CN1183152C - 一种从南昌链霉菌发酵液中提取梅岭霉素的改进方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从南昌链霉菌发酵液中提取梅岭霉素的改进方法，该法主要包括发酵液的预处理工艺、液固分离工艺、残留在滤液中梅岭霉素的萃取回收工艺、滤饼(菌丝体)的预处理工艺、菌丝体的一步溶媒浸提与浸提液的浓缩工艺，以及浓缩浸提液的一步萃取工艺等。梅岭霉素的总回收率(以发酵液中梅岭霉素总含量为基准)可达85%以上。
Description
技术领域
本发明涉及一种从发酵液中提取抗生素的方法，特别是涉及一种从南昌链霉菌发酵液中提取梅岭霉素的方法。
背景技术
梅岭霉素(meilingmycin)为十六元大环内酯化合物，首先由江西农业大学欧阳谅等人通过南昌链霉菌发酵制备而得，具有强烈的杀螨、杀虫与驱虫效果，含量仅0.15μg/mL对桑蚕致死100％，对柑桔锈壁虱和棉红蜘蛛的LC90分别为0.24μg/mL和0.14μg/mL。是一种结构新颖、高效、广谱、低毒且具有自主知识产权的农用、兽用抗生素(CN92110534.7)。它与当今世界范围内广泛应用的农用杀虫剂阿维菌素(Avermectins)以及兽用驱虫剂伊维菌素(Ivermectins)具有相同的母核结构，而侧链结构完全不同，且某些生物学活性优于阿维菌素，因此梅岭霉素是一种结构确定、市场前景广阔而亟待开发的新型绿色生物农药。
中国专利(CN92110534.7)公开了一种用南昌链霉菌发酵生产梅岭霉素的方法，其中从发酵液中分离提取梅岭霉素的工艺，包括发酵液预处理、液固两相分离、溶媒浸提、浸提液浓缩、乙酸乙酯萃取、活性炭脱色、萃取液浓缩以及再上柱分离洗脱等步骤。其主要缺点是：
1、所说的发酵液预处理方法不当。放罐后的发酵液中杂质很多，其中因菌丝部分自溶而使发酵液变得很粘稠，给后续的分离过程带来了极大困难。不仅过滤效率很低(通常在压滤时尚需十多小时到数十小时)，而且在溶剂萃取时会产生严重的乳化现象，使水相和溶剂相不易分离，导致提取操作的困难，所以中国专利CN92110534.7采用碱液来调节发酵液的pH＝8.5-9.0是不当的。
2、液固两相分离十分困难。由于发酵液预处理失当，造成发酵液中菌丝体的部分自溶，使发酵液变得颇为粘稠，所以中国专利CN92110534.7不得不采用压滤或离心技术进行过滤。即使如此，其过滤效率仍然很低，过滤速率非常缓慢，30多升的发酵液压滤需要十多个小时。为了提高效率不得不提高压滤过程的压力，造成能耗的增大，滤布寿命的缩短，严重时会导致过滤过程中滤布的破损，达不到节留菌丝体(滤饼)的目的。而采用离心技术处理发酵液，则势必造成固定投资的明显提高。因此探索适宜的过滤条件已成为本发明的一个重要举措。
3、滤液的处理方式不妥。通常滤液中的梅岭霉素约占总量的10％左右，而滤液/发酵液＝0.6～0.7(体积比)，因滤液体积大、色素含量高而单位较低，为此中国专利CN92110534.7采用将滤液弃去的方法或采用薄膜浓缩后再用工业酒精浸提，然后再浓缩除去大部分酒精获得浓缩滤液的方法来处理。若直接弃去滤液，则势必造成梅岭霉素的无谓损失，而若采用薄膜浓缩(滤液)、酒精浸提、再浓缩、获得的浓缩滤液不仅品质差(滤液中较大部分黄色素留在浓缩液中)，而且成本过高，有点得不偿失。
4、滤饼即菌丝体的溶媒浸提过程效率低，溶剂耗量大，成本高。梅岭霉素为胞内产物，中国专利CN92110534.7按照常规采用乙醇、丙酮或乙酸乙酯等溶剂浸提菌丝体，使胞内的梅岭霉素浸提出来，但未对菌丝体进行预处理。故浸提效率较低，浸提时间太长，而且至少需要三次浸提方可达到较为理想的收率。
