CN118161420A - 一种抑制酪氨酸酶活性的胶原肽/壳寡糖复合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种抑制酪氨酸酶活性的胶原肽/壳寡糖复合物及其制备方法和应用，其中胶原肽与壳寡糖以1:1‑5的质量比复合，其中胶原肽与壳寡糖的复合质量比为1:3时，其抗氧化性和酪氨酸酶抑制性能均优于其他配比组合以及两种组分分别作用的效果。
Description
技术领域
本发明属于功能性保健食品领域，具体涉及一种抑制酪氨酸酶活性的胶原肽/壳寡糖复合物及其制备方法和应用。
背景技术
壳聚糖是一种从甲壳素中提取的天然氨基多糖，被称为自然界中含量最丰富的有机材料之一，具有良好的生物相容性、可降解性和无毒性。壳寡糖是由壳聚糖通过物理、酶解或化学水解等方法降解得到的一种氨基寡糖，分子量一般在3000Da以下，由于分子量的降低是壳寡糖具有良好的溶解性，壳寡糖具有抑制酪氨酸酶活性、抗氧化、促进细胞生长等生物活性，且易被人体吸收，在医疗和食品行业有重要研究意义。
壳寡糖可以通过清除自由基或诱导抗氧化酶基因的表达而表现出抗氧化活性，其自由基清除效率取决于壳寡糖上的氨基与羟基的供氢能力。壳寡糖分子间的氢键作用力随着分子量降低而减小，因此分子量越小的壳寡糖被认为可以提供更多的氢离子用于阻断自由基的链式反应，其抗氧化性更强。
胶原肽因其具备良好的抗氧化活性、保湿抗皱活性、美白活性而受到广大研究人员的青睐。胶原肽的不同生理活性一方面取决于特定的功能性氨基酸序列，另一方面取决于合适的分子量。胶原肽中的疏水氨基酸残基如丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸等可以通过电子转移，进而和自由基形成稳定化合物，这些氨基酸使得胶原肽抗氧化性提高；同时胶原肽中还有大量的氨基、羧基、羟基等亲水基团，且其分子量较小，与皮肤相容性较好，可进入角质层，起到深层保湿作用，是较为理想的保湿化妆品原料。随着对胶原肽抗氧化活性和保湿抗皱活性的研究，胶原肽的美白活性也逐渐成为研究热点，当胶原肽分子量在3000Da以下时，其美白活性较好。若肽链中含有疏水性氨基酸，可氧化自由基，对胶原肽抑制酪氨酸酶活性非常重要；胶原肽中的不带电荷的极性氨基酸残基，可能通过与生成黑色素时的中间产物形成共轭而抑制酪氨酸酶活性，精氨酸、组氨酸可以螯合酪氨酸酶中心的铜离子进而抑制酪氨酸酶活性，胶原肽中上述氨基酸含量丰富，为胶原肽具备美白活性提供了理论基础。但现有技术中还未见有将胶原肽和壳寡糖复合用于提高抗氧化性和抑制酪氨酸酶活性的报道。
发明内容
为了克服现有技术中存在的上述技术问题，本发明提供一种抑制酪氨酸酶活性的胶原肽/壳寡糖复合物及其制备方法和应用，将胶原肽与壳寡糖进行复合，用于协同提高抗氧化性和抑制酪氨酸酶的活性。
为了实现发明目的，本发明采用如下技术方案：一种抑制酪氨酸酶活性的胶原肽/壳寡糖复合物，由胶原肽和壳寡糖组成。
在本发明的优选的实施方案中，胶原肽和壳寡糖的质量比为1:1-5；更优选的，胶原肽和壳寡糖的质量比为1:3。本发明通过特定比例的胶原肽与壳寡糖复合，使其具有比组分单独使用更好的抗氧化性和酪氨酸酶抑制性能，达到更好的美白效果。实验结果表明，胶原肽与壳寡糖的复合质量比为1:3时，其抗氧化性和酪氨酸酶抑制性能均优于其他配比组合以及两种组分分别作用的效果。
本发明还保护所述的胶原肽/壳寡糖复合物的制备方法，包括以下步骤：按比例分别称取胶原肽和壳寡糖，配制成不同浓度的溶液，然后混合均匀，并进行恒温反应，得到胶原肽/壳寡糖复合物。
在本发明的优选的实施方案中，胶原肽和壳寡糖的质量比为1:1-5；更优选的，胶原肽和壳寡糖的质量比为1:3。
