CN118302410A - 特别用于治疗神经疾病的α-丙氨酸的氘代官能化衍生物 - Google Patents
特别用于治疗神经疾病的α-丙氨酸的氘代官能化衍生物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118302410A CN118302410A CN202280077941.8A CN202280077941A CN118302410A CN 118302410 A CN118302410 A CN 118302410A CN 202280077941 A CN202280077941 A CN 202280077941A CN 118302410 A CN118302410 A CN 118302410A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- amino
- compounds
- dcm
- dioxopyrrolidin
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 title claims abstract description 7
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 title claims abstract description 7
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical class C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 title description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 351
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical compound [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 33
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims abstract description 17
- -1 2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl-3, 4-d Chemical class 0.000 claims description 161
- QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N propionamide Chemical compound CCC(N)=O QLNJFJADRCOGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 64
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 23
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 15
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 claims description 12
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 claims description 12
- 229910052731 fluorine Chemical group 0.000 claims description 11
- 229940080818 propionamide Drugs 0.000 claims description 11
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 claims description 9
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 claims description 6
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 5
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 5
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical group FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 208000019695 Migraine disease Diseases 0.000 claims description 4
- 239000011737 fluorine Chemical group 0.000 claims description 4
- 206010027599 migraine Diseases 0.000 claims description 4
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 4
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 claims description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 2
- LKJPYSCBVHEWIU-UHFFFAOYSA-N N-[4-cyano-3-(trifluoromethyl)phenyl]-3-[(4-fluorophenyl)sulfonyl]-2-hydroxy-2-methylpropanamide Chemical compound C=1C=C(C#N)C(C(F)(F)F)=CC=1NC(=O)C(O)(C)CS(=O)(=O)C1=CC=C(F)C=C1 LKJPYSCBVHEWIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 14
- 150000001294 alanine derivatives Chemical class 0.000 abstract description 2
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 402
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 371
- 238000000034 method Methods 0.000 description 97
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical class [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 89
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 88
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 85
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 85
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 82
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 76
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 67
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 66
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 45
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 44
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 44
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 44
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 43
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 42
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 42
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 41
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N N,N′-Dicyclohexylcarbodiimide Substances C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 39
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 39
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 36
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 35
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 30
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 29
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 28
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 22
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 22
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 208000000114 Pain Threshold Diseases 0.000 description 22
- FFUAGWLWBBFQJT-UHFFFAOYSA-N hexamethyldisilazane Chemical compound C[Si](C)(C)N[Si](C)(C)C FFUAGWLWBBFQJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 230000037040 pain threshold Effects 0.000 description 22
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 20
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 18
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 18
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 17
- DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L oxaliplatin Chemical compound O1C(=O)C(=O)O[Pt]11N[C@@H]2CCCC[C@H]2N1 DWAFYCQODLXJNR-BNTLRKBRSA-L 0.000 description 17
- 229960001756 oxaliplatin Drugs 0.000 description 17
- 238000004296 chiral HPLC Methods 0.000 description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 16
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 16
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 15
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 14
- YKPUWZUDDOIDPM-SOFGYWHQSA-N capsaicin Chemical compound COC1=CC(CNC(=O)CCCC\C=C\C(C)C)=CC=C1O YKPUWZUDDOIDPM-SOFGYWHQSA-N 0.000 description 14
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000003502 anti-nociceptive effect Effects 0.000 description 13
- 229960003965 antiepileptics Drugs 0.000 description 13
- 125000004431 deuterium atom Chemical group 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000001773 anti-convulsant effect Effects 0.000 description 12
- WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N benzylamine Chemical group NCC1=CC=CC=C1 WGQKYBSKWIADBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 description 12
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 11
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 11
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 10
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 10
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical group O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000003040 nociceptive effect Effects 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 230000006742 locomotor activity Effects 0.000 description 8
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 229960002504 capsaicin Drugs 0.000 description 7
- 235000017663 capsaicin Nutrition 0.000 description 7
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000010149 post-hoc-test Methods 0.000 description 7
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 7
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 7
- QVHJQCGUWFKTSE-RXMQYKEDSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)NC(=O)OC(C)(C)C QVHJQCGUWFKTSE-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 6
- QVHJQCGUWFKTSE-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)OC(C)(C)C QVHJQCGUWFKTSE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 6
- QVHJQCGUWFKTSE-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)NC(=O)OC(C)(C)C QVHJQCGUWFKTSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 6
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 6
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 6
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 6
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 6
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 6
- LRFWYBZWRQWZIM-UHFFFAOYSA-N (2-fluorophenyl)methanamine Chemical compound NCC1=CC=CC=C1F LRFWYBZWRQWZIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010053398 Clonic convulsion Diseases 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 5
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 5
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 5
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-[4-(4-methoxyphenyl)-1,3-thiazol-2-yl]-n-(3-methoxypropyl)acetamide Chemical compound S1C(N(C(=O)CCl)CCCOC)=NC(C=2C=CC(OC)=CC=2)=C1 KZMAWJRXKGLWGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000004198 2-fluorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(F)=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 150000003949 imides Chemical group 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 210000001589 microsome Anatomy 0.000 description 4
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 4
- JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N pentaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCO JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 125000004847 2-fluorobenzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(F)=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 102100031562 Excitatory amino acid transporter 2 Human genes 0.000 description 3
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 3
- QBUGRGYVBGAIOF-QGZVFWFLSA-N N[C@@H](C(=O)N1CCN(CC1)C1=CC(=CC=C1)C(F)(F)F)C1=CC=CC=C1 Chemical compound N[C@@H](C(=O)N1CCN(CC1)C1=CC(=CC=C1)C(F)(F)F)C1=CC=CC=C1 QBUGRGYVBGAIOF-QGZVFWFLSA-N 0.000 description 3
- 206010039897 Sedation Diseases 0.000 description 3
- NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N Valproic acid Chemical compound CCCC(C(O)=O)CCC NIJJYAXOARWZEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N hydrochloric acid Substances Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 3
- 210000001853 liver microsome Anatomy 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 3
- AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N oxazine, 1 Chemical compound C([C@@H]1[C@H](C(C[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)N(C)C)[C@H](O)C[C@]21C)=O)CC1=CC2)C[C@H]1[C@@]1(C)[C@H]2N=C(C(C)C)OC1 AICOOMRHRUFYCM-ZRRPKQBOSA-N 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 230000036280 sedation Effects 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- NOLJGQIBRHILEF-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-amino-n-[(2-fluorophenyl)methyl]propanamide Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC1=CC=CC=C1F NOLJGQIBRHILEF-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- VRHPVAHXPQMOJZ-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-amino-n-benzylpropanamide Chemical compound C[C@H](N)C(=O)NCC1=CC=CC=C1 VRHPVAHXPQMOJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- JGLMVXWAHNTPRF-CMDGGOBGSA-N CCN1N=C(C)C=C1C(=O)NC1=NC2=CC(=CC(OC)=C2N1C\C=C\CN1C(NC(=O)C2=CC(C)=NN2CC)=NC2=CC(=CC(OCCCN3CCOCC3)=C12)C(N)=O)C(N)=O Chemical compound CCN1N=C(C)C=C1C(=O)NC1=NC2=CC(=CC(OC)=C2N1C\C=C\CN1C(NC(=O)C2=CC(C)=NN2CC)=NC2=CC(=CC(OCCCN3CCOCC3)=C12)C(N)=O)C(N)=O JGLMVXWAHNTPRF-CMDGGOBGSA-N 0.000 description 2
- 208000032131 Diabetic Neuropathies Diseases 0.000 description 2
- 208000001654 Drug Resistant Epilepsy Diseases 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000034308 Grand mal convulsion Diseases 0.000 description 2
- 101000866287 Homo sapiens Excitatory amino acid transporter 2 Proteins 0.000 description 2
- 208000002033 Myoclonus Diseases 0.000 description 2
- WGQKYBSKWIADBV-DYCDLGHISA-N N-deuterio-1-phenylmethanamine Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)N[2H] WGQKYBSKWIADBV-DYCDLGHISA-N 0.000 description 2
- ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N NADPH Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 2
- 206010061334 Partial seizures Diseases 0.000 description 2
- 208000037012 Psychomotor seizures Diseases 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 2
