CN118354796A - 用于治疗、预防或管理过度增殖病症的化合物、药物组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本文公开了用于治疗、预防或管理人和其他哺乳动物的包括过度增殖病症(诸如癌症)的疾病和病况的化合物、药物组合物和方法。本文公开的化合物是经由可切割连接体和/或功能性间隔基缀合至整联蛋白结合部分的六环拓扑异构酶抑制剂前药。

Description

用于治疗、预防或管理过度增殖病症的化合物、药物组合物和 方法
交叉引用
本国际专利申请要求于2021年10月4日提交的美国临时专利申请号63/252,122的权益，所述申请通过引用整体并入本文。
背景技术
本申请涉及化合物、药物组合物、其制备方法及其在人类和其他动物中用于治疗、预防或管理包括过度增殖病症(诸如癌症)的疾病和病况中的用途。
发明内容
本发明涉及新型化合物(或“缀合物”)，其包含具有活性组分的一个或多个分子的一种或多种结合剂分子或其衍生物，其中所述活性组分是六环细胞毒性或细胞抑制配体(例如，拓扑异构酶抑制剂)，其经由本文所述和定义的连接体肽EL缀合至一种多种结合剂分子(例如，整联蛋白结合剂(例如，αvβ3整联蛋白结合剂))，以及其制备方法，其用于治疗和/或预防病症，特别是过度增殖病症的用途。
本发明描述了具有小分子结合剂的缀合物，其在通过肿瘤微环境(TME)中存在的酶切割后在TME中在细胞外释放药物。本文描述的化合物可以包含经由酶促可切割连接体和/或聚合连接体缀合的小分子结合剂(例如，细胞毒性或细胞抑制配体和整联蛋白结合剂)，在一些实施方案中，其保留在酸性TME中。
为了增加本文所述的毒簇的治疗窗口，并实现此类有效的抗肿瘤化合物的肿瘤靶向性，已经开发了一类六环喜树碱衍生物前药，并在本发明中对此进行了描述。发明性前药化合物可以包括但不限于一个或多个αvβ3整联蛋白结合部分，其经由肽部分EL连接到毒簇，该肽部分EL被存在于肿瘤微环境(TME)中的蛋白酶切割以在作用位点释放母体抗肿瘤化合物。TME中存在的酶包括但不限于中性粒细胞弹性蛋白酶和豆荚蛋白(legumain)。
在一个方面，本文提供了包含经由连接体缀合至一个或多个整联蛋白结合剂(IN)的六环细胞毒性或细胞抑制配体(CT)的化合物或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，连接体是酶促可切割的。
在一些实施方案中，本文提供了式(A)或式(C)的化合物：
CT-EL-L1-A1(L2-IN)(L3-IN) 式(A)
CT-EL-L5-IN 式(C)
其中：
CT是六环细胞毒性或细胞抑制配体；
EL是酶促可切割连接体；任选地进一步包含自裂解基团(SIL)；
每个L1、L2、L3和L5独立地是二价连接体；
A1是三价连接体；并且
IN在每个例子中独立地是整联蛋白结合剂。
在一些实施方案中，化合物被中性粒细胞弹性蛋白酶切割。在一些实施方案中，EL具有式：权利要求1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物被中性粒细胞弹性蛋白酶切割。在一些实施方案中，EL是下式的酶促可切割的肽连接体：L-Asp-L-Pro-L-Ala、L-Asn-L-Pro-L-Ala、L-Asp-L-Pro-L-Val、L-Asn-L-Pro-L-Val、-Gly-L-Pro-L-Val-、L-Ala-L-Pro-L-Val-、L-Nva-L-Pro-L-Val-、L-His-L-Pro-L-Val-、L-Asp-L-Pro-L-Ile、L-Asn-L-Pro-L-Ile、-Gly-L-Pro-L-Ile-、L-Ala-L-Pro-L-Ile-、L-Nva-L-Pro-L-Ile-、L-His-L-Pro-L-Ile-、L-Asp-L-Pro-L-Leu、L-Asn-L-Pro-L-Leu、-Gly-L-Pro-L-Leu-、L-Ala-L-Pro-L-Leu-、L-Nva-L-Pro-L-Leu-或L-His-L-Pro-L-Leu-。
在一些实施方案中，化合物是式(I-A)或式(I-C)的化合物：
或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中：
CT是六环细胞毒性或细胞抑制配体；
E1是氢、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH、-CH2CH2C(O)OH；-CH2C(O)OR1；或-CH2CH2C(O)OR1；
E3是-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2或-CH(CH3)CH2CH3；
A1是三价连接体；
每个L1、L2、L3和L5独立地是二价连接体；
R1是取代的或未取代的C1-12烷基；其中如果R1被取代，则其被独立地选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、-L6-IN、-C1-6烷基、-CN、-CONH2、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-COOH、-COO(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-NHL6-IN、-N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)3 +、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO(IN)、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-OH、-O(C1-6烷基)、-OC(＝O)O(C1-6烷基)、-OC(＝O)NH(C1-6烷基)、氧代、-SO3H、-SO2(C1-6烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-6烷基)和-SO2N(C1-6烷基)2；其中L6是二价连接体；并且
IN在每个例子中独立地是整联蛋白结合剂。
在一些实施方案中，IN在每个例子中是小分子整联蛋白结合部分。在一些实施方案中，IN在每个例子中是αvβ3整联蛋白结合剂。在一些实施方案中，IN在每个例子中具有结构
或其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中：
#L表示至L1、L2、L3、L5或L6的键；并且
R是氢或取代的或未取代的C1-12烷基。
在一些实施方案中，本文提供了式(II-A)或式(II-C)的化合物：
其中：
CT是六环细胞毒性或细胞抑制配体；
E1是氢、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH、-CH2CH2C(O)OH；-CH2C(O)OR1；或-CH2CH2C(O)OR1；
E3是-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2或-CH(CH3)CH2CH3；
A1是三价连接体；
每个L1、L2、L3和L5各自独立地是二价连接体；并且
R1是取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的杂烷基、取代的或未取代的碳环或取代的或未取代的杂环；其中如果R1被取代，则其被独立地选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、-L6-IN、-C1-6烷基、-CN、-CONH2、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-COOH、-COO(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-NHL6-IN、-N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)3 +、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO(IN)、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-OH、-O(C1-6烷基)、-OC(＝O)O(C1-6烷基)、-OC(＝O)NH(C1-6烷基)、氧代、-SO3H、-SO2(C1-6烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-6烷基)和-SO2N(C1-6烷基)2；其中L6是二价连接体；并且IN是整联蛋白结合剂。
在一些实施方案中，CT是：
其中：
X1是-F、-Cl或-CH3；
X2是-F、-Cl或-CH3；
X3是氢；并且
X4是氢、C1-3烷基或C1-3烷基胺；
RX是氢、-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-EL2-C(O)CH2-(吡啶)；
其中EL2是酶促可切割连接体；并且
RY是氢、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)C1-6卤代烷基、-C(O)C1-6烷基-OH或-C(O)C1-6烷基-OCH3。
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物。
在一些实施方案中，本文提供了式(III-A)、式(III-C)、式(IV-A)或式(IV-C)的化合物：
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中：
RX是氢、-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-EL2-C(O)CH2-(吡啶)；
其中EL2是豆荚蛋白可切割连接体；
RY是氢、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基或-C(O)C1-6卤代烷基；
E1是氢、-CH2C(O)NH2或-CH2C(O)OH；并且
A1是三价连接体；并且
每个L1、L2、L3和L5独立地是二价连接体。
在又另一方面，本文描述了一种化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物或其药物组合物，用作药剂。在又另一方面，本文描述了一种化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物或其药物组合物，用于治疗本文公开的疾病或病症的方法中。在一些实施方案中，所述疾病或病症是过度增殖病症。在一些实施方案中，所述疾病或病症是癌症。
对于本领域技术人员来说，本公开的另外方面和优势将从以下详细描述中变得显而易见，其中仅显示和描述了本公开的说明性实施方案。如将理解，本公开能够具有其他和不同的实施方案，并且其几个细节能够在各种明显的方面具有修改，所有这些都不会偏离本公开。因此，附图和描述应被视为说明性的，而不是限制性的。
援引并入
本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请在此通过引用并入本文，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请被明确和单独指出通过引用并入本文。程度是通过引用并入的出版物和专利或专利申请与说明书中包含的公开内容相矛盾时，说明书旨在替代和/或优先于任何此类矛盾的材料。
附图说明
本公开的新颖特征在所附权利要求书中特别地阐述。将通过参考阐述了利用本发明原理的说明性实施方案的以下具体实施方案和附图(在本文中也称为“图”)获得对本发明的特征和优势的更好的理解，在所述附图中：
图1中子图(a)示出了化合物1的内酯环的闭合形式和水解的开放形式之间的pH依赖性平衡反应；子图(b)示出了具有酸性洗脱液的化合物1的LC-MS梯度；并且子图(c)示出了具有碱性洗脱液的化合物1的LC-MS梯度。
图2中子图(a)示出了化合物2的内酯环的闭合形式和水解的开放形式之间的平衡反应；子图(b)示出了具有酸性洗脱液的化合物2的LC-MS梯度；并且子图(c)示出了具有碱性洗脱液的化合物2的LC-MS梯度。
图3中子图(a)示出了化合物4的内酯环的闭合形式和水解的开放形式之间的平衡反应；子图(b)示出了具有酸性洗脱液的化合物4的LC-MS梯度；并且子图(c)示出了具有碱性洗脱液的化合物4的LC-MS梯度。
图4示出了化合物4b和5在SCLC小鼠异种移植物模型中与未处理(媒介物)相比的抗肿瘤功效。
具体实施方式
本发明涉及新型药物化合物，其包含一种或多种αvβ3整联蛋白结合剂、含有一个或多个N-烷基氨基基团或在连接体中不同位置处的一个或多个氧以及通过肿瘤相关酶(中性粒细胞弹性蛋白酶)可切割的肽序列的新型连接体单元，和细胞毒性组分(例如，六环拓扑异构酶抑制剂)，其制备方法，其用于治疗、预防或管理人类和其他动物的包括过度增殖病症(诸如癌症)的疾病和病况的用途。
癌症的化疗通常伴随着严重的副作用，这是由于化疗药物对其他组织类型的增殖细胞而不是肿瘤组织的毒性作用。多年来，科学家们一直致力于提高所采用的活性化合物的选择性的问题。一种常用的方法是合成前药，例如，通过改变pH(DE-A 42 29 903)，通过酶(例如葡萄糖醛酸酶；EP-A 511 917和595 133)或抗体-酶缀合物(WO 88/07378；US 4975 278；EP-A 595 133)，前药或多或少选择性地在靶组织中释放。这些方法的一个问题是，除其他外，缀合物在其他组织和器官中缺乏稳定性，并且特别是，无处不在的活性化合物分布，其跟随活性化合物在肿瘤组织中的细胞外释放。
20(S)-喜树碱是一种五环生物碱，由Wall等人(J.Am.Chem.Soc.88、3888(1966))于1966年分离得到。在许多体外和体内试验中，其具有高活性抗肿瘤潜力。然而，不幸的是，由于毒性和溶解度问题，在临床研究阶段未能实现有希望的潜力。
通过打开E环内酯和形成钠盐，获得了环封闭形式的pH依赖平衡的水溶性化合物。这里也是，临床研究也没有取得成功。
大约20年后，发现生物活性归因于对拓扑异构酶I的酶抑制。此后，为了找到更易溶解、耐受性更好并且在体内有活性的喜树碱衍生物，研究活动再次增加。
为了提高水溶性，已经描述了A环和B环改性的喜树碱衍生物和具有可电离基团的20-O-酰基衍生物的盐(US 4,943,579)。后一种前药概念后来也被转移到改性的喜树碱衍生物(WO 96/02546)。然而，描述的20-O-酰基前药在体内具有非常短的半衰期，并且被非常迅速地切割成母体结构。
大量喜树碱衍生物已在临床前和临床研究中被研究；其中，伊立替康(irinotecan)、拓扑替康(topotecan)和贝洛替康(belotecan)已成功获批(Li等人，Am JCancer Res 2017；7(12):2350-2394)。下面列出了一些此类衍生物(A-W)。
改善细胞毒性试剂诸如喜树碱及其衍生物的治疗窗口仍然是一个挑战。
整联蛋白是在细胞表面发现的异二聚体跨膜蛋白，其在细胞与细胞外基质的粘附中起重要作用。它们通过存在于这些蛋白中的RGD序列识别细胞外糖蛋白，诸如细胞外基质上的纤连蛋白或玻连蛋白(RGD是氨基酸序列精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸的单字母代码)。
一般而言，诸如，例如玻连蛋白受体(也称为αvβ3受体，或可选地αvβ5受体或GpIIb/IIIa受体)的整联蛋白在诸如细胞迁移、血管生成和细胞-基质粘附等生物过程中起重要作用，因此对于这些过程是关键步骤的疾病来说也是如此。癌症、骨质疏松、动脉硬化、再狭窄和眼炎可以通过举例的方式提到。
αvβ3受体大量出现在，例如，生长的内皮细胞上，并使它们可能与细胞外基质粘附。因此，αvβ3受体在血管生成(即新血管的形成)中起重要作用，这是癌性病症中肿瘤生长和转移形成的重要前提。
有可能表明，阻断上述受体是治疗这类病症的重要起点。如果生长的内皮细胞与细胞外基质的粘附通过阻断其相应的整联蛋白受体(例如，通过环肽或单克隆抗体)而受到抑制，则不会发生血管生成，从而导致肿瘤生长的停止或倒退(参见，例如，Brooks等人，inCell 79,1157-1164(1994))。
尽管令人信服的临床前结果表明整联蛋白的抑制具有治疗潜力，但针对那些整联蛋白的整联蛋白抑制剂的临床试验一再未能证明对癌症患者的治疗益处(C.Ruegg等人，Cancers 2019,11,978)。
WO 1998/010795描述了一种缀合物，其中靶向肿瘤的分子连接到功能单元诸如，例如细胞抑制剂的或可检测的标记诸如，例如放射性核素。特别地，整联蛋白结合剂诸如，例如具有上述RGD序列的肽被描述为靶向肿瘤或肿瘤间质的分子。阿霉素被描述为与此类寻址肿瘤的分子相关的细胞抑制剂的一个实例。
在WO 1998/010795的化合物的情况中，进行连接使得寻址肿瘤的分子和功能单元在保留其各自性质的情况下直接相互结合(参见，例如，第56页第17行至第58页第10行和实施例6)。结果是，这些化合物确实通过与寻址肿瘤的实体结合选择性地集中在肿瘤细胞的紧邻区域(通过结合至αvβ3整联蛋白受体，其特别地在通过血管生成新形成的内皮细胞上表达，在具有αvβ3整联蛋白拮抗作用的自由基的情况下)，但是由于直接结合，功能单元诸如例如细胞抑制剂不能被释放到肿瘤组织的细胞内空间中。
从根本上说，该缀合物一方面通过部分寻址缀合物中发现的αvβ3或αvβ5整联蛋白受体的作用而选择性地集中在肿瘤组织中，而另一方面包括可从缀合物被释放的细胞抑制剂，由于细胞抑制剂对肿瘤细胞的更直接作用的可能性，其与WO 1998/010795中描述的缀合物相比应该对肿瘤组织具有增加的毒性作用。具体而言，如果细胞抑制剂的释放发生在肿瘤组织的紧邻区域或甚至在肿瘤细胞中，则这种毒性作用和肿瘤选择性应该更高。
在WO 2000/069472中公开了酶激活的抗肿瘤前药化合物，其可被胶原酶(IV)和弹性蛋白酶特异性切割。关于通过弹性蛋白酶可切割的连接单元，此申请描述了特异性四肽序列Ala-Ala-Pro-Val和Ala-Ala-Pro-Nva是合适的。此外，在该参考文献中，没有提到包含寻址αvβ3整联蛋白受体的部分和细胞抑制剂的缀合物。Y.Liu等人(Mol.Pharmaceutics2012,9,168)描述了经由豆荚蛋白可切割连接物连接到αvβ3整联蛋白靶向部分的奥瑞他汀(Auristatins)的缀合物。Gennari等人描述了紫杉烷衍生物经由含有自裂解间隔单元的弹性蛋白酶可切割连接体连接至环肽RGD整联蛋白识别基序和二酮哌嗪(DKP)支架(Chem.Eur.J.2019,25,1696–1700)。
在EP 1 238 678中公开了具有细胞毒性试剂的缀合物，其靶向αvβ3整联蛋白，并且具有可被弹性蛋白酶特异性切割的肽连接物。关于弹性蛋白酶可切割的连接单元，此申请描述了包含Pro-Val和Pro-Leu的肽序列。作为毒簇部分，举例说明了喜树碱和喹诺酮羧酸。
此类缀合物的具体挑战包括
·能够在适当的媒介物中静脉施用的足够的溶解度，
·完整缀合物的高肿瘤穿透性，
·避免系统性解缀合的血浆中的高稳定性，
·与肿瘤微环境中的靶向受体高效结合，
·通过肿瘤微环境中存在的酶高效切割，
·切割的毒簇部分的高稳定性和细胞渗透性，以增强肿瘤细胞的摄取对重新分布。
因此，本发明的一个目的是开发包含寻址αvβ3整联蛋白受体的部分和细胞抑制剂的缀合物，其可以优选在肿瘤微环境中从缀合物中被释放，其中缀合物中寻址αvβ3整联蛋白受体的部分保留其与αvβ3整联蛋白受体结合的能力，并且因此为这种化合物提供组织选择性。此外，缀合物的可切割性和药物释放应该由肿瘤环境中存在和活性的酶(诸如中性粒细胞弹性蛋白酶)介导。最后，毒簇的特性(profile)应该以某种方式匹配细胞外切割和释放机制，其中毒簇应该可高度渗透到肿瘤细胞和组织中，而不是药物转运蛋白的底物。
在WO2020/094471中已经描述了具有7-乙基喜树碱的αvβ3整联蛋白缀合物，其解决了这些方面中的一些。
已经研究了许多喜树碱衍生物作为抗体-药物偶联物中的有效负荷，诸如Enhertu中的DxD(Modi等人，N.Engl.J.Med.382,610-621)和Trodelvy中的SN38(Rugo等人，FutureOncol.1705-715)，这两者最近都获得了批准。
由于小分子药物缀合物可以显示出优于ADC的有利特征，诸如，例如更高的肿瘤穿透性(Cazzamalli等人，J.Am.Chem.Soc.2018,140,1617)，本发明包含具有选定的喜树碱衍生物的小分子药物缀合物。优选的喜树碱衍生物应显示出高效力、高膜渗透特性和低流出比。本文所述的示例性喜树碱衍生物包括10,11-亚甲二氧基喜树碱(例如，FL118)和依喜替康(exatecan)衍生物。
本发明涉及药物化合物，其为缀合物，该缀合物包含一个或多个αvβ3整联蛋白结合部分、可选择性地被肿瘤相关酶(诸如弹性蛋白酶)切割的连接单元、聚N-烷基胺(例如，聚乙烯亚胺或PEI)或聚醚(例如，聚乙二醇或PEG)间隔基和有效的细胞毒性试剂(即，毒簇(CT))，优选地但不限于六环喜树碱衍生物，诸如本文描述的那些。由于经由优选的连接单元与αvβ3整联蛋白结合剂连接，缀合物具有肿瘤特异性作用，该优选的连接单元可被弹性蛋白酶选择性切割，即通过特别可在肿瘤基质中发现的酶切割。优选的连接单元提供缀合物在生物培养基(例如培养基或血清)中的足够的稳定性，同时由于其在肿瘤微环境中的特异性酶促或水解切割和释放的药物部分的细胞摄取而提供所需的肿瘤细胞杀伤。
具体而言，本发明的化合物通过不同的手段显示了有利的特征：
·含有连接体中的不同位置处的一个或多个氧原子或N-烷基氨基团的改变的间隔基，其提供高的溶解度
·能够产生高亲和力的一个或多个αvβ3整联蛋白结合部分
·尽管存在显著的空间性挑战，但这些新型连接体似乎对肿瘤基质中存在的酶(如中性粒细胞弹性蛋白酶)的切割高度敏感
·在一些实施方案中，缀合物设计，但不限于羟基内酯酰化，其对内酯环稳定性具有有利影响(Drugs Fut 2002,27(9),869)
·缀合物在血浆中的高稳定性和在弹性酶的存在下增加的细胞毒性活性
·采用优选地但不限于六环细胞毒性或细胞抑制弹头(warhead)(例如，依喜替康衍生物或10,11-亚甲基二氧基-喜树碱毒簇、10,11亚乙基二氧基-喜树碱毒簇)，其相对于一些五环喜树碱类似物提供提高的效力。
为了实现此目标，依喜替康、10,11-亚甲基二氧基-喜树碱和其衍生物(例如，本文公开的那些)作为上面提到的缀合物中的毒簇部分是特别有利的。本文提供了细胞毒性或细胞抑制配体(例如，六环拓扑异构酶抑制剂，例如，依喜替康或10,11-亚甲基二氧基-喜树碱)的缀合物，其被设计用于解决本领域先前描述的化合物和缀合物具有有限临床可行性的各种挑战。特别是，本化合物和缀合物提供了具有功能性和有益作用的连接部分，包括肿瘤保留，多个整联蛋白结合单元的结合，毒簇和靶向部分之间的延长的距离，以及调节DMPK和毒簇释放并且因此这些特征中的每个增强靶上毒性同时限制了这种靶外部位(例如，中性粒细胞弹性蛋白酶不太普遍的地方)的毒性问题的前药设计。本文公开的化合物和缀合物在临床上是有利的，并且为至少上文描述的那些原因以及对本领域技术人员将显而易见的其他原因提供实用性的另外的要素。
虽然本文已经示出和描述了本发明的各种实施方案，但对于本领域技术人员来说显而易见的是，这种实施方案仅通过示例的方式提供。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员可以想到许多变化、变化和替换。应当理解，可以采用本文描述的发明的实施方案的各种替代方案。
化合物
癌症细胞或肿瘤微环境过表达某些酶，包括但不限于中性粒细胞弹性蛋白酶。本文描述的缀合物通常是通过中性粒细胞弹性蛋白酶酶促可切割的。在一些实施方案中，本文描述的缀合物在癌症细胞的微环境中选择性地可切割，而在循环或健康组织中发生较少切割。在一些实施方案中，本文描述的缀合物在被肿瘤相关酶(诸如，中性粒细胞弹性蛋白酶和/或豆荚蛋白)激活后是细胞毒性的。在一些实施方案中，本文描述的缀合物在缺乏所述激活时在治疗浓度是无毒的。本文描述的细胞毒性试剂是拓扑异构酶的抑制剂。细胞毒性试剂也可以例如，经由酶促可切割连接体或间隔基缀合至整联蛋白结合部分。本公开中使用的整联蛋白结合部分包括能够结合至肿瘤细胞或至细胞外基质的任何试剂。实例包括，但不限于，小分子、肽、蛋白质等。在一些实施方案中，整联蛋白结合部分结合至为α-vβ-3(或可选地：αvβ3、avb3或甚至avb3)的整联蛋白。在一些实施方案中，本文描述的缀合物充当前药，例如，酶促或水解可切割前药并且切割的组分中的一个是本文描述的细胞毒性试剂或细胞抑制剂(例如，依喜替康或FL118)。在一些实施方案中，本文描述的缀合物是具有如本文所定义的式(I)的化合物。
在一个方面，本文提供了化合物、或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有由式(01)-(05)中任一项表示的结构：
其中：
CT是六环细胞毒性或细胞抑制基团；
EL是酶促可切割连接体；
L是二价连接体；
A是三价连接体；
IN是整联蛋白结合剂；并且
MOD是物理化学或药代动力学调节基团。
在一个方面，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有由式(A)、式(C)或式(E)表示的结构：
CT-EL-L1-A1(L2-IN)(L3-IN) 式(A)
CT-EL-L5-IN 式(C)
CT-EL-L1-A1(L2-IN)(L3-MOD) 式(E)
其中，在每个例子中：
CT是六环细胞毒性或细胞抑制配体；
EL是酶促可切割连接体；
每个L1、L2、L3和L5独立地是二价连接体；
IN在每个例子中独立地是整联蛋白结合剂；
MOD是物理化学或药代动力学调节基团；并且
A1是三价连接体(例如，含有1至100个非氢原子，任选地含有烷基、杂烷基、碳环和/或杂环基团或其任意组合的三价自由基)。
在一些实施方案中，L1、L2、L3和/或L5是二价连接体(例如，取代的或未取代的C1-60烷基连接体或取代的或未取代的1至60元杂烷基连接体，其各自任选地被选自以下项的基团取代和/或中断一次或多次：-C(O)-、-C(O)NH-、-C(O)N(CH3)-、-C(O)O-、-NH-、-N(CH3)-、-NHC(O)-、-N(CH3)C(O)-、-NHC(O)NH-、-NHS(O)2NH-、-NHS(O)2NHC(O)-、-NHS(O)2NHC(O)O-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NH-、-S(O)2NHC(O)-、-S(O)2NHC(O)NH-、-S(O)2NHC(O)O-、芳基、杂芳基、芳烷基、杂芳烷基或其任意组合)。在一些实施方案中，L1、L2、L3和/或L5是二价连接体(例如，简单间隔基、聚合间隔基，在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有由式(I)或式(I’)表示的结构：
在一些实施方案中，本文提供了式(I)或式(I’)的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中：
CT是六环细胞毒性或细胞抑制配体的一价自由基；
SIL是自裂解连接体；
E1是氢、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH、
-CH2C(O)OR1；
E3是CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3；
RA是氢或C1-6烷基；
RB是-L1-A1(L2-(IN))(L3-(IN))、-L5-IN或-L1-A1(L2-(IN))(L3-(MOD))；
其中：
IN是整联蛋白结合剂的一价自由基；
A1是三价连接体(例如，选自以下项的取代的或未取代的三价自由基：烷基、杂烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基或其组合(例如，芳烷基、杂烷基-芳基、
烷基-杂芳基杂烷基-杂芳基))；
L1、L2、L3和L5中的每一个独立地是二价连接体(例如，取代的或未取代的C1-60烷基或取代的或未取代的1-60杂烷基，其任选地被杂芳基取代或中断)；
MOD是物理化学或药代动力学调节基团(例如，-COOH)；并且
R1是取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的杂烷基、取代的或未取代的碳环或取代的或未取代的杂环；其中如果R1被取代，则其被独立地选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、-L6-IN、-C1-6烷基、-CN、-CONH2、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-COOH、-COO(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-NHL6-IN、-N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)3 +、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO(IN)、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-OH、-O(C1-6烷基)、-OC(＝O)O(C1-6烷基)、-OC(＝O)NH(C1-6烷基)、氧代、-SO3H、-SO2(C1-6烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-6烷基)和-SO2N(C1-6烷基)2；其中L6是二价连接体(例如，取代的或未取代的C1-30烷基或取代的或未取代的杂烷基)。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(I-A)或式(I-A’)的结构：
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(I-A)或式(I-A’)的结构式，其中：
CT是六环细胞毒性或细胞抑制配体的一价自由基；
E1是氢、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH、-CH2C(O)OR1、-CH2CH2C(O)OH或-CH2CH2C(O)OR1；
E3是-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2或-CH(CH3)CH2CH3；
IN在每个例子中独立地是整联蛋白结合剂的一价自由基；
A1是三价自由基(例如，选自以下项的取代的或未取代的三价自由基：烷基、杂烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基或其组合(例如，芳烷基、杂烷基-芳基、烷基-杂芳基杂烷基-杂芳基))；
L1、L2和L3中的每一个是二价连接体(例如，取代的或未取代的C1-30烷基或取代的或未取代的杂烷基)；并且
R1是取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的杂烷基、取代的或未取代的碳环或取代的或未取代的杂环；其中如果R1被取代，则其被独立地选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、-C1-6烷基、-CN、-CONH2、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-COOH、-COO(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-NHL6-IN、-N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)3 +、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO(IN)、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-OH、-O(C1-6烷基)、-OC(＝O)O(C1-6烷基)、-OC(＝O)NH(C1-6烷基)、氧代、-SO3H、-SO2(C1-6烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-6烷基)和-SO2N(C1-6烷基)2；其中L6是二价连接体(例如，取代的或未取代的C1-30烷基或取代的或未取代的杂烷基)。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(I-C)或式(I-C’)的结构：
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(I-C)或式(I-C’)的结构，其中：
CT是六环细胞毒性或细胞抑制配体的一价自由基；
E1是氢、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH、-CH2C(O)OR1、-CH2CH2C(O)OH或-CH2CH2C(O)OR1；
E3是-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2或-CH(CH3)CH2CH3；
IN在每个例子中独立地是整联蛋白结合剂的一价自由基；
L5是二价连接体(例如，取代的或未取代的C1-60烷基连接体或取代的或未取代的1至60元杂烷基连接体，其每个任选地被芳基或杂芳基取代或中断)；
R1是取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的杂烷基、取代的或未取代的碳环或取代的或未取代的杂环；其中如果R1被取代，则其被独立地选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、-L6-IN、-C1-6烷基、-CN、-CONH2、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-COOH、-COO(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-NHL6-IN、-N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)3 +、-NHCO(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-OH、-O(C1-6烷基)、-OC(＝O)O(C1-6烷基)、-OC(＝O)NH(C1-6烷基)、氧代、-SO3H、-SO2(C1-6烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-6烷基)和-SO2N(C1-6烷基)2；
其中L6是二价连接体(例如，取代的或未取代的C1-30烷基或取代的或未取代的杂烷基)。
在另一方面，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有由式(II)或式(II’)表示的结构：
在一些实施方案中，本文提供了式(II)或式(II’)的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中：
(i)X1和X2一起形成亚乙基二氧基或亚甲基二氧基杂环；并且X3和X4各自独立地是氢、卤素、C1-6卤代烷基、C1-6烷基或C1-6烷基胺；或
(ii)X1和X2各自独立地是氢、卤素、C1-4烷基或C1-4卤代烷基，以及X3和X4一起形成被-NRXRY取代的碳环A；
其中：
RX是氢、C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-EL2-C(O)CH2(吡啶)；
其中：
EL2是酶促可切割连接体，(例如，通过肿瘤相关蛋白酶(例如，豆荚蛋白)可切割，例如，二肽或三肽连接体，例如，(-L-Asp)-(L-Pro)-(L-Val-)、(-L-Asn)-(L-Pro)-(L-Val-)、(-L-Ala)-(L-Ala)-(L-Asn-)或(-L-Ala)-(L-N-Me-Ala)-(L-Asn-)；
RY是氢、取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的杂烷基、取代的或未取代的碳环或取代的或未取代的杂环；其中如果RY被取代，则其被独立地选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、-C1-6烷基、-CN、-CONH2、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-COOH、-COO(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)3 +、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO(IN)、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-OH、-O(C1-6烷基)、-OC(＝O)O(C1-6烷基)、-OC(＝O)NH(C1-6烷基)、氧代、-SO3H、-SO2(C1-6烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-6烷基)和-SO2N(C1-6烷基)2；
E1是氢、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH或-CH2C(O)OR1；
E3是CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3；
RA是氢或C1-6烷基；
RB是-L1-A1(L2IN)(L3IN)、-L5-IN或-L1-A1(L2IN)(L3MOD)；
其中：
IN是整联蛋白结合剂的一价自由基；
MOD是如本文所定义的物理化学调节基团(例如，-COOH)；
A1是三价自由基(例如，选自以下项的取代的或未取代的三价自由基：烷基、杂烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基或其组合(例如，芳烷基、杂烷基-芳基、烷基-杂芳基杂烷基-杂芳基))；
L1、L2、L3和L5中的每一个独立地是二价连接体(例如，取代的或未取代的C1-60烷基连接体或取代的或未取代的1至60元杂烷基连接体，其每个任选地被芳基或杂芳基取代或中断)；并且
R1是取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的杂烷基、取代的或未取代的碳环或取代的或未取代的杂环；其中如果R1被取代，则其被独立地选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、-L6-IN、-C1-6烷基、-CN、-CONH2、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-COOH、-COO(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-NHL6-IN、-N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)3 +、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO(IN)、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-OH、-O(C1-6烷基)、-OC(＝O)O(C1-6烷基)、-OC(＝O)NH(C1-6烷基)、氧代、-SO3H、-SO2(C1-6烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-6烷基)和-SO2N(C1-6烷基)2；其中L6是二价连接体(例如，取代的或未取代的C1-30烷基或取代的或未取代的杂烷基)。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(II-A)、式(II-C)或式(II-E)的结构：
在一些实施方案中，A1是含有1至100个原子，任选地含有烷基、杂烷基、碳环或杂环基团或其任意组合的三价自由基；并且L1、L2和L3中的每一个独立地是取代的或未取代的杂烷基。
在一些实施方案中：
A1是三价连接体(例如，任选地包含杂烷基、烷基、芳烷基、杂芳烷基、芳基、杂芳基、环烷基和/或杂环烷基基团的三价连接体基团)；
E1是氢、-CH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH；
E3是CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3；
L1、L2、L3和L5各自是二价连接体(例如，独立地选自(i)、(ii)、(iii)和(iv)：
(i)-C(O)-、
(ii)-(CO)m(CH2)n(OC2-6烷基)o(NH)p(CO)q-、
(iii)-(CO)r(CH2)s(NR10C1-6烷基)t(NR11)u(CO)v-或
(iv)-(CO)r(CH2)s(NR10C(O)C1-6烷基)t(NR11)u(CO)v-，
其中：
R10在每个例子中独立地是氢或C1-3烷基；
R11在每个例子中独立地是氢或C1-3烷基；
m在每个例子中独立地是0或1；
n在每个例子中独立地是0至10的整数；
o在每个例子中独立地是0至10的整数；
p在每个例子中独立地是0或1；
q在每个例子中独立地是0或1；
r在每个例子中独立地是0或1；
s在每个例子中独立地是0至10的整数；
t在每个例子中独立地是0至10的整数；
u在每个例子中独立地是0或1；并且
v在每个例子中独立地是0或1)；并且
MOD是物理化学或药代动力学调节(例如，-COOH)。
在一些实施方案中，A1是三价杂烷基自由基；并且L1、L2和L3中的每一个是取代的或未取代的杂烷基。
在一些实施方案中，L5是取代的或未取代的杂烷基。在一些实施方案中，L5是具有由下式表示的结构的连接体：
(i)-(CO)m(CH2)n(OC2-6烷基)o(NH)p(CO)q-或
(ii)-(CO)r(CH2)s(NR10C1-6烷基)t(NR11)u(CO)v-；或
(iii)-(CO)r(CH2)s(NR10C(O)C1-6烷基)t(NR11)u(CO)v-；或
其中：
R10是氢或C1-3烷基；
R11是氢或C1-3烷基；
m是0或1；
n是0至10；
o是1至10；
p是0或1；
q是0或1；
r是0或1；
s是0至10；
t是1至10；
u是0或1；并且
v是0或1。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中：
X1和X2一起形成亚甲基二氧基杂环；
X3是氢；并且X4是氢、C1-6烷基或C1-6烷基胺。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中：
X1和X2各自独立地是卤素或-CH3；并且
X3和X4一起形成被-NRXRY取代的环己基环；
其中：
RX是氢、C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-(-L-Asn)-(N-Me-L-Ala)-(L-Ala-)-C(O)CH2-(吡啶)；并且
RY是氢或C1-6烷基。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有由式(III)或式(IV)表示的结构：
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有由式(III’)或式(IV’)表示的结构：
在一些实施方案中，本文提供了式(III-A)、式(III-C)、式(IV-A)或式(IV-C)的化合物：
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物。
在一些实施方案中：
RX是氢、C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn(即，-Cbz)、
-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-EL2-C(O)CH2(吡啶)；其中：
EL2是(-L-Asp)-(L-Pro)-(L-Val-)、(-L-Asn)-(L-Pro)-(L-Val-)、(-
L-Ala)-(L-Ala)-(L-Asn-)或(-L-Ala)-(N-Me-L-Ala)-(L-Asn-)；
RY是氢、取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的杂烷基、取代的或未取代的碳环或取代的或未取代的杂环；其中如果RY被取代，则其被独立地选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、-C1-6烷基、-CN、-CONH2、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-COOH、-COO(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)3 +、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO(IN)、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-OH、-O(C1-6烷基)、-OC(＝O)O(C1-6烷基)、-OC(＝O)NH(C1-6烷基)、氧代、-SO3H、-SO2(C1-6烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-6烷基)和-SO2N(C1-6烷基)2；
E1是氢、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH或-CH2C(O)OR1；
R1是被-L6-IN、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-NHL6-IN、-N(C1-6烷基)2或-N(C1-6烷基)3 +取代的C1-6烷基基团；IN是整联蛋白结合剂；并且L6是-C(O)-；
A1是三价杂烷基自由基；
L1、L2、L3和L5中的每一个独立地是二价连接体(例如，取代的或未取代的C1-60烷基或取代的或未取代的1-60杂烷基，其任选地被杂芳基取代或中断)；
在一些实施方案中，L1、L2、L3和L5中的每一个独立地是简单间隔基(如本文所定义)或聚合间隔基(如本文所定义)。
在一些实施方案中，本文提供了式(III-A)或式(IV-A)的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中：
RX是氢、-C1-6烷基、-C(O)CH3或-C(O)CF3；
RY是氢或-C1-6烷基；
E1是氢、-CH2C(O)NH2或-CH2C(O)OH；
A1是三价连接体(例如，取代的或未取代的氨基酸)；并且
L1、L2、L3和L5各自独立地选自(i)、(ii)或(iii)或(iv)：
(i)-C(O)-、
(ii)-(CO)m(CH2)n(OC2-6烷基)o(NH)p(CO)q-、
(iii)-(CO)r(CH2)s(NR10C2-6烷基)t(NR11)u(CO)v-；或
(iv)-(CO)r-(CH2)s-(NR10C(O)C1-6烷基)t-(NR11)u-(CO)v-；
其中：
R10在每个例子中独立地是氢或C1-3烷基；
R11在每个例子中独立地是氢或C1-3烷基；
m在每个例子中独立地是0或1；
n在每个例子中独立地是0至10的整数；
o在每个例子中独立地是0至10的整数；
p在每个例子中独立地是0或1；
q在每个例子中独立地是0或1；
r在每个例子中独立地是0或1；
s在每个例子中独立地是0至10的整数；
t在每个例子中独立地是0至10的整数；
u在每个例子中独立地是0或1；并且
v在每个例子中独立地是0或1。
在一些实施方案中，本文提供了式(III-A)或式(IV-A)的化合物，其中：
RX是氢、-C1-6烷基或-C(O)CH3；
RY是氢或-C1-6烷基；
E1是氢、-CH2C(O)OH或-CH2C(O)NH2；
A1是取代的或未取代的氨基酸(例如，取代的或未取代的赖氨酸或取代的或未取代的谷氨酰胺)；
L1是-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NH；或
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NH-，
L2是-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NHC(O)；
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-或
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)C(O)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)-，以及
L3是-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NHC(O)；
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-；或
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)C(O)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)-。
在一些实施方案中，本文提供了式(III-A)或式(IV-A)的化合物，其具有以下结构：
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物。