在本发明的优选的实施方案中，加入去离子水配制成不同浓度的溶液，然后置于具有搅拌功能的反应器中进行恒温反应。
在本发明的优选的实施方案中，恒温反应的反应温度为20-70℃，反应时间为30-120min。
本发明还保护所述的胶原肽/壳寡糖复合物以及所述的制备方法制备得到的胶原肽/壳寡糖复合物在药物或保健食品或化妆品或医疗器械中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
本发明采用的组分完全来自于纯天然原料，提取工艺简便，无任何添加，不会对人体造成不良影响，更不会造成成瘾性和药物依赖性等，安全性高，抗氧化性和酪氨酸酶抑制活性更好。
本发明中特定比例的胶原肽与壳寡糖得到复合物协同提高了抗氧化性和酪氨酸酶抑制活性，为更好的实现美白提供新的发展思路。
附图说明
下面结合附图做进一步说明。
图1为胶原肽和壳寡糖质量比为1:1时过氧自由基清除率。
图2为胶原肽和壳寡糖质量比为1:1时酪氨酸酶抑制活性。
图3为胶原肽和壳寡糖质量比为1:3时过氧自由基清除率。
图4为胶原肽和壳寡糖质量比为1:3时酪氨酸酶抑制活性。
图5为胶原肽和壳寡糖质量比为1:5时过氧自由基清除率。
图6为胶原肽和壳寡糖质量比为1:5时酪氨酸酶抑制活性。
图7为胶原肽壳寡糖抗氧化性协同作用图。
图8为胶原肽壳寡糖酪氨酸酶抑制效果协同作用图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式对本发明进行具体的描述，但本发明的技术范围不限于这些实施例。
本发明所用到的测试方法如下：
步骤1：分别称取一定量的胶原肽和壳寡糖，以去离子水为溶剂将其配制成50mg/mL的溶液，梯度稀释后使其浓度为50mg/mL、40mg/mL、30mg/mL、20mg/mL、10mg/mL、8mg/mL、6mg/mL、4mg/mL、2mg/mL和1mg/mL。
步骤2：胶原肽和壳寡糖的抗氧化性测定如下所述，称取一定量的Tris样品粉末溶于去离子水配制成50mmol/L的溶液，取50mL Tris溶液与19.9mL的0.1mol/L的HCl混合并定容至100mL，缓冲液中须含有1mmol/L的EDTA，配制成Tris-HCl缓冲液。称取一定量的邻苯三酚样品粉末，将其溶于10mmol/L的HCl中配制成1.5mmol/L的邻苯三酚溶液。在96孔板中加入80μL样品，80μL的Tris-HCl缓冲液，40μL的邻苯三酚混合，室温下反应10min，利用全波长酶标仪测定其在405nm处的吸光度值。对照组：Tris-HCl缓冲液和邻苯三酚溶液量保持不变，用80μL的去离子水代替样品。空白组：Tris-HCl缓冲液和样品量保持不变，用40μL10mmol/L盐酸代替邻苯三酚。
计算公式如下：
其中式(1)中AC为对照组吸光度；AS为样品吸光度；Ab为空白组吸光度。
步骤3：胶原肽和壳寡糖的酪氨酸酶抑制活性测定如下所述，配制反应所需的酪氨酸溶液，多酚氧化酶溶液，溶剂为PBS缓冲液。配制样品组溶液以及对照组溶液，实验组中滴加酪氨酸60μL，复合肽溶液60μL，PBS 80μL；对照组中PBS替代酪氨酸溶液；空白组中去离子水替代复合肽溶液；完全对照组中去离子水替代复合肽溶液，PBS替代酪氨酸溶液。在25℃避光保存10min，再加入多酚氧化酶20μL，在25℃下避光反应20min，使用酶标仪测定其在475nm处的吸光度值，分别记为As、Ac、Ab、A0。
按以下公式计算酪氨酸酶抑制活性：
下面为具体的实施例。
实施例1：按1:1的质量比例分别称取一定量胶原肽和壳寡糖，加入去离子水配制成不同浓度的溶液，然后置于具有搅拌功能的反应器中进行恒温反应，温度设定为25℃，反应时间设定为30min，制备得到胶原肽/壳寡糖复合物。
实施例2：按1:3的质量比例分别称取一定量胶原肽和壳寡糖，加入去离子水配制成不同浓度的溶液，然后置于具有搅拌功能的反应器中进行恒温反应，温度设定为25℃，反应时间设定为30min，制备得到胶原肽/壳寡糖复合物。
实施例3：按1:5的质量比例分别称取一定量胶原肽和壳寡糖，加入去离子水配制成不同浓度的溶液，然后置于具有搅拌功能的反应器中进行恒温反应，温度设定为25℃，反应时间设定为30min，制备得到胶原肽/壳寡糖复合物。
实施例1-3所制备的复合物的抗氧化性和酪氨酸酶抑制活性如附图1-6所示。可见，本发明通过特定比例的胶原肽与壳寡糖复合，使其具有比单独使用更好的抗氧化性和酪氨酸酶抑制活性，达到更好的美白效果。实验结果表明，在胶原肽与壳寡糖质量比为1:1和1:5时，复合物的抗氧化性和酪氨酸酶抑制活性与胶原肽能力相当，而当胶原肽与壳寡糖质量比为1:3时，各浓度下复合物的抗氧化性和酪氨酸酶抑制活性均优于两种组分单独作用时的结果，又在1:3比例下进行了协同指数计算，发现胶原肽和壳寡糖的协同指数小于1，即协同效果优异，复合物效果相比单独使用效果更好。
本发明采用的组分完全来自于纯天然原料，提取工艺科学简便，无任何添加。口服后不会对人肠胃造成不良影响，更不会造成成瘾性和药物依赖性等，安全性高，抗氧化性和酪氨酸酶抑制活性更好。
以上实施例显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，而不是以任何方式限制本发明的范围，在不脱离本发明范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的范围内。
Claims (10)
1.一种抑制酪氨酸酶活性的胶原肽/壳寡糖复合物，其特征在于，由胶原肽和壳寡糖组成。
2.根据权利要求1所述的胶原肽/壳寡糖复合物，其特征在于，胶原肽和壳寡糖的质量比为1:1-5。
3.根据权利要求1所述的胶原肽/壳寡糖复合物，其特征在于，胶原肽和壳寡糖的质量比为1:3。
4.根据权利要求1所述的胶原肽/壳寡糖复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：按比例分别称取胶原肽和壳寡糖，配制成不同浓度的溶液，然后混合均匀，并进行恒温反应，得到胶原肽/壳寡糖复合物。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，胶原肽和壳寡糖的质量比为1:1-5。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，胶原肽和壳寡糖的质量比为1:3。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，加入去离子水配制成不同浓度的溶液，然后置于具有搅拌功能的反应器中进行恒温反应。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，恒温反应的反应温度为20-70℃，反应时间为30-120min。
9.根据权利要求1-3中任一项所述的胶原肽/壳寡糖复合物在药物或保健食品或化妆品或医疗器械中的应用。
10.根据权利要求4-8中任一项所述的制备方法制备得到的胶原肽/壳寡糖复合物在药物或保健食品或化妆品或医疗器械中的应用。
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| CN202410301865.5A CN118161420A (zh) | 2024-03-17 | 2024-03-17 | 一种抑制酪氨酸酶活性的胶原肽/壳寡糖复合物及其制备方法和应用 |
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