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 230000004973 motor coordination Effects 0.000 description 2
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 2
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 230000024437 response to mechanical stimulus Effects 0.000 description 2
- 230000001624 sedative effect Effects 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003419 tautomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 2
- HOBFSNNENNQQIU-SNVBAGLBSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-2-phenylacetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)C1=CC=CC=C1 HOBFSNNENNQQIU-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- VRHPVAHXPQMOJZ-MRVPVSSYSA-N (2r)-2-amino-n-benzylpropanamide Chemical compound C[C@@H](N)C(=O)NCC1=CC=CC=C1 VRHPVAHXPQMOJZ-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- KKIMDKMETPPURN-UHFFFAOYSA-N 1-(3-(trifluoromethyl)phenyl)piperazine Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(N2CCNCC2)=C1 KKIMDKMETPPURN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKIYPFZZDQLNMP-UHFFFAOYSA-N 5-pentyl-2h-tetrazole Chemical compound CCCCCC=1N=NNN=1 OKIYPFZZDQLNMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000017194 Affective disease Diseases 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000020925 Bipolar disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010152 Bonferroni least significant difference Methods 0.000 description 1
- FOTACVICOYDZSF-HXUWFJFHSA-N C(C)(C)(C)OC(N[C@@H](C(N1CCN(CC1)C1=CC(=CC=C1)C(F)(F)F)=O)C1=CC=CC=C1)=O Chemical compound C(C)(C)(C)OC(N[C@@H](C(N1CCN(CC1)C1=CC(=CC=C1)C(F)(F)F)=O)C1=CC=CC=C1)=O FOTACVICOYDZSF-HXUWFJFHSA-N 0.000 description 1
- 239000004072 C09CA03 - Valsartan Substances 0.000 description 1
- DKDQSNBVUJECIK-SNVBAGLBSA-N C[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(=O)NCc1ccccc1F Chemical compound C[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(=O)NCc1ccccc1F DKDQSNBVUJECIK-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- DKDQSNBVUJECIK-JTQLQIEISA-N C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(=O)NCc1ccccc1F Chemical compound C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(=O)NCc1ccccc1F DKDQSNBVUJECIK-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 101100112111 Caenorhabditis elegans cand-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010009346 Clonus Diseases 0.000 description 1
- 102000004328 Cytochrome P-450 CYP3A Human genes 0.000 description 1
- 108010081668 Cytochrome P-450 CYP3A Proteins 0.000 description 1
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 1
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000006792 Lennox-Gastaut syndrome Diseases 0.000 description 1
- NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N Lidocaine Chemical compound CCN(CC)CC(=O)NC1=C(C)C=CC=C1C NNJVILVZKWQKPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010026749 Mania Diseases 0.000 description 1
- 208000019022 Mood disease Diseases 0.000 description 1
- 101100329200 Mus musculus Cyp2d9 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 206010034620 Peripheral sensory neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 101100329193 Rattus norvegicus Cyp2d1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000035896 Twin-reversed arterial perfusion sequence Diseases 0.000 description 1
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L Zinc chloride Inorganic materials [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000028311 absence seizure Diseases 0.000 description 1
- 231100000987 absorbed dose Toxicity 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 208000005298 acute pain Diseases 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N aldehydo-D-glucuronic acid Chemical compound O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-QTBDOELSSA-N 0.000 description 1
- 230000003281 allosteric effect Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000001430 anti-depressive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000935 antidepressant agent Substances 0.000 description 1
- 229940005513 antidepressants Drugs 0.000 description 1
- 239000002249 anxiolytic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000949 anxiolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004638 bioanalytical method Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012707 chemical precursor Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N dcm dichloromethane Chemical compound ClCCl.ClCCl DEZRYPDIMOWBDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000003544 deproteinization Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000000632 dystonic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002085 enols Chemical class 0.000 description 1
- OLAMWIPURJGSKE-UHFFFAOYSA-N et2o diethylether Chemical compound CCOCC.CCOCC OLAMWIPURJGSKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000010227 extrahepatic metabolism Effects 0.000 description 1
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002611 lead compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229960004194 lidocaine Drugs 0.000 description 1
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003137 locomotive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- COTNUBDHGSIOTA-UHFFFAOYSA-N meoh methanol Chemical compound OC.OC COTNUBDHGSIOTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- WGQKYBSKWIADBV-ZSJDYOACSA-N n,n-dideuterio-1-phenylmethanamine Chemical compound [2H]N([2H])CC1=CC=CC=C1 WGQKYBSKWIADBV-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N reserpine Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@H]2C[C@@H]3C4=C(C5=CC=C(OC)C=C5N4)CCN3C[C@H]2C1)C(=O)OC)OC)C(=O)C1=CC(OC)=C(OC)C(OC)=C1 QEVHRUUCFGRFIF-MDEJGZGSSA-N 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 201000000980 schizophrenia Diseases 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000000932 sedative agent Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 201000005572 sensory peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000013097 stability assessment Methods 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- PJMPDSCDUZBOAC-LLVKDONJSA-N tert-butyl n-[(2r)-1-(benzylamino)-1-oxopropan-2-yl]carbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C)C(=O)NCC1=CC=CC=C1 PJMPDSCDUZBOAC-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- PJMPDSCDUZBOAC-NSHDSACASA-N tert-butyl n-[(2s)-1-(benzylamino)-1-oxopropan-2-yl]carbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC1=CC=CC=C1 PJMPDSCDUZBOAC-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- PHCBRBWANGJMHS-UHFFFAOYSA-J tetrasodium;disulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O PHCBRBWANGJMHS-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000816 toxic dose Toxicity 0.000 description 1
- 238000001946 ultra-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 229960000604 valproic acid Drugs 0.000 description 1
- SJSNUMAYCRRIOM-QFIPXVFZSA-N valsartan Chemical compound C1=CC(CN(C(=O)CCCC)[C@@H](C(C)C)C(O)=O)=CC=C1C1=CC=CC=C1C1=NN=N[N]1 SJSNUMAYCRRIOM-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 1
- 229960004699 valsartan Drugs 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
- C07D207/22—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D207/24—Oxygen or sulfur atoms
- C07D207/26—2-Pyrrolidones
- C07D207/263—2-Pyrrolidones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms
- C07D207/27—2-Pyrrolidones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals directly attached to the ring nitrogen atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/4015—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. piracetam, ethosuximide
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/06—Antimigraine agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/22—Anxiolytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/24—Antidepressants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B59/00—Introduction of isotopes of elements into organic compounds ; Labelled organic compounds per se
- C07B59/002—Heterocyclic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D207/36—Oxygen or sulfur atoms
- C07D207/40—2,5-Pyrrolidine-diones
- C07D207/404—2,5-Pyrrolidine-diones with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms, e.g. succinimide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/05—Isotopically modified compounds, e.g. labelled
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Psychology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
公开了一组化合物，特别是用于治疗神经疾病的化合物，该化合物是经修饰的丙氨酸衍生物，该经修饰的丙氨酸衍生物的结构是基于生物电子等排和用氘选择性替代氢原子而设计的。
Description
从结构的观点来看，本发明涉及作为丙氨酸的修饰的(官能化的)衍生物的化学化合物，其结构是基于生物电子等排和用氢原子的稳定同位素—氘选择性替代氢原子而设计的。这些化合物特别旨在用于治疗神经疾病(特别是癫痫和神经病理性疼痛)，并且相对于被氢原子替代的母体分子，前述化合物的特征在于在小鼠中的明显更有利的药代动力学性质，即，它们具有在血浆和脑中的明显更长的生物半衰期(t0.5)，它们更缓慢地从体内消除并且具有来自给药部位(腹膜或胃肠道)的明显更有利的吸收特性(生物利用度)。因此，作为本发明目的的所选择的氘代衍生物可用作特别用于治疗神经疾病的药物制剂的活性成分。所公开的氘代化合物相对于其结构中含有氢的类似物具有更有利的药代动力学特性，使其成为临床前和临床开发中潜在的更有前景的候选物。
技术现状
先前在一系列官能化的氨基酸衍生物中进行的研究已经揭示了具有R-构型的立体异构源中心的化合物具有特别有利的药理学性质和高于平均水平的安全范围，其中分子的中心片段由D(R)-丙氨酸形成，D(R)-丙氨酸的氨基已被引入吡咯烷-2,5-二酮环，并且羧基部分转化为苄基酰胺部分(优选具有未取代的芳环或在2-位具有氟原子)。在专利申请P.429656、PCT/PL2020/050028和专利Pat.240297中公开了这些化合物，它们的结构如图1所示。
上述专利申请所提供的化合物在癫痫动物模型中显示广谱的抗惊厥活性，这在对小鼠和大鼠的研究中得到证实。化合物1还显示出在小鼠的神经病理性疼痛模型和抑郁及焦虑模型中有效，并且在体外具有神经保护和神经营养作用。化合物1和2的独特特征是，在转棒试验中对小鼠运动协调具有最小影响，在小鼠的自发运动活动试验中没有镇静作用，没有与细胞色素P-450的CYP3A4和CYP2D9同种型的相互作用，并且对人微粒体具有非常高的代谢稳定性。考虑到上述事实，上述专利申请所公开的物质，特别是化合物1，有望成为用于治疗各种类型的癫痫(包括耐药性癫痫)、伴随情感疾病/障碍即抑郁和焦虑的癫痫、神经病理性疼痛、神经系统变性疾病(包括阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化等)的候选药物。
尽管具有极有前景的药理学性质，但由于在将上述物质腹腔内(i.p.)施用于小鼠后生物半衰期(t0.5)相对短，从而它们的应用潜力略微降低，具体地，对于化合物1而言，其在血清中约为47分钟(20mg/kg剂量)和56分钟(40mg/kg剂量)，在脑中约为57分钟(20mg/kg剂量)和75分钟(40mg/kg剂量)。对于化合物2而言，这些值如下，在血清中为34分钟(20mg/kg剂量)和33分钟(40mg/kg剂量)，在脑中为34分钟(20mg/kg剂量)和38分钟(40mg/kg剂量)(参见表1～4)。这些结果可能使得每天向人多次施用该物质成为必需。因此，上述给药方案即一天内多次应用该药物，可能导致患者对计划的药物疗法不依从或依从性差，这可能导致治疗功效降低。
考虑到上述事实，本发明解决的技术问题是提供专利申请P.429656、PCT/PL2020/050028和专利Pat.240297中公开的化合物1和2，特别是化合物1的类似物，它们具有更有利的药代动力学参数，其特征在于，尤其是具有至少80分钟的更长的血浆和脑生物半衰期(t0.5)，并且在体内(在小鼠中)进行的研究中仍然具有与母体分子1和2相似的有效且广泛基础的抗惊厥活性。
发明内容
本发明的目的是通式(I)所示的N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)丙酰胺的氘代衍生物：
其中：
A是氢或氘，其中至少一个A是氘，
B是氢或氘，
X是氢或氘或氟，
Y是氢或氘。
优选地，X是氢或氟，特别优选氟。
优选地，每个A是氘。
特别优选地，当每个A是氘时，每个B和X也是氘。优选地，每个Y是氘。
在优选的实施方案中，本发明的目的是氘代的N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)丙酰胺衍生物，其选自：
(R)-N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺(化合物d4-(R)-1，其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝H)，
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺(化合物d9-(R)-2，其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝H)，
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(2-氟苄基)丙酰胺(化合物d4-(R)-4，其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝H)，
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺(化合物d6-(R)-5，其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝D)，
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺(化合物d11-(R)-6：A＝D，B＝D，X＝D，Y＝D)，
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺(化合物d6-(R)-7，其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝D)，
(S)-N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺(化合物d4-(S)-1，其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝H)，
(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺(化合物d9-(S)-2，其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝H)，
(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(2-氟苄基)丙酰胺(化合物d4-(S)-4，其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝H)，
(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺(化合物d6-(S)-5，其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝D)，
(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺(化合物d11-(S)-6，其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝D)，
(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺(化合物d6-(S)-7，其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝D)，
