楚的是，可以在不脱离所附权利要求的精神或范围的情况下对其进行某些改变和修改。

Claims (32)

1.一种式(X)的化合物或其药学上可接受的盐：

其中与式(X)的所有立体异构体的总重量相比，所述式(X)的化合物按重量计包含约50％、约60％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或约99％的式(I)的化合物：

其中n是选自1-20的整数。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述式(X)的化合物按重量计包含约90％的所述式(I)的化合物。

3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述式(X)的化合物按重量计包含约95％的所述式(I)的化合物。

4.根据权利要求1所述的化合物，其中所述式(X)的化合物按重量计包含约99％的所述式(I)的化合物。

5.一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：

其中n是选自1-20的整数。

6.根据权利要求5所述的化合物，其中所述化合物是非对映体过量的。

7.根据权利要求6所述的化合物，其中所述化合物的非对映体过量为至少约50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％。

8.根据权利要求5所述的化合物，其中所述化合物按重量计至少约50％不含、至少约60％

不含、至少约70％不含、至少约75％不含、至少约80％不含、至少约85％不含、至少约90％不含、至少约95％不含、至少约97％不含、至少约99％不含或100％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。

9.根据权利要求8所述的化合物，其中所述化合物按重量计至少约90％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。

10.根据权利要求8所述的化合物，其中所述化合物按重量计至少约95％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。

11.根据权利要求8所述的化合物，其中所述化合物按重量计至少约97％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的化合物，其中n是6-10的整数。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的化合物，其中n是8。

14.根据权利要求1-11中任一项所述的化合物，其中所述化合物是根据式(II)的化合物或其药学上可接受的盐：

15.根据权利要求14所述的化合物，其中所述化合物按重量计至少约50％不含、至少约60％不含、至少约70％不含、至少约75％不含、至少约80％不含、至少约85％不含、至少约90％不含、至少约95％不含、至少约97％不含、至少约99％不含或100％不含相反的D-半胱氨酸氨基酸差向异构体。

16.根据权利要求15所述的化合物，其中所述化合物按重量计至少约90％不含相反的D-

半胱氨酸氨基酸差向异构体。

17.根据权利要求15所述的化合物，其中所述化合物按重量计至少约95％不含相反的D-

半胱氨酸氨基酸差向异构体。

18.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，所述化合物是药学上可接受的盐。

19.根据权利要求18所述的化合物，所述化合物是HCl盐。

20.根据权利要求18所述的化合物，所述化合物是TFA盐。

21.一种组合物，所述组合物包含根据权利要求1所述的式(X)的化合物。

22.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1-20中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。

23.一种治疗增殖性、皮肤或眼科疾病的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据权利要求1-20中任一项所述的化合物、治疗有效量的根据权利要求21所述的组合物或治疗有效量的根据权利要求22所述的药物组合物的步骤。

24.根据权利要求1-20中任一项所述的化合物、根据权利要求21所述的组合物或根据权利要求22所述的药物组合物，用于疗法中。

25.根据权利要求1-20中任一项所述的化合物、根据权利要求21所述的组合物或根据权利要求22所述的药物组合物，用于增殖性、皮肤或眼科疾病的治疗中。

26.根据权利要求1-20中任一项所述的化合物、根据权利要求21所述的组合物或根据权利要求22所述的药物组合物在制造用于治疗增殖性、皮肤或眼科疾病的药剂中的用途。

27.根据权利要求23-26中任一项所述的方法或用途，其中所述疾病是脑癌、肝癌、卵巢癌、胃癌或结直肠癌。

28.根据权利要求23-26中任一项所述的方法或用途，其中所述疾病是头颈癌、口腔癌或颌面癌。

29.根据权利要求23-28中任一项所述的方法或用途，其中腹膜内施用所述化合物。

30.根据权利要求29所述的方法或用途，其中经由吸入施用所述化合物。

31.根据权利要求23-28中任一项所述的方法或用途，其中口服施用所述化合物。

32.根据权利要求31所述的方法或用途，其中舌下施用所述化合物。