在一些实施方案中，本文提供了式(III-A)或式(IV-A)的化合物，其具有结构：
在一些实施方案中，本文提供了式(III-C)或式(IV-C)的化合物：
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物。
在一些实施方案中，化合物是式(III-C’)或式(IV-C’)的化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本文提供了式(III-C)、式(IV-C)、式(III-C’)或式(IV-C’)的化合物，其中：
RX是氢、-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-EL2-C(O)CH2-(吡啶)；
其中：
EL2是酶促可切割连接体(例如，-(L-Asn)(NMe-L-Ala)(L-Ala)-
或-(L-Asn)(L-Ala)(L-Ala)-)；
RY是氢、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基或-C(O)C1-6卤代烷基；
E1是氢、-CH2C(O)NH2或-CH2C(O)OH；并且
L5是-C(O)-C1-6烷基-NHC(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C2-6烷基-[OC2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C2-6烷基-[OC2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NHC1-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NHC1-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)C1-6烷基]1-8-NHC(O)-或
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)C1-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(III-C)或式(IV-C)的结构，其中：
RX是氢、-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-(L-Asn)-(N-Me-L-Ala)-(L-Ala)-C(O)CH2-(吡啶)
RY是氢、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基或-C(O)C1-6卤代烷基；
E1是氢、-CH2C(O)NH2或-CH2C(O)OH；
L5是-C(O)-C2-6烷基-[OCH2CH2]2-4-NHC(O)-或
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)CH2CH2]2-4-NHC(O)-。
在一些实施方案中，E1是氢。在一些实施方案中，E1是氢；并且L5是-C(O)-C2-4烷基-[OC2-6烷基]1-8-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是氢；并且L5是-C(O)-C2-4烷基-[OC2-4烷基]2-6-NHC(O)-或-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-6-NHC(O)-。
在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)NH2。在一些实施方案中，L5是-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)NH2以及L5是-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)OH。在一些实施方案中，L5是-C(O)-C2-4烷基-[OC2-6烷基]1-8-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)OH；并且L5是-C(O)-C2-4烷基-[OC2-6烷基]1-8-NHC(O)-。在一些实施方案中，L5是-C(O)-C2-4烷基-[OC2-4烷基]2-6-NHC(O)-或-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-6-NHC(O)-。在一些实施方案中，L5是-C(O)-CH2CH3-[OCH2CH3]3-NHC(O)-或-C(O)CH2-[N(CH3)CH2CH3]3-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是氢、-CH2C(O)OH或-CH2C(O)NH2；并且L5是-C(O)-CH2CH3-[OCH2CH3]3-NHC(O)-或-C(O)CH2-[N(CH3)CH2CH3]3-NHC(O)-。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(III-C)或式(IV-C)的结构，其中：
E1是氢、-CH2C(O)NH2或-CH2C(O)OH；并且
L5是-C(O)-C2-4烷基-[OCH2CH2]2-4-NHC(O)-或
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)CH2CH2]2-4-NHC(O)-。
在一些实施方案中E1是氢；并且L5是-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)CH2CH2]2-4-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是氢；并且L5是-C(O)-CH2-[N(CH3)CH2CH2]3-NHC(O)-。在一些实施方案中E1是-CH2C(O)NH2；并且L5是-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)CH2CH2]2-4-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)NH2；并且L5是-C(O)-CH2-[N(CH3)CH2CH2]3-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)OH；并且L5是-C(O)-C2-6烷基-[OCH2CH2]2-4-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)OH；并且L5是-C(O)-CH2CH2-[OCH2CH2]3-NHC(O)-。
在一些实施方案中，L5是：
-C(O)-C2-6烷基-[OCH2CH2]2-4-NHC(O)-；或
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)CH2CH2]2-4-NHC(O)-。
在一些实施方案中，L5是：
-C(O)-CH2CH2-[OCH2CH2]3-NHC(O)-；或
-C(O)-CH2-[N(CH3)CH2CH2]3-NHC(O)-。
在一些实施方案中，本文提供了式(III-C)、式(IV-C)、式(III-C’)或式(IV-C’)的化合物其中：
RX是氢、-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-(-L-Asn)-(N-Me-L-Ala)-(L-Ala-)-C(O)CH2-(吡啶)；并且
RY是氢或-C1-6烷基。
在一些实施方案中，本文提供了式(III-C)、式(IV-C)、式(III-C’)或式(IV-C’)的化合物其中：
RX是氢、-CH2CH3、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn或-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-(-L-Asn)-(N-Me-L-Ala)-(L-Ala-)-C(O)CH2-(吡啶)；并且
RY是氢或-CH2CH3。
在一些实施方案中，本文提供了式(III-C)、式(IV-C)、式(III-C’)或式(IV-C’)的化合物其中：
RX是氢、-C(O)CH3或-C(O)OBn；
RY是氢；
E1是-CH2C(O)OH；并且
L5是-C(O)-C2F-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-。
在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)OH。在一些实施方案中，L5是-C(O)-C1-4烷基-[OC2-6烷基]1-8-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)OH；并且L5是-C(O)-C1-4烷基-[OC2-6烷基]1-8-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)OH；并且L5是-C(O)-C1-4烷基-[OCH2CH2]2-4-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)OH；并且L5是-C(O)-CH2CH2-[OCH2CH2]3-NHC(O)-。
在一些实施方案中：
RX是氢；
E1是-CH2C(O)OH；并且
L5是-C(O)-CH2CH2-[OCH2CH2]3-NHC(O)-。
在一些实施方案中：
RX是-C(O)CH3；
E1是-CH2C(O)OH；并且
L5是-C(O)-CH2CH2-[OCH2CH2]3-NHC(O)-。
在一些实施方案中：
RX是-C(O)OBn；
E1是-CH2C(O)OH；并且
L5是-C(O)-CH2CH2-[OCH2CH2]3-NHC(O)-。
在一些实施方案中，本文提供了具有以下结构的化合物：
在一些实施方案中，本文提供了式(III-C)或式(IV-C)的化合物，其具有结构：
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物。
在一些实施方案中，本文提供了式(III-C)、式(IV-C)、式(III-C’)或式(IV-C’)的化合物其中：
RX是-CH2CH3、-C(O)CF3、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-(-L-Asn)-(N-Me-L-Ala)-(L-Ala-)-C(O)CH2-(吡啶)；
RY是氢或CH2CH3；
E1是-CH2C(O)OH；并且
L5是-C(O)-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-。
在一些实施方案中，本文提供了式(III-C)或式(IV-C)的化合物，其具有结构：
在另一方面，本文提供了式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中
CT是：
在另一方面，本文提供了式(V)或式(V’)的化合物：
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物。
在一些实施方案中，本文提供了式(V)或式(V’)的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中：
X5和X6各自独立地是氢、卤素、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；
E1是氢、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH或-CH2C(O)OR1；
E3是CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2或CH(CH3)CH2CH3；
RA是氢或C1-6烷基；
RB是-L1-A1(L2-(IN))(L3-(IN))、-L5-IN或L7-IN；
其中：
IN是整联蛋白结合剂的一价自由基；
A1是三价自由基；
L1、L2、L3、L5和L7中的每一个独立地是取代的或未取代的C1-30烷基或取代的或未取代的杂烷基；
R1是取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的杂烷基、取代的或未取代的碳环或取代的或未取代的杂环；其中如果R1被取代，则其被独立地选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、-L6-IN、-C1-6烷基、-CN、-CONH2、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-COOH、-COO(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-NHL6-IN、-N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)3 +、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO(IN)、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-OH、-O(C1-6烷基)、-OC(＝O)O(C1-6烷基)、-OC(＝O)NH(C1-6烷基)、氧代、-SO3H、-SO2(C1-6烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-6烷基)和-SO2N(C1-6烷基)2；其中L6是取代的或未取代的C1-30烷基或取代的或未取代的杂烷基。
在一些实施方案中，本文提供了式(V)或式(V’)的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中：
X5是-F、-Cl或-CH3；并且
X6是-F、-Cl或-CH3。
在一些实施方案中，本文提供了式(V)或式(V’)的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中X5是-F并且X6是-CH3。
在一些实施方案中，本文提供了式(V)或式(V’)的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中E1是氢。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)NH2。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)OH。
在一些实施方案中，本文提供了式(V)或式(V’)的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中E3是-CH(CH3)2。在一些实施方案中，E3是CH2CH(CH3)2。在一些实施方案中，E3是-CH(CH3)CH2CH3。
在一些实施方案中，本文提供了式(V)或式(V’)的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中RA是氢。在一些实施方案中，RA是-CH3。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(V-A)或式(V-C)的结构：
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(V-A)或式(V-C)的结构；其中：
E1是氢、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH或-CH2C(O)OR1；
E3是-CH(CH3)2；
R1是被-L6-IN、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-NHL6-IN、-N(C1-6烷基)2或
-N(C1-6烷基)3 +取代的C1-6烷基基团；并且L6是-C(O)-；
IN在每个例子中独立地是整联蛋白结合剂；
A1是三价杂烷基自由基；
L1、L2、L3和L5各自独立地是：
(i)-C(O)-、
(ii)-(CO)m(CH2)n(OC2-6烷基)o(NH)p(CO)q-、
(iii)-(CO)r(CH2)s(NR10C2-6烷基)t(NR11)u(CO)v-；或
(iv)-(CO)r(CH2)s(NR10C(O)-C1-6烷基)t(NR11)u(CO)v-；
其中：
R10在每个例子中独立地是氢或C1-3烷基；
R11在每个例子中独立地是氢或C1-3烷基；
m在每个例子中独立地是0或1；
n在每个例子中独立地是0至10的整数；
o在每个例子中独立地是0至10的整数；
p在每个例子中独立地是0或1；
q在每个例子中独立地是0或1；
r在每个例子中独立地是0或1；
s在每个例子中独立地是0至10的整数；
t在每个例子中独立地是0至10的整数；
u在每个例子中独立地是0或1；并且
v在每个例子中独立地是0或1。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(V-C)的结构，其中：
E1是氢、-CH2C(O)NH2或-CH2C(O)OH；
L5是-C(O)-C1-6烷基-NHC(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-或
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-；并且
IN是整联蛋白结合剂的一价自由基。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(V-C)的结构，其中：
E1是氢、-CH2C(O)NH2或-CH2C(O)OH；
L5是-C(O)-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-或
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-；并且
IN是整联蛋白结合剂的一价自由基。
在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)NH2。在一些实施方案中，L5是-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)NH2以及L5是-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)OH。在一些实施方案中，L5是-C(O)-C2-4烷基-[OC2-6烷基]1-8-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)OH；并且L5是-C(O)-C2-4烷基-[OC2-6烷基]1-8-NHC(O)-。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(VII-A)的结构，其中：
E1是-CH2C(O)NH2或-CH2C(O)OH；并且
L5是-C(O)-C2-6烷基-[OCH2CH2]2-4-NHC(O)-或
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)CH2CH2]2-4-NHC(O)-。
在一些实施方案中E1是-CH2C(O)NH2；并且L5是-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)CH2CH2]2-4-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)NH2；并且L5是-C(O)-CH2-[N(CH3)CH2CH2]3-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)OH；并且L5是-C(O)-C2-6烷基-[OCH2CH2]2-4-NHC(O)-。在一些实施方案中，E1是-CH2C(O)OH；并且L5是-C(O)-CH2CH2-[OCH2CH2]3-NHC(O)-。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(V-A’)或式(V-C’)的结构：
在一些实施方案中，本文提供了具有以下结构的化合物：
在又另一方面，本文提供了式(X)的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物：
在一些实施方案中，本文提供了式(X)或式(X’)的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中：
XC是键、
(-L-Asn-)-、
(-L-Asp)-(L-Pro)-(L-Val-)-、
(-L-Asn)-(L-Pro)-(L-Val-)-、
(-L-Ala)-(L-Ala)-(L-Asn-)-或
(-L-Ala)-(L-N-Me-Ala)-(L-Asn-)-。
在一些实施方案中，XC是键、(-L-Asn-)或(-L-Ala)-(L-N-Me-Ala)-(L-Asn-)。在一些实施方案中，XC是键。在一些实施方案中，XC是(-L-Asn)。在一些实施方案中，XC是(-L-Ala)-(L-N-Me-Ala)-(L-Asn-)。在一些实施方案中，XC是酶促可切割基团(例如，豆荚蛋白可切割基团)。在一些实施方案中，XC是自裂解或化学不稳定基团。在一些实施方案中，XC含有自裂解基团。
在一些实施方案中，XC是键、
在一些实施方案中，本文提供了具有以下结构的化合物：
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物。
在一些实施方案中，化合物10和化合物11和含有化合物10或11作为基团“CT”的缀合物是前药。在一些实施方案中，本文提供了前药化合物，其包含豆荚蛋白可切割前药基团(例如，基团XC)和中性粒细胞弹性蛋白酶-可切割连接体(例如，EL)。在一些实施方案中，(例如，其中CT包含豆荚蛋白可切割基团XC(例如，化合物10或化合物11))，细胞毒性有效负荷(CT)被两个(或更多个)肿瘤相关酶(例如，豆荚蛋白和中性粒细胞弹性蛋白酶)激活。在一些实施方案中，与没有所述豆荚蛋白可切割基团的化合物相比，包含豆荚蛋白可切割前药基团的化合物毒性较小(例如，细胞毒性)。在一些实施方案中，与包含活性有效负荷(即，非前药有效负荷，例如，具有细胞毒性作用的有效负荷)的化合物相比，包含豆荚蛋白可切割前药作为有效负荷的化合物在药代动力学上提供了有利的调节。
在一些实施方案中，本文提供了化合物，其为：
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物。在一些实施方案中，化合物用于制造用于治疗疾病或病症的药物。在一些实施方案中，化合物用于制造用于治疗疾病或病症的小分子药物缀合物。在一些实施方案中，化合物治疗疾病或病症。在一些实施方案中，本文提供了包含本文公开的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
在一些实施方案中，本文提供了化合物，其为：
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物。在一些实施方案中，化合物用于制造用于治疗疾病或病症的药物。在一些实施方案中，化合物用于制造用于治疗疾病或病症的小分子药物缀合物。在一些实施方案中，化合物用于治疗疾病或病症。在一些实施方案中，本文提供了包含本文公开的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有根据式(II-AA)或式(II-CC)的结构：
其中：
E1是氢、-CH2C(O)NH2或-CH2C(O)OH；
E3是-CH3或-CH(CH3)2；
*表示(R)或(S)立体异构体；
L1是具有以下结构的二价连接体：
A1是具有以下结构的三价连接体：
L2、L3和L5中的每一个是具有以下结构的二价连接体：
其中y是1、2、3、4、5、6、7或8(优选地2、3或4)；并且
CT是六环细胞毒性或具有以下结构的细胞抑制基团：
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有根据下式的结构：
其中E1、L5、*和CT如表A中所示。
表A.
在一些实施方案中，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有根据下式的结构：
其中E1、*、**和CT如表B中所示。
表B.
间隔基/连接体(L1、L2、L3、L4、L5、L6和L7)
本文提供了具有连接体或间隔基(可交换地使用)的化合物，该连接体或间隔基用于在化合物或缀合物的一个或多个要素之间形成物理空间。在一些实施方案中，连接体或间隔基提供了另外的实用性(例如，功能性连接体)。例如，在一些实施方案中，连接体被提供有能够产生相邻的酶促可切割部分(例如，EL)的增强的切割的特定长度。在一些实施方案中，连接体被提供有减小空间位阻和/或能够产生较大靶结合的特定长度。
在一些实施方案中，本文提供了包含连接体(例如，L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7)的化合物，其中连接体增强了化合物在肿瘤微环境内的保留。在一些实施方案中，与包含烷基或PEG连接体的参考文献化合物相比，本文公开的连接体(例如，聚胺或聚酰胺连接体)增加了化合物的肿瘤与血浆比率。在一些实施方案中，本文提供了包含三价连接体(A1)和两个连接体-结合剂基团(L2IN、L3IN)或连接体-结合剂和连接体-MOD基团(L2IN)(L3MOD)的化合物，其中与包含二价连接体的化合物相比，包含L3IN或L3MOD基团的化合物具有增加的半衰期和/或增加的AUC。在一些实施方案中，本文提供了包含三价连接体和两个整联蛋白结合基团的化合物，其中与包含二价连接体的化合物相比，包含L3IN或L3MOD基团的化合物具有血浆蛋白结合的增加或清除率的降低。
在一些实施方案中，连接体是选自C、N、O或S的原子的分支或线性链(其每个被氢或键取代以便满足标准化合价)。在一些实施方案中，连接体是羰基(-C(O)-)。在一些实施方案中，连接体含有6个或更少个(非氢)原子。在一些实施方案中，连接体含有约10至约20个(非氢)原子。在一些实施方案中，连接体含有约10至约20个以线性链排布的(非氢)原子。在一些实施方案中，连接体含有约20至约30个(非氢)原子。在一些实施方案中，连接体含有约20至约30个以线性链排布的(非氢)原子。在一些实施方案中，连接体含有约30至约40个(非氢)原子。在一些实施方案中，连接体含有约30至约40个以线性链排布的(非氢)原子。在一些实施方案中，存在多个连接体，其每个具有不同的长度。在一些实施方案中，连接体含有环状或分支部分。在一些实施方案中，连接体被一个或多个烷基、氧代、氨基或酰胺基团取代。
在一些实施方案中，L1、L2、L3、L5、L6和L7中的每一个含有一个或多个羰基基团(-C(O)-)、胺基团(例如，-NH-或-N(CH3)-)或酰胺基团(例如，-C(O)NH-、-C(O)N(CH3)-、-NHC(O)-或N(CH3)C(O)-)或被它们末端取代。
在一些实施方案中，L1、L2、L3、L5、L6和L7中的每一个是取代的或未取代的C2-20烷基链，其任选地被选自以下项的基团中断一次或多次：-C(O)-、-C(O)NH-、-C(O)N(CH3)-、-C(O)O-、-NH-、-NHC(O)-、-N(CH3)-、-N(CH3)C(O)-、-NHC(O)NH-、-N(CH3)C(O)NH-、-NHS(O)2NH-、-NHS(O)2NHC(O)-、-NHS(O)2NHC(O)O-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或其任意组合。
在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5、L6和L7被一个或多个侧链基团(例如，烷基胺、烷基酸、烷基酰胺、烷基醇等)取代。在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5、L6和L7被包含羧酸和/或胺的一个或多个侧链取代。
在一些实施方案中，连接体在生物系统(例如，在酸性肿瘤微环境内)中是电离的。在一些实施方案中，连接体内电离的或部分带电荷的(例如，部分正的或部分负的)一个或多个部分增强了化合物在优选的地点(例如，细胞外地，肿瘤微环境内)的定位。
在一些实施方案中，连接体(例如，L1、L2、L3、L5、L6和L7中的一个或多个)是任选取代的聚胺或聚酰胺连接体。
在一些实施方案中，聚胺或聚酰胺连接体是官能性连接体。
在一些实施方案中，L1、L2、L3、L5、L6和L7中的一个或多个的聚胺或聚酰胺连接体被一个或多个羰基基团取代。
在一些实施方案中，L1、L2、L3、L5、L6和L7中的一个或多个的聚胺或聚酰胺连接体在酸性肿瘤微环境中形成铵离子(或任选地多种铵离子)。
在一些实施方案中，L1、L2、L3、L5、L6和L7中的一个或多个的聚胺或聚酰胺连接体被选择性地保留在肿瘤微环境中。
在一些实施方案中，本发明提供了具有本文公开的式的结构的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中L1、L2、L3和L6中的每一个独立地是键、取代的或未取代的C1-30烷基或取代的或未取代的杂烷基。在一些实施方案中，L1、L2、L3和L6中的每一个独立地是-C(O)-、取代的或未取代的C2-30烷基或取代的或未取代的杂烷基。
在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5、L6和L7中的每一个是非-可切割连接体。在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5、L6和L7中的每一个是非可切割杂烷基连接体，其任选地包含一个或多个(例如，1至10)聚合子单位(例如，PEG或PEI)。
在一些实施方案中，L1、L2、L3和L6中的每一个是取代的或未取代的C2-20烷基链，其任选地被各自独立地选自以下项的基团中断一次或多次：-O-、-S-、-NH-、-N(CH3)-、-C(O)-、-C(O)NH-、-C(O)N(CH3)-、-C(O)O-、-NHC(O)-、N(CH3)C(O)-或-NHC(O)NH-或其任意组合。
在一些实施方案中，L1、L2、L3和L6中的每一个含有(例如，被末端取代有)一个或多个羰基基团(-C(O)-)、胺基团(例如，-NH-或-N(CH3)-)或酰胺基团(例如，-C(O)NH-、-C(O)N(CH3)-、-NHC(O)-或N(CH3)C(O)-)。在一些实施方案中，间隔基诸如L1、L2、L3和L6含有一个或多个聚合单元诸如：其中y是1至20的整数，优选在1和10之间，更优选在2和8之间。在一些实施方案中，y是2、3、4、5、6、7、8、9或10。在一些实施方案中，y是2、3、4、5或6。在一些实施方案中，y是6、7、8、9或10。在一些实施方案中，y是2、3或4。在一些实施方案中，y是6、7、8或9。
在一些实施方案中，一个或多个L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7是任选取代的聚胺连接体。在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7的聚胺连接体在酸性肿瘤微环境内形成铵离子。在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7的聚胺连接体选择性地保留在肿瘤微环境中。在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7的聚胺或聚酰胺连接体增强了缀合物在肿瘤微环境中的保留。在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7的聚醚连接体提高了缀合物的水性溶解度和/或减小了聚集。在一些实施方案中，延长的连接体提供了优选的距离或减小了整联蛋白结合剂和细胞毒性或细胞抑制自由基之间的空间位阻。在一些实施方案中，与包含类似烷基或PEG连接体的参考文献化合物相比，L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7的聚酰胺连接体(例如，聚肌氨酸连接体)增加了包含所述连接体的化合物的肿瘤与血浆比率。在一些实施方案中，与包含类似烷基或PEG连接体的参考文献化合物相比，L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7的聚酰胺连接体(例如，聚肌氨酸连接体)改进了包含所述连接体的化合物的药代动力学。
在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5和/或L6是选自以下项的简单间隔基：
-O--S-
-S(O)2--C(O)-
-C1-30烷基-、-C(O)-C1-30烷基
-C1-30烷基-C(O)-、-C(O)-C1-30烷基-C(O)-、
-C1-30烷基-C(O)NH-、-C(O)-C1-30烷基-C(O)NH-、
-C1-30烷基-C(O)N(CH3)-、-C(O)-C1-30烷基-C(O)N(CH3)-、
-C1-30烷基-NH-、-C(O)-C1-30烷基-NH-、
-C1-30烷基-NHC(O)-、-C(O)-C1-30烷基-NHC(O)-、
-C1-30烷基-N(CH3)-、-C(O)-C1-30烷基-N(CH3)-、
-C1-30烷基-N(CH3)C(O)-、-C(O)-C1-30烷基-N(CH3)C(O)-、
-C(O)NH-、-C(O)N(CH3)-
-C(O)NH-C1-30烷基-、-C(O)N(CH3)-C1-30烷基
-C(O)NH-C1-30烷基-C(O)-、-C(O)N(CH3)-C1-30烷基-C(O)-、
-C(O)NH-C1-30烷基-C(O)NH-、-C(O)N(CH3)-C1-30烷基-C(O)NH-、
-C(O)NH-C1-30烷基-C(O)N(CH3)-、-C(O)N(CH3)-C1-30烷基-C(O)N(CH3)-、
-C(O)NH-C1-30烷基-NH-、-C(O)N(CH3)-C1-30烷基-NH-、
-C(O)NH-C1-30烷基-NHC(O)-、-C(O)N(CH3)-C1-30烷基-NHC(O)-、
-C(O)NH-C1-30烷基-N(CH3)-、-C(O)N(CH3)-C1-30烷基-N(CH3)-、
-C(O)NH-C1-30烷基-N(CH3)C(O)-、-C(O)N(CH3)-C1-30烷基-N(CH3)C(O)-、
-NH-、-NHC(O)-、
-NH-C1-30烷基-、-NHC(O)-C1-30烷基-、
-NH-C1-30烷基-C(O)-、-NHC(O)-C1-30烷基-C(O)-、
-NH-C1-30烷基-C(O)NH-、-NHC(O)-C1-30烷基-C(O)NH-、
-NH-C1-30烷基-C(O)N(CH3)-、-NHC(O)-C1-30烷基-C(O)N(CH3)-、
-NH-C1-30烷基-NH-、-NHC(O)-C1-30烷基-NH-、
-NH-C1-30烷基-NHC(O)-、-NHC(O)-C1-30烷基-NHC(O)-、
-NH-C1-30烷基-N(CH3)-、-NHC(O)-C1-30烷基-N(CH3)-、
-NH-C1-30烷基-N(CH3)C(O)-、-NHC(O)-C1-30烷基-N(CH3C(O)-、
-N(CH3)-、-N(CH3)C(O)-、
-N(CH3)-C1-30烷基-、-N(CH3)C(O)-C1-30烷基-、
-N(CH3)-C1-30烷基-C(O)-、-N(CH3)C(O)-C1-30烷基-C(O)-、
-N(CH3)-C1-30烷基-C(O)NH-、-N(CH3)C(O)-C1-30烷基-C(O)NH-、
-N(CH3)-C1-30烷基-C(O)N(CH3)-、-N(CH3)C(O)-C1-30烷基-C(O)N(CH3)-、
-N(CH3)-C1-30烷基-NH-、-N(CH3)C(O)-C1-30烷基-NH-、
-N(CH3)-C1-30烷基-NHC(O)-、-N(CH3)C(O)-C1-30烷基-NHC(O)-、
-N(CH3)-C1-30烷基-N(CH3)-、-N(CH3)C(O)-C1-30烷基-N(CH3)-、
-N(CH3)-C1-30烷基-N(CH3)C(O)-、-N(CH3)C(O)-C1-30烷基-和N(CH3C(O)-。
在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7是两个或三个简单间隔基的组合。在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7是被氨基酸、二肽或三肽中断(例如，接合)的两个或三个简单间隔基的组合。在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7是被环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基中断(例如，接合)的两个或三个简单间隔基的组合。在一些实施方案中，中断基团是取代的三唑。在一些实施方案中，中断基团是氨基酸。在一些实施方案中，中断基团是：-S-、-S(O)-、-S(O)2-、
在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7是任选地被选自以下项的基团中断一次或多次的取代的或未取代的C2-20烷基链：-C(O)-、-C(O)NH-、-C(O)N(CH3)-、-C(O)O-、-NH-、-N(CH3)-、-NHC(O)-、-N(CH3)C(O)-、-NHC(O)NH-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、碳环基、杂环基、芳烷基、杂芳烷基或其任意组合。在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7是WO2016207089中公开的连接体，其通过引用以其整体并入。在一些实施方案中，连接体包含经由芳基或杂芳基基团(例如，三唑、二苯并环辛炔或其衍生物)接合的两个简单间隔基。例如，连接体可以包含二苯基环辛炔(DBCO)衍生物诸如DBCO NHS酯或由其形成的化学基团。例如，中断基团可以包括：
或其衍生物，其中中断基团在每一端上被取代以形成连接体(例如，L1、L2、L3、L4、L5、L6和/或L7)。
在一些实施方案中，L1、L2、L3、L4、L5和/或L6中的每一个是具有由以下式(i)、(ii)或(iii)表示的结构的聚合间隔基：
(i)-(CO)m(CH2)n(OC2-6烷基)o(NH)p(CO)q-；
(ii)-(CO)r(CH2)s(NR10C2-6烷基)t(NR11)u(CO)v-；或
(iii)-(CO)r(CH2)s(NR10C(O)C1-6烷基)t(NR11)u(CO)v-；
其中：
R10在每个例子中独立地选自氢或C1-3烷基；
R11在每个例子中独立地选自氢或C1-3烷基；
m是0或1；
n是0至10；
o是1至10；
p是0或1；
q是0或1；
r是0或1；
s是0至10；
t是1至10；
u是0或1；
v是0或1。
在一些实施方案中，L1、L2、L3、L5和/或L6是选自以下项的聚合间隔基：
-C(O)-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NHC(O)-C1-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NHC(O)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)C(O)-C1-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)C(O)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NH-、
-C(O)-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-N(CH3)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-NH-、
-C(O)-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-N(CH3)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NHC(O)-C1-6烷基]1-8-NH-、
-C(O)-C1-6烷基-[NHC(O)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NH-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-N(CH3)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)C(O)-C1-6烷基]1-8-NH-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)C(O)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)-、
-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NH-、
-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-N(CH3)-、
-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-NH-、
-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-N(CH3)-、
-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NH-和
-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-N(CH3)-。
在一些实施方案中，L4是选自以下项的聚合间隔基(即，聚胺或聚酰胺连接体)：
-C(O)-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NHC(O)-C1-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NHC(O)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)C(O)-C1-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)C(O)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-NH-、
-C(O)-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-N(CH3)-、
-C(O)-C1-6烷基-[NHC(O)-C1-6烷基]1-8-NH-、
-C(O)-C1-6烷基-[NHC(O)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NH-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-N(CH3)-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)C(O)-C1-6烷基]1-8-NH-、
-C(O)-C1-6烷基-[N(CH3)C(O)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)-、
-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-NH-、
-C1-6烷基-[NH-C2-6烷基]1-8-N(CH3)-、
-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-NH-和
-C1-6烷基-[N(CH3)-C2-6烷基]1-8-N(CH3)-。
在一些实施方案中，L5是选自以下项的聚合间隔基(即，PEG连接体)：
-C(O)-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NH-、
-C(O)-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-N(CH3)-、
-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NH-、
-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-N(CH3)-和
-C2-6烷基-[O-C2-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-。
在一些实施方案中，L7是取代的C12-30烷基或具有15至60个(优选地18至36个)非氢原子(优选地选自C、N、O和S)的取代的或未取代的杂烷基。在一些实施方案中，L7是具有15至60个原子的杂烷基。在一些实施方案中，L7是通过15至60个共价键将IN缀合至其余分子的杂烷基基团。在一些实施方案中，L7是杂烷基基团。在一些实施方案中，L7是取代的或未取代的C1-30烷基或取代的或未取代的杂烷基。在一些实施方案中，L7是取代的或未取代的C1-30烷基或含有4-12个Z基团的取代的或未取代的杂烷基；其中每个Z基团独立地是–(O-C1-6烷基)-、-(NH-C1-6烷基)-或–(N(C1-3烷基)-C1-6烷基。在一些实施方案中，L7是含有6至12个Z基团的取代的或未取代的杂烷基。在一些实施方案中，L7是含有6至10个Z基团的取代的或未取代的杂烷基。在一些实施方案中，每个Z基团独立地选自-(OCH2CH2)-、-(OCH2CH2CH2)-、-(OCH2CH2CH2CH2)-、-(OCH(CH3)CH2)-、-(OCH2CH(CH3))-、-(OC(CH3)2CH2)-、-(OCH2C(CH3)2)-、-(NHCH2CH2)-、-(NHCH2CH2CH2)-、-(NHCH2CH2CH2CH2)-、-(NHCH(CH3)CH2)-、-(NHCH2CH(CH3))-、-(NHC(CH3)2CH2)-、-(NHCH2C(CH3)2)-、-(NHC(O)CH2)-、-(NHC(O)CH2CH2)-、-(NHC(O)CHCH3)-、-(NHC(O)C(CH3)2)-、-(NHC(O)C(CH3)2CH2)-、-(N(CH3)CH2CH2)-、-(N(CH3)CH2CH2CH2)-、-(N(CH3)CH2CH2CH2CH2)-、-(N(CH3)CH(CH3)CH2)-、-(N(CH3)CH2CH(CH3))-、-(N(CH3)C(CH3)2CH2)-、-(N(CH3)C(O)CH2)-、-(N(CH3)C(O)CH2CH2)-、-(N(CH3)C(O)CHCH3)-、-(N(CH3)C(O)C(CH3)2)-、-(N(CH3)C(O)C(CH3)2CH2)-和-(N(CH3)CH2C(CH3)2)-。在一些实施方案中，每个Z基团独立地选自-(OCH2CH2)-、-(NHCH2CH2)-和-(N(CH3)CH2CH2)-和-(N(CH3)C(O)CH2)-。在一些实施方案中，Z基团被烷基基团、酰胺、烷基酰胺、烷基胺、聚氨基烷基基团或氨基酸(包括修饰的或合成的氨基酸)分开。
在一些实施方案中，间隔基(例如，L7)是具有由以下式(i)或(ii)表示的结构的延长的连接体：
(i)-(CO)a(C0-6烷基)(Z1C2-6烷基)b-Z2-(C0-6烷基)(Z3C2-6烷基)c(Z4)d(CO)e-；或
(ii)-(CO)a(C0-6烷基)(Z1C(O)C1-6烷基)b-Z2-；
其中：
Z1每次出现独立地是-O-、-NH-或-N(C1-3烷基)-；
Z2是键、-C(O)-、-C(O)NH-、-C(O)-(C1-6烷基)-C(O)-、-C(O)-(C1-6烷基)-C(O)NH-、-C(O)-(C1-6烷基)-C(O)N(CH3)-、-C(O)NH-(C1-6烷基)-C(O)NH-、-NH-、-N(C1-6烷基)-、-N(C1-6烷基)C(O)-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-或-NHC(O)-(C1-6烷基)-NHC(O)-；
Z3每次出现独立地是-O-、-NH-或-N(C1-3烷基)-；
Z4是-O-、-NH-或-N(C1-3烷基)-；
a是0或1；
b是1至10；
c是1至10；
d是0或1；并且
e是0或1。
在一些实施方案中，间隔基(例如，L7)是具有由以下式(iii)表示的结构的延长的连接体：
(iii)-(CO)a(C0-6烷基)(Z1C2-6烷基)b-Z2-(C0-6烷基)(Z3C2-6烷基)c(Z4)d(CO)e-
其中：
Z1每次出现独立地是-O-、-NH-或-N(C1-3烷基)-；
Z2是键、-C(O)-、-C(O)NH-、-C(O)-(C1-6烷基)-C(O)-、-C(O)-(C1-6烷基)-C(O)NH-、-C(O)-(C1-6烷基)-C(O)N(CH3)-、-C(O)NH-(C1-6烷基)-C(O)NH-、-NH-、-N(C1-6烷基)-、-N(C1-6烷基)C(O)-、-NHC(O)-、-NHC(O)NH-或-NHC(O)-(C1-6烷基)-NHC(O)-；
Z3每次出现独立地是-O-或-N(CH3)-；
Z4是-NH-或-N(CH3)-；
a是0或1；
b是1至6；
c是1至6；
d是0或1；并且
e是0或1。
在一些实施方案中，间隔基SP(例如，L7)是选自以下项的延长的间隔基：