(R,S)-N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺(化合物d4-(R,S)-1，其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝H)，
(R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺(化合物d9-(R,S)-2，其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝H)，
(R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(2-氟苄基)丙酰胺(化合物d4-(R,S)-4，其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝H)，
(R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺(化合物d6-(R,S)-5，其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝D)，
(R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺(化合物d11-(R,S)-6，其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝D)，
(R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺(化合物d6-(R,S)-7，其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝D)。
这些化合物在以下方案中示出：
化合物d4-(R)-1：A＝D，B＝H，X＝H，Y＝H
化合物d9-(R)-2：A＝D，B＝D，X＝D，Y＝H
化合物d4-(R)-4：A＝D，B＝H，X＝F，Y＝H
Y＝H
化合物d4-(R,S)-4：A＝D，B＝H，X＝F，
Y＝H
化合物d6-(R)-5：A＝D，B＝H，X＝H，Y＝D
化合物d11-(R)-6：A＝D，B＝D，X＝D，
Y＝D
化合物d6-(R)-7：A＝D，B＝H，X＝F，Y＝D
化合物d6-(S)-5：A＝D，B＝H，X＝H，Y＝D
化合物d11-(S)-6：A＝D，B＝D，X＝D，
Y＝D
化合物d6-(S)-7：A＝D，B＝H，X＝F，Y＝D
化合物d6-(R,S)-5：A＝D，B＝H，X＝H，
Y＝D
化合物d11-(R,S)-6：A＝D，B＝D，X＝D，
Y＝D
化合物d6-(R,S)-7：A＝D，B＝H，X＝F，
Y＝D
特别优选地，根据本发明的化合物选自由以下各项组成的组：N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)丙酰胺衍生物，其在C-2处的立体异构源中心为R-构型并且还含有氘，尤其是在通式(I)中的位置A处：
(R)-N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺(化合物d4-(R)-1，其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝H)，
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺(化合物d9-(R)-2，其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝H)，
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(2-氟苄基)丙酰胺(化合物d4-(R)-4，其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝H)，
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺(化合物d6-(R)-5，其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝D)，
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺(化合物d11-(R)-6：A＝D，B＝D，X＝D，Y＝D)，
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺(化合物d6-(R)-7，其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝D)。
在对腹腔内(i.p.)给药后的小鼠进行的药代动力学研究中，根据本发明的在酰亚胺环中含有4个氘原子的化合物d4-(R)-1(A＝D)、含有9个氘原子(包括酰亚胺环中的4个氘原子，芳环中的5个氘原子)的d9-(R)-2(A＝D，B＝D，X＝D)、含有在琥珀酰亚胺和亚甲基桥中的6个氘原子的d6-(R)-5(A＝D，Y＝D)以及含有11个氘原子的d11-(R)-6(A＝D，B＝D，X＝D，Y＝D)的特征在于，在两种剂量即20mg/kg和40mg/kg下在受试动物的血清和脑中的消除慢得多，这是由与在位置A、B、X和Y中含有氢原子的母体衍生物1(表1～4)相比，这些化合物在血浆中，特别是在脑中的生物半衰期(t0.5)明显更长(约为1.5～3倍)所支持的。在所有情况下，t0.5值均高于80分钟的最低预期值。对于作为母体化合物2的生物电子等排体的化合物d4-(R)-4和d6-(R)-7而言，观察到通过将不同数目的氘原子引入所述结构中来延长t0.5的类似且非常有益的效果。值得注意的是，从中枢神经系统中的活性的观点来看，延长t0.5(约4倍)的效果在受试动物的脑中特别明显。不明显的是，在芳环中含有5个氘原子的化合物d5-(R)-3和在侧甲基中含有3个氘原子的化合物d3-(R)-8的情况下，没有观察到t0.5的类似程度的延长，其为阴性实施例。化合物d5-(R)-3和d3-(R)-8的结构如图2所示。
所获得的结果证明了，特别地，吡咯烷-2,5-二酮环的选择性氘代，即引入4个氘原子替代4个氢原子[通式(I)中的位置A]，能够延长生物半衰期(t0.5)。类似地，在氘引入亚甲基桥[通式(I)中的位置Y]的情况下，观察到有利但稍微较弱的效果。当考虑到母体化合物1(图1)和根据本发明的由式(I)所述的氘代类似物d4-(R)-1这两者的特征还在于在体外对小鼠微粒体具有优异代谢稳定性的事实时，吡咯烷-2,5-二酮环中的选择性氘替代对t0.5的延长的上述影响甚至更不是显而易见的，并且所获得的结果表明这些物质在上述酰亚胺片段中不被代谢(参见图19)。这可能表明，由氘选择性引入吡咯烷-2,5-二酮环引起的t0.5的延长可能导致阶段II代谢转化即偶联反应(例如与葡糖醛酸、甘氨酸等)的减少，肝外代谢的抑制或未改变的药物从身体的排泄减少。上述阶段II代谢转化的减少可能是通过消除“可移动的”氢原子，阻止在体内形成对偶联反应易感的烯醇式，从而抑制了酰亚胺衍生物特有的酮-烯醇互变异构特性的结果(Valadbeigi，Y.；Farrokhpour，H。Struct.Chem.2015，26，539-545)。值得注意的是，迄今为止在文献中没有记载通过使用氢/氘生物电子等排替代来阻断酮-烯醇互变异构的方法，并且当环中留有至少一个氢原子时[即当通式(I)中至少一个A＝H时]这种方法似乎也是不可能的。
出乎意料地是，根据本发明的母体化合物1的氘代类似物即d4-(R)-1和d9-(R)-2的特征在于，在腹腔内给药后显著更高的吸收以及更好的渗透至脑内，这由以下得以证明：依赖于所施用的剂量(20或40mg/kg)的AUCinf参数的增加，即血浆增加1.4～3.2倍，脑增加1.7～2.6倍。不明显地，对于衍生物d6-(R)-5和d11-(R)-6，在两种剂量下在脑中以及仅在40mg/kg剂量下在血浆中观察到AUCinf的显著增加。应当强调的是，AUCinf的惊人增加即4.4～5.3倍(血浆)和7.5～7.9倍(脑)揭示了化合物2的氘代类似物即d4-(R)-4和d6-(R)-7。对于d5-(R)-3，在受试动物的血浆和脑中没有观察到类似的AUC增加，与母体化合物1相比，d5-(R)-3在40mg/kg剂量下测定的AUCinf在血浆中较低并且在小鼠脑中仅略高。对于d3-(R)-8也获得几乎相同的血浆和脑的AUCinf值，其仅在40mg/kg下测试(基于表1～4中总结的AUCinf值的数据)。
本发明的后续目的是如上定义的本发明的化合物，其用于制药，尤其是用于治疗或预防神经疾病、癫痫、神经系统疼痛(neurological pain)、偏头痛、抑郁、焦虑、神经系统变性疾病或神经病理性疼痛(neuropathic pain)。优选地，神经系统变性疾病是帕金森病、阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化。
附图说明
为了更好地阐明本发明的本质，由以下附图来解释说明书内容：
图1示出了现有技术化合物1和2的结构(专利申请P.429656、PCT/PL2020/050028和专利Pat.240297)。
图2示出了化合物d5-(R)-3和d3-(R)-8的结构，它们不是本发明的实施方案，并且是未显示出根据本发明获得的技术效果的比较例。
图3示出了以20mg/kg的剂量(n＝3～4)i.p.给药后，作为时间的函数的小鼠血清中母体化合物1和氘代衍生物d4-(R)-1、d9-(R)-2、d6-(R)-5及d11-(R)-6的浓度。
图4示出了以40mg/kg的剂量(n＝3～4)i.p.给药后，作为时间的函数的小鼠血清中母体化合物1和氘代衍生物d4-(R)-1、d9-(R)-2、d5-(R)-3、d6-(R)-5及d11-(R)-6的浓度。图中未示出具有与1和d5-(R)-3相同特性的化合物d3-(R)-8。
图5示出了以20mg/kg的剂量(n＝3～4)i.p.给药后，作为时间的函数的小鼠脑中母体化合物1和氘代衍生物d4-(R)-1、d9-(R)-2、d6-(R)-5及d11-(R)-6的浓度。
图6示出了以40mg/kg的剂量(n＝3～4)i.p.给药后，作为时间的函数的小鼠脑中母体化合物1和氘代衍生物d4-(R)-1、d9-(R)-2、d5-(R)-3、d6-(R)-5及d11-(R)-6的浓度。图中未示出具有与1和d5-(R)-3相同特性的化合物d3-(R)-8。
图7示出了以20mg/kg的剂量(n＝4)i.p.给药后，作为时间的函数的小鼠血清中母体化合物2和氘代衍生物d4-(R)-4及d6-(R)-7的浓度。
图8示出了以40mg/kg的剂量(n＝4)i.p.给药后，作为时间的函数的小鼠血清中母体化合物2和氘代衍生物d4-(R)-4及d6-(R)-7的浓度。
图9示出了以20mg/kg的剂量(n＝4)i.p.给药后，作为时间的函数的小鼠脑中母体化合物2和氘代衍生物d4-(R)-4及d6-(R)-7的浓度。
图10示出了以40mg/kg的剂量(n＝4)i.p.给药后，作为时间的函数的小鼠脑中母体化合物2和氘代衍生物d4-(R)-4及d6-(R)-7的浓度。
图11示出了以40mg/kg的剂量(n＝4)胃内(p.o.)给药后，作为时间的函数的小鼠血清中母体化合物2和氘代衍生物d6-(R)-7的浓度。
图12示出了以40mg/kg的剂量(n＝4)胃内(p.o.)给药后，作为时间的函数的小鼠脑中母体化合物2和氘代衍生物d6-(R)-7的浓度。
图13示出了受试化合物1和氘代衍生物d4-(R)-1、d9-(R)-2在scPTZ试验中对阵挛性癫痫的首次发作的潜伏期的影响。结果用平均值±SEM表示(每组6只小鼠)。统计分析：单因素方差分析(ANOVA)，然后进行Dunnett's事后检验：*p<0.05，**p<0.01。
图14示出了化合物d4-(R)-1在福尔马林试验的阶段I和II中的抗伤害感受活性。结果表示为第一阶段试验(福尔马林注射后0～5分钟)和第二阶段试验(福尔马林注射后15～30分钟)中的舔爪时间。数值代表一组8～10只动物的平均值±SEM。与仅给予媒介物(吐温80的1％水溶液)的对照组(Veh)相比，在统计学上具有显著性差异。单因素方差分析(ANOVA)，然后进行Dunnett's事后检验：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，****p<0.0001。
图15示出了化合物d4-(R)-1在辣椒素试验中的抗伤害感受活性，其中结果显示为注射辣椒素后5分钟内的舔爪时间。数值代表一组8～10只动物的平均值±SEM；与仅给予媒介物(吐温80的1％水溶液)的对照组(Veh)相比，在统计学上具有显著性差异。单因素方差分析(ANOVA)，然后进行Dunnett's事后检验：****p<0.0001。
图16示出了化合物d4-(R)-1在奥沙利铂诱导的神经病理性疼痛模型中的抗伤害感受活性。结果显示为在化合物给药后30分钟在von Frey试验中响应于机械性异常性疼痛的疼痛阈值。数值代表一组8～10只动物的平均值±SEM。与单独给予奥沙利铂的组相比，在统计学上具有显著性差异，单因素重复测量方差分析(ANOVA)，然后进行Dunnett's事后检验：*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。与健康动物组相比，在统计学上具有显著性差异：^p<0.05，^^p<0.01，^^^p<0.001(单因素重复测量方差分析(ANOVA)，然后进行Dunnett's事后检验)。
图17示出了化合物d4-(R)-1在链脲霉素诱导的疼痛性糖尿病神经病变模型中的抗伤害感受活性。结果显示为在化合物给药后30分钟在von Frey试验中响应于机械性异常性疼痛的疼痛阈值。对照组(0)被给予媒介物(吐温80的1％水溶液)。数值代表一组8～10只动物的平均值±SEM。与单独给予STZ的组相比，在统计学上具有显著性差异：*p<0.05，***p<0.001，****p<0.0001(单因素重复测量方差分析(ANOVA)，然后进行Bonferroni事后检验)。与对照组相比，在统计学上具有显著性差异(单因素方差分析(ANOVA)，然后进行Dunnett's事后检验)：^p<0.05，^^p<0.01。
图18示出了化合物d4-(R)-1对动物的自发运动活动的影响。结果显示为在30分钟的测量期间红外光束中断的数量。数值代表一组8～10只动物的平均值±SEM。与对照组相比，在统计学上具有显著性差异(单因素重复测量方差分析(ANOVA)，然后进行Dunnett's事后检验)：**p<0.01。Veh为吐温80的1％水溶液。
图19示出了母体化合物1(A)和氘代类似物d4-(R)-1(B)的与MLMS孵育120分钟后的UPLC图谱。
发明的详细说明
本发明公开了先导化合物1和2的类似物(图1)，其特征在于，在血浆和脑中具有更长的生物半衰期(t0.5)—即超过80分钟，更好的脑渗透(AUC)，以及在小鼠的临床前研究中具有类似或更有效的抗惊厥活性。使用氢/氘生物电子等排替代来设计所公开的化合物，并且在所进行的化学研究中提出将氘分别引入母体分子1和2的三个或两个位点。氘的引入包括根据式(I)的结构的以下片段：(I)吡咯烷-2,5-二酮环(在位置A替代)；(ii)亚甲基部分(在位置Y替代)；(iii)苄胺芳环(在位置B和X替代)。在进行的化学研究中，还合成了化合物1的氘代类似物，在其结构中引入三个氘原子替代侧甲基的氢原子(参见图2中的化合物d3-(R)-8)。
式(I)化合物具有手性中心，本发明的范围尤其包括具有R-构型的对映异构体，其可被认为是专利申请P.429656、PCT/PL2020/050028和专利Pat.240297中公开的化合物1和2的生物电子等排体。这些化合物可以通过使用起始原料的合适的异构体形式(氨基酸衍生物)获得，或者它们可以在制备最终化合物之后根据已知的分离方法分离。
化学研究：
根据本发明的式(I)化合物可以根据四步程序使用可商购的试剂作为起始物质获得，所述起始物质即具有所期望的绝对构型(R、S或R,S)的丙氨酸的叔丁氧基羰基(Boc)衍生物、苄胺(或其氘代衍生物-d2-苄胺、d5-苄胺或d7-苄胺)或2-氟苄胺(或其氘代衍生物-d2-2-氟苄胺)以及琥珀酸酐(或其氘代类似物-d4-琥珀酸酐)。合成程序和示例性反应条件在方案1中例示出。在第一步中，苄胺或2-氟苄胺(或它们各自的氘代衍生物)与用叔丁氧基羰基保护的具有适当的绝对构型(R、S或R,S)的丙氨酸进行缩合反应，作为其结果，获得式(IV)的中间体，然后将其脱保护以形成式(III)的化合物。在下一步中，式(III)的化合物用于与合适的琥珀酸酐(或d4-琥珀酸酐)进行缩合反应以得到式(II)的酰氨基-酸化合物，然后将其环化以形成通式(I)化合物。
以良好的产率(>82％)获得中间体和最终化合物。通过LC/MS方法测定中间体和最终产物的伪分子离子质量。通过1HNMR和13CNMR图谱分析确认最终化合物的结构。通过UPLC测定最终化合物的纯度，最终产物的纯度>99％。通过手性HPLC确认对映体纯度为>99％ee。药代动力学研究：
从表1～4中的药代动力学数据可以看出，无氘的母体化合物1和2在所研究的剂量范围内显示出非线性药代动力学，这由曲线下的面积的不成比例的增加来证明(对于化合物1，剂量增加2倍分别导致动物的血清和脑中AUCinf增加约2倍和1.4倍，对于化合物2，剂量增加2倍分别导致动物的血清和脑中AUCinf增加4.1倍和2.4倍)。在根据本发明的氘代衍生物d4-(R)-1的情况下，观察到AUCinf比率随剂量的增加不成比例地增加2.8倍，但仅在血清中，这可能表明该化合物的消除过程饱和。作为本发明优选实施方案的在结构中含有不同数目的氘原子的其它衍生物的特征在于，在测试的剂量范围内呈非线性药代动力学，并且剂量的加倍导致受试动物的血清中AUCinf增加1.7倍(d4-(R)-4)、2.3倍(d6-(R)-5)和1.8-倍(d6-(R)-7)以及脑中AUCinf增加2.5倍(d6-(R)-5)和5.2倍(d11-(R)-6)。与上述数据相反，本发明的化合物d9-(R)-2表现出线性药代动力学过程(在小鼠的血清和脑中剂量加倍后，面积比为1.9)。在血浆中观察到化合物d11-(R)-6的类似的线性(剂量加倍后面积比为2.0)。令人惊奇的是，在结构中含有氟原子的类似物即d4-(R)-4和d6-(R)-7的情况下，剂量加倍导致受试动物的脑中AUCinf值的略微增加(1.1倍)或降低。
有趣的是，仅在芳环中含有5个氘原子的d5-(R)-3衍生物和化合物d3-(R)-8(其中用-CD3基团替代母体化合物1的-CH3基团)的特征在于，与母体物质1相比，在受试动物的血清和脑中具有类似的浓度-时间特征谱和类似的药代动力学参数值(表2和4)。对于这些衍生物，仅以40mg/kg的剂量进行研究。因此，化合物d5-(R)-3和d3-(R)-8可被认为是阴性实施例，其中氘原子的引入没有导致化合物1的药代动力学特性的改善。作为本发明优选实施方案的所有衍生物，即d4-(R)-1、d9-(R)-2、d4-(R)-4、d6-(R)-5、d11-(R)-6和d6-(R)-7的特征在于，从受试动物的血清和脑中的消除慢得多，这可由这些化合物的显著更长的超过80分钟的生物半衰期(t0.5)来证明，与所用剂量无关(20或40mg/kg)。对于化合物d4-(R)-1、d9-(R)-2、d6-(R)-5和d11-(R)-6，与1和反例d5-(R)-3和d3-(R)-8相比在血浆和脑中的t0.5增加至少1.5倍。对于起始化合物2的氘代类似物即d4-(R)-4、d6-(R)-7，观察到t0.5的明显更显著的延长，在血浆中为至少2.6倍，在脑中为至少2.5倍。有趣且非显而易见的是，在优选的实施方案中，将氘引入分子1中增加了脑中的AUCinf参数，但不显著改变所测试的化合物的Cmax值。对于反例d5-(R)-3和d3-(R)-8没有观察到类似的关系。作为本发明特别优选实施方案的目标的氘代衍生物，即d4-(R)-1、d9-(R)-2、d4-(R)-4、d6-(R)-5、d11-(R)-6和d6-(R)-7，其特征还在于与母体分子1和2以及反例d5-(R)-3和d3-(R)-8相比，具有显著更长的平均滞留时间(MRT)，即血清中(>133分钟)和脑中(>148分钟)。
对于化合物d6-(R)-7，将其以40mg/kg的剂量胃内(p.o.)施用于小鼠，观察到氘引入分子中的类似有益的同位素效应。将d6-(R)-7与母体化合物2所获得的特征谱和药代动力学参数进行比较(参见表5、图11和12)，表明氘代化合物具有显著更好的生物利用度(AUCinf)、略微更高的血浆和脑浓度以及更长的平均滞留时间。
图3示出了以20mg/kg(i.p.)的剂量给药后在小鼠血清中受试化合物1、d4-(R)-1、d9-(R)-2、d6-(R)-5和d11-(R)-6的浓度-时间特征谱，图4示出了以40mg/kg(i.p.)的剂量给药后在小鼠血清中受试化合物1、d4-(R)-1、d9-(R)-2、d5-(R)-3、d6-(R)-5和d11-(R)-6的浓度-时间特征谱，图5示出了以20mg/kg(i.p.)的剂量给药后在小鼠脑中受试化合物1、d4-(R)-1、d9-(R)-2、d6-(R)-5和d11-(R)-6的浓度-时间特征谱，图6示出了以40mg/kg(i.p.)的剂量给药后在小鼠脑中受试化合物1、d4-(R)-1、d9-(R)-2、d5-(R)-3、d6-(R)-5和d11-(R)-6的浓度-时间特征谱，图7示出了以20mg/kg(i.p.)的剂量给药后在小鼠血清中受试化合物2、d4-(R)-4和d6-(R)-7的浓度-时间特征谱，图8示出了以40mg/kg(i.p.)的剂量给药后在小鼠血清中受试化合物2、d4-(R)-4和d6-(R)-7的浓度-时间特征谱，图9示出了以20mg/kg(i.p.)的剂量给药后小鼠脑中受试化合物2、d4-(R)-4和d6-(R)-7的浓度-时间特征谱，图10示出了以40mg/kg(i.p.)的剂量给药后小鼠脑中的受试化合物2、d4-(R)-4和d6-(R)-7的浓度-时间特征谱，图11示出了以40mg/kg(p.o.)的剂量给药后在小鼠血浆中受试化合物2和d6-(R)-7的浓度-时间特征谱，图12示出了以40mg/kg(p.o.)的剂量给药后在小鼠脑中受试化合物2和d6-(R)-7的浓度-时间特征谱。
值得注意的是，在化合物d4-(R)-KA-104的情况下，没有观察到将四个氘原子引入吡咯烷-2,5-二酮环中的类似且明显有益的同位素效应，化合物d4-(R)-KA-104从化学观点来看是化合物(R)-6的氘代类似物，其公开于专利申请P.428485和PCT/PL2020/050001中。应注意，d4-(R)-KA-104中的氘代酰亚胺片段与本申请中所公开的化合物(其为本发明的优选实施方案的实例)所观察到的氘代酰亚胺片段类似。对上述两种物质即(R)-6和d4-(R)-KA-104进行的药代动力学研究表明，与琥珀酰亚胺环中含有四个氢原子的母体化合物-(R)-6相比，以40mg/kg的剂量腹腔内施用于小鼠的d4-(R)-KA-104仅具有稍微较长的生物半衰期(t0.5)和平均滞留时间(MRT)以及稍微较高的生物利用度(AUCinf)。母体分子(即(R)-6)、氘代类似物d4-(R)-KA-104的化学结构和药代动力学研究数据如表6所示。
表5.以40mg/kg的剂量p.o.给药后，使用非房室模型分析计算的在小鼠中母体化合物2和氘代类似物d6-(R)-7的药代动力学参数。
药代动力学参数—参见表1。将物质溶于DMSO、PEG400和注射用水(1：4：5，v/v/v)的混合物中。
表6.化合物(R)-6和d4-(R)-KA-104的结构以及以40mg/kg的剂量i.p.给药后，使用非房室模型分析计算的在小鼠血清中受试化合物的药代动力学参数。
*化合物(R)-6的结构已经公开在专利申请P.428485和PCT/PL2020/050001中。药代动力学参数—参见表1。将物质溶于DMSO、PEG400和注射用水(1：4：5，v/v/v)的混合物中。
方法学部分记载了先前未被公开的新获得的衍生物d4-(R)-KA-104的合成程序和物理化学数据。该化合物是专利申请P.428485和PCT/PL2020/050001中公开的化合物(R)-6的选择性氘代类似物，也是本发明的目标。
抗惊厥活性：
本发明的另一个目的是由式(I)所述的化合物的应用，特别是作为本发明优选实施方案的d4-(R)-1、d9-(R)-2、d4-(R)-4、d6-(R)-5、d11-(R)-6和d6-(R)-7，作为药物制剂中的活性物质，特别用于治疗癫痫或神经病理性疼痛或偏头痛或抑郁或焦虑或神经系统变性疾病(阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化等)。根据本发明的氘代化合物以及在专利申请P.429656、PCT/PL2020/050028和专利Pat.240297中公开的它们的氢生物电子等排体在广范的动物模型中显示抗惊厥活性，并且可以用作用于治疗癫痫的各种药物剂型的活性成分。基于专利申请P.429656、PCT/PL2020/050028和专利Pat.240297中公开的母体化合物1和2的各个立体异构体的生物学数据，可以预期本申请中公开的含有氘的化合物的S-对映异构体和外消旋混合物(R,S)会具有广谱然而与R-优映体相比较弱的抗惊厥活性。
作为本发明特别优选的实施方案的化合物d4-(R)-1、d9-(R)-2、d4-(R)-4、d6-(R)-5、d11-(R)-6和d6-(R)-7表现出广谱抗惊厥活性，即当腹腔内施用于小鼠时，它们在最大电休克癫痫发作试验(MES)、6Hz(32mA和44mA)癫痫发作试验和皮下戊四唑癫痫发作试验(scPTZ，该试验公开了化合物d4-(R)-1、d9-(R)-2的数据)中均有效(表6)。具有这种药理学特性的物质在广谱的人癫痫发作中可能是潜在有效的，即伴有或不伴有继发性全身性的强直阵挛性癫痫发作、肌阵挛性癫痫发作、全身性失神性癫痫发作、局灶性癫痫发作和耐药性癫痫。在腹腔内给药后0.5小时的时间点，所有含氘衍生物在MES、6Hz(32mA)和6Hz(44mA)试验/模型中是有效的。化合物d4-(R)-1和d9-(R)-2在scPTZ试验中也是有效的，并且效力与对于母体物质1观察到的活性相当。令人惊讶地，在本发明的优选实施方案中，与母体化合物1和2相比，氘代衍生物的特征在于在MES试验中具有更强的活性，MES试验始终是用于鉴定新型抗癫痫药物的候选物的最重要的癫痫发作动物模型之一(Castel-Branco，M.M.等人，Methods Find.Exp.Clin.Pharmacol，2009，31，101-106)。此外，作为本发明的特别优选的实施方案的氘代化合物d4-(R)-1、d9-(R)-2、d4-(R)-4、d6-(R)-5、d11-(R)-6和d6-(R)-7在i.p.给药后2h的附加时间点在所有癫痫发作试验/模型中是有效的，而母体分子1(特别是)和2在该时间间隔内活性较低或无活性。这无疑证明了，氘的引入，特别是将氘引入到吡咯烷-2,5-二酮环(位置A，式I)，而且也引入到亚甲基桥(位置Y，式I)，对药代动力学特性具有积极作用并允许生物半衰期(t0.5)的显著延长，这导致氘代化合物相对于母体物质1和2延长了有效的抗惊厥保护。与来自癫痫发作试验/模型的数据相关的所获得的药代动力学特性的PK/PD分析表明，尤其是化合物d4-(R)-4和d6-(R)-7提供了最有利的PK/PD性质，它们是化合物2的氘代衍生物。特别值得注意的是以下事实：所有公开的化合物，特别是d4-(R)-4和d6-(R)-7在6Hz(44mA)试验中具有强的保护作用，6Hz(44mA)试验被认为是用于鉴定在耐药性癫痫的治疗中潜在有效的物质的最重要的动物模型之一(Metcalf,C.等人，Epilepsia2017,1073–1084；Barton,M.E.等人，Epilepsy Res.2001,47,217–227)。此外，氢和氘的几乎相同的物理化学性质表明，如在抗惊厥活性的情况下，本文应用的生物电子等排替代将至少保持母体分子1的抗抑郁、抗焦虑、镇痛、神经保护和神经营养活性，母体分子1在专利申请P.429656，PCT/PL2020/050028和专利Pat.240297中公开。考虑到上述事实，还提出所公开的含氘衍生物具有与其化学前体1和2相同的作用机制，即它们是EAAT2谷氨酸转运蛋白的正向选择性变构调节剂(Abram,M.等人，J.Med.Chem.2022,65,11703–11725)。值得注意的是，根据文献数据，通过增加EAAT2在神经胶质细胞上的表达而直接或间接增加EAAT2活性的化合物是治疗神经(包括神经系统变性)和精神疾病的有前景的候选物，所述疾病即肌萎缩侧索硬化、多发性硬化、帕金森病、阿尔茨海默病、亨廷顿病、精神分裂症、神经病理性疼痛、焦虑、抑郁、缺血性卒中、癫痫等(Fontana,A.C.K.J.Neurochem.2015,134,982–1007；Pajarillo,E.et al.Neuropharmacology 2019,161,107559；Rosenblum,L.T.；Trotti,D.Adv.Neurobiol.2017,16,117–136；John,C.S.et al.Neuropsychopharmacology2015,40,1700–1708；Zaitsev,A.V.et al.CNSDrugs2020,34,1089–1103；Green,J.L.etal.Biochem.Pharmacol.2021,193,114786；Temmermand,R.et al.Pharmacol.Res.2022,185,106492)。