总之现有技术存在生产效率低，溶剂耗量大，后续工序必须对所得浸提液进行浓缩以除去溶剂，故又增加了能耗(浸提液需要浓缩至原有体积的1/20左右得到浓缩浸提液)，为此产业部门希望发明人提供一种方法来改善菌丝体的浸提条件，提高浸提效率，减少溶剂用量，以降低浸提成本。
5、浓缩浸提液的萃取过程。现有技术采用溶剂乙酸乙酯来萃取，其单级效率低，至少需要三级萃取才能满足萃取要求，造成溶剂耗量多，有效组分浓度低，而且由于该溶剂对色素的选择性差，故色素的除去率较低，需要进一步处理。
6、用活性炭脱色处理乙酸乙酯萃取液工艺没有专一性。现有技术为了除去萃取液中的黄色素采用活性炭脱色处理乙酸乙酯萃取液，因活性炭吸附为非特异性吸附，故目的产物损失较大，而且活性炭并不能完全除去色素，需要进一步处理，可见采用活性炭吸附脱色处理不是一个好方法。
7、用上柱洗脱的方法进一步处理乙酸乙酯萃取液，但由于该法速度慢，效率低，且分子筛价格昂贵，故难以大规模工业化应用。
现有技术为了提纯乙酸乙酯萃取液和进一步脱除色素，试图通过上柱分离洗脱法予以解决，因此首先将经活性炭脱色后的乙酸乙酯萃取液加热浓缩(除去乙酸乙酯)得到浓缩物，再将浓缩物溶于二氯甲烷，然后上柱通过分子筛SephadexLH-20分离，石油醚-二氯甲烷-甲醇或二氯甲烷-乙醚系统洗脱，收集的洗脱液加热浓缩后(除去上述所用的二氯甲烷等溶剂)得到仍带有黄色的油状物梅岭霉素粗品，可见分离效果仍不理想，而且提取总收率仅占放罐梅岭霉素总含量的65.3％，可见有1/3以上的有效组分损失了(参见CN1070228A第12页实施例4以及表6的记载)。
由上可见，现有技术不仅存在针对性差、工艺路线长、生产效率及收率较低等缺点，而且由于发酵液中存在大量的黄色素现有技术亦难以有效去除，所得产品品质欠佳(一种带黄色的液状粗制品)。为了使梅岭霉素这一具有诱人前景的农用、兽用抗生素早日商业化，迫切需要对现有的梅岭霉素提取工艺予以改进。
梅岭霉素为无色粉状结晶，一般条件下易溶于甲醇、乙醇、氯仿、二氯甲烷、丙酮等高介电常数有机溶剂，微溶于石油醚、正己烷和环己烷等低介电常数有机溶剂，难溶于水，而黄色素则易溶于高介电常数溶剂，在低介电常数溶剂中几乎完全不溶，但易溶于水。这些特性上的差异可以作为改进发明的基础。
本发明的目的在于克服现有技术的上述缺点，提供一种从南昌链霉菌发酵液中提取梅岭霉素的改进方法，它既能满足提取过程高效率、又能满足产物高品质的要求(产物为一种无色透明的油状物液体，通过进一步精制可以得到无色的粉状结晶的梅岭霉素)，具有工艺简单，生产效率高，能耗低等优点。
发明内容
本发明的构思如下：
1、发酵过程终止后，首先对发酵液进行酸化处理(现有技术将发酵液用NaOH溶液进行碱化处理)，用酸化剂调节发酵液的pH＝1～5，保持发酵液的品质，然后在发酵罐中通过提高发酵液的温度，并在搅拌条件下加入助滤剂等措施来改善发酵液的过滤特性，发酵液可以方便地通过真空过滤或压滤，得到滤液和滤饼两部分，其中滤饼即是菌丝体。
2、滤液在特定的条件下用低介电常数溶剂进行萃取，回收残留在滤液中的梅岭霉素，并有效地去除黄色素，获得无色透明的萃取液A。
3、菌丝体的预处理，即通过加热真空干燥，使菌丝体中含水量≤5％，若干燥至恒重则更好，可以大大地改善菌丝体的表面化学特性，当菌丝体用高介电常数溶剂浸提时，可以大大提高菌丝体内的梅岭霉素的浸出速率，一次浸提效率可达95％以上，所得浸提液经真空薄膜浓缩(除去溶剂后)得到浓缩浸提液。