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)C(O)-C1-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)C(O)-C1-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)C(O)-C1-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)C(O)-C1-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)C(O)-C1-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)C(O)-C1-4烷基]2-4-NH-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)C(O)-C1-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)C(O)-C1-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NH-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[NH-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-、
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-NHC(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-和
-C1-4烷基-[N(CH3)-C2-4烷基]2-4-N(CH3)C(O)-C2-4烷基-[O-C2-4烷基]2-4-N(CH3)-。
在一些实施方案中，间隔基(例如，L1、L2、L3、L4、L5、L6或L7)进一步包含紧固基团，其中紧固基团是将间隔基缀合至相邻基团(例如，EL、A1、IN、MOD)的连接体。紧固基团可以是典型地包含约1至约20个原子的取代的或未取代的烷基或取代的或未取代的杂烷基连接体，该原子选自碳、氮和氧。优选地，紧固基团是短的烷基或杂烷基基团，其在其末端具有配置为与相邻基团形成稳定的键(例如，肽键)的官能团。紧固基团的实例包括基团诸如：
#C(O)-C1-6烷基-C(O)–、#C(O)NH-C1-6烷基-C(O)–、
#C(O)N(CH3)-C1-6烷基-C(O)–、#NH-C1-6烷基-C(O)–、
#NHC(O)-C1-6烷基-C(O)–、#N(CH3)-C1-6烷基-C(O)-、
#N(CH3)C(O)-C2-6烷基-C(O)–、#C(O)-C1-6烷基-C(O)NH–、
#C(O)NH-C1-6烷基-C(O)NH–、#C(O)N(CH3)-C1-6烷基-C(O)NH–、
#NH-C1-6烷基-C(O)NH–、#NHC(O)-C1-6烷基-C(O)NH–、
#N(CH3)-C1-6烷基-C(O)NH–、#N(CH3)C(O)-C1-6烷基-C(O)NH–、
#C(O)-C1-6烷基-C(O)N(CH3)-、#C(O)NH-C1-6烷基-C(O)N(CH3)–、
#C(O)N(CH3)-C1-6烷基-C(O)N(CH3)-、#NH-C1-6烷基-C(O)N(CH3)–、
#NHC(O)-C1-6烷基-C(O)N(CH3)–、#N(CH3)-C1-6烷基-C(O)N(CH3)–、
#N(CH3)C(O)-C1-6烷基-C(O)N(CH3)–、#C(O)-C1-6烷基-NH–、
#C(O)NH-C1-6烷基-NH–、#C(O)N(CH3)-C1-6烷基-NH–、
#NH-C1-6烷基-NH–、#NHC(O)-C1-6烷基-NH–、
#N(CH3)-C1-6烷基-NH–、#N(CH3)C(O)-C1-6烷基-NH–、
#C(O)-C1-6烷基-NHC(O)–、#C(O)NH-C1-6烷基-NHC(O)–、
#C(O)N(CH3)-C1-6烷基-NHC(O)–、#NH-C1-6烷基-NHC(O)–、
#NHC(O)-C1-6烷基-NHC(O)–、#N(CH3)-C1-6烷基-NHC(O)–、
#N(CH3)C(O)-C1-6烷基-NHC(O)–、#C(O)-C1-6烷基-N(CH3)–、
#C(O)NH-C1-6烷基-N(CH3)–、#C(O)N(CH3)-C1-6烷基-N(CH3)–、
#NH-C1-6烷基-N(CH3)–、#NHC(O)-C1-6烷基-N(CH3)–、
#N(CH3)-C1-6烷基-N(CH3)–、#N(CH3)C(O)-C1-6烷基-N(CH3)–、
#C(O)-C1-6烷基-N(CH3)C(O)–、#C(O)NH-C1-6烷基-N(CH3)C(O)–、
#C(O)N(CH3)-C1-6烷基-N(CH3)C(O)–、#NH-C1-6烷基-
N(CH3)C(O)–、
#NHC(O)-C1-6烷基-N(CH3)C(O)–、#N(CH3)-C1-6烷基-N(CH3)C(O)–、
#N(CH3)C(O)-C1-6烷基-N(CH3)C(O)–、#C(O)-C1-6烷基–、
#C(O)NH-C1-6烷基–、#C(O)N(CH3)-C1-6烷基–、
#NH-C1-6烷基–、#NHC(O)-C1-6烷基–、
#N(CH3)-C1-6烷基–、#N(CH3)C(O)-C1-6烷基–；
#C1-6烷基-C(O)-–、#C1-6烷基-C(O)NH–、
#C1-6烷基-C(O)N(CH3)–、#C1-6烷基-NH–、
#C1-6烷基-NHC(O)–、#C1-6烷基-N(CH3)–或
#C1-6烷基-N(CH3)C(O)–、
其中#表示至间隔基的键，并且–表示至相邻基团的键。
在一些实施方案中，紧固基团是#C(O)-C2-6烷基-C(O)–或#NH-C2-6烷基-NH–。在一些实施方案中，紧固基团是#C(O)(CH2CH2CH2)C(O)–或#NH(CH2CH2)NH–。如本文所用紧固基团表示S1、S2、S3等，对应于其所附接的连接体。可选地，紧固基团可以被描述为A1的成员，在这种情况下S1、S2、S3编号仍然属于A1结合至其的连接体。在一些实施方案中，紧固基团是键。在一些实施方案中，紧固基团不存在。
在一些实施方案中，L1选自：
其中#EL表示至EL(或SIL)的键；并且#A1表示至A1的键。
在一些实施方案中，L2和L3各自独立地选自：
其中#IN表示至IN或MOD的键；并且#A1表示至A1的键。
在一些实施方案中，L4是：
其中#EL表示至EL(或SIL)的键；并且#IN表示至IN的键。
在一些实施方案中，L4是：
在一些实施方案中，L5是：
其中#EL表示至EL(或SIL)的键；并且#IN表示至IN的键。
在一些实施方案中，L5是：
在一些实施方案中，L6是：-C0-12烷基-C(O)-；-C0-12烷基-C(O)NH-；-C0-12烷基-C(O)N(CH3)-；-C0-12烷基-NH-；-C0-12烷基-NHC(O)-；-C0-12烷基-N(CH3)-；或-C0-12烷基-N(CH3)C(O)-；
在一些实施方案中，L6是：-C(O)-。
在一些实施方案中，L7是：
三价自由基(A1)
在一些实施方案中，三价自由基A1是含有1至100个选自H、C、N、O和S的原子的部分，其配置为结合至连接体L1、L2和L3。在一些实施方案中，A1含有中心原子或基团(Y)，基团(Y)是N或CH。在一些实施方案中，中心原子或基团(Y)具有一个或多个臂(arm)(例如，烷基或杂烷基链，其任选地被独立地选自以下项的一个或多个取代基取代或中断：羰基(-C(O)-)、醚(-O-)、胺(例如，-NH-或-N(CH3)-)或酰胺(例如，-C(O)NH-、-C(O)N(CH3)-、-NHC(O)-或-N(CH3)C(O)-、可选地被称为酰胺连接体)。在一些实施方案中，A1是三价杂烷基自由基。在一些实施方案中，A1是具有酰胺连接体臂(例如，B1、B2、B3)的三价自由基。在一些实施方案中，三价自由基被称为分支单元、分支基团。在一些实施方案中，式(01)或式(05)的A是A1。在一些实施方案中，A1是三价杂芳基、杂芳烷基、芳基、芳烷基、杂烷基-芳基、杂烷基-杂芳基自由基。在一些实施方案中，A1含有中心原子或基团(Y)，基团(Y)是碳环(例如，环烷基或芳基)或杂环(例如，杂环烷基或杂芳基)。在一些实施方案中，(Y)是苯基、三嗪基或三唑基，其每个任选地被1-3个杂烷基臂取代。
在一些实施方案中，A或A1是三价连接体，其任选地包含是配置为将有效负荷缀合至两个整联蛋白结合剂或至一个整联蛋白结合剂和一个MOD基团(例如，经由间隔基L和/或酶连接体EL)的臂或紧固基团。在一些实施方案中，A或A1是三价连接体。在一些实施方案中，A或A1是包含臂B1、B2和B3和任选地进一步包含紧固基团S1、S2和S3的三价连接体，其中三价连接体被配置为与相邻基团(例如，L1、L2、L3、IN、MOD或EL)形成酰胺键。在一些实施方案中，A或A1是三价酰胺连接体。在此文本中，三价酰胺连接体可以是具有三价(或能够与3个试剂形成键)，并且通常由烷基、羰基和胺基团组成，并且优选地能够与相邻基团(例如，L1、L2、L3、IN、MOD或EL)形成酰胺键的化学基团。在一些实施方案中，三价自由基是三价酰胺连接体。在一些实施方案中，三价酰胺连接体包含中心氨基酸(例如，赖氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸等)，其中氨基酸与相邻基团(例如，L1、L2、L3、IN、MOD或EL)形成键，任选地经由连接臂(例如，B1、B2、B3)和/或紧固基团(即，S1、S2或S3)桥接。优选地，本文描述的三价自由基将有效负荷(例如，酶促可切割有效负荷(CP))与两个整联蛋白结合剂或与一个整联蛋白结合剂和一个基团MOD接合，并且其中有效负荷、整联蛋白结合剂和MOD可以经过连接体/间隔基(L1、L2或L3)被接合。
在一些实施方案中，A1具有由下式表示的结构：或其中(Y)是N、CH、苯基或杂芳基，并且B1、B2和B3中的每一个表示连接至相应的间隔基(例如，分别L1、L2和L3)的臂，并且其中*表示至L1的键，**表示至L2的键，***表示至L3的键。
在一些实施方案中，A1是下式的三价自由基：
其中：
*表示至L1的键，
**表示至L2的键，
***表示至L3的键，
S1、S2、S3中的每一个是紧固基团；并且
B1、B2、B3中的每一个是连接臂。
并且Y是CH或N。
在一些实施方案中，S1、S2和S3中的一个或多个是键。在一些实施方案中，S1、S2和S3中的一个或多个是-C(O)-C2-6烷基-C(O)-、-N(CH3)-C1-6烷基-N(CH3)-、-NH-C1-6烷基-NH-或-NH-C1-6烷基-N(CH3)-。在一些实施方案中，S1、S2和/或S3是-C(O)-C2-6烷基-C(O)-或-NH-C1-6烷基-NH-。
在一些实施方案中，每个B1、B2和B3是酰胺连接体(例如，烷基酰胺和/或聚酰胺连接体)。在一些实施方案中，每个B1、B2和B3是包含1至约32个原子的酰胺连接体。在一些实施方案中，1至约32个原子选自碳、氮和氧。
在一些实施方案中，每个B1、B2和B3选自：
-C(O)-；
-C(O)NH-；
-C(O)N(CH3)-；
-C(O)NH-C0-6烷基-C(O)-；
-C(O)NH-C0-6烷基-C(O)NH-；
-C(O)NH-C0-6烷基-C(O)N(CH3)-；
-C(O)NH-C0-6烷基-NH-；
-C(O)NH-C0-6烷基-N(CH3)-；
-C(O)NH-C0-6烷基-NHC(O)-；
-C(O)NH-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-；
-C(O)N(CH3)-C0-6烷基-C(O)-；
-C(O)N(CH3)-C0-6烷基-C(O)NH-；
-C(O)N(CH3)-C0-6烷基-C(O)N(CH3)-；
-C(O)NH-C0-6烷基-NH-；
-C(O)NH-C0-6烷基-N(CH3)-；
-C(O)N(CH3)-C0-6烷基-NHC(O)-；
-C(O)N(CH3)-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-；
-C(O)-C1-6烷基-；
-C(O)-C0-6烷基-C(O)-；
-C(O)-C0-6烷基-C(O)NH-；
-C(O)-C0-6烷基-C(O)N(CH3)-；
-C(O)-C0-6烷基-NH-；
-C(O)-C0-6烷基-N(CH3)-；
-C(O)-C0-6烷基-NHC(O)-；
-C(O)-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-；
-C0-6烷基-C(O)-；
-C0-6烷基-C(O)NH-；
-C0-6烷基-C(O)N(CH3)-；
-C0-6烷基-C(O)NH-C0-6烷基-C(O)-；
-C0-6烷基-C(O)NH-C0-6烷基-C(O)NH-；
-C0-6烷基-C(O)NH-C0-6烷基-C(O)N(CH3)-；
-C0-6烷基-C(O)NH-C0-6烷基-NH-；
-C0-6烷基-C(O)NH-C0-6烷基-N(CH3)-；
-C0-6烷基-C(O)NH-C0-6烷基-NHC(O)-；
-C0-6烷基-C(O)NH-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-；
-C0-6烷基-C(O)N(CH3)-C0-6烷基-C(O)-；
-C0-6烷基-C(O)N(CH3)-C0-6烷基-C(O)NH-；
-C0-6烷基-C(O)N(CH3)-C0-6烷基-C(O)N(CH3)-；
-C0-6烷基-C(O)NH-C0-6烷基-NH-；
-C0-6烷基-C(O)NH-C0-6烷基-N(CH3)-；
-C0-6烷基-C(O)N(CH3)-C0-6烷基-NHC(O)-；
-C0-6烷基-C(O)N(CH3)-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-；
-C0-6烷基-C(O)-C0-6烷基-C(O)-；
-C0-6烷基-C(O)-C0-6烷基-C(O)NH-；
-C0-6烷基-C(O)-C0-6烷基-C(O)N(CH3)-；
-C0-6烷基-C(O)-C0-6烷基-NH-；
-C0-6烷基-C(O)-C0-6烷基-N(CH3)-；
-C0-6烷基-C(O)-C0-6烷基-NHC(O)-；
-C0-6烷基-C(O)-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-、
-C0-6烷基-NH-；
-C0-6烷基-NHC(O)-；
-C0-6烷基-NHC(O)-C1-6烷基-C(O)-；
-C0-6烷基-NHC(O)-C1-6烷基-C(O)NH-；
-C0-6烷基-NHC(O)-C1-6烷基-C(O)N(CH3)-；
-C0-6烷基-NHC(O)-C1-6烷基-NH-；
-C0-6烷基-NHC(O)-C1-6烷基-N(CH3)-；
-C0-6烷基-NHC(O)-C1-6烷基-NHC(O)-；
-C0-6烷基-NHC(O)-C1-6烷基-N(CH3)C(O)-；
-C0-6烷基-N(CH3)-；
-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-；
-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-C1-6烷基-C(O)-；
-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-C1-6烷基-C(O)NH-；
-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-C1-6烷基-C(O)N(CH3)-；
-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-C1-6烷基-NH-；
-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-C1-6烷基-N(CH3)-；
-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-C1-6烷基-NHC(O)-；和
-C0-6烷基-N(CH3)C(O)-C1-6烷基-N(CH3)C(O)-。
在一些实施方案中，A1是氨基酸或其衍生物。在一些实施方案中，A1是包含氨基酸的氨基酸衍生物，其中羧酸酯基团被C1-6氨基烷基基团取代。在一些实施方案中，A1是包含氨基酸(例如，Glu或Asp)的氨基酸衍生物，其中羧酸酯基团被C1-6氨基烷基基团(例如，β-丙氨酸基团)取代。在一些实施方案中，A1是氨基酸。在一些实施方案中，A1是赖氨酸。在一些实施方案中，A1是L-Lys。在一些实施方案中，A1是D-Lys。在一些实施方案中，A1是Glu或其氨基烷基衍生物。在一些实施方案中，A1是L-Glu或其β-丙氨酸取代的衍生物。在一些实施方案中，A1是D-Glu或其β-丙氨酸取代的衍生物。
在一些实施方案中，A1是氨基酸或其衍生物。在一些实施方案中，A1是Lys(例如，L-Lys或D-Lys)、Glu(L-Glu或D-Glu)或Asp(L-Asp或D-Asp)或其衍生物(例如，被一个或多个臂(例如，B1、B2或B3)取代)。在一些实施方案中，A1具有以下结构中的一个：
*C(O)-C0-6烷基-Y(C0-6烷基-NH**)(C0-6烷基-NH***)、
*C(O)-C0-6烷基-Y(C0-6烷基-NH**)(C0-6烷基-C(O)***)、
*C(O)-C0-6烷基-Y(C0-6烷基-C(O)**)(C0-6烷基-C(O)***)、
*C(O)-C0-6烷基-C(O)NH-Y(C0-6烷基-NH**)(C0-6烷基-NH***)、
*C(O)-C0-6烷基-C(O)NH-Y(C0-6烷基-NH**)(C0-6烷基-C(O)***)、
*C(O)-C0-6烷基-C(O)NH-Y(C0-6烷基-C(O)**)(C0-6烷基-C(O)***)、
*C(O)-C0-6烷基-C(O)NH-Y(C0-6烷基-C(O)NH-C0-6烷基-NH**)(C0-6烷基-C(O)NH-C0-6烷基-NH***)；
其中*、**和***中的每一个表示至间隔基L1、L2或L3的键；并且Y是N或CH。在一些实施方案中，Y是赖氨酸或谷氨酰胺。
在一些实施方案中，A1具有以下结构中的一个：
在一些实施方案中，A1是式(A1-1a)的A1：
在一些实施方案中，A1是式(A1-1b)的A1：
其中*、**和***中的每一个表示至间隔基L1、L2或L3的键。在一些实施方案中，A1是式(A1-1c)或式(A1-1d)的A1：
其中*、**和***中的每一个表示至间隔基L1、L2或L3的键。在一些实施方案中，A1是式(A1-2a)的A1：
在一些实施方案中，A1是式(A1-2b)的A1：
其中*、**和***中的每一个表示至间隔基L1、L2或L3的键。在一些实施方案中，A1是式(A1-2c)或式(A1-2d)的A1：
其中*、**和***中的每一个表示至间隔基L1、L2或L3的键。
物理化学调节剂(MOD)
在一些实施方案中，本公开提供了包含物理化学调节剂(“MOD”)的缀合物。基团MOD可以经由连接体(例如，稳定的衬(liner))被连接至缀合物的其余部分。在一些实施方案中，MOD经由连接体(例如，L6)被连接至EL。在一些实施方案中，MOD经由连接体(例如，L3)被结合至A1。在一些实施方案中，MOD是带电荷的或极性基团。带电荷的或极性基团的实例包括氢氧化物和醇、羧化物和羧酸、铵和胺、胍盐和胍等。在一些实施方案中，MOD是或包含胺。在一些实施方案中，MOD是聚胺基团。在一些实施方案中，MOD是-NR2或-NR3 +。在一些实施方案中，MOD是-C1-6烷基-NR2或-C1-6烷基-NR3 +(例如，-C1-6烷基-NH2、-C1-6烷基-NHCH3、-C1-6烷基-N(CH3)2或-C1-6烷基-N(CH3)3 +)。在一些实施方案中，MOD是-C1-6烷基-NHC(＝NH+)NH2。在一些实施方案中，MOD是多元酸基团。在一些实施方案中，MOD是-COOH或-COO-。在一些实施方案中，MOD是-C1-6烷基-COOR(例如，-C1-6烷基-COOH、-C1-6烷基-COO-、-C1-6烷基-COO-Na+或-C1-6烷基-COOCH3.)。在一些实施方案中，MOD是在体内被转化为极性或带电荷基团的基团(例如，MOD是烷基酯，其在体内被转化为烷基酸，从而降低膜渗透性)。在一些实施方案中，MOD是-OH或-O-。在一些实施方案中，MOD是氨基酸。在一些实施方案中，MOD是碱性氨基酸。在一些实施方案中，MOD是Arg、His或Lys。在一些实施方案中，MOD是酸性氨基酸。在一些实施方案中，MOD是Glu或Asp。在一些实施方案中，MOD是非天然氨基酸(例如，D-Glu或D-Asp)。在一些实施方案中，MOD是极性氨基酸(例如，Ser、Thr、Asn、Gln)。在一些实施方案中，本文提供了下式的化合物：
在一些实施方案中，L3是杂烷基连接体。在一些实施方案中，L3是简单间隔基。在一些实施方案中，L3是羰基、酰基连接体、酰胺连接体或烷基连接体。在一些实施方案中，L3是任选取代的烷基连接体(例如，任选取代的烷基酰胺连接体)。在一些实施方案中，MOD是-OH、-COOH、-NH2、NHCH3、-N(CH3)2、-(CH3)3 +或其盐。在一些实施方案中，L3是C1-12烷基。在一些实施方案中，L3是NHC1-12烷基。在一些实施方案中，L3是NHC(O)-C1-12烷基。在一些实施方案中，L3是C(O)-C1-12烷基。在一些实施方案中，L3是如本文所定义的连接体(L)或间隔基(SP)。
在一些实施方案中，L3是-(CO)r(CH2)s(NR10C(O)C1-6烷基)t(NR11)u(CO)v-。在一些实施方案中，L3是-[N(CH3)CH2C(O)]1-12，以及MOD是-OH或-O-。L3-MOD的实例包括：-[N(CH3)CH2C(O)]4O-、-[N(CH3)CH2C(O)]6O-和-[N(CH3)CH2C(O)]8O-。在一些实施方案中，MOD是-OH、-COOH、-NH2、NHCH3、-N(CH3)2、-(CH3)3 +或其盐。在一些实施方案中，L3是C1-12烷基。在一些实施方案中，L3是NHC1-12烷基。在一些实施方案中，L3是NHC(O)-C1-12烷基。在一些实施方案中，L3是C(O)-C1-12烷基。在一些实施方案中，L3如本文所描述。
酶促可切割连接体(EL)
在一个方面，本文提供了化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有由式(01)-(05)中任一个表示的结构：
其中：
CT是六环细胞毒性或细胞抑制配体；
EL是酶促可切割连接体；
L是稳定的连接体；
A是分支基团；
IN是整联蛋白结合基团；并且
MOD是物理化学调节剂基团。
在一些实施方案中，EL是具有式-AA1-AA2的二肽-或具有式-AA1-AA2-AA3-的三肽，其中每个AA1、AA2和AA3独立地是氨基酸或其衍生物。在一些实施方案中，EL进一步包含自裂解连接体(SIL)。
在一些实施方案中，本文提供了式(01)-(05)中任一个的化合物，其中EL具有式：
*-AA1-AA2-(AA3)0-1-(SIL)0-1-**；
其中：
每个AA1、AA2和AA3独立地是氨基酸或其衍生物、
SIL是自裂解连接体、
*是至L(例如，L1、L4、L5、L6或L7)的键；并且
**是至CT的键。
在一些实施方案中，SIL是PAB(对氨基苄基氨基甲酸酯)基团。
在一些实施方案中，EL是具有式-AA1-AA2-的二肽，其中每个AA1和AA2独立地是氨基酸。
在一些实施方案中，EL是具有式-AA1-AA2-AA3-的三肽，其中每个AA1、AA2和AA3独立地是氨基酸。
在一些实施方案中，本发明提供了具有本文公开的式的结构的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中EL被来自蛋白酶种类的酶切割。
在一些实施方案中，本发明提供了具有本文公开的式的结构的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中EL被中性粒细胞弹性蛋白酶切割。
在一些实施方案中，本发明提供了具有本文公开的式的结构的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中EL被中性粒细胞弹性蛋白酶切割。
在一些实施方案中，本发明提供了具有本文公开的式的结构的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中EL具有式：L-Asp-L-Pro-L-Val、L-Asn-L-Pro-L-Val、-Gly-L-Pro-L-Val-、L-Ala-L-Pro-L-Val-、L-Nva-L-Pro-L-Val-、L-His-L-Pro-L-Val-、L-Asp-L-Pro-L-Ile、L-Asn-L-Pro-L-Ile、-Gly-L-Pro-L-Ile-、L-Ala-L-Pro-L-Ile-、L-Nva-L-Pro-L-Ile-、L-His-L-Pro-L-Ile-、L-Asp-L-Pro-L-Leu、L-Asn-L-Pro-L-Leu、-Gly-L-Pro-L-Leu-、L-Ala-L-Pro-L-Leu-、L-Nva-L-Pro-L-Leu-或L-His-L-Pro-L-Leu-。在一些实施方案中，具有式L-Asp-L-Pro-L-Val、L-Asn-L-Pro-L-Val、-Gly-L-Pro-L-Val-、L-Ala-L-Pro-L-Val-、L-Nva-L-Pro-L-Val-、L-His-L-Pro-L-Val-、L-Asp-L-Pro-L-Ile、L-Asn-L-Pro-L-Ile、-Gly-L-Pro-L-Ile-、L-Ala-L-Pro-L-Ile-、L-Nva-L-Pro-L-Ile-、L-His-L-Pro-L-Ile-、L-Asp-L-Pro-L-Leu、L-Asn-L-Pro-L-Leu、-Gly-L-Pro-L-Leu-、L-Ala-L-Pro-L-Leu-、L-Nva-L-Pro-L-Leu-或L-His-L-Pro-L-Leu-的EL是可被中性粒细胞弹性蛋白酶切割的。
在一些实施方案中，EL具有式L-Asp-L-Pro-L-Val、L-Asn-L-Pro-L-Val、-Gly-L-Pro-L-Val-、L-Ala-L-Pro-L-Val-、L-Nva-L-Pro-L-Val-或L-His-L-Pro-L-Val-。在一些实施方案中，EL具有式L-Asp-L-Pro-L-Val、L-Asn-L-Pro-L-Val或-Gly-L-Pro-L-Val-。
在一些实施方案中，EL是式(EL-1a)的EL：
L-Asp-L-Pro-L-Val 式(EL-1a)。
在一些实施方案中，EL是式(EL-1b)的EL：
L-Asp*-L-Pro-L-Val 式(EL-1b)
其中Asp*表示天冬氨酸的前药，诸如Asp的烷基酯，其中烷基基团被胺(例如，NH2、N(CH3)2、N(CH3)3 +)或至整联蛋白结合剂(例如，-L6-IN、NHL6-IN或NHCO-IN)的连接体取代。
在一些实施方案中，EL是式(EL-2)的EL：
L-Asn-L-Pro-L-Val 式(EL-2)。
在一些实施方案中，EL是式(EL-3)的EL：
Gly-L-Pro-L-Val 式(EL-3)。
在一些实施方案中，EL由式(I)表示：
其中CP、E3和E1如本文所定义；
RA是氢或C1-6烷基；并且
RB是至如本文描述的间隔基(SP)的键或连接体(L1、L5或L7)。
整联蛋白结合剂(IN)
在一些实施方案中，本发明提供了具有本文公开的式的结构的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中IN是包含肽、蛋白质、抗体或小分子的整联蛋白结合剂。在一些实施方案中，这种肽、蛋白质、抗体或小分子的分子量小于1kD。
在一些实施方案中，本发明提供了具有本文公开的式的结构的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中IN是肽类或拟肽类整联蛋白结合剂。
在一些实施方案中，本发明提供了具有本文公开的式的结构的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中IN是包含非肽、非抗体或小分子的整联蛋白结合剂。在一些实施方案中，这种非肽、非蛋白质、非抗体或小分子的分子量(例如，<1kD)。在一些实施方案中，IN是小分子整联蛋白结合剂。在一些实施方案中，IN是具有两个或更多个脲基团(-NHC(O)NH-)的小分子整联蛋白结合剂。在一些实施方案中，IN是小分子αvβ3整联蛋白结合剂。
在一些实施方案中，本发明提供了具有本文公开的式的结构的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中IN是线性整联蛋白结合肽。
在一些实施方案中，IN是大环整联蛋白结合肽。
在一些实施方案中，线性整联蛋白结合肽是约束的大环整联蛋白结合肽。
在一些实施方案中，IN是非肽类或非拟肽类整联蛋白结合剂。
在一些实施方案中，IN是肿瘤结合部分。在一些实施方案中，IN结合至肿瘤和非肿瘤细胞。在一些实施方案中，IN迅速结合分裂中的细胞(例如，肿瘤细胞或其他过度增殖细胞)。
在一些实施方案中，IN是αvβ3-结合部分。
在一些实施方案中，IN是IN-1a或IN-1b，其中
IN-1a是以及
IN-1b是
或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中#SP表示至间隔基(例如，L2、L3、L4、L5、L6和/或L7中的一个)的键。
如表A和表B所示，当*＝(R)时，表示IN-1a，并且IN-1b对应于*＝(S)。对于与整联蛋白受体(例如，αvβ3整联蛋白受体)结合(R)异构体是优选的，因为该异构体与(S)异构体具有优异的结合(较低的IC50)。
在一些实施方案中，IN具有结构：
或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中#SP表示至间隔基(例如，L2、L3、L4、L5、L6和/或L7中的一个)的键。
细胞毒性或细胞抑制自由基(CT)
本文公开了具有六环细胞毒性或细胞抑制自由基CT的化合物。在一些实施方案中，CT是(六环)小分子自由基(例如，分子量<1kD)。在一些实施方案中，CP是大环自由基。在一些实施方案中，CP是多环自由基。在一些实施方案中，CP是具有六个环的多环自由基。在一些实施方案中，CP是具有六元稠环的多环自由基。在一些实施方案中，CP是六环自由基。在一些实施方案中，CP是在其中一个环中具有α-羟基内酯部分的六环自由基。
在一些实施方案中，CT是的C20羟基自由基，其中稠环在C7和C9之间形成，其中所述稠环被-NRXRY取代。在一些实施方案中，C7和C9之间的稠环(即，X3和X4分别在式(I)中)是环烷基环。在一些实施方案中，C7和C9之间的稠环(即，X3和X4分别在式(I)中)是被-NRXRY取代的环烷基环。在一些实施方案中，C7和C9之间的稠环(即，X3和X4分别在式(I)中)是被-NRXRY取代的环己基环。在一些实施方案中，CT是六环喜树碱衍生物。在一些实施方案中，RX是氢、C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-EL2-C(O)CH2(吡啶)；并且RY是氢或C1-6烷基。
在一些实施方案中，CT是：
在一些实施方案中：
X1和X2一起形成亚乙基二氧基或亚甲基二氧基杂环；并且
X3和X4各自独立地是氢、卤素、C1-6卤代烷基、C1-6烷基或C1-6烷基胺。
在一些实施方案中：
X1和X2一起形成亚甲基二氧基杂环；并且
X3和X4各自独立地是氢、C1-6烷基或C1-6烷基胺。
在一些实施方案中：
X1和X2一起形成亚甲基二氧基杂环；
X3是氢；并且
X4是氢、C1-6烷基或C1-6烷基胺。
在一些实施方案中：
X1和X2一起形成亚甲基二氧基杂环；并且
X3是氢；并且
X4是氢、-CH2CH3、-CH2NH2或-CH2N(CH3)2。
在一些实施方案中：
X1和X2一起形成亚甲基二氧基杂环；
X3是氢；并且
X4是氢或-CH2NH2。
在一些实施方案中：
X1和X2各自独立地是氢、卤素、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；并且
X3和X4一起形成被-NRXRY取代的碳环A；
其中：
RX是氢、C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-EL2-C(O)CH2(吡啶)；
其中：
EL2是(-L-Asp)-(L-Pro)-(L-Val-)、(-L-Asn)-(L-Pro)-(L-Val-)、(-L-Ala)-(L-Ala)-(L-Asn-)或(-L-Ala)-(L-N-Me-Ala)-(L-Asn-)；并且
RY是氢或C1-6烷基。
在一些实施方案中：
X1和X2各自独立地是氢、卤素、C1-4烷基或C1-4卤代烷基；并且
X3和X4一起形成被-NRXRY取代的碳环A；其中RX是氢、-C(O)CH3或-C(O)OBn；并且RY是氢。
在一些实施方案中：
X1和X2各自独立地是卤素或-CH3；并且
X3和X4一起形成被-NRXRY取代的环己基环；其中：
RX是氢、C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn或-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或
RY是氢或C1-6烷基。
在一些实施方案中：
X1和X2各自独立地是氢、卤素或-CH3；并且
X3和X4一起形成被-NRXRY取代的环己基环；其中RX是氢、-C(O)CH3或-C(O)OBn；并且RY是氢。
在一些实施方案中：
X1是-F；
X2是-CH3；并且
X3和X4一起形成被-NH2、-NHC(O)CH3或-NHC(O)OBn取代的环己基环。
在一些实施方案中：
(i)X1和X2一起形成杂环和X3和X4各自是氢；或
(ii)X1和X2各自独立地是氢、卤素、C1-4烷基或C1-4卤代烷基和X3和X4一起形成被-NRXRY取代的碳环A；
其中：
RX是氢、C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-EL2-C(O)CH2(吡啶)；
其中：
EL2是(-L-Asp)-(L-Pro)-(L-Val-)、(-L-Asn)-(L-Pro)-(L-Val-)、(-L-Ala)-(L-Ala)-(L-Asn-)或(-L-Ala)-(L-N-Me-Ala)-(L-Asn-)；
RY是氢、取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的杂烷基、取代的或未取代的碳环或取代的或未取代的杂环；其中如果RY被取代，则其被独立地选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、-C1-6烷基、-CN、-CONH2、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-COOH、-COO(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)3 +、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO(IN)、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-OH、-O(C1-6烷基)、-OC(＝O)O(C1-6烷基)、-OC(＝O)NH(C1-6烷基)、氧代(＝O)、-SO3H、-SO2(C1-6烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-6烷基)和-SO2N(C1-6烷基)2。
在一些实施方案中，RX是氢、C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3或-C(O)OBn。在一些实施方案中，RX是氢、C1-6烷基、-C(O)CH3或-C(O)CF3。在一些实施方案中，RX是氢、C1-6烷基或-C(O)CH3。在一些实施方案中，RX是氢。在一些实施方案中，RX是C1-6烷基或-C(O)CH3。在一些实施方案中，RX是-CH2CH3或-C(O)CH3。在一些实施方案中，RX是-CH3。在一些实施方案中，RX是-CH3或-CH2CH3和RY是氢或-C1-6烷基。在一些实施方案中，RX和RY各自独立地是氢、-CH3或-CH2CH3或-C(O)CH3。
在一些实施方案中，RY是氢或取代的烷基，其中烷基被选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、-CONH2、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-COOH、-COO(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-OH、-O(C1-6烷基)和氧代(＝O)。在一些实施方案中，RY是氢或取代的C1-6烷基，其中烷基被选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、-CONH2、-CONH(CH3)、-CONH(CH2CH3)、-CON(CH3)2、-CON(CH2CH3)2、-NH2、-NH(CH3)、-NH(CH2CH3)、-N(CH3)2、-N(CH2CH3)2、-OH或氧代(＝O)。在一些实施方案中，RY是氢或取代的C1-6烷基，其中烷基被选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素和氧代(＝O)。在一些实施方案中，RY是取代的或未取代的烷基；其中如果RY被取代，其被选自以下项的一个或多个基团取代：氘、氟、氯和氧。在一些实施方案中，RY是氢、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、C1-6卤代烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)C1-6氘代烷基或-C(O)C1-6卤代烷基。在一些实施方案中，RY是氢、C1-6烷基、C1-6氘代烷基、-C(O)C1-6烷基或-C(O)C1-6卤代烷基。在一些实施方案中，RY是氢、-CH3、-CD3、-CH2CH3、-CH2CD3、-CD2CD3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-C(O)CH3、-C(O)CH2CH3、-C(O)CF3、-C(O)CHF2、-C(O)CH2F或-C(O)CH2CF3。在一些实施方案中，RY是氢、-CH3、-CD3、-CH2CH3、-CD2CD3、-C(O)CH3、-C(O)CD3、-C(O)CH2CH3、-C(O)CF3、-C(O)CHF2、-C(O)CH2F或-C(O)CH2CF3。在一些实施方案中，RY是氢、-CH3、-CH2CH3、-C(O)CH3、-C(O)CH2CH3或-C(O)CF3。在一些实施方案中，RY是氢、-CH2CH3、-C(O)CH3或-C(O)CF3。在一些实施方案中，RY是氢或C1-6烷基。在一些实施方案中，RY是氢、-CH3或-CH2CH3。在一些实施方案中，RY是氢或-CH2CH3。在一些实施方案中，RY是氢。在一些实施方案中，RY是-C1-6烷基。在一些实施方案中，RY是-CH2CH3。在一些实施方案中，RY是氢、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基或-C(O)C1-6卤代烷基。在一些实施方案中，RY是芳烷基、杂芳烷基、杂烷基-芳基、杂烷基-杂芳基，每个烷基、杂烷基、芳基或杂芳基基团任选地被一个或多个卤素、氧代、羟基、氨基、酰胺和/或酸基团取代。
在一些实施方案中，CT是细胞毒性或细胞抑制部分的自由基。在一些实施方案中，CT是六环细胞毒性或细胞抑制部分的自由基。在一些实施方案中，CT是六环拓扑异构酶抑制剂的自由基。在一些实施方案中，CT是六环拓扑异构酶抑制剂的α-羟基内酯自由基。在一些实施方案中，CT是六环拓扑异构酶抑制剂的羟基自由基。在一些实施方案中，CT是六环拓扑异构酶抑制剂的C20羟基自由基。在一些实施方案中，CT是依喜替康、DXd、10,11-亚甲基二氧基-喜树碱(FL118)或其衍生物的羟基自由基。在一些实施方案中，六环拓扑异构酶抑制剂的α-羟基内酯自由基比N-连接的或其N-甘氨酰基连接的类似物更稳定(即，经历更少的内酯环的开环异构现象)。在一些实施方案中，本文提供了含有经由酯键经由内酯环处的羟基自由基)连接的六环拓扑异构酶抑制剂的化合物和缀合物，其中内酯环水解和开环与N-连接的化合物或具有未修饰的羟基内酯环的缀合物(例如化合物1或曲妥单抗德鲁替康(trastuzumab deruxtecan))相比受到抑制。
在一些实施方案中，CT是依喜替康或DXd或其衍生物的自由基。在一些实施方案中，CT选自：
在一些实施方案中，CT是依喜替康或其衍生物的自由基。在一些实施方案中，CT选自：
在一些实施方案中，CT是10,11-亚乙基二氧基-喜树碱自由基。在一些实施方案中，CT是勒托替康(lurtotecan)或其衍生物的自由基。在一些实施方案中，CT是10,11-亚甲基二氧基-喜树碱(FL118)或其衍生物的自由基。在一些实施方案中，CT是7-甲胺-10,11-亚甲基二氧基-喜树碱或其衍生物的自由基。
在一些实施方案中，CT选自：
在一些实施方案中，CT选自：
在一些实施方案中，CT是10,11-亚甲基二氧基-喜树碱自由基，其在C20羟基基团处形成至氨基酸(例如，EL或式(I)的氨基酸)的酯键。在一些实施方案中，CT是7-甲胺-10,11-亚甲基二氧基-喜树碱自由基，其在内酯环处的羟基基团处形成至氨基酸(例如，EL或式(I)的氨基酸)的酯键。在一些实施方案中，CT是10,11-亚甲基二氧基-喜树碱或经由至缬氨酸残基的羰基的酯键结合的7-甲胺-10,11-亚甲基二氧基-喜树碱自由基。
在一些实施方案中，CT是：
在一些实施方案中，X1是F，X2是-CH3和X4是氢或-CH2NH2。在一些实施方案中，RX是氢、-CH2CH3、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-(-L-Asn)-(N-Me-L-Ala)-(L-Ala-)-C(O)CH2-(吡啶)以及RY是氢或-CH2CH3。
本文考虑如上描述的用于各种变量的基团的任意组合。遍及说明书中，基团和取代基由本领域技术人员选择以提供稳定的部分和化合物。
药学上可接受的盐
在一个方面，本文描述的化合物以药学上可接受的盐的形式存在。同样，具有相同类型活性的这些化合物的活性代谢物也包括在本公开的范围内。此外，本文所述的化合物可以与药学上可接受的溶剂诸如水、乙醇等以未溶剂化或溶剂化形式存在。本文提出的化合物的溶剂化形式也被认为是本文公开的。
在一些实施方案中，药学上可接受的盐通过本文所述的缀合物与酸反应而获得。在一些实施方案中，本文所述的缀合物(例如游离碱形式)是碱性的，并与有机酸或无机酸反应。无机酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸和偏磷酸。有机酸包括但不限于，1-羟基-2-萘甲酸；2,2-二氯乙酸；2-羟基乙磺酸；2-氧代戊二酸；4-乙酰氨基苯甲酸；4-氨基水杨酸；乙酸；己二酸；抗坏血酸(L)；天冬氨酸(L)；苯磺酸；苯甲酸；樟脑酸(+)；樟脑-10-磺酸(+)；癸酸(羊蜡酸)；己酸(羊油酸)；辛酸(羊脂酸)；碳酸；肉桂酸；柠檬酸；环己烷氨基磺酸；十二烷基硫酸；乙烷-1,2-二磺酸；乙磺酸；甲酸；富马酸；半乳糖酸；龙胆酸；葡庚糖酸(D)；葡萄糖酸(D)；葡萄糖醛酸(D)；谷氨酸；戊二酸；甘油磷酸；乙醇酸；马尿酸；异丁酸；乳酸(DL)；乳糖酸；月桂酸；马来酸；苹果酸(-L)；丙二酸；扁桃酸(DL)；甲磺酸；萘-1,5-二磺酸；萘-2-磺酸；烟酸；油酸；草酸；棕榈酸；双羟萘酸；磷酸；丙酸；焦谷氨酸(-L)；水杨酸；癸二酸；硬脂酸；琥珀酸；硫酸；酒石酸(+L)；硫氰酸；甲苯磺酸(p)；和十一碳烯酸。
在一些实施方案中，发明性化合物的药学上可接受的盐尤其包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘二磺酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、葡萄糖酸、苯甲酸和扑酸(embonic acid)的盐。
在一些实施方案中，本文所述的缀合物被制备为氯化物盐、硫酸盐盐、溴化物盐、甲磺酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐。
在一些实施方案中，药学上可接受的盐通过本文所述的缀合物与碱反应而获得。在一些实施方案中，本文所述的缀合物是酸性的并且与碱反应。在这种情况下，本文所述的缀合物的酸性质子被金属离子取代，例如锂、钠、钾、镁、钙或铝离子。在一些情况下，本文所述的化合物与有机碱配位，诸如，但不限于乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、葡胺、N-甲基葡糖胺、二环己基胺、三(羟甲基)甲胺。在其他情况下，本文所述的化合物与氨基酸形成盐，氨基酸诸如但不限于精氨酸、赖氨酸等。用于与包括酸性质子的化合物形成盐的可接受的无机碱包括但不限于氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化锂等。在一些实施方案中，本文提供的化合物被制备为钠盐、钙盐、钾盐、镁盐、葡胺盐、N-甲基葡糖胺盐或铵盐。在一些实施方案中，本文提供的化合物制备为钠盐，例如单钠盐、二钠盐、三钠盐或四钠盐。在一些实施方案中，盐是二钠盐或三钠盐。在一些实施方案中，盐是三氟乙酸(TFA)盐，例如单-TFA、二-TFA、三-TFA或四-TFA盐。
在一些实施方案中，发明性化合物的药学上可接受的盐还包括衍生自常规碱的盐，例如，碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙和镁盐)、锌盐和衍生自氨或具有1-20个碳原子的有机胺的铵盐，例如，乙胺、二乙胺、三乙胺、N,N-乙基二异丙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲氨基乙醇、二乙氨基乙醇、三(羟甲基)氨基甲烷、胆碱、苯扎铵(benzalkonium)、普鲁卡因、二苄基胺、二环己基胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、精氨酸、赖氨酸和1,2-乙二胺。
应当理解，提及药学上可接受的盐包括溶剂加成形式。在一些实施方案中，溶剂化物含有化学计量或非化学计量量的溶剂，并且在用药学上可接受的溶剂诸如水、乙醇等结晶的过程中形成。当溶剂是水时形成水合物，或者当溶剂是醇时形成醇化物。本文所述化合物的溶剂化物在本文所述的过程中被方便地制备或形成。此外，本文提供的化合物任选地以未溶剂化以及溶剂化形式存在。
在一些实施方案中，本发明的上下文被描述为通过与溶剂分子配位形成固态或液态络合物的发明性化合物的那些形式。水合物是溶剂化物的其中与水配位的特殊形式。在本发明的上下文中优选的溶剂化物是水合物。
本文所述的方法和制剂包括N-氧化物(如果合适)的使用，或具有本文公开的任何一个式结构的化合物的药学上可接受的盐，以及具有相同类型活性的这些化合物的活性代谢产物。
在一些实施方案中，本文公开的式的化合物的有机基团(例如烷基基团、芳环)上的位点易受各种代谢反应的影响。在有机基团上并入适当的取代基将减少、最小化或消除此代谢途径。在具体的实施方案中，降低或消除芳环对代谢反应易感性的合适的取代基是，仅作为实例，卤素、氘、烷基基团、卤代烷基基团或氘代烷基基团。
在另一实施方案中，本文所述的化合物被同位素标记(例如用放射性同位素)或通过另一其他方式标记，包括但不限于使用发色团或荧光部分、生物发光标记或化学发光标记。
本文所述的化合物包括同位素标记的化合物，其与本文提出的各种式和结构中阐述的那些相同，但事实上一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然界中通常发现的原子质量或质量数的原子所取代。可并入本化合物中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、硫、氟氯、碘、磷的同位素，诸如，例如2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、35S、18F、36Cl、123I、124I、125I、131I、32P和33P。在一个方面，本文所述的同位素标记的化合物，例如其中并入放射性同位素如3H和14C的那些在药物或基质组织分布测定中是有用的。在一个方面，用同位素如氘取代提供了某些治疗优势，这些优势源于更大的代谢稳定性，诸如，例如，增加的体内半衰期或减少的剂量要求。
在一些实施方案中，本发明还包括发明性化合物的所有合适的同位素变体。发明性化合物的同位素变体在这里被理解为指其中发明性化合物中的至少一个原子被交换为具有相同原子序数但原子质量不同于通常或主要发生在自然界中的原子质量的另一原子的化合物。可并入发明性化合物中的同位素的实例是氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴和碘的同位素，诸如2H(氘)、3H(氚)、13C、14C、15N、17O、18O、32P、33P、33S、34S、35S、36S、18F、36Cl、82Br、123I、124I、129I和131I。发明性化合物的特定同位素变体，特别是其中并入了一种或多种放射性同位素的变体，对于例如检查作用机制或活性成分在体内的分布可能是有利的；由于相对容易的制备性和可检测性，特别是用3H、14C或18F同位素标记的化合物适用于该目的。此外，同位素(例如氘)的并入可导致特定的治疗益处，这是化合物更大的代谢稳定性的结果，例如体内半衰期的延长或所需的活性剂量的减少；因此，发明性化合物的这种修饰也可能构成本发明的优选实施方案。发明性化合物的同位素变体可以通过本领域技术人员已知的常用方法制备，例如通过下面进一步描述的方法和工作实施例中描述的程序，通过使用各自试剂或起始化合物的相应同位素修饰。