同样重要的是，所有化合物d4-(R)-1、d9-(R)-2、d4-(R)-4、d6-(R)-5、d11-(R)-6和d6-(R)-7在给出的癫痫发作试验/模型中显示出比丙戊酸(VPA，表6)显著更高的活性，丙戊酸是具有广范的治疗适应症的模型抗癫痫药物，包括：全身性癫痫发作(肌阵挛性癫痫发作、强直性阵挛性癫痫发作、失张力性癫痫发作、失神性癫痫发作)、局灶性癫痫发作(简单或复杂癫痫发作、继发性全身性癫痫发作)、Lennox-Gastaut综合征、双相障碍中躁狂发作的治疗和偏头痛。
图13示出了所选的化合物即d4-(R)-1和d9-(R)-2在scPTZ试验中对阵挛性癫痫发作的初次发作的潜伏期的影响。与对照组相比，化合物d4-(R)-1和d9-(R)-2以剂量依赖性方式增加了阵挛性癫痫发作的初次发作的潜伏时间。对于化合物d4-(R)-1以40mg/kg和60mg/kg的剂量获得了统计学上显著的结果(潜伏时间的延长：分别从740±212.5秒延长至1399±207.5秒，p<0.05以及从740±212.5秒延长至1789±11.2秒，p<0.01)，并且对于化合物d9-(R)-2以60mg/kg的剂量获得了统计学上显著的结果(从740±212.5秒延长至1632±167.8秒，p<0.05)。母体化合物1在40mg/kg和60mg/kg的剂量下统计学上显著增加了潜伏期(分别从740±212.5秒延长至1568±150.9秒，p<0.05以及从740±212.5秒延长至1467±210.8秒，p<0.05)。与化合物d4-(R)-1和d9-(R)-2不同，母体衍生物1观察到的效果不是剂量依赖性的。
抗伤害感受活性：
作为本发明特别优选的实施方案的化合物d4-(R)-1，除了抗惊厥活性外，还在许多疼痛试验/模型中表现出抗伤害感受活性，所述疼痛试验/模型即福尔马林诱导的持续性疼痛试验、辣椒素诱导的疼痛试验和神经病理性疼痛模型，即奥沙利铂(OXPT)诱导的周围神经病和链脲霉素(STZ)诱导的糖尿病性神经病模型。
在福尔马林试验中镇痛活性的评价
通过向小鼠足底内注射20μL恒定体积的2.5％福尔马林溶液，用化学剂诱导疼痛。将动物置于单独的透明观察室中30分钟。测量值是经福尔马林处理的爪的总的舔咬时间。在两个时间间隔中对伤害感受反应进行计数：从福尔马林注射开始的0～5分钟(试验的阶段I-急性疼痛)和从其给药开始的15-30分钟(试验的阶段II-炎性疼痛)。将观察到的伤害感受反应的抑制—缩短舔咬爪子的时间—解释为受试化合物的镇痛作用。
在福尔马林试验中，腹腔内给药的d4-(R)-1在试验的两个阶段都显示出强效的镇痛活性(图14)。对照组的平均伤害感受反应在试验的第一阶段和第二阶段分别为66.72±6.56秒和191.40±20.46秒。化合物d4-(R)-1在所有测试剂量下将福尔马林试验的第一阶段中的伤害感受反应降低至基线(即对照)的46.80％(30mg/kg的剂量)、49.85％(60mg/kg的剂量)、64.40％(90mg/kg的剂量)和39.68％(120mg/kg的剂量)，对于三个剂量30、60和120mg/kg观察到统计学上显著的效果。在对应于强直性炎性疼痛的试验的第二阶段中，化合物d4-(R)-1将伤害感受反应降低至基线(即对照)的46.04％(30mg/kg的剂量)、56.06％(60mg/kg的剂量)、43.36％(90mg/kg的剂量)和30.24％(120mg/kg的剂量)。基于所获得的结果，计算ED50剂量(使伤害感受反应减少50％的剂量)。ED50值分别为97.9mg/kg(阶段I)和71.5mg/kg(阶段II)。
在辣椒素诱导的疼痛模型中镇痛活性的评价
该试验评价了在足底内注射20μL恒定体积中的1.6μg辣椒素后，后爪的舔和/或咬的时间。在辣椒素给药后5分钟内进行观察。伤害感受反应的抑制—缩短舔咬爪子的时间—为受试化合物的抗伤害感受活性的量度。
对照组的伤害感受反应为66.50±3.94秒。腹腔内给药的化合物d4-(R)-1在所有剂量下分别将伤害感受反应统计学上显著降低至初始值(即对照)的31.77％(30mg/kg的剂量)、38.72％(60mg/kg的剂量)、10.90％(90mg/kg的剂量)。其ED50值为17.5mg/kg(图15)。
奥沙利铂(OXPT)诱导的周围神经病模型-von Frey试验
通过von Frey方法(Frey仪器/纤维，Bioseb，France)测量单次给药OXPT导致动物响应机械刺激的疼痛阈值的降低。OXPT给药前和OXPT给药后3小时(早期)和7天(晚期)观察反应。
在健康小鼠中(即在OXPT给药之前)触发缩爪反应的平均力(疼痛阈值)为5.15±0.24g(第一组)、6.16±0.26g(第二组)和6.37±0.40g(第三组)。在第一组中，在OXPT给药后3小时观察到疼痛阈值显著降低至3.97±0.23g(基线的77.1％)。以30mg/kg的剂量给药d4-(R)-1将疼痛阈值增加至5.73±0.40g(基线的111.3％)。在OXPT给药后7天，疼痛阈值为4.46±0.20g(基线的86.6％)，30mg/kg剂量的d4-(R)-1将其增加至6.38±0.50g(基线的123.9％)。在第二组中，在OXPT给药后3小时观察到疼痛阈值显著降低至3.93±0.40g(基线的63.8％)。以60mg/kg给药d4-(R)-1导致疼痛阈值增加至5.33±0.427g(基线的86.5％)。在OXPT给药后七天，疼痛阈值为3.57±0.31g(基线的57.9％)，60mg/kg的d4-(R)-1将该值增加至7.34±0.42g(基线的119.2％)。在第三组中，在OXPT给药后3小时观察到疼痛阈值显著降低至3.30±0.27g(基线的51.2％)。以90mg/kg的剂量给药d4-(R)-1将疼痛阈值增加至7.23±0.42g(基线的113.5％)。在OXPT给药后七天，疼痛阈值为4.78±0.34g(基线的75.0％)，90mg/kg的d4-(R)-1将该值增加至7.04±0.31g(基线的110.5％)(图16)。
链脲霉素诱导的糖尿病神经病理性疼痛模型-von Frey's试验
链脲霉素的单次给药导致动物响应机械刺激而发生高血糖症(血浆葡萄糖浓度超过300mg/dL)和疼痛阈值的降低(机械性异常性疼痛，von Frey试验)。在链脲霉素注射后3周对反应进行测试。与化合物给药之前进行的测量相比，以30、60和90mg/kg的剂量腹腔内给药化合物d4-(R)-1以统计学上显著且剂量依赖性方式使疼痛阈值增加。重要的是，d4-(R)-1在所有剂量下都完全消除了进行性感觉神经病的症状。
在健康小鼠组(STZ给药前)中触发缩爪反应的平均力(疼痛阈值)为5.89±0.20g。在第一组中，STZ给药后3周，观察到疼痛阈值略微降低至5.22±0.45g(基线的88.6％)。以30mg/kg的剂量给药d4-(R)-1导致疼痛阈值增加至6.80±0.54g(基线的115.4％)。在第二组中，在STZ给药后三周观察到疼痛阈值显著降低至4.53±0.45g(基线的76.9％)。以60mg/kg的剂量给药d4-(R)-1导致疼痛阈值增加至8.64±0.72g(基线的146.6％)。在第三组中，在STZ给药后三周观察到疼痛阈值显著降低至4.99±0.29g(基线的84.7％)。以90mg/kg的剂量给药d4-(R)-1导致疼痛阈值增加至9.40±0.61g(基线的159.6％)(图17)。
由于结构中含有氘原子的其它衍生物是化合物d4-(R)-1的密切类似物(生物电子等排体)，其与d4-(R)-1类似在体内研究中显示出强的抗惊厥活性，因此应预期这些物质如d4-(R)-1也具有由生物电子等排体H/D替代产生的强且广谱的抗伤害感受活性。
对动物的自发运动活动的影响
还研究了d4-(R)-1对自发运动活动的影响以评价其潜在的镇静性质。强镇静活性是可能导致对抗伤害感受试验结果的误解或不确定的解释的不被期待的特性。出于此目的，在30分钟的观察期间，在每组动物中对笼中光束交叉的数目进行计数。对于用媒介物(即1％的吐温80水溶液)处理的小鼠的光束交叉数是1678.0±150.0。在仅以30mg/kg的剂量给药化合物后，其显著降低至对应于起始值的46.90％的值。以60mg/kg、90mg/kg和120mg/kg的剂量给药d4-(R)-1分别导致运动活动增加至基线的106.30％、115.73％和118.95％，但这些结果在统计学上不显著(图18)。因此，所公开的数据证明d4-(R)-1没有镇静作用，并且在疼痛模型中获得的结果是可靠的并且清楚地表明该化合物的抗伤害感受潜力。
体外代谢稳定性
氘代化合物d4-(R)-1(其为本发明特别优选的实施方案的实例)和母体分子(即1)的代谢稳定性通过在作为辅因子的NADPH的存在下将其与小鼠肝微粒体(MLM)一起孵育120分钟来进行体外试验。基于从反应混合物获得的UPLC色谱图，在两种情况下均未出现代谢物，这证明两种受试物质的非常高的代谢稳定性(图19)。化合物1和2及其氘代类似物d4-(R)-1、d9-(R)-2、d4-(R)-4、d6-(R)-5、d11-(R)-6和d6-(R)-7在与人肝微粒体(HLM)一起孵育120分钟后具有类似的高代谢稳定性。
氘代化合物d4-(R)-1和母体分子1在MLM中的优异代谢稳定性证明，就从体外代谢稳定性研究中获得的结果而言，作为本发明目的的氘代衍生物在体内观察到的有益同位素效应(即药代动力学参数的改善，包括t0.5延长)是完全非显而易见的。
方法学
化学研究
分析方法
使用JEOL-500光谱仪(JEOLUSA，Inc.MA，USA)分别在500MHz和126MHz下记录质子核磁共振(1H NMR)和碳核磁共振(13C NMR)图谱。化学位移以相对于作为内标的TMSδ＝O(1H)的δ(ppm)值给出。J值以赫兹(Hz)表示。氘代氯仿(CDCl3)用作溶剂。在图谱的描中使用以下信号缩写：br s(宽单峰)，d(二重峰)，dd(双二重峰)，t(三重峰)，td(双三重峰)，q(四重峰)，qd(双四重峰)，m(多重峰)。UPLC/MS分析系统由与在电喷雾电离(ESI)模式下操作的Waters TQD质谱仪耦联的Waters仪器(Waters Corporation,Milford,MA,USA)组成。使用尺寸为2.1×100mm且颗粒直径为1.7μm的Acquity UPLC BEHC18柱进行色谱分离。将柱保持在40℃并且用梯度从95％至0％的洗脱剂A洗脱10min，流速为0.3mL min-1。洗脱剂A：水/甲酸(0.1％，v/v)；洗脱剂B：乙腈/甲酸(0.1％，v/v)。使用PDAWaters eλ检测器记录色谱图。在200～700nm范围内以1.2nm的分辨率和20点/s的采样速率进行图谱分析。使用具有以下组成的展开剂系统在涂覆有硅胶60F254(Macherey-Nagel，Düren，德国)的铝板上进行薄层色谱法(TLC)：DCM:MeOH(9:0.3；v/v),DCM:MeOH(9:0.5；v/v)，斑点检测-UV光(λ＝254nm)。在Büchi 353装置(Büchi Labortechnik，Flawil，Switzerland)中使用开口毛细管测定熔点：(m.p.)。化合物d4-(R)-1、d9-(R)-2、d5-(R)-3、d4-(R)-4、d6-(R)-5、d11-(R)-6、d6-(R)-7、d4-(S)-1、d9-(S)-2、d5-(S)-3、d4-(S)-4、d6-(S)-5、d11-(S)-6、d6-(S)-7的对映体纯度使用配备有Amylose-C手性柱(250×4.6mm)的Shimadzu Prominence ilc 2030C plus设备(Shimadzu Corporation，Kyoto，Japan)通过手性HPLC图谱分析来测定。在以下条件下进行分析：柱温：20℃，洗脱剂混合物：己烷/i-PrOH＝85/15(v/v)，流速：0.7mL/min，在λ＝209nm检测。使用ChemBiodraw Ultra 12.0程序产生代表本发明的示例性实施方案的化合物的化学名称。所提供的中间体和最终产物的合成在产率、所使用的试剂的量和所获得的化合物的最终形式方面没有进行优化。获得母体化合物1和2的方法公开在专利申请P.429656，PCT/PL2020/050028和专利Pat.240297中。
所用的缩写：
AcOEt-乙酸乙酯
DCC-N,N′-二环己基碳二亚胺
DCM-二氯甲烷
Et2O-乙醚
HCl-盐酸
HMDS-六甲基二硅氮烷
MeOH-甲醇
NaCl-氯化钠
NH4OH-氢氧化铵
Na2SO4-硫酸钠
TFA-三氟乙酸
ZnCl2-氯化锌
中间体产物(根据方案1的II、III和IV)的合成以及物理化学和图谱数据的实施例：
方案1.根据本发明的式(I)化合物的合成。
实施例1.中间体(R)-IV(其中B＝H，X＝H，Y＝H)；(R)-(1-(苄基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
将Boc-D-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)溶于20mL二氯甲烷(DCM)中，然后加入DCC(6.81g，1.2当量)，30分钟后滴加苄胺(2.95g，1当量)。在室温搅拌下继续反应4小时。此后，蒸馏出DCM至干燥。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法对中间体进行纯化。获得无色透明油状化合物。
产率：91％(6.95g)；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H22N2O3(278.35)，单一同位素质量：279.16。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.44分钟。(M+H)+279.3。
实施例2.中间体(R)-IV(其中B＝D，X＝D，Y＝H)；(R)-(1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-D-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和苄胺-d5(3.09g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：92％(7.08g)；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H17D5N2O3(283.38)，单一同位素质量：284.19。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.41分钟。(M+H)+284.1。
实施例3.中间体(R)-IV(其中B＝H，X＝F，Y＝H)；(R)-(1-((2-氟苄基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-D-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和2-氟苄胺(3.31g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：93％(7.28g)；薄层色谱法：Rf＝0.45(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H21FN2O3(296.34)，单一同位素质量：297.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.54分钟。(M+H)+297.2。
实施例4.中间体(R)-IV(其中B＝H，X＝H，Y＝D)；(R)-(1-氧代-1-((苯基甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-D-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和苄胺-d2(3.01g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：93％(7.18g)；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H20D2N2O3(280.36)，单一同位素质量：281.18。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.43分钟。(M+H)+281.2。
实施例5.中间体(R)-IV(其中B＝D，X＝D，Y＝D)；(R)-(1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-D-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和苄胺-d7(3.15g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：94％(7.39g)；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H15D7N2O3(285.39)，单一同位素质量：286.21。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.42分钟。(M+H)+286.3。
实施例6.中间体(R)-IV(其中B＝H，X＝F，Y＝D)；(R)-(1-(((2-氟苯基)甲基-d2)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-D-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和2-氟苄胺-d2(3.36g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：93％(7.33g)；薄层色谱法：Rf＝0.45(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H19D2FN2O3(298.35)，单一同位素质量：299.17。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.53分钟。(M+H)+299.2。
实施例7.中间体(S)-IV(其中B＝H，X＝H，Y＝H)；(S)-(1-(苄基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-L-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和苄胺(2.95g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：90％(6.86g)；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H22N2O3(278.35)，单一同位素质量：279.16。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.43分钟。(M+H)+279.3。
实施例8.中间体(S)-IV(其中B＝D，X＝D，Y＝H)；(S)-(1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-L-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和苄胺-d5(3.09g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：90％(6.92g)；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H17D5N2O3(283.38)，单一同位素质量：284.19。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.40分钟。(M+H)+284.2。
实施例9.中间体(S)-IV(其中B＝H，X＝F，Y＝H)；(S)-(1-((2-氟苄基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-L-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和2-氟苄胺(3.31g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：92％(7.20g)；薄层色谱法：Rf＝0.45(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H21FN2O3(296.34)，单一同位素质量：297.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.55分钟。(M+H)+297.2。
实施例10.中间体(S)-IV(其中B＝H，X＝H，Y＝D)；(S)-(1-氧代-1-((苯基甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-L-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和苄胺-d2(3.01g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：91％(7.03g)；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H20D2N2O3(280.36)，单一同位素质量：281.18。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.43分钟。(M+H)+281.1。
实施例11.中间体(S)-IV(其中B＝D，X＝D，Y＝D)；(S)-(1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-L-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和苄胺-d7(3.15g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：91％(7.14g)；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H15D7N2O3(285.39)，单一同位素质量：286.21。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.42分钟。(M+H)+286.3。
实施例12.中间体(S)-IV(其中B＝H，X＝F，Y＝D)；(S)-(1-(((2-氟苯基)甲基-d2)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-L-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和2-氟苄胺-d2(3.36g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：89％(7.01g)；薄层色谱法：Rf＝0.45(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H19D2FN2O3(298.35)，单一同位素质量：299.17。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.53分钟。(M+H)+299.3。
实施例13.中间体(R,S)-IV(其中B＝H，X＝H，Y＝H)；(R,S)-(1-(苄基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-D,L-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和苄胺(2.95g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：93％(7.16g)；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H22N2O3(278.35)，单一同位素质量：279.16。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.42分钟。(M+H)+279.1。
实施例14.中间体(R,S)-IV(其中B＝D，X＝D，Y＝H)；(R,S)-(1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-D,L-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和苄胺-d5(3.09g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：89％(6.85g)；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H17D5N2O3(283.38)，单一同位素质量：284.19。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.43分钟。(M+H)+284.2。