4、浓缩浸提液用上述萃取液A进行液—液萃取，在特定条件下，即一定的温度、pH、盐析剂浓度下，经过液—液萃取(一级萃取)，可得萃取液B，其一步萃取率达95％，萃取液B再经浓缩(除去溶剂后)可得到无色透明的液体，即梅岭霉素粗制品。
本发明亦是这样实现的：
1、首先在南昌链霉菌的发酵过程中，使用一多参数全自动发酵罐(参见中国专利，申请号：00127307.8)通过优化过程参数和工艺条件，提高发酵液的品质，使发酵液中梅岭霉素的含量由现有技术的300μg/ml提高到500μg/ml以上(具体的发酵工艺改进，将另有专利申请公开，故本发明申请中不予以详述)。
2、发酵过程终了后，在上述发酵罐内，首先对发酵液进行预处理，用酸化剂调节发酵液的pH＝1～5，所说的酸化剂是草酸或盐酸与草酸的混合物；然后将发酵液加热升温至81～90℃，并保温10～30分钟以促使可溶性蛋白变性沉淀，可改善发酵液的过滤特性；在搅拌条件下加入1％～5％的助滤剂，以进一步改善发酵液的过滤特性，所说的助滤剂是粉状的硅藻土、珠光石、碳酸钙或纸浆中的一种。
3、将已经预处理的发酵液趁热放罐进入过滤容器中进行过滤，可以方便地得到滤液和滤饼菌丝体两部分，其中滤饼即是菌丝体；所说的过滤器可以是真空抽滤器或压滤机，过滤过程仅需1～2hr。
4、过滤所得滤液中含有10％左右的梅岭霉素和大部分的黄色素，必须分别予以回收和除去。本发明采用低介电常数溶剂(有机相)来萃取回收梅岭霉素，萃取条件为：
有机相与水相(滤液)的体积比为1，pH＝1.0～5.0，温度为5～45℃，盐析剂的重度浓度为0.5～5％，其中所说的低介电常数溶剂为环己烷、正己烷、四氯化碳、甲苯、苯、二甲苯、石油醚中的一种；所说的盐析剂是氯化钠、氯化钾、硫酸亚铁、硫酸铵中的一种，但以硫酸铵为佳。在上述萃取条件下，可高效地回收滤液中的梅岭霉素，其回收率可达95％以上。由于溶剂的选择性，黄色素则全部残留在水相中(即萃余液中)，所得萃取液A为一种无色透明的液体，供后续工艺使用。
5、过滤所得菌丝体通过预处理来改善菌丝体的表面化学特性。所说预处理是指将菌丝体在60-120℃进行真空干燥，使菌丝体中含水量≤5％，最好干燥至恒重，从而大大改善菌丝体的表面化学特性(高介电常数溶剂可快速地渗透入菌丝体内，溶解梅岭霉素后，再快速地渗透出来)。
6、预处理后的菌丝体，首先采用高介电常数溶剂在室温下实现一步浸提。由于预处理后菌丝体表面化学特性的改善，菌丝体内的梅岭霉素可高效快速地被浸提出来，梅岭霉素的一次浸提效率可达95％以上。
溶剂的用量为：每公斤菌丝体对应0.5～3.0升溶剂。浸提时得到菌丝体浸提液，经真空薄膜浓缩(回收溶剂循环使用)后，得到浓缩浸提液。所说的高介电常数溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷中的一种。
若菌丝体未做预处理，则用上述溶剂浸提，其一次浸提率不足本发明的一半。
然后将浓缩浸提液用上述所得萃取液A来进行一步液—液萃取分离，萃取时的工艺条件为：
温度： 5～45℃，
pH： 1～5，
盐析剂的重量浓度： 0.5～5％。
其中盐析剂是氯化钠、氯化钾、硫酸亚铁、硫酸铵中的一种，以硫酸铵为佳(硫酸铵用量可少至0.5％，萃余液可做肥料处理无三废)。
萃取所得萃取液B，经真空薄膜浓缩(回收溶剂循环使用)后可得到无色透明的液体，即为本发明的梅岭霉素产品(粗制品)。
总之，本发明对现有技术作了较多的改进，如发酵液的预处理，过滤条件的改善，滤液中的梅岭霉素的萃取回收，菌丝体的预处理与浸提效率的提高，特别是利用梅岭霉素与黄色素在低介电常数溶剂中分配系数的不同，并通过优选萃取条件，达到高效分离梅岭霉素与黄色素的目的，所得萃取液经浓缩(除去溶剂)即可得到无色透明的液体—梅岭霉素粗制品。