在一些实施方案中，本文公开的化合物具有一个或多个立体中心并且每个立体中心独立地以R或S构型存在。在一些实施方案中，本文所述的缀合物以R构型存在。在一些实施方案中，本文所述的缀合物以S构型存在。本文提出的化合物包括所有非对映异构体、单个对映异构物、阻聚异构体和差向异构体形式以及它们的适当混合物。本文提供的化合物和方法包括所有顺式(cis)、反式(trans)、顺(syn)、反(anti)、反式(E)和顺式(Z)异构体及其适当的混合物。
如果需要，可以通过诸如立体选择性合成或通过手性色谱柱分离立体异构体，或通过非手性或手性色谱柱分离非对映异构体或在适当溶剂或溶剂混合物中结晶和重结晶的方法获得单个立体异构体。在某些实施方案中，通过使化合物的外消旋混合物与光学活性拆分剂反应以形成一对非对映异构体化合物/盐，分离非对映体并回收光学纯的单个对映体，将本文公开的化合物制备为其各自的立体异构体。在一些实施方案中，使用本文所述化合物的共价非对映体衍生物进行单独对映体的拆分。在另一实施方案中，通过基于溶解度差异的分离/拆分技术来分离非对映体。在其他实施方案中，立体异构体的分离通过色谱法或通过形成非对映体盐，和通过重结晶或色谱法的分离或其任何组合进行。JeanJacques,Andre Collet,Samuel H.Wilen,“Enantiomers,Racemates and Resolutions”,John Wiley And Sons,Inc.,1981。在一些实施方案中，立体异构体是通过立体选择性合成获得的。
前药
在一些实施方案中，本文所述的化合物被制备为前药。“前药”是指在体内转化为母体药物的试剂。前药通常是有用的，因为在一些情况下，它们比母体药物更容易施用。例如，它们通过口服施用是生物可利用的，而母体则不能。进一步或可选地，相比于母体药物，前药在药物组合物中也具有提高的溶解度。在一些实施方案中，前药的设计增加了有效的水溶性。前药的实例(但不限于)是本文所述的化合物，其以酯(“前药”)的形式施用，但随后被代谢水解以提供活性实体。前药的进一步实例是与酸基团结合的短肽(聚氨基酸)，其中肽被代谢以显示活性部分。在某些实施方案中，在体内施用后，前药被化学转化为化合物的生物、药学或治疗活性形式。在某些实施方案中，前药通过一个或多个步骤或过程被酶促代谢为化合物的生物、药学或治疗活性形式。
在一些实施方案中，本文公开的细胞毒性或细胞抑制前药(例如拓扑异构酶抑制剂前药(例如依喜替康或亚甲基二氧基喜树碱前药)是为了增加细胞毒性或细胞抑制部分的治疗窗口，并实现这类抗肿瘤化合物的肿瘤靶向。发明性前药缀合物由αvβ3整联蛋白结合部分组成，该部分经由肽连接体与喜树碱部分连接，其可被肿瘤微环境中存在的蛋白酶切割以在作用位点释放母体喜树碱化合物。肿瘤微环境中存在的酶包括但不限于中性粒细胞弹性蛋白酶。前药可以经由酶促或化学过程在体内被转化为母体药物。
在一些实施方案中，前药在酶促切割(例如，肿瘤相关酶诸如中性粒细胞弹性蛋白酶)后被激活。在一些实施方案中，前药含有被给定酶识别的肽序列。在一些实施方案中，前药被特定的酶选择性地切割。在一些实施方案中，肽部分的N-甲基化增强了对特定酶(例如，豆荚蛋白)相对于其他酶(例如，蛋白酶，诸如组织蛋白酶)的选择性。
在一些实施方案中，前药进一步包含在体内被释放的非肽前药部分(例如，酯)。非肽前药部分表明被代谢或断裂以释放活性试剂的键不是肽键(-C(O)-NH-)。在一些实施方案中，非肽前药部分是烷基酯(包括取代，诸如烷基基团上的烷基取代)。在一些实施方案中，非肽前药部分是氨基酸，诸如天冬氨酸或谷氨酸残基的酯。在一些实施方案中，烷基酯前药由Asp*或Glu*表示，表示烷基(例如，取代的烷基)基团正在掩蔽侧链的羧酸部分。在一些实施方案中，本文提供了前药化合物，其中烷基胺(-C1-6烷基-NR2)或烷基铵(-C1-6烷基-NR3 +)基团在体内从氨基酸酯(例如Asp*或Glu*)被释放(此处使用的“R”是氢或C1-6烷基)以释放酸部分。在一些实施方案中，非肽前药部分(例如酯(例如烷基胺或烷基铵酯))在血浆中被释放(即，切割)，而酶促可切割部分保持完整(例如，当切割酶不存在或不丰富时)。在一些实施方案中，前药酯在血浆中缓慢被切割，没有可检测到的酶促可切割部分或与其附接的有效负荷(例如，细胞毒性或细胞抑制配体)的释放。在一些实施方案中，非肽(即，酯)前药部分在肽前药部分之前被切割。在一些实施方案中，非肽(即，酯)前药部分独立于蛋白酶活性(例如非蛋白水解切割)而被切割。在一些实施方案中，非肽(即，酯)前药部分被缓慢切割至约50％(±5％)的程度。这里使用的“缓慢”是指前药在血浆中至少两小时后被切割至约50％的程度。在一些实施方案中，在血浆中约2、约3、约4、约5、约6、约8、约10或约12小时后，缓慢切割构成约50％的前药释放。在一些实施方案中，在血浆中约2小时至约12小时后，缓慢切割构成约50％的前药释放。在一些实施方案中，酯前药在血浆中约2小时至约6小时后被切割至约50％的程度。在一些实施方案中，酯前药在血浆中约2小时至约4小时后被切割至约50％的程度。如前所述，非肽(即，酯)前药部分独立地(例如，在不存在或存在的情况下)被蛋白水解酶诸如中性粒细胞弹性蛋白酶切割。在一些实施方案中，酯前药部分在体内施用约3或4小时后(且在约6小时内)被切割至约50％的程度。在一些实施方案中，这种前药的降解产物是无烷基酯的母体缀合物，这意味着酶促可切割部分、细胞毒性或细胞抑制部分、连接体/间隔基和整联蛋白结合剂保持完整。在一些实施方案中，酶促切割发生在酯前药部分的释放之后。在一些实施方案中，负责切割酶促可切割部分的蛋白酶识别游离的Asp或Glu残基，但不识别Asp*或Glu*前药酯。
本文所述的化合物的前药包括但不限于酯、醚、碳酸酯、硫代碳酸酯、N-酰基衍生物、N-酰氧基烷基衍生物、N-烷氧基酰基衍生物、叔胺的季衍生物、N-曼尼希碱、席夫碱、氨基酸缀合物、磷酸酯和磺酸酯。参见例如Design of Prodrugs,Bundgaard,A.Ed.,Elsevier,1985和Method in Enzymology,Widder,K.等人，Ed.；Academic,1985,vol.42,p.309-396；Bundgaard,H.“Design and Application of Prodrugs”in A Textbook ofDrug Design and Development,Krosgaard-Larsen and H.Bundgaard,Ed.,1991,Chapter5,p.113-191；和Bundgaard,H.,Advanced Drug Delivery Review,1992,8,1-38，其每一个通过引用并入本文。在一些实施方案中，本文公开的化合物中的羟基用于形成前药，其中羟基被并入到酰氧基烷基酯、烷氧基羰基氧基烷基酯、烷基酯、芳基酯、磷酸酯、糖酯、醚等中。在一些实施方案中，本文公开的化合物中的羟基是前药，其中羟基随后在体内被代谢以提供羧酸基团。在一些实施方案中，羧基用于提供酯或酰胺(例如，前药)，然后在体内代谢以提供羧酸基团。在一些实施方案中，本文所述的化合物被制备为烷基酯前药。
本文所述的化合物的前药形式，其中所述前药在体内被代谢以产生所阐述的本文所述的缀合物，包括在权利要求的范围内。在一些情况下，本文所述的一些化合物是另一衍生物或活性化合物的前药。
在一些实施方案中，羟基基团、氨基基团或羧酸基团中的任何一个以合适的方式被官能化以提供前药部分。在一些实施方案中，前药部分如上所述。
药物组合物
本发明提供了药物组合物，其包含本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；和药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，本文所述的化合物被配制成药物组合物。使用一种或多种药学上可接受的非活性成分以常规方式配制药物组合物，该非活性成分有助于将活性化合物加工成药学上使用的制剂。恰当的配方取决于所选择的施用途径。本文所述的药物组合物的概述可在例如Remington:The Science and Practice of Pharmacy,Nineteenth Ed(Easton,Pa.:Mack Publishing Company,1995)；Hoover,John E.,Remington’sPharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania 1975；Liberman,H.A.and Lachman,L.,Eds.,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；和Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,Seventh Ed.(Lippincott Williams&Wilkins1999)中找到，对于这种公开内容通过引用并入本文。
在一些实施方案中，本文所述的化合物在药物组合物中单独施用或与药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂组合施用。本文所述的化合物和组合物的施用可以通过任何能够将化合物递送到作用位点的方法来实现。这些方法包括但不限于经由肠内途径(包括口服、胃或十二指肠饲管、直肠栓剂和直肠灌肠)、肠胃外途径(注射或输注，包括动脉内、心内、皮内、十二指肠内、髓内、肌内、骨内、腹膜内、鞘内、血管内、静脉内、玻璃体内、硬膜外和皮下)、吸入、透皮、透粘膜、舌下、口腔和局部(包括经皮、真皮、灌肠、滴眼液、滴耳液、鼻内、阴道)施用的递送，尽管最合适的途径可能取决于例如接受者的病况和病症。仅作为示例，本文所述的化合物可以通过例如手术期间的局部输注、局部应用诸如乳膏或软膏、注射、导管或植入物而局部施用到需要治疗的区域。施用也可以通过在患病组织或器官的部位直接注射。
在一些实施方案中，适合口服施用的药物组合物以离散单元的形式存在，诸如各自含有预定量的活性成分的胶囊、扁胶囊或片剂；作为粉末或颗粒；作为水性液体或非水性液体中的溶液或混悬剂；或者作为水包油液体乳液或油包水液体乳液。在一些实施方案中，活性成分以丸剂、干药糖剂或糊剂的形式存在。
可口服使用的药物组合物包括由明胶制成的片剂、推入配合式胶囊(push-fitcapsule)、以及由明胶和增塑剂(诸如甘油或山梨糖醇)制成的软密封胶囊。可以任选地与一种或多种辅助成分通过压制或模制来制备片剂。可通过在适合机器中压制呈自由流动形式诸如粉剂或颗粒剂，任选与粘合剂、惰性稀释剂或润滑剂、表面活性剂或分散剂混合的活性成分制备压制片剂。可通过在适合的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物制成模制片剂。在一些实施方案中，片剂被包衣或刻痕，并且被配制以提供其中活性成分的缓释或控释。口服施用的所有制剂应具有适合此类施用的剂量。推入适配胶囊可含有与填充剂(诸如乳糖)、结合剂(诸如淀粉)或润滑剂(诸如滑石粉或硬脂酸镁)以及任选的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，在软胶囊中，活性化合物可以溶解或悬浮在合适的液体中，例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。在一些实施方案中，添加稳定剂。对糖衣丸核芯作适当包衣。为此，可以使用浓缩糖溶液，其可以任选地含有阿拉伯树胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、卡波凝胶、聚乙二醇或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。可以将染料或颜料添加到片剂或糖衣丸包衣中，用于鉴定或表征活性化合物剂量的不同组合。
在一些实施方案中，药物组合物被配制用于通过注射肠胃外施用，例如通过推注或连续输注。注射用制剂可以单位剂量形式提供，例如，在安瓿或在多剂量容器中，并添加防腐剂。所述组合物可采用诸如在油性或水性媒介物中的混悬剂、溶液或乳剂的形式，并且可以含有诸如混悬剂、稳定剂或分散剂的配制剂。组合物可以在单位剂量或多剂量容器中呈现，例如密封安瓿和小瓶中，并且可以以粉末形式贮藏或贮藏在冷冻-干燥(冻干)条件下，仅需要在临用前立即添加无菌液体载体，例如盐水或无菌无热原水。临时的注射溶液和混悬剂可从之前所述种类的无菌粉末剂、颗粒剂和片剂制备。
用于肠胃外施用的药物组合物包括活性化合物的水性和非水性(油性)无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；并且可包括混悬剂和增稠剂的水性和非水性无菌混悬剂。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括脂肪油(诸如芝麻油)，或合成脂肪酸酯(诸如油酸乙酯或甘油三酯)或脂质体。水性注射混悬剂可以含有增加混悬剂粘度的物质，诸如羧甲基纤维素钠、山梨醇或右旋糖酐。任选地，混悬剂还可以含有合适的稳定剂或增加化合物的溶解度以允许制备高浓度溶液的试剂。
药物组合物也可以被配制成贮库制剂。这种长效制剂可以通过植入(例如皮下或肌内)或肌内注射施用。因此，例如，化合物可以用合适的聚合物或疏水性材料(例如，在可接受的油中的乳液)或离子交换树脂配制，或者作为微溶性衍生物，例如，作为微溶盐配制。
对于口腔或舌下施用，组合物可以采用以传统方式配制的片剂、含片、锭剂或凝胶的形式。这种组合物可以包括调味基的活性成分，诸如蔗糖和阿拉伯树胶或黄蓍胶。
药物组合物可以局部施用，即通过非全身施用。这包括将本发明的化合物从外部应用于表皮或口腔，并将这种化合物滴入耳朵、眼睛和鼻子，使得该化合物不会显著地进入血流。相反，全身施用是指口服、静脉内、腹膜内和肌肉内施用。
适用于局部施用的药物组合物包括适用于穿过皮肤渗透到炎症部位的液体或半液体制剂，如凝胶、搽剂、乳液、乳膏、软膏或糊剂，以及适合施用至眼睛、耳朵或鼻子的滴剂。对于局部施用，活性成分可以包含制剂重量的0.001％-10％w/w，例如1％-2％。
通过吸入施用的药物组合物可方便地从吹入器、喷雾器加压包或其他递送气溶胶喷雾的方便方式递送。加压包可以包括合适的抛射剂，诸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体。在加压气溶胶的情况下，剂量单位可以通过提供阀门来递送计量量来确定。可选地，为了通过吸入或吹入施用，药物制剂可以采取干粉组合物的形式，例如该化合物和合适的粉末基质(诸如乳糖或淀粉)的粉末混合物。粉末组合物可以以单位剂量形式呈现，例如胶囊、药筒、明胶或泡罩包装，粉末可以在吸入器或吹入器的帮助下从这些包装中施用。
应当理解，除了上述特别提及的成分外，本文所述的化合物和组合物还可包括本领域中就所讨论制剂类型而言常规的其他试剂，例如适用于口服施用的那些可以包括调味剂。
用于治疗疾病或病症的化合物
在一些实施方案中，本发明提供了本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；用于治疗疾病或病症。
在一些实施方案中，本发明提供了本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；用于制造用于治疗本文描述的疾病或病症的药物。
在一些实施方案中，本发明提供了本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；用于治疗过度增殖病症。
在一些实施方案中，本发明提供了本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中用于治疗自身免疫病症。
在一些实施方案中，本发明提供了本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；用于治疗眼科疾病或病症。在一些实施方案中，眼科疾病或病症是黄斑变性。在一些实施方案中，眼科疾病或病症是葡萄膜黑色素瘤。
在一些实施方案中，本发明提供了本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中用于治疗皮肤病症。在一些实施方案中，皮肤病症是银屑病。
在一些实施方案中，本发明提供了本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；用于治疗癌症。在一些实施方案中，癌症是侵袭性癌症。在一些实施方案中，癌症是转移性癌症。在一些实施方案中，癌症是乳腺、呼吸道、脑、生殖器官、消化道、泌尿道、眼睛、肝脏、皮肤、头颈部、甲状腺、甲状旁腺的癌症或其转移。
在一些实施方案中，乳腺的癌症是侵袭性导管癌、侵袭性小叶癌、导管原位癌、小叶原位癌、炎性乳腺癌、基底乳腺癌或三阴性乳腺癌。
在一些实施方案中，呼吸道的癌症是小细胞、非小细胞肺癌、支气管腺瘤或胸膜肺母细胞瘤。
在一些实施方案中，脑的癌症是脑干胶质瘤、下丘脑胶质瘤、胶质母细胞瘤、小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤、神经外胚层肿瘤或松果体肿瘤。
在一些实施方案中，生殖器官的癌症是前列腺癌、睾丸癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌或子宫肉瘤。
在一些实施方案中，消化道的癌症是肛门癌、结肠癌、结肠直肠癌、食道癌、胆囊癌、胃癌、胰腺癌、直肠癌、小肠癌或唾液腺癌。
在一些实施方案中，泌尿道的癌症是膀胱癌、阴茎癌、肾癌、肾盂癌、输尿管癌或尿道癌。
在一些实施方案中，眼睛的癌症是眼内黑色素瘤或视网膜母细胞瘤。
在一些实施方案中，肝脏的癌症是肝细胞癌、肝细胞癌伴或不伴纤维板层变异体、胆管癌、肝内胆管癌或混合型肝细胞胆管癌。
在一些实施方案中，皮肤的癌症是鳞状细胞癌、卡波西氏肉瘤、恶性黑色素瘤、默克尔细胞皮肤癌或非黑色素瘤皮肤癌。
在一些实施方案中，头颈部的癌症是喉癌、下咽癌、鼻咽癌、口咽癌或唇和口腔癌。
在一些实施方案中，所述癌症是肉瘤。在一些实施方案中，所述肉瘤是尤文氏肉瘤、骨肉瘤或纤维肉瘤。在一些实施方案中，肉瘤是软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤或横纹肌肉瘤。
在一些实施方案中，癌症是淋巴瘤。在一些实施方案中，淋巴瘤是AIDS-相关的淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T-细胞淋巴瘤、霍奇金病或中枢神经系统淋巴瘤。
在一些实施方案中，癌症是白血病。在一些实施方案中，白血病是急性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病或毛细胞白血病。
在一些实施方案中，癌症是乳腺癌、结肠癌、肾癌或肺癌。
给药方法和治疗方案
在一些实施方案中，本发明提供了一种治疗对象的疾病或病症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，用于治疗疾病或病症的方法中的化合物是式(A)、式(B)、式(C)、式(D)、式(I)、式(I-A)、式(I-B)、式(I-C)、式(I-D)、式(II)、式(II-A)、式(II-B)、式(II-C)、式(II-D)、式(III-A)、式(III-B)、式(III-C)或式(III-D)的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的过度增殖病症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的自身免疫病症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的眼科疾病或病症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的黄斑变性的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的皮肤疾病或病症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的银屑病的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的癌症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的侵袭性癌症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的转移性癌症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的乳腺、呼吸道、脑、生殖器官、消化道、泌尿道、眼睛、肝脏、皮肤、头颈部、甲状腺、甲状旁腺的癌症或其转移的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的乳腺的癌症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的侵袭性导管癌、侵袭性小叶癌、导管原位癌、小叶原位癌、炎性乳腺癌、基底乳腺癌或三阴性乳腺癌的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的呼吸道的癌症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的小细胞肺癌、非小细胞肺癌、支气管腺瘤或胸膜肺母细胞瘤的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的脑的癌症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的脑干胶质瘤、下丘脑胶质瘤、胶质母细胞瘤、小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤、神经外胚层肿瘤或松果体肿瘤的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的生殖器官的癌症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的前列腺癌、睾丸癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌或子宫肉瘤的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的消化道的癌症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的肛门癌、结肠癌、结肠直肠癌、食道癌、胆囊癌、胃癌、胰腺癌、直肠癌、小肠癌或唾液腺癌的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的泌尿道的癌症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的膀胱癌、阴茎癌、肾癌、肾盂癌、输尿管癌或尿道癌的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的眼睛的癌症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的眼内黑色素瘤或视网膜母细胞瘤的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的肝脏的癌症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的肝细胞癌、肝细胞癌伴或不伴纤维板层变异体、胆管癌、肝内胆管癌或混合型肝细胞胆管癌的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的皮肤的癌症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的鳞状细胞癌、卡波西氏肉瘤、恶性黑色素瘤、默克尔细胞皮肤癌或非黑色素瘤皮肤癌的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的头颈部的癌症的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的喉癌、下咽癌、鼻咽癌、口咽癌或唇和口腔癌的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的肉瘤的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的尤文氏肉瘤、骨肉瘤、纤维肉瘤、软组织肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤或横纹肌肉瘤的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗对象的乳腺癌、结肠癌、肾癌或肺癌的方法，包括施用治疗有效量的本文公开的式的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；或其药物组合物至有需要的个体。
在另一方面，本文提供了治疗疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的对象施用治疗有效量的包含本文公开的式的化合物中任一个或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物的药物组合物；或其药物组合物至有需要的个体。
待施用的活性化合物的总量通常为每天约0.001mg/kg至约200mg/kg体重，优选每天约0.01mg/kg至约20mg/kg体重。临床上有用的给药方案从每天施用一到三次到每四周施用一次不等。此外，“药物假期”(即患者在一定时间段内不给药药物)可能有利于药理作用和耐受性之间的总体平衡。单位剂量可以含有约0.5mg至约1500mg的活性成分，并且可以每天施用一次或多次，或者每天施用少于一次。通过注射施用，包括静脉内、肌内、皮下和肠胃外注射，以及使用输注技术的平均每日剂量优选为0.01至200mg/kg总体重。平均每日直肠剂量方案优选为0.01至200mg/kg总体重。平均每日阴道剂量方案优选为0.01至200mg/kg总体重。平均每日局部剂量方案优选为0.1至200mg，每日施用1至4次。透皮浓度优选为维持0.01至200mg/kg的每日剂量所需的浓度。平均每日吸入剂量方案优选为0.01至100mg/kg总体重。
当然，每位患者的具体初始和持续给药方案将根据主治诊断医生确定的病况的性质和严重程度、所采用的特定化合物的活性、患者的年龄和一般情况、施用时间、施用途径、药物排泄率、药物组合等改变。本发明的化合物或其药学上可接受的盐或酯或组合物的期望治疗方式和剂量数可由本领域技术人员使用常规治疗测试来确定。
本发明进一步提供了本发明的化合物用于制备治疗上述病症的药物组合物的用途。
施用
根据本发明的化合物可能具有全身或局部活性。为此，它们可以以合适的方式被施用，诸如，例如，通过口服、肠胃外、肺、鼻、舌下、舌侧、颊侧、直肠、阴道、真皮、透皮、结膜、眼途径或作为植入物或支架施用。
对于这些施用途径，根据本发明的化合物可以以合适的施用形式被施用。
对于口服施用，可以将根据本发明的化合物配制成本领域已知的快速或以改良的方式递送本发明的化合物的剂型，诸如，例如片剂(例如，未包衣或包衣的片剂，例如具有延迟溶解或不溶的肠溶或控释包衣)、口腔崩解片、薄膜/薄片、薄膜/冻干物、胶囊(例如，硬明胶或软明胶胶囊)、糖衣片剂、颗粒、丸粒、粉末、乳液、混悬剂、气溶胶或溶液。可以将结晶或非晶化或溶解形式的本发明的化合物并入所述剂型中。
肠胃外施用可能会因避免吸收步骤(例如静脉内、动脉内、心内、椎管内或腰内)或包含吸收(例如肌内、皮下、皮内、经皮或腹膜内)而受到影响。适用于肠胃外施用的施用形式特别是溶液、混悬剂、乳液、冻干物或无菌粉末形式的注射和输注的制剂。在一些实施方案中，本文公开的化合物经由注射(例如，肠胃外注射)施用。在一些实施方案中，本文公开的化合物被配制用于注射。在一些实施方案中，本文公开的化合物与药学上可接受的赋形剂(例如，载体或媒介物，例如，水性媒介物)一起被配制用于注射。在一些实施方案中，注射是静脉内的。在一些实施方案中，静脉内注射是静脉内输注。
适用于其他施用途径的实例是用于吸入的药物形式(例如，粉末吸入器、喷雾器等)、滴鼻剂、鼻溶液、鼻喷雾剂；用于舌侧、舌下或口腔施用的片剂/薄膜/薄片/胶囊；栓剂；滴眼液、眼膏、洗眼液、眼部插入物、滴耳液、耳喷雾剂、耳粉、洗耳液、耳卫生棉条；阴道胶囊、水性混悬剂(例如，洗剂、振荡混合物(mixturae agitandae)等)、亲脂性混悬剂、乳液、软膏、乳膏、透皮治疗系统(例如，贴片等)、牛奶、糊剂、泡沫、粉末、植入物或支架。
根据本发明的化合物可以被并入陈述的施用形式中。这可以以本身已知的方式通过与药学上合适的赋形剂混合来影响。除其他外，药学上合适的赋形剂包括，
·填料和载体(例如纤维素、微晶纤维素(诸如，例如，)、乳糖、甘露醇、淀粉、磷酸钙(诸如，例如，))，
·软膏基质(例如凡士林、石蜡、甘油三酯、蜡、羊毛蜡、羊毛蜡醇、羊毛脂、亲水性软膏、聚乙二醇)，
·栓剂的基质(例如聚乙二醇、可可脂、硬脂肪)，
·溶剂(例如水、乙醇、异丙醇、甘油、丙二醇、中链长甘油三酯脂肪油、液体聚乙二醇、石蜡)，
·表面活性剂、乳化剂、分散剂或润湿剂(诸如，例如，十二烷基硫酸钠)、卵磷脂、磷脂、脂肪醇(诸如，例如，)、山梨糖醇脂肪酸酯(诸如，例如，)、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯(诸如，例如，)、聚氧乙基脂肪酸甘油酯(诸如，例如，)、聚乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、甘油脂肪酸酯、泊洛沙姆(诸如，例如，)，
·缓冲剂，酸和碱(例如磷酸盐、碳酸盐、柠檬酸、乙酸、盐酸、氢氧化钠溶液、碳酸铵、氨丁三醇、三乙醇胺)，
·等渗剂(例如葡萄糖、氯化钠)，
·吸附剂(例如高分散二氧化硅)，
·增粘剂、凝胶形成剂、增稠剂或结合剂(例如聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、淀粉、卡波姆、聚丙烯酸(诸如，例如，)；藻酸盐、明胶)，
·崩解剂(例如改性淀粉、羧甲基纤维素钠、淀粉乙醇酸钠(诸如，例如，)、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素纳(诸如，例如，))，
·流量调节器、润滑剂、助流剂和脱模剂(例如硬脂酸镁、硬脂酸、滑石粉、高分散二氧化硅(诸如，例如，))，
·快速溶解或以改性方式溶解的薄膜或扩散膜的包衣材料(例如糖、虫胶)和成膜剂(例如聚乙烯吡咯烷酮(诸如，例如，)、聚乙烯醇、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、乙基纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、乙酸纤维素、乙酸邻苯二甲纤维素、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯诸如，例如)，
·胶囊材料(例如明胶、羟丙基甲基纤维素)，
·合成聚合物(例如聚乳酸、聚乙交酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯(诸如，例如，)、聚乙烯吡咯烷酮(诸如，例如，)、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚环氧乙烷、聚乙二醇及其共聚物和嵌段共聚物)，
·增塑剂(例如聚乙二醇、丙二醇、甘油、三乙酸甘油酯、柠檬酸三乙酰酯、邻苯二甲酸二丁酯)，
·渗透促进剂，
·稳定剂(例如抗氧化剂诸如，例如，抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸钠、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯)，
·防腐剂(例如对羟基苯甲酸酯、山梨酸、硫柳汞、苯扎氯铵、醋酸氯己定、苯甲酸钠)，
·着色剂(例如无机颜料诸如，例如，氧化铁、二氧化钛)，
·调味品、甜味剂、风味或气味掩蔽剂。
本发明进一步涉及一种药物组合物，其包含至少一种根据本发明的化合物，通常与一种或多种药学上合适的赋形剂一起，以及它们的根据本发明的用途。
联合治疗
在某些情况下，与一种或多种其他治疗剂联合施用至少一种本文所述的缀合物或其药学上可接受的盐是合适的。
根据另一方面，本发明涵盖包含至少一种本发明在此公开的化合物和至少一种或多种另一活性成分的药物组合物，特别是药物，特别是用于治疗或预防过度增殖性病症。
本发明的化合物可以作为唯一的药物制剂或与一种或多种其他药物活性成分联合施用，其中该组合不会引起不可接受的不良反应。本发明还涵盖这样的药物联合。例如，本发明的化合物可以与已知的活性成分联合用于治疗和/或预防过度增殖性病症。
用于治疗和/或预防过度增殖性病症的活性成分的实例包括但不限于131I-chTNT、阿巴瑞克(abarelix)、阿贝西利(abemaciclib)、阿比特龙(abiraterone)、阿卡替尼(acalabrutinib)、阿柔比星(aclarubicin)、阿达木单抗(adalimumab)、曲妥珠单抗抗体-药物偶联物(ado-trastuzumab emtansine)、阿法替尼(afatinib)、阿柏西普(aflibercept)、阿地白介素(aldesleukin)、阿来替尼(alectinib)、阿仑单抗(alemtuzumab)、阿仑膦酸(alendronic acid)、阿利维甲酸(alitretinoin)、六甲蜜胺(altretamine)、阿米福汀(amifostine)、氨鲁米特(aminoglutethimide)、氨基乙酰丙酸己酯(hexyl amino levulinate)、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那曲唑(anastrozole)、安西司亭(ancestim)、anetholedithiolethione、anetumab ravtansine、血管紧张素II(angiotensin II)、抗凝血酶III(antithrombin III)、阿帕鲁胺(apalutamide)、阿瑞匹坦(aprepitant)、阿西莫单抗(arcitumomab)、阿加来必(arglabin)、三氧化二砷(arsenic trioxide)、天冬酰胺酶(asparaginase)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、阿基仑赛(axicabtagene ciloleucel)、阿昔替尼(axitinib)、阿扎胞苷(azacitidine)、巴利昔单抗(basiliximab)、贝洛替康(belotecan)、苯达莫司汀(bendamustine)、贝索单抗(besilesomab)、贝利司他(belinostat)、贝伐单抗(bevacizumab)、贝沙罗汀(bexarotene)、比卡鲁胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、博来霉素(bleomycin)、博纳吐单抗(blinatumomab)、硼替佐米(bortezomib)、博苏替尼(bosutinib)、布舍瑞林(buserelin)、布仑妥昔单抗-韦多汀(brentuximab vedotin)、布格替尼(brigatinib)、白消安(busulfan)、卡巴他赛(cabazitaxel)、卡博替尼(cabozantinib)、降钙素(calcitonine)、亚叶酸钙(calcium folinate)、左亚叶酸钙(calcium levofolinate)、卡培他滨(capecitabine)、卡罗单抗(capromab)、卡马西平-卡铂(carbamazepine carboplatin)、卡波醌(carboquone)、卡非佐米(carfilzomib)、卡莫福(carmofur)、卡莫司汀(carmustine)、卡妥单抗(catumaxomab)、塞来昔布(celecoxib)、西莫白介素(celmoleukin)、塞瑞替尼(ceritinib)、西妥昔单抗(cetuximab)、氯氨布西(chlorambucil)、氯地孕酮(chlormadinone)、氮芥(chlormethine)、西多福韦(cidofovir)、西那卡塞(cinacalcet)、顺铂(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、克罗德酸(clodronic acid)、氯法拉滨(clofarabine)、考比替尼(cobimetinib)、库潘尼西((copanlisib)、克瑞他酶((crisantaspase)、克里唑蒂尼(crizotinib)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、环丙孕酮(cyproterone)、阿糖胞苷(cytarabine)、达卡巴嗪(dacarbazine)、更生霉素(dactinomycin)、达雷木单抗(daratumumab)、达依泊汀α(darbepoetin alfa)、达拉菲尼(dabrafenib)、达沙替尼(dasatinib)、道诺霉素(daunorubicin)、地西他滨(decitabine)、地加瑞克(degarelix)、地尼白介素(denileukin diftitox)、狄诺塞麦(denosumab)、地普奥肽(depreotide)、地洛哌林(deslorelin)、二脱水半乳糖醇(dianhydrogalactitol)、右雷佐生(dexrazoxane)、二溴螺氯铵(dibrospidium chloride)、二脱水半乳糖醇(dianhydrogalactitol)、双氯芬酸(diclofenac)、恩杂鲁胺(dinutuximab)、多西他赛(docetaxel)、多拉司琼((dolasetron)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、阿霉素(doxorubicin)、阿霉素+雌素酮(doxorubicin+estrone)、屈大麻酚(dronabinol)、德瓦鲁单抗(durvalumab)、依库丽单抗(eculizumab)、依决洛单抗(edrecolomab)、依利醋铵(elliptinium acetate)、依洛图珠单抗(elotuzumab)、艾曲波帕(eltrombopag)、恩西地平(enasidenib)、内皮抑素(endostatin)、依诺他滨(enocitabine)、恩杂鲁胺(enzalutamide)、表柔比星(epirubicin)、环硫雄醇(epitiostanol)、依泊汀α((epoetinalfa)、依泊汀β((epoetin beta)、依泊汀ζ(epoetin zeta)、依铂(eptaplatin)、艾日布林(eribulin)、埃罗替尼(erlotinib)、埃索美拉唑(esomeprazole)、雌二醇(estradiol)、雌莫司汀(estramustine)、乙炔雌二醇(ethinylestradiol)、依托泊苷(etoposide)、依维莫司(everolimus)、依西美坦(exemestane)、法倔唑(fadrozole)、芬太尼(fentanyl)、非格司亭(filgrastim)、氟甲睾酮(fluoxymesterone)、氟尿苷(floxuridine)、氟达拉滨(fludarabine)、氟二氧嘧啶(fluorouracil)、氟他米特(flutamide)、叶酸(folinicacid)、福美司坦(formestane)、福瑞普坦(fosaprepitant)、福莫司汀(fotemustine)、氟维司群(fulvestrant)、钆布醇(gadobutrol)、钆特醇(gadoteridol)、钆特酸葡胺(gadotericacid meglumine)、钆弗塞胺(gadoversetamide)、钆塞酸(gadoxetic acid)、硝酸镓(gallium nitrate)、加尼瑞克(ganirelix)、易瑞沙(gefitinib)、吉西他滨(gemcitabine)、(gemtuzumab)、羧肽酶(Glucarpidase)、谷胱甘肽(glutoxim)、粒细胞巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)、戈舍瑞林(goserelin)、格拉司琼(granisetron)、粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor)、组胺二盐酸盐(histaminedihydrochloride)、组氨瑞林(histrelin)、羟基尿素(hydroxycarbamide)、碘-125粒子(I-125seeds)、南索拉唑(lansoprazole)、伊班膦酸(ibandronic acid)、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、依鲁替尼(ibrutinib)、去甲氧基柔红霉素(idarubicin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、伊马替尼(imatinib)、咪喹莫特(imiquimod)、胺丙磺酯(improsulfan)、吲地司琼(indisetron)、英卡膦酸(incadronic acid)、巨大戟醇甲基丁烯酸酯(ingenol mebutate)、奥英妥珠单抗(inotuzumab ozogamicin)、干扰素α(interferonalfa)、干扰素β(interferon beta)、干扰素γ(interferon gamma)、碘比醇(iobitridol)、碘苄胍(iobenguane(123I))、碘美普尔(iomeprol)、易普利姆玛(ipilimumab)、伊立替康(irinotecan)、依曲康唑(Itraconazole)、伊沙匹隆(ixabepilone)、伊沙佐米(ixazomib)、兰瑞肽(lanreotide)、南索拉唑(lansoprazole)、拉帕替尼(lapatinib)、Iasocholine、来那度胺(lenalidomide)、乐伐替尼(lenvatinib)、来格司亭(lenograstim)、香菇多糖(lentinan)、来曲唑(letrozole)、亮丙瑞林(leuprorelin)、左旋咪唑(levamisole)、左炔诺孕酮(levonorgestrel)、左甲状腺素钠(levothyroxine sodium)、麦角乙脲(lisuride)、(lobaplatin)、洛铂(lomustine)、罗氮芥(lonidamine)、lutetium Lu 177dotatate、马索罗酚(masoprocol)、甲羟孕酮(medroxyprogesterone)、甲地孕酮(megestrol)、美拉胂醇(melarsoprol)、美法仑(melphalan)、美雄烷(mepitiostane)、巯基嘌呤(mercaptopurine)、美司钠(mesna)、美沙酮(methadone)、甲氨蝶呤(methotrexate)、甲氧沙林(methoxsalen)、甲氨基酮戊酸盐(methylaminolevulinate)、甲基强的松龙(methylprednisolone)、甲基睾酮(methyltestosterone)、甲酪氨酸(metirosine)、米哚妥林(midostaurin)、米伐木肽(mifamurtide)、米替福新(miltefosine)、米铂(miriplatin)、二溴甘露醇(mitobronitol)、米托胍腙(mitoguazone)、二溴卫矛醇(mitolactol)、丝裂霉素(mitomycin)、米托坦(mitotane)、(mitoxantrone)、莫格利珠单抗(mogamulizumab)、莫拉司亭(molgramostim)、莫哌达醇(mopidamol)、盐酸吗啡(morphine hydrochloride)、硫酸吗啡(morphine sulfate)、mvasi、大麻隆(nabilone)、nabiximols、那法瑞林(nafarelin)、纳洛酮+戊唑辛(naloxone+pentazocine)、纳曲酮(naltrexone)、那托司亭(nartograstim)、奈西妥木单抗(necitumumab)、奈达铂(nedaplatin)、奈拉滨(nelarabine)、奈雷替尼(neratinib)、奈立膦酸(neridronic acid)、奈妥吡坦/帕洛诺司琼(netupitant/palonosetron)、纳武单抗(nivolumab)、喷曲肽(pentetreotide)、尼洛替尼(nilotinib)、尼鲁米特(nilutamide)、尼莫拉唑(nimorazole)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、尼莫司汀(nimustine)、尼达尼布(nintedanib)、尼雷帕利(niraparib)、二胺硝吖啶(nitracrine)、纳武单抗(nivolumab)、奥比妥珠单抗(obinutuzumab)、奥曲肽(octreotide)、奥法木单抗(ofatumumab)、奥拉帕尼(olaparib)、奥拉妥单抗(olaratumab)、高三尖杉酯碱(omacetaxine mepesuccinate)、奥美拉唑(omeprazole)、昂丹司琼(ondansetron)、奥普瑞白介素(oprelvekin)、、奥古蛋白(orgotein)、奥利莫德(orilotimod)、奥希替尼(osimertinib)、奥沙利铂(oxaliplatin)、羟考酮(oxycodone)、羟甲烯龙(oxymetholone)、ozogamicine、p53基因疗法(p53 gene therapy)、紫杉醇(paclitaxel)、帕柏西利(palbociclib)、帕利弗明(palifermin)、钯-103粒子(palladium-103seed)、帕洛诺司琼(palonosetron)、帕米膦酸(pamidronic acid)、帕尼妥木单抗(panitumumab)、帕比司他(panobinostat)、泮托拉唑(pantoprazole)、帕唑帕尼(pazopanib)、培门冬酶(pegaspargase)、PEG-依泊汀β(甲氧基PEG-依泊汀β)(PEG-epoetinbeta(methoxy PEG-epoetin beta))、派姆单抗(pembrolizumab)、聚乙二醇非格司亭(pegfilgrastim)、聚乙二醇干扰素α-2b(peginterferon alfa-2b)、派姆单抗(pembrolizumab)、培美曲塞(pemetrexed)、戊唑辛(pentazocine)、喷司他丁(pentostatin)、培洛霉素(peplomycin)、全氟正丁烷(Perflubutane)、培磷酰胺(perfosfamide)、珀妥珠单抗(Pertuzumab)、沙培林(picibanil)、匹罗卡品(pilocarpine)、吡柔比星(pirarubicin)、匹克生琼(pixantrone)、普乐沙福(plerixafor)、普卡霉素(plicamycin)、聚氨葡糖、(poliglusam)、磷酸聚雌二醇(polyestradiol phosphate)、泊洛妥珠单抗(polatuzumab)、聚乙烯吡咯烷酮+透明质酸钠(polyvinylpyrrolidone+sodium hyaluronate)、多糖-K(polysaccharide-K)、泊马度胺(pomalidomide)、帕纳替尼(ponatinib)、卟吩姆钠(porfimer sodium)、普拉曲沙(pralatrexate)、泼尼莫司汀(prednimustine)、强的松(prednisone)、丙卡巴肼(procarbazine)、丙考达唑(procodazole)、普萘洛尔(propranolol)、喹高利特(quinagolide)、雷贝拉唑(rabeprazole)、雷考妥莫单抗(racotumomab)、氯化镭-223(radium-223chloride)、雷多替尼(radotinib)、雷洛昔芬(raloxifene)、雷替曲塞(raltitrexed)、雷莫司琼(ramosetron)、雷莫卢单抗(ramucirumab)、雷莫司汀(ranimustine)、拉布立酶(rasburicase)、丙亚胺(razoxane)、瑞美替尼(refametinib)、瑞格拉非尼(regorafenib)、利波西利(ribociclib)、利塞膦酸(risedronic acid)、依替膦酸铼-186(rhenium-186etidronate)、利妥昔单抗(rituximab)、罗拉吡坦(rolapitant)、洛米迪星(romidepsin)、洛米司亭(romiplostim)、罗莫肽(romurtide)、卢卡帕利(rucaparib)、来昔决南钐(153Sm)(samarium(153Sm)lexidronam)、沙格司亭(sargramostim)、萨玛利珠单抗(sarilumab)、萨妥莫单抗(satumomab)、分泌素(secretin)、司妥昔单抗(siltuximab)、西普鲁塞-T(sipuleucel-T)、西佐喃(sizofiran)、索布佐生(sobuzoxane)、甘氨双唑钠(sodium glycididazole)、索尼地吉(sonidegib)、索拉非尼(sorafenib)、康力龙(stanozolol)、链脲佐菌素(streptozocin)、舒尼替尼(sunitinib)、他拉泊芬(talaporfin)、拉他莫基(talimogene laherparepvec)、他米巴罗汀(tamibarotene)、三苯氧胺(tamoxifen)、他喷他多(tapentadol)、他索纳明(tasonermin)、替西白介素(teceleukin)、诺非妥莫单抗锝(99mTc)(technetium (99mTc)nofetumomab merpentan)、99mTc-HYNIC-[Tyr3]-奥曲肽(99mTc-HYNIC-[Tyr3]-octreotide)、替加氟(tegafur)、替加氟+吉美拉西+奥替拉西(tegafur+gimeracil+oteracil)、替莫泊芬(temoporfin)、替莫唑胺(temozolomide)、替西罗莫司(temsirolimus)、替尼泊苷(teniposide)、睾酮、(testosterone)、替曲膦(tetrofosmin)、沙利度胺(thalidomide)、噻替派(thiotepa)、胸腺法新(thymalfasin)、促甲状腺素α(thyrotropin alfa)、硫鸟嘌呤(tioguanine)、tisagenlecleucel、托珠单抗、(tocilizumab)、拓扑替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、托西莫单抗(tositumomab)、曲贝替定(trabectedin)、曲美替尼(trametinib)、曲马多(tramadol)、曲妥珠单抗(trastuzumab)、曲妥珠单抗-美坦新偶联物(trastuzumab emtansine)、曲奥舒凡(treosulfan)、维甲酸(tretinoin)、三氟尿苷+替吡拉西(trifluridine+tipiracil)、曲洛司坦(trilostane)、曲普瑞林、(triptorelin)、曲美替尼(trametinib)、曲磷胺(trofosfamide)、促血小板生成素(thrombopoietin)、色氨酸(tryptophan)、乌苯美司(ubenimex)、瓦他拉尼(valatinib)、戊柔比星(valrubicin)、万迪他尼(vandetanib)、伐普肽(vapreotide)、维拉非尼(vemurafenib)、维奈托克(venetoclax)、长春碱(vinblastine)、长春新碱、(vincristine)、长春地辛(vindesine)、长春氟宁(vinflunine)、长春瑞滨(vinorelbine)、维莫德吉(vismodegib)、伏立诺他(vorinostat)、伏氯唑(vorozole)、钇-90玻璃微球(yttrium-90glass microspheres)、泽布替尼(zanubrutinib)、净司他丁(zinostatin)、净司他丁斯酯(zinostatinstimalamer)、唑来膦酸(zoledronic acid)和佐柔比星(zorubicin)。