实施例15.中间体(R,S)-IV(其中B＝H，X＝F，Y＝H)；(R,S)-(1-((2-氟苄基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-D,L-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和2-氟苄胺(3.31g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得化合物。
产率：90％(7.05g)；薄层色谱法：Rf＝0.45(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H21FN2O3(296.34)，单一同位素质量：297.15。UPLC(>99％纯度)：tR＝5.56分钟。(M+H)+297.1。
实施例16.中间体(R,S)-IV(其中B＝H，X＝H，Y＝D)；(R,S)-(1-氧代-1-((苯基甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-D,L-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和苄胺-d2(3.01g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：92％(7.10g)；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H20D2N2O3(280.36)，单一同位素质量：281.18。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.43分钟。(M+H)+281.2。
实施例17.中间体(R,S)-IV(其中B＝D，X＝D，Y＝D)；(R,S)-(1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-D,L-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和苄胺-d7(3.15g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：91％(7.15g)；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H15D7N2O3(285.39)，单一同位素质量：286.21。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.41分钟。(M+H)+286.3。
实施例18.中间体(R,S)-IV(其中B＝H，X＝F，Y＝D)；(R,S)-(1-(((2-氟苯基)甲基-d2)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用Boc-D,L-丙氨酸(5.0g，27mmol，1当量)和DCC(6.81g，1.2当量)和2-氟苄胺-d2(3.36g，1当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。获得无色透明油状化合物。
产率：90％(7.09g)；薄层色谱法：Rf＝0.45(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C15H19D2FN2O3(298.35)，单一同位素质量：299.17。UPLC(纯度>99％)：tR＝5.54分钟。(M+H)+299.2。
实施例19.中间体(R)-III(其中B＝H，X＝H，Y＝H)；(R)-2-氨基-N-苄基丙酰胺
将10mL的TFA添加到(R)-(1-(苄基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.95g，25mmol，1当量)的DCM(100mL)溶液中，将混合物搅拌2小时，接着用25％ NH4OH溶液中和，并且接着用DCM(3×50mL)萃取。有机层用无水Na2SO4干燥，然后蒸发至干。获得无色透明油状化合物。
产率：89％(3.9g)；薄层色谱法：Rf＝0.21(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H14N2O(178.24)，单一同位素质量：179.11。UPLC(纯度96.8％)：tR＝2.11分钟。(M+H)+179.2。
实施例20.中间体(R)-III(其中B＝D，X＝D，Y＝H)；(R)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-(1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.08g，25mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：94％(4.3g)；薄层色谱法：Rf＝0.21(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H9D5N2O(183.27)，单一同位素质量：184.14。UPLC(纯度96.3％)：tR＝2.16分钟。(M+H)+184.1。
实施例21.中间体(R)-III(其中B＝H，X＝F，Y＝H)；(R)-2-氨基-N-(2-氟苄基)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-(1-((2-氟苄基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.08g，25mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：92％(4.4g)；薄层色谱法：Rf＝0.23(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H13FN2O(196.23)，单一同位素质量：197.10。UPLC(纯度97.4％)：tR＝2.29分钟。(M+H)+197.2。
实施例22.中间体(R)-III(其中B＝H，X＝H，Y＝D)；(R)-2-氨基-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-(1-氧代-1-((苯基甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.01g，25mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：95％(4.3g)；薄层色谱法：Rf＝0.21(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H12D2N2O(180.25)，单一同位素质量：181.12。UPLC(纯度>99％)：tR＝2.12分钟。(M+H)+181.3。
实施例23.中间体(R)-III(其中B＝D，X＝D，Y＝D)；(R)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-(1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.13g，25mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：95％(4.4g)；薄层色谱法：Rf＝0.21(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H7D7N2O(185.28)，单一同位素质量：186.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝2.14分钟。(M+H)+186.2。
实施例24.中间体(R)-III(其中B＝H，X＝F，Y＝D)；(R)-2-氨基-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-(1-(((2-氟苯基)甲基-d2)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.86g，23mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：95％(4.3g)；薄层色谱法：Rf＝0.23(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H11D2FN2O(198.24)，单一同位素质量：199.11。UPLC(纯度>99％)：tR＝2.28分钟。(M+H)+199.2。
实施例25.中间体(S)-III(其中B＝H，X＝H，Y＝H)；(S)-2-氨基-N-苄基丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-(1-(苄基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.50g，23mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：87％(3.67g)；薄层色谱法：Rf＝0.21(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H14N2O(178.24)，单一同位素质量：179.11。UPLC(纯度96.8％)：tR＝2.12分钟。(M+H)+179.2。
实施例26.中间体(S)-III(其中B＝D，X＝D，Y＝H)；(S)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-(1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.51g，23mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：95％(4.0g)；薄层色谱法：Rf＝0.21(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H9D5N2O(183.27)，单一同位素质量：184.14。UPLC(纯度96.3％)：tR＝2.15分钟。(M+H)+184.2。
实施例27.中间体(S)-III(其中B＝H，X＝F，Y＝H)；(S)-2-氨基-N-(2-氟苄基)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-(1-((2-氟苄基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.82g，23mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：93％(4.3g)；薄层色谱法：Rf＝0.23(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H13FN2O(196.23)，单一同位素质量：197.10。UPLC(纯度98.2％)：tR＝2.30分钟。(M+H)+197.1。
实施例28.中间体(S)-III(其中B＝H，X＝H，Y＝D)；(S)-2-氨基-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-(1-氧代-1-((苯基甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.01g，25mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：94％(4.2g)；薄层色谱法：Rf＝0.21(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H12D2N2O(180.25)，单一同位素质量：181.12。UPLC(纯度>99％)：tR＝2.13分钟。(M+H)+181.2。
实施例29.中间体(S)-III(其中B＝D，X＝D，Y＝D)；(S)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-(1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.13g，25mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：91％(4.2g)；薄层色谱法：Rf＝0.21(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H7D7N2O(185.28)，单一同位素质量：186.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝2.14分钟。(M+H)+186.1。
实施例30.中间体(S)-III(其中B＝H，X＝F，Y＝D)；(S)-2-氨基-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-(1-(((2-氟苯基)甲基-d2)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.86g，23mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：93％(4.2g)；薄层色谱法：Rf＝0.23(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H11D2FN2O(198.24)，单一同位素质量：199.11。UPLC(纯度>99％)：tR＝2.28分钟。(M+H)+199.2。
实施例31.中间体(R,S)-III(其中B＝H，X＝H，Y＝H)；(R,S)-2-氨基-N-苄基丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-(1-(苄基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.50g，23mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：96％(3.9g)；薄层色谱法：Rf＝0.21(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H14N2O(178.24)，单一同位素质量：179.11。UPLC(纯度98.2％)：tR＝2.12分钟。(M+H)+179.3。
实施例32.中间体(R,S)-III(其中B＝D，X＝D，Y＝H)；(R,S)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-(1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.51g，23mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：93％(3.9g)；薄层色谱法：Rf＝0.21(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H9D5N2O(183.27)，单一同位素质量：184.14。UPLC(纯度96.3％)：tR＝2.14分钟。(M+H)+184.2。
实施例33.中间体(R,S)-III(其中B＝H，X＝F，Y＝H)；(R,S)-2-氨基-N-(2-氟苄基)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-(1-((2-氟苄基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.82g，23mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：94％(4.2g)；薄层色谱法：Rf＝0.23(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H13FN2O(196.23)，单一同位素质量：197.10。UPLC(纯度98.2％)：tR＝2.31分钟。(M+H)+197.1。
实施例34.中间体(R,S)-III(其中B＝H，X＝H，Y＝D)；(R,S)-2-氨基-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-(1-氧代-1-((苯基甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.01g，25mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：93％(4.2g)；薄层色谱法：Rf＝0.21(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H12D2N2O(180.25)，单一同位素质量：181.12。UPLC(纯度>99％)：tR＝2.12分钟。(M+H)+181.2。
实施例35.中间体(R,S)-III(其中B＝D，X＝D，Y＝D)；(R,S)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-(1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(7.13g，25mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：94％(4.3g)；薄层色谱法：Rf＝0.21(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H7D7N2O(185.28)，单一同位素质量：186.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝2.14分钟。(M+H)+186.2。
实施例36.中间体(R,S)-III(其中B＝H，X＝F，Y＝D)；(R,S)-2-氨基-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-(1-(((2-氟苯基)甲基-d2)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.86g，23mmol，1当量)和10mL的TFA。获得无色透明油状化合物。
产率：94％(4.3g)；薄层色谱法：Rf＝0.23(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C10H11D2FN2O(198.24)，单一同位素质量：199.11。UPLC(纯度>99％)：tR＝2.28分钟。(M+H)+199.2。
实施例37.中间体(R)-II(其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝H)；(R)-4-((1-(苄基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4
将琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(2.18g，21mmol，1当量)添加至(R)-2-氨基-N-苄基丙酰胺(3.9g，21mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液中，将混合物搅拌30分钟。此后，将乙酸乙酯蒸馏至干。用乙醚(Et2O)洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：94％(5.81g)；熔点：129.5-131.6℃；薄层色谱法：Rf＝0.34(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H14D4N2O4(282.33)，单一同位素质量：283.15。UPLC(纯度91.2％)：tR＝3.12分钟。(M+H)+283.4。
实施例38.中间体(R)-II(其中A＝H，B＝D，X＝D，Y＝H)；(R)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺(2.18g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐(1.22g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：95％(3.20g)；熔点：129.9-131.8℃；薄层色谱法：Rf＝0.35(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H13D5N2O4(283.34)，单一同位素质量：284.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.12分钟。(M+H)+284.1。
实施例39.中间体(R)-II(其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝H)；(R)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺(2.18g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.26g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：96％(3.28g)；熔点：129.7-131.3℃；薄层色谱法：Rf＝0.34(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H9D9N2O4(287.36)，单一同位素质量：288.18。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.12分钟。(M+H)+288.2。
实施例40.中间体(R)-II(其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝H)；(R)-4-((1-((2-氟苄基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-2-氨基-N-(2-氟苄基)丙酰胺(4.12g，21mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(2.18g，21mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：95％(5.99g)；熔点：131.2-132.6℃；薄层色谱法：Rf＝0.36(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H13D4FN2O4(300.32)，单一同位素质量：301.14。UPLC(纯度95.70％)：tR＝3.32分钟。(M+H)+301.2。
实施例41.中间体(R)-II(其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝D)；(R)-4-氧代-4-((1-氧代-1-((苯基甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-2-氨基-N-((苯基-d2)甲基)丙酰胺(2.16g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.26g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：95％(3.23g)；熔点：129.5-131.8℃；薄层色谱法：Rf＝0.34(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H12D6N2O4(284.34)，单一同位素质量：285.16。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.13分钟。(M+H)+285.2。
实施例42.中间体(R)-II(其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝D)；(R)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺(2.22g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.26g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：94％(3.26g)；熔点：129.1-131.2℃；薄层色谱法：Rf＝0.34(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H7D11N2O4(289.38)，单一同位素质量：290.20。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.12分钟。(M+H)+290.2。
实施例43.中间体(R)-II(其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝D)；(R)-4-((1-(((2-氟苯基)甲基-d2)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-2-氨基-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺(2.37g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.26g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：95％(3.44g)；熔点：131.3-132.5℃；薄层色谱法：Rf＝0.36(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H11D6FN2O4(303.15)，单一同位素质量：304.34。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.34分钟。(M+H)+304.3。
实施例44.中间体(S)-II(其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝H)；(S)-4-((1-(苄基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-2-氨基-N-苄基丙酰胺(2.18g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.26g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：92％(5.69g)；熔点：129.3-131.9℃；薄层色谱法：Rf＝0.34(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H14D4N2O4(282.33)，单一同位素质量：283.15。UPLC(纯度93.5％)：tR＝3.13分钟。(M+H)+283.1。