此外，由于本发明在萃取过程中可完全去除黄色素，因此现有技术中设置的活性炭脱色和分子筛分离(上柱)等工艺可全部被删除。总之，本发明与现有技术相比，不仅大大地缩短了工艺流程，提高了生产效率，而且有效组分的收率和品质均有显著提高。
具体实施方法
下面结合实施例进一步阐明本发明的内容。
实施例1
在50升多参数全自动发酵罐中通过南昌链霉菌的发酵制得含梅岭霉素的发酵液，放罐体积35升，其中梅岭霉素的单位为508μg/ml，总含量为17.78g。直接在发酵罐内进行发酵液预处理：先将发酵液进行酸化处理，用草酸调节发酵液至pH＝4.0～5.0，然后将发酵液升温至81～82℃，再在搅拌下加入1％助滤剂(重量比)，搅拌均匀后停止搅拌，保温30分钟。所说的助滤剂是粉状的硅藻土、珠光石、碳酸钙以及纸浆中的一种。趁热放料至真空过滤器，过滤得到滤液和滤饼(菌丝体)两部分，其中滤液24升(梅岭霉素含量为31μg/ml，总量为0.74g)，滤饼即菌丝体5.1kg(单位为3299μg/g，总含量为16.82g)。滤液用四氯化碳进行液—液萃取(回收滤液中梅岭霉素)，萃取时的条件为：两相体积比：四氯化碳/滤液(水相)＝1∶1；pH＝5.0；盐析剂的重量浓度为0.5％(硫酸铵0.12kg)；萃取温度为45℃，萃取后得萃取液A124升(单位为29μg/ml，总量为0.70g)，梅岭霉素萃取回收率为94.5％。菌丝体(滤饼)在120℃干燥至含水量为2％或干燥至恒重(～3.2kg)，然后用工业酒精(浓度为95％)24L浸提一次，分离后得浸提液23L(其中含梅岭霉素685μg/ml，总量为15.98g，一步浸提率为95％)，在60℃真空浓缩(回收工业酒精)，得到浸提浓缩液，然后用上述萃取液A1来萃取浸提浓缩液，萃取时pH＝5.0，温度为45℃，盐析剂(硫酸铵)的重量浓度为0.5％，萃取后得到萃取液B124升，其中梅岭霉素的单位为661μg/ml，总量为15.86g，一步萃取回收率为95.0％。萃取液B1通过真空薄膜浓缩(80℃)得到梅岭霉素粗品20.7g(其中梅岭霉素单位为732mg/g，总量为15.16g)，总回收率(以发酵液中梅岭霉素含量为基准)达85.2％。
实施例2
按照实施例1相同的方法制得相似的发酵液，放罐体积为35升(其中梅岭霉素的单位为510μg/ml，总含量为17.85g)。直接在发酵罐内进行发酵液预处理：首先加入草酸进行酸化处理，调节发酵液的pH＝1.0，然后将发酵液升温至90℃，同时在搅拌下加入2.0％(重量比)助滤剂(约0.6kg)，搅拌均匀后停止搅拌，继续保温10分钟。所说的助滤剂同实施例1。趁热放料送至真空过滤器中，过滤得到滤液和滤饼即菌丝体两部分，其中滤液24升(梅岭霉素含量为31μg/ml，总量为0.74g)，滤饼即菌丝体5.50kg(单位为3050μg/g，总量为16.78g)。滤液用环己烷或正己烷进行液—液萃取一次，萃取时条件如下：相比：环己烷或正己烷(有机相)/滤液(水相)＝1∶1(体积比)，温度为45℃，pH＝5.0，盐析剂的重量浓度为5％(～1.2kg)，所说的盐析剂为氯化钠或氯化钾。萃取后得到萃取液A224升(其中梅岭霉素单位为29.6μg/ml，总量为0.71g，梅岭霉素的一步萃取率为95.9％)。菌丝体在120℃真空干燥至含水量≤5％(重量为3.72kg)完成菌丝体的预处理，然后用溶剂三氯甲烷或二氯甲烷24L浸提一次，分离得浸提液23L(其中梅岭霉素单位为694μg/ml，总量为15.94g，其一步浸提率为95.1％)。