在一个实施方案中，本文所述的化合物中的一种的治疗效果通过施用佐剂而增强(例如，佐剂本身具有最小的治疗益处，但与另一种治疗剂组合，对患者的总体治疗益处增强)。在一些实施方案中，通过将本文所述的化合物之一与同样具有治疗益处的另一种试剂(其也包括治疗方案)一起施用，增加了患者所体验的益处。
在一个具体实施方案中，本文所述的缀合物或其药学上可接受的盐与第二治疗剂共同施用，其中本文所述的缀合物或其药学可接受的盐和第二治疗剂调节所治疗的疾病、病症或病况的不同方面，从而提供比单独施用任一治疗剂更大的总体益处。
在任何情况下，无论正在治疗的疾病、病症或病况如何，患者所体验的总体益处只是两种治疗剂的相加，或者患者体验到协同益处。
对于本文所述的联合疗法，共同施用的化合物的剂量根据采用的联合药物的类型、采用的具体药物、所治疗的疾病或病况等而变化。在另外的实施方案中，当与一种或多种其他治疗剂共同施用时，本文提供的化合物与一种或者多种其他治疗剂同时施用或者顺序施用。
在联合疗法中，多种治疗剂(其中一种是本文所述的化合物之一)以任何顺序或甚至同时施用。如果同时施用，则仅作为示例，以单一、统一的形式或多种形式(例如，作为单个药丸或作为两个单独的药丸)提供多种治疗剂。
本文所述的缀合物或其药学上可接受的盐，以及联合疗法，在疾病或病况发生之前、期间或之后施用，并且施用含有化合物的组合物的时间不同。因此，在一个实施方案中，本文所述的化合物用作预防剂，并连续施用至有发展病况或疾病倾向的对象，以防止疾病或病况的发生。在另一个实施方案中，化合物和组合物在症状出现期间或之后尽快被施用至对象。在具体的实施方案中，在检测到或怀疑疾病或病况发作后，在可行的情况下尽快施用本文所述的化合物，并持续治疗该疾病所需的时间长度。在一些实施方案中，治疗所需的长度不同，并且治疗长度被调整以适应每个对象的特定需求。
尽管本文已经显示和描述了本发明的优选实施方案，但是对本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施例仅作为示例提供。本发明并不旨在受到说明书中提供的具体实施方案的限制。虽然已经参考上述说明书描述了本发明，但本文中的实施方案的描述和图解并不意味着以限制的意义来解释。在不脱离本发明的情况下，本领域技术人员现在将想到许多变化、改变和替换。此外，应当理解，本发明的所有方面不限于本文所述的具体描述、配置或相对比例，其取决于各种条件和变量。应当理解，在实践本发明时可以采用本文所述的本发明的实施方案的各种替代方案。因此，本发明还应涵盖任何这种替代方案、修改、变化或等同物。以下权利要求限定了本发明的范围，并且由此涵盖在这些权利要求及其等价物的范围内的方法和结构。
定义
除非另有定义，否则本文中使用的所有技术术语具有与本公开所属领域的本领域普通技术人员通常理解的含义相同的含义。
除非另有说明，本申请中使用的下列术语具有以下定义。
此处使用的章节标题仅用于组织目的，不应解释为限制主题。
如本说明书和所附权利要求中所用，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数引用，除非上下文另有明确规定。除非另有说明，否则本文中对“或”的任何提及均旨在包含“和/或”。
如本文所用，术语“包含(comprising)”(以及包含的任何形式或变体，诸如“包含(comprise)”和“包含(comprises)”)、“具有(having)”(以及具有的任何形式和变体，诸如“具有(have)”和“具有(has)”)、“包括(including)”(以及包括的任何形式或变体)，诸如“包括(includes)”和“包括(include)”)或“含有(containing)”(以及含有的任何形式或者变体，如，“含有(contains)”和“含有(contain)”)是包含的或开放的，不排除附加的、未引用的添加剂、组分、整数、要素或方法步骤。
如本文所用，术语“约”一个数字是指该数字加上或减去该数字的10％。在范围上下文中使用术语“约”是指该范围减去其最低值的10％，再加上其最大值的10％。
当术语“至少”、“大于”或“大于或等于”在一系列两个或多个数值中的第一个数值之前时，术语“至少”、“大于”或“小于或等于”适用于该系列数值中的每个数值。例如，大于或等于1、2或3相当于大于或等于1、大于或等于2或大于或等于3。
当术语“不超过”、“小于”或“小于或等于”在一系列两个或多个数值中的第一个数值之前时，术语“不超过”、“小于”或“小于或等于”适用于该系列数值中的每个数值。例如，小于或等于3、2或1相当于小于或等于3、小于或等于2或小于或等于1。
术语“包括(including)”以及其他形式(如“包括(include)”、“包括(includes)”和“包括(included)”)的使用不受限制。
短语“一种或多种药学上可接受的赋形剂”在本文中用于指一种药学上可接受的赋形剂或多于一种药学上可接受的赋形剂可以以任意组合使用。要使用的药学上可接受的赋形剂的数量可以由本领域技术人员自行决定，并且它们可以是不同类型的。
本文中使用的术语“基本上”是指大多数，或大部分，如至少约50％、60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％、99.99％或至少约99.999％或更多。
本文中的术语“特定pH”是指通过添加药学上可接受的赋形剂获得的包含CocE的溶剂或溶液的期望的pH值。
术语“％wt”用于描述组分的混合物中一种组分的重量百分比。
本文中的术语“痕量”指的是多于但是接近0％。
本文中的术语“约”是指±10％、±20％、±30％、±40％或±50％，或最接近的有效数字。
“氨基酸”是指天然氨基酸或非天然氨基酸。天然氨基酸是天然存在的氨基酸，包括但不限于精氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、苏氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、甘氨酸、脯氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。由于许多不同的原因，非天然氨基酸可以被并入肽中，例如，以提高肽的活性或选择性和血浆稳定性，或诱导或稳定二级结构(例如，螺旋、片或转角)。非天然氨基酸包括但不限于N-烷基(例如，N-甲基)氨基酸、立体异构体(D-氨基酸)、同型氨基酸、α-甲基氨基酸、β1氨基酸、β2氨基酸、β3氨基酸、肽、氨基环己烷羧酸盐(ACHC)和非蛋白质氨基酸，诸如，瓜氨酸、鸟氨酸、同型丙氨酸、正缬氨酸、正亮氨酸等。在一些实施方案中，非天然氨基酸包括N-甲基丙氨酸和瓜氨酸。
如本文所用，C1-Cx包括C1-C2、C1-C3……C1-Cx。仅作为示例，被定名为“C1-C6”的基团表示在该部分中有一到六个碳原子，例如，含有1个碳原子、2个碳原子和3个碳原子或4个碳原子的基团。因此，仅作为示例，“C1-C4烷基”表示烷基中有一到四个碳原子，例如，烷基选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。
“烷基”是指脂肪族烃基。烷基是支链或直链的。在一些实施方案中，“烷基”基团具有1至10个碳原子，例如C1-C10烷基。每当它出现在本文中时，诸如“1到10”的数值范围指的是给定范围内的每个整数；例如，“1-10个碳原子”是指烷基由1个碳原子、2个碳原子和3个碳原子等组成，最多并且包括10个碳原子，尽管本定义也涵盖术语其中没有指定数值范围的“烷基”的出现。在一些实施方案中，烷基是C1-C6烷基。在一个方面，烷基是甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基。典型的烷基基团包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基或己基。
“亚烷基”基团是指二价烷基自由基。任何上述单价烷基基团都可以通过从烷基中提取第二个氢原子而成为亚烷基。在一些实施方案中，亚烷基是C1-C6亚烷基。在其它实施方案中，亚烷基是C1-C4亚烷基。典型的亚烷基包括但不限-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-等。在一些实施方案中，亚烷基是-CH2-。
“烷氧基”基团是指(烷基)O-基团，其中烷基如本文所定义。
术语“烷基胺”基团是指-N(烷基)xHy基团，其中x是0且y是2，或其中x是1且y是1，或其中x是2且y是0。
“羟烷基”是指其中一个氢原子被羟基取代的烷基。在一些实施方案中，羟烷基是C1-C4羟烷基。典型的羟烷基包括但不限于-CH2OH、-CH2CH2OH、-CH2CH2CH2OH、-CH2CH2CH2CH2OH等。
“氨基烷基”是指其中一个氢原子被氨基取代的烷基。在一些实施方案中，氨基烷基是C1-C4氨基烷基。典型的氨基烷基基团包括但不限于-CH2NH2、-CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2NH2、-CH2CH2CH2CH2NH2等。
术语“烯基”是指其中存在至少一个碳-碳双键的一种烷基。在一个实施方案中，烯基具有式–C(R)＝CR2，其中R指烯基的剩余部分，其可以相同或不同。在一些实施方案中，R是H或烷基。在一些实施方案中，烯基选自乙烯基(ethenyl)(或乙烯基(vinyl))、丙烯基(或烯丙基)、丁烯基、戊烯基、戊二烯基等。烯基的非限制性实例包括-CH＝CH2、-C(CH3)＝CH2、-CH＝CHCH3、-C(CH3)＝CHCH3和–CH2CH＝CH2。
术语“炔基”是指其中存在至少一个碳-碳三键的一种烷基。在一个实施方案中，烯基具有式-C≡C-R，其中R指炔基的剩余部分。在一些实施方案中，R是H或烷基。在一些实施方案中，炔基选自乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。炔基的非限制性实例包括-C≡CH、-C≡CCH3-C≡CCH2CH3、-CH2C≡CH。
术语“杂烷基”通常是指具有1至30个碳原子的直链和/或支链烃链，并且可以被以下组中的一个或多个基团中断一次或多于一次：-O-、-S-、-C(＝O)-、-S(＝O)-、-S(＝O)2-、-NRy-、-NRyC(＝O)-、-C(＝O)-NRy-、-NRyNRy-、-S(＝O)2-NRyNRy-、-C(＝O)-NRyNRy-、-CRx＝N-O-，并且其中包括侧链(如果存在的话)的烃链可以被–NH-C(＝O)-NH2、-C(＝O)-OH、-OH、-NH2、-NH-C(＝NNH2)-、磺酰胺、砜、亚砜、磺酸、磺酰胺或其组合取代。在本文中，Ry在每种情况下为-H、苯基、C1-C10-烷基、C2-C10-烯基或C2-C10-炔基，其在每种情形下又可被–NHC(O)NH2、-COOH、-OH、-NH2、-NH-C(＝NNH2)-、磺酰胺、砜、亚砜、磺酸、磺酰胺或其组合取代。在本文中，Rx是-H、C1-C3-烷基或苯基。本文使用的术语“杂烷基-芳基”和“杂烷基-杂芳基”通常是指分别被芳族碳环或芳族杂环取代的杂烷基基团(如上所定义)；并且其中每个任选地被取代。
术语“芳族”是指具有含有4n+2π个电子的离域π-电子系统的平面环，其中n是整数。术语“芳族”包括碳环芳基(“芳基”，例如苯基)和杂环芳基(或“杂芳基”或“杂芳族”)基团(例如，吡啶)。该术语包括单环或稠环多环(或共享相邻碳原子对的环)基团。
术语“碳环的”或“碳环”是指形成环骨架的原子都是碳原子的环或环系统。因此，该术语将碳环与其中环骨架包含至少一个不同于碳的原子的“杂环的”或“杂环”区分开来。在一些实施方案中，双环碳环的两个环中的至少一个是芳族的。在一些实施方案中，双环碳环的两个环均是芳族的。碳环包括芳基和环烷基。
如本文所用，术语“芳基”是指其中形成环的每个原子都是碳原子的芳环。在一个方面，芳基是苯基或萘基。在一些实施方案中，芳基是苯基。在一些实施方案中，芳基是苯基、萘基、茚满基(indanyl)、茚基(indenyl)或四氢萘基。在一些实施方案中，芳基是C6-C10芳基。根据结构，芳基是单自由基或双自由基(或亚芳基基团)。
如本文所用，术语“芳烷基”通常指与C1-4-烷基键合的单环芳族碳环(例如苯基)。说明性的芳烷基基团包括苄基和乙基苯基。
术语“环烷基”指单环或多环脂族、非芳族自由基，其中形成环的每个原子(或骨架原子)都是碳原子。在一些实施方案中，环烷基是螺环或桥联化合物。在一些实施方案中，环烷基任选地与芳族环稠合，并且附接点在不是芳族环碳原子的碳处。环烷基包括具有3至10个环原子的基团。在一些实施方案中，环烷基选自环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环辛基、螺[2.2]戊基、降冰片基(norbornyl)和双环[1.1.1]戊基。在一些实施方案中，环烷基是C3-C6环烷基。在一些实施方案中，环烷基是C3-C4环烷基。
术语“卤”或，可选地，“卤素”或“卤化物”是指氟、氯、溴或碘。在一些实施例中，卤是氟、氯或溴。
术语“氟烷基”是指其中一个或多个氢原子被氟原子取代的烷基。在一个方面，氟烷基是C1-C6氟烷基。
术语“杂环”或“杂环的”是指杂芳环(也称为杂芳基)和在环中含有一至四个杂原子的杂环烷基环，其中环一个或多个)中的每个杂原子选自O、S和N，其中每个杂环基团在其环系统中具有3至10个原子，条件是任何环都不包含两个相邻的O或S原子。非芳族杂环基团(也称为杂环烷基)包括在其环系统中具有3至10个原子的环，并且芳族杂环基团包括在其环系统中具有5至10个碳原子的环。杂环基团包括苯并稠环系统。非芳族杂环基团的实例为吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、噁唑烷基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢硫代吡喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、噻吨基(thioxanyl)、哌嗪基、氮丙啶基、氮杂环丁烷基(azetidinyl)、氧杂环丁烷基(oxetanyl)、硫杂环丁烷基(thietanyl)、高哌啶基、氧杂环庚烷基(oxepanyl)、硫杂环庚烷基(thiepanyl)、氧氮杂基(oxazepinyl)、二氮杂基(diazepinyl)、硫氮杂基(thiazepinyl)、1,2,3,6-四氢吡啶基、吡咯-2-基、吡咯-3-基、吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃基，二噁烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、吡唑啉基、二噻烷基(dithianyl)、二硫杂环戊烷基(dithiolanyl)、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡嗪基、咪唑基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、3-氮杂双环[4.1.0]庚基、3H-吲哚基、吲哚-2-酮基、异吲哚-1-酮基、异吲哚-1,3-二酮基、3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮基、3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮基、异吲哚啉-1,3-二亚硫酰基、苯并[d]噁唑-2(3H)-酮基、1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮基、苯并[d]-噻唑-2(3H)-酮基和喹啉基。芳族杂环基团的实例为吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯甲硫基苯基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘吡啶基和呋吡啶基。在可能的情况下，上述基团是C-附接的(或C-连接的)或N-附接的。例如，衍生自吡咯的基团包括吡咯-1-基(N-附接的)或吡咯-3-基(C-附接的)。此外，衍生自咪唑的基团包括咪唑-1-基或咪唑-3-基(均是N-附接的)或咪唑-2-基、咪唑-4-基或咪唑-5-基(都是C-附接的)。杂环基团包括苯并稠环体系。非芳族杂环任选被一个或两个氧代(＝O)部分取代，诸如吡咯烷-2-酮。在一些实施方案中，双环杂环的两个环中的至少一个是芳族的。在一些实施方案中，双环杂环的两个环都是芳族的。
术语“杂芳基”或，可选地，“杂芳族”是指包括一个或多个选自氮、氧和硫的环杂原子的芳基基团。杂芳基基团的说明性实例包括单环杂芳基和双环杂芳基。单环杂芳基包括吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、异噻唑基、吡咯基、哒嗪基、三嗪基、噁二唑基、噻二唑基和呋咱基。单环杂芳基包括吲嗪、吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、吲唑、苯并咪唑、嘌呤、喹嗪、喹啉、异喹啉、噌啉、酞嗪、喹唑啉、喹喔啉、1,8-二萘吡啶和蝶呤。在一些实施方案中，杂芳基在环中含有0-4个N原子。在一些实施方案中，杂芳基在环中含有1-4个N原子。在一些实施方案中，杂芳基在环中含有0-4个N原子、0-1个O原子和0-1个S原子。在一些实施方案中，杂芳基在环中含有1-4个N原子、0-1个O原子和0-1个S原子。在一些实施方案中，杂芳基是C1-C9杂芳基。在一些实施方案中，单环杂芳基是C1-C5杂芳基。在一些实施方案中，单环杂芳基是5元或6元杂芳基。在一些实施方案中，双环杂芳基是C6-C9杂芳基。如本文所用，术语“杂芳烷基”通常指被杂芳基基团取代的低级烷基基团(例如C1-6烷基)。说明性实例包括-CH2-吡啶、-CH2CH2-三唑等。
“杂环烷基”基团是指包括至少一个选自氮、氧和硫的杂原子的环烷基。在一些实施方案中，杂环烷基与芳基或杂芳基稠合。在一些实施方案中，杂环烷基为噁唑烷酮基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、四氢硫基吡喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、哌嗪基、哌啶-2-酮基、吡咯烷-2,5-二亚硫酰基、吡咯啉-2,5-二酮基、吡咯烷酮基、咪唑烷基、咪唑烷-2-酮基或噻唑烷-2-酮基。在一个方面，杂环烷基是C2-C10杂环烷基。在另一方面，杂环烷基是C4-C10杂环烷基。在一些实施方案中，杂环烷基是单环的或双环的。在一些实施方案中，杂环烷基是单环的和是3、4、5、6、7或8元环。在一些实施方案中，杂环烷基是单环的和是3、4、5或6元环。在一些实施方案中，杂环烷基是单环的和并且是3或4元环。在一些实施方案中，杂环烷基在环中含有0-2个N原子。在一些实施方案中，杂环烷基在环中含有0-2个N原子、0-2个O原子和0-1个S原子。
术语“键”或“单键”是指两个原子之间的化学键，或当通过键连接的原子被认为是较大亚结构的一部分时的两个部分。在一个方面，当本文所述的基团是键时，所引用的基团不存在，从而允许在其余识别的基团之间形成键。
术语“部分”是指分子的特定片段或官能团。化学部分通常是嵌入或附加在分子中的公认的化学实体。
术语“任选取代的”或“取代的”是指所引用基团任选地被一个或多个另外的基团取代，所述另外的基团单独且独立地选自卤素、-CN、-NH2、-NH(烷基)、-N(烷基)2、-OH、-CO2H、-CO2烷基、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(烷基)、-C(＝O)N(烷基)2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NH(烷基)、-S(＝O)2N(烷基)2、烷基、环烷基、氟烷基、杂烷基、烷氧基、氟烷氧基、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷基亚砜、芳基亚砜、烷基砜和芳基砜。在一些其他实施方案中，任选的取代基独立地选自卤素、-CN、-NH2、-NH(CH3)、-N(CH3)2、-OH、-CO2H、-CO2(C1-C4烷基)、-C(＝O)NH2、-C(＝O)NH(C1-C4烷基)、-C(＝O)N(C1-C4烷基)2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2NH(C1-C4烷基)、-S(＝O)2N(C1-C4烷基)2、C1-C4烷基、C3-C6环烷基、C1-C4氟烷基、C1-C4杂烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4氟烷氧基、-SC1-C4烷基、-S(＝O)C1-C4烷基和-S(＝O)2C1-C4烷基。在一些实施方案中，任选的取代基独立地选自卤素、-CN、-NH2、-OH、-NH(CH3)、-N(CH3)2、-CH3、-CH2CH3、-CHF2、-CF3、-OCH3、-OCHF2和-OCF3。在一些实施方案中，取代的基团被一个或两个前述基团取代。在一些实施方案中，脂族碳原子(无环或环状)上的任选的取代基包括氧代(＝O)。
在一些实施方案中，每个取代的烷基、取代的氟烷基、取代的杂烷基、取代的碳环和取代的杂环被一个或多个Rs基团取代，所述Rs基团独立地选自卤素、C1-C6烷基、单环碳环、单环杂环、-CN、-OR21、-CO2R21、-C(＝O)N(R21)2、-N(R21)2、-NR21C(＝O)R22、-SR21、-S(＝O)C1-C6烷基、-SO2R22或-SO2N(R21)2；每个R21独立地选自氢、C1-C6烷基、C1-C6-氟烷基、C1-C6杂烷基、C3-C6环烷基、C2-C6杂环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳基；或者两个R21基团与它们所附接的N原子一起形成含N杂环；每个R22独立地选自C1-C6烷基、C1-C6氟烷基、C1-C6杂烷基、C3-C6环烷基、C2-C6杂环烷基、苯基、苄基、5元杂芳基和6元杂芳基。
如本文所用，“药学上可接受的”是指一种材料，诸如载体或稀释剂，其不会消除化合物的生物活性或性质，并且在使用的浓度或量下相对无毒，例如，将该材料施用至个体，而不会引起不期望的生物效应或以有害的方式与含有其的组合物的任何组分相互作用。
术语“药学上可接受的盐”是指治疗活性剂的一种形式，其由阳离子形式的治疗活性剂与合适的阴离子组合组成，或在可选实施方案中，由阴离子形式的治疗活性剂与合适的阳离子组合组成。Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selection andUse.International Union of Pure and Applied Chemistry,Wiley-VCH2002.S.M.Berge,L.D.Bighley,D.C.Monkhouse,J.Pharm.Sci.1977,66,1-19.P.H.Stahland C.G.Wermuth,编辑,Handbook of Pharmaceutical Salts:Properties,Selectionand Use,Weinheim/Zürich:Wiley-VCH/VHCA,2002。药物盐通常比非离子物质在胃液和肠液中更易溶解和更快速溶解，因此在固体剂型中是有用的。此外，由于它们的溶解度通常是pH的函数，因此选择性溶解在消化道的一个或另一个部分是可能的，并且此能力可以作为延迟和持续释放行为的一个方面来操纵。而且，因为形成盐的分子可以与中性形式平衡，所以可以调节通过生物膜的通道。
如本文所用，术语“可接受的”，就制剂、组合物或成分而言，是指对正在被治疗的对象的一般健康没有持续的有害影响。
如本文所用，术语“调节”是指直接或间接地与靶标相互作用，从而改变靶标的活性，包括仅作为示例，增强靶标的活性、抑制靶标的活性或限制靶标的活性或者扩展靶标的活性。
如本文所用，术语“调节剂”是指直接或间接与靶标相互作用的分子。相互作用包括但不限于激动剂、部分激动剂、反向激动剂、拮抗剂、降解剂或其组合的相互作用。在一些实施方案中，调节剂是拮抗剂。在一些实施方案中，调节剂是抑制剂。
如本文所用，术语“施用(administer)”、“施用(administering)”、“施用(administration)”等是指可用于将化合物或组合物递送到所需的生物作用位点的方法。这些方法包括但不限于口服途径、十二指肠内途径、肠胃外注射(包括静脉内、皮下、腹膜内、肌内、血管内或输注)、局部和直肠施用。本领域技术人员熟悉可用于本文所述化合物和方法的施用技术。在一些实施方案中，本文所述的化合物和组合物被口服施用。
如本文所用，术语“联合施用”等是指包括向单个患者施用所选治疗剂，并旨在包括通过相同或不同的施用途径或在相同或不同时间施用试剂的治疗方案。
如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指施用足够量的试剂或化合物，其将在一定程度上缓解正在被治疗的疾病或病况的一种或多种症状。结果包括减少或减轻疾病的体征、症状或原因，或生物系统的任何其他期望的改变。例如，用于治疗用途的“有效量”是提供疾病症状的临床显著降低所需的包含本文公开的化合物的组合物的量。在任何个案中，适当的“有效”量可选择性地使用技术(诸如剂量递增研究)被确定。
如本文所用，术语“增强(enhance)”或“增强(enhancing)”是指在效力或持续时间上增加或延长期望的效果。因此，关于增强治疗剂的效果，术语“增强”是指在效力或持续时间上增加或延长其他治疗剂对系统的效果的能力。如本文所用，“增强有效量”是指足以增强所需系统中另一种治疗剂的效果的量。
如本文所用，术语“药物组合”是指由多于一种的活性成分混合或组合而成的产物，包括活性成分的固定和非固定组合。术语“固定组合”是指活性成分，例如本文所述的缀合物或其药学上可接受的盐，和助剂，均以单一实体或剂量的形式同时施用于患者。术语“非固定组合”是指将活性成分，例如本文所述的缀合物或其药学上可接受的盐，和助剂，作为单独的实体同时、同时发生地或顺序地施用至患者，没有特定的干预时间限制，其中这种施用在患者体内提供了这两种化合物的有效水平。后者也适用于鸡尾酒疗法，例如施用三种或更多种活性成分。
术语“制造的制品”和“试剂盒”用作同义词。
术语“对象”或“患者”包括哺乳动物。哺乳动物的实例包括但不限于哺乳动物类的任何成员：人类、黑猩猩以及其他猿类和猴类等的非人类灵长类动物；农场动物，诸如牛、马、绵羊、山羊、猪；家畜，诸如兔子、狗和猫；实验室动物，包括啮齿类动物，诸如大鼠、小鼠和豚鼠等。在一个方面，哺乳动物是人类。
如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”包括减轻、缓和或改善疾病或病况的至少一种症状，预防其他症状，抑制疾病或病症，例如，阻止疾病或病况的发展或进展，缓解疾病或病况，引起疾病或病况的消退，缓解由疾病或病况引起的继发性病况，或预防性或治疗性地停止疾病或病况的症状。
如本文所用，术语“肿瘤微环境”或“TME”包括肿瘤周围的环境，包括周围的血管、免疫细胞、成纤维细胞、信号分子和细胞外基质。肿瘤微环境包括肿瘤细胞、坏死细胞和肿瘤周围可能(例如，通过信号传导因子、生长因子、生长因素受体、激素、细胞因子等)受肿瘤影响的细胞。肿瘤微环境包括直接围绕肿瘤的区域(例如，在肿瘤的约1cm内)。在一些情况下，肿瘤微环境包括其中pH低于不在肿瘤附近或不受肿瘤影响的类似组织的细胞、组织、血管和其他生物材料。肿瘤微环境可以通过具有低(即酸性)pH来定义。
如本文所用，术语“组合”如本领域技术人员已知地被使用，所述组合可以是固定组合、非固定组合或成套零件。
本发明中的“固定组合”如本领域技术人员已知地被使用，并被定义为其中，例如，第一种活性成分，诸如本文公开的一种或多种化合物，和另一活性成分一起以一个单位剂量或一个单一实体存在的组合。“固定组合”的一个实例是药物组合物，其中第一种活性成分和另一活性成分以混合物的形式存在，用于同时施用，诸如在制剂中。“固定组合”的另一个实例是药物组合，其中第一种活性成分和另一活性成分存在于一个单元中而不混合。
如本领域技术人员所知，本发明中的非固定组合或成套零件被定义为其中第一活性成分和另一活性成分以多于一个单元存在的组合。非固定组合或成套零件的一个实例是其中第一活性成分和另一活性成分单独存在的组合。非固定组合或成套零件的组分可以单独、顺序、同时、同时发生地或按时间交错被施用。
实施例
如上所使用，并且遍及本发明的说明书，除非另有说明，以下缩写应理解为具有以下含义：
缩写
786-0 人肿瘤细胞系
A431NS 人肿瘤细胞系
A549 人肿瘤细胞系
ABCBl ATP-结合盒亚家族B成员I(P-gp和MDRl的同义词)
abs. 无水的
Abu α-氨基丁酸
Ac 乙酰基
ACN 乙腈
ADC 抗体药物缀合物
A2DC 抗体2药物缀合物
aq. 水性，水性溶液
ATP 三磷酸腺苷
BCRP 乳腺癌耐受蛋白，一种外排转运蛋白
BEP 2-溴-1-乙基四氟硼酸吡啶鎓
Boc 叔丁氧基羰基
br. 宽(在NMR中)
Ex. 实施例
BxPC3 人肿瘤细胞系
ca. 约
C-DAR 半胱氨酸药物与抗体的比率(附接到半胱氨酸残基的连接体)
Cl 化学电离(在MS中)
D 双峰(在NMR中)
D 天
TLC 薄层色谱法
DCI 直接化学电离(在MS中)
DCM 二氯甲烷
Dd 双二重峰(在NMR中)
DIEA N,N-二异丙基乙胺(Hünig’s碱)
DMAP 4-N,N-二甲基氨基吡啶
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMEM Dulbecco改良的伊格尔培养基(用于细胞培养的标准化营养培养基)
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
DAR 药物与抗体比率
DPBS Dulbecco磷酸盐缓冲盐溶液
Dt 双三重峰(在NMR中)
DTT DL-二硫苏糖醇
d.Th. 理论的(以化学产率计)
EDC N'-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺盐酸盐
EGFR 表皮生长因子受体
ee： 对映体过量
EI 电子碰撞电离(在MS中)
ELISA 酶联免疫吸附测定
eq. 当量
ESI 电喷雾电离(在MS中)
FCS 胎牛血清
Fmoc (9H-芴-9-基甲氧基)羰基
sat. 饱和的
GTP 鸟苷-5'-三磷酸
h 小时
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HCT-116 人肿瘤细胞系
HEPES 4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙烷-磺酸
HOAc 乙酸
HOAt 1-羟基-7-氮杂苯并三唑
HOBt 1-羟基-1H-苯并三唑水合物
HOSu N-羟基琥珀酰亚胺
HPLC 高压、高效液相色谱
HT29 人肿瘤细胞系
IC50 半数最大抑制浓度
i.m. 肌内，施用到肌肉中
i.v. 静脉内，施用到静脉中
K-DAR 赖氨酸药物与抗体的比率(附接到赖氨酸残留物的连接体)
KPL-4 人肿瘤细胞系
KU-19-19 人肿瘤细胞系
LC-MS 液相色谱-质谱联用
LLC-PKl 细胞Lewis肺癌猪肾细胞系
L-MDR 人MDR1转染的LLC-PKl细胞
LoVo 人肿瘤细胞系
m 多重峰(在NMR中)
Me 甲基
MDRl 多药耐药蛋白I
MeCN 乙腈
min 分钟
MS 质谱法
MTBE甲基叔丁基醚
MTT 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-溴化四唑鎓NCI-H292 人肿瘤细胞系
NCI-H520 人肿瘤细胞系
NMM N-甲基吗啉
NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
NMR 核磁共振波谱法
NMRI 源自海军医学研究所(Naval Medical Research Institute)的小鼠品系
裸小鼠(Nude mice) 实验动物
NSCLC 非小细胞肺癌
PBS 磷酸盐缓冲盐溶液
Pd/C 活性炭上的钯
P-gp p-糖蛋白，一种转运蛋白
PNGaseF 用于裂解糖的酶
Quant 量化的(以产量计)
quart 四重峰(在NMR中)
quint 五重峰(在NMR中)
RT 室温
Rt 保留时间(在HPLC中)
s 单峰(在NMR中)
s.c. 皮下，在皮下施用
SCC-4 人肿瘤细胞系
SCC-9 人肿瘤细胞系
SCID 患有严重联合免疫缺陷的小鼠测试小鼠
SK-HEP-I 人肿瘤细胞系
t 三重峰(在NMR中)
2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三膦烷2,4,6-三氧化物
TBAF 四正丁基氟化铵
TCEP 三(2-羧乙基)膦
TEMPO (2,2,6,6-四甲基哌啶-l-基)氧基
tert 叔
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
UV 紫外光谱法
v/v (溶液的)体积与体积的比率
Z 苄氧基羰基
提供以下实施例仅用于说明目的，不限制本文提供的权利要求的范围。
分析方法(LC-MS)
提供以下实施例仅用于说明目的，不限制本文提供的权利要求的范围。
分析方法(LC-MS)
通用方法1(LC-MS)：仪器：Waters ACQUITY SQD UPLC系统；色谱柱：WatersAcquity UPLC HSS T3 1.8μ50x1mm；洗脱液A：1l水+0.25mL 99％ige甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.25mL 99％甲酸；梯度：0.0min 90％A→1.2分钟5％A→2.0分钟5％A烘箱：50℃；流速(Flow)：0.40mL/min；紫外线检测：208–400nm。
方法2(LC-MS)：系统MS：Thermo Scientific FT-MS；系统UHPLC+：ThermoScientific UltiMate 3000；色谱柱：Waters，HSST3，2.1x75mm，C18 1.8μm；洗脱液A：1l水+0.01％甲酸；洗脱液B：1l乙腈+0.01％甲酸；梯度：0.0min 10％B→2.5分钟95％B→3.5分钟95％B；烘箱：50℃；流速：0.90ml/min；紫外线检测：210nm/最佳积分路径210-300nm
方法3(LC-MS)：系统MS：Waters TOF仪器；系统UPLC：Waters Acquity I-CLASS；色谱柱：Waters，HSST3，2.1x50mm，C18 1.8μm；洗脱液A：1l水+0.01％甲酸；洗脱液B：1l乙腈+0.01％甲酸；梯度：0.0min 2％B→0.5分钟2％B→7.5分钟95％B→10.0分钟95％B；烘箱：50℃；流速：1.00ml/min；紫外线检测：210nm
方法4(LC-MS)：系统MS：Thermo Scientific FT-MS；系统UHPLC+：ThermoScientific Vanquish；色谱柱：Waters，HSST3，2.1x75mm，C18 1.8μm；洗脱液A：1l水+0.01％甲酸；洗脱液B：1l乙腈+0.01％甲酸；梯度：0.0min 10％B→2.5分钟95％B→3.5分钟95％B；烘箱：50℃；流速：0.90ml/min；紫外线检测：210nm
方法5(LC-MS)：系统MS：Waters TOF仪器；系统UPLC：Waters Acquity I-CLASS；色谱柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μm 50x1mm；洗脱液A：1l水+0.100ml 99％ige甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.100ml 99％ige甲酸；梯度：0.0min 90％A→1.2分钟5％A→2.0分钟5％A烘箱：50℃；流速：0.40ml/min；紫外线检测：210nm。
方法6(LC-MS)：系统MS：Waters TOF仪器；系统UPLC：Waters Acquity I-CLASS；色谱柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μm 50x1mm；洗脱液A：1l水+0.100ml 99％ige甲酸，洗脱液B：1l乙腈+0.100ml 99％ige甲酸；梯度：0.0min 95％A→6.0分钟5％A→7.5分钟5％A烘箱：50℃；流速：0.35ml/min；紫外线检测：210nm。
合成实施例
结构单元
实施例B1：(3R)-3-{[(4-氨基苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-{3-[({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯基}磺酰基)氨基]苯基}丙酸(结构单元1)的制备
结构单元1的合成已经在WO2020/094471中描述
1H-NMR(500MHz,D4-甲醇):δ＝0.93(t,3H),1.5(m,2H),2.74(d,2H),3.1(dt,2H),5.15(t,1H),6.68(d,2H),6.85(d,1H),7.05(d,1H),7.1(d,1H),7.13(t,1H),7.28-7.4(m,3H),7.6(s,1H),7.66(d,1H)。
实施例B2：(3R)-3-{[(4-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氨基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-{3-[({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯基}磺酰基)氨基]苯基}丙酸(结构单元2)的制备
结构单元2的合成已经在WO2020/094471中描述。
实施例B3：(2S)-1-[(19S)-19-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-2,2-二甲基-4,17,20-三氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十烷-20-基]吡咯烷-2-甲酸(结构单元3)的制备
使用经典的肽合成方法合成结构单元3，首先在T3P和DIPEA存在下，在THF中使Z-Asp(OtBu)-OH与L-脯氨酸苄酯盐酸盐(1:1)偶联，随后通过在Pd/C上氢解除去Z-保护基团和苄基酯，以得到(2S)-1-[(2S)-2-氨基-4-叔丁氧基-4-氧代丁酰基]吡咯烷-2-甲酸。用{2-[2-(2-{3-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯酰化该部分保护的二肽，得到标题化合物。先前通过在EDCI存在下使2,2-二甲基-4-氧代-3,8,11,14-四氧杂-5-氮杂十七烷-17-酸与N-羟基琥珀酰亚胺在二噁烷中反应，制备了{2-[2-(2-{3-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯。LC-MS：Rt＝0.81min；MS(ESIpos)：m/z＝590[M+H]+。
实施例B4：N-{2-[{2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}-N-甲基甘氨酸(结构单元4)的制备
最初，从市售的N,N'-二甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]乙烷-1,2-二胺开始，获得甲基(2-{甲基[2-(甲基氨基)乙基]氨基}乙基)氨基甲酸叔丁酯。
溴乙酸苄酯(609mg，2.66mmol)最初在氩气下溶于乙腈(25ml)中，并加入碳酸钾(734mg，5.31mmol)。将溶液冷却至0℃，并加入甲基(2-{甲基[2-(甲基氨基)乙基]氨基}乙基)氨基甲酸叔丁酯(652mg，2.66mmol)的乙腈溶液。将该批料在室温下搅拌1小时，并且随后过滤。滤液在真空中蒸发，剩余残留物通过制备型HPLC纯化。收集相关级分并蒸发至干。获得665mg(97％纯度，62％产率)的保护的中间体N-{2-[{2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}-N-甲基甘氨酸苄酯，为无色油。将该中间体(687mg，1.75mmol)溶于DCM/甲醇中，在10％钯炭上于室温下氢化2小时。滤出催化剂，真空浓缩滤液，得到结构单元4(555mg，61％纯度，64％产率)，为无色油。LC-MS：Rt＝0.74min；MS(ESIpos)：m/z＝304[M+H]+
实施例B5：N-{2-[{2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}-N-甲基甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酸(结构单元5)的制备
使用经典的肽合成方法合成结构单元5，首先在HATU和N,N-二异丙基乙胺的存在下，在DMF中使Boc-Asn和L-脯氨酸苄酯盐酸盐(1:1)偶联，并且随后在DCM中用TFA去除Boc保护基团。在HATU和N,N-二异丙基乙胺的存在下，在DMF中用N-{2-[{2-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}-N-甲基甘氨酸(结构单元4)将该部分保护的二肽酰化。在最后的步骤中，通过在10％Pd/炭上的氢解被除去苄基酯。LC-MS：Rt＝0.81min；MS(ESIpos)：m/z＝515[M+H]+
实施例B6：N-(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酰基-N-甲基-L-丙氨酸(结构单元6)的制备
在N,N-二异丙基乙胺的存在下在DMF中使2,5-二氧代吡咯烷-1-基N-(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酸酯与N-甲基-L-丙氨酸偶联，合成结构单元6。
实施例B7：N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酸(结构单元7)的制备
将市售的N,N'-二甲基-N-[2-(甲基氨基)乙基]乙烷-1,2-二胺(500mg，3.44mmol)在氩气下溶于乙腈(50ml)中，并加入碳酸钾(476mg，3.44mmol)。将溶液冷却至0℃，并加入溴乙酸苄酯(394mg，1.72mmol)的乙腈溶液。将该批料在室温下搅拌20小时，随后进行过滤。蒸发滤液并通过制备型HPLC纯化剩余残留物。收集相关级分并蒸发至干，得到476mg(99％纯度，34％产率)受保护的中间体，为无色油。该中间体在甲醇和2.5当量乙酸中在三氢(吡啶)硼存在下利用(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯被还原地烷基化。随后，通过在10％Pd/炭上的氢解除去苄基酯。LC-MS：Rt＝0.47min；MS(ESIpos)：m/z＝347[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.394(s,9H)2.378(s,3H)2.542(s,2H)2.779(s,3H)2.812(s,3H)2.852-2.944(m,4H)3.145(br t,J＝6.26Hz,2H)3.229(br t,J＝5.87Hz,1H)3.262-3.344(m,4H)3.975(s,3H)7.098(br t,J＝5.09Hz,1H)。
实施例B8：N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酸(结构单元8)的制备
使用经典的肽合成方法合成结构单元8，首先在HATU和N,N-二异丙基乙胺存在下，在DMF中使Boc-Asn与L-脯氨酸苄酯盐酸盐(1:1)偶联，然后在DCM中用TFA去除Boc保护基，得到作为三氟乙酸盐的二肽H-L-Asn-L-Pro-OBzl。在HATU和N,N-二异丙基乙胺的存在下，用N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酸(结构单元7)在DMF中酰化该部分保护的二肽。在最后的步骤中，通过在10％Pd/炭上的氢解除去苄基酯。LC-MS：Rt＝0.54min；MS(ESIpos)：m/z＝558[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 1.393(s)1.851-1.956(m)2.074(s)2.129(br dd,J＝12.13,8.22Hz)2.365-2.413(m)2.480-2.516(m)2.543(s)2.768(s)2.820(s)2.843-2.906(m)3.158(br t,J＝6.06Hz)3.217(br t,J＝5.87Hz)3.284-3.347(m)3.383(dd,J＝8.51,5.77Hz)3.613-3.654(m)3.793(br d,J＝13.30Hz)4.227(dd,J＝8.61,4.11Hz)4.712-4.752(m)4.848-4.902(m)4.915-4.955(m)6.902(br s)6.966(s)7.103(br t,J＝5.28Hz)7.452(br s)7.472(br s)8.769-8.817(m)8.941(br d,J＝7.63Hz)。
实施例B9：(3S)-3-{[(4-氨基苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-{3-[({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯基}磺酰基)氨基]苯基}丙酸(结构单元9)的制备
结构单元9的合成已经在WO2020/09447中描述。
实施例B10：(3S)-3-{[(4-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氨基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-{3-[({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯基}磺酰基)氨基]苯基}丙酸(结构单元10)的制备
结构单元10的合成已经在WO2020/094471中描述。LC-MS：Rt＝0.89min；MS(ESIpos)：m/z＝720[M+H]+。
中间体
实施例I1：N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸2-(苄氧基)-2-氧代乙基酯(中间体1)的制备