实施例45.中间体(S)-II(其中A＝H，B＝D，X＝D，Y＝H)；(S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺(2.18g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐(1.22g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：96％(3.23g)；熔点：129.5-131.4℃；薄层色谱法：Rf＝0.35(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H13D5N2O4(283.34)，单一同位素质量：284.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.11分钟。(M+H)+284.2。
实施例46.中间体(S)-II(其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝H)；(S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺(2.18g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.22g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：95％(3.24g)；熔点：129.5-131.2℃；薄层色谱法：Rf＝0.34(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H9D9N2O4(287.36)，单一同位素质量：288.18。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.11分钟。(M+H)+288.2。
实施例47.中间体(S)-II(其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝H)；(S)-4-((1-((2-氟苄基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-2-氨基-N-(2-氟苄基)丙酰胺(4.12g，21mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(2.18g，21mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：93％(5.86g)；熔点：131.5-132.4℃；薄层色谱法：Rf＝0.36(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H13D4FN2O4(300.32)，单一同位素质量：301.14。UPLC(纯度99.20％)：tR＝3.31分钟。(M+H)+301.2。
实施例48.中间体(S)-II(其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝D)；(S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-((苯基甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-2-氨基-N-((苯基-d2)甲基)丙酰胺(2.16g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.26g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：96％(3.26g)；熔点：129.5-131.7℃；薄层色谱法：Rf＝0.34(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H12D6N2O4(284.34)，单一同位素质量：285.16。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.12分钟。(M+H)+285.2。
实施例49.中间体(S)-II(其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝D)；(S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺(2.22g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.26g12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：93％(3.23g)；熔点：129.1-131.4℃；薄层色谱法：Rf＝0.34(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H7D11N2O4(289.38)，单一同位素质量：290.20。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.13分钟。(M+H)+290.1。
实施例50.中间体(S)-II(其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝D)；(S)-4-((1-(((2-氟苯基)甲基-d2)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-2-氨基-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺(2.37g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.26g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：94％(3.40g)；熔点：131.2-132.4℃；薄层色谱法：Rf＝0.36(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H11D6FN2O4(303.15)，单一同位素质量：304.34。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.35分钟。(M+H)+304.2。
实施例51.中间体(R,S)-II(其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝H)；(R,S)-4-((1-(苄基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-2-氨基-N-苄基丙酰胺(2.18g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.26g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：95％(3.22g)；熔点：89.3-90.9℃；薄层色谱法：Rf＝0.34(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H14D4N2O4(282.33)，单一同位素质量：283.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.12分钟。(M+H)+283.2。
实施例52.中间体(R,S)-II(其中A＝H，B＝D，X＝D，Y＝H)；(R,S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺(2.18g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐(1.22g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：97％(3.26g)；熔点：89.4-91.4℃；薄层色谱法：Rf＝0.35(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H13D5N2O4(283.34)，单一同位素质量：284.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.13分钟。(M+H)+284.2。
实施例53.中间体(R,S)-II(其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝H)；(R,S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺(2.18g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.26g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：92％(3.14g)；熔点：89.1-90.6℃；薄层色谱法：Rf＝0.34(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H9D9N2O4(287.36)，单一同位素质量：288.18。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.12分钟。(M+H)+288.2。
实施例54.中间体(R,S)-II(其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝H)；(R,S)-4-((1-((2-氟苄基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-2-氨基-N-(2-氟苄基)丙酰胺(4.12g，21mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(2.18g，21mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：93％(5.84g)；熔点：89.3-90.5℃；薄层色谱法：Rf＝0.36(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H13D4FN2O4(300.32)，单一同位素质量：301.14。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.32分钟。(M+H)+301.2。
实施例55.中间体(R,S)-II(其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝D)；(R,S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-((苯基甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-2-氨基-N-((苯基-d2)甲基)丙酰胺(2.16g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.26g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：94％(3.19g)；熔点：89.1-90.6℃；薄层色谱法：Rf＝0.34(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H12D6N2O4(284.34)，单一同位素质量：285.16。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.12分钟。(M+H)+285.1。
实施例56.中间体(R,S)-II(其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝D)；(R,S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-2-氨基-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺(2.22g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.26g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：95％(3.29g)；熔点：89.4-90.7℃；薄层色谱法：Rf＝0.34(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H7D11N2O4(289.38)，单一同位素质量：290.20。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.13分钟。(M+H)+290.3。
实施例57.中间体(R,S)-II(其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝D)；(R,S)-4-((1-(((2-氟苯基)甲基-d2)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-2-氨基-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺(2.37g，12mmol，1当量)的乙酸乙酯(50mL)溶液和琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(1.26g，12mmol，1当量)。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：96％(3.47g)；熔点：89.4-90.6℃；薄层色谱法：Rf＝0.36(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C14H11D6FN2O4(303.15)，单一同位素质量：304.34。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.33分钟。(M+H)+304.2。
根据式(I)的最终产物的合成以及物理化学数据和图谱数据的实施例：
实施例58.化合物d4-(R)-1(其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝H)；(R)-N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺
将ZnCl2(1.36g，10mmol，1当量)添加至(R)-4-((1-(苄基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4(2.82g，10mmol，1当量)的无水1,4-二噁烷(100mL)悬浮液中，将整个混合物加热至110℃。然后在30分钟内滴加HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)的无水1,4-二噁烷(15mL)溶液。在回流搅拌下继续反应约24小时，然后减压浓缩。蒸馏出溶剂后，将油状残余物溶于DCM中，并用0.1M HCl(3×50mL)、水(3×50mL)和饱和氯化钠溶液(3×50mL)萃取。有机层用无水Na2SO4干燥，然后蒸发至干。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：89％(2.34g)；熔点：138.2-138.9℃；薄层色谱法：Rf＝0.39(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H12D4N2O3(264.32)，单一同位素质量：265.14。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.79分钟。(M+H)+265.2。手性HPLC>99％ee(tR＝24.566分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.57(d,J＝7.2Hz,3H),4.39(d,J＝5.7Hz,2H),4.77(q,J＝7.2Hz,1H),6.40(br s,1H),7.22–7.26(m,3H),7.29–7.32(m,2H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,28.3,33.7,49.8,127.7,128.8,137.9,168.6,177.0。
实施例59.化合物d4-(S)-1(其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝H)；(S)-N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-4-((1-(苄基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4(2.87g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：87％(2.29g)；熔点：137.9-138.8℃；薄层色谱法：Rf＝0.39(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H12D4N2O3(264.32)，单一同位素质量：265.14。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.76分钟。(M+H)+265.3。手性HPLC>99％ee(tR＝26.484分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.59(d,J＝7.5Hz,3H),4.43(d,J＝5.7Hz,2H),4.79(q,J＝7.4Hz,1H),6.33(br s,1H),7.24–7.28(m,3H),7.31(d,J＝6.9Hz,2H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,25.7,34.0,49.8,127.7,128.8,137.9,168.6,177.0。
实施例60.化合物d4-(R,S)-1(其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝H)；(R,S)-N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-4-((1-(苄基氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4(2.87g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：85％(2.23g)；熔点：83.4-84.2℃；薄层色谱法：Rf＝0.39(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H12D4N2O3(264.32)，单一同位素质量：265.14。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.78分钟。(M+H)+265.2。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.55-1.59(m,3H),4.40(d,J＝5.4Hz,2H),4.76(qd,J＝7.4,1.7Hz,1H),6.41(br s,1H),7.22–7.27(m,3H),7.29–7.33(m,2H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,25.7,34.0,49.8,129.4,129.4,130.2,130.2,168.8,177.0。
实施例61.化合物d9-(R)-2(其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝H)；(2R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4(2.87g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：85％(2.29g)；熔点：139.3-140.7℃；薄层色谱法：Rf＝0.44(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H7D9N2O3(269.35)，单一同位素质量：270.17。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.82分钟，(M+H)+270.1。手性HPLC>99％ee(tR＝24.539分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.58(d,J＝7.2Hz,3H),4.43(d,J＝5.7Hz,2H),4.79(q,J＝7.2Hz,1H),6.31(br s,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.6,34.0,43.8,49.9,127.1,127.3,128.3,137.7,168.6,176.9。
实施例62.化合物d9-(S)-2(其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝H)；(2S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4(2.87g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：84％(2.26g)；熔点：138.9-140.2℃；薄层色谱法：Rf＝0.44(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H7D9N2O3(269.35)，单一同位素质量：270.17。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.81分钟，(M+H)+270.2。手性HPLC>99％ee(tR＝26.476分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.57(d,J＝7.2Hz,3H),4.40(d,J＝5.7Hz,2H),4.77(q,J＝7.5Hz,1H),6.42(br s,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,34.0,43.8,49.8,127.3,128.1,128.3,137.7,168.7,177.0。
实施例63.化合物d9-(R,S)-2(其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝H)；(2R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4(2.87g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：87％(2.34g)；熔点：84.1-85.5℃；薄层色谱法：Rf＝0.4(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H7D9N2O3(269.35)，单一同位素质量：270.17。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.80分钟，(M+H)+270.1。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ1.57(d,J＝7.2Hz,3H),4.40(d,J＝5.7Hz,2H),4.77(q,J＝7.2Hz,1H),6.40(br s,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,34.0,43.8,49.8,127.1,127.3,128.1,137.7,168.6,177.0。
实施例64.化合物d5-(R)-3(其中A＝H，B＝D，X＝D，Y＝H)；(2R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸(2.83g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，10mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：87％(2.30g)；熔点：138.9-140.2℃；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H11D5N2O3(265.32)，单一同位素质量：266.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.80分钟，(M+H)+266.2。手性HPLC>99％ee(tR＝24.447分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.58(d,J＝7.2Hz,3H),2.67–2.71(m,4H),4.42(d,J＝5.4Hz,2H),4.76–4.79(m,1H),6.37(brs,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.6,34.0,43.8,49.9,127.1,127.3,128.3,137.7,168.6,176.9。
实施例65.化合物d5-(S)-3(其中A＝H，B＝D，X＝D，Y＝H)；(2S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸(2.83g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，10mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：85％(2.25g)；熔点：138.4-139.8℃；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H11D5N2O3(265.32)，单一同位素质量：266.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.81分钟，(M+H)+266.2。手性HPLC>99％ee(tR＝26.484分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.58(d,J＝7.2Hz,3H),2.69(s,4H),4.42(d,J＝5.7Hz,2H),4.79(q,J＝7.5Hz,1H),6.38(br s,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,28.3,34.0,43.9,49.8,127.1,128.1,137.7,168.7,175.6。