在80℃下真空薄膜浓缩(回收溶剂)得浸提浓缩液，然后用上述萃取液A2萃取浸提浓缩液，萃取时的pH、温度、盐析剂的浓度等条件均同上述滤液萃取时的条件，萃取后得到萃取液B224升，其中梅岭霉素的单位为666μg/ml，总量为16g，其一步萃取回收率为96％。萃取液B2经薄膜浓缩(回收除去溶剂后)，得梅岭霉素粗品20.7g，其中梅岭霉素单位为739mg/g，总量为15.30g，总回收率(以发酵液中梅岭霉素含量为基准)为85.7％。
实施例3
在50升的发酵罐中，按实施例1相似方法完成发酵过程，放罐体积为32升，梅岭霉素的单位为580μg/ml，总含量为18.56g。直接在发酵罐内进行酸化处理：先加入盐酸调节发酵液的pH＝3.0，再加入草酸调节pH＝1.0，完成酸化处理后，一边将发酵液升温至85～86℃，一边在搅拌下加入5％的助滤剂，所说的助滤剂同实施例1。保温20分钟，然后趁热放料至过滤器(一种小型压滤机)，过滤得到滤液和滤饼(菌丝体)两部分，其中滤液24升(梅岭霉素的单位为35μg/ml，总量为0.84g)，滤饼即菌丝体为6.2kg(梅岭霉素的单位为2852μg/g，总量为17.68g)。滤液用甲苯(或苯、二甲苯)进行液—液萃取，萃取时的条件为：相比(体积比)：甲苯/滤液＝1∶1，温度为5℃，pH＝1，盐析剂的浓度为3％(0.72kg)，所说的盐析剂是硫酸铵，得到萃取液A324升(其中梅岭霉素的单位为32.5μg/ml，总量为0.78g，一步萃取回收率为92.8％)。过滤所得的菌丝体在80℃下真空干燥至含水量≤2％或干燥至恒重，完成菌丝体的预处理。然后用乙酸乙酯24L浸提一次，得到浸提液23L(其中梅岭霉素的单位为736μg/ml，总量为16.93g，一次浸提率为95.8％)。经薄膜浓缩(除去溶剂)得到浓缩浸提液。浓缩浸提液用上述所得萃取液A3进行液—液萃取，萃取时的条件为：pH＝1.0、温度为25℃、盐析剂的重量浓度为3％，所说的盐析剂是硫酸铵。萃取后得到萃取液B324升，其中梅岭霉素的单位为708μg/ml，总含量为16.99g(含从溶液中回收的梅岭霉素)，一步萃取率为96％。萃取液B3经薄膜浓缩(除去溶剂)得到梅岭霉素粗品20.38g，其中梅岭霉素单位为780mg/g，总量为15.9g，总回收率(以发酵液中梅岭霉素总含量为基准)达85.6％以上。
实施例4
在一50升的发酵罐中按照实施例1相似的方法完成发酵过程，放罐体积36升，发酵液中梅岭霉素的单位为587μg/ml，总含量为21.13g。直接在发酵罐中进行发酵液预处理：首用酸化剂(草酸)进行酸化处理，调节发酵液的pH＝3.0，然后将发酵液升温至85℃，同时在搅拌下加入助滤剂3％(重量比)，所说的助滤剂同实施例1。搅拌均匀后停止搅拌，再保温20分钟，趁热放料至过滤器，过滤得到滤液和菌丝体两部分，其中滤液28升(梅岭霉素的单位为30μg/ml，总量为0.84g)，滤饼即菌丝体为6.4kg(梅岭霉素的单位为3125μg/g，总量为20g)。滤液用正己烷或环己烷进行一步液-液萃取，萃取时的条件为：相比(体积比)：正己烷/滤液＝1∶1，萃取温度为15℃，pH＝3，盐析剂的重量浓度为1％，所说的盐析剂是硫酸铵、氯化钠、氯化钾中的一种，或者是它们的混合物。萃取后得到萃取液A428升(其中梅岭霉素的单位为28μg/ml，总含量为0.78g，其一步萃取率为92.8％)供后续使用。