将羟基乙酸苄酯(1.00g，6.02mmol)溶于DCM(50mL)中。加入N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸(1.31g，6.02mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.38g，7.22mmol)和DMAP(36.8mg，301μmol)。将反应在室温下搅拌过夜，并且然后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC纯化，得到中间体1(1.27g，93％纯度，54％产率)，为无色泡沫。LC-MS:Rt＝2.20min；MS(ESIpos)：m/z＝388[M+Na]+
实施例I2：{[N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酰]氧基}乙酸(中间体2)的制备
将N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸2-(苄氧基)-2-氧代乙基酯(中间体1)(1.27g，3.48mmol)溶于DCM/甲醇(1:1，100mL)中。添加10％的Pd/C(50.0mg)。反应在室温下在常压下氢化2小时。过滤出催化剂并在真空中浓缩滤液，得到中间体2(822mg，80％纯度，69％产率)，为无色油。LC-MS：Rt＝1.42min；MS(ESIneg)：m/z＝274[M-H]-。
实施例I3：2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]氨基}-2-氧代乙基N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸酯(中间体3)的制备
将甲烷磺酸—(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(1/1)(依喜替康甲磺酸盐)(50.0mg，94.1μmol)溶于乙酸乙酯中。用饱和NaHCO3溶液萃取。混浊的有机相含有未溶解的原料。分离出水相，并通过HPLC确认其不含起始材料。将有机相真空浓缩，溶于乙腈/水中并冷冻干燥。将残留物重新溶解在DMF(5.0mL)中。加入{[N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酰]氧基}乙酸(中间体2)(51.8mg，188μmol)、HATU(46.5mg，122μmol)和DIEA(66μL，380μmol)。将反应在室温下搅拌1小时，并将反应蒸发至干。残留物通过制备型HPLC纯化，得到中间体3(61.0mg，95％纯度，89％产率)，为黄色泡沫。LC-MS：Rt＝1.95min；MS(ESIneg)：m/z＝691[M-H]-。
实施例I4：三氟乙酸—2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]氨基}-2-氧代乙基L-缬氨酸酯(1/1)(中间体4)的制备
将2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]氨基}-2-氧代乙基N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸酯(中间体3)(61.0mg，88.1μmol)溶于DCM(5.0mL)中，然后加入TFA(1.0mL)。将该批料在室温下搅拌2小时，并且然后在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/水中并冷冻干燥，得到中间体4(58.0mg，93％纯度，86％产率)，为无色泡沫。LC-MS：Rt＝1.13min；MS(ESIpos)：m/z＝593[M+H]+
实施例I5：(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]氨基}-2-氧代乙氧基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(中间体5)的制备
将三氟乙酸—2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]氨基}-2-氧代乙基L-缬氨酸酯(1/1)(中间体4)(58.0mg，82.1μmol)溶于DMF(5.0mL)中。添加(2S)-1-[(19S)-19-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-2,2-二甲基-4,17,20-三氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十烷-20-基]吡咯烷-2-甲酸(结构单元3)(58.1mg，98.5μmol)、HATU(40.6mg，107μmol)和DIEA(57μl，330μmol)。将反应在室温下搅拌1小时。将反应蒸发至干，并且残留物通过制备型HPLC分离以得到中间体5(89.0mg，93％产率)，为黄色泡沫。LC-MS：Rt＝3.52min；MS(ESIpos)：m/z＝1165[M+H]+。
实施例I6：2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]氨基}-2-氧代乙基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯—三氟乙酸(1/1)(中间体6)的制备
将(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-(2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]氨基}-2-氧代乙氧基)-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(中间体5)(89.0mg，76.4μmol)溶于DCM(4.3mL)中，随后添加TFA(870μl)。将反应在室温下搅拌2小时并且随后在真空中浓缩。将残留物溶于中ACN/水并冷冻干燥以得到中间体6(85.0mg，85％纯度，84％产率)，为黄色泡沫。LC-MS：Rt＝2.78min；MS(ESIpos)：m/z＝1008[M+H]+。
实施例I7：(1S,9S)-1-乙酰胺基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸酯(中间体7)的制备
将N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]乙酰胺(化合物7，见实施例C7)(24.0mg，50.3μmol)悬浮在DCM(4.0mL)中，随后添加(4S)-2,5-二氧代-4-(丙烷-2-基)-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(24.5mg，101μmol)和DMAP(6.14mg，50.3μmol；CAS：1122-58-3)，并将反应在室温下搅拌2天。将反应在真空中浓缩，并通过制备型HPLC进行分离以得到中间体7(31.9mg，100％纯度，94％产率)，为无色泡沫。LC-MS：Rt＝3.63min；MS(ESIpos)：m/z＝677[M+H]+。
实施例I8：三氟乙酸—(1S,9S)-1-乙酰胺基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基L-缬氨酸酯(1/1)(中间体8)的制备
将(1S,9S)-1-乙酰胺基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸酯(中间体7)(31.5mg，46.5μmol)溶于DCM(2.6mL)中，随后添加TFA(530μl)。将反应在室温下搅拌1小时并且随后在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/水中并冷冻干燥以得到中间体8，为黄色泡沫(35.0mg，97％纯度，105％产率)。LC-MS：Rt＝1.11min；MS(ESIpos)：m/z＝577[M+H]+。
实施例I9：(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-{[(1S,9S)-1-乙酰胺基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基]氧基}-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(中间体9)的制备
将三氟乙酸-(1S,9S)-1-乙酰胺基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基L-缬氨酸酯(1/1)(中间体8)(35.0mg，50.7μmol)溶于DMF(5.0mL)中。添加(2S)-1-[(19S)-19-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-2,2-二甲基-4,17,20-三氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十烷-20-基]吡咯烷-2-甲酸(结构单元3)(35.9mg，60.8μmol)、HATU(25.0mg，65.9μmol)和DIEA(35μl，200μmol)。将反应在室温下搅拌1小时并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC纯化以得到中间体9(45.0mg，84％纯度，65％产率)，为黄色泡沫。LC-MS：Rt＝4.73min；MS(ESIpos)：m/z＝1149[M+H]+。
实施例I10：(1S,9S)-1-乙酰胺基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯—三氟乙酸(1/1)(中间体10)的制备
将(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-{[(1S,9S)-1-乙酰胺基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基]氧基}-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(中间体9)(45.0mg，39.2μmol)溶于DCM(4.7mL)中，随后添加TFA(940μl)。将反应在室温下搅拌4小时并且随后在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/水中并冷冻干燥以得到黄色油，其通过制备型HPLC纯化以得到中间体10，为两种旋转异构体，为黄色泡沫(14.2mg，100％纯度，32％产率)。LC-MS：Rt＝1.98min；MS(ESIpos)：m/z＝992[M+H]+。
实施例I11：[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]氨基甲酸苄酯(中间体11)的制备
将甲烷磺酸—(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(1/1)(依喜替康甲磺酸盐)(50.0mg，94.1μmol)溶于DMF(10.0mL)中，随后添加1-{[(苄氧基)羰基]氧基}吡咯烷-2,5-二酮(28.1mg，113μmol)和DIEA(49μl，280μmol)。将反应在室温下搅拌过夜。将反应在真空中浓缩并将残留物与ACN/H2O/DMF混合。过滤出沉淀的固体，干燥并通过制备型HPLC纯化以得到中间体11(50.0mg，92％纯度，87％产率)，为白色泡沫。LC-MS：Rt＝3.21min；MS(ESIpos)：m/z＝570[M+H]+。
实施例I12：(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸酯(中间体12)的制备
将[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]氨基甲酸苄酯(中间体11)(50.0mg，87.8μmol)加入DCM(20.0mL)中，随后添加(4S)-2,5-二氧代-4-(丙烷-2-基)-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(51.2mg，211μmol)和DMAP(19.3mg，158μmol；CAS：1122-58-3)。将混合物在搅拌的同时回流7小时。将反应在真空中浓缩。添加水，其后产物沉淀。过滤混合物，滤渣的可溶性很差，但可溶于DMSO+ACN或MeOH/DCM。该化合物通过制备型HPLC纯化以得到中间体12(54.0g，98％纯度，78％产率)。LC-MS：Rt＝2.48min；MS(ESIpos)：m/z＝769[M+H]+。
实施例I13：三氟乙酸—(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基L-缬氨酸酯(1/1)(中间体13)的制备
将(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸酯(中间体12)(44.0mg，98％纯度，55.9μmol)溶于DCM(6.3mL)中，添加TFA(1.3mL)并将反应在室温下搅拌30min。将反应在真空中浓缩，将残留物溶于ACN/H2O中并冻干以得到中间体13(44.0mg，98％纯度，98％产率)。LC-MS：Rt＝2.56min；MS(ESIpos)：m/z＝669[M+H]+。
实施例I14：(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-{[(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基]氧基}-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(中间体14)的制备
向DMF(8.0mL)中的三氟乙酸—(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基L-缬氨酸酯(1/1)(中间体13)(44.0mg，98％纯度，54.9μmol)和(2S)-1-[(19S)-19-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-2,2-二甲基-4,17,20-三氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十烷-20-基]吡咯烷-2-甲酸(结构单元3)(38.9mg，65.9μmol)的溶液中添加HATU(27.1mg，71.4μmol)和DIEA(29μl，160μmol)。将溶液在室温下搅拌30min并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC纯化，随后冻干以得到标题化合物(50.0mg，100％纯度，73％产率)，为黄色泡沫。LC-MS：Rt＝4.28min；MS(ESIpos)：m/z＝1239[M+H]+。
实施例I15：(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯—三氟乙酸(1/1)(中间体15)的制备
将(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-{[(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基]氧基}-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(中间体14)(50.0mg，40.3μmol)溶于DCM(10mL)中并且添加TFA(5.0mL)。将反应在室温下搅拌4小时，随后将其在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冻干以得到中间体15(49.0mg，100％，101％产率)，为黄色残留物。LC-MS：Rt＝2.63min；MS(ESIpos)：m/z＝1084[M+H]+。
实施例I16：(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸酯(中间体16)的制备
将(7S)-7-乙基-7-羟基-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-8,11(7H、13H)-二酮(10,11-亚甲基二氧基-喜树碱)(20mg，0.051mmol)溶于DCM(5mL)中，随后添加(4S)-2,5-二氧代-4-(丙烷-2-基)-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(24.8mg，0.102mmol)和DMAP(4.80mg，0.039mmol)。将反应在室温下搅拌12小时。再次向反应中添加相同量的(4S)-2,5-二氧代-4-(丙烷-2-基)-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯和DMAP，并且将反应进一步搅拌4小时。将反应在真空中浓缩并通过制备型HPLC纯化以得到中间体16(7.20mg，80％纯度，19％产率)，为几乎无色的泡沫。LC-MS：Rt＝3.47min；MS(ESIpos)：m/z＝592[M+H]+。
实施例I17：三氟乙酸—(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基L-缬氨酸酯(1/1)(中间体17)的制备
将(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸酯(中间体16)(50.0mg，84.5μmol)溶于DCM(15.0mL)中，随后添加TFA(3.0mL)。将反应在室温下搅拌30min。将反应在真空中浓缩并将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体17(10.2mg，82％纯度，16％产率)，为无色泡沫。LC-MS：Rt＝1.69min；MS(ESIpos)：m/z＝492[M+H]+。1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)δ[ppm]:0.935(1.23),0.949(2.16),0.964(1.23),1.029(1.70),1.043(1.71),1.085(1.20),1.097(2.50),1.111(1.69),1.141(1.17),1.155(1.18),1.232(2.32),1.248(12.26),1.262(16.00),1.276(8.18),2.217(0.48),2.232(0.62),2.248(0.53),2.731(0.46),2.891(0.49),3.125(0.41),3.131(1.08),3.140(1.11),3.146(1.10),3.154(1.06),3.594(0.54),3.602(0.60),3.607(0.95),3.615(1.00),3.620(1.20),3.628(1.20),3.633(1.00),3.641(0.96),3.646(0.61),3.654(0.57),5.243(1.37),5.260(0.58),5.520(1.14),5.527(1.87),6.293(2.87),7.126(1.11),7.231(1.55),7.431(1.66),7.531(1.62),7.537(1.18),8.387(0.53),8.481(1.09),8.492(0.80),8.574(0.50)。
实施例I18：(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-{[(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基]氧基}-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(中间体18)的制备
将三氟乙酸—(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基L-缬氨酸酯(1/1)(中间体17)(25.0mg，41.3μmol)溶于DMF(5.0mL)中。添加(2S)-1-[(19S)-19-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-2,2-二甲基-4,17,20-三氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十烷-20-基]吡咯烷-2-甲酸(结构单元3)(29.2mg，49.5μmol)、HATU(23.5mg，61.9μmol)和DIEA(22μl，120μmol)。将反应在室温下搅拌1小时并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC纯化以得到中间体18(20.9mg，100％纯度，48％产率)，为浅黄色泡沫。LC-MS：Rt＝1.98min；MS(ESIpos)：m/z＝1063[M+H]+。
实施例I19：(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯—三氟乙酸(1/1)(中间体19)的制备
将(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-{[(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基]氧基}-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(中间体18)(37.0mg，34.8μmol)溶于DCM(5.0mL)中并且添加TFA(1.0mL)。将反应在室温下搅拌30min并且随后在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体19(36.0mg，100％纯度，101％产率)，为无色泡沫。LC-MS：Rt＝2.66min；MS(ESIpos)：m/z＝907[M+H]+。
实施例I20：N2-(叔丁氧基羰基)-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酸苄酯(中间体20)的制备
将N2-(叔丁氧基羰基)-L-天冬酰胺(500mg，2.15mmol)溶于DMF(40mL)中。添加L-脯氨酸苄酯—盐酸盐(1/1)(520mg，2.15mmol)、HATU(982mg，2.58mmol)和DIEA(750μl，4.3mmol)。将反应在室温下搅拌4小时并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC纯化以得到中间体20(700mg，99％纯度，77％产率)，为几乎无色的泡沫。LC-MS：Rt＝1.52min；MS(ESIpos)：m/z＝420[M+H]+。
实施例I21：三氟乙酸—L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酸苄酯(2/1)(中间体21)的制备
将N2-(叔丁氧基羰基)-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酸苄酯(中间体20)(700mg，1.67mmol)溶于DCM(20mL)中，随后添加TFA(4.0mL)。将反应在室温下搅拌30min并将反应在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体21(831mg，98％纯度，89％产率)，为无色泡沫。LC-MS：Rt＝0.47min；MS(ESIpos)：m/z＝320[M+H]+。
实施例I22：三氟乙酸—N-甲基-N-(2-{甲基[2-(甲基氨基)乙基]氨基}乙基)甘氨酸苄酯(1/1)(中间体22)的制备
反应在氩气下进行。将N1,N2-二甲基-N1-[2-(甲基氨基)乙基]乙烷-1,2-二胺(500mg，3.44mmol)溶于ACN(50mL)中，并加入碳酸钾(476mg，3.44mmmol；CAS：584-08-7)。在0℃下，加入溴乙酸苄酯(394mg，1.72mmol)的ACN溶液。反应在室温下搅拌20小时。过滤反应以分离出固体，浓缩滤液并通过制备型HPLC纯化，得到中间体22(476mg，99％纯度，34％产率)，为无色油。LC-MS：Rt＝0.49min；MS(ESIpos)：m/z＝294[M+H]+。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ[ppm]:2.615(16.00),2.644(12.71),3.013(2.29),3.025(2.19),3.037(2.39),3.047(1.67),3.114(1.55),3.123(2.48),3.132(1.26),3.201(1.72),3.212(2.98),3.223(1.38),3.947(6.33),5.204(10.48),7.354(0.62),7.361(1.24),7.368(1.39),7.375(1.02),7.382(0.73),7.397(11.06),7.404(8.52)。
实施例I23：N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酸苄酯(中间体23)的制备
将三氟乙酸—N-甲基-N-(2-{甲基[2-(甲基氨基)乙基]氨基}乙基)甘氨酸苄酯(1/1)(中间体22)(470mg，1.15mmol)、(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(367mg，2.31mmol)和AcOH(170μl)溶于MeOH(50mL)中以得到清澈溶液。随后添加硼烷吡啶络合物(三氢(吡啶)硼)(515mg，5.54mmol)，并将反应在室温下搅拌5小时。将反应在真空中浓缩并通过制备型HPLC纯化两次以得到中间体23(366mg，99％纯度，72％产率)，为无色油。LC-MS：Rt＝0.95min；MS(ESIpos)：m/z＝437[M+H]+。
实施例I24：N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酸(中间体24)的制备
将N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酸苄酯(中间体23)(366mg，838μmol)溶于DCM/MeOH(1：1,30mL)中。添加Pd/C 10％(12.0mg)，并且在室温下常压下将反应氢化2小时。过滤出催化剂并浓缩滤液以得到中间体24(312mg，107％产率)，为无色油。LC-MS：Rt＝0.47min；MS(ESIpos)：m/z＝347[M+H]+。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ[ppm]:1.395(16.00),2.073(1.10),2.370(5.09),2.770(6.00),2.803(5.43),2.865(0.82),2.876(1.83),2.889(1.69),2.900(0.82),3.124(0.70),3.134(1.29),3.145(0.78),3.205(0.89),3.215(1.56),3.225(0.80),3.268(0.85),3.279(1.40),3.290(1.15),3.302(1.20),3.312(1.06),3.964(2.49),7.097(0.57)。
实施例I25：N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酸苄酯(中间体25)的制备
将L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酸苄酯三氟乙酸盐(1：2)(中间体21)(244.9mg，0.447mmol)溶于DMF(20.0mL)中。添加N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酸(结构单元7)(155.0mg，0.447mmol)、HATU(255.2mg，671.0μmol)和DIEA(233.8μl，1342μmol)。将反应在室温下搅拌1小时并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离以得到中间体25(227mg，92％纯度，72％产率)，为无色泡沫。LC-MS：Rt＝1.49min；MS(ESIpos)：m/z＝648[M+H]+。
实施例I27：(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(中间体27)的制备
将三氟乙酸—(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基L-缬氨酸酯(1/1)(中间体17)(28.0mg，46.2μmol)溶于DMF(5.0mL)中。添加N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酸(结构单元8)(25.8mg，46.2μmol)、HATU(26.4mg，69.4μmol)和DIEA(24μl，140μmol)。将反应在室温下搅拌1小时。将反应在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离以得到中间体27(28.0mg，93％纯度，54％产率)，为浅黄色泡沫。LC-MS：Rt＝2.60min；MS(ESIpos)：m/z＝1031[M+H]+。
实施例I28：三氟乙酸—(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-{2-[{2-[(2-氨基乙基)(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}-N-甲基甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(1/1)(中间体28)的制备
将(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(中间体27)(28.0mg，27.2μmol)溶于DCM(5.0mL)中，随后添加TFA(1.0mL)。将反应在室温下搅拌30min并且随后在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体28(28.0mg，100％纯度，99％产率)，为无色泡沫。LC-MS：Rt＝2.17min；MS(ESIpos)：m/z＝931[M+H]+。
实施例I29：((S)-4-氨基-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基)-1,4-二氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体29)的制备
向DMF(10mL)中的甲烷磺酸—(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(1/1)(依喜替康甲磺酸盐)(30.0mg，56.4umol)的溶液中添加2,5-二氧代吡咯烷-1-基N2-(叔丁氧基羰基)-L-天冬酰胺酯(37.2mg，112.9umol)和DIEA(39.3ul，225.7umol)。将反应在室温下搅拌3小时，随后添加另一1当量的Boc-Asn-Osu(18.6mg，56.4umol)和1当量的DIEA(10.0uL，56.4umol)并将反应搅拌过夜。将反应在真空中浓缩，通过制备型HPLC纯化并冻干以得到标题化合物(37.0mg，100％纯度，100％产率)，为黄色泡沫。
LC-MS：Rt＝2.52min；MS(ESIpos)：m/z＝650[M+H]+。
实施例I30：三氟乙酸—N1-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-天冬酰胺(1/1)(中间体30)的制备
将((S)-4-氨基-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基)-1,4-二氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体29)(37mg，57μmol)溶于DCM(6mL)中，随后添加TFA(1mL)。将反应在室温下搅拌30min并且随后在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冻干以得到中间体30(38.0mg，98％纯度，99％产率)，为黄色泡沫。LC-MS：Rt＝0.92min；MS(ESIpos)：m/z＝550[M+H]+。
实施例I31：((S)-1-(((S)-1-(((S)-4-氨基-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基)-1,4-二氧代丁烷-2-基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)(甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体31)的制备
将三氟乙酸—N1-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-
1-基]-L-天冬酰胺(1/1)(中间体30)(10mg，14.8μmol)溶于DMF(4mL)中。添加N-(叔丁氧基羰基)-L-丙氨酰基-N-甲基-L-丙氨酸(结构单元6)(4.9mg，18μmol)、HATU(8.5mg，22μmol)和DIEA(6mg，45μmol)。将反应在室温下搅拌10min并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC纯化，并且其后冻干以得到中间体I31(5.0mg，100％纯度，42％.产率)，为黄色泡沫。LC-MS：Rt＝
1.55min；MS(ESIpos)：m/z＝806[M+H]+。
实施例I32：三氟乙酸L-丙氨酰基-N-甲基-L-丙氨酰基-N1-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-天冬酰胺(1/1)(中间体32)的制备
将((S)-4-氨基-1-(((1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基)氨基)-1,4-二氧代丁烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体31)(11mg，14μmol)溶于DCM(4.6mL)中，随后添加TFA(0.9mL)。将反应在室温下搅拌30min并且随后在真空中浓缩。将残留物重新溶于ACN/H2O中并冻干以得到中间体32(10.0mg，100％纯度，89％产率)，为黄色泡沫。LC-MS：Rt＝0.98min；MS(ESIpos)：m/z＝706[M+H]+。
实施例I33：(1S,9S)-1-(二乙基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/1)(中间体33)
将(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-{[(1S,9S)-1-(二乙基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基]氧基}-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(18.1mg，15.6μmol)(中间体34)溶于DCM(5.0mL)中，随后添加TFA(2.0mL)。将反应在室温下搅拌1小时并在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体33(17.0mg，95％纯度，92％产率)，为浅黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝2.65min；MS(ESIpos)：m/z＝1006[M+H]+。
实施例I34：(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-{[(1S,9S)-1-(二乙基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基]氧基}-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(中间体34)
将三氟乙酸(1S,9S)-1-(二乙基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基L-缬氨酸酯(1/1)(14.0mg，19.9μmol)(中间体35)溶于DMF(5.0mL)中。添加(2S)-1-[(19S)-19-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-2,2-二甲基-4,17,20-三氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十烷-20-基]吡咯烷-2-甲酸(14.1mg，23.8μmol)(结构单元3)、HATU(9.82mg，25.8μmol；CAS-RN：[148893-10-1])和N,N-二异丙基乙胺(10μl，60μmol；CAS-RN：[7087-68-5])。将反应在室温下搅拌1小时并在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC纯化以得到中间体34(18.1mg，91％纯度，71％产率)，为浅黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝4.69min；MS(ESIpos)：m/z＝1163[M+H]+。
实施例I35：三氟乙酸(1S,9S)-1-(二乙基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基L-缬氨酸酯(1/1)(中间体35)
将(1S,9S)-1-(二乙基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸酯(15.0mg，21.7μmol)(中间体36)溶于DCM(7.5mL)中，随后添加TFA(1.5mL)。将反应在室温下搅拌1小时并在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体35(14.0mg，100％纯度，91％产率)，为米色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝2.54min；MS(ESIpos)：m/z＝591[M+H]+。
实施例I36：(1S,9S)-1-(二乙基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸酯(中间体36)
将(1S,9S)-1-(二乙基氨基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(20.0mg，40.7μmol)(化合物17)溶于DCM(5.0mL)中。添加Boc-Val-NCA：(4S)-2,5-二氧代-4-(丙烷-2-基)-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(23.8mg，97.6μmol)和DMAP(8.95mg，73.2μmol；CAS-RN：[1122-58-3])。将反应在回流下搅拌22小时并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离以得到中间体36(15.0mg，100％纯度，53％产率)，为米色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝4.74min；MS(ESIpos)：m/z＝691[M+H]+。
实施例I37：(1S,9S)-1-(二甲基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(中间体37)
将(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-{[(1S,9S)-1-(二甲基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基]氧基}-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(36.0mg，31.7μmol)(中间体38)溶于DCM(5.0mL)中，随后添加TFA(2.5mL)。将反应在室温下搅拌3小时并在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体37(33.0mg，100％纯度，95％产率)，为浅黄色泡沫。LC-MS(方法2)Rt＝0.91min；MS(ESIneg)：m/z＝976[M-H]-。
实施例I38：(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-{[(1S,9S)-1-(二甲基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基]氧基}-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(中间体38)
将三氟乙酸(1S,9S)-1-(二甲基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基L-缬氨酸酯(1/1)(23.0mg，34.0μmol)(中间体39)溶于DMF(8.6mL)中。添加(2S)-1-[(19S)-19-(2-叔丁氧基-2-氧代乙基)-2,2-二甲基-4,17,20-三氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十烷-20-基]吡咯烷-2-甲酸(24.1mg，40.8μmol)(结构单元3)、HATU(16.8mg，44.2μmol；CAS-RN：[148893-10-1])和N,N-二异丙基乙胺(18μl，100μmol；CAS-RN：[7087-68-5])。将反应在室温下搅拌1小时并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离以得到中间体38(36.0mg，99％纯度，92％产率)，为浅黄色泡沫。LC-MS(方法6)：Rt＝3.03min；MS(ESIpos)：m/z＝1134[M+H]+。
实施例I39：三氟乙酸(1S,9S)-1-(二甲基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基L-缬氨酸酯(1/1)(中间体39)
将(1S,9S)-1-(二甲基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸酯(23.0mg，34.7μmol)(中间体40)溶于DCM(5.2mL)中，随后添加TFA(1.0mL)。将反应在室温下搅拌1小时并在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体39(23.0mg，97％纯度，95％产率)，为米色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝2.06min；MS(ESIpos)：m/z＝563[M+H]+。
实施例I40：(1S,9S)-1-(二甲基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(叔丁氧基羰基)-L-缬氨酸酯(中间体40)
将(1S,9S)-1-(二甲基氨基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(40.0mg，86.3μmol)(中间体41)溶于DCM(33mL)中。添加Boc-Val-NCA：(4S)-2,5-二氧代-4-(丙烷-2-基)-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(50.4mg，207μmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(DMAP)：(19.0mg，155μmol；CAS-RN：[1122-58-3])。将反应在回流下搅拌22小时并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离以得到中间体40(23.0mg，100％纯度，40％产率)，为米色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝3.96min；MS(ESIpos)：m/z＝663[M+H]+。
实施例I41：(1S,9S)-1-(二甲基氨基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(中间体41)
将甲烷磺酸(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(1/1)(依喜替康甲磺酸盐)(50.0mg，94.1μmol)溶于甲醇(10mL)中。加入碳酸氢钠(15.8mg，188μmol；CAS-RN:[144-55-8])。加入甲醛(61.1mg，37％纯度，752μmol)，并在50℃下搅拌反应1小时。再加入2倍的甲醛，并在50℃下继续搅拌1小时。然后将反应冷却至0℃，并加入三乙酰氧基硼氢化钠(79.7mg，376μmol；CAS-RN:[556553-60-7])。将反应在室温下搅拌2小时，然后在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中，抽吸滤出沉淀物，并滤液通过制备型HPLC纯化。将沉淀物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥，得到中间体41(15.0mg，87％纯度，30％产率)，为无色泡沫。LC-MS(方法2)：Rt＝0.94min；MS(ESIpos)：m/z＝464[M+H]+。
实施例I42：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-{2-[{2-[(2-氨基乙基)(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}-N-甲基甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸盐(1：3)(中间体42)
将(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-{2-[{2-[(2-氨基乙基)(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}-N-甲基甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸盐(1：3)(44.0mg，30.3μmol)(中间体43)溶于乙醇(10.0mL)中。添加Pd/C10％并且将反应在室温下在大气压下氢化2小时。过滤出催化剂并浓缩滤液。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体42(37.0mg，72％纯度，67％产率)，为无色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝1.76min；MS(ESIpos)：m/z＝973[M+H]+-。
实施例I43：三氟乙酸(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-{2-[{2-[(2-氨基乙基)(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}-N-甲基甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(中间体43)
将(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(58.0mg，48.0μmol)(中间体44)溶于DCM(10mL)中，随后添加TFA(2.0ml、26mmol；CAS-RN：[76-05-1])。将反应在室温下搅拌1小时并且随后在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体43(59.0mg，95％纯度，80％产率)，为浅黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝2.99min；MS(ESIpos)：m/z＝1108[M+H]+。
实施例I44：(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(中间体44)
将三氟乙酸(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基L-缬氨酸酯(1/1)(98.0mg，125μmol)(中间体13)溶于DMF(9.1mL)中。添加N-甲基-N-(2,2,8,11-四甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十三烷-13-基)甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酸(69.8mg，125μmol)(结构单元8)、HATU(71.4mg，188μmol；CAS-RN：[148893-10-1])和N,N-二异丙基乙胺(44μl，250μmol；CAS-RN：[7087-68-5])。将反应在室温下搅拌3小时并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离以得到中间体44(58.0mg，93％纯度，36％产率)，为浅黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝3.36min；MS(ESIpos)：m/z＝1208[M+H]+。