实施例66.化合物d5-(R,S)-3(其中A＝H，B＝D，X＝D，Y＝H)；(2R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸(2.83g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，10mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：84％(2.22g)；熔点：84.4-86.1℃；薄层色谱法：Rf＝0.43(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H11D5N2O3(265.32)，单一同位素质量：266.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.82分钟，(M+H)+266.2。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.57(d,J＝7.5Hz,3H),2.68(s,4H),4.40(d,J＝5.7Hz,2H),4.77(q,J＝7.2Hz,1H),6.42(br s,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,28.3,33.9,43.8,49.8,127.1,128.1,137.7,168.7,177.0。
实施例67.化合物d4-(R)-4(其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝H)；(R)-N-(2-氟苄基)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-4-((1-((2-氟苄基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4(3.00g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：84％(2.36g)；熔点：157.2-157.3℃；薄层色谱法：Rf＝0.44(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H11D4FN2O3(282.31)，单一同位素质量：283.13。UPLC(纯度>99％)：tR＝4.01分钟，(M+H)+283.2。手性HPLC>99％ee(tR＝18.863分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.57(d,J＝7.3Hz,3H),4.38-4.52(m,2H),4.76(q,J＝7.3Hz,1H),6.48(br s,1H),6.98–7.04(m,1H),7.08–7.11(m,1H),7.20–7.24(1H),7.30–7.31(m,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,37.9,38.0,49.8 115.4,124.5(J＝3.6Hz),124.8,124.9,129,4(J＝8.5Hz),130.2(J＝4.2Hz),168.7,177.0。
实施例68.化合物d4-(S)-4(其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝H)；(S)-N-(2-氟苄基)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-4-((1-((2-氟苄基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4(3.00g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：86％(2.41g)；熔点：157.4-157.8℃；薄层色谱法：Rf＝0.44(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H11D4FN2O3(282.31)，单一同位素质量：283.13。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.90分钟，(M+H)+283.3。手性HPLC>99％ee(tR＝21.383分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.57(d,J＝7.5Hz,3H),4.40-4.51(m,2H),4.77(q,J＝7.5Hz,1H),6.49(br s,1H),7.01(t,J＝9.3Hz,1H),7.09(td,J＝7.5,0.9Hz,1H),7.21-7.25(m,1H),7.31(td,J＝7.6,1.4Hz,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,37.9(d,J＝4.2Hz),49.8,115.5,124.5(d,J＝3.6Hz),124.8,124.9,129.4(d,J＝7.8Hz),130.2(d,J＝3.6Hz),168.7,176.9。
实施例69.化合物d4-(R,S)-4(其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝H)；(R,S)-N-(2-氟苄基)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-4-((1-((2-氟苄基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4(3.00g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：85％(2.38g)；熔点：98.4-99.7℃；薄层色谱法：Rf＝0.44(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H11D4FN2O3(282.31)，单一同位素质量：283.13。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.95分钟，(M+H)+283.2。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.57(d,J＝7.5Hz,3H),4.40-4.50(m,2H),4.76(q,J＝7.2Hz,1H),6.52(br s,1H),6.98–7.03(m,1H),7.08(td,J＝7.5,1.0Hz,1H),7.20–7.24(m,1H),7.30(td,J＝7.6,1.7Hz,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,34.0,37.9(d,J＝3.6Hz),49.8,115.5,124.5(d,J＝3.6Hz),129.4(d,J＝8.5Hz),130.2(d,J＝4.2Hz),168.8,177.0。
实施例70.化合物d6-(R)-5(其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝D)；(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-4-氧代-4-((1-氧代-1-((苯基甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4(2.84g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：86％(2.28g)；熔点：138.3-139.1℃；薄层色谱法：Rf＝0.39(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H10D6N2O3(266.33)，单一同位素质量：267.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.78分钟(M+H)+267.2。手性HPLC>99％ee(tR＝23.945分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.58(d,J＝7.5Hz,3H),4.78(q,J＝7.5Hz,1H),6.35(br s,1H),7.22–7.28(m,3H),7.30–7.33(m,2H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.6,25.7,34.0,49.8,127.8,128.8,137.8,168.6,177.0。
实施例71.化合物d6-(S)-5(其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝D)；(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-((苯基甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4(2.84g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：84％(2.23g)；熔点：138.3-139.0℃；薄层色谱法：Rf＝0.39(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H10D6N2O3(266.33)，单一同位素质量：267.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.78分钟(M+H)+267.2。手性HPLC>99％ee(tR＝25.872分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.58(d,J＝7.5Hz,3H),4.78(q,J＝7.5Hz,1H),6.35(br s,1H),7.23–7.28(m,3H),7.30–7.34(m,2H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.6,25.7,34.0,49.8,127.8,128.8,137.8,168.6,177.0。
实施例72.化合物d6-(R,S)-5(其中A＝D，B＝H，X＝H，Y＝D)；(R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-((苯基甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4(2.84g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：82％(2.18g)；熔点：84.5-86.2℃；薄层色谱法：Rf＝0.39(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H10D6N2O3(266.33)，单一同位素质量：267.15。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.78分钟(M+H)+267.3。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ1.58(d,J＝7.2Hz,3H),4.77(q,J＝7.5Hz,1H),6.35(br s,1H),7.23–7.27(m,3H),7.30–7.33(m,2H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,25.7,34.0,49.8,127.5,128.5,137.7,168.6,177.0.。
实施例73.化合物d6-(R)-7(其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝D)；(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-4-((1-(((2-氟苯基)甲基-d2)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4(3.03g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：84％(2.39g)；熔点：157.2-157.7℃；薄层色谱法：Rf＝0.44(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H9D6FN2O3(284.32)，单一同位素质量：284.14。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.98分钟(M+H)+285.2。手性HPLC>99％ee(tR＝18.011分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.57(d,J＝7.2Hz,3H),4.76(q,J＝7.3Hz,1H),6.44(br s,1H)7.01(ddd,J＝10.2,8.2,1.0Hz,1H),7.09(td,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.21-7.26(m,1H),7.31(td,J＝7.6,1.7Hz,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,25.7,34.0,49.8,115.5,124.5(d,J＝3.6Hz),129.4(d,J＝8.5Hz),130.2(d,J＝4.2Hz),168.8,177.0。
实施例74.化合物d6-(S)-7(其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝D)；(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-4-((1-(((2-氟苯基)甲基-d2)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4(3.03g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：86％(2.44g)；熔点：157.3-157.7℃；薄层色谱法：Rf＝0.44(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H9D6FN2O3(284.32)，单一同位素质量：284.14。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.98分钟(M+H)+285.2。手性HPLC>99％ee(tR＝20.145分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.57(d,J＝7.2Hz,3H),4.76(q,J＝7.3Hz,1H),6.44(br s,1H)7.01(ddd,J＝10.2,8.2,1.0Hz,1H),7.09(td,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.21-7.26(m,1H),7.31(td,J＝7.6,1.7Hz,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,25.7,34.0,49.8,115.5,124.5(d,J＝3.6Hz),129.4(d,J＝8.5Hz),130.2(d,J＝4.2Hz),168.8,177.0。
实施例75.化合物d6-(R,S)-7(其中A＝D，B＝H，X＝F，Y＝D)；(R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-4-((1-(((2-氟苯基)甲基-d2)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基)-4-氧代丁酸-2,2,3,3-d4(3.03g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：84％(2.35g)；熔点：98.3-99.8℃；薄层色谱法：Rf＝0.44(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H9D6FN2O3(284.32)，单同位素重量：284.14UPLC(>99％纯度)：tR＝3.98分钟(M+H)+285.2。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.57(d,J＝7.2Hz,3H),4.76(q,J＝7.3Hz,1H),6.44(br s,1H)7.01(ddd,J＝10.2,8.2,1.0Hz,1H),7.09(td,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.22–7.26(m,1H),7.31(td,J＝7.6,1.7Hz,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,25.7,34.0,49.8,115.5,124.5(d,J＝3.6Hz),129.4(d,J＝8.5Hz),130.2(d,J＝4.2Hz),168.8,177.0。
实施例76.化合物d11-(R)-6(其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝D)；(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4(2.89g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：83％(2.40g)；熔点：138.1-139.0℃；薄层色谱法：Rf＝0.39(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H5D11N2O3(271.36)，单一同位素质量：271.19。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.80分钟(M+H)+272.2。手性HPLC>99％ee(tR＝24.017分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.58(d,J＝7.5Hz,3H),4.79(q,J＝7.5Hz,1H),6.32(br s,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,25.7,34.0,49.8,127.5,128.5,137.7,168.6,177.0。
实施例77.化合物d11-(S)-6(其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝D)；(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4(2.89g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：85％(2.45g)；熔点：138.1-139.1℃；薄层色谱法：Rf＝0.39(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H5D11N2O3(271.36)，单一同位素质量：271.19。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.80分钟(M+H)+272.2。手性HPLC>99％ee(tR＝26.128分钟)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ1.58(d,J＝7.5Hz,3H),4.79(q,J＝7.5Hz,1H),6.32(br s,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,25.7,34.0,49.8,127.5,128.5,137.7,168.6,177.0。
实施例78.化合物d11-(R,S)-6(其中A＝D，B＝D，X＝D，Y＝D)；(R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺
使用与上述程序类似的程序获得化合物。在反应中使用(R,S)-4-氧代-4-((1-氧代-1-(((苯基-d5)甲基-d2)氨基)丙烷-2-基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4(2.89g，10mmol，1当量)和ZnCl2(1.36g，20mmol，1当量)和HMDS(2.42g，3.14mL，15mmol，1.5当量)。通过采用DCM：MeOH(9：0.3；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：82％(2.37g)；熔点：84.2-86.3℃；薄层色谱法：Rf＝0.39(DCM：MeOH(9：0.3；v/v))；C14H5D11N2O3(271.36)，单一同位素质量：271.19。UPLC(纯度>99％)：tR＝3.80分钟(M+H)+272.2。1HNMR(500MHz,CDCl3)δ1.58(d,J＝7.5Hz,3H),4.79(q,J＝7.5Hz,1H),6.32(br s,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ14.5,25.7,34.0,49.8,127.5,128.5,137.7,168.6,177.0。
化合物d4-(R)-KA-104的合成程序
根据方案2中所示的合成程序制备标题化合物。
方案2.用于获得化合物d4-(R)-KA-104的方法。
实施例79.中间体(R)-VII；(R)-(2-氧代-1-苯基-2-(4-(3-(三氟甲基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。
将Boc-D-苯基甘氨酸(1.25g，5mmol，1当量)溶于20mL的DCM中，然后加入DCC(1.55g，7.5mmol1.5当量)，30分钟后加入1-(3-(三氟甲基)苯基)哌嗪(1.15g，5mmol，1当量)。在室温搅拌下继续反应4小时。此后，蒸馏出DCM至干燥。通过采用DCM：MeOH(9：0.5；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法对中间体(R)-VII进行纯化。
无色透明油。产率：78％(1.81g)；薄层色谱法：Rf＝0.62(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C24H28F3N3O3(463.50)，单一同位素质量：464.21。UPLC(纯度>99％)：tR＝8.40分钟。(M+H)+464.2。
实施例80.中间体(R)-VI；(R)-2-氨基-2-苯基-1-(4-(3-(三氟甲基)-苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮
将5mL的TFA加入到(R)-(2-氧代-1-苯基-2-(4-(3-(三氟甲基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯((R)-VI)(1.39g，3mmol，1当量)的DCM(50mL)溶液中，并将混合物搅拌2小时。接下来，将反应混合物用25％NH4OH溶液中和，然后用DCM(3×50mL)萃取。有机层用无水Na2SO4干燥，然后蒸发至干。得到黄色油状的(R)-2-氨基-2-苯基-1-(4-(3-(三氟甲基)苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮。
黄色油。产率：95％(1.03g)；C19H20F3N3O(363.38)。单一同位素质量：364.16。UPLC(>99％纯度)：tR＝4.96分钟。(M+H)+364.3。
实施例81.中间体(R)-V；(R)-4-氧代-4-((2-氧代-1-苯基-2-(4-(3-(三氟甲基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4
将琥珀酸酐-2,2,3,3-d4(0.28g，2.8mmol，1当量)添加至(R)-2-氨基-2-苯基-1-(4-(3-(三氟甲基)苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮((R)-VI)(1.02g，2.8mmol，1当量)的AcOEt(50mL)溶液中，并将反应混合物搅拌30分钟。此后，将AcOEt蒸馏至干。用Et2O醚洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：87％(1.13g)；C23H20D4F3N3O4(467.48)，单一同位素质量：468.20。UPLC(纯度>99％)：tR＝6.40分钟。(M+H)+468.2。
实施例82.化合物d4-(R)-KA-104；(R)-1-(2-氧代-1-苯基-2-(4-(3-(三氟甲基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)吡咯烷-2,5-二酮-3,3,4,4-d4
将ZnCl2(0.27g，2.0mmol，1当量)添加至(R)-4-氧代-4-((2-氧代-1-苯基-2-(4-(3-(三氟甲基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)丁酸-2,2,3,3-d4((R)-V)(0.93g，2.0mmol，1当量)的无水1,4-二噁烷(50mL)悬浮液中，将混合物加热至110℃。然后经30分钟滴加HMDS(0.48g，0.62mL，3.0mmol，1.5当量)的无水1,4-二噁烷(5mL)溶液。在回流搅拌下继续反应约24小时，然后减压浓缩。蒸馏出溶剂后，将油状残余物溶于DCM中，并用0.1M的HCl(3×50mL)、水(3×50mL)和饱和氯化钠溶液(3×50mL)萃取。有机层用无水Na2SO4干燥，然后蒸发至干。通过采用DCM：MeOH(9：0.5；v/v)洗脱剂体系的柱色谱法纯化粗产物。用Et2O洗涤后得到固体化合物。
白色固体。产率：80％(0.71g)；熔点：189.2-190.6℃；薄层色谱法：Rf＝0.35(DCM：MeOH(9：0.5；v/v))；C23H18D4F3N3O3(449.47)，单一同位素质量：449.19。UPLC(纯度：>99％):tR＝6.94分钟，(M+H)+449.3。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ2.79(br s,2H),3.02-3.18(m,2H),3.24–3.41(m,4H),6.11(s,1H),6.97(dd,J＝8.3,2.3Hz,1H),7.01(s,1H),7.09(d,J＝7.7Hz,1H),7.30–7.39(m,5H),7.41–7.46(m,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ42.4,45.6,48.5,48.7,56.9,67.2,112.8(d,J＝3.4Hz),116.7(d,J＝3.4Hz),119.2,124.1(q,J＝272.9Hz),128.7,128.9,129.7,129.8,130.9,131.5(q,J＝32.2Hz),132.8,150.8,165.1,176.4。