菌丝体在80℃下真空干燥至含水量≤5％，然后用甲醇24升在室温下浸提一次，得到浸提液23L，其中梅岭霉素的单位为822μg/ml，总量为18.9g，一次浸提率为94.5％。所得浸提液再经薄膜浓缩(除去溶剂，回收后循环使用)后得到浓缩浸提液。用上述所得的A4来萃取浓缩浸提液，萃取时的pH＝3.0、温度为15℃、盐析剂的重量浓度为1％，所说的盐析剂与上述滤液萃取时相同。通过液—液萃取得到萃取液B428升，其中梅岭霉素的单位为667μg/ml，总量为18.68g，一步萃取率可达95％。然后将萃取液B4进行薄膜浓缩(除去溶剂，回收后循环使用)，得到梅岭霉素粗品22.80g，其中梅岭霉素单位为794mg/g，总量为18.1g，梅岭霉素的总回收率(以发酵液中梅岭霉素总含量为基准)达85.6％。
综上所述可见，本发明通过对发酵液的预处理，大大改善了发酵液的过滤特性，提高了过滤效率。所得滤液在特定条件下用低介电常数溶剂一步萃取，其梅岭霉素的萃取回收率可达92％以上。所得滤饼即菌丝体通过预处理，大大改善了菌丝体的表面化学特性，使菌丝体内的梅岭霉素一步浸提率可达95％(用高介电常数溶剂浸提)，所得浸提液经加热浓缩除去溶剂，然后再用低介电常数溶剂萃取，在特定条件下，其梅岭霉素的一步萃取率可达95％以上，梅岭霉素的总回收率(以发酵液中梅岭霉素的总含量为基准)可达85％以上。总之，本发明的技术进步与现有技术相比是显而易见的。
Claims (1)
1、一种从南昌链霉菌发酵液中提取梅岭霉素的改进方法，该方法主要包括发酵液的预处理工艺、液固两相分离工艺、残留在滤液中的梅岭霉素萃取回收工艺、菌丝体的预处理工艺、菌丝体的一步浸提与浸提液的浓缩工艺，以及浓缩浸提液的一步萃取工艺，其特征在于：
所说的发酵液预处理工艺主要包括在发酵终了时立刻对发酵液进行酸化处理，即用酸化剂调节发酵液的pH＝1～5，其中所说酸化剂是草酸或盐酸与草酸的混合物，然后将发酵液加热升温至81～90℃，保温10～30分钟；
所说的液固分离工艺系指在搅拌条件下先向发酵液中添加1.0～5.0％的助滤剂，然后趁热将发酵液送至过滤器中过滤，其中所说的助滤剂是粉状的硅藻土、珠光石、碳酸钙或纸浆中的一种，所说的过滤器是真空过滤器或板框压滤机；
所说的残留在滤液中的梅岭霉素萃取回收工艺，是采用低介电常数溶剂进行一步萃取回收，获得萃取液A，其萃取时的工艺条件为：
两相体积比： 溶剂/滤液＝1∶1，
温度： 5～45℃，
pH： 1～5，
盐析剂的重量浓度： 0.5～5％；
其中所说的低介电常数溶剂是环己烷、正己烷、四氯化碳、苯、甲苯、二甲苯、石油醚中的一种，所说的盐析剂是氯化钠、氯化钾、硫酸亚铁、硫酸铵中的一种；
所说的菌丝体预处理工艺系指将菌丝体在60-120℃下进行真空干燥，直至菌丝体中含水量≤5％或干燥至恒重；
所说的菌丝体一步浸提与浸提液的浓缩工艺，系指将预处理的菌丝体先用高介电常数溶剂在室温下实现一步浸提，液固分离后得到浸提液，然后将浸提液在60-120℃下进行真空薄膜浓缩得到浓缩浸提液，其中所说的高介电常数溶剂是甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷中的一种；
所说的浓缩浸提液一步萃取分离工艺，系指将浓缩浸提液用滤液萃取时所得的萃取液A来进行一步液一液萃取分离，萃取时的工艺条件为：
温度： 5～45℃，
pH： 1～5，
盐析剂的重量浓度：0.5～5％；
所说的盐析剂是氯化钠、氯化钾、硫酸亚铁、硫酸铵中的一种。
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