实施例I45：(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(中间体45)
将(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/2)(135mg，80.9μmol)(中间体46)溶于DMF(40mL)中。添加(3R)-3-{[(4-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氨基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]丙酸(116mg，162μmol)(结构单元2)和N,N-二异丙基乙胺(280μl，1.6mmol；CAS-RN：[7087-68-5])。将反应在室温下搅拌30分钟并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离两次以得到中间体45(89.0mg(94％纯度，40％产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝4.00min；MS(ESIpos)：m/z＝2602[M+H]+。
实施例I46：(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/2)(中间体46)
将(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5-氮杂十七烷-17-基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(113mg，68.8μmol)(中间体47)溶于DCM(20mL)中，随后添加TFA(4.0mL)。将反应在室温下搅拌1小时并在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体46(135mg，100％纯度，117％产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝2.34min；MS(ESIpos)：m/z＝1441[M+H]+。
实施例I47：(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5-氮杂十七烷-17-基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(中间体47)
(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-[3-(2-{2-[2-(L-赖氨酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰基]-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/2)(145mg，115μmol)(中间体48)溶于DMF(32mL)中。添加{2-[2-(2-{3-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯(115mg，275μmol)(中间体49)和N,N-二异丙基乙胺(160μl，920μmol；CAS-RN：[7087-68-5])。将反应在室温下搅拌3小时并在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC纯化以得到中间体47(113mg，100％纯度，60％产率)，为无色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝4.14min；MS(ESIpos)：m/z＝1641[M+H]+。
实施例I48：(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-[3-(2-{2-[2-(L-赖氨酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰基]-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/2)(中间体48)
将(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(103mg，83.4μmol)(中间体50)溶于DCM(15mL)中，随后添加TFA(5.0mL)。将反应在室温下搅拌1小时并在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体48(108mg，100％纯度，定量产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝2.27min；MS(ESIpos)：m/z＝1035[M+H]+。
实施例I49：{2-[2-(2-{3-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯(中间体49)
将t-Boc-N-酰胺基-PEG3-酸：2,2-二甲基-4-氧代-3,8,11,14-四氧杂-5-氮杂十七烷-17-酸(3.00g，9.33mmol)悬浮在DCM(50mL)中。添加HO-Su：1-羟基吡咯烷-2,5-二酮(1.61g、14.0mmol)、EDCI(2.15g、11.2mmol)和DMAP(5.00mg，40.9μmol)。将反应在室温下搅拌1小时并在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC纯化以得到中间体49(3.15g，90％纯度，72％产率)，为无色油。LC-MS(方法2)：Rt＝1.38min；MS(ESIpos)：m/z＝419[M+H]+。
实施例I50：(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(中间体50)
将(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/1)(109mg，107μmol)(中间体19)溶于DMF(21mL)中。添加Boc-Lys(Boc)-OSu：2,5-二氧代吡咯烷-1-基N2,N6-双(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸酯(61.6mg，139μmol)和N,N-二异丙基乙胺(56μl，320μmol；CAS-RN：[7087-68-5])。将反应在室温下搅拌20小时并在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离以得到中间体50(103mg，100％纯度，78％产率)，为浅黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝4.24min；MS(ESIpos)：m/z＝1236[M+H]+。
实施例I51：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(中间体51)
将(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/2)(86.0mg，50.2μmol)(中间体52)溶于DMF(25mL)中。添加(3R)-3-{[(4-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氨基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]丙酸(72.3mg，100μmol)(结构单元2)和N,N-二异丙基乙胺(170μl，1.0mmol；CAS-RN：[7087-68-5])。将反应在室温下搅拌30分钟并在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离。纯化的物质仅可溶于DMSO中，因此必须分离三次才能得到中间体51(5.50mg，100％纯度，4％产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝3.41min；MS(ESIpos)：m/z＝2645[M+H]+。
实施例I52：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/2)(中间体52)
将(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5-氮杂十七烷-17-基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(82.0mg，48.7μmol)(中间体53)溶于DCM(14mL)中，随后添加TFA(2.8mL)。将反应在室温下搅拌1小时并且随后在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体52(86.0mg，95％纯度，98％产率)，为黄色泡沫。
LC-MS(方法3)：Rt＝1.96min；MS(ESIpos)：m/z＝1484[M+H]+。
实施例I53：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5-氮杂十七烷-17-基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(中间体53)
将(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-[3-(2-{2-[2-(L-赖氨酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰基]-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/2)(114mg，90％纯度，78.5μmol)(中间体54)溶于DMF(25mL)中。添加{2-[2-(2-{3-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]-3-氧代丙氧基}乙氧基)乙氧基]乙基}氨基甲酸叔丁酯(69.0mg，165μmol)(中间体49)和N,N-二异丙基乙胺(110μl，630μmol；CAS-RN：[7087-68-5])。将反应在室温下搅拌3小时并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC纯化以得到中间体53(82.0mg，90％纯度，56％产率)，为无色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝3.35min；MS(ESIpos)：m/z＝1684[M+H]+。
实施例I54：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-[3-(2-{2-[2-(L-赖氨酰基氨基)乙氧基]乙氧基}乙氧基)丙酰基]-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/2)(中间体54)
将(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(101mg，79.0μmol)(中间体55)溶于DCM(15mL)中，随后添加TFA(5.0mL)。将反应在室温下搅拌1小时并在真空中浓缩。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体54(114mg，100％纯度，110％产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法)：Rt＝1.17min；MS(ESIpos)：m/z＝1078[M+H]+。
实施例I55：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(中间体55)
将(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/1)(105mg，98.7μmol)(中间体56)溶于DMF(20mL)中。添加Boc-Lys(Boc)-OSu：2,5-二氧代吡咯烷-1-基N2,N6-双(叔丁氧基羰基)-L-赖氨酸酯(48.1mg，109μmol)和N,N-二异丙基乙胺(52μl，300μmol；CAS-RN：[7087-68-5])。将反应在室温下搅拌20小时并在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离以得到中间体55(101mg，90％纯度，72％产率)，为无色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝3.34min；MS(ESIpos)：m/z＝1278[M+H]+。
实施例I56：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/1)(中间体56)
将(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-{[(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基]氧基}-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(287mg，86％纯度，223μmol)(中间体57)溶于DCM(30mL)中，随后添加TFA(5.0mL)。将反应在室温下搅拌1小时，随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC纯化以得到中间体56(216mg，95％纯度，87％产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝2.04min；MS(ESIpos)：m/z＝950[M+H]+。
实施例I57：(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-{[(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基]氧基}-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(中间体57)
将(19S)-19-[(2S)-2-{[(2S)-1-{[(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基]氧基}-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]氨基甲酰基}吡咯烷-1-羰基]-2,2-二甲基-4,17-二氧代-3,8,11,14-四氧杂-5,18-二氮杂二十一烷-21-酸叔丁酯(350mg，282μmol)(中间体14)溶于乙醇(50mL)中。添加催化剂Pd/C 10％(50.0mg)。将反应在标准压力下氢化2小时。过滤出催化剂并在旋转蒸发器上浓缩滤液。将残留物溶于ACN/H2O中并冷冻干燥以得到中间体57(287mg，86％纯度，79％产率)，为无色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝3.59min；MS(ESIpos)：m/z＝1107[M+H]+。
实施例I58：(1S,9S)-1-乙酰胺基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(中间体58)的制备
将(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(20.0mg，7.56μmol)(中间体51)溶于DMF(4.0mL)中。添加Ac-OSu：1-(乙酰氧基)吡咯烷-2,5-二酮(2.38mg，15.1μmol)和N,N-二异丙基乙胺(5.3μl，30μmol；CAS-RN：[7087-68-5])。将反应在室温下搅拌20小时并在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离以得到中间体58(3.40mg，92％纯度，15％产率)，为无色泡沫。LC-MS(方法)：Rt＝7.65min；MS(ESIpos)：m/z＝2687[M+H]+。
化合物
实施例C1：2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]氨基}-2-氧代乙基N-(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(化合物1)的制备
将2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]氨基}-2-氧代乙基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/1)(中间体6)(15.0mg，13.4μmol)溶于DMF(5mL)中。添加(3R)-3-{[(4-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氨基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]丙酸(结构单元2)(9.62mg，13.4μmol)和DIEA(47μl，270μmol)。将反应在室温下搅拌15min并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离以得到化合物1(1.93mg。94％纯度，8％产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝3.81min；MS(ESIpos)：m/z＝1588[M+H]+。
实施例C2：(1S,9S)-1-乙酰胺基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基1-[(2S)-2-(甲酸根甲基)-17-{4-[({(1R)-2-甲酸根-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-4,17-二氧代-7,10,13-三氧杂-3,16-二氮杂十七烷-1-酰基]-L-脯氨酰基-L-缬氨酸二钠(化合物2)的制备
将(1S,9S)-1-乙酰胺基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯—三氟乙酸(1/1)(中间体10)(7.50mg，6.78μmol)溶于DMF(6mL)中。添加(3R)-3-{[(4-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氨基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]丙酸(结构单元2)(4.88mg，6.78μmol)和DIEA(24μl，140μmol)。将反应在室温下搅拌15min。将反应蒸发至干，并且残留物通过制备型HPLC分离以得到黄色泡沫(9.4mg，5.98μmol)，将其溶于二噁烷/H2O(1：1,3mL)中。添加氢氧化钠溶液(120μl，0.10M，12μmol)。将溶液冷冻干燥，得到化合物2(8.70mg，99％纯度，75％产率)，为无色泡沫。基于先前基于结构的验证，HPLC和LC-MS光谱中的双峰被指定为旋转异构体。LC-MS(方法6)：Rt＝2.86和2.91min；MS(ESIpos)：m/z＝1572[M+H]+。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ[ppm]:0.066(0.44),0.817(7.99),0.830(16.00),0.842(8.80),0.877(7.47),0.911(13.20),0.921(8.84),1.005(1.16),1.093(0.50),1.235(2.54),1.338(0.80),1.350(3.00),1.362(5.39),1.374(5.26),1.386(2.72),1.398(0.68),1.899(14.94),1.904(12.97),1.976(1.51),2.121(3.08),2.200(1.94),2.211(2.72),2.224(2.83),2.236(2.42),2.248(1.96),2.259(2.12),2.269(2.36),2.281(1.91),2.295(1.93),2.356(1.93),2.367(2.25),2.392(11.38),2.425(0.84),2.587(1.95),2.614(1.52),2.654(0.55),2.687(0.96),2.920(2.21),2.930(4.59),2.941(4.48),2.952(1.95),3.164(4.08),3.195(4.12),3.401(5.37),3.410(6.59),3.416(6.36),3.463(5.92),3.486(8.50),3.498(14.62),3.508(12.45),3.554(2.04),3.570(2.44),3.604(2.40),3.794(1.95),3.937(0.86),3.982(0.95),4.849(1.55),4.860(1.55),4.958(2.17),5.141(1.08),5.172(1.68),5.194(1.95),5.207(1.80),5.250(1.79),5.282(1.09),5.425(0.64),5.461(5.77),5.482(0.94),5.494(0.65),5.534(1.75),6.404(0.51),6.663(2.41),6.676(2.49),6.931(2.52),6.944(3.04),7.054(2.33),7.067(4.00),7.080(2.34),7.175(3.23),7.188(3.92),7.202(2.87),7.217(7.67),7.227(7.02),7.243(2.60),7.273(3.82),7.286(4.97),7.300(2.44),7.344(1.51),7.398(1.25),7.552(1.83),7.569(5.55),7.588(1.68),7.792(2.47),8.111(1.56),8.271(1.37),8.389(0.71),8.460(2.72),8.475(2.67),8.535(0.55),8.778(2.62),9.918(0.79),11.029(0.51)。
实施例C3：(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(化合物3)的制备
向DMF(8mL)中的(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯—三氟乙酸(1/1)(中间体15)(48.0mg，40.1μmol)的溶液中添加(3R)-3-{[(4-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氨基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]丙酸(结构单元2)(31.7mg，44.1μmol)和DIEA(28μl，160μmol)。随后将反应在室温下搅拌2小时并且随后在真空中浓缩，通过制备型HPLC纯化并且随后冻干以得到标题化合物(44.5mg，100％纯度，67％产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝4.56min；MS(ESIpos)：m/z＝1664[M+H]+。
实施例C4：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(化合物4)的制备
在室温下在EtOH(10mL)中用Pd/C 10％(2.0mg)将(1S,9S)-1-{[(苄氧基)羰基]氨基}-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(化合物3)(10.0mg，6.01μmol)氢化2小时并过滤。将滤液在真空中浓缩，随后溶解在ACN/H2O中并冻干以得到化合物4(5.50mg，92％纯度，55％产率)，为白色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝3.15min；MS(ESIpos)：m/z＝1530[M+H]+。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6):δ[ppm]＝9.16-8.94(m,1H),8.42-8.38(m,1H),8.38-8.34(m,1H),8.33(s,1H),8.16-8.10(m,1H),8.00(br s,1H),7.61(br d,1H),7.52-7.45(m,1H),7.30-7.25(m,1H),7.24(s,1H),7.24-7.22(m,1H),7.22-7.21(m,1H),7.21(br s,1H),7.20-7.18(m,4H),7.14(t,1H),6.98(d,1H),6.88(brd,1H),6.73-6.64(m,1H),6.10-6.04(m,1H),5.64(br d,1H),5.53(s,1H),5.49(d,2H),5.46(s,1H),5.41(d,1H),4.99(br d,1H),4.89(br d,1H),4.78(br dd,1H),4.74-4.66(m,1H),4.09(t,1H),3.75(br d,1H),3.70-3.63(m,1H),3.59(br t,2H),3.51-3.50(m,1H),3.54-3.50(m,4H),3.50-3.45(m,6H),3.45-3.43(m,1H),3.43-3.39(m,4H),3.39-3.38(m,3H),3.27-3.18(m,7H),3.18-3.13(m,3H),3.09-2.95(m,4H),2.72(br dd,1H),2.69-2.59(m,3H),2.54(s,16H),2.53-2.52(m,1H),2.46-2.41(m,2H),2.41-2.36(m,4H),2.36-2.31(m,2H),2.26-2.10(m,6H),2.03-1.95(m,2H),1.95-1.87(m,2H),1.51-1.33(m,4H),1.33-1.16(m,5H),1.01(s,1H),0.94(dd,5H),0.92-0.87(m,3H),0.87-0.83(m,5H)。
实施例C4b：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基1-{(2S)-2-(甲酸根甲基)-17-[4-({[(1R)-2-甲酸根-1-{3-[({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯基}磺酰基)氨基]苯基}乙基]氨基甲酰基}氨基)苯胺]-4,17-二氧代-7,10,13-三氧杂-3,16-二氮杂十七烷-1-酰基}-L-脯氨酰基-L-缬氨酸二钠(化合物4b)的制备
将3mg(2μmol)化合物4溶于二噁烷/水(1:1，2mL)中。加入氢氧化钠溶液(4μmol，0.1M)。将溶液冷冻干燥，以得到几乎无色的泡沫，即化合物4b(2mg，92％纯度，63％产率)。LC-MS：(方法6)Rt＝2.36min；MS(ESIpos)：m/z＝1530[M+H]+。
实施例C5：(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸二钠(化合物5)的制备
将(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯—三氟乙酸(1/1)(中间体18)(18.0mg，17.6μmol)溶于DMF(5mL)中。添加(3R)-3-{[(4-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氨基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]丙酸(结构单元2)(14.0mg，19.4μmol)和DIEA(61μl，350μmol)。将该批料在室温下搅拌30min。将反应蒸发至干，并且残留物通过制备型HPLC分离以得到黄色泡沫(18.5mg，12.44μmol)，将其溶于二噁烷/水(1：1，5mL)中。添加氢氧化钠溶液(24.87μmol，0.1M)。将溶液冷冻干燥以得到几乎无色的泡沫，即化合物5(19mg，100％纯度，67％产率)。LC-MS(方法3)：Rt＝3.81min；MS(ESIpos)：m/z＝1487[M+H]+。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6):δ[ppm]＝11.16-10.61(m,1H),9.99-9.90(m,1H),8.77-8.71(m,1H),8.54-8.46(m,1H),8.46-8.43(m,1H),8.43-8.40(m,1H),8.35-8.29(m,1H),8.29-8.22(m,1H),8.09-8.01(m,1H),7.78-7.69(m,1H),7.65-7.59(m,1H),7.49(s,1H),7.48(br d,1H),7.30-7.29(m,1H),7.29-7.27(m,1H),7.25-7.23(m,1H),7.24-7.22(m,1H),7.21(s,2H),7.19(s,2H),7.19-7.17(m,1H),7.08(t,1H),6.94(d,1H),6.69(br d,1H),6.28(d,2H),6.30-6.21(m,1H),5.45(s,2H),5.23-5.16(m,2H),4.99-4.95(m,1H),4.90-4.82(m,2H),4.05(br t,1H),3.80-3.75(m,1H),3.75-3.69(m,1H),3.62-3.58(m,1H),3.58-3.54(m,1H),3.50(s,4H),3.50-3.47(m,3H),3.46(brd,3H),3.42(br t,3H),3.20(br dd,3H),2.98-2.91(m,2H),2.74-2.67(m,1H),2.64-2.58(m,1H),2.54(s,9H),2.53-2.52(m,1H),2.43-2.33(m,3H),2.33-2.27(m,1H),2.26-2.21(m,1H),2.21-2.15(m,2H),2.37-2.12(m,1H),2.14-2.07(m,1H),2.04-1.98(m,1H),1.97-1.85(m,2H),1.41-1.34(m,2H),1.27-1.22(m,1H),1.03-1.00(m,1H),0.94(d,3H),0.93(brd,3H),0.91-0.85(m,3H),0.83(t,3H),0.07(d,1H)。
实施例C6：(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-{2-[{2-[{2-[({4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯基}氨基甲酰基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}-N-甲基甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(化合物6)的制备
将三氟乙酸—(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-{2-[{2-[(2-氨基乙基)(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}-N-甲基甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(1/1)(中间体28)(14.0mg，13.4μmol)溶于DMF(5mL)中。添加(3R)-3-{[(4-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氨基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]丙酸(结构单元2)(10.6mg，14.7μmol)和DIEA(47μl，270μmol)。将反应在室温下搅拌30min。将反应蒸发至干并且残留物通过制备型HPLC纯化以得到化合物6(12.4mg，93％纯度，57％产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝2.77min；MS(ESIpos)：m/z＝1511[M+H]+。
实施例C7：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]乙酰胺(化合物7)的制备
将甲烷磺酸—(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(1/1)(依喜替康甲磺酸盐)(50.0mg，94.1μmol)溶于DMF(8.8mL)中。添加1-(乙酰氧基)吡咯烷-2,5-二酮(Ac-OSu)(29.6mg，188μmol)和DIEA(66μl，380μmol)。将该批料在室温下搅拌3小时。将反应蒸发至干。随后残留物通过制备型HPLC纯化以得到化合物7(24.0mg，100％纯度，53％产率)，为浅黄色泡沫。LC-MS(方法2)：Rt＝1.35min；MS(ESIpos)：m/z＝478[M+H]+。
实施例C8：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]-2,2,2-三氟乙酰胺(化合物8)的制备
将甲烷磺酸—(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(1/1)(依喜替康甲磺酸盐)(6mg，11.3μmol)加入DMF(2mL)中。添加三氟乙酸酐(4.7mg，22.6μmol)和DIEA(2.9mg，22.6μmol)，并在室温下搅拌反应过夜。加入更多的三氟乙酸酐(20μL)和DIEA(10μL)，并继续搅拌另外48小时。将反应物在真空中浓缩，溶解在ACN/H2O中并通过制备型HPLC纯化，然后浓缩并冻干，以得到化合物8(3.20mg，100％纯度，53％产率)，为黄色残留物。LC-MS(方法2)：Rt＝1.67min；MS(ESIpos)：m/z＝532[M+H]+。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm0.882(t,J＝7.32Hz,3H)1.815-1.950(m,2H)2.150-2.256(m,1H)2.300(s,3H)2.424(s,3H)2.537(br d,J＝14.42Hz,1H)3.052-3.171(m,1H)3.242-3.337(m,2H)5.105(br s,1H)5.393-5.495(m,3H)5.705(d,J＝19.15Hz,1H)6.352-6.821(m,1H)7.347(s,1H)7.885(d,J＝10.83Hz,1H)8.437(br d,J＝4.58Hz,3H)
实施例C9：N-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]-2-(吡啶-4-基)乙酰胺(化合物9)的制备
将甲烷磺酸—(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(1/1)(依喜替康甲磺酸盐)(6.00mg，11.3μmol)加入DMF(4mL)中。随后添加(吡啶-4-基)乙酸—氯化氢(1/1)(2.35mg，13.5μmol)、HATU(6.44mg，16.9μmol)和DIEA(7.9μl，45μmol)并将反应在室温下搅拌30min。将反应在真空中浓缩并且残留物通过制备型HPLC纯化并冻干以得到化合物9(4.0mg，100％纯度，64％产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法2)：Rt＝1.12min；MS(ESIpos)：m/z＝555[M+H]+。
实施例C10：N1-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]-N2-[(吡啶-4-基)乙酰基]-L-天冬酰胺(化合物10)的制备
将三氟乙酸—N1-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-天冬酰胺(1/1)(中间体30)(5.00mg，98％纯度，7.41μmol)加入DMF(2mL)中，随后添加(吡啶-4-基)乙酸—氯化氢(1/1)(1.54mg，8.90μmol)、HATU(4.23mg，11.1μmol)和DIEA(5.2μl，30μmol)。将反应在室温下搅拌10min。将反应在真空中浓缩并且残留物通过制备型HPLC纯化并冻干以得到化合物10(2.70mg，100％纯度，54％产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法2)：Rt＝0.95min；MS(ESIpos)：m/z＝669[M+H]+。
实施例C11：N-[(吡啶-4-基)乙酰基]-L-丙氨酰基-N-甲基-L-丙氨酰基-N1-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-天冬酰胺(化合物11)的制备
将三氟乙酸—L-丙氨酰基-N-甲基-L-丙氨酰基-N1-[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]-L-天冬酰胺(中间体32)(1/1)(5.00mg，6.10μmol)加入DMF(2mL)中，随后添加(吡啶-4-基)乙酸—氯化氢(1/1)(1.27mg，7.32μmol)、HATU(3.48mg，9.15μmol)和DIEA(4.2μl，24μmol)并将反应在室温下搅拌10min。随后将其在真空中浓缩并且残留物通过制备型HPLC纯化并冻干以得到化合物11(4.0mg，100％纯度，80％产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法6)：Rt＝1.72min；MS(ESIpos)：m/z＝825[M+H]+。
实施例C12：2-{[(1S,9S)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-1-基]氨基}-2-氧代乙基N-(14-{4-[({(1S)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(化合物12)的制备
化合物12是化合物1的差向异构体，并且类似于实施例C1采用对映体结构单元10而不是结构单元2合成。产量：0.86mg(100％纯度，4％产率)。LC-MS(方法6)：Rt＝2.8min；MS(ESIpos)：m/z＝1588[M+H]+。
实施例C13：(1S,9S)-1-乙酰胺基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基1-[(2S)-2-(甲酸根甲基)-17-{4-[({(1S)-2-甲酸根-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-4,17-二氧代-7,10,13-三氧杂-3,16-二氮杂十七烷-1-酰基]-L-脯氨酰基-L-缬氨酸二钠(化合物13)的制备
化合物13是化合物2的差向异构体，并且类似于实施例C2采用对映体结构单元10而不是结构单元2合成。产量：2.7mg(97％纯度，2步产率57％)。LC-MS(方法6)：Rt＝2.89min和2.92min；MS(ESIpos)：m/z＝1572[M+H]+。
实施例C14：(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-{2-[{2-[{2-[({4-[({(1S)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯基}氨基甲酰基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}-N-甲基甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(化合物14)的制备
化合物14是化合物6的差向异构体，并且类似于实施例C6采用对映体结构单元10而不是结构单元2合成。产量：8.9mg(93％纯度，38％产率)。LC-MS(方法6)：Rt＝2.07min；MS(ESIpos)：m/z＝1511[M+H]+。
实施例C15：(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(14-{4-[({(1S)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸二钠(化合物15)的制备
化合物15是化合物5的差向异构体，并且类似于实施例C5采用对映体结构单元10而不是结构单元2合成。产量：23mg(100％纯度，83％产率)。LC-MS(方法3)：Rt＝3.80min；MS(ESIpos)：m/z＝1487[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.831(t,J＝7.43Hz,3H)0.859-0.916(m,3H)0.928(d,J＝6.65Hz,5H)1.202-1.298(m,1H)1.313-1.428(m,2H)1.862-1.956(m,2H)1.956-2.034(m,1H)2.063-2.140(m,1H)2.171-2.220(m,2H)2.220-2.285(m,1H)2.285-2.321(m,1H)2.332-2.370(m,1H)2.370-2.392(m,1H)2.525-2.562(m,8H)2.562-2.577(m,1H)2.577-2.655(m,1H)2.665-2.732(m,1H)2.903-3.029(m,2H)3.143-3.285(m,4H)3.376-3.531(m,13H)3.539-3.608(m,3H)3.663-3.818(m,2H)3.951-4.079(m,1H)4.837-4.930(m,2H)4.930-5.002(m,1H)5.184(s,1H)5.450(s,1H)6.251-6.295(m,2H)6.686(d,J＝8.02Hz,1H)6.943(d,J＝7.63Hz,1H)7.073(t,J＝7.92Hz,1H)7.172-7.195(m,1H)7.195-7.222(m,2H)7.222-7.270(m,3H)7.270-7.308(m,2H)7.445-7.476(m,1H)7.481(s,1H)7.561-7.629(m,1H)7.712-7.832(m,1H)8.023-8.097(m,1H)8.259-8.307(m,1H)8.307-8.396(m,1H)8.420-8.455(m,1H)8.520-8.620(m,1H)8.713-8.899(m,1H)9.872-10.008(m,1H)10.875-11.069(m,1H)
实施例C16：三氟乙酸(1S,9S)-9-乙基-1-(乙基氨基)-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(1/1)(化合物16)的制备
将甲烷磺酸(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(1/1)(依喜替康甲磺酸盐)(25.0mg，47.0μmol)溶于MeOH(5.0mL)中。添加碳酸氢钠(15.8mg，188.1μmol)。随后添加乙醛(10.5μl，0.188mmol)并将反应在回流下搅拌2小时。随后将反应冷却至0℃，随后添加三乙酰氧基硼氢化钠(39.9mg，188.1μmol)。将反应在室温下搅拌1小时，同时通过HPLC和LC-MS监测。将反应在真空中浓缩并且残留物通过制备型HPLC纯化以得到化合物16(10.80mg，100％纯度，40％产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法2)：Rt＝0.86min；MS(ESIpos)：m/z＝464[M+H]+。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6):δ[ppm]＝9.04-8.94(m,1H),8.77-8.65(m,1H),7.89(d,1H),7.35(s,1H),6.64-6.49(m,1H),5.55-5.50(m,1H),5.46(s,2H),5.45-5.40(m,1H),5.04(br s,1H),3.35-3.28(m,2H),3.28-3.22(m,1H),3.19-3.11(m,2H),2.77-2.64(m,1H),2.41(s,3H),2.23-2.14(m,1H),1.94-1.82(m,2H),1.20(t,3H),0.88(t,3H)。
实施例C17：(1S,9S)-1-(二乙基氨基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(化合物17)的制备
将甲烷磺酸(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(1/1)(依喜替康甲磺酸盐)(25.0mg，47.0μmol)溶于DCM(8.0mL)中。添加碳酸氢钠(7.90mg，94.1μmol)。添加乙醛(21μl，380μmol)并将反应在回流下搅拌1小时。再添加两次乙醛(21μl，380μmol)并且将反应在回流下搅拌1小时。将反应冷却至0℃，随后添加三乙酰氧基硼氢化钠(39.9mg，188μmol)。将反应在室温下搅拌20小时。将反应在真空中浓缩并通过制备型HPLC纯化以得到化合物17(20.5mg，100％纯度，89％产率)，为无色泡沫。LC-MS(方法2)：Rt＝1.22min；MS(ESIpos)：m/z＝492[M+H]+。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6):δ[ppm]＝9.35-9.28(m,2H),7.89(s,1H),7.88(s,1H),7.77-7.67(m,1H),7.35(s,2H),7.31-7.28(m,1H),6.62-6.49(m,2H),5.54-5.48(m,2H),5.46-5.44(m,1H),5.48-5.39(m,5H),5.31(br d,2H),5.36-5.23(m,1H),5.07(br d,2H),4.52-4.46(m,1H),3.43-3.27(m,7H),3.24-3.11(m,5H),3.07-2.98(m,2H),2.98-2.89(m,1H),2.83-2.79(m,1H),2.65-2.56(m,2H),2.40(br s,5H),2.44-2.28(m,5H),2.23-2.15(m,2H),2.07-1.95(m,1H),1.93-1.81(m,6H),1.34(br t,6H),1.18-1.03(m,11H),0.89(br t,8H)。
实施例C18：(1S,9S)-1-(二甲基氨基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(化合物18)的制备
类似于实施例化合物C17，从依喜替康甲磺酸盐制备(1S,9S)-1-(二甲基氨基)-9-乙基-5-氟-9-羟基-4-甲基-1,2,3,9,12,15-六氢-10H,13H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-10,13-二酮(化合物18)
LC-MS(方法4)：Rt＝1.01min；MS(ESIpos)：m/z＝464[M+H]+。
实施例C19：(1S,9S)-1-(二乙基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(化合物19)的制备
将(1S,9S)-1-(二乙基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/1)(11.8mg，80％纯度，8.43μmol)(中间体33)溶于DMF(4.6mL)中。添加(3R)-3-{[(4-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氨基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]丙酸(6.07mg，8.43μmol)(结构单元2)和N,N-二异丙基乙胺(29μl，170μmol；CAS-RN：[7087-68-5])。将反应在室温下搅拌30分钟并且随后在真空中浓缩。粗残留物通过制备型HPLC分离两次以得到化合物19(330μg，95％纯度，2％产率)，为无色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝3.65min；MS(ESIpos)：m/z＝1586[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.855(t,J＝7.43Hz,1H)0.895-0.933(m,1H)0.933-0.959(m,1H)1.056-1.104(m,1H)1.315-1.348(m,1H)1.407-1.446(m,1H)1.893-1.951(m,1H)1.964-2.005(m,1H)2.089-2.130(m,1H)2.142-2.214(m,1H)2.312-2.376(m,1H)2.376-2.429(m,1H)2.429-2.483(m,1H)2.541(s,4H)2.606-2.654(m,1H)2.678-2.741(m,1H)2.752-2.827(m,1H)2.957-3.010(m,1H)3.010-3.049(m,1H)3.091-3.131(m,1H)3.173-3.237(m,1H)3.262-3.372(m,1H)3.372-3.431(m,2H)3.569-3.621(m,1H)3.645-3.707(m,1H)3.738-3.766(m,1H)4.062-4.092(m,1H)4.761-4.781(m,1H)4.874-4.911(m,1H)4.977-5.014(m,1H)5.036-5.094(m,1H)5.305(br d,J＝19.76Hz,1H)5.494-5.523(m,1H)5.514-5.577(m,1H)6.016-6.086(m,1H)6.215-6.228(m,1H)6.630(br d,J＝8.22Hz,1H)6.899(d,J＝7.94Hz,1H)6.986(d,J＝7.63Hz,1H)7.130-7.187(m,1H)7.197(s,1H)7.232-7.258(m,1H)7.258-7.290(m,1H)7.401(br d,J＝8.41Hz,1H)7.693(d,J＝9.78Hz,1H)8.056(s,1H)8.114(br d,J＝8.61Hz,1H)8.312-8.341(m,1H)8.351(s,1H)8.753(br d,J＝0.98Hz,1H)8.762(s,1H)9.016-9.138(m,1H)10.265(s,1H)12.000-12.583(m,1H)。
实施例C20：(1S,9S)-1-(二甲基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(化合物20)的制备
将(1S,9S)-1-(二甲基氨基)-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯三氟乙酸(1/1)(10.0mg，9.16μmol)(中间体37)溶于DMF(5.1mL)中。添加(3R)-3-{[(4-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氨基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]丙酸(6.59mg，9.16μmol)(结构单元2)和N,N-二异丙基乙胺(32μl，180μmol；CAS-RN：[7087-68-5])。将反应在室温下搅拌30分钟并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离以得到化合物20(1.70mg，100％纯度，12％产率)，为无色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝3.33min；MS(ESIpos)：m/z＝1558[M+H]+。
实施例C21：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-{2-[{2-[{2-[({4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯基}氨基甲酰基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}-N-甲基甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(化合物21)的制备
将三氟乙酸(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-{2-[{2-[(2-氨基乙基)(甲基)氨基]乙基}(甲基)氨基]乙基}-N-甲基甘氨酰基-L-天冬酰胺酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(3/1)(16.0mg，12.2μmol)(中间体42)溶于DMF(4.9mL)中。添加(3R)-3-{[(4-{[(4-硝基苯氧基)羰基]氨基}苯基)氨基甲酰基]氨基}-3-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]丙酸(8.75mg，12.2μmol)(结构单元2)和N,N-二异丙基乙胺(21μl，120μmol；CAS-RN：[7087-68-5])。将反应在室温下搅拌30分钟并且随后在真空中浓缩。残留物通过制备型HPLC分离以得到化合物21(1.80mg，100％纯度，10％产率)，为黄色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝2.38min；MS(ESIpos)：m/z＝1555[M+H]+。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δppm 0.855(t,J＝7.43Hz,1H)0.888-0.950(m,3H)1.040(dd,J＝9.59,6.65Hz,1H)1.407-1.447(m,1H)1.911-1.978(m,1H)2.133-2.245(m,2H)2.286-2.347(m,1H)2.414(s,1H)2.541(s,5H)2.597-2.655(m,1H)2.708-2.900(m,3H)3.010-3.050(m,1H)3.138-3.332(m,4H)3.549-3.745(m,3H)3.788-3.872(m,1H)4.130(br t,J＝7.92Hz,1H)4.714-4.737(m,1H)4.937-5.013(m,1H)5.089-5.110(m,1H)5.443(d,J＝18.98Hz,1H)5.471-5.560(m,1H)5.698(br d,J＝18.58Hz,1H)6.287-6.309(m,1H)6.502-6.607(m,1H)6.710(br d,J＝8.41Hz,1H)6.880(d,J＝7.90Hz,1H)6.971-6.989(m,1H)7.135(s,1H)7.147(s,1H)7.161(s,1H)7.201(s,1H)7.225-7.254(m,1H)7.237(s,1H)7.258(s,1H)7.271(s,1H)7.284(s,1H)7.406(br d,J＝8.80Hz,1H)7.502(br s,1H)7.663(d,J＝10.56Hz,1H)8.060-8.071(m,1H)8.280(br d,J＝9.00Hz,1H)8.428(br s,1H)8.491-8.542(m,1H)8.637-8.743(m,1H)8.831(s,1H)8.912-9.018(m,1H)10.258(s,1H)12.188-12.440(m,1H)。
实施例C22：(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基1-[(2S)-15-{[N2,N6-双(14-{4-[({(1R)-2-甲酸根-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-赖氨酰基]氨基}-2-(甲酸根甲基)-4-氧代-7,10,13-三氧杂-3-氮杂十五烷-1-酰基]-L-脯氨酰基-L-缬氨酸三钠(化合物22)的制备
将(7S)-7-乙基-8,11-二氧代-7,8,11,13-四氢-2H,10H-[1,3]二氧杂环戊二烯并[4,5-g]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-7-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(89.0mg，34.2μmol)(中间体45)溶于二噁烷/水(1：1，30mL)中。添加氢氧化钠溶液(100μl，1.0M，100μmol)，并将溶液冷冻干燥以得到化合物22(90.0mg，100％纯度，99％产率)，为无色泡沫。LC-MS(方法6)：Rt＝3.00min；MS(ESIpos)：m/z＝1302[M+2H]2+。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ[ppm]:0.815(5.47),0.828(11.48),0.840(5.74),0.876(2.07),0.889(4.05),0.906(5.47),0.917(5.15),1.012(0.45),1.234(1.02),1.336(1.28),1.348(2.86),1.360(4.23),1.372(3.77),1.384(1.92),1.396(0.49),1.447(0.47),1.463(0.47),1.581(0.44),1.904(0.67),2.005(0.48),2.088(0.40),2.192(1.28),2.204(1.24),2.272(1.59),2.282(2.71),2.293(1.51),2.313(1.05),2.336(0.84),2.347(1.24),2.359(1.17),2.370(1.72),2.380(1.79),2.425(0.42),2.522(1.50),2.591(1.35),2.613(1.30),2.677(0.42),2.690(0.46),2.704(0.42),2.918(1.35),2.928(2.84),2.939(2.81),2.950(1.30),2.974(0.95),2.984(1.14),2.993(0.92),3.163(0.92),3.173(1.08),3.188(1.16),3.206(3.39),3.215(3.44),3.224(1.68),3.366(4.67),3.375(2.62),3.414(3.54),3.423(5.47),3.433(3.58),3.446(6.10),3.459(12.22),3.468(4.35),3.481(5.03),3.490(4.80),3.513(16.00),3.561(2.46),3.568(8.86),3.571(4.99),3.582(4.63),3.593(1.93),3.798(0.81),3.987(0.58),4.182(0.63),4.191(0.63),4.856(0.60),4.868(0.59),4.926(0.41),4.968(1.16),5.199(1.61),5.446(3.03),6.223(0.63),6.269(2.29),6.279(2.17),6.657(1.56),6.669(1.58),6.934(1.88),6.947(2.08),7.052(1.85),7.065(2.95),7.078(1.32),7.175(2.07),7.191(4.17),7.207(4.60),7.244(5.48),7.258(3.06),7.279(3.00),7.285(3.52),7.293(3.90),7.306(2.38),7.491(2.80),7.552(2.02),7.808(2.49),7.929(0.90),7.981(0.70),7.995(0.63),8.120(1.00),8.133(0.95),8.258(0.51),8.440(2.20),8.463(0.92),8.804(1.74),9.911(0.70)。
实施例C23：(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基1-[(2S)-15-{[N2,N6-双(14-{4-[({(1R)-2-甲酸根-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-赖氨酰基]氨基}-2-(甲酸根甲基)-4-氧代-7,10,13-三氧杂-3-氮杂十五烷-1-酰基]-L-脯氨酰基-L-缬氨酸三钠(化合物23)
将(1S,9S)-1-氨基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(5.50mg，2.08μmol)(中间体51)溶于二噁烷/水(1：1，2.0mL)中。添加氢氧化钠溶液(62μl，0.10M，6.2μmol)。将溶液冷冻干燥以得到化合物23(4.40mg，100％纯度，78％产率)，为无色泡沫。LC-MS(方法3)：Rt＝3.41min；MS(ESIpos)：m/z＝1323[M+2H]2+。[M+H]+。1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ[ppm]:0.815(3.66),0.828(7.76),0.840(4.04),0.877(1.35),0.889(2.55),0.907(2.55),0.918(2.95),0.925(2.07),1.005(0.52),1.234(0.89),1.339(0.95),1.351(1.92),1.363(2.75),1.374(2.54),1.387(1.34),1.399(0.40),1.897(0.60),2.211(0.77),2.222(0.63),2.268(0.89),2.279(1.69),2.290(0.94),2.324(0.58),2.335(0.68),2.369(3.63),2.518(1.75),2.521(1.73),2.587(1.06),2.612(0.97),2.652(0.41),2.699(0.41),2.924(0.92),2.934(1.91),2.945(1.92),2.956(0.95),2.981(0.81),3.204(2.70),3.214(2.68),3.363(3.45),3.412(2.53),3.421(3.80),3.430(2.32),3.449(5.16),3.460(8.63),3.479(3.55),3.488(3.45),3.511(10.47),3.566(16.00),3.580(3.11),3.590(1.24),3.769(0.42),4.180(0.47),4.190(0.46),4.375(0.50),4.867(0.61),4.879(0.47),4.962(0.78),5.366(0.50),5.398(0.58),5.472(1.19),5.479(1.05),5.583(0.51),6.153(0.56),6.675(0.94),6.687(0.94),6.934(1.28),6.947(1.38),7.057(1.21),7.070(1.86),7.083(0.78),7.178(1.81),7.186(2.78),7.189(2.57),7.200(3.21),7.237(3.94),7.252(2.13),7.275(1.67),7.288(2.13),7.301(1.02),7.526(0.66),7.545(0.60),7.594(0.88),7.747(0.59),7.794(0.65),7.911(0.64),7.952(0.55),7.965(0.46),8.053(0.44),8.300(0.46),8.398(0.88),8.758(0.85)。
实施例C24：(1S,9S)-1-乙酰胺基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基1-[(2S)-15-{[N2,N6-双(14-{4-[({(1R)-2-甲酸根-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-赖氨酰基]氨基}-2-(甲酸根甲基)-4-氧代-7,10,13-三氧杂-3-氮杂十五烷-1-酰基]-L-脯氨酰基-L-缬氨酸三钠(化合物24)的制备
将(1S,9S)-1-乙酰胺基-9-乙基-5-氟-4-甲基-10,13-二氧代-2,3,9,10,13,15-六氢-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:6,7]吲嗪并[1,2-b]喹啉-9-基N-(3-{2-[2-(2-{[N2,N6-双(14-{4-[({(1R)-2-羧基-1-[3-({3-[(丙基氨基甲酰基)氨基]苯-1-磺酰基}氨基)苯基]乙基}氨基甲酰基)氨基]苯胺基}-14-氧代-4,7,10-三氧杂-13-氮杂十四烷-1-酰基)-L-赖氨酰基]氨基}乙氧基)乙氧基]乙氧基}丙酰基)-L-α-天门冬氨酰基-L-脯氨酰基-L-缬氨酸酯(3.40mg，1.26μmol)(中间体58)溶于二噁烷/H2O(1：1，2.0mL)中。添加氢氧化钠溶液(38μl，0.10M，3.8μmol)。将溶液冷冻干燥以得到化合物24(2.14mg，92％纯度，57％产率)，为无色泡沫。LC-MS(方法6)：Rt＝3.01min；MS(ESIpos)：m/z＝1344[M+2H]2+。
生物评估：
实施例B1：存在与不存在弹性蛋白酶下的体外细胞毒性
根据标准程序用提供者推荐的培养基进行细胞培养。将总体积为100μL的细胞接种在具有白色底部的96孔板(#3610)中。在37℃和5％CO2下培养24小时时间段后，通过添加90μL新鲜培养基来交换培养基。通过将10μL培养基中的试验化合物一式三份加入细胞中开始处理。选择10-5M至10-13M的浓度范围。制备了两组相同处理的样品。一组单独用试验化合物处理，而第二组加入化合物和10nM弹性蛋白酶，然后在37℃和5％CO2下培养72小时时间段。使用MTT测定(ATCC)检测增殖。在培养期结束时，将MTT试剂加入所有样品中持续4小时。对细胞进行裂解，然后加入洗涤剂过夜。在570nm处检测到所形成的染料。未处理但在其他方面处理相同的细胞的增殖被定义为100％值。剂量响应曲线允许确定相应的IC50值，其概述在表1中。
表1.具有或不具有弹性蛋白酶的IC50值的确定
AA＝<0.01nM；A＝0.01-0.1nM；B＝0.1-1nM；C＝1.1-10nM；
D＝10-100nM；DD＝>100nM
细胞毒性测定(版本2)如上所述进行。当以自动化方式进行测定时，应用一些变化，并且改变了IC50值测定。这里，通过将测量值相对于无细胞的含有培养基的孔的吸光度值(＝-100％)和DMSO处理的细胞的吸光度(＝0％)归一化来计算细胞的代谢活性的变化，单位为百分比。AC50值(-50％处的活性浓度)通过使用GeneData Screener软件的4参数Hill拟合来确定。值在表1b中概述。
表1b.具有或没有弹性蛋白酶的AC50值的确定
A<1nM B＝1.1-10nM C＝11-100nMD>100nM n.t.＝未测试
实施例B2：在存在与不存在豆荚蛋白下的体外细胞毒性
对具有豆荚蛋白可切割残基的实施例使用相同的测定设计揭示了由于细胞培养条件，添加各自的切割酶不允许有效负荷的最佳产生。为细胞毒性测定的pH值与蛋白酶的pH最优值显著不同，这反映在表2中测得的细胞毒性效力的微小改善中。
表2：具有或没有豆荚蛋白的IC50值的确定
A<1nM B＝1.1-10nM C＝11-100nM D>100nM n.t.＝未测试
实施例B3：αvβ3结合测定
各自αvβ3抑制剂的结合亲和力以类似ELISA的方式进行测试。96孔板用玻连蛋白(1μg/ml)或纤连蛋白0.5μg/ml)涂覆，并且然后用BSA封闭未涂覆的表面空间。在将试验化合物的一系列稀释(从20μM开始，以1:5稀释)与整联蛋白的胞外结构域(2μg/ml，αvβ3或αvβ3)预孵育2h后，将溶液添加到涂覆的板中。在室温下孵育1小时和几个洗涤步骤后，在室温下加入整联蛋白特异性抗体1小时。在三个洗涤步骤后将第二过氧化物酶标记的抗体加入板中。在室温下孵育1小时后，通过快速加入SeramunBlau(50μL/孔，Seramun DiagnosticGmbH，Heidesee，Germany)展开板，并在黑暗中在室温下培养5分钟。用0.3M H2SO4(50μL/孔)停止反应，并用读板器在450nm处测量吸光度。一式两份测试每种化合物的IC50，并分析所得的抑制曲线。作为参考标准品，使用西仑吉肽(cilengitide)。该参考的αvβ3结合被用作100％值。
实施例B4：大鼠血浆中的稳定性
将1mg各自的试验化合物溶于1.5mL二甲基亚砜和1mL水的混合物中。为了完全溶解，将HPLC小瓶摇匀并用超声处理。将500μl此溶液添加到0.5mL大鼠血浆中，在37℃的温度下涡旋。在各个时间点取等分试样(每份10μL)，并通过HPLC进行分析，以确定试验化合物的量。所有数据都以t0时初始化合物的面积百分比给出。
测定缓冲液中稳定性的方法：将0.15mg测试化合物溶于0.1ml二甲基亚砜和0.4ml乙腈中。为了完全溶解，摇动和超声处理装有样品溶液的HPLC小瓶。然后加入1.0ml相应的缓冲溶液，并对样品进行涡旋。通过HPLC分析样品溶液，以确定在37℃下24小时的时间段内特定时间的测试化合物和至多两种副产物的量。t0值来自于在室温下与缓冲液涡旋后立即采集的样品。峰面积(以百分比计)用于量化。
实施例B5：内酯环稳定性
通过内酯环水解的pH依赖性开环是喜树碱类试剂中的一个问题。其是闭合内酯形式和开环羟基酸形式之间的pH依赖性平衡，在酸性pH下转移到闭合环，并在碱性条件下转移到开放形式。只有内酯形式是活性的。如图1中子图(a)所示，化合物1的内酯环可以通过水解经历开环，得到无活性的产物。在酸性条件下(图1中子图(b))，仅观察到内酯(101)的闭合形式。然而，在碱性条件下(图1中子图(c))，在LC-MS的UV轨迹中检测到闭合内酯环(102)和水解的开环形式(103)。使用本文所述的LC-MS方法，闭合和水解开放形式可通过质量区分。
如图2和图3所示，分别为化合物2和化合物4的实例，通过内酯环上羟基的酰化进行的连接体附接(例如化合物2-6和化合物13-15)稳定了闭合的内酯形式。图2和3的子图(a)分别显示了化合物2和化合物4的内酯环的闭合和开放形式之间的平衡。化合物2在酸性LC-MS条件下仅以闭合形式(201)是可检测的(图2中子图(b))。在碱性条件下(图2中子图(c))，检测到两个峰(202)，这两个峰均具有相同的质量，对应于化合物2的闭合形式。这些峰被指定为化合物2的闭合形式的旋转异构体。在碱性条件下未检测到开放形式(203)，显示出当内酯环处的羟基被酰化时的优越稳定性。化合物4显示出类似于化合物2的增强的稳定性。在酸性条件下(图3中子图(b))，通过UV和质谱法仅检测到闭合形式(301)。通过UV光谱法检测到第二峰(304)，然而没有检测到相应的质量。在碱性条件下(图3中子图(c))，通过UV光谱法检测到主峰(302)和相邻的肩峰，并且对应于与化合物4的闭合形式一致的质谱峰。与化合物2一样，在酸性或碱性条件下，通过LC-MS未检测到开放形式(303)。
这与化合物1形成对比，化合物1具有未修饰的内酯环和在1-位附接到羟基乙酰酰胺的连接体。当使用酸性洗脱液时，化合物1在LC-MS中保持稳定，但用碱性洗脱液观察到内酯环的显著水解。
酸性洗脱液的方法：系统MS：Waters TOF仪器；系统UPLC：Waters Acquity I-CLASS；色谱柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μm50x1mm；洗脱液A：1L水+0.100ml 99％甲酸(pH 3.4)；洗脱液B：1L乙腈+0.100ml 99％甲酸；梯度：0.0min 90％A→1.2min 5％A→2.0min 5％A柱温：50℃；流量：0.40ml/min；紫外线检测：210nm。
碱性洗脱液的方法：系统MS：Thermo Scientific FT-MS；系统UHPLC+：ThermoScientific UltiMate 3000；色谱柱：Waters，BEH c18 1.7μ，2.1x50mm，洗脱液A：1L水+1.0mL(25％氨)(洗脱液A的pH＝10.2)；洗脱液B：1L乙腈；梯度：0.0min 5％B→2.5min 95％B→3.5min 95％B；柱温：50℃；流量：0.90ml/min；紫外线检测：210nm/最佳积分路径210-300纳米。
实施例B6：用于测定细胞渗透性的体外试验
Caco-2：可以通过使用Caco-2细胞的通量测定中的体外测试来研究物质的细胞渗透性[M.D.Troutman和D.R.Thakker，Pharm.Res.20(8),1210-1224(2003)]。为此目的，将细胞在24孔滤板上培养15-16天。为了测定渗透性，将相应的测试物质在HEPES缓冲液中从顶部(a)或底部(B)施加至细胞，并孵育2小时。0小时后和2小时后，从顺式和反式隔室中取出样品。样品通过HPLC(Agilent 1200,Germany)使用反相柱进行分离。HPLC系统通过Turbo离子喷雾接口耦合到TripleQuadropol质谱仪API 4000(AB SCIEX DeutschlandGmbH，Darmstadt，Germany)。基于Papp值评估渗透率，该Papp值使用Schwab等人[D.Swab等人，J.Med.Chem.461716-1725(2003)]发表的公式计算。当Papp(B-A)与Papp(A-B)的比率(流出比率)大于2或小于0.5时，物质被归类为主动运输。流出比率为0.5–2的化合物被认为不是主动运输的。在表5中，提供了用于比较的参考化合物。Ref1是依喜替康甲磺酸盐，Ref2是DXd，并且Ref3是10,11-亚甲基二氧基-喜树碱(FL118)。
表5：试验化合物的Caco-2运输数据
AA 1-9 BB 10-99 CC 100-999
A＝主动运输的；B＝非主动运输的
P-糖蛋白(P-gp)测定：许多肿瘤细胞表达药物的转运蛋白，并且这通常伴随着对细胞抑制剂产生耐药性。因此，不是这种转运蛋白的底物的物质，诸如P-糖蛋白(P-gp)或BCRP，可以表现出改善的活性特征。P-gp(ABCB1)的底物的物质性质通过使用过表达P-gp的LLC-PKl细胞(L-MDRl细胞)的通量测定法来测定[A.H.Shinkel等人，J.Clin.Invest.96，1698-1705(1995)]。为此目的，LLC PKl细胞或L-MDRl细胞在96孔滤板上培养3-4天。为了测定渗透性，相应的测试物质，单独或在抑制剂(诸如伊维菌素或维拉帕米)存在下，在HEPES缓冲液中从顶部(A)或底部(B)被施加至细胞，并孵育2小时。0小时后和2小时后，从顺式和反式隔室中取出样品。使用反相柱通过HPLC分离样品。HPLC系统通过Turbo离子喷雾接口耦合到Triple Quadropol质谱仪API 3000(Applied Biosystems Applera,Darmstadt,Germany)。渗透率基于Papp值进行评估，该Papp值使用Schwab等人[D.Swab等人，J.Med.Chem.46，1716-1725(2003)]发表的公式计算。当Papp(B-A)与Papp(A-B)的流出比率大于2时，物质被归类为P-gp底物。
实施例B7：药代动力学
向雄性大鼠(n＝3)静脉给予0.5或2.0mg/kg单次剂量的测试制品，该测试制品溶于含有1％DMSO和2％乙醇的血浆中。采集连续血液样品直到给药后24小时。从血液样品中采集血浆并冷冻保存，直到进行样品分析。通过LC/MS/MS分析测试制品血浆浓度。使用非房室分析计算药代动力学参数。
实施例B8：体内异种移植研究
在SCLC小鼠异种移植模型中检查试验化合物的抗肿瘤活性。为此目的，免疫功能受损的小鼠被皮下植入肿瘤细胞或肿瘤片段。在平均肿瘤大小为20-40mm2时，将动物随机分为治疗组和对照组(n＝10只动物/组)，治疗从仅媒介物或实施例C4b或C5(制剂：磷酸盐缓冲盐水(“PBS”)；应用途径：静脉注射至尾静脉(“i.v.”))开始。连续两天进行静脉注射治疗，每天一次，随后为期五天的药物假期，而不进行任何治疗。肿瘤大小和体重每周测定两次。通过电子卡尺[长度(mm)x宽度(mm)]检测肿瘤面积。在三个3周的治疗后实验组结束。体内抗肿瘤疗效表示为在媒介物对照留在研究的最后一天时，治疗组和对照组的测量的平均肿瘤面积的T/C比(治疗/对照；治疗组的平均肿瘤面积/对照组的平均肿瘤面积)。T/C低于0.5的化合物被定义为活性(即有效)。使用GraphPadPrizm软件评估统计分析。相对于对照组进行了不配对t检验。

Claims (54)

1.一种化合物或其药学上可接受的盐，其包含经由连接体缀合至一个或多个整联蛋白结合剂(IN)的六环细胞毒性或细胞抑制配体(CT)。
2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述连接体是酶促可切割的。
3.如权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其具有由式(A)或式(C)表示的结构：
CT-EL-L1-A1(L2-IN)(L3-IN) 式(A)
CT-EL-L5-IN 式(C)
其中：
CT是六环细胞毒性或细胞抑制配体；
EL是酶促可切割连接体；任选地进一步包含自裂解基团(SIL)；
每个L1、L2、L3和L5独立地是二价连接体；
A1是三价连接体；并且
IN在每个例子中独立地是整联蛋白结合剂。
4.如权利要求1-3中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物被中性粒细胞弹性蛋白酶切割。
5.如权利要求3或4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中EL是以下式的酶促可切割的肽连接体：L-Asp-L-Pro-L-Ala、L-Asn-L-Pro-L-Ala、L-Asp-L-Pro-L-Val、L-Asn-L-Pro-L-Val、-Gly-L-Pro-L-Val-、L-Ala-L-Pro-L-Val-、L-Nva-L-Pro-L-Val-、L-His-L-Pro-L-Val-、L-Asp-L-Pro-L-Ile、L-Asn-L-Pro-L-Ile、-Gly-L-Pro-L-Ile-、L-Ala-L-Pro-L-Ile-、L-Nva-L-Pro-L-Ile-、L-His-L-Pro-L-Ile-、L-Asp-L-Pro-L-Leu、L-Asn-L-Pro-L-Leu、-Gly-L-Pro-L-Leu-、L-Ala-L-Pro-L-Leu-、L-Nva-L-Pro-L-Leu-或L-His-L-Pro-L-Leu-。
6.如权利要求1-5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其具有式(I-A)或式(I-C)的结构：
或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中：
CT是六环细胞毒性或细胞抑制配体；
E1是氢、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH、-CH2CH2C(O)OH；-CH2C(O)OR1；或-CH2CH2C(O)OR1；
E3是-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2或-CH(CH3)CH2CH3；
A1是三价连接体；
每个L1、L2、L3和L5独立地是二价连接体；
R1是取代的或未取代的C1-12烷基；其中如果R1被取代，则其被独立地选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、-L6-IN、
-C1-6烷基、-CN、-CONH2、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-COOH、-COO(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、-NHL6-IN、-N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)3 +、-NHCO(C1-6烷基)、-NHCO(IN)、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-OH、-O(C1-6烷基)、
-OC(＝O)O(C1-6烷基)、-OC(＝O)NH(C1-6烷基)、氧代、-SO3H、
-SO2(C1-6烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-6烷基)和-SO2N(C1-6烷基)2；其中L6是二价连接体；并且
IN在每个例子中独立地是整联蛋白结合剂。
7.如权利要求1-6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中IN在每个例子中是非肽整联蛋白结合剂。
8.如权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中IN在每个例子中是小分子整联蛋白结合部分。
9.如权利要求1-8中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中IN在每个例子中是αvβ3整联蛋白结合剂。
10.如权利要求1-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中IN在每个例子中具有结构：
或其药学上可接受的盐或其立体异构体，其中：
#L表示至L1、L2、L3、L5或L6的键；并且
R是氢或取代的或未取代的C1-12烷基。
11.如权利要求1-10中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(II-A)或式(II-C)的结构：
其中：
CT是六环细胞毒性或细胞抑制配体；
E1是氢、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH2C(O)NH2、-CH2C(O)OH、-CH2CH2C(O)OH；-CH2C(O)OR1；或-CH2CH2C(O)OR1；
E3是-CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2或-CH(CH3)CH2CH3；
A1是三价连接体；
每个L1、L2、L3和L5各自独立地是二价连接体；并且
R1是取代的或未取代的烷基、取代的或未取代的杂烷基、取代的或未取代的碳环或取代的或未取代的杂环；其中如果R1被取代，则其被独立地选自以下项的一个或多个基团取代：氘、卤素、
-L6-IN、-C1-6烷基、-CN、-CONH2、-CONH(C1-6烷基)、-CON(C1-6烷基)2、-COOH、-COO(C1-6烷基)、-NH2、-NH(C1-6烷基)、
-NHL6-IN、-N(C1-6烷基)2、-N(C1-6烷基)3 +、-NHCO(C1-6烷基)、
-NHCO(IN)、-N(C1-6烷基)CO(C1-6烷基)、-OH、-O(C1-6烷基)、
-OC(＝O)O(C1-6烷基)、-OC(＝O)NH(C1-6烷基)、氧代、-SO3H、
-SO2(C1-6烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-6烷基)和-SO2N(C1-6烷基)2；其中L6是二价连接体；并且IN是整联蛋白结合剂。
12.如权利要求1-11中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中CT是：
其中：
X1是-F、-Cl或-CH3；
X2是-F、-Cl或-CH3；
X3是氢；并且
X4是氢、C1-3烷基或C1-3烷基胺；
RX是氢、-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-EL2-C(O)CH2-(吡啶)；
其中EL2是酶促可切割连接体；并且
RY是氢、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基、-C(O)C1-6卤代烷基、-C(O)C1-6烷基-OH或-C(O)C1-6烷基-OCH3。
13.如权利要求1-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其具有式(III-A)、式(III-C)、式(IV-A)或式(IV-C)的结构：
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物；
其中：
RX是氢、-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-EL2-C(O)CH2-(吡啶)；
其中EL2是豆荚蛋白可切割连接体；
RY是氢、C1-6烷基、-C(O)C1-6烷基或-C(O)C1-6卤代烷基；
E1是氢、-CH2C(O)NH2或-CH2C(O)OH；并且
A1是三价连接体；并且
每个L1、L2、L3和L5独立地是二价连接体。
14.如权利要求1-13中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中L1、L2、L3和L5中的每一个独立地是取代的或未取代的C1-60烷基或1-60杂烷基，其任选地被各自独立地选自以下项的一个或多个基团取代或中断：-C(O)-、-C(O)NH-、-C(O)N(CH3)-、-C(O)O-、-NH-、-N(CH3)-、-NHC(O)-、-N(CH3)C(O)-、-NHC(O)NH-、-NHS(O)2NH-、-NHS(O)2NHC(O)-、-NHS(O)2NHC(O)O-、-O-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NH-、-S(O)2NHC(O)-、-S(O)2NHC(O)NH-、-S(O)2NHC(O)O-、杂环基和杂芳基；或其任意组合。
15.如权利要求1-14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中：
RX是氢、-C1-6烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)OBn、-C(O)CH2(吡啶)、-Asn-C(O)CH2(吡啶)或-EL2-C(O)CH2-(吡啶)；
EL2是-(L-Ala)(L-Ala)(L-Asn)-或-(L-Ala)(NMe-L-Ala)(L-Asn)-；
RY是氢、-C1-6烷基或-C(O)C1-6烷基；
E1是氢、-CH2C(O)NH2或-CH2C(O)OH；
A1是取代的或未取代的氨基酸；并且
L1、L2、L3和L5各自独立地选自(i)、(ii)或(iii)和(iv)：
(i)-C(O)-、
(ii)-(CO)m(CH2)n(OC2-6烷基)o(NH)p(CO)q-、
(iii)-(CO)r(CH2)s(NR10C2-6烷基)t(NR11)u(CO)v-；或
(iv)-(CO)r-(CH2)s-(NR10C(O)C1-6烷基)t-(NR11)u-(CO)v-；
其中：
R10在每个例子中独立地是氢或C1-3烷基；
R11在每个例子中独立地是氢或C1-3烷基；
m在每个例子中独立地是0或1；
n在每个例子中独立地是0至10的整数；
o在每个例子中独立地是0至10的整数；
p在每个例子中独立地是0或1；
q在每个例子中独立地是0或1；
r在每个例子中独立地是0或1；
s在每个例子中独立地是0至10的整数；
t在每个例子中独立地是0至10的整数；
u在每个例子中独立地是0或1；并且
v在每个例子中独立地是0或1。
16.如权利要求1-15中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中：
RX是氢、-C1-4烷基、-C(O)CH3、-C(O)CF3或-C(O)OBn；
RY是氢、-C1-4烷基或-C(O)C1-4烷基；
E1是氢、-CH2C(O)OH或-CH2C(O)NH2；
A1是取代的或未取代的氨基酸，所述取代的或未取代的氨基酸是：L-Lys、L-Glu或L-Gln；
L1是-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NH、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C1-6烷基]1-8-NH-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)-或
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)C(O)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)-；并且
每个L2、L3和L5独立地是：
-C(O)-C2-4烷基-[O-C2-6烷基]1-8-NHC(O)、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C1-6烷基]1-8-NHC(O)-、
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-或
-C(O)-C1-4烷基-[N(CH3)C(O)-C1-6烷基]1-8-N(CH3)C(O)-。
17.如权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中：
RX是氢、-CH3、-CH2CH3、-C(O)CH3或-C(O)OBn；
RY是氢、-CH3或-CH2CH3；
E1是-CH2C(O)OH或-CH2C(O)NH2；
L1是具有以下结构的二价连接体：
A1是具有以下结构的三价连接体：
L2、L3和L5中的每一个是具有以下结构的二价连接体：
其中在每个例子中每个y独立地是1、2、3、4、5、6、7或8。
18.如权利要求1-17中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中CT是：
19.如权利要求1-18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中CT是：
20.如权利要求1-18中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其为：
或
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物。
21.如权利要求1-20中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其为：
或
22.一种式(X)的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物：
其中：
XC是键、
(-L-Asn-)-、
(-L-Asp)-(L-Pro)-(L-Val-)-、
(-L-Asn)-(L-Pro)-(L-Val-)-、
(-L-Ala)-(L-Ala)-(L-Asn-)-或
(-L-Ala)-(L-N-Me-Ala)-(L-Asn-)-。
23.如权利要求22所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其中XC是键、(-L-Asn-)或(-L-Ala)-(L-N-Me-Ala)-(L-Asn-)。
24.如权利要求22或23所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物；其为：
或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物。
25.一种化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其为：
或其药学上可接受的盐。
26.一种药物组合物，其包含如权利要求1-25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；以及药学上可接受的赋形剂。
27.如权利要求1-25中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；用于制造用于治疗疾病或病症的药物。
28.如权利要求1-24中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；用作药物。
29.如权利要求1-24中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；或其立体异构体或其立体异构体的混合物；用于治疗疾病或病症。
30.如权利要求29所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中所述疾病或病症是过度增殖病症。
31.如权利要求29所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中所述疾病或病症是自身免疫病症。
32.如权利要求29所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中所述疾病或病症是眼科疾病或病症。
33.如权利要求32所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中所述眼科疾病或病症是黄斑变性。
34.如权利要求29所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中所述疾病或病症是皮肤病症。
35.如权利要求34所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中所述皮肤病症是银屑病。
36.如权利要求30所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中所述过度增殖病症是癌症(例如，侵袭性和/或转移性癌症)。
37.如权利要求36所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中所述癌症是乳腺、呼吸道、脑、生殖器官、消化道、泌尿道、眼睛、肝脏、皮肤、头颈部、甲状腺、甲状旁腺的癌症或其转移。
38.如权利要求37所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中乳腺的所述癌症是侵袭性导管癌、侵袭性小叶癌、导管原位癌、小叶原位癌、炎性乳腺癌、基底乳腺癌或三阴性乳腺癌。
39.如权利要求37所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中呼吸道的所述癌症是小细胞肺癌、非小细胞肺癌、支气管腺瘤或胸膜肺母细胞瘤。
40.如权利要求37所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中脑的所述癌症是脑干胶质瘤、下丘脑胶质瘤、胶质母细胞瘤、小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤、神经外胚层肿瘤或松果体肿瘤。
41.如权利要求37所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中生殖器官的所述癌症是前列腺癌、睾丸癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌或子宫肉瘤。
42.如权利要求37所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中消化道的所述癌症是肛门癌、结肠癌、结肠直肠癌、食道癌、胆囊癌、胃癌、胰腺癌、直肠癌、小肠癌或唾液腺癌。
43.如权利要求37所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中泌尿道的所述癌症是膀胱癌、阴茎癌、肾癌、肾盂癌、输尿管癌或尿道癌。
44.如权利要求37所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中眼睛的所述癌症是眼内黑色素瘤或视网膜母细胞瘤。
45.如权利要求37所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中肝脏的所述癌症是肝细胞癌、肝细胞癌伴或不伴纤维板层变异体、胆管癌、肝内胆管癌或混合型肝细胞胆管癌。
46.如权利要求37所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中皮肤的所述癌症是鳞状细胞癌、卡波西氏肉瘤、恶性黑色素瘤、默克尔细胞皮肤癌或非黑色素瘤皮肤癌。
47.如权利要求37所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中头颈部的所述癌症是喉癌、下咽癌、鼻咽癌、口咽癌或唇和口腔癌。
48.如权利要求36所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中所述癌症是肉瘤。
49.如权利要求48所述使用的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物，其中所述肉瘤是尤文氏肉瘤、骨肉瘤或纤维肉瘤。
50.一种治疗对象的疾病或病症的方法，包括向所述对象施用治疗有效量的如权利要求1-24中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或其立体异构体或其立体异构体的混合物。
51.如权利要求50所述的方法，其中所述疾病或病症是过度增殖病症。
52.如权利要求50所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
53.如权利要求52所述的方法，其中所述癌症是乳腺、呼吸道、脑、生殖器官、消化道、泌尿道、眼睛、肝脏、皮肤、头颈部、甲状腺、甲状旁腺的癌症或其转移。
54.如权利要求53所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌、结肠癌、肾癌或肺癌。
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