小鼠体内药代动力学研究
通用信息
在由经认可的动物机构提供的重27～32g的雄性白化小鼠(CD-1)上进行实验。在温度为22～24℃、湿度为50％(+/-10％)、每小时提供15次换气、具有12：12小时的明-暗循环的房间中饲养动物。此外，它们可持续获得食物和水。在获得适当批准后，所有程序均根据所适用的波兰和欧洲动物研究伦理指南进行。将含氘的受试化合物(d4-(R)-1、d9-(R)-2、d4-(R)-4、d6-(R)-5、d11-(R)-6和d6-(R)-7)和专利申请P.429656、PCT/PL2020/050028和专利240297中公开的母体含氢的衍生物1和2溶解在DMSO、PEG400和注射用水(1：4：5，v/v/v)的混合物中，并以20mg/kg和40mg/kg的两个剂量i.p.施用于小鼠。化合物d5-(R)-3、d3-(R)-8、(R)-KA-104和d4-(R)-KA-104仅以40mg/kg的剂量施用。化合物2和d6-(R)-7也以在DMSO/PEG400/注射用水(1：4：5，v/v/v)的混合物中的溶液形式以40mg/kg的剂量胃内施用之后进行试验。在不同时间点即在施用受试化合物后5、15和30分钟以及1、2、4、6、8、12和24小时(n＝3～4)，在异氟烷深度麻醉下通过断头术处死动物来采集血液和脑。使血液在室温下凝固20分钟，然后在10,000×g下离心5分钟(Eppendorf miniSpin离心机，德国)以获得血清。将获得的生物材料储存在-70℃下直至分析。
分析方法
通过高效液相色谱法-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定小鼠血清和脑匀浆中受试化合物的浓度。在与Exion LC AC HPLC(美国丹纳赫公司(Danaher Corporation，USA))偶联的Sciex Q TRAP 4500三重四极杆质谱仪上进行分析。在Hypersil GoldTM C18柱(3×50mm，5μm，thermo scientific，USA)上进行色谱分离，使用乙腈和水的混合物(含有0.1％甲酸)作为流动相。在40℃下进行分析并且使用表7中所示的梯度以获得最佳保留时间。缬沙坦用作内标物。为了最大灵敏度使用正离子化模式(ESI+)。通过使用注射泵将受试化合物的溶液直接连续输注(7μL/min)至质谱仪来优化离子路径参数。离子源的最佳参数为：离子喷雾电压设定为5500V，气体温度设定为500℃。帘气压设定为20psi，碰撞气体设定为中等。使用Analyst version 1.7软件收集并整合数据。以0.001至5μg/mL和0.1至40μg/mL的范围的血清以及0.004至20μg/g和0.4至80μg/g的范围的脑组织在适当基质(血清或脑匀浆)中制备校正曲线。通过加权(1/x·x)线性回归分析来生成校正曲线。计算的精密度值和准确度值均在FDA生物分析方法验证指南推荐的范围内。未观察到可能显著影响测定准确度的基质效应。测定的化合物在样品制备过程中和在自动进样器条件下是稳定的。
表7.用于测定小鼠血清和脑匀浆中受试化合物的流动相组成梯度。流动相A-0.1％甲酸的乙腈溶液；流动相B-0.1％甲酸的水溶液。
标准溶液的制备
在甲醇中以1mg/mL的浓度制备受试化合物的储备溶液。然后通过对储备溶液进行连续稀释来制备浓度为0.01、0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、10、50、100、200和400μg/mL(校准样品的有效浓度为0.001、0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1、5、10、20和40μg/mL)的工作标准溶液。为了制备校正曲线，将5μL具有特定浓度的受试化合物的工作标准溶液加入到45μL适当的基质(血清或脑匀浆)中并混合10秒。然后用0.1％甲酸的乙腈溶液将样品脱蛋白，并加入内标物(1：3v/v)，振荡10分钟(IKA Vibrax VXR，德国)，并以8000×g离心5分钟(Eppendorf miniSpin离心机，德国)。为了测定受试化合物的浓度，制备两条校正曲线。对于0.001至5μg/mL范围内的校正曲线，将上清液直接转移至色谱小瓶中。在0.1至40μg/mL范围内的校正曲线的情况下，用脱蛋白试剂将上清液另外稀释10倍，然后转移至色谱小瓶。
样品制备
使用labGen 125组织匀浆器(Gole Parmer，UK)在1：4(w/v)蒸馏水中对脑进行匀浆。用0.1％甲酸的乙腈溶液使脑或血清匀浆样品(50μL)脱蛋白，添加内标物(1：3，v/v)。然后将样品振荡10分钟(IKA Vibrax VXR，德国)并在8000×g下离心5分钟(EppendorfminiSpin离心机，德国)。将上清液直接转移至色谱小瓶或用脱蛋白试剂稀释10倍。用纯基质稀释其中在脱蛋白前受试化合物的浓度高于40μg/mL的血清样品。将自动进样器的温度设定为15℃并将1μL注射到分析柱中。
药代动力学分析
非房室模型分析用于评价药代动力学参数。直接从浓度-时间图评价最大浓度(Cmax)和达到最大血液浓度所需的时间—tmax。使用线性梯形法则计算绘制至最后测量的浓度的浓度-时间曲线下的面积(AUC0-t)和绘制至无穷大的浓度-时间曲线下的面积(AUCinf)。在Excel(Microsoft Office)中使用线性回归计算浓度-时间曲线的末端斜率(λz)。终末半衰期(t0.5λz)由以下关系式：ln2/λz计算。分布体积(Vz/F)按照剂量/(λz·AUC0～∞)计算，以及清除率(CL/F)由以下方程式获得：剂量/AUC0～∞。在这些方程式中，F是吸收剂量的分数。化合物在体内的平均滞留时间(MRT)基于以下方程式估算：AUMC0～∞/AUC0～∞，其中AUMC是一阶矩曲线下的面积。
在小鼠体内研究中评价抗惊厥活性和对运动协调的作用
通用信息
在由经认可的动物机构提供的重25～30g的雄性白化小鼠(CD-1)上进行实验。在获得适当批准后，所有程序均根据所适用的波兰和欧洲动物研究伦理指南进行。将物质在DMSO、PEG400和注射用水(1：4：5，v/v/v)的混合物中预先溶解后，以0.1mL/10g b.w.的单次注射在指定的试验之前的30分钟和2小时进行腹腔内施用。对4只小鼠组成的组进行初始筛选。基于由6只动物组成的3～4组动物获得的结果，估算在指定试验中的平均有效剂量(ED50)和转棒试验中的神经毒性剂量(TD50)。
最大电休克癫痫发作试验
在最大电休克癫痫发作试验(MES)中，通过持续时间为0.2s的500V、25mA电刺激诱导癫痫发作。使用电击发生器(Rodent shocker，Type 221，Hugo Sachs Elektronik，德国)产生电脉冲，并使用置于耳廓上的电极传递至动物。在腹腔内施用各种剂量的化合物后30分钟/2小时进行研究。在实验期间，对经历后肢强直性伸展形式的癫痫发作的动物数量进行计数(J.J.等人，Fundam.Clin.Pharmacol.2008,22,69～74)。
精神运动性癫痫发作试验(6Hz试验)
在精神运动性癫痫发作试验(6Hz试验)中，由频率为每秒6个脉冲的32mA和/或44mA电刺激诱发癫痫发作。使用电击发生器(ECT单元57800；Ugo Basile，Gemonio，意大利)产生电脉冲，并使用角膜电极传递至动物。在开始试验之前，用局部麻醉剂溶液(1％利多卡因溶液)轻轻润湿眼睛表面。在腹腔内施用各种剂量的化合物后30分钟/2小时进行研究。在3秒的时间内连续传递电刺激，然后观察动物10秒。在实验期间，对具有精神运动性惊厥发作的动物数进行计数：观察运动抑制、踉跄、保持坐姿、前肢阵挛、触须颤搐和Straub竖尾(Leclercq,K.；Kaminski,R.M.Epilepsia 2015,56,310–318)。
皮下戊四唑(scPTZ)癫痫发作试验
在皮下戊四唑癫痫发作试验中，动物接受剂量为100mg/kg的戊四唑。在试验前30分钟和2小时施用受试化合物。在PTZ施用后，将动物单独置于透明笼中并观察30分钟/2小时的时间。在实验期间，对具有持续至少3秒且失去平衡的阵挛性癫痫发作的动物数目进行计数。此外，测量首次阵挛性癫痫发作开始的潜伏期并与对照组进行比较(Ferreri,G.等人，Pharmacol.Biochem.Behav.2004,77,859–894；K.等人，J.EnzymInhib.Med.Chem.2016,31,1576–1582)。转棒试验中对小鼠协调性的影响
在转棒试验(May Commat,RR 0711RotaRod，土耳其)中评价受试化合物对运动协调性的作用。在实际实验前一天，将小鼠在以10转/分钟(rpm)旋转的棒上训练3分钟。在施用化合物后30分钟和2小时进行实验。在旋转棒的速度：10rpm下对动物的运动协调性测试60秒。神经毒性的量度是不能在棒上停留规定时间(J.J.等人，Eur.Neuropsychopharmacol.2005,6,609–616)。
统计分析
基于Litchfield和Wilcoxon方法(Litchfield,J.T.；Wilcoxon,F.J.Pharmacol.Exp.Ther.1949,96,99–113)计算ED50(有效剂量)值和TD50(毒性剂量)值以及相应的95％置信限。为了对scPTZ试验中的结果进行统计评价，使用单因素ANOVA方差分析，随后进行Dunnett's事后检验。如果p<0.05，则认为该值具有统计学上的显著性。
在小鼠体内研究中评价抗伤害感受活性和对自发运动活动的作用通用信息
在由经认可的动物机构提供的重25～30g的雄性白化小鼠(CD-1)上进行实验。在获得适当批准后，所有程序均根据所适用的波兰和欧洲动物研究伦理指南进行。所述物质在1％的吐温80溶液中悬浮后以0.1mL/10gb.w.的单次注射在指定试验前30分钟进行腹腔内施用。
抗伤害感受活性
所有试验/模型均根据专业文献中记载的程序进行：福尔马林试验(Beirith等人，Eur.J.Pharmacol.1998,345,233-245)，辣椒素诱导的疼痛模型(Mogilski等人，Pharmacol.Biochem.Behav.2015,133,99-110)，奥沙利铂诱导的神经病理性疼痛模型-vonFrey's试验(等人，Pharmacol.Biochem.Behav.2014,122,173-181)，链脲霉素诱导的糖尿病神经病理性疼痛模型-von Frey's试验(等人，Neuropharmacology2017,125,181-188；Tanabe等人，J.Pharmacol.Sci.2008,107,213-220)。试验组由8-10只动物组成。
小鼠中的自发性运动活动试验
根据科学文献(Mogilski等人，Inflamm.Res.2017,66,79-95)中记载的方法学，使用尺寸为40×40×31cm的笼(活动笼；Ugo Basile,Gemonio VA，意大利)对受试化合物对动物的自发性运动活动的影响进行评估(镇静或活化作用的评估)。在实验前30分钟施用化合物。在接下来的30分钟内以10分钟的间隔对每组中的光束交叉数进行计数。研究组由10只动物组成。
对小鼠微粒体的代谢稳定性评价
使用购自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)的小鼠(MLMS)和人(HLMS)肝微粒体进行代谢稳定性评估。文献中记载了详细的方法学(Kamiński等人，J.Med.Chem.2015,58,5274-5286)。通过将50mM受试化合物与小鼠或人微粒体(1mg/mL)在10mM TRIS-HCl缓冲液中混合来制备反应混合物。将反应混合物于37℃预孵育5min。初始孵育后，加入50μL的NADPH再生系统(Promega，Madison，WI，USA)以引发反应。然后将反应混合物于37℃孵育120分钟。加入200μL冷的超纯甲醇以完成反应。然后将混合物以14,000g离心15分钟，并使用具有TQ检测器的Waters ACQUITYTM TQD LC/MS系统(Waters，Milford，USA)分析上清液。每种实验以一式三份进行。
Claims (6)
1.式(I)化合物：
其中：
A是氢或氘，其中至少一个A是氘，特别优选每个A是氘，
B是氢或氘，
X是氢或氘或氟，
Y是氢或氘。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，其选自由以下各项组成的组：
(R)-N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺、
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺、
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺、
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺、
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺、
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(2-氟苄基)丙酰胺、
(S)-N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺、
(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺、
(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(2-氟苄基)丙酰胺、
(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺、
(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺、
(S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺、
(R,S)-N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺、
(R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺、
(R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(2-氟苄基)丙酰胺、
(R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺、
(R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺、
(R,S)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺。
3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，其选自由以下各项组成的组：
(R)-N-苄基-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)丙酰胺、
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基)丙酰胺、(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(2-氟苄基)丙酰胺、
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-(苯基甲基-d2)丙酰胺、(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((苯基-d5)甲基-d2)丙酰胺、
(R)-2-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基-3,3,4,4-d4)-N-((2-氟苯基)甲基-d2)丙酰胺。
4.用于制药的根据权利要求1-3中任一项所述的化合物。
5.用于治疗或预防神经疾病，尤其是癫痫、神经病理性疼痛、偏头痛或炎性疼痛或抑郁或焦虑或神经系统变性疾病的根据权利要求1-4中任一项所述的化合物。
6.根据权利要求4或5所述的化合物，其特征在于，所述神经系统变性疾病是帕金森病或阿尔茨海默病或肌萎缩侧索硬化。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PLP.439639 | 2021-11-24 | ||
| PL439639A PL244897B1 (pl) | 2021-11-24 | 2021-11-24 | Deuterowane funkcjonalizowane pochodne α-alaniny, zwłaszcza do leczenia chorób neurologicznych |
| PCT/PL2022/050083 WO2023096512A1 (en) | 2021-11-24 | 2022-11-24 | DEUTERATED FUNCTIONALIZED DERIVATIVES OF α-ALANINE, IN PARTICULAR FOR THE TREATMENT OF NEUROLOGICAL DISEASES |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN118302410A true CN118302410A (zh) | 2024-07-05 |
Family
ID=84980841
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202280077941.8A Pending CN118302410A (zh) | 2021-11-24 | 2022-11-24 | 特别用于治疗神经疾病的α-丙氨酸的氘代官能化衍生物 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN118302410A (zh) |
| AU (1) | AU2022395821A1 (zh) |
| CA (1) | CA3236670A1 (zh) |
| PL (1) | PL244897B1 (zh) |
| WO (1) | WO2023096512A1 (zh) |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL244071B1 (pl) * | 2019-01-07 | 2023-11-27 | Univ Jagiellonski | Pochodne (2,5-dioksopirolidyn-1-ylo)(fenylo)-acetamidu i ich zastosowanie do leczenia chorób o podłożu neurologicznym |
| PL240297B1 (pl) * | 2019-04-16 | 2022-03-14 | Univ Jagiellonski | Modyfikowane pochodne aminokwasowe do leczenia chorób o podłożu neurologicznym oraz wybranych zaburzeń psychiatrycznych |
-
2021
- 2021-11-24 PL PL439639A patent/PL244897B1/pl unknown
-
2022
- 2022-11-24 AU AU2022395821A patent/AU2022395821A1/en active Pending
- 2022-11-24 WO PCT/PL2022/050083 patent/WO2023096512A1/en active Application Filing
- 2022-11-24 CA CA3236670A patent/CA3236670A1/en active Pending
- 2022-11-24 CN CN202280077941.8A patent/CN118302410A/zh active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL244897B1 (pl) | 2024-03-25 |
| PL439639A1 (pl) | 2023-05-29 |
| WO2023096512A1 (en) | 2023-06-01 |
| CA3236670A1 (en) | 2023-06-01 |
| AU2022395821A1 (en) | 2024-06-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102012675B1 (ko) | 베타-세크레타제(BACE)의 억제제로서 유용한 3,4-디하이드로-피롤로[1,2-a]피라진-1-일아민 유도체 | |
| SK5232002A3 (en) | Bicyclic amino acids as pharmaceutical agents | |
| CN103298810A (zh) | 1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶衍生物及其作为MGLUR2受体的正变构调节剂的用途 | |
| TW201124421A (en) | Substituted phenoxymethyl dihydro oxazolopyrimidinones, preparation and use thereof | |
| KR20210145298A (ko) | 신경근 질환, 신경 퇴행성 질환, 자가면역 질환, 발달 질환, 진탕, 안구 건조증, 및/또는 대사 질환의 dnp 및 dnp 프로드럭 치료 | |
| ES2532660T3 (es) | Antagonistas carbocíclicos de receptores de GLYT1 | |
| RU2513856C2 (ru) | Способы получения метилового эфира 4-оксооктагидроиндол-1-карбоновой кислоты и ее производные | |
| WO2021150885A1 (en) | Cannabinoid derivatives | |
| US20220153694A1 (en) | Modified amino acid derivatives for the treatment of neurological diseases and selected psychiatric disorders | |
| Dawidowski et al. | Synthesis and anticonvulsant activity of novel 2, 6-diketopiperazine derivatives. Part 2: Perhydropyrido [1, 2-a] pyrazines | |
| EP2382206A2 (en) | Compounds and methods for the treatment of pain and other diseases | |
| Abram et al. | Asymmetric synthesis and in vivo/in vitro characterization of new hybrid anticonvulsants derived from (2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl) phenylacetamides | |
| CN118302410A (zh) | 特别用于治疗神经疾病的α-丙氨酸的氘代官能化衍生物 | |
| JP2022522949A (ja) | （２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）（フェニル）－アセトアミド誘導体、および神経疾患の処置におけるその使用 | |
| KR20240110038A (ko) | 특히 신경 질환의 치료를 위한 α-알라닌의 중수소화된 기능화 유도체 | |
| US20150045574A1 (en) | Methods for making valerenic acid derivatives and their use | |
| CN111848722B (zh) | 一种雷公藤红素衍生物及其制备方法与应用 | |
| Kourounakis et al. | Synthesis and Evaluation of Brain‐targeted Chemical Delivery Systems for the Neurotrophomodulator 4‐Methylcatechol | |
| WO2021210997A1 (en) | Water-soluble, modified amino acid derivatives for treatment of neurological diseases, and selected psychiatric disorders | |
| Thurkauf et al. | Synthesis, pharmacological action, and receptor binding affinity of the enantiomeric 1-(1-phenyl-3-methylcyclohexyl) piperidines | |
| Lin et al. | Synthesis and biological activity of cis-(3aR)-(-)-2, 3, 3a, 4, 5, 9b-hexahydro-3-propyl-1H-benz [e] indole-9-carboxamide: a potent and selective 5-HT1A receptor agonist with good oral availability | |
| CN114728920B (zh) | 一种沃替西汀前药及其应用 | |
| WO2024105016A1 (en) | Novel bicyclic[1,2,4]triazolone derivatives as negative allosteric modulators of mglu7 receptors | |
| WO2024015416A1 (en) | Celastrol derivatives | |
| EP1992637A1 (en) | 1-Aminocyclopentane-1,3,4- tricarboxylic acids derivatives |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication |