CN118159548A - 抗病毒化合物 - Google Patents

Abstract

本文提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、包含本文所述的化合物(包括本文所述的化合物的药学上可接受的盐)的药物组合物及其合成方法。本文还提供了用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐治疗疾病和/或病症的方法。

Description

抗病毒化合物

以引用方式并入任何优先权申请

例如在与本申请一起提交的申请数据表或请求中鉴定到对其的国外或国内优先权要求的任何和所有申请均据此以引用方式在37CFR 1.57以及规则4.18和20.6下并入，包括2021年7月9日提交的美国临时申请号63/203,135、2021年9月22日提交的美国临时申请号63/261,480、2021年11月17日提交的美国临时申请号63/264,212、2021年12月15日提交的美国临时申请号63/265,479和2022年2月15日提交的美国临时申请号63/268,052，这些专利中的每一篇专利全文以引用方式并入。

背景技术

技术领域

本申请涉及化学、生物化学和医学领域。本文公开了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、包含本文所述的化合物(包括本文所述的化合物的药学上可接受的盐)的药物组合物及其合成方法。本文还公开了用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐治疗疾病和/或病症的方法。

描述

正义单链RNA病毒((+)ssRNA病毒)是使用正义单链RNA作为其遗传物质的病毒。正义单链RNA病毒可以是有包膜的或无包膜的。冠状病毒、小核糖核酸病毒和诺罗病毒都是(+)ssRNA病毒。已知上述病毒中的每一种病毒都能感染哺乳动物，包括人。

发明内容

本文所公开的一些实施方案涉及式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

本文所公开的一些实施方案涉及药物组合物，该药物组合物可含有有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。

本文所述的一些实施方案涉及治疗冠状病毒感染的方法，该方法可包括向被鉴定为患有冠状病毒感染的受试者施用有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于治疗冠状病毒感染。

本文所公开的一些实施方案涉及抑制冠状病毒的复制的方法，该方法可包括使感染冠状病毒的细胞与有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于抑制冠状病毒的复制。

本文所述的一些实施方案涉及治疗小核糖核酸病毒感染的方法，该方法可包括向被鉴定为患有小核糖核酸病毒感染的受试者施用有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于治疗小核糖核酸病毒感染。

本文所公开的一些实施方案涉及抑制小核糖核酸病毒的复制的方法，该方法可包括使感染小核糖核酸病毒的细胞与有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于抑制小核糖核酸病毒的复制。

本文所述的一些实施方案涉及治疗诺罗病毒感染的方法，该方法可包括向被鉴定为患有诺罗病毒感染的受试者施用有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于治疗诺罗病毒感染。

本文所公开的一些实施方案涉及抑制诺罗病毒的复制的方法，该方法可包括使感染诺罗病毒的细胞与有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于抑制诺罗病毒的复制。

这些是下文更详细描述的其他实施方案。

具体实施方式

冠状病毒科病毒是有包膜的正链、单链、球形RNA病毒家族。冠状病毒因其表面上的冠状突起而得名。冠状病毒科包括两个亚科：冠状病毒和环曲病毒。冠状病毒属具有螺旋核衣壳，而环曲病毒属具有管状核衣壳。冠状病毒科的病毒包括中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)、SARS和SARS-CoV-2。

冠状病毒疾病2019(COVID-19)(也称为新型冠状病毒肺炎或2019-nCoV急性呼吸道疾病)是由病毒严重呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)(也称为新型冠状病毒2019或2019-nCoV)引起的感染性疾病。COVID-19的症状包括发热、咳嗽、气短、疲劳、头痛、嗅觉丧失、鼻塞、喉咙痛、咳痰、肌肉或关节疼痛、寒颤、恶心、呕吐和腹泻。在严重的情况下，症状可包括觉醒困难、精神错乱、脸色或嘴唇发青、咳血、白细胞计数减少和肾衰竭。并发症可能包括肺炎、病毒性败血症、急性呼吸窘迫综合征和肾衰竭。

COVID-19对公众健康特别有威胁。该病毒是高度传染性的，并且目前的研究表明，它可以被无症状携带者或症状前携带者传播。同样，疾病的早期进展缓慢，足以使携带者常常无法意识到他们被感染，导致他们让许多其他人暴露于病毒。COVID-19的易传播性、其受害者的高住院率和其死亡率的组合使得该病毒成为严重的公共健康风险，特别是对于不具有被配备以便为大流行病级别的患者提供支持性护理的医疗保健系统的国家而言。还没有针对COVID-19的疫苗或特异性抗病毒治疗，因此迫切需要治疗或治愈措施。

SARS-CoV-2并不是唯一会引起疾病的冠状病毒。它是一种β冠状病毒(冠状病毒的一个属)，包括其他人类病原体，包括SARS-CoV(SARS的致病物)、MERS-CoV(MERS的致病物)和HCoV-OC43(普通感冒的致病物)。这些病毒的传染性以及它们引起的疾病的严重程度差异很大。β-冠状病毒还可以表现为人畜共患感染，在人和动物之间传播。此外，非人物种诸如骆驼、蝙蝠、老虎、非人灵长类动物和兔子也可能对β冠状病毒易感。因此，迫切需要治疗或治愈多种冠状病毒。

本公开提供了可用于对抗冠状病毒、特别是SARS-CoV-2(人的COVID-19的致病物)的分子。因此，本公开满足了本领域对可安全且有效地治疗或预防人的冠状病毒感染的化合物的需要。

小核糖核酸病毒是正链RNA、无包膜病毒家族。小核糖核酸病毒具有60个相同的亚基(顶点)，含有五个原聚体。每个原聚体由称为VP1、VP2、VP3和VP4的四种蛋白质的一个拷贝构成。存在若干小核糖核酸病毒属，包括肠道病毒属、口蹄疫病毒属、心病毒属和肝病毒属。已知能感染人的肠道病毒包括但不限于鼻病毒A、鼻病毒B、鼻病毒C、柯萨奇病毒A、柯萨奇病毒B和脊髓灰质炎病毒。不存在针对小核糖核酸病毒感染的特异性治疗。

诺罗病毒是属于杯状病毒科的单链正义RNA、无包膜病毒。诺罗病毒通常通过粪口途径传播，并且是肠胃炎的常见原因。被感染的受试者可能经历恶心、非血性腹泻、呕吐和/或腹痛。患有诺罗病毒感染的人可能会严重脱水并且需要医疗照顾。与小核糖核酸病毒感染一样，对于诺罗病毒感染没有特异性治疗。因此，需要有效治疗或预防小核糖核酸病毒和/或诺罗病毒感染的化合物。

定义

除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有与本领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。除非另有说明，否则本文引用的所有专利、申请、公开申请和其他公开全文均以引用方式并入。在本文的术语存在多个定义的情况下，除非另有说明，否则以该部分中的定义为准。

每当基团被描述为“任选地取代的”时，该基团可以是未取代的，或者被所指示的取代基中的一个或多个取代。同样，当基团被描述为“未取代的或取代的”时，如果是取代的，则一个或多个取代基可选自所指示的取代基中的一个或多个。如果没有指示取代基，则意指所指示的“任选取代的”或“取代的”基团可以被一个或多个基团(例如1、2或3个)取代，该一个或多个基团单独地且独立地选自氘、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)、杂环基(烷基)、羟基、烷氧基、酰基、氰基、卤素、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰氨基、S-磺酰氨基、N-磺酰氨基、C-羧基、O-羧基、C-酰氨基(烷基)、异氰酸根、硫氰酸根、硝基、叠氮基、甲硅烷基、亚氧硫基、亚磺酰基、磺酰基、卤代烷基、卤代烷氧基、三卤甲磺酰基、三卤甲磺酰氨基、氨基、单取代胺和二取代胺。

如本文所用，其中“a”和“b”为整数的“C_a至C_b”是指烷基、烯基或炔基基团的碳原子数，或环烷基、环烯基、芳基、杂芳基或杂环基基团中的环的碳原子数。即，烷基、烯基、炔基、环烷基的环、环烯基的环、芳基的环、杂芳基的环或杂环基的环可含有“a”至“b”(包括端点在内)个碳原子。因此，例如，“C₁至C₄烷基”基团是指具有1至4个碳的所有烷基基团，即CH₃-、CH₃CH₂-、CH₃CH₂CH₂-、(CH₃)₂CH-、CH₃CH₂CH₂CH₂-、CH₃CH₂CH(CH₃)-和(CH₃)₃C-。如果关于烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基或杂环基基团没有指定“a”和“b”，则应当假定这些定义中所描述的最宽范围。

如本文所用，“烷基”是指包含完全饱和(没有双键或三键)烃基基团的直链或支链烃链。烷基基团可具有1至20个碳原子(每当它在本文中出现，数值范围诸如“1至20”是指给定范围内的每个整数；例如，“1至20个碳原子”意指烷基基团可由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等组成，至多并且包含20个碳原子，但本发明的定义还涵盖在未指定数值范围的情况下出现的术语“烷基”)。烷基基团也可为具有1至10个碳原子的中等大小的烷基。烷基基团也可为具有1至6个碳原子的低级烷基。化合物的烷基基团可被命名为“C₁-C₄烷基”或类似的命名。仅以举例的方式，“C₁-C₄烷基”指示在烷基链中存在一至四个碳原子，即烷基链选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。典型的烷基基团包括但绝不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基和己基。烷基基团可以是取代的或未取代的。

如本文所用，“烯基”是指在直链或支链烃链中含有一个或多个双键的烷基基团。烯基的长度可变化。例如，烯基可为C_2-4烯基、C_2-6烯基或C_2-8烯基。烯基基团的示例包括丙二烯基、乙烯基甲基和乙烯基。烯基基团可以是未取代的或取代的。

如本文所用，“炔基”是指在直链或支链烃链中含有一个或多个三键的烷基基团。炔基的长度可变化。例如，炔基可为C_2-4炔基、C_2-6炔基或C_2-8炔基。炔基的示例包括乙炔基和丙炔基。炔基基团可以是未取代的或取代的。

如本文所用，“环烷基”是指完全饱和(无双键或三键)单环或多环烃环体系。当由两个或更多个环构成时，这些环可以稠合或螺接方式接合在一起。环烷基基团可在环中含有3至10个原子。在环中含有3至8个原子或在环中含有3至6个原子。环烷基基团可以是未取代的或取代的。典型的环烷基基团包括但绝不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。

如本文所用，“环烯基”是指在至少一个环中含有一个或多个双键的单环或多环烃环体系；但是，如果存在不止一个双键，则该双键无法形成遍及所有环的完全离域的π电子体系(否则该基团将为如本文所定义的“芳基”)。当由两个或更多个环构成时，这些环可以稠合或螺接方式连接在一起。环烯基可在环中含有3至10个原子或在环中含有3至8个原子。环烯基基团可以是未取代的或取代的。

如本文所用，“芳基”是指具有遍及所有环的完全离域π电子体系的碳环(所有碳)单环或多环的芳族环体系(包括其中两个碳环共享化学键的稠环体系)。芳基基团中的碳原子数可变化。例如，芳基基团可为C₆至C₁₄芳基基团、C₆至C₁₀芳基基团或C₆芳基基团。芳基基团的示例包括但不限于苯、萘和薁。芳基基团可以是取代的或未取代的。

如本文所用，“杂芳基”是指含有一个或多个杂原子(例如，1至5个杂原子)的单环、双环和三环芳族环体系(具有完全离域π电子体系的环体系)，该杂原子是除碳之外的元素，包括但不限于氮、氧和硫。杂芳基基团的环中的原子数可变化。例如，杂芳基基团可在环中含有4至14个原子，在环中含有5至10个原子，或者在环中含有5至6个原子。此外，术语“杂芳基”包括其中两个环，诸如至少一个芳基环和至少一个杂芳基环或至少两个杂芳基环共享至少一个化学键的稠环体系。杂芳基环的示例包括但不限于呋喃、呋咱、噻吩、苯并噻吩、酞嗪、吡咯、噁唑、苯并噁唑、1,2,3-噁二唑、1,2,4-噁二唑、噻唑、1,2,3-噻二唑、1,2,4-噻二唑、苯并噻唑、咪唑、苯并咪唑、吲哚、吲唑、吡唑、苯并吡唑、异噁唑、苯并异噁唑、异噻唑、三唑、苯并三唑、噻二唑、四唑、吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、嘌呤、蝶啶、喹啉、异喹啉、喹唑啉、喹喔啉、噌啉和三嗪。杂芳基基团可以是取代的或未取代的。

如本文所用，“杂环基”是指单环、双环和三环体系，其中碳原子连同1至5个杂原子一起构成所述环体系。杂环可任选地含有一个或多个以完全离域π电子体系不会遍及所有环发生的这种方式定位的不饱和键。杂环基基团的环中的原子数可变化。例如，杂环基基团可在环中含有4至14个原子、在环中含有5至10个原子或在环中含有5至6个原子。杂原子是除碳之外的元素，包括但不限于氧、硫和氮。杂环还可含有一个或多个羰基或硫代羰基官能团，以便使该定义包括氧代-体系和硫代-体系，诸如内酰胺、内酯、环状酰亚胺、环状硫代酰亚胺和环状氨基甲酸酯。当由两个或更多个环构成时，这些环可以稠合形式接合在一起。另外，杂环基中的任何氮均可以是季铵化的。杂环基基团可以是未取代的或取代的。此类“杂环基”基团的示例包括但不限于1,3-二噁英、1,3-二氧杂环己烷、1,4-二氧杂环己烷、1,2-二氧戊环、1,3-二氧戊环、1,4-二氧戊环、1,3-氧硫杂环己烷、1,4-氧硫杂环己二烯、1,3-氧硫杂环戊烷、1,3-二硫杂环戊二烯、1,3-二硫戊环、1,4-氧硫杂环己烷、四氢-1,4-噻嗪、2H-1,2-噁嗪、马来酰亚胺、琥珀酰亚胺、巴比妥酸、硫代巴比妥酸、二氧代哌嗪、乙内酰脲、二氢尿嘧啶、三氧杂环己烷、六氢-1,3,5-三嗪、咪唑啉、咪唑烷、异噁唑啉、异噁唑烷、噁唑啉、噁唑烷、噁唑烷酮、噻唑啉、噻唑烷、吗啉、环氧乙烷、哌啶N-氧化物、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吡咯烷酮、吡咯烷二酮、4-哌啶酮、吡唑啉、吡唑啶、2-氧代吡咯烷、四氢吡喃、4H-吡喃、四氢噻喃、硫代吗啉、硫代吗啉亚砜、硫代吗啉砜以及它们的苯并稠合类似物(例如，苯并咪唑啉酮、四氢喹啉和3,4-亚甲基二氧基苯基)。

如本文所用，“环烷基(烷基)”是指经由低级亚烷基基团连接作为取代基的环烷基基团。环烷基(烷基)的低级亚烷基和环烷基基团可以是取代的或未取代的。环烷基(烷基)基团可以是未取代的或取代的。

如本文所用，“芳基(烷基)”是指经由低级亚烷基基团连接作为取代基的芳基基团。芳基(烷基)的低级亚烷基和芳基基团可以是取代的或未取代的。示例包括但不限于苄基、2-苯基(烷基)、3-苯基(烷基)和萘基(烷基)。

如本文所用，“杂芳基(烷基)”是指经由低级亚烷基基团连接作为取代基的杂芳基基团。杂芳基(烷基)的低级亚烷基和杂芳基基团可以是取代的或未取代的。示例包括但不限于2-噻吩基(烷基)、3-噻吩基(烷基)、呋喃基(烷基)、噻吩基(烷基)、吡咯基(烷基)、吡啶基(烷基)、异噁唑基(烷基)、咪唑基(烷基)、以及它们的苯并稠合类似物。

“杂环基(烷基)”是指经由低级亚烷基基团连接作为取代基的杂环基团。杂环基(烷基)的低级亚烷基和杂环基可以是取代的或未取代的。示例包括但不限于四氢-2H-吡喃-4-基(甲基)、哌啶-4-基(乙基)、哌啶-4-基(丙基)、四氢-2H-噻喃-4-基(甲基)和1,3-噻嗪烷-4-基(甲基)。

“低级亚烷基基团”是形成键以经由其末端碳原子连接分子片段的直链-CH₂-系链基团。示例包括但不限于亚甲基(-CH₂-)、亚乙基(-CH₂CH₂-)、亚丙基(-CH₂CH₂CH₂-)和亚丁基(-CH₂CH₂CH₂CH₂-)。低级亚烷基基团可通过用根据“取代的”的定义列出的一个或多个取代基替代低级亚烷基基团的一个或多个氢来取代。此外，当低级亚烷基基团为取代的时，低级亚烷基可通过用环烷基基团(例如，)替代同一碳上的两个氢来取代。

如本文所用，“烷氧基”是指式-OR，其中R为本文所定义的烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、环烷基(烷基)、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)。烷氧基的非限制性列表为甲氧基、乙氧基、正丙氧基、1-甲基乙氧基(异丙氧基)、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、苯氧基和苄氧基。在一些情况下，烷氧基可以是-OR，其中R为未取代的C_1-4烷基。烷氧基可以是取代的或未取代的。

如本文所用，“酰基”是指经由羰基基团连接作为取代基的氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)。示例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、苯甲酰基和丙烯酰基。酰基可以是取代的或未取代的。

如本文所用，“卤代烷基”是指其中氢原子中的一个或多个被卤素替代的烷基基团(例如，单卤代烷基、二卤代烷基和三卤代烷基)。此类基团包括但不限于氯甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、1-氯-2-氟甲基和2-氟异丁基。卤代烷基可以是取代的或未取代的。

如本文所用，“卤代烷氧基”是指其中氢原子中的一个或多个氢原子被卤素替代的O-烷基基团和O-单环环烷基(例如，单卤代烷氧基、二卤代烷氧基和三卤代烷氧基)。此类基团包括但不限于氯甲氧基、氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、1-氯-2-氟甲氧基、2-氟异丁氧基、氯取代的环丙基、氟取代的环丙基、氯取代的环丁基和氟取代的环丁基。在一些情况下，卤代烷氧基可以是-OR，其中R为被1、2或3个卤素取代的C_1-4烷基。卤代烷氧基可以是取代的或未取代的。

“亚氧硫基”基团是指其中R可为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)的“-SR”基团。亚氧硫基可以是取代的或未取代的。

“亚磺酰基”基团是指其中R可与相对于亚氧硫基所定义的相同的“-S(＝O)-R”基团。亚磺酰基可以是取代的或未取代的。

“磺酰基”基团是指其中R可与相对于亚氧硫基所定义的相同的“SO₂R”基团。磺酰基可以是取代的或未取代的。

“O-羧基”基团是指其中R可为如本文所定义的氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)的“RC(＝O)O-”基团。O-羧基可以是取代的或未取代的。

术语“酯”和“C-羧基”是指其中R可与相对于O-羧基所定义的相同的“-C(＝O)OR”基团。酯和C-羧基可以是取代的或未取代的。

“硫代羰基”基团是指其中R可与相对于O-羧基所定义的相同的“-C(＝S)R”基团。硫代羰基可以是取代的或未取代的。

“三卤甲磺酰基”基团是指其中每个X为卤素的“X₃CSO₂-”基团。

“三卤甲磺酰氨基”基团是指其中每个X为卤素并且R_A为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)的“X₃CS(O)₂N(R_A)-”基团。

如本文所用，术语“氨基”是指-NH₂基团。

如本文所用，术语“羟基”是指-OH基团。

“氰基”基团是指“-CN”基团。

如本文所用，术语“叠氮基”是指-N₃基团。

“异氰酸根”基团是指“-NCO”基团。

“硫代氰酸根”基团是指“-SCN”基团。

“异硫代氰酸根”基团是指“-NCS”基团。

“巯基”基团是指“-SH”基团。

“羰基”基团是指-C(＝O)-基团。

“S-磺酰氨基”基团是指其中R_A和R_B可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)的“-SO₂N(R_AR_B)”基团。S-磺酰氨基可以是取代的或未取代的。

“N-磺酰氨基”基团是指其中R和R_A可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)的“RSO₂N(R_A)-”基团。N-磺酰氨基可以是取代的或未取代的。

“O-氨甲酰基”基团是指其中R_A和R_B可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)的“-OC(＝O)N(R_AR_B)”基团。O-氨甲酰基可以是取代的或未取代的。

“N-氨甲酰基”基团是指其中R和R_A可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)的“ROC(＝O)N(R_A)-”基团。N-氨甲酰基可以是取代的或未取代的。

“O-硫代氨甲酰基”基团是指其中R_A和R_B可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)的“-OC(＝S)-N(R_AR_B)”基团。O-硫代氨甲酰基可以是取代的或未取代的。

“N-硫代氨甲酰基”基团是指其中R和R_A可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)的“ROC(＝S)N(R_A)-”基团。N-硫代氨甲酰基可以是取代的或未取代的。

“C-酰氨基”基团是指其中R_A和R_B可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)的“-C(＝O)N(R_AR_B)”基团。C-酰氨基可以是取代的或未取代的。

“N-酰氨基”基团是指其中R和R_A可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)的“RC(＝O)N(R_A)-”基团。N-酰氨基可以是取代的或未取代的。

“单取代的胺”是指“-NHR_A”，其中R_A可独立地为烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)。单取代的胺可以是取代的或未取代的。在一些情况下，单取代的胺可为-NHR_A，其中R_A可为未取代的C_1-6烷基或者未取代的或取代的苄基。

“二取代的胺”是指“-NR_AR_B”，其中R_A和R_B可独立地为烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)。单取代的胺可以是取代的或未取代的。在一些情况下，单取代的胺可为-NR_AR_B，其中R_A和R_B可独立地为未取代的C_1-6烷基或者未取代的或取代的苄基。

“酮酰胺”基团是指-C(＝O)-C(＝O)N(R_AR_B)基团，其中R_A和R_B可独立地为氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基、杂环基、芳基(烷基)、杂芳基(烷基)或杂环基(烷基)。酮酰胺可以是取代的或未取代的。

如本文所用，术语“卤素原子”或“卤素”意指元素周期表第7列中放射性稳定的原子中的任一者，诸如氟、氯、溴和碘。

在未指定取代基的数量(例如，卤代烷基)的情况下，可存在一个或多个取代基。例如，“卤代烷基”可包括一个或多个相同或不同的卤素。又如，“C₁至C₃烷氧基苯基”可包括相同或不同的含有一个、两个或三个原子的烷氧基基团中的一个或多个。

如本文所用，除非另外指明，否则任何保护基团、氨基酸和其他化合物的缩写符合它们的常见用法、公认的缩写、或IUPAC-IUB生物化学命名委员会(参见，Biochem.11:942-944(1972))。

术语“药学上可接受的盐”是指不会对其施用到的生物体引起显著刺激并且不会消除化合物的生物活性和特性的化合物的盐。在一些实施方案中，该盐为化合物的酸加成盐。药物盐可通过使化合物与无机酸(诸如，氢卤酸(例如，盐酸或氢溴酸)、硫酸、硝酸和磷酸)反应来获得。药物盐还可通过使化合物与有机酸诸如脂族或芳族羧酸或磺酸(例如，甲酸、乙酸、琥珀酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、烟碱酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸或萘磺酸)反应来获得。药物盐还可通过使化合物与碱反应以形成盐来获得，诸如铵盐、碱金属盐(诸如，钠或钾盐)、碱土金属盐(诸如，钙或镁盐)、有机碱(诸如，二环己基胺、N-甲基-D-葡糖胺、三(羟甲基)甲胺、C₁-C₇烷基胺、环己胺、三乙醇胺、乙二胺)的盐以及与氨基酸(诸如，精氨酸和赖氨酸)反应形成的盐。

对于本申请中尤其是所附权利要求书中所用的术语和短语及其变型，除非另有明确说明，否则应理解为开放式的而非限制性的。对于前述示例，术语“包括”应被理解为“包括但不受限制”、“包括但不限于”等；如本文所用，术语‘包括’与‘包含’、‘含有’或‘被表征为’同义且是包容性的或开放式的，并且不排除附加的未列出的元素或方法步骤；术语‘具有’应解释为‘至少具有’；术语‘包含’应解释为‘包含但不限于’；术语“示例”用于提供所讨论的项目的示例性实例，而不是其详尽的或限制性的列表。此外，术语“包括”应被解释为与短语“至少具有”或“至少包含”同义。当用于化合物或组合物的上下文中时，术语“包括”意指化合物或组合物至少包括所述的特征或组分，但也可包括另外的特征或组分。

对于本文中使用的基本上任何复数和/或单数术语，本领域技术人员可从复数转换成单数和/或从单数转换成复数，只要适合于上下文和/或应用即可。为清楚起见，可在本文中明确地表述各种单数/复数置换。不定冠词“一个”或“一种”不排除多个。

应当理解，在本文所述的具有一个或多个手性中心的任何化合物中，如果未明确地指出绝对立体化学，则每个中心可独立地为(R)构型或(S)构型或它们的混合物。因此，本文所提供的化合物可为对映体纯的对映体富集的外消旋混合物或非对映体纯的非对映体富集的立体异构混合物。此外，应当理解，在本文所述的具有生成可被定义为E或Z的几何异构体的一个或多个双键的任何化合物中，每个双键可独立地为E或Z或它们的混合物。同样，应当理解，在所述的任何化合物中，也旨在包括所有互变异构形式。

应当理解，在本文所公开的化合物具有未满价化合价的情况下，用氢或其同位素(例如，氢-1(氕)和氢-2(氘))来补满。

应当理解，本文所述的化合物可同位素标记。用同位素诸如氘取代可得到因代谢稳定性提高而得到的某些治疗优势，诸如例如，体内半衰期增大或者剂量需求降低。如在化合物结构中表示的每种化学元素可包含所述元素的任何同位素。例如，在化合物结构中，可明确地公开或理解氢原子存在于化合物中。在化合物的可能存在氢原子的任何位置处，氢原子可为氢的任何同位素，包含但不限于氢-1(氕)和氢-2(氘)。因此，除非上下文中另有明确规定，否则本文提及的化合物涵盖所有可能的同位素形式。

对于所提供的范围值，应当理解，上限和下限以及范围的上限和下限之间的每个居间值均涵盖在实施方案内。

化合物

本文所公开的一些实施方案涉及式(I)的化合物或其药学上可接受的盐：

其中：环A¹可为 并且其中环A¹可任选地被一个或多个部分取代，该一个或多个部分独立地选自＝O、＝CH₂、氘、卤素、羟基、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基；R¹可选自氰基、未取代的或取代的C_2-5炔基、未取代的或取代的酰基、未取代的或取代的酮酰胺、-CH(OH)-(S(＝O)₂-O^-)、-CH(OH)((P＝O)(OR⁶)₂)和-C(＝O)CH₂-O-((P＝O)(OR⁷)₂)；每个R⁶和每个R⁷可独立地为氢、未取代的C_1-6烷基、未取代的C_2-6烯基、未取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的芳基或者未取代的或取代的芳基(C_1-4烷基)；R²可为氢、氘或卤素；R³可为未取代的或取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)、未取代的或取代的双环含氮杂环基(C_1-4烷基)或者未取代的或取代的单环含氮杂芳基(C_1-4烷基)；R⁴可为氢、氘或卤素；R⁵可为取代的单环C_3-6环烷基或取代的4元至6元单环杂环基；R⁸和R¹⁰可独立地选自未取代的或取代的C_2-6烷基、未取代的或取代的C_2-6烯基、未取代的或取代的C_2-6炔基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的或取代的双环C_5-8环烷基、未取代的或取代的单环4元至6元杂环基和未取代的单环C_3-6环烷基(CH₂)-，其中当C_2-6烷基是取代的，C_2-6烷基可被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、氰基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的C_1-4烷氧基和未取代的C_1-4卤代烷氧基，或者C_2-6烷基被氘取代1至13次；其中当C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基是取代的，C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基可被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_2-4烯基、未取代的C_2-4炔基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基和未取代的C_1-4烷氧基；R⁹可选自未取代的或取代的C_1-6烷基、未取代的或取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的或取代的双环C_5-6环烷基、未取代的或取代的单环杂芳基和未取代的或取代的单环杂环基，其中该取代的C_1-6烷基被未取代的C_1-4烷氧基取代1或2次，其中该取代的单环C_3-6环烷基被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4烷氧基、未取代的C_1-4卤代烷基和未取代的单环C_3-6环烷基，并且其中该取代的C_1-6卤代烷基被未取代的C_1-4烷氧基取代1或2次；并且R¹¹可为任选取代的单环4元至6元杂环基、-(NH)_m-任选取代的5元至6元单环杂芳基、-O-任选取代的C_1-6烷基、-O-任选取代的C_3-8环烷基和-O-任选取代的C_3-8环烷基(C_1-4烷基)，其中m可为0或1。

取代基R¹可为各种部分。在一些实施方案中，R¹可为未取代的酮酰胺。在一些实施方案中，R¹可为取代的酮酰胺。酮酰胺可具有结构-C(＝O)-C(＝O)NR^y1R^z1。在一些实施方案中，R¹可为酰基，例如，R¹可为-C(＝O)H、-C(＝O)(未取代的C_1-4烷基)、-C(＝O)(未取代的至取代的苄基)、-C(＝O)(未取代的至取代的单环杂芳基)或-C(＝O)(未取代的至取代的双环杂芳基)。在一些实施方案中，R¹可为取代的酰基。R¹的酰基可具有结构-C(＝O)R^y2。当酰基被取代时，可存在于酰基上的可能基团包括羟基、取代的或未取代的烷氧基(诸如-O-(未取代的C_1-4烷基)、-O-(未取代的C_3-6环烷基)、取代的或未取代的苯氧基或者取代的或未取代的苄氧基)或-O-(C＝O)-(未取代的C_1-6烷基)。在一些实施方案中，R¹可为未取代的，可为-C(＝O)-N-磺酰氨基。

R^y1、R^y2和R^z1可为各种基团。在一些实施方案中，R^y1、R^y2和R^z1可独立地选自氢、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基(例如，单环C_3-8环烷基)、C_3-8环烯基(诸如单环C_3-8环烯基)、芳基(诸如苯基或萘基)、杂芳基(包括单环或双环杂芳基)、杂环基(例如，单环或双环杂环基)、芳基(烷基)(诸如苄基)、杂芳基(烷基)(包括单环杂芳基(CH₂)-和单环(杂芳基(CH₂CH₂)-)或杂环基(烷基)(诸如单环杂环基(CH₂)-和单环杂环基(CH₂CH₂)-)，其中上述R^y1、R^y2和R^z1基团中的每一者可为未取代的或取代的。在一些实施方案中，R^y1、R^y2和R^z1可独立地选自H、C_1-8烷基、未取代的C_1-4卤代烷基(包括-CF₃、-CCl₃、-CHF₂、-C(CH₃)F₂、-CHCl₂、-CH₂F、-CH(CH₃)F、-CH₂CF₃、-CH₂Cl、-CH₂CH₂F、-CH₂CH₂Cl、-CH₂CH₂CH₂F和-CH₂CH₂CH₂Cl)、-C_1-4烷基(OH)(包括-CH₂OH、-CH₂CH₂OH和-CH(CH₃)OH)、-C_1-4烷基(C_1-4烷氧基)(诸如-CH₂O(未取代的C_1-4烷基)和-CH₂CH₂O(未取代的C_1-4烷基))、-C_1-4烷基-O-(单环C_3-6环烷基)(诸如-CH₂O(单环C_3-6环烷基)、-CH₂CH₂O(单环C_3-6环烷基))、-C_1-4烷基-O-(苯基)(例如，-CH₂O(苯基)和-CH₂CH₂O(苯基))、-C_1-4烷基-O-(5至6元单环杂芳基)(诸如-CH₂O(5至6元单环杂芳基)和-CH₂CH₂O(5至6元单环杂芳基))、-C_1-4烷基-O-(5至6元单环杂环基)(例如，-CH₂O(5至6元单环杂环基)和-CH₂CH₂O(5至6元单环杂环基))、-C_1-4烷基-O-(单环C_3-6环烷基(C_1-4烷基)(诸如-C_1-4烷基-O-CH₂-(单环C_3-6环烷基)和-C_1-4烷基-O-CH₂CH₂-(单环C_3-6环烷基))、-C_1-4烷基-O-(苄基)(例如，-CH₂O(苄基)和-CH₂CH₂O(苄基))、-C_1-4烷基-O-(5至6元单环杂芳基(C_1-4烷基)、-C_1-4烷基-O-(5至6元单环杂环基(C_1-4烷基)、-C_1-4烷基-O(C＝O)(未取代的C_1-6烷基)(例如，-CH₂O(C＝O)(未取代的C_1-6烷基))、单环C_3-8环烷基(诸如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基)、单环杂芳基(诸如咪唑、1,3,4-噁二唑和吡啶基)、单环杂环基(例如，四氢呋喃和四氢吡喃)、双环杂芳基(例如，苯并噻唑、苯并咪唑和苯并噁唑)、双环杂环基、单环C_3-6环烷基(烷基)、芳基(烷基)(诸如苄基)、杂芳基(烷基)(例如，单环杂芳基-(CH₂)-，诸如吡啶基-(CH₂)-)和杂环基(烷基)(例如，单环杂环基-(CH₂)-)，其中前述R^y1、R^y2和R^z1基团中的每一者可以是未取代的或取代的。

在一些实施方案中，R¹可为-C(＝O)R^y2，其中R^y2可为-C_1-4烷基(OH)(诸如-CH₂OH)。在一些实施方案中，R¹可为-C(＝O)-C(＝O)NR^y1R^z1；其中R^y1可为H；并且R^z1可为前一段落中针对R^z1列出的任何部分。在一些实施方案中，R¹可为-C(＝O)-C(＝O)NR^y1R^z1；其中R^y1可为H；并且R^z1可为单环C_3-8环烷基(例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基)。

前药型和含磷酸酯部分可存在于R¹处。在一些实施方案中，R¹可为-CH(OH)-(S(＝O)₂-O^-)。在其他实施方案中，R¹可为-CH(OH)((P＝O)(OR⁶)₂)，其中每个R⁶可独立地为氢、未取代的C_1--6烷基、未取代的C_2-6烯基、未取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的芳基或者未取代的或取代的芳基(C_1-4烷基)。在其他实施方案中，R¹可为-C(＝O)CH₂-O-((P＝O)(OR⁷)₂)，其中每个R⁷可独立地为氢、未取代的C_1-6烷基、未取代的C_2-6烯基、未取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的芳基或者未取代的或取代的芳基(C_1-4烷基)。R⁶和R⁷基团的其他示例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基(直链的和支链的)、己基(直链的和支链的)、乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、氯甲基、氟甲基、二氟甲基、二氯甲基、三氟甲基、三氯甲基、未取代的或取代的苯基和未取代的或取代的苄基。

在一些实施方案中，R¹可为氰基。在其他实施方案中，R¹可为未取代的C_2-5炔基。在其他实施方案中，R¹可为取代的C_2-5炔基。C_2-5炔基可具有各种结构。例如，C_2-5炔基可具有结构-(CH₂)₁-C_2-4炔基或-(CH₂)₂-C_2-3炔基。

如本文所述，环A¹可为其中环A¹可任选地被取代。在一些实施方案中，环A¹可为未取代的在其他实施方案中，环A¹可为取代的在另一些实施方案中，环A¹可为未取代的在又一些实施方案中，环A¹可为取代的在一些实施方案中，环A¹可为未取代的在其他实施方案中，环A¹可为取代的在另一些实施方案中，环A¹可为未取代的在又一些实施方案中，环A¹可为取代的在一些实施方案中，环A¹可为未取代的在其他实施方案中，环A¹可为取代的在另一些实施方案中，环A¹可为未取代的在又一些实施方案中，环A¹可为取代的在一些实施方案中，环A¹可为未取代的在其他实施方案中，环A¹可为取代的在另一些实施方案中，环A¹可为未取代的在又一些实施方案中，环A¹可为取代的本领域技术人员理解，环A¹的每个环结构中所示的氮对应于式(I)中所示的环氮，并且与环氮相邻的碳具有与R⁴所连接的碳对应的例如，本领域技术人员理解，当环A¹为时，则式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可具有以下结构：

如本文所提供的，环A¹可被一个或多个部分取代，该一个或多个部分独立地选自＝O、＝CH₂、氘、卤素、羟基、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基。可存在于环A¹中的合适取代基的示例包括卤素(诸如F或Cl)、未取代的C_1-4烷基(例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基)、未取代的C_1-4卤代烷基(包括-CF₃、-CCl₃、-CHF₂、-C(CH₃)F₂、-CHCl₂、-CH₂F、-CH(CH₃)F、-CH₂CF₃、-CH₂Cl、-CH₂CH₂F、-CH₂CH₂Cl、-CH₂CH₂CH₂F和-CH₂CH₂CH₂Cl)、未取代的C_2-4烯基(诸如乙烯基、丙烯基和丁烯基)和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基(例如，环丙基、环丁基、环戊基和环己基)。当环A¹被未取代的或取代的C_3-6单环环烷基取代时，该未取代的或取代的C_3-6单环环烷基可取代一个氢。在一些实施方案中，未取代的或取代的C_3-6单环环烷基可取代环A¹的两个氢，使得未取代的或取代的C_3-6单环环烷基以螺接方式连接到环A¹。取代环A¹的两个氢的未取代的或取代的C_3-6单环环烷基的示例包括以下： 其中每一者可以是如本文所述未取代的或取代的。环A¹的示例包括但不限于以下：

在一些实施方案中，R⁴可为氢。在其他实施方案中，R⁴可为氘。在其他实施方案中，R⁴可为卤素(诸如氟或氯)。

如本文所提供，R³可为选自未取代的或取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)和未取代的或取代的双环含氮杂环基(C_1-4烷基)。在一些实施方案中，R³可为未取代的单环含氮杂芳基(C_1-4烷基)。在其他实施方案中，R³可为取代的单环含氮杂芳基(C_1-4烷基)。在另一些实施方案中，R³可为未取代的双环含氮杂环基(C_1-4烷基)。在又一些实施方案中，R³可为取代的双环含氮杂环基(C_1-4烷基)。当R³为双环含氮杂环基(C_1-4烷基)时，双环杂环基的两个环可以稠合方式(包括桥接方式)或螺接方式连接。在一些实施方案中，R³可为未取代的单环含氮杂芳基(C_1-4烷基)。在其他实施方案中，R³可为取代的单环含氮杂芳基(C_1-4烷基)。

本领域技术人员理解，当两个环以螺接方式连接时，两个环通过单环原子连接。例如，在结构中，环C1和C2以螺接方式接合。当本文所述的两个环以稠合方式连接时，这两个环通过两个或更多个环原子连接。在一些情况下，这两个环可通过两个相邻的环原子连接。例如，环D1和D1通过两个相邻的环原子以稠合方式连接。在一些情况下，本文所述的两个环可通过这两个环之间共享的三个或更多个原子连接。以下结构：是通过三个或更多个环原子连接的两个环的示例。当两个环通过三个或更多个环原子连接时，连接两个环的所述三个或更多个环原子将被本领域技术人员称为“桥接”原子。另外，本领域技术人员基于本文所提供的公开内容将理解，以“桥接”方式连接的两个环是以稠合方式连接的两个环的示例。

单环和双环含氮杂环基(C_1-4烷基)的环原子数可变化。非限制性示例包括未取代的或取代的5元单环含氮杂环基(C_1-4烷基)、6元单环含氮杂环基(C_1-4烷基)、未取代的或取代的9元双环含氮杂环基(C_1-4烷基)和10元双环含氮杂环基(C_1-4烷基)。合适的R³基团的示例包括以下：氮杂环庚烷-2-酮(C_1-4烷基)、咪唑烷-2-酮(C_1-4烷基)、四氢嘧啶-2-酮(C_1-4烷基)、吡咯烷-2-酮(C_1-4烷基)、哌啶-2-酮(C_1-4烷基)、吡唑烷-3-酮(C_1-4烷基)、噁唑烷-4-酮(C_1-4烷基)、1,4-氧杂氮杂环庚烷-3-酮(C_1-4烷基)、吗啉-3-酮(C_1-4烷基)、

其中每个m1可独立地为1、2、3或4(包括上述的取代的或未取代的形式)。本文提供的R³基团可以被一个或多个独立地选自针对“任选地取代的”列出的那些的部分取代。在一些实施方案中，本文提供的R³基团可以被一个或多个部分取代，该一个或多个部分选自氘、卤素、羟基、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_2-4烯基、未取代的C_1-4烷氧基、氨基、-(未取代的C_1-4烷基)-O-P-(OH)₂(诸如-CH₂-O-P-(OH)₂)和-(未取代的C_1-4烷基)-O-P-(O(未取代的C_1-4烷基))₂(诸如-CH₂-O-P-(OCH₃)₂)。

R³部分的非限制性示例包括以下：

在一些实施方案中，R²可为氢。在其他实施方案中，R²可为氘。在其他实施方案中，R²可为卤素(例如，氟或氯)。

如本文所提供，R⁵可为在一些实施方案中，R⁹可为未取代的C_1-6卤代烷基。例如，R⁹可为-CF₃、-CClF₂、-CCl₃、-CHF₂、-C(CH₃)F₂、-CHCl₂、-CH₂F、-CH(CH₃)F、-CH₂CF₃、-CH(CH₃)CF₃、-CH₂CH₂CF₃、-CH₂CH(CH₃)CF₃、-CF₂CF₃、-CH₂Cl、-CH₂CH₂F、-CH₂CH₂Cl、-CH₂CH₂CH₂F和-CH₂CH₂CH₂Cl。在一些实施方案中，R⁹可为-CF₃。在其他实施方案中，R⁹可为取代的C_1-6卤代烷基，其中C_1-6卤代烷基可被未取代的C_1-4烷氧基取代1或2次。当C_1-6卤代烷基被1或2个未取代的C_1-4烷氧基取代时，C_1-6卤代烷基的一个或多个氢可以被未取代的C_1-4烷氧基(诸如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基)取代。被未取代的C_1-4烷氧基取代的示例性C_1-6卤代烷基包括-C(OCH₃)F₂、-C(OCH₃)Cl₂、-CH(OCH₃)F、-C(OCH₃)(CH₃)F、-CH(OCH₃)CF₃、-C(OCH₃)(CH₃)CF₃、-CH₂CH(OCH₃)CF₃、-CH₂C(OCH₃)(CH₃)CF₃、-CH(OCH₃)Cl、-CH₂CH(OCH₃)F、-CH₂CH(OCH₃)Cl、-CH₂CH₂CH(OCH₃)F和-CH₂CH₂CH(OCH₃)Cl。在另一些实施方案中，R⁹可为未取代的C_1-6烷基(诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基(直链或支链)和己基(直链或支链))。在又一些实施方案中，R⁹可为被未取代的C_1-4烷氧基取代1或2次的C_1-6烷基。当C_1-6烷基被未取代的C_1-4烷氧基取代时，C_1-6烷基的氢可被未取代的C_1-4烷氧基诸如本文所述的那些取代。被未取代的C_1-4烷氧基取代1或2次的C_1-6烷基的非限制性列表包括-CH₂(OCH₃)、-CH(OCH₃)₂、-CH(CH₃)(OCH₃)和-C(CH₃)₂(OCH₃)。在一些实施方案中，R⁹可为未取代的或取代的单环杂芳基。对于R⁹可存在多种未取代的或取代的单环杂芳基。例如，杂芳基可以是包含1、2或3个选自氮(N)、氧(O)和硫(S)的杂原子的5元或6元杂芳基。未取代的或取代的单环杂芳基的示例性杂芳基包括但不限于呋喃、异噁唑、异噻唑吡啶、哒嗪、嘧啶和吡嗪。在又一些实施方案中，R⁹可为未取代的或取代的单环杂环基。R⁹的单环杂环基的非限制性列表包括氧杂环丁烷、四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、四氢吡喃、四氢噻喃、哌啶和吗啉。各种取代基可存在于R⁹的取代的杂芳基和/或取代的杂环基中。例如，杂芳基可被选自卤素、未取代的C_1-6烷基、未取代的C_1-6卤代烷基和未取代的C_1-6烷氧基的部分取代1、2或3次。本文描述了合适的卤素、未取代的C_1-6烷基、未取代的C_1-6卤代烷基和未取代的C_1-6烷氧基。

在一些实施方案中，R⁹可为未取代的单环C_3-6环烷基，诸如环丙基、环丁基、环戊基和环己基。在其他实施方案中，R⁹可为卤素取代的单环C_3-6环烷基。在另一些实施方案中，R⁹可为被未取代的C_1-4烷基取代的单环C_3-6环烷基。在又一些实施方案中，R⁹可为被未取代的C_1-4烷氧基取代的单环C_3-6环烷基。在一些实施方案中，R⁹可为被未取代的C_2-4烯基取代的单环C_3-6环烷基。在其他实施方案中，R⁹可为被未取代的C_1-4卤代烷基取代的单环C_3-6环烷基。在另一些实施方案中，R⁹可为被未取代的单环C_3-6环烷基取代的单环C_3-6环烷基，诸如环丙基、环丁基、环戊基或环己基。在一些实施方案中，R⁹可为未取代的双环C_5-6环烷基。在其他实施方案中，R⁹可为取代的双环C_5-6环烷基。双环C_5-6环烷基的两个环可以螺接方式或稠合方式连接。在一些实施方案中，R⁹可为卤素取代的双环C_5-6环烷基。在另一些实施方案中，R⁹可为被未取代的C_1-4烷基取代的双环C_5-6环烷基。在又一些实施方案中，R⁹可为被未取代的C_1-4烷氧基取代的双环C_5-6环烷基。在一些实施方案中，R⁹可为被未取代的C_2-4烯基取代的双环C_5-6环烷基。在其他实施方案中，R⁹可为被未取代的C_1-4卤代烷基取代的双环C_5-6环烷基。在另一些实施方案中，R⁹可为被未取代的单环C_3-6环烷基取代的双环C_5-6环烷基(包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基)。双环C_5-6环烷基的非限制性列表包括螺[2.2]戊烷、螺[2.3]己烷、双环[1.1.1]戊烷和双环[2.1.1]己烷。

合适的卤素取代的单环C_3-6环烷基包括卤素取代的环丙基、卤素取代的环丁基、卤素取代的环戊基和卤素取代的环己基。另外的单环C_3-6环烷基包括被未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4烷氧基、未取代的C_2-4烯基、未取代的C_1-4卤代烷基和/或未取代的单环C_3-6环烷基取代的环丙基，被未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4烷氧基、未取代的C_2-4烯基、未取代的C_1-4卤代烷基和/或未取代的单环C_3-6环烷基取代的环丁基，被未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4烷氧基、未取代的C_2-4烯基、未取代的C_1-4卤代烷基和/或未取代的单环C_3-6环烷基取代的环戊基，以及被未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4烷氧基、未取代的C_2-4烯基、未取代的C_1-4卤代烷基和/或未取代的单环C_3-6环烷基取代的环己基。卤素取代的单环C_3-6环烷基和/或双环C_5-6环烷基上的卤素数目、单环C_3-6环烷基和/或双环C_5-6环烷基上的未取代C_1-4烷基的数目、单环C_3-6环烷基和/或双环C_5-6环烷基上的未取代C_1-4烷氧基的数目、单环C_3-6环烷基和/或双环C_5-6环烷基上的未取代C_2-4烯基的数目、单环C_3-6环烷基和/或双环C_5-6环烷基上的未取代C_1-4卤代烷基的数目和单环C_3-6环烷基和/或双环C_5-6环烷基上的未取代单环C_3-6环烷基的数目可变化。例如，1、2、3或4个卤素可存在于卤素取代的单环C_3-6环烷基上，1、2、3或4个未取代的C_1-4烷基可存在于被未取代的C_1-4烷基取代的单环C_3-6环烷基上，1、2、3或4个未取代的C_1-4烷氧基可存在于被未取代的C_1-4烷氧基取代的单环C_3-6环烷基上，1、2、3或4个未取代的C_2-4烯基可存在于被未取代的C_2-4烯基取代的单环C_3-6环烷基上，1、2、3或4个未取代的C_1-4卤代烷基可存在于被未取代的C_1-4卤代烷基取代的单环C_3-6环烷基上，1或2个未取代的单环C_3-6环烷基可存在于单环C_3-6环烷基上，1、2、3或4个卤素可存在于卤素取代的双环C_5-6环烷基上，1、2、3或4个未取代的C_1-4烷基可存在于被未取代的C_1-4烷基取代的双环C_5-6环烷基上，1、2、3或4个未取代的C_1-4烷氧基可存在于被未取代的C_2-4烷氧基取代的双环C_5-6环烷基上，1、2、3或4个未取代的C_2-4烯基可存在于被未取代的C_2-4烯基取代的双环C_5-6环烷基上，1、2、3或4个未取代的C_1-4卤代烷基可存在于被未取代的C_1-4卤代烷基取代的双环C_5-6环烷基上，并且1或2个未取代的单环C_3-6环烷基可存在于双环C_5-6环烷基上。在一些实施方案中，单环C_3-6环烷基可被选自卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4烷氧基、未取代的C_2-4烯基和未取代的C_1-4卤代烷基的1个或多个取代基(诸如1、2、3或4个取代基)取代。在其他实施方案中，双环C_5-6环烷基可被选自卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4烷氧基、未取代的C_2-4烯基和未取代的C_1-4卤代烷基的1个或多个取代基(诸如1、2、3或4个取代基)取代。可存在于取代的单环C_3-6环烷基上的合适的卤素包括但不限于氟(F)和氯(Cl)。未取代的C_1-4卤代烷基的示例包括但不限于-CF₃、-CCl₃、-CHF₂、-C(CH₃)F₂、-CHCl₂、-CH₂F、-CH(CH₃)F、-CH₂CF₃、-CH₂Cl、-CH₂CH₂F、-CH₂CH₂Cl、-CH₂CH₂CH₂F和-CH₂CH₂CH₂Cl。

在一些实施方案中，R⁵可为其中R¹⁰可独立地选自未取代的或取代的C_2-6烷基、未取代的或取代的C_2-6烯基、未取代的或取代的C_2-6炔基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的或取代的双环C_5-8环烷基和未取代的或取代的单环4元至6元杂环基，其中当C_2-6烷基被取代时，C_2-6烷基可被独立地选自卤素和未取代的C_1-4烷氧基的取代基取代1、2、3或4次；其中当C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基是取代的，C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基可被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_2-4烯基、未取代的C_2-4炔基、未取代的C_1-4卤代烷基和未取代的C_1-4烷氧基；并且R¹¹可为-(NH)_m-任选取代的5元至6元单环杂芳基，其中m可为0或1。在一些实施方案中，R¹¹可为任选取代的单环4元至6元杂环基。R¹¹的杂环基的示例包括任选取代的4元至6元单环杂环基，包括1、2或3个独立地选自N(氮)、O(氧)和S(硫)的杂原子。R¹¹的杂环基的非限制性列表包括以下：氮杂环丁烷、吡咯烷和哌啶。在其他实施方案中，m可为0；并且R¹¹可为未取代的5元至6元单环杂芳基。在其他实施方案中，m可为0；并且R¹¹可为取代的5元至6元单环杂芳基。在另一个实施方案中，m可为1；并且R¹¹可为-(NH)-未取代的5元至6元单环杂芳基。在其他实施方案中，m可为1；并且R¹¹可为-(NH)-取代的5元至6元单环杂芳基。对于R¹¹可存在的5元至6元单环杂芳基的示例包括5元至6元单环杂芳基，包括1、2或3个独立地选自N(氮)、O(氧)和S(硫)的杂原子。合适的5元至6元单环杂芳基的示例包括但不限于咪唑、吡唑、噁唑、噻唑、1,2,3-三唑、1,2,4-三唑、1,3,4-噁二唑和1,3,4-噻二唑。在另一些实施方案中，R¹¹可为-O-任选取代的C_1-6烷基。在又一些实施方案中，R¹¹可为-O-任选取代的C_3-8环烷基。在一些实施方案中，R¹¹可为-O-任选取代的C_3-8环烷基(C_1-4烷基)。-O-任选取代的C_3-8环烷基和-O-任选取代的C_3-8环烷基(C_1-4烷基)的环烷基可为单环C_3-6环烷基或双环C_5-8环烷基。-O-任选取代的环烷基(C_1-4烷基)的C_1-4烷基可为-CH₂-、-CH₂CH₂-、-CH₂CH₂CH₂-或-CH₂CH₂CH₂CH₂-。如本文所述，R¹¹可为取代的。可存在于R¹¹上的示例性基团包括卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4烷氧基和未取代的C_1-4卤代烷基。

R⁸和/或R¹⁰部分可为C_2-6烷基、C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基或单环4元至6元杂环基的取代或未取代形式。在一些实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为未取代的C_2-6烷基。在其他实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为取代的C_2-6烷基。示例性C_2-6烷基包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基(直链和支链的)和己基(直链和支链的)。在一些实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为未取代的C_2-6烯基。在其他实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为取代的C_2-6烯基。在另一些实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为未取代的C_2-6炔基。在又一些实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为取代的C_2-6炔基。

对于R⁸和/或R¹⁰也可存在环状部分，包括单环和双环部分。在一些实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为未取代的单环C_3-6环烷基。在一些实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为取代的单环C_3-6环烷基。例如，R⁸和/或R¹⁰可为取代的或未取代的环丙基、取代的或未取代的环丁基、取代的或未取代的环戊基或取代的或未取代的环己基。在一些实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为未取代的双环C_5-8环烷基。在其他实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为未取代的双环C_5-8环烷基。双环C_5-8环烷基的两个环可以稠合或螺接形式连接。本文提供了以稠合和螺接形式连接的环的示例。在一些实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为未取代的或取代的双环[1.1.1]戊基。在另一些实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为未取代的单环4元至6元杂环基。在又一些实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为未取代的单环4元至6元杂环基。R⁸和/或R¹⁰的单环4元至6元杂环基中存在的杂原子数可变化。合适的杂原子包括但不限于O(氧)、S(硫)和N(氮)。单环4元至6元杂环基的示例为氧杂环丁烷、硫杂环丁烷、氮杂环丁烷、吡咯烷、四氢呋喃、四氢噻吩、四氢吡喃、四氢噻喃和哌啶(包括上述各基团的未取代或取代形式)。在一些实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为未取代的单环C_3-6环烷基(CH₂)-。本文描述了各种单环C_3-6烷基。作为示例，R⁸和/或R¹⁰可选自环丙基(CH₂)-、环丁基(CH₂)-、环戊基(CH₂)-和环己基(CH₂)-。

如本文所述，R⁸和/或R¹⁰可为取代的。在一些实施方案中，当R⁸和/或R¹⁰是被取代的C_2-6烷基时，C_2-6烷基可被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、氰基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的C_1-4烷氧基和未取代的C_1-4卤代烷氧基。在一些实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为被氘取代1至13次的C_2-6烷基。在一些实施方案中，R⁸和/或R¹⁰可为被氘取代1至9次、被氘取代1至6次、被氘取代1至5次或被氘取代1至3次的C_2-6烷基。每个卤素可独立地为F(氟)或Cl(氯)。可存在于R⁸和/或R¹⁰的取代的C_2-6烷基上的示例性未取代的和取代的单环C_3-6环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和卤素取代的单环C_3-6环烷基。可在R⁸和/或R¹⁰的C_2-6烷基上取代的合适的未取代的C_1-4烷氧基包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。可在R⁸和/或R¹⁰的C_2-6烷基上取代的未取代的C_1-4卤代烷氧基的示例包括-OCl₃、-OCF₃、-OCH₂Cl、-OCH₂F、-OCHCl₂和-OCHF₂。在一些实施方案中，当R⁸和/或R¹⁰为取代的C_2-6烯基、取代的C_2-6炔基、取代的单环C_3-6环烷基、取代的双环C_5-8环烷基或取代的单环4元至6元杂环基时，上述各基团可被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_2-4烯基、未取代的C_2-4炔基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基和未取代的C_1-4烷氧基。可在取代的C_2-6烯基、取代的C_2-6炔基、取代的单环C_3-6环烷基、取代的双环C_5-8环烷基或取代的单环4元至6元杂环基上取代的未取代的C_1-4烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的C_2-4炔基的示例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、乙炔基、丙炔基和丁炔基。本文描述了可存在于取代的C_2-6烯基、取代的C_2-6炔基、取代的单环C_3-6环烷基、取代的双环C_5-8环烷基或取代的单环4元至6元杂环基上的合适的卤素和未取代的C_1-4烷氧基，诸如本段中所述的。未取代的和取代的单环C_3-6环烷基的非限制性列表包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和卤素取代的单环C_3-6环烷基。可存在于取代的C_2-6烯基、取代的C_2-6炔基、取代的单环C_3-6环烷基、取代的双环C_5-8环烷基或取代的单环4元至6元杂环基上的未取代的C_1-6卤代烷基的示例包括但不限于-CF₃、-CCl₃、-CHF₂、-C(CH₃)F₂、-CHCl₂、-CH₂F、-CH(CH₃)F、-CH₂CF₃、-CH₂Cl、-CH₂CH₂F、-CH₂CH₂Cl、-CH₂CH₂CH₂F和-CH₂CH₂CH₂Cl。示例性R⁵基团包括下列：

如本文所述，在一些实施方案中，R⁵可为取代的单环C_3-6环烷基，诸如环丙基、环丁基、环戊基或环己基。在其他实施方案中，R⁵可为取代的4至6元单环杂环基。例如，R⁵可为取代的4元至6元单环杂环基，包括1、2或3个选自N(氮)、O(氧)和S(硫)的杂原子。取代的单环C_3-6环烷基和/或取代的4元至6元单环杂环基可被选自以下的部分取代1、2或3次：氘、卤素、未取代的C_1-6烷基、未取代的C_1-6卤代烷基和未取代的C_1-6烷氧基。

此外，当R⁵是单环C_3-6环烷基或4元至6元单环杂环基时，单环C_3-6环烷基或4元至6元单环杂环基可被未取代的或取代的双环环烯基或未取代的或取代的双环杂环基以螺接方式取代。双环环烯基可为未取代的或取代的8元至10元双环环烯基。未取代的或取代的双环杂环基可为未取代的或取代的8元至10元双环杂环基，例如，在环中包括1、2或3个选自N(氮)、O(氧)和S(硫)的杂原子的未取代的或取代的8元至10元双环杂环基。在一些实施方案中，双环环烯基和/或双环杂环基可被独立地选自以下的部分取代一次或多次(例如1、2、3或4次)：卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-6卤代烷基(诸如-CF₃、-CCl₃、-CHF₂、-C(CH₃)F₂、-CHCl₂、-CH₂F、-CH(CH₃)F、-CH₂CF₃、-CH₂Cl、-CH₂CH₂F、-CH₂CH₂Cl、-CH₂CH₂CH₂F、-CH₂CH₂CH₂Cl)和未取代的C_1-4烷氧基。作为由未取代的或取代的双环环烯基或未取代的或取代的双环杂环基以螺接方式取代的单环C_3-6环烷基或4元至6元单环杂环基的R⁵的示例包括以下：

在一些实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以是其中：环A¹可为并且其中环A¹可任选地被一个或多个部分取代，该一个或多个部分独立地选自卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基；R¹可选自氰基、未取代的或取代的C_2-5炔基、未取代的或取代的酰基、未取代的或取代的酮酰胺、-CH(OH)-(S(＝O)₂-O^-)、-CH(OH)((P＝O)(OR⁶)₂)和-C(＝O)CH₂-O-((P＝O)(OR⁷)₂)；每个R⁶和每个R⁷可独立地为氢、未取代的C_1-6烷基、未取代的C_2-6烯基、未取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的芳基或者未取代的或取代的芳基(C_1-4烷基)；R²可为氢、氘或卤素；R³可为未取代的或取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)或未取代的或取代的双环含氮杂环基(C_1-4烷基)；R⁴可为氢、氘或卤素；R⁵可为R⁸可选自未取代的或取代的C_2-6烷基、未取代的或取代的C_2-6烯基、未取代的或取代的C_2-6炔基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的或取代的双环C_5-8环烷基和未取代的或取代的单环4元至6元杂环基，其中当C_2-6烷基被取代时，C_2-6烷基可被独立地选自卤素和未取代的C_1-4烷氧基的取代基取代1、2、3或4次；其中当C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基是取代的，C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基可被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基和未取代的C_1-4烷氧基；并且R⁹可选自未取代的C_1-6烷基、未取代的C_1-6卤代烷基和未取代的至取代的单环C_3-6环烷基，其中该取代的单环C_3-6环烷基被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基和未取代的C_1-4卤代烷基。

在一些实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以是其中：环A¹可为并且其中环A¹可任选地被一个或多个部分取代，该一个或多个部分独立地选自卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基；R¹可选自氰基、未取代的或取代的C_2-5炔基、未取代的或取代的酰基、未取代的或取代的酮酰胺、-CH(OH)-(S(＝O)₂-O^-)、-CH(OH)((P＝O)(OR⁶)₂)和-C(＝O)CH₂-O-((P＝O)(OR⁷)₂)；每个R⁶和每个R⁷可独立地为氢、未取代的C_1-6烷基、未取代的C_2-6烯基、未取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的芳基或者未取代的或取代的芳基(C_1-4烷基)；R²可为氢、氘或卤素；R³可为未取代的或取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)或未取代的或取代的双环含氮杂环基(C_1-4烷基)；R⁴可为氢、氘或卤素；R⁵可为取代的单环C_3-6环烷基或取代的4元至6元单环杂环基；R⁸可选自未取代的或取代的C_2-6烷基、未取代的或取代的C_2-6烯基、未取代的或取代的C_2-6炔基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的或取代的双环C_5-8环烷基和未取代的或取代的单环4元至6元杂环基，其中当C_2-6烷基被取代时，C_2-6烷基可被独立地选自卤素和未取代的C_1-4烷氧基的取代基取代1、2、3或4次；其中当C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基是取代的，C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基可被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基和未取代的C_1-4烷氧基；并且R⁹可选自未取代的或取代的C_1-6烷基、未取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的或取代的单环杂芳基和未取代的或取代的单环杂环基，其中该取代的单环C_3-6环烷基被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基和未取代的C_1-4卤代烷基。

在一些实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以是其中：环A¹可为 并且其中环A¹可任选地被一个或多个部分取代，该一个或多个部分独立地选自氘、卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基；R¹可选自氰基、未取代的或取代的C_2-5炔基、未取代的或取代的酰基、未取代的或取代的酮酰胺、-CH(OH)-(S(＝O)₂-O^-)、-CH(OH)((P＝O)(OR⁶)₂)和-C(＝O)CH₂-O-((P＝O)(OR⁷)₂)；每个R⁶和每个R⁷可独立地为氢、未取代的C_1-6烷基、未取代的C_2-6烯基、未取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的芳基或者未取代的或取代的芳基(C_1-4烷基)；R²可为氢、氘或卤素；R³可为未取代的或取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)、未取代的或取代的双环含氮杂环基(C_1-4烷基)、未取代的或取代的单环含氮杂芳基(C_1-4烷基)；R⁴可为氢、氘或卤素；并且R⁵可为R¹⁰可选自未取代的或取代的C_2-6烷基、未取代的或取代的C_2-6烯基、未取代的或取代的C_2-6炔基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的或取代的双环C_5-8环烷基和未取代的或取代的单环4元至6元杂环基，其中当C_2-6烷基被取代时，C_2-6烷基可被独立地选自卤素和未取代的C_1-4烷氧基的取代基取代1、2、3或4次；其中当C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基是取代的，C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基可被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_2-4烯基、未取代的C_2-4炔基、未取代的C_1-4卤代烷基和未取代的C_1-4烷氧基；并且R¹¹可为任选取代的单环4元至6元杂环基、-(NH)_m-任选取代的5元至6元单环杂芳基、-O-任选取代的C_1-6烷基、-O-任选取代的C_3-8环烷基和-O-任选取代的C_3-8环烷基(C_1-4烷基)，其中m可为0或1。

在一些实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以是其中：环A¹可为 并且其中环A¹可任选地被一个或多个部分取代，该一个或多个部分独立地选自氘、卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基；R¹可选自氰基、未取代的或取代的C_2-5炔基、未取代的或取代的酰基、未取代的或取代的酮酰胺、-CH(OH)-(S(＝O)₂-O^-)、-CH(OH)((P＝O)(OR⁶)₂)和-C(＝O)CH₂-O-((P＝O)(OR⁷)₂)；每个R⁶和每个R⁷可独立地为氢、未取代的C_1-6烷基、未取代的C_2-6烯基、未取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的芳基或者未取代的或取代的芳基(C_1-4烷基)；R²可为氢、氘或卤素；R³可为未取代的或取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)、未取代的或取代的双环含氮杂环基(C_1-4烷基)或者未取代的或取代的单环含氮杂芳基(C_1-4烷基)；R⁴可为氢、氘或卤素；R⁵可为取代的单环C_3-6环烷基或取代的4元至6元单环杂环基；R⁸和R¹⁰可独立地选自未取代的或取代的C_2-6烷基、未取代的或取代的C_2-6烯基、未取代的或取代的C_2-6炔基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的或取代的双环C_5-8环烷基和未取代的或取代的单环4元至6元杂环基，其中当C_2-6烷基被取代时，C_2-6烷基可被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、氰基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基和未取代的C_1-4烷氧基；其中当C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基是取代的，C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基可被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_2-4烯基、未取代的C_2-4炔基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基和未取代的C_1-4烷氧基；R⁹可选自未取代的C_1-6烷基、未取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的或取代的双环C_5-6环烷基、未取代的或取代的单环杂芳基和未取代的或取代的单环杂环基，其中该取代的单环C_3-6环烷基被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基和未取代的单环C_3-6环烷基；并且R¹¹可为任选取代的单环4元至6元杂环基、-(NH)_m-任选取代的5元至6元单环杂芳基、-O-任选取代的C_1-6烷基、-O-任选取代的C_3-8环烷基和-O-任选取代的C_3-8环烷基(C_1-4烷基)，其中m可为0或1。

在一些实施方案中，式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以是其中：环A¹可为 并且其中环A¹可任选地被一个或多个部分取代，该一个或多个部分独立地选自氘、卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基；R¹可选自氰基、未取代的或取代的C_2-5炔基、未取代的或取代的酰基、未取代的或取代的酮酰胺、-CH(OH)-(S(＝O)₂-O^-)、-CH(OH)((P＝O)(OR⁶)₂)和-C(＝O)CH₂-O-((P＝O)(OR⁷)₂)；每个R⁶和每个R⁷可独立地为氢、未取代的C_1-6烷基、未取代的C_2-6烯基、未取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的芳基或者未取代的或取代的芳基(C_1-4烷基)；R²可为氢、氘或卤素；R³可为未取代的或取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)、未取代的或取代的双环含氮杂环基(C_1-4烷基)或者未取代的或取代的单环含氮杂芳基(C_1-4烷基)；R⁴可为氢、氘或卤素；R⁵可为取代的单环C_3-6环烷基或取代的4元至6元单环杂环基；R⁸和R¹⁰可独立地选自未取代的或取代的C_2-6烷基、未取代的或取代的C_2-6烯基、未取代的或取代的C_2-6炔基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的或取代的双环C_5-8环烷基和未取代的或取代的单环4元至6元杂环基和未取代的单环C_3-6环烷基(CH₂)-，其中当C_2-6烷基被取代时，C_2-6烷基可被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、氰基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基和未取代的C_1-4烷氧基；其中当C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基是取代的，C_2-6烯基、C_2-6炔基、单环C_3-6环烷基、双环C_5-8环烷基和单环4元至6元杂环基可被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_2-4烯基、未取代的C_2-4炔基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基和未取代的C_1-4烷氧基；R⁹可选自未取代的或取代的C_1-6烷基、未取代的或取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的或取代的双环C_5-6环烷基、未取代的或取代的单环杂芳基和未取代的或取代的单环杂环基，其中该取代的C_1-6烷基被未取代的C_1-4烷氧基取代1或2次，其中该取代的单环C_3-6环烷基被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基和未取代的单环C_3-6环烷基，并且其中该取代的C_1-6卤代烷基被未取代的C_1-4烷氧基取代1或2次；并且R¹¹可为任选取代的单环4元至6元杂环基、-(NH)_m-任选取代的5元至6元单环杂芳基、-O-任选取代的C_1-6烷基、-O-任选取代的C_3-8环烷基和-O-任选取代的C_3-8环烷基(C_1-4烷基)，其中m可为0或1。

式(I)的化合物的示例包括以下：

或前述中任一者的药学上可接受的盐。

式(I)的化合物的另外示例包括以下：

或前述中任一者的药学上可接受的盐。式(I)的化合物的其他示例包括以下：

或前述中任一者的药学上可接受的盐。

在一些实施方案中，环A¹可为并且R⁵可为在一些实施方案中，环A¹可为R¹可为氰基；R²可为氢；R³可为未取代的或取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)；R⁴可为氢；并且R⁵可为在一些实施方案中，环A¹可为R¹可为氰基；R²可为氢；R³可为未取代的或取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)；R⁴可为氢；R⁵可为R⁸可为未取代的C_2-6烷基；并且R⁹可为未取代的C_1-6卤代烷基。在一些实施方案中，环A¹可为并且R⁵可为在一些实施方案中，环A¹可为R¹可为氰基；R²可为氢；R³可为未取代的或取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)；R⁴可为氢；并且R⁵可为在一些实施方案中，环A¹可为R¹可为氰基；R²可为氢；R³可为未取代的或取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)；R⁴可为氢；R⁵可为R⁸可为未取代的C_2-6烷基；并且R⁹可为未取代的C_1-6卤代烷基。在一些实施方案中，环A¹不可为在一些实施方案中，环A¹不可为

合成

可以各种方式制备式(I)的化合物以及本文所述的那些。本文示出并描述了用于制备式(I)的化合物的一般合成路线，以及用于合成本文所述的化合物的原料的一些示例。另外，出于一般合成路线的目的，所述结构如本领域技术人员已知那样被适当保护，并且通用结构意在包含这些保护基团。本文所示和所述的路线仅仅是例示性的，并且不旨在或者不应被理解为以任何方式限制权利要求的范围。本领域技术人员将能够识别对所公开的合成的修改并且能够基于本文的公开内容来设计替代路线；所有此类修改和替代路线均在权利要求的范围内。

方案A

方案A描述了通式(A-6)的化合物的合成。通式(A-1)的氨基酯(Alk表示烷基)与通式(A-2)的酸反应，方法是通过将羧酸转化为酰氯来活化羧酸，随后在碱的存在下与氨基酸反应，或者通过用偶联剂(诸如HATU)活化酸，随后在碱(诸如DIPEA)的存在下与氨基酯偶联，得到通式(A-3)的化合物。通式(A-3)的酯官能团可以例如在-OAlk为-OMe的碱性条件下，使用LiOH的MeOH溶液进行水解，从而得到通式(A-4)的化合物。通式(A-4)的羧酸与通式(A-5)的胺的进一步偶联可提供通式(A-6)的化合物。出于通用合成的目的，R¹可为潜在官能团，其被转化为如本文针对R¹所述的官能团。

方案A1

另选地，如方案A1所述，通式(A1-5)的氨基酸亚组可如方案A1所述制备。通式(A1-1)的受保护的(PG^A1)氨基酸可与通式(A-1)的氨基酯在已知的酰胺形成条件(例如，HATU和iPr₂NEt)下偶联。式(A1-2)的化合物的酯可例如通过使用LiOH的THF/H₂O溶液脱保护，得到通式(A1-3)的酸。例如，在PG^A1为Boc的情况下，可通过用TFA处理去除保护基PG^A1，得到通式(A1-4)的化合物。该化合物可转化为通式(A1-5)的化合物(例如，通过在三乙胺存在的条件下用2,2,2-三氟乙酸乙酯处理)，或另选地转化为通式(A1-6)的化合物(例如，通过在碱如三乙胺(以及任选地，添加剂如N-甲基咪唑)存在下用三卤代乙酸烷基酯(诸如2,2-二氯-2-氟乙酸乙酯、2-氯-2,2-二氟乙酸甲酯或2-氯-2,2-二氟乙酸乙酯)，或在碱(例如，三乙胺，以及添加剂，例如N-甲基咪唑)存在下用2,2,3,3,3-五氟丙酸烷基酯(诸如2,2,3,3,3-五氟丙酸甲酯或乙酯)处理通式(A1-4)的化合物)。

用于合成通式(A1-1)的氨基酸或可由本领域技术人员转化为通式(A1-1)的氨基酸的前体的一般方法描述于文献中并且包括以下示例：

方案B

在方案B中，通式(A-4)的羧酸可与通式(B-1)的氨基酸例如在偶联剂(诸如T3P)和碱(例如，DIPEA)的影响下偶联。所获得的通式(B-2)的化合物可被氧化，从而得到通式(B-3)的化合物。在方案B中，R^y1可以是本文相对于R¹所述的酮酰胺的一部分。

方案B1

另选地，如方案B1所示，使通式(B1-1)的氨基酸(具有氮的保护基团PG^B1，例如-Boc)可与通式(B-1)的化合物偶联，类似于针对将通式(A-4)的化合物转化为通式(B-2)的化合物所述。可例如通过在PG^B1为Boc的情况下用酸处理，随后与通式(A-2)的化合物偶联，导致形成通式(B-2)的化合物，从而去除保护基团。

方案B2

如本文所述，R¹可为取代的酰基，其中可存在于酰基上的可能基团包括羟基、取代的或未取代的烷氧基(例如，-O-(未取代的C_1-4烷基)和-O-(未取代的C_3-6环烷基))、未取代的C_1-4烷基(诸如被未取代的C_1-4烷基取代的杂芳基)、取代的或未取代的苯氧基或者取代的或未取代的苄氧基)。在方案B2中，R可表示可存在于R¹的取代酰基上的任何前述部分。通式(B2-2)和(B2-3)的化合物可如方案B2所述制备。通式(B2-1)的氨基酮化合物可以在典型的酰胺偶联条件下偶联至通式(A-4)或(B1-1)的羧酸。通式(B2-2)的化合物可任选地例如在R表示苄基基团的情况下通过催化氢解进一步转化为通式(B2-3)的羟基酮。通式(B2-4)的化合物的PG^B1可以被去保护(例如在其中PG^B1为Boc-基团的情况下，通过用Et₂O中的HCl处理)。然后可以在典型的酰胺键形成条件下将胺与通式(A-2)的羧酸偶联，得到通式(B2-2)的化合物。

方案B3

类似于方案B2中针对式(B2-2)化合物所述，使用通式(B3-1)的酰胺代替通式(B2-1)的化合物，可获得通式(B3-2)的化合物。通式(B3-2)的化合物向通式B3-3的化合物的转化可例如在CH₂Cl₂中的三氟乙酸酐(TFAA)和吡啶的影响下进行，或者通过应用Burgess试剂进行。

方案B4

出于通用合成的目的，方案B3中所述的转化包括如方案B4中所述的转化，其中通式(A1-3)的化合物可与通式(B3-1)的胺偶联，得到通式(B4-1)的化合物，其中PG^A1可以是可被去除的保护基团(例如，在PG^A1为Boc的情况下，通过用HCl或TFA处理)。通式(B4-2)的化合物可转化为通式(B4-3)的化合物(例如，通过在碱(诸如三乙胺，以及任选地添加剂，例如N-甲基咪唑)存在下用三卤代乙酸烷基酯诸如2,2-二氯-2-氟乙酸乙酯、2-氯-2,2-二氟乙酸甲酯、2-氯-2,2-二氟乙酸乙酯或2,2,2-三氟乙酸乙酯处理，或在碱(例如，三乙胺，以及添加剂，例如N-甲基咪唑)存在下用2,2,3,3,3-五氟丙酸烷基酯(诸如2,2,3,3,3-五氟丙酸甲酯或乙酯)处理；或在偶联剂(诸如EDC或HATU)和碱(诸如NEt₃)存在下用羧酸处理)。通式(B4-3)的化合物可类似于针对将通式(B3-2)的化合物转化为通式(B3-3)的化合物所述而转化为通式(B4-4)的化合物。另选地，通式(B4-2)的化合物可转化为通式(B4-4)的化合物(例如，对于-R₉为-CF₂CF₃，通过在2,2,3,3,3-五氟丙酸钾存在下用T3P和吡啶处理)。通式(B4-1)的化合物可通过将通式(B3-4)的化合物的PG^B1脱保护然后与通式(A1-1)的化合物偶联而获得。

方案C

通式(B-1)的化合物可如方案C所概述来制备。通式(C-1)的醛(PG¹可为氮保护基团，例如-Boc)和通式(C-2)的异腈在羧酸(例如，苯甲酸)的存在下，可在类似于Passerini的反应中缩合为通式(C-3)的化合物。水解后，可获得通式(C-4)的化合物。例如，当PG¹可为Boc时，可通过用HCl处理去除PG¹。

方案C1

通式(B2-1)的氨基酮可如方案C1所概述来制备。通式(C1-1)的受保护的氨基酸可以在典型的酰胺偶联条件下转化为其对应的Weinreb酰胺。将有机金属试剂添加到Weinreb酰胺中，随后处理，可得到通式(C1-3)的酮。其中R可为苄基的一个示例是通过混合Mg、HgCl₂和苄基氯甲基醚，随后添加到通式(C1-2)的Weinreb酰胺中，然后用饱和氯化铵处理来形成有机金属试剂。可去除保护基团(PG¹)(例如，当PG¹为Boc时，可使用HCl去除保护基团)，从而形成通式(B2-1)的氨基酮。当使用HCl去保护时，通式(B2-1)的化合物可作为HCl盐获得。通式(C1-1)的化合物的示例为(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-2-氧代哌啶-3-基)丙酸和(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酸。

方案D1

方案D2

本文所述的R¹的其他转化示于方案D1和D2中。在方案D1和D2中，PG²表示合适的保护基团，并且R^z1和R^y1是本文相对于R¹所述的酮酰胺的一部分。

方案E

用于制备通式(E-8)的氨基酸亚组的方法提供于方案E中。通式(E-1)的内酰胺可用合适的保护基团PG^E保护。这种PG^E基团的示例是Boc-基团。出于方案E的目的，该保护基团可以在任何相关阶段去除；因此，对于通式(E-4)、(E-5)、(E-6)、(E-7)、(E-8)和(E-9)的化合物中的任一种化合物，PG^E提供氢。通式(E-2)的内酰胺可以与通式(E-3)的醛(S或R-加纳醛)反应。通式(E-4)的醇可被消除以提供通式(E-5)的烯烃化合物(例如，通过将羟基顺序转化为对应的甲磺酸酯，随后在碱性条件下消除)。双键可被还原(例如，通过在均相或非均相催化剂的影响下氢化，任选地非对映选择性地氢化)以提供通式(E-6)的化合物。去除通式(E-6)的化合物中的缩丙酮得到通式(E-7)的受Boc-保护的氨基醇，随后可氧化为通式(E-8)的羧酸。另选地，通式(E-5)的化合物中的缩丙酮可以被去保护，以获得通式(E-9)的化合物。通式(E-9)的化合物的双键的还原(例如，通过在均相或非均相催化剂的影响下氢化，任选地非对映选择性地氢化)可用于获得通式(E-7)的化合物。通式(E-4)的化合物可例如通过Barton型脱氧来脱氧，得到通式(E-6)的化合物。

方案F

式(I)的化合物可包含前药部分。用于包含前药部分的方法示于方案F中。例如，可通过用NaHSO₃处理，将通式(F-1)的醛转化为对应的通式(F-2)的硫酸氢盐加合物。通式(F-3)的羟基酮可转化为对应的通式(F-5)的磷酸酯，例如，通过用二叔丁基N,N-二丙-2-基亚磷酰胺和四唑处理，随后用H₂O₂氧化，这可以提供通式(F-4)的化合物。通式(F-4)的化合物可以被去保护(例如通过用TFA处理)，得到通式(F-5)的化合物。

如方案G所示，通式(G2)的氨基酯的合成可经由Diels-Alder反应完成，如在Arakawa等人，Chemical&Pharmaceutical Bulletin(2003)51(8)，1015-1020中所述(-PG_G1可为-Bz并且-PG_G2可为-CH₃)。本文在中间体的合成中还描述了-PG_G1为-Boc且-PG_G2为-叔丁基或Me的用途。通式(G2)的化合物可使用本领域技术人员已知的方法并且根据用于PG_G1和PG_G2的保护基进行脱保护。另选地，通式(G2)的化合物可通过双键的氢化转化为通式(G3)的化合物，或通过双键的环丙烷化转化为通式(G4)的化合物。环丙烷化可例如通过施加Simmons-smith环丙烷化、通过在Pd(OAc)₂存在下用CH₂N₂处理、或本领域技术人员已知的其他方法来进行。另选地，可使用氘代中间体。

方案G

方案H

其他中间体描述于方案H中。通式(G2)的中间体可被选择性羟基化，例如，通过在手性Pd催化剂的存在下与三氯硅烷的氢化硅烷化，随后SiCl₃/OH交换(例如，Breuning等人，Beilstein Journal of Organic Chemistry(2009)5(81):1-5)。通式(H1)的醇的氧化可提供通式(H2)的酮。通式(H2)的酮可例如通过使用Wittig或Tebbe试剂而转化为通式(H3)的烯烃。双键向环丙基的转化可通过在Pd(OAc)₂的存在下用CH₂N₂处理来进行，或者通过文献中描述的和本领域技术人员已知的其他方法来进行，并且可产生通式(H4)的化合物。可用通式(H1)的化合物的异构体进行类似的方法，可通过使用对映体手性Pd催化剂获得通式(H5)的化合物。然后，通式(H5)的化合物可类似于针对将通式(H1)的化合物转化为通式(H4)的化合物所述而转化为通式(H6)的化合物。另选地，通式(H2)的化合物的酮可通过氟化，例如通过应用DAST试剂转化为通式(H2')的化合物。通式(H7)的异构化合物可从相关异构体开始获得。通过用氟化试剂如DAST(二乙基氨基三氟化硫)处理，可将通式(H1)和(H5)的醇转化为通式(H1')和(H5')的相关氟衍生物。

方案I

方案I所示的通式(I1)、(I2)(Johnson等人，Synthetic Communications(2011)41(18):2769-2793)、(I3)、(I4)、(I5)、(I6)、(I7)、(I8)、(I9)、(I10)、(I11)和(I12)的其他化合物可通过文献(例如，de Graaff等人，Org.Biomol.Chem.(2015)13:10108-10112；以及Johnson等人，Synthetic Communications(2011)41(18):2769-2793)中所述的方法和/或通过应用如本文所述的方法获得。使用如本文所述的类似方法，通式(I1)、(I2)、(I3)、(I4)、(I5)、(I6)、(I7)、(I8)、(I9)、(I10)、(I11)和(I12)的化合物可用于获得式(I)的化合物以及药学上可接受的盐。

方案IA

例如，如方案IA所示，式(IA1)的化合物(等人，J.Org.Chem.(2005)70(16):6295-6302)可被氢化为式(IA2)的化合物。将式(IA2)的化合物还原(例如，用LiAlH₄还原(Johnson等人，Synthetic Communications(2011)41(18):2769-2793)后，可得到式(IA3)的化合物。式(IA3)的化合物可使用IBX氧化(de Graaff等人，Org.Biomol.Chem.(2015)13:10108-10112)，随后引入腈(Liu等人，Org.Process Res.Dev.(2016)20(2):320-324)，得到式(IA4)的化合物。接下来可将腈转化为式(IA5)的化合物的羧酸或酯。在上述方案中，通过将腈从式(IA3)的化合物引入到式(IA4)的化合物中可获得外消旋物质。另选地，可使用非手性方法来提供对映体富集的化合物。

方案J

中间体即式(J1)的化合物(Moody等人，J.Chem.Soc.,Perkin Trans.1(1997)23:3519-3530)可用于使用与方案H所述类似的方法来制备通式(J2)和(J3)的氨基酸。

药物组合物

本文所述的一些实施方案涉及药物组合物，该药物组合物可包含有效量的本文所述的化合物(例如，如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐)和药学上可接受的载体、赋形剂、或它们的组合。本文所述的药物组合物适用于人类和/或兽医应用。

如本文所用，“载体”是指有利于将化合物结合到细胞或组织中的化合物。例如但不限于，二甲基亚砜(DMSO)是有利于将许多有机化合物摄取到受试者的细胞或组织中的常用载体。

如本文所用，“稀释剂”是指药物组合物中不具有药物活性但在药学上可能是必须的或期望的成分。例如，稀释剂可用于增大其质量太小而无法制造和/或施用的强效药品的体积。它也可为用于待通过注射、摄取或吸入施用的药品的溶解的液体。本领域中稀释剂的常见形式为缓冲水溶液，诸如但不限于模仿人类血液的组成的磷酸盐缓冲盐水。

如本文所用，“赋形剂”是指添加到药物组合物中以向组合物提供但不限于体积、稠度、稳定性、结合能力、润滑、崩解能力等的惰性物质。“稀释剂”是一种类型的赋形剂。

正确的制剂取决于所选的施用途径。用于制剂和施用本文所述的化合物的技术是本领域技术人员已知的。本领域中存在施用化合物的多种技术，包括但不限于口服、直肠、局部、气溶胶、注射、吸入和肠胃外递送(包括肌内、皮下、静脉内、髓内注射、鞘内、直接心室内、腹腔内、鼻内和眼内注射)。药物组合物通常将根据特定的预期施用途径进行调制。

也可以局部方式而非系统方式施用化合物，例如，经由以贮库或缓释制剂的形式将该化合物直接注射到感染区域中。此外，可将化合物施用于靶向药品递送体系中，例如，施用于涂覆有组织特异性抗体的脂质体中。脂质体可靶向到器官并且由器官选择性地摄取。

本文所公开的药物组合物可以本身已知的方式制造，例如，通过常规混合、溶解、制粒、糖衣丸制备、研磨、乳化、封装、包埋或制片工艺的方式。如本文所述，用于药物组合物中的化合物可作为具有药学上相容的抗衡离子的盐来提供。

使用方法

本文所述的一些实施方案涉及治疗冠状病毒感染的方法，该方法可包括向被鉴定为患有冠状病毒感染的受试者施用有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。本文所述的其他实施方案涉及使用如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐来制造用于治疗冠状病毒感染的药物。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于治疗冠状病毒感染的用途。

本文所公开的一些实施方案涉及治疗冠状病毒感染的方法，该方法可包括使感染冠状病毒的细胞与有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。本文所述的其他实施方案涉及使用如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐来制造用于治疗冠状病毒感染的药物。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于治疗冠状病毒感染的用途。

本文所公开的一些实施方案涉及抑制冠状病毒的复制的方法，该方法可包括使感染冠状病毒的细胞与有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。本文所述的其他实施方案涉及使用如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐来制造用于抑制冠状病毒的复制的药物。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于抑制冠状病毒的复制的用途。

在一些实施方案中，冠状病毒可以是α冠状病毒或β冠状病毒。本文所述的化合物可有效对抗冠状病毒的一种或多种变体。变体的示例包括但不限于α-变体(B.1.1.7)、β-变体(B.1.351)、γ-变体(P.1)和δ-变体(B.1.617.2)。在一些实施方案中，冠状病毒可选自CoV 229E、CoV NL63、CoV OC43、CoV HKU1、中东呼吸综合征(MERS)-CoV、严重急性呼吸综合征(SARS)-CoV和SARS-CoV-2。

本文所述的一些实施方案涉及治疗小核糖核酸病毒感染的方法，该方法可包括向被鉴定为患有小核糖核酸病毒感染的受试者施用有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。本文所述的其他实施方案涉及使用如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐来制造用于治疗小核糖核酸病毒感染的药物。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于治疗小核糖核酸病毒感染的用途。

本文所公开的一些实施方案涉及治疗小核糖核酸病毒感染的方法，该方法可包括使感染小核糖核酸病毒的细胞与有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。本文所述的其他实施方案涉及使用如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐来制造用于治疗小核糖核酸病毒感染的药物。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于治疗小核糖核酸病毒感染的用途。

本文所公开的一些实施方案涉及抑制小核糖核酸病毒的复制的方法，该方法可包括使感染小核糖核酸病毒的细胞与有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。本文所述的其他实施方案涉及使用如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐来制造用于抑制小核糖核酸病毒的复制的药物。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于抑制小核糖核酸病毒的复制的用途。

在一些实施方案中，小核糖核酸病毒可以是鼻病毒，包括鼻病毒A、B和/或C。在一些实施方案中，本文所述的化合物(包括式(I)的化合物)或其药学上可接受的盐可用于治疗鼻病毒的一种或多种血清型。

本文所述的一些实施方案涉及治疗诺罗病毒感染的方法，该方法可包括向被鉴定为患有诺罗病毒感染的受试者施用有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。本文所述的其他实施方案涉及使用如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐来制造用于治疗诺罗病毒感染的药物。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于治疗诺罗病毒感染的用途。

本文所公开的一些实施方案涉及治疗诺罗病毒感染的方法，该方法可包括使感染诺罗病毒的细胞与有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。本文所述的其他实施方案涉及使用如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐来制造用于治疗诺罗病毒感染的药物。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于治疗诺罗病毒感染的用途。

本文所公开的一些实施方案涉及抑制诺罗病毒的复制的方法，该方法可包括使感染诺罗病毒的细胞与有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物接触。本文所述的其他实施方案涉及使用如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐来制造用于抑制诺罗病毒的复制的药物。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于抑制诺罗病毒的复制的用途。

本文所公开的一些实施方案涉及治疗因冠状病毒和/或小核糖核酸病毒感染而发展的呼吸病症的方法，该方法可包括向患有呼吸病症的受试者施用有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，以及/或者使患有呼吸病症的受试者中感染冠状病毒和/或小核糖核酸病毒的细胞与其接触。本文所述的其他实施方案涉及使用如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐来制造用有效量的化合物或其药学上可接受的盐治疗由于冠状病毒感染和/或小核糖核酸病毒感染引起的呼吸病症的药物。本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐、或包含有效量的如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于治疗由于冠状病毒感染和/或小核糖核酸病毒感染引起的呼吸病症的用途。

感染冠状病毒的受试者可以是渐近的。冠状病毒感染本身可经由一种或多种症状显现。症状的示例包括但不限于咳嗽、喉咙痛、流涕、打喷嚏、头痛、发烧、气短、肌痛、腹痛、疲劳、呼吸困难、持续性胸痛或压迫、觉醒困难、嗅觉和味觉丧失、肌肉或关节疼痛、寒颤、恶心或呕吐、鼻塞、腹泻、咳血、结膜充血、痰液产生、胸闷和/或心悸。冠状病毒感染可引起并发症。并发症的非限制性列表包括但不限于窦炎、中耳炎、肺炎、急性呼吸窘迫综合征、弥散性血管内凝血、心包炎和/或肾衰竭。

与冠状病毒一样，感染小核糖核酸病毒的受试者可以是渐近的。另选地，受试者可表现出一种或多种症状。小核糖核酸病毒感染的症状的示例包括但不限于无菌性脑膜炎、皮疹、结膜炎、流涕、头痛、咳嗽、发烧、喉咙痛、胸痛和/或腹痛和麻痹。如本文所提供，感染诺罗病毒的受试者表现出一种或多种症状，所述症状包括但不限于恶心、非血性腹泻、呕吐和腹痛。可归因于诺罗病毒感染的并发症的示例是脱水，包括严重脱水。

用于确定治疗冠状病毒、小核糖核酸病毒和/或诺罗病毒感染的方法的有效性的各种指标也是本领域技术人员已知的。合适的指标的示例包括但不限于由冠状病毒(或负载)的减少指示的病毒负载的减少(例如，血清中减少<10⁵个拷贝/mL)、血浆病毒负载的减少、病毒复制的减少、血清转化时间的减少(患者血清中不可检测的病毒)、对治疗的持续病毒反应的速率的增加、临床结果中发病率或死亡率的减少、对呼吸机的需求和/或呼吸机上的总时间的减少、ICU(重症监护室)和/或医院住院率的降低和/或时间的缩短。

如本文所用，术语“治疗”(“treat,”“treating,”“treatment,”“therapeutic,”)和“疗法”不一定意指完全治愈或消除疾病或病症。对疾病或病症的任何非期望迹象或症状的任何程度的减轻均可被认为是治疗和/或疗法。此外，治疗可包括可使受试者的总体健康感觉或外观恶化的行为。

如本文所用，“受试者”是指动物，其为治疗、观察或实验的对象。“动物”包括冷血和温血脊椎动物和无脊椎动物，诸如鱼、贝类、爬行动物以及特别是哺乳动物。“哺乳动物”包括但不限于小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、狗、猫、绵羊、山羊、牛、马、骆驼、非人灵长类，诸如猴子、黑猩猩和猿，特别是人。在一些实施方案中，受试者可以是人，例如60岁或以上的人类受试者。

术语“有效量”用于指示引起所指示的生物或药物响应的活性化合物或药剂的量。例如，化合物的有效量可为减轻或改善疾病的症状，或延长被治疗的受试者的存活期所需的量。该响应可在组织、系统、动物或人类中发生，并且包括减轻被治疗的疾病的迹象或症状。根据本文所提供的公开内容，有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内。本文所公开的化合物作为剂量所需的有效量将取决于施用途径、被治疗的动物(包括人)类型以及所考虑的特定动物的身体特征。可调制该剂量以实现期望作用，但该剂量将取决于以下因素：如体重、饮食、并存的药物治疗以及医学领域技术人员将认识到的其他因素。

在一些实施方案中，受试者可以是无症状的，例如，受试者可感染冠状病毒，但不表现出病毒感染的任何症状。在一些实施方案中，受试者可具有预先存在的病症，诸如哮喘、高血压、免疫失能的受试者(诸如患有癌症、HIV和/或遗传免疫缺陷的受试者、骨髓移植受试者、实体器官移植受试者、已具有用于癌症治疗的干细胞的受试者和/或使用口服或静脉内皮质类固醇或称为免疫抑制剂的其他药物的受试者)、肝病、处于严重疾病风险的受试者、用透析治疗的慢性肾病、慢性肺病、糖尿病、血红蛋白病、严重心脏病(例如，心力衰竭、冠状动脉疾病、先天性心脏病、心肌病和肺动脉高血压)、重度肥胖(诸如身体质量指数(BMI)为40或以上的受试者)和生活在疗养院或长期护理机构中的人。附加示例和另外的信息由CDC提供(https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/need-extra-precautions/groups-at-higher-risk.html)。

本文所述的化合物(包括式(I)的化合物或其药学上可接受的盐)可以在受试者感染冠状病毒后施用。除此之外和/或另选地，本文所述的化合物(包括式(I)的化合物或其药学上可接受的盐)可以预防性地施用。

已用于治疗冠状病毒感染的药剂的示例包括瑞德西韦。然而，与用于治疗冠状病毒的化合物相关的缺点包括但不限于一种或多种不良副作用、对皮下施用的需要和/或高成本。式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的潜在优点可以是较少的不良副作用、不良副作用的发作延迟和/或不良副作用的严重程度降低。

冠状病毒感染可通过抑制某些机制来治疗。在一些实施方案中，本文所述的化合物(诸如式(I)的化合物或其药学上可接受的盐)对于冠状病毒蛋白酶可具有选择性。例如，与宿主蛋白酶(例如，选自组织蛋白酶L、组织蛋白酶B、组织蛋白酶D、组织蛋白酶K、白细胞弹性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶、胃蛋白酶、半胱天冬酶2、弹性蛋白酶和钙蛋白酶的一种或多种宿主蛋白酶)相比，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐对于冠状病毒蛋白酶可具有选择性。在一些实施方案中，相对于宿主蛋白酶(诸如本文所述的那些)，对于冠状病毒蛋白酶的选择性可为>2倍。在一些实施方案中，相对于宿主蛋白酶(诸如本文所述的那些)，对于冠状病毒蛋白酶的选择性可为>10倍。在一些实施方案中，相对于宿主蛋白酶(诸如本文所述的那些)，对于冠状病毒蛋白酶的选择性可为>100倍。

研究表明，SARS-CoV-2进入靶细胞是可以由多种蛋白酶介导的过程，所述蛋白酶包括半胱氨酸组织蛋白酶L和/或跨膜蛋白酶丝氨酸2(TMPRSS2)(Shang等人，PNAS(2020)117:11727，以及Hoffmann等人，Cell(2020)181:271-280)。缺乏对3CLpro的抑制作用的组织蛋白酶L抑制剂K117777可导致对VeroE6、A549-ACE2和/或HeLa-ACE2中的SARS-CoV-2的有效抑制(Mellott等人，bioRxiv(2020)2020.2010.2023.347534)。还已证明，当TMPRSS2在A549-ACE2中表达时，K117777的有效抗病毒作用被破坏(Steuten等人，bioRxiv(2020)2020.2011.2021.392753)。3CLpro抑制剂的脱靶活性(例如，对组织蛋白酶L的脱靶活性)可导致对化合物的细胞效能的3CLpro组分的不准确评估。例如，本文所述的化合物(诸如式(I)的化合物或其药学上可接受的盐)可以对冠状病毒蛋白酶比对宿主蛋白酶(诸如组织蛋白酶L)具有更大的选择性。选择性可以由本领域技术人员例如使用IC₅₀和/或Ki值来确定。在一些实施方案中，本文所述的化合物不显著抑制组织蛋白酶L(例如，IC₅₀≥10000nM或>3.3μM)，但抑制冠状病毒蛋白酶(例如，SARS-Cov-2 3Clpro)。

抗病毒治疗的缺点可以是抗性的发展，包括交叉抗性。抗性可能是治疗失败的原因。如本文所用，术语“抗性”是指病毒株对抗病毒剂显示出延迟、减弱和/或无效的响应。在一些实施方案中，可将如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐提供给感染了对一种或多种其他抗病毒剂具有抗性的冠状病毒毒株的受试者。在一些实施方案中，与用一种或多种其他抗病毒剂治疗时冠状病毒抗性毒株的发展相比，当用如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐治疗受试者时，冠状病毒抗性毒株的发展被延迟。

组合疗法

在一些实施方案中，如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐可与一种或多种用于治疗和/或抑制冠状病毒复制的附加药剂组合使用。附加药剂包括但不限于ACE抑制剂、抗凝剂、抗炎剂、ARB、ASO、Covid-19恢复期血浆、进入抑制剂、H₂泵拮抗剂、H-传导通道、HIV蛋白酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、免疫球蛋白、免疫抑制剂、免疫治疗剂、单克隆抗体、神经氨酸苷酶抑制剂、核苷抑制剂、核苷类似物抑制剂、聚合酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、siRNA、他汀类、组织纤溶酶原活化剂、抗生素、抗微生物剂和疫苗。附加药剂的示例包括抗坏血酸、安纳金(Anakin)、阿奇霉素、巴洛沙韦(Baloxavir)、巴瑞替尼、磷酸氯喹、秋水仙碱、皮质类固醇、依前列醇、法莫替丁、法匹拉韦、IGIV、干扰素(例如，重组干扰素α2b、IFN-α和/或PEG-IFN-α-2a)、IVIG、伊维菌素、γ-球蛋白、洛匹那韦、甲泼尼龙、莫努匹韦(Molnupiravir)(MK-4482或EIDD-2801)、氯硝柳胺、硝唑尼特、一氧化氮、奥司他韦、帕拉米韦、RANTES、利巴韦林、瑞德西韦、鲁索替尼、沙利鲁单抗(Sarilumab)、司妥昔单抗、西罗莫司、他汀类、他克莫司、托珠单抗、乌米那韦(Umifenovir)、扎那米韦、卡西瑞单抗、依米得韦单抗、巴尼韦单抗、埃特司韦单抗和AT-527(Good等人，Antimicrobial Agents andChemotherapy(2021)65(4):e02479-20)。

在一些实施方案中，如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐可与一种或多种附加药剂一起在单一药物组合物中施用。在一些实施方案中，化合物或其药学上可接受的盐可与一种或多种附加药剂一起作为两种或更多种单独的药物组合物施用。此外，如本文所述的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种附加药剂的施用顺序可变化。

实施例

在以下示例中更详细地公开了附加的实施方案，其不旨在以任何方式限制权利要求的范围。

化合物

下文提供了可以各种方式(包括本文所示和所述的那些合成方案)制备的式(I)的化合物及其药学上可接受的盐。本领域技术人员将能够识别对所公开的合成的修改并且能够基于本文的公开内容来设计路线；所有此类修改和替代路线均在权利要求的范围内。

中间体的合成

向(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸1,2-二叔丁酯(15g，52.2mmol，1.0当量)在DCM(250mL)中的溶液中添加三乙胺(9.51g，93.9mmol，1.8当量)和DMAP(1.91g，15.7mmol，0.3当量)。在0℃处，滴加MsCl(8.97g，78.3mmol，1.5当量)。将混合物在室温(rt)处搅拌2h，并用水(100mL)淬灭反应。将溶液用DCM(3×150mL)萃取。将有机层合并，用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用EA:PE(1:10)进行色谱分离，得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-(甲磺酰基氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1,2-二叔丁酯(17.8g，89％)。LC-MS(ESI,m/z)：366[M+H]⁺。

向(2S,4R)-4-(甲磺酰基氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸1,2-二叔丁酯(17.8g，48.7mmol，1.0当量)在MeOH(400mL)中的溶液中添加(苯基二硒基)苯(9.12g，29.2mmol，0.6当量)。在0℃处，分若干批添加硼氢化钠(2.4g，63.3mmol，1.3当量)。将混合物回流过夜，然后减压浓缩。添加水(100mL)，并将混合物用EA(3×150mL)萃取。将有机层合并，用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用EA:PE(1:5)进行色谱分离，得到呈无色油状物的(2S,4S)-4-(苯基硒基)吡咯烷-1,2-二甲酸1,2-二叔丁酯(7.5g，32％)。LC-MS(ESI,m/z):428[M+H]⁺。

向(2S,4S)-4-(苯基硒基)吡咯烷-1,2-二甲酸1,2-二叔丁酯(7.5g，17.6mmol，1.0当量)在DCM(100mL)中的溶液中添加吡啶(2.4mL，30.5mmol，1.7当量)和30％ H₂O₂水溶液(5.6mL，71.6mmol，4.0当量)。将混合物在室温处搅拌12h，并用水(20mL)淬灭反应。将溶液用DCM(3×150mL)萃取。将有机层合并，用1M柠檬酸(80mL)、饱和Na₂SO₃水溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用EA:PE(1:9)进行色谱分离，得到呈无色油状物的(2S)-2,5-二氢吡咯-1,2-二甲酸1,2-二叔丁酯(2.8g，53％)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ6.02-6.09(m,1H),5.76-5.83(m,1H),4.72-4.78(m,1H),4.05-4.09(m,2H),1.17-1.42(m,18H)。LC-MS(ESI,m/z):270[M+H]⁺。

将(2S)-2,5-二氢吡咯-1,2-二甲酸1,2-二叔丁酯(2.8g，10.4mmol，1.0当量)在二环戊二烯(60mL)中的溶液在170℃和氮气下搅拌48h，然后用DCM(200mL)拆分。去除溶剂后，将残余物在硅胶柱上用EA:PE(1:9)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的产物(2.5g，粗产物)。将粗制油状物在C18柱上用H₂O:MeCN(2:1)进行色谱分离，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸二叔丁酯(690mg，19％)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ6.14-6.21(m,2H),3.55-3.60(m,1H),3.23-3.27(m,1H),2.95-3.02(m,2H),2.74-2.87(m,3H),1.24-1.48(m,20H)。LC-MS(ESI,m/z):270[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸异叔丁酯(690mg，2.1mmol，1.0当量)在二氧杂环己烷(10mL)中的溶液中添加盐酸(10mL，9M)。将混合物在室温处搅拌过夜，然后减压浓缩，得到呈黑色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(320mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):180[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(320mg，1.79mmol，1.0当量)在DCM(8mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(429mg，1.97mmol，1.1当量)和三乙胺(542mg，5.34mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h，然后减压浓缩，得到呈棕色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(叔丁氧基羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(430mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):280[M+H]⁺。

将(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酸甲酯(10.0g，34.9mmol，1.00当量)在氨(150mL，7M MeOH水溶液)中的混合物在80℃处搅拌过夜并减压浓缩，得到呈浅棕色固体的N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(10.0g，粗产物)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.65(s,1H),7.29(s,1H),7.01(s,1H),6.88-6.95(m,1H),3.84-4.15(m,1H),3.09-3.21(m,2H),2.08-2.26(m,2H),1.84-1.96(m,1H),1.60-1.74(m,1H),1.44-1.54(m,1H),1.38(s,9H)。LC-MS(ESI,m/z):272[M+H]⁺。

将((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(710mg，2.62mmol，1.0当量)在盐酸的乙醚溶液(12mL，2mol/L)中的溶液在室温处搅拌2h并减压浓缩，得到呈白色固体的(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烯酰胺(500mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):172[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(叔丁氧基羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(979mg，3.5mmol，1.2当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐(1.44g，3.8mmol，1.3当量)和N,N-二异丙基乙胺(2.64g，20.4mmol，7.0当量)。将混合物在0℃处搅拌30min，然后添加(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙烯酰胺(500mg，2.92mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，并用水(5mL)淬灭反应。将混合物用EA(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在C18柱上用水:MeCN(2:1)进行色谱分离，得到呈棕黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-甲酸叔丁酯(1.05g，75％)。LC-MS(ESI,m/z):433[M+H]⁺。

将(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-甲酸叔丁酯(300mg，0.69mmol，1.0当量)在盐酸的乙醚溶液(5mL，2mol/L)中的溶液在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(200mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):333[M+H]⁺。

在0℃处向(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酸叔丁酯盐酸盐(6.00g，26.8mmol，1.0当量)和2,2,2-三氟乙酸乙酯(7.62g，53.6mmol，2.0当量)在MeOH(100mL)中的搅拌混合物中添加三乙胺(5.43g，53.7mmol，2.0当量)。在30℃处将混合物搅拌5h，然后减压浓缩，得到粗产物。用DCM(150mL)稀释粗产物，并制成具有100-200硅胶筛目的浆液(15g)，并且在去除DCM后将浆液加载到柱色谱上。将样品通过柱色谱法(柱尺寸6×24cm，柱体积：600mL，硅胶尺寸(100-200目)，量：330g)纯化，并用MeOH:DCM(0％-10％，30min内)洗脱。收集的级分：选择0％MeOH:DCM级分作为纯级分，并且将这些级分合并并减压浓缩，得到呈白色固体的(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸叔丁酯(7.20g，90％)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ6.78-6.90(m,1H),4.32-4.38(m,1H),1.50(s,9H),1.01(s,9H)。LC-MS(ESI,m/z):282[M-H]^-。

向(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸叔丁酯(1.03g，3.64mmol，1.0当量)在DCM(5mL)中的混合物中添加三氟乙酸(5mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈黄色油状物的(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸(826mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):226[M-H]^-。

向(2S)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1,2-二叔丁基(2S)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1,2-二叔丁酯(50g，175mmol，1.0当量)在甲苯(500mL)中的溶液中添加[叔丁氧基(二甲基氨基)甲基]二甲胺(36.7g，210mmol，1.2当量)。将混合物在氮气和115℃下搅拌3小时并减压浓缩，得到呈橙色油状物的(S,Z)-4-((二甲基氨基)亚甲基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸二叔丁酯(46g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):341[M+H]⁺。

在-78℃和N₂下，向(S,Z)-4-((二甲基氨基)亚甲基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸二叔丁酯(46g，135mmol，1.0当量)的THF(900mL)溶液中滴加DIBAl-H(203mL，1M甲苯溶液，203mmol，1.5当量)。

将混合物在-78℃处搅拌2h，然后在0℃处缓慢倒入盐酸(800mL，2mol/L)中。将溶液用EA(3×600mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用EA:PE(1:5)进行色谱分离，得到呈无色油状物的(S)-4-亚甲基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸二叔丁酯(16mg，36％)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ5.98-6.00(m,1H),5.58-5.59(m,1H),4.50-4.54(m,1H),3.04-3.34(m,1H),2.57-2.64(m,1H),1.36-1.44(m,18H)。LC-MS(ESI,m/z):298[M+H]⁺。

在-40℃和N₂下向(S)-4-亚甲基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸二叔丁酯(12g，40.4mmol，1.0当量)的THF(200mL)溶液中添加甲氧基锂(22mL，2.2M甲醇溶液，48.4mmol，1.2当量)。将混合物在-40℃处搅拌30min。用饱和氯化钠水溶液(100mL)淬灭反应。将溶液用EA(3×100mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用EA:PE(1:4)进行色谱分离，得到呈无色粘性油状物的1-(叔丁基)5-甲基(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-亚甲基戊二酸酯(12g，81％)。LC-MS(ESI,m/z):330[M+H]⁺。

向1-(叔丁基)5-甲基(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-亚甲基戊二酸酯(7g，21mmol，1.0当量)在MeCN(70mL)和DMSO(70mL)中的溶液中添加2H-吡唑-3-胺(2.1g，25.5mmol，1.2当量)、K₂CO₃(2.94mg，21mmol，1.0当量)。将混合物在60℃下搅拌过夜，然后减压浓缩。将残余物在C18柱上用MeCN:H₂O(3:2)进行色谱分离，得到呈棕黄色油状物的(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙酸叔丁酯(1.7g，19％)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.76(s,1H),7.18-7.27(m,2H),5.56-5.57(m,1H),4.26-4.36(m,1H),3.89-4.13(m,1H),2.75-2.79(m,1H),2.10-2.25(m,1H),1.61-1.80(m,1H),1.27-1.53(m,18H)。LC-MS(ESI,m/z):381[M+H]⁺。

向(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙酸叔丁酯(800mg，3.55mmol，1.0当量)在二氧杂环己烷(8mL)中的溶液中添加盐酸(8mL，9M)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈灰白色半固体的(2S)-2-氨基-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙酸(400mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):225[M+H]⁺。

向(2S)-2-氨基-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙酸(400mg，1.78mmol，1.0当量)在DCM(6mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(430mg，1.96mmol，1.1当量)和三乙胺(180mg，5.36mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h，然后减压浓缩，得到呈棕黄色半固体的(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙酸(530mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):325[M+H]⁺。

向(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙酸(530mg，1.63mmol，1.0当量)在DMF(8mL)中的溶液中添加N,N,N,N-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(550mg，1.96mmol，1.2当量)、NMI(671mg，8.17mmol，5.0当量)和NH₃的二氧杂环己烷(40mL，10.0当量，0.4mol/L)溶液。将混合物在室温处搅拌2h，然后在C18柱上用MeCN:H₂O(1:4)进行色谱分离，得到呈棕黄色油状物的((2S)-1-氨基-1-氧代-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(280mg，48％)。LC-MS(ESI,m/z):324[M+H]⁺。

将((2S)-1-氨基-1-氧代-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(280mg，0.87mmol，1.0当量)在盐酸(4mL，2mol/L的二氧杂环己烷溶液)中的溶液在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈灰白色半固体的(2S)-2-氨基-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙酰胺(180mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):224[M+H]⁺。

(S)-3-((R*)-1-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-2-((叔丁氧 基羰基)氨基)丙酸

暂时指定用“*”表示手性中心。

向100mL圆底烧瓶中装入5,5-二甲基吡咯烷-2-酮(3.5g，30.9mmol，1.0当量)、DCM(50mL)、二碳酸二叔丁酯(10.8g，49.5mmol，1.6当量)、三乙胺(6.24g，61.8mmol，2.0当量)和DMAP(0.38g，3.09mmol，0.1当量)。将溶液在40℃处搅拌过夜，并用水(150mL)淬灭反应。将溶液用EA(5×300mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用EA:PE(13:87)进行色谱分离，得到呈白色固体的2,2-二甲基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.0g，58％)。LC-MS(ESI,m/z):214[M+H]⁺。

向100mL圆底烧瓶中装入2,2-二甲基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.6g，16.9mmol，1.00当量)和THF(50mL)。将溶液冷却至-78℃，并添加LiHMDS(20.2mL，1M的THF溶液，20.2mmol，1.2当量)。将混合物在-78℃处搅拌1h，并在Ar下添加(4R)-4-甲酰基-2,2-二甲基-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(5.81g，25.3mmol，1.5当量)在THF(10mL)中的溶液。在-78℃处继续搅拌1h。用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭反应。将溶液用二氯甲烷(3×150mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用EA:PE(1:4)进行色谱分离，得到呈无色油状物的(4R)-4-{[1-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基](羟基)甲基}-2,2-二甲基-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(7.2g，89％)。LC-MS(ESI,m/z):443[M+H]⁺。

向100mL圆底烧瓶中装入(4R)-4-{[1-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基](羟基)甲基}-2,2-二甲基-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(1g，2.26mmol，1.00当量)、DCM(10mL)、三乙胺(1.14g，11.3mmol，5.0当量)和MsCl(0.31g，4.52mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，并用水(30mL)淬灭反应。将溶液用二氯甲烷(4×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色油状物的(4R)-4-{[1-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基](甲磺酰基氧基)甲基}-2,2-二甲基-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(960mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):521[M+H]⁺。

向100mL圆底烧瓶中装入(4R)-4-{[1-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基](甲磺酰基氧基)甲基}-2,2-二甲基-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(900mg，1.73mmol，1.0当量)、DCM(20mL)和DBU(1.32g，8.64mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，并用水(30mL)淬灭反应。将溶液用二氯甲烷(3×80mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用EA:PE(1:4)进行色谱分离，得到呈无色油状物的(4S)-4-{[1-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-亚基]甲基}-2,2-二甲基-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(635mg，82％)。LC-MS(ESI,m/z):425[M+H]⁺。

向250mL圆底烧瓶中装入(4S)-4-{[1-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-亚基]甲基}-2,2-二甲基-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(4.4g，10.4mmol，1.0当量)、EA(50mL)和10％活性碳钯(5.51g)。将烧瓶的内容物置于氢气气氛(3atm)下。将混合物在室温处搅拌过夜。滤除固体。将有机层减压浓缩，得到呈无色油状物的(4S)-4-{[1-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基]甲基}-2,2-二甲基-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(4.3g，78％)。LC-MS(ESI,m/z):427[M+H]⁺。

将(4S)-4-((1-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(3.6g)通过制备型SFC使用以下梯度条件纯化：柱：Lux 5umCellulose-2，3*25cm，5μm；流动相A：CO₂，流动相B：IPA(0.5％2M NH₃-MeOH)；流速：60mL/min；梯度：等度10％ B；柱温(℃)：35；背压(巴)：100；波长：220nm；RT1(min)：4.81；RT2(min)：6.43；样品溶剂：MeOH--制备级；进样体积：1.5mL；运行次数：27。纯化得到呈灰白色固体的(S)-4-(((S*)-1-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(990mg)(Lux Celloluse-2 4.6*50mm，3μm，35℃。共溶剂：IPA(0.1％ DEA)，2.0min内10％至50％，在50％下保持1.0min；Rt：0.969min)，以及呈灰白色固体的(S)-4-(((R*)-1-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(1.6g)(Lux Celloluse-2 4.6*50mm，3μm，35℃。共溶剂：IPA(0.1％ DEA)，2.0min内10％至50％，在50％下保持1.0min；Rt：1.411min)。

向40mL小瓶中装入(S)-4-(((R*)-1-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(1.6g，3.75mmol，1.0当量)、对甲苯磺酸酯(64.6mg，0.375mmol，0.1当量)和MeOH(20mL)。将混合物在室温处搅拌过夜。将反应用水(20mL)淬灭。将溶液用EA(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈灰白色半固体的(S)-4-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-羟丙基)-2,2-二甲基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.47g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):387[M+H]⁺。

向(S)-4-((R*)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-羟丙基)-2,2-二甲基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.7g，4.40mmol，1.0当量)在丙酮(22mL)中的溶液中添加5％碳酸氢钠溶液(22mL，13.1mmol，3.0当量)和2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(0.14g，0.88mmol，0.2当量)。在0℃处，滴加次氯酰基钠(1.15g，15.4mmol，3.5当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，并用水(20mL)淬灭反应。将溶液用Et2O(2×20mL)洗涤。用浓盐酸(1mol/L)将水溶液的pH值调节至2。将溶液用EtOAc(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体的(S)-3-((R*)-1-(叔丁氧基羰基)-5,5-二甲基-2-氧代吡咯烷-3-基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)丙酸(1.2g，61％)。

((S)-1-羟基-3-((S*)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁 基酯

暂时指定用“*”表示手性中心的绝对构型。

向3-氰基丙酸甲酯(10g，88.4mmol，1.0当量)在Et₂O(100mL)中的溶液中添加Ti(OⁱPr)₄(5.03g，17.7mmol，0.2当量)。然后在N₂下滴加EtMgBr(194mL，1M的THF溶液，194mmol，2.2当量)。将混合物在室温处搅拌2h，并用水(20mL)淬灭反应。将混合物用EA(3×60mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用PE:MeOH(12:1)进行色谱分离，得到呈无色油状物的4-氮杂螺[2.4]庚-5-酮(8.5g，69％)。LC-MS(ESI,m/z):112[M+H]⁺。

向250mL圆底烧瓶中装入4-氮杂螺[2.4]庚-5-酮(8.5g，76.5mmol，1.0当量)、DCM(100mL)、二碳酸二叔丁酯(26.7g，122mmol，1.6当量)、三乙胺(0.77g，7.65mmol，0.1当量)和DMAP(0.93g，7.65mmol，0.1当量)。将溶液在40℃处搅拌过夜，并用水(70mL)淬灭反应。将溶液用DCM(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用EA:PE(1:12)进行色谱分离，得到呈白色固体的5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚烷-4-甲酸叔丁酯(11g，58％)。LC-MS(ESI,m/z):212[M+H]⁺。

向500mL圆底烧瓶中装入5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚烷-4-甲酸叔丁酯(11g，52.1mmol，1.0当量)和THF(150mL)。将溶液冷却至-78℃，并添加LiHMDS(62.5mL，1M的THF溶液，62.5mmol，1.2当量)。将混合物在-78℃处搅拌1h，并在Ar下添加(4R)-4-甲酰基-2,2-二甲基-1,3-噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(17.9g，78.1mmol，1.5当量)在THF(50mL)中的溶液。在-78℃处继续搅拌1h。用饱和氯化铵溶液(100mL)淬灭反应。将溶液用EA(3×200mL)萃取。将有机层合并，用盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用EA:PE(1:8)进行色谱分离，得到呈无色油状物的(4R)-4-((4-(叔丁氧基羰基)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)(羟基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(19.7g，69％)。LC-MS(ESI,m/z):441[M+H]⁺。

向500mL圆底烧瓶中装入(4R)-4-((4-(叔丁氧基羰基)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)(羟基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(19.7g，44.7mmol，1.0当量)、DCM(250mL)、三乙胺(27.2g，268mmol，6.0当量)和MsCl(20.5g，179mmol，4.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，并用水(100mL)淬灭反应。将溶液用DCM(4×150mL)萃取。将有机层合并，用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈橙色油状物的(4R)-4-((4-(叔丁氧基羰基)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)((甲基磺酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(22g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):519[M+H]⁺。

向500mL圆底烧瓶中装入(4R)-4-((4-(叔丁氧基羰基)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)((甲基磺酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(22g，42.4mmol，1.0当量)、DCM(200mL)和DBU(14.2g，93.3mmol，2.2当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，并用水(80mL)淬灭反应。将溶液用DCM(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用EA:PE(1:12)进行色谱分离，得到呈无色油状物的6-{[(4S)-3-(叔丁氧基羰基)-2,2-二甲基-1,3-噁唑烷-4-基]亚甲基}-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚烷-4-甲酸叔丁酯(11.3g，57％)。LC-MS(ESI,m/z):423[M+H]⁺。

向250mL小瓶中装入6-{[(4S)-3-(叔丁氧基羰基)-2,2-二甲基-1,3-噁唑烷-4-基]亚甲基}-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚烷-4-甲酸叔丁酯(11.3g，26.7mmol，1.0当量)、4-甲基苯磺酸(5.53g，32.1mmol，1.2当量)和MeOH(120mL)。将混合物在室温处搅拌过夜，然后减压浓缩，得到呈橙色油状物的6-[(2S)-2-氨基-3-羟基亚丙基]-4-氮杂螺[2.4]庚-5-酮(5.8g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):183[M+H]⁺。

向6-[(2S)-2-氨基-3-羟基亚丙基]-4-氮杂螺[2.4]庚-5-酮(5.8g，31.829mmol，1.00当量)在DCM(90mL)中的溶液中添加三乙胺(25.8g，255mmol，8.0当量)和二碳酸二叔丁酯(20.8g，95.5mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，并用水(30mL)淬灭反应。将混合物用CDCl₃:异丙醇＝3:1(3×50mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用MeOH:DCM(1:25)进行色谱分离，得到呈棕黄色固体的N-[(2S)-1-羟基-3-[(6E)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-亚基]丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯(3.9g，39％)。LCMS(ESI,m/z)：283[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-羟基-3-[5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-亚基]丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯(3.9g，13.8mmol，1.0当量)在THF(30mL)和MeOH(90mL)中的溶液中添加NiCl₂·6H₂O(23g，96.7mmol，7.0当量)。在0℃处，分若干批添加NaBH₄(11g，290mmol，21.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，并用水(30mL)淬灭反应。将混合物用CDCl₃:异丙醇＝3:1(3×60mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在C18柱上用MeCN:H₂O(4:1)进行色谱分离，得到呈棕黄色固体的N-[(2S)-1-羟基-3-{5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基}丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.7g，39％)。LCMS(ESI,m/z)：285[M+H]⁺。

将N-[(2S)-1-羟基-3-{5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基}丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.7g)通过SFC使用以下梯度条件纯化：柱：NB-Lux 5um i-Cellulose-5，2.12*25cm，5μm；流动相A：CO₂，流动相B：MeOH(0.1％2M NH₃-MeOH)；流速：100mL/min；梯度：等度25％ B；柱温(℃)：35；背压(巴)：100；波长：220nm；RT1(min)：3.37；RT2(min)：4.02；样品溶剂：MeOH--制备级；进样体积：1mL；运行次数：40。纯化得到590mg首先洗脱的呈棕黄色固体的((S)-1-羟基-3-((R*)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯，以及640mg最后洗脱的呈棕黄色固体的((S)-1-羟基-3-((S*)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯。

(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酰胺

在0℃处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酸甲酯(3.0g，10.5mmol，1.0当量)在四氢呋喃(50mL)中的搅拌混合物中滴加硼氢化锂(26.2mL，52.4mmol，5.0当量)。将混合物在0℃处搅拌1h，然后减压浓缩。将混合物用水(20mL)稀释，然后用异丙醇:三氯甲烷(1:5，4×50mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用二氯甲烷:甲醇(19:1)洗脱，得到呈白色固体的N-[(2S)-1-羟基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯(2.6g，粗产物)。通过添加PE:EA(4:1，40mL)使粗产物沉淀，得到呈白色固体的N-[(2S)-1-羟基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯(2.4g，79％)。LC-MS(ESI,m/z):259[M+H]⁺。

在室温处，向N-[(2S)-1-羟基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯(2.4g，9.29mmol，1.0当量)在二甲基亚砜(40mL)中的搅拌混合物中分批添加2-碘酰基苯甲酸(7.80g，27.8mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h，然后用饱和碳酸氢钠(水溶液)碱化至pH＝8。将混合物用水(20mL)稀释并用EA(4×200mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3×100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色固体的N-[(2S)-1-氧代-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯(1.5g，63％)。LC-MS(ESI,m/z):257[M+H]⁺。

在0℃处，向N-[(2S)-1-氧代-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯(900mg，3.51mmol，1.0当量)在二氯甲烷(10mL)中的搅拌混合物中滴加异氰基环丙烷(471mg，7.02mmol，2.0当量)和乙酸(633mg，10.5mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌5h，然后减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用二氯甲烷:甲醇(49:1)洗脱，得到呈黄色固体的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1-(环丙基氨基甲酰基)-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙基乙酸酯(820mg，55％)。LC-MS(ESI,m/z):384[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-1-(环丙基氨基甲酰基)-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙酸丙酯(810mg，2.11mmol，1.0当量)在四氢呋喃(8mL)中的搅拌混合物中添加氢氧化锂(253mg，10.5mmol，5.0当量，8mL水溶液)。将混合物在0℃处搅拌1h。将混合物用盐酸(2M)酸化至pH＝6。将混合物用EA(4×60mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色固体的N-[(2S)-1-(环丙基氨基甲酰基)-1-羟基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯(680mg，94％)。LCMS(ESI,m/z):342[M+H]⁺。

在室温处，向N-[(2S)-1-(环丙基氨基甲酰基)-1-羟基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙-2-基]氨基甲酸叔丁酯(400mg，1.17mmol，1.0当量)在二氯甲烷(6mL)中的搅拌混合物中滴加三氟乙酸(2mL)。将混合物在室温处搅拌1h然后减压浓缩，得到呈棕色固体的(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基-4-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丁酰胺(290mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):242[M+H]⁺。

(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧 代吡咯烷-3-基)丁-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-甲 酸叔丁酯

将((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(800mg，2.34mmol，1.0当量)在盐酸(14mL，4M的二氧杂环己烷溶液)中的溶液在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈灰白色固体的(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酰胺(550mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):242[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(叔丁氧基羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(700mg，2.5mmol，1.1当量)在DMF(8mL)中的溶液中添加N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐(1.13g，2.96mmol，1.3当量)和N,N-二异丙基乙胺(2.06g，16mmol，7.0当量)。将混合物在0℃处搅拌30min，并添加(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基-4-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁酰胺(550mg，2.28mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，并用水(10mL)淬灭反应。将混合物用EA(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用MeOH:DCM(1:12)进行色谱分离，得到呈棕黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-甲酸叔丁酯(900mg，70％)。LC-MS(ESI,m/z):503[M+H]⁺。

实施例1

化合物1

向(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸叔丁酯(118mg，0.42mmol，1.2当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐(171mg，0.45mmol，1.3当量)和N,N-二异丙基乙胺(313mg，2.42mmol，7.0当量)。将混合物在0℃处搅拌30min，然后添加(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(115mg，0.35mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，并用水(3mL)淬灭反应。将混合物用EA(3×5mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3×5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在C18柱上用水:MeCN(2:1)进行色谱分离，得到呈棕黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(150mg，收率72％)。LC-MS(ESI,m/z):542[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(120mg，0.22mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加TFAA(88.4mg，0.42mmol，1.9当量)和吡啶(61.3mg，0.78mmol，3.5当量)。将混合物在0℃处搅拌4h，并用水(4mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×5mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(0.05％TFA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内30％ B至50％B，50％ B；波长：254nm；RT1(min)：5.55；)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(1)(53.2mg，收率45％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,80℃)δ8.66-8.95(m,2H),7.28-7.37(m,1H),5.96-6.23(m,2H),4.87-4.93(m,1H),4.41-4.68(m,1H),3.86-4.17(m,1H),3.58-3.71(m,1H),3.20-3.51(m,2H),2.83-3.06(m,4H),2.59-2.79(m,1H),2.29-2.38(m,1H),2.03-2.28(m,2H),1.61-1.84(m,2H),1.31-1.42(m,2H),0.79-0.90(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):524[M+H]⁺。

实施例2

化合物2

在-30℃下，向4-叔丁基3-甲基(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3,4-二甲酸酯(300mg，1.02mmol，1.0当量)在Et₂O(2.5mL)中的溶液中添加重氮甲烷(30mL，30.0当量)和乙酸钯(II)(45.9mg，0.205mmol，0.2当量)。将混合物在室温处搅拌1h，然后过滤。将滤饼用乙醚(3×50mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用乙酸乙酯(EA):石油醚(PE)(1:8)进行色谱分离，得到呈浅黄色固体的4-叔丁基3-甲基(1R,2S,3S,6R,7S,8S,10R)-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3,4-二甲酸酯(200mg，58％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ4.25-4.50(m,1H),3.53-3.72(m,4H),3.22-3.30(m,1H),2.52-2.64(m,2H),2.22-2.42(m,2H),1.21-1.47(m,9H),1.03-1.16(m,1H),0.70-0.95(m,3H),0.39-0.54(m,1H),-0.09-0.05(m,1H)。LC-MS(ESI,m/z):208[M+H-Boc]⁺。

向4-叔丁基3-甲基(1R,2S,3S,6R,7S,8S,10R)-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3,4-二甲酸酯(245mg，0.797mmol，1.0当量)在MeOH(3mL)和H₂O(3mL)中的搅拌混合物中添加氢氧化锂(95.4mg，3.98mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物用盐酸(1M)酸化至pH＝4，然后用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将混合物减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1R,2S,3S,6R,7S,8S,10R)-4-(叔丁氧基羰基)-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-甲酸(200mg，85％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.57(s,1H),4.17-4.39(m,1H),3.47-3.76(m,1H),3.12-3.31(m,1H),2.51-2.59(m,2H),2.20-2.44(m,2H),1.27-1.49(m,9H),1.05-1.22(m,1H),0.69-0.93(m,3H),0.40-0.51(m,1H),-0.06-0.00(m,1H)。LC-MS(ESI,m/z):238[M+H-56]⁺。

在室温处，向(1R,2S,3S,6R,7S,8S,10R)-4-(叔丁氧基羰基)-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-甲酸(200mg，0.682mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的搅拌混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(311mg，0.818mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(528mg，4.09mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌10min，然后添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(141mg，0.682mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将化合物级分减压浓缩，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S,8S,10R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-4-甲酸叔丁酯(200mg，55％)。LC-MS(ESI,m/z):447[M+H]⁺。

在室温处，向(1R,2S,3S,6R,7S,8S,10R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-4-甲酸叔丁酯(200mg，0.448mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的搅拌混合物中添加盐酸(3mL，2MEt₂O溶液)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈白色固体的(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S,8S,10R)-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(200mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):347[M+H]⁺。

向(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸(101mg，0.446mmol，1.1当量)在DMF(2mL)中的搅拌混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(184mg，0.486mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(314mg，2.43mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌10min，然后添加(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S,8S,10R)-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(155mg，0.405mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将化合物级分减压浓缩，得到呈白色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S,8S,10R)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(170mg，67％)。LC-MS(ESI,m/z):556[M+H]⁺。

在室温处，向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S,8S,10R)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(100mg，0.180mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌混合物中滴加三氟乙酸酐(75.6mg，0.360mmol，2.0当量)和吡啶(49.8mg，0.630mmol，3.5当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用二氯甲烷(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC用以下条件纯化(柱：Xselect Peptide CSH C18 19*150mm 5μm，1；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：10min内34％ B至48％ B，48％ B；波长：254nm；RT1(min)：8.98)，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S,8S,10R)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-甲酰胺(9.6mg，9％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.47-9.13(m,2H),7.33-7.62(m,1H),4.82-4.95(m,1H),4.56-4.75(m,2H),3.90-4.04(m,1H),3.57-3.70(m,1H),3.08-3.20(m,2H),2.59-2.72(m,1H),2.24-2.45(m,4H),2.05-2.20(m,2H),1.60-1.84(m,2H),0.91-1.11(m,9H),0.85-0.91(m,1H),0.75-0.84(m,2H),0.56-0.65(m,1H),0.38-0.51(m,1H),-0.30-0.00(m,1H)。

实施例3

化合物3

向(2S,3R)-2-氨基-3-(叔丁氧基)丁酸(1.00g，5.71mmol，1.0当量)在甲醇(15mL)中的搅拌混合物中添加2,2,2-三氟乙酸乙酯(0.970g，6.84mmol，1.2当量)和三乙胺(1.73g，17.1mmol，3.0当量)。将混合物在rt下搅拌过夜。将反应用水(50mL)淬灭。将混合物用盐酸(1M)调节至pH 5～6，然后用EtOAc(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈浅棕色固体的(2S,3R)-3-(叔丁氧基)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸(1.58g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):270[M-H]^-。

向(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(120mg，0.277mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(1mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(92.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):333[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(92.0mg，0.277mmol，1.0当量)、(2S,3R)-3-(叔丁氧基)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸(75.1mg，0.277mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(126mg，0.332mmol，1.2当量)在DMF(4mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(286mg，2.21mmol，8.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(1:12)进行色谱分离，得到所需产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化，将级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S,3R)-3-(叔丁氧基)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(61.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):586[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S,3R)-3-(叔丁氧基)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(60.0mg，0.102mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌混合物中添加吡啶(32.4mg，0.408mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(43.1mg，0.204mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge制备型Phenyl OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.05％ TFA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：10min内40％ B至56％ B，56％ B；波长：254nm；RT1(min)：8.22)纯化，得到(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S,3R)-3-(叔丁氧基)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(1.7mg，2％)。LC-MS(ESI,m/z):512[M-56+H]⁺。

实施例4

化合物4

向(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(500mg，1.15mmol，1.0当量)在DCM(6mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(2mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈黄色油状物的(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(380mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):333[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(76.0mg，0.229mmol，1.0当量)、(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酸(52.9mg，0.229mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(104mg，0.275mmol，1.2当量)在DMF(2mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(236mg，1.83mmol，8.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将化合物级分减压浓缩，得到呈白色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(105mg，78％)。LC-MS(ESI,m/z):546[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.183mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(1mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈黄色油状物的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(81.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):446[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(81.5mg，0.183mmol，1.0当量)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(83.5mg，0.220mmol，1.2当量)和5-甲基-1,2-噁唑-3-甲酸(23.3mg，0.183mmol，1.0当量)在DMF(3mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(189mg，1.46mmol，8.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将化合物级分减压浓缩，得到呈白色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-5-甲基-1,2-噁唑-3-甲酰胺(74mg，62％)。LC-MS(ESI,m/z):554[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-5-甲基-1,2-噁唑-3-甲酰胺(70.0mg，0.126mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌混合物中添加吡啶(39.9mg，0.504mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(53.0mg，0.252mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内35％ B至65％ B，65％ B；波长：254nm；RT1(min)：5)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-[(5-甲基-1,2-噁唑-3-基)甲酰胺基]丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(7.70mg，11％)。LC-MS(ESI,m/z):537[M+H]⁺。

实施例5

化合物5

在0℃向吡啶甲酸(110mg，0.894mmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(408mg，1.07mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(924mg，7.15mmol，8.0当量)。0.5h后，添加(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酸叔丁酯盐酸盐(200mg，0.894mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，然后得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱法纯化，得到(2S)-3,3-二甲基-2-(吡啶-2-基甲酰胺基)丁酸叔丁酯(88mg，33％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.67-8.73(m,1H),8.40-8.50(m,1H),8.00-8.10(m,2H),7.62-7.69(m,1H),4.26-4.33(m,1H),1.44(s,9H),1.00(s,9H)。LCMS(ESI,m/z)：293[M+H]⁺。

向(2S)-3,3-二甲基-2-(吡啶-2-基甲酰胺基)丁酸叔丁酯(88.0mg，0.291mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的溶液中添加三氟乙酸(0.7mL)。将混合物在室温处搅拌4h，然后减压浓缩，得到粗产物。LCMS(ESI,m/z)：237[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(100mg，0.301mmol，1当量)在DMF(4mL)中的溶液中添加在0℃处搅拌的(2S)-3,3-二甲基-2-(吡啶-2-基甲酰胺基)丁酸(70.8mg，0.301mmol，1.0当量)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(137.3mg，0.361mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(233mg，2.41mmol，8.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将化合物级分减压浓缩，得到N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]吡啶-2-甲酰胺(50.0mg，粗产物)。

在室温处，向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]吡啶-2-甲酰胺(25.0mg，0.045mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌混合物中滴加三氟乙酸酐(8.81mg，0.090mmol，2.0当量)和吡啶(12.5mg，0.158mmol，3.5当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物(25mg)通过制备型HPLC用以下条件纯化(柱：Kinetex EVO C18，21.2*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内35％ B至62％ B，62％ B；波长：254nm；RT1(min)：5)，得到呈浅黄色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(吡啶-2-基甲酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(3.2mg，12％)。LCMS(ESI,m/z):533[M+H]⁺。

实施例6

化合物6

将吡嗪酸(166mg，1.34mmol，1.0当量)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(612mg，1.61mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.04g，8.05mmol，6.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物搅拌20分钟。在0℃处添加(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酸叔丁酯盐酸盐(300mg，1.34mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h，并用水(2mL)淬灭反应。将混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。用二氯甲烷(10mL)稀释粗产物，并制成具有100-200硅胶筛目的浆液(1g)。去除二氯甲烷后，将浆液加载到柱上。将样品通过柱色谱法(柱尺寸4×24cm，柱体积：200mL，硅胶尺寸(100-200目))纯化，并用EA:PE(0％-40％，30min内)洗脱。收集的级分：选择23％-26％EA:PE级分作为纯级分。将这些级分合并并减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(2S)-3,3-二甲基-2-(吡嗪-2-基甲酰胺基)丁酸叔丁酯(300mg，76％)。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ9.21(br,1H),8.91-8.95(m,1H),8.75-8.82(m,1H),8.29-8.33(m,1H),4.31-4.34(m,1H),1.45(s,9H),1.01(s,9H)。LC-MS(ESI,m/z):294[M+H]⁺。

向(2S)-3,3-二甲基-2-(吡嗪-2-基甲酰胺基)丁酸叔丁酯(87.9mg，0.300mmol，1.0当量)在二氯甲烷(1mL)中的混合物中添加三氟乙酸(0.5mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈黄色油状物的(2S)-3,3-二甲基-2-(吡嗪-2-基甲酰胺基)丁酸(80.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):238[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-3,3-二甲基-2-(吡嗪-2-基甲酰胺基)丁酸(71.1mg，0.30mmol，1.0当量)和(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(99.6mg，0.30mmol，1.0当量)在DMF(3mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(348mg，2.70mmol，9.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ NH₄HCO₃)纯化。将化合物级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(吡嗪-2-基甲酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(70.0mg，43％)。LC-MS(ESI,m/z):552[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]吡嗪-2-甲酰胺(55.0mg，0.100mmol，1.0当量)在二氯甲烷(1mL)中的混合物中添加吡啶(31.5mg，0.400mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(41.9mg，0.200mmol，2.0当量)。将混合物在rt下搅拌过夜。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge制备型C18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：MeOH--HPLC；流速：25mL/min；梯度：12min内43％ B至53％ B，53％ B；波长：254nm；RT1(min)：11)纯化，得到呈灰白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(吡嗪-2-基甲酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(3.0mg，5％)。LC-MS(ESI,m/z):534[M+H]⁺。

实施例7

化合物7

向4-甲氧基苯胺(5.0g，36.4mmol，1.0当量)和硫酸镁(24.4g，202mmol，5.0当量)在DCM(100mL)中的混合物中添加2-羟基-2-甲氧基乙酸甲酯(4.88g，40.5mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h并过滤。将滤饼用二氯甲烷(3×100mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到呈棕黄色油状物的(2Z)-2-[(4-甲氧基苯基)亚氨基]乙酸甲酯(8g，粗产物)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ7.95(s,1H),7.33-7.43(m,2H),6.85-6.99(m,2H),3.94(s,3H),3.83(s,3H)。LC-MS(ESI,m/z):194[M+H]⁺。

在室温处，向粉末状分子筛(5A，4g)、磺酰胺(0.20g，2.07mmol，0.05当量)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.25g，2.07mmol，0.05当量)在DCM(40mL)中的搅拌混合物中添加(2Z)-2-[(4-甲氧基苯基)亚氨基]乙酸甲酯(8.00g，41.4mmol，1.0当量)和异丁醛(3.58g，49.6mmol，1.2当量)。将混合物在rt下搅拌过夜。用水(150mL)淬灭反应。将混合物用乙酸乙酯(3×150mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(1:4)进行色谱分离，得到呈浅黄色油状物的(2S)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]-3,3-二甲基-4-氧代丁酸甲酯(4.5g，36％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.58(s,1H),6.73(m,4H),5.42(d,J＝8.0Hz,1H),4.44(d,J＝8.0Hz,1H),3.65(s,3H),3.61(s,3H),0.85-1.34(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z):266[M+H]⁺。

在室温处在N₂下，向(2S)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]-3,3-二甲基-4-氧代丁酸甲酯(4.5g，16.9mmol，1.0当量)和磷酸钾(4.69g，33.9mmol，2.0当量)在MeOH(50mL)中的搅拌混合物中滴加(1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(4.24g，22.0mmol，1.3当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(200mL)淬灭反应体系。将混合物用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(1:9)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的(2S)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]-3,3-二甲基戊-4-酸甲酯(1.70g，36％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.65-6.76(m,4H),5.05(d,J＝12.0Hz,1H),3.92(d,J＝12.0Hz,1H),3.61-3.64(m,6H),3.09(s,1H),1.34(s,3H),1.29(s,3H)。LC-MS(ESI,m/z):262[M+H]⁺。

在室温处，向(2S)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]-3,3-二甲基戊-4-酸甲酯(1.14g，4.36mmol，1.0当量)在CH₃CN(9mL)和H₂O(3mL)中的搅拌混合物中添加硝酸铈铵(12.0g，21.8mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。添加THF(10mL)，然后添加三甲胺和二碳酸二叔丁酯(5.48g，25.1mmol，6.0当量)。将混合物在室温处搅拌4h，然后用水(50mL)稀释。将混合物用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(1:9)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基戊-4-酸甲酯(800mg，63％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.01(d,J＝12.0Hz,1H),4.11(d,J＝12.0Hz,1H),3.65(s,3H),3.06(s,1H),1.39(s,9H),1.21-1.23(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z):156[M+H-Boc]⁺。

在室温处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基戊-4-酸甲酯(800mg，3.13mmol，1.0当量)在THF(6mL)和H₂O(2mL)中的搅拌混合物中添加氢氧化锂(375mg，15.6mmol，5.0当量)。将混合物在60℃处搅拌1h。将混合物用盐酸(1M)酸化至pH 3。将水层用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将混合物减压浓缩，得到呈浅橙色固体的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基戊-4-炔酸(700mg，92％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.76(s,1H),6.69(d,J＝8.0Hz,1H),4.00(d,J＝8.0Hz,1H),3.03(s,1H),1.40(s,9H),1.17-1.24(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z):142[M-100+H]⁺。

向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基戊-4-炔酸(400mg，1.65mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(1mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕黄色油状物的(2S)-2-氨基-3,3-二甲基戊-4-炔酸(300mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):142[M+H]⁺。

向(2S)-2-氨基-3,3-二甲基戊-4-炔酸(234mg，1.65mmol，1.0当量)和三乙胺(670mg，6.63mmol，4.0当量)在MeOH(3mL)中的搅拌混合物中添加2,2,2-三氟乙酸乙酯(471mg，3.31mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后用盐酸(1M)酸化至pH 4。将混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将合并的有机层减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊-4-炔酸(300mg，76％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.28(s,1H),9.67(d,J＝8.0Hz,1H),4.45(d,J＝8.0Hz,1H),3.09(s,1H),1.25-1.41(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z):236[M-H]^-。

在室温处向(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊-4-炔酸(71.3mg，0.300mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的搅拌混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(137mg，0.361mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(232mg，1.80mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌10min，并添加(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(110mg，0.300mmol，1.0当量)。将混合物在室温处再搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将化合物级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊-4-炔酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(120mg，51％)。LC-MS(ESI,m/z):552[M+H]⁺。

在室温处，向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊-4-炔酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(120mg，0.218mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌混合物中添加吡啶(60.2mg，0.763mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(91.3mg，0.436mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，然后得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC用以下条件纯化(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内40％ B至70％B，70％ B；波长：254nm；RT1(min)：5；)得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊-4-炔酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(14.9mg，12％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.46-9.16(m,2H),7.27-7.52(m,1H),5.93-6.25(m,2H),4.78-4.93(m,1H),4.62-4.75(m,1H),3.89-4.09(m,1H),3.55-3.76(m,1H),3.33-3.47(m,1H),3.09-3.21(m,2H),2.79-3.02(m,4H),2.65-2.78(m,1H),2.27-2.41(m,1H),1.98-2.25(m,2H),1.61-1.91(m,2H),1.32-1.45(m,2H),1.07-1.31(m,6H)。

实施例8

化合物8

标有*的手性中心是暂时指定的

在0℃处向甲基三苯基溴化膦(68.4g，191mmol，1.4当量)在四氢呋喃(100mL)中的混合物中添加1-四氢萘酮(20.0g，136mmol，1.0当量)。在0℃处搅拌0.5h后，添加甲基三苯基溴化膦(68.4g，191mmol，1.4当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，然后过滤。将滤液减压浓缩，得到粗产物。用二氯甲烷(100mL)稀释粗产物，并制成具有100-200硅胶筛目的浆液(60g)。去除二氯甲烷后，将混合物加载到柱上。将样品通过柱色谱法(柱尺寸6×24cm，柱体积：600mL，硅胶尺寸(100-200目))纯化，并用PE(0％-10％，30min内)洗脱。收集的级分：选择0％ PE级分作为纯级分。将这些级分合并并减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的1-亚甲基-3,4-二氢-2H-萘(12.0g，60％)。LC-MS(ESI,m/z):145[M+H]⁺。

在60℃处向1-亚甲基-3,4-二氢-2H-萘(1.00g，6.930mmol，1.0当量)、[Ru(对伞花烃)Cl₂]₂(212mg，0.350mmol，0.05当量)和(S)-(i-Pr)-Pybox(209mg，0.690mmol，0.1当量)在四氢呋喃(80mL)中的搅拌混合物中，在8h内分批添加2-重氮乙酸乙酯(1.18g，10.4mmol，1.5当量)。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将样品通过柱色谱法(柱尺寸6×24cm，柱体积：600mL，硅胶尺寸(100-200目)纯化，并用EA:PE(0％-10％，30min内)洗脱。收集的级分：选择5％-8％ PE级分作为纯级分。将这些级分合并并减压浓缩，得到粗产物。通过TLC纯化粗产物(流动相：EA:PE＝1:40；R_f＝0.4；检测：UV)，得到呈浅黄色油状物的(1R*,3R*)-3',4'-二氢-2'H-螺[环丙烷-1,1'-萘]-3-甲酸乙酯。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ7.01-7.13(m,3H),6.81-6.86(m,1H),4.02-4.19(m,2H),2.80-2.84(m,2H),1.76-1.93(m,4H),1.52-1.71(m,2H),1.34-1.43(m,1H),1.16-1.24(m,3H)。LC-MS(ESI,m/z):231[M+H]⁺。

向(1R,3R)-3',4'-二氢-2'H-螺[环丙烷-1,1'-萘]-3-甲酸乙酯(380mg，1.65mmol，1.0当量)在乙醇(4mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化钠(461mg，11.5mmol，7.0当量，在水4mL中)。将混合物在rt下搅拌过夜。将混合物减压浓缩以去除乙醇。将混合物用盐酸(2M)调节至pH 5，然后用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈灰白色固体的(1R,3R)-3',4'-二氢-2'H-螺[环丙烷-1,1'-萘]-3-甲酸(240mg，71％)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ12.24(br,1H),6.89-7.21(m,4H),2.72-2.91(m,2H),1.51-1.89(m,6H),1.26-1.45(m,1H)。LC-MS(ESI,m/z):203[M+H]⁺。

在0℃处，向(1R,3R)-3',4'-二氢-2'H-螺[环丙烷-1,1'-萘]-3-甲酸(71.2mg，0.352mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(24.74mg，0.065mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(273mg，2.11mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(130mg，0.352mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(TFA 0.05％)纯化。将化合物级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-{[(1R,3R)-3',4'-二氢-2'H-螺[环丙烷-1,1'-萘]-3-基]羰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙烯酰胺(70mg，43％)。LC-MS(ESI,m/z):517[M+H]+。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-{[(1S,3S)-3',4'-二氢-2'H-螺[环丙烷-1,1'-萘]-3-基]羰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(70.0mg，0.135mmol，1.0当量)在二氯甲烷(1mL)中的混合物中添加吡啶(37.5mg，0.473mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(56.9mg，0.270mmol，2.0当量)。将混合物在rt下搅拌过夜。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内41％ B至61％ B，61％ B；波长：254nm；RT1(min)：5.47)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-{[(1R,3R)-3',4'-二氢-2'H-螺[环丙烷-1,1'-萘]-3-基]羰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(17mg，25％)。LC-MS(ESI,m/z):499[M+H]⁺。

实施例9

化合物9

向(2S)-2-氨基-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙酰胺(2S)-2-氨基-3-{5-氧代-4H,6H,7H-吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}丙酰胺(70mg，0.31mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加N,N,N,N-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(106mg，0.38mmol，1.2当量)、NMI(180mg，2.2mmol，7.0当量)和(2S)-2-氨基-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙酰胺(134mg，0.35mmol，1.1当量)。将混合物在0℃处搅拌2h，然后在C18柱上用MeCN:H₂O(3:7)进行色谱分离，得到呈棕黄色半固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-1-氨基-1-氧代-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(75mg，36％)。LC-MS(ESI,m/z):594[M+H]⁺。

在0℃处，向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-1-氨基-1-氧代-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(75mg，0.13mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的溶液中添加吡啶(70mg，0.88mmol，7.0当量)和TFAA(106mg，0.5mmol，4.0当量)。将混合物在0℃处搅拌2h。用水(2mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×3mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18，30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内37％B至67％ B，67％ B；波长：254nm；RT1(min)：5.25)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((1S)-1-氰基-2-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(4.5mg，6％)。LC-MS(ESI,m/z):576[M+H]⁺。

实施例10

化合物10

在0℃处，向1-叔丁基2-甲基(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸酯(30.0g，122mmol，1.0当量)、三乙胺(22.3g，220mmol，1.8当量)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(4.48g，36.7mmol，0.3当量)在DCM(500mL)中的混合物中滴加甲磺酰氯(21.0g，183mmol，1.5当量)。将混合物在0℃处搅拌2h。用水(500mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×500mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc:PE(1:1)进行色谱分离，得到呈浅黄色固体的1-叔丁基2-甲基(2S,4R)-4-(甲磺酰氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(35.0g，85％)。LC-MS(ESI,m/z):224[M+H-Boc]⁺。

在0℃处向1-叔丁基2-甲基(2S,4R)-4-(甲磺酰氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(25.0g，77.3mmol，1.0当量)和二苯基二硒化物(24.1g，77.3mmol，1.0当量)在MeOH(600mL)中的混合物中添加硼氢化钠(3.80g，100mmol，1.3当量)。将混合物在70℃处搅拌过夜，然后减压浓缩以去除MeOH。添加水(600mL)，并且混合物用EtOAc(3×600mL)萃取。将有机层合并，用盐水(600mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc:PE(1:8)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的1-叔丁基2-甲基(2S,4S)-4-(苯基硒基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(26.8g，84％)。LC-MS(ESI,m/z):286[M-100+H]⁺。

向1-叔丁基2-甲基(2S,4S)-4-(苯基硒基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(26.8g，69.7mmol，1.0当量)和吡啶(9.38g，118mmol，1.7当量)在DCM(300mL)中的混合物中添加过氧化氢(31.6mL，279mmol，4.0当量，30％的水溶液)。将混合物在室温处搅拌5h。用水(500mL)淬灭反应。混合物用DCM(3×400mL)萃取。将有机层合并，用柠檬酸(500mL，1M)、饱和亚硫酸钠水溶液(500mL)洗涤，用盐水(500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc:PE(1:5)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的1-叔丁基2-甲基(2S)-2,5-二氢吡咯-1,2-二甲酸酯(10.5g，62％)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ5.91-5.04(m,1H),5.67-5.79(m,1H),4.92-5.09(m,1H),4.17-4.35(m,2H),3.71-3.79(m,3H),1.42-1.52(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):128[M+H-Boc]⁺。

将1-叔丁基2-甲基(2S)-2,5-二氢吡咯-1,2-二甲酸酯(3.68g，16.2mmol，1.0当量)在二环戊二烯(40mL)中的混合物在170℃处搅拌过夜。用DCM(500mL)稀释混合物，并制成具有100-200硅胶筛目的浆液(50g)。将混合物加载到柱上。减压去除DCM后，将样品通过柱色谱法(柱尺寸6×24cm，柱体积：600mL，硅胶尺寸(100-200目)，量：330g)纯化，并用EtOAc:PE(0％-50％，30min内)洗脱。收集的级分：选择19％-25％EtOAc:PE级分作为纯级分。将这些级分合并并减压浓缩，得到粗产物(2.5g)。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将化合物级分减压浓缩，得到呈黄色油状物的4-叔丁基3-甲基(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3,4-二甲酸酯(1.70g，32％)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ6.12-6.30(m,2H),3.78-3.98(m,1H),3.72(s,3H),3.38-3.51(m,1H),3.04-3.21(m,2H),2.77-2.96(m,3H),1.50-1.58(m,1H),1.32-1.46(m,10H)。LC-MS(ESI,m/z):194[M+H-Boc]⁺。

在室温处，将4-叔丁基3-甲基(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3,4-二甲酸酯(500mg，1.70mmol，1.0当量)在氯化氢(10mL，2M Et₂O溶液)中的混合物搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯盐酸盐(391mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):194[M+H]⁺。

在0℃处，向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯盐酸盐(391mg，1.70mmol，1.0当量)、(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酸(394mg，1.70mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(777mg，2.04mmol，1.2当量)在DMF(10mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.32g，10.2mmol，6.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc:PE(8:92)进行色谱分离，得到呈灰白色半固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯(490mg，69％)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ6.03-6.27(m,2H),5.11-5.26(m,1H),4.18-4.36(m,2H),3.72-3.78(m,3H),3.54-3.70(m,2H),2.97-3.14(m,2H),2.86-2.94(m,2H),1.49-1.54(m,1H),1.41-1.48(m,9H),1.33-1.39(m,1H),0.92-1.00(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):407[M+H]⁺。

向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯(490mg，1.205mmol，1.0当量)在THF(5mL)/水(5mL)中的混合物中添加氢氧化锂(144mg，6.03mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h。将混合物减压浓缩以去除THF，然后用盐酸(2M)将pH调节至5。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(465mg，97％)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ6.04-6.30(m,2H),5.21-5.29(m,1H),4.22-4.32(m,2H),3.52-3.79(m,2H),3.06-3.24(m,2H),2.91-3.04(m,2H),1.51-1.56(m,1H),1.37-1.47(m,10H),0.95-1.00(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):393[M+H]⁺。

向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(465mg，1.18mmol，1.0当量)在DCM(15mL)中的混合物中添加三氟乙酸(5mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈深蓝色半固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(346mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):293[M+H]⁺。

向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(346mg，1.18mmol，1.0当量)在MeOH(10mL)中的混合物中添加三乙胺(1.44g，14.2mmol，12.0当量)和2,2,2-三氟乙酸乙酯(1.01g，7.10mmol，6.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，然后减压浓缩以去除MeOH。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将化合物级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(310mg，65％)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ12.22-13.12(m,1H),8.96-9.49(m,1H),5.88-6.24(m,2H),4.24-4.60(m,1H),3.94-4.05(m,1H),3.43-3.58(m,2H),2.67-3.04(m,4H),1.30-1.44(m,2H),0.76-1.05(m,9H).LC-MS(ESI,m/z):389[M+H]^-。

在0℃处，向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(102mg，0.263mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(120mg，0.316mmol，1.2当量)在DMF(2mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(204mg，1.58mmol，6.0当量)。在0℃处搅拌15min后，添加(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基-4-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丁酰胺盐酸盐(73.0mg，0.263mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，然后得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(7:93)进行色谱分离，得到呈浅黄色固体的(3S)-N-环丙基-3-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-2-羟基-4-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丁酰胺(120mg，68％)。LC-MS(ESI,m/z):612[M+H]⁺。

向(3S)-N-环丙基-3-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-2-羟基-4-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丁酰胺(120mg，0.196mmol，1.0当量)在DMSO(3mL)中的混合物中添加2-碘酰基苯甲酸(165mg，0.588mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h。用饱和碳酸氢钠(10mL)淬灭反应。将混合物用EtOAc(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(4:96)进行色谱分离，得到呈白色固体的N-环丙基-3-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-2-氧代-4-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丁酰胺(31.8mg，24％)。LC-MS(ESI,m/z):610[M+H]⁺。

实施例11

化合物11

将(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(2S)-1-(环丙基氨基甲酰基)-1-羟基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙-2-基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(150mg，0.298mmol，1.0当量)在氯化氢(2mL，2M的Et₂O溶液)中的混合物在室温处搅拌1h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(130mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):403[M+H]⁺。

在0℃处，向(1R,3R)-3',4'-二氢-2'H-螺[环丙烷-1,1'-萘]-3-甲酸(76.03mg，0.376mmol，1.1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(155mg，0.410mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(265mg，2.05mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(150mg，0.342mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将残余物通过TLC(二氯甲烷:甲醇，12:1)纯化，得到呈黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2-((1R,2R)-3',4'-二氢-2'H-螺[环丙烷-1,1'-萘]-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(80mg，40％)。LC-MS(ESI,m/z):587[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2-((1R,2R)-3',4'-二氢-2'H-螺[环丙烷-1,1'-萘]-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(80.0mg，0.136mmol，1.0当量)在DMSO(2mL)中的搅拌混合物中添加2-碘酰基苯甲酸(114mg，0.408mmol，3.0当量)。将混合物在rt下搅拌过夜。用饱和碳酸氢钠(10mL)淬灭反应。将混合物用EtOAc(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用二氯甲烷:甲醇(94:6)进行色谱分离，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-(4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2-((1R,2R)-3',4'-二氢-2'H-螺[环丙烷-1,1'-萘]-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺。LC-MS(ESI,m/z):585[M+H]^-。

实施例12

化合物12

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(95.0mg，0.175mmol，1.0当量)在EtOAc(3mL)中的混合物中添加10％活性碳钯(90.0mg)。将混合物在室温处在氢气下搅拌3h。将混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4R,7S,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(75.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):544[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4R,7S,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(75.0mg，0.138mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中添加吡啶(76mg，0.966mmol，7.0当量)和三氟乙酸酐(116mg，0.552mmol，4.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×5mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19×150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内36％ B至56％ B，56％ B；波长：254nm；RT：6.18min)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4R,7S,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(19.6mg，26％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.85-9.20(m,1H),8.60-8.84(m,1H),7.35-7.55(m,1H),4.80-4.98(m,1H),4.59-4.75(m,1H),4.30-4.58(m,1H),3.76-3.85(m,1H),3.45-3.75(m,1H),3.10-3.25(m,2H),2.55-2.70(m,1H),2.30-2.54(m,3H),2.05-2.29(m,3H),1.62-1.88(m,2H),1.40-1.60(m,2H),1.05-1.39(m,4H),0.95-1.04(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):526[M+H]⁺。

实施例13

化合物13

在室温处，向(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(250mg，0.578mmol，1.0当量)在乙酸乙酯(3mL)中的搅拌混合物中添加10％活性碳钯(120mg)。将混合物在氢气下搅拌1.5h。过滤混合物，并将滤饼用乙酸乙酯(3×10mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到呈白色固体的(1S,2S,3S,6R,7R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-甲酸叔丁酯(200mg，75％)。LC-MS(ESI,m/z):435[M+H]⁺。

在室温处，向(1S,2S,3S,6R,7R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-甲酸叔丁酯(200mg，0.460mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌混合物中添加氯化氢(6mL，2M Et₂O溶液)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(2S)-2-[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(180mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):335[M+H]⁺。

在室温处，向(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸(124mg，0.550mmol，1.2当量)在DMF(2mL)中的搅拌混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(209mg，0.550mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(355mg，2.74mmol，6.0当量)。将混合物在室温处搅拌10min，并添加(2S)-2-[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(170mg，0.458mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(1:15)进行色谱分离，得到呈浅黄色固体的(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(135mg，54％)。LC-MS(ESI,m/z):553[M+H]^-。

向(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊-4-炔酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(135mg，0.244mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸酐(102mg，0.488mmol，2.0当量)和吡啶(67.5mg，0.854mmol，3.5当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用二氯甲烷(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC用以下条件纯化(柱：XBridge制备型C18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内40％ B至70％ B，70％ B；波长：254nm；RT1(min)：5)，得到呈白色固体的(1S,2S,3S,6R,7R)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊-4-炔酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酰胺(18.8mg，14％)。LC-MS(ESI,m/z):536[M+H]⁺。

实施例14

化合物14

在0℃处，向((S)-1-羟基-3-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(400mg，1.41mmol，1.0当量)在CCl₄(6mL)和乙腈(6mL)中的溶液中添加高碘酸钠(1.52g，7.13mmol，5.07当量，在9mL水中)和三氯钌(35.0mg，0.169mmol，0.12当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后过滤通过硅藻土。用DCM(3×50mL)萃取滤液。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈白色固体的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙酸(240mg，57％)。LC-MS(ESI,m/z):299[M+H]⁺。

向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙酸(130mg，0.436mmol，1.0当量)在THF(3mL)中的溶液中添加1-羟基苯并三唑(177mg，1.31mmol，3.0当量)，并在0℃处搅拌1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(184mg，0.959mmol，2.2当量)。搅拌1h后，添加氢氧化铵(2.6mL)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈白色固体的((S)-1-氨基-1-氧代-3-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(80mg，61％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.11-7.6(m,1H),6.47-6.51(m,1H),6.03(br,1H),5.85(m,1H),4.36-4.42(m,1H),2.78-2.85(m,1H),2.26-2.34(m,1H),2.13-2.21(m,1H),1.89-2.04(m,2H),1.43-1.51(m,9H),0.77-0.98(m,2H),0.67-0.75(m,2H)。LC-MS(ESI,m/z):298[M+H]⁺。

将((S)-1-氨基-1-氧代-3-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(80.0mg，0.269mmol，1.0当量)在氯化氢(3mL，2M乙醚溶液)中的混合物在室温处搅拌5h，然后减压浓缩，得到呈黄色固体的(S)-2-氨基-3-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙酰胺盐酸盐(60mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):198[M+H]^-。

在0℃处，向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(110mg，0.283mmol，1.1当量)在二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(117mg，0.308mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(199mg，1.54mmol，6.0当量)。搅拌20min后，添加(S)-2-氨基-3-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙酰胺盐酸盐(60.0mg，0.257mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(65mg，44％)。LC-MS(ESI,m/z):568[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(60.0mg，0.106mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中添加吡啶(41.8mg，0.530mmol，5.0当量)和三氟乙酸酐(51.1mg，0.244mmol，2.3当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用DCM(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内40％ B至70％ B，70％ B；波长：220nm；RT1(min)：5.63；)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(27.5mg，47％)。¹HNMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.75-8.81(m,1H),8.67-8.69(m,1H),7.50-7.57(m,1H),5.93-6.16(m,2H),4.84-4.89(m,1H),4.44-4.64(m,1H),3.98-4.12(m,1H),3.58-3.66(m,1H),3.37-3.47(m,1H),3.07-3.17(m,1H),2.79-2.93(m,2H),2.63-2.73(m,1H),2.54-2.63(m,1H),2.12-2.29(m,1H),1.74-1.99(m,3H),1.32-1.42(m,2H),0.88-0.94(m,9H),0.71-0.77(m,1H),0.48-0.62(m,3H)。LC-MS(ESI,m/z):550[M+H]⁺。

实施例15

化合物15

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(500mg，1.29mmol，1.0当量)在乙酸乙酯(10mL)中的混合物中添加10％活性碳钯(120mg)。将混合物在室温处在氢气下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤然后用乙酸乙酯(150mL)洗涤。减压浓缩滤液，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4R,7S,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(460mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):391[M+H]⁺。

在0℃处，向(1S,3aR,4R,7S,7aS)-2-[(S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(184mg，0.471mmol，1.1当量)在二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(195mg，0.514mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(332mg，2.57mmol，6.0当量)。搅拌20min后，添加(S)-2-氨基-3-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙酰胺盐酸盐(100mg，0.428mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈白色固体的(1S,3aR,4R,7S,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(140mg，57％)。LC-MS(ESI,m/z):570[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4R,7S,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(140mg，0.246mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的混合物中添加吡啶(77.8mg，0.984mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(92.9mg，0.443mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用DCM(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(65％-72％)进行色谱分离，得到呈白色固体的(1S,3aR,4R,7S,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((R)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚-6-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(47.6mg，33％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.94-8.98(m,1H),8.57-8.75(m,1H),7.51-7.59(m,1H),4.83-4.90(m,1H),4.56-4.68(m,1H),4.46-4.48(m,1H),3.70-3.79(m,1H),3.57-3.65(m,1H),2.49-2.68(m,2H),2.31-2.42(m,2H),2.12-2.22(m,2H),1.89-2.01(m,2H),1.79-1.86(m,1H),1.35-1.49(m,2H),1.19-1.32(m,3H),1.06-1.14(m,1H),0.93-0.97(m,9H),0.72-0.75(m,1H),0.49-0.62(m,3H)。LC-MS(ESI,m/z):552[M+H]⁺。

实施例16

化合物16

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(2.00g，5.09mmol，1.0当量)在DCM(30mL)中的混合物中添加三氟乙酸(10mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(1.40g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):293[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(1.49g，5.09mmol，1.0当量)在MeOH(10mL)中的搅拌混合物中添加三乙胺(6.19g，61.1mmol，12.0当量)和2,2,2-三氟乙酸乙酯(4.34g，30.5mmol，6.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，然后减压浓缩以去除MeOH。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(1.17g，59％)。LC-MS(ESI,m/z):389[M+H]^-。

在80℃处将(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-2-氧代哌啶-3-基)丙酸甲酯(1.0g，3.32mmol，1.0当量)在氨(20mL，7M MeOH溶液)中的混合物搅拌过夜。将混合物减压浓缩，得到呈浅棕色固体的((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代哌啶-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.01g，粗产物)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.36-7.65(m,1H),7.14-7.35(m,1H),6.44-7.12(m,2H),3.74-4.22(m,1H),2.91-3.30(m,2H),1.99-2.40(m,2H),1.45-1.94(m,4H),0.94-1.44(m,10H)。LC-MS(ESI,m/z):286[M+H]⁺。

将((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代哌啶-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，0.421mmol，1.0当量)在氯化氢(3mL，2M的Et₂O溶液)中的混合物在室温处搅拌1h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色油状物的(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代哌啶-3-基]丙酰胺盐酸盐(80.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):186[M+H]⁺。

在0℃处，向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(162mg，0.420mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(191mg，0.504mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(325mg，2.52mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代哌啶-3-基]丙酰胺盐酸盐(93.0mg，0.420mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(6:94)进行色谱分离，得到呈浅黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代哌啶-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(160mg，68％)。LC-MS(ESI,m/z):556[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代哌啶-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(160mg，0.288mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的混合物中添加吡啶(91.1mg，1.15mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(120mg，0.576mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：10min内35％ B至55％ B，55％ B；波长：254nm；RT1(min)：8.15)纯化，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代哌啶-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(38.5mg，25％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.75-8.95(m,1H),8.60-8.73(m,1H),7.15-7.40(m,1H),5.90-6.30(m,2H),4.65-5.10(m,1H),4.40-4.60(m,1H),3.90-4.25(m,1H),3.55-3.75(m,1H),3.35-3.50(m,1H),3.10-3.20(m,2H),3.00-3.05(m,1H),2.85-3.00(m,2H),2.65-2.80(m,1H),2.20-2.50(m,2H),1.70-1.95(m,3H),1.50-1.70(m,1H),1.30-1.50(m,3H),0.80-1.05(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):538[M+H]⁺。

实施例17

化合物17a和17b

暂时指定用“*”表示手性中心

将((2S)-1-氨基-1-氧代-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(290mg)通过SFC使用以下梯度条件纯化：柱：OptiChiral-C9-5，3*25cm，5μm；流动相A：CO₂，流动相B：IPA(0.5％2M NH₃-MeOH)；流速：100mL/min；梯度：等度35％ B；柱温(℃)：35；背压(巴)：100；波长：220nm；RT1(min)：3.3；RT2(min)：5.85；样品溶剂：MeOH--制备级；进样体积：4.8mL；纯化得到呈灰白色固体的((2S)-1-氨基-1-氧代-3-(5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(210mg)，该灰白色固体通过SFC使用以下梯度条件纯化：柱：Lux 5um Cellulose-4，3*25cm，5μm；流动相A：CO₂，流动相B：IPA(0.5％2M NH₃-MeOH)；流速：100mL/min；梯度：等度40％B；柱温(℃)：35；背压(巴)：100；波长：220nm；RT1(min)：2.87；RT2(min)：4.33；样品溶剂：MeOH--制备级；进样体积：4.8mL；运行次数：4。纯化得到呈灰白色固体的((S)-1-氨基-1-氧代-3-((R*)-5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(80mg)的混合物。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.78(s,1H),7.29-7.32(m,2H),6.96-7.06(m,2H),5.59-5.60(m,1H),4.31-4.37(m,1H),3.95-4.03(m,2H),2.69-2.80(m,1H),2.09-2.19(m,1H),1.69-1.77(m,1H),1.24-1.37(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):324[M+H]⁺。

以及呈灰白色固体的((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(90mg)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.76(s,1H),7.29-7.33(m,2H),6.95-7.06(m,2H),5.58-5.59(m,1H),4.40-4.44(m,1H),3.93-4.07(m,2H),2.75-2.81(m,1H),2.21-2.25(m,1H),1.51-1.61(m,1H),1.20-1.24(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):324[M+H]⁺。

将((S)-1-氨基-1-氧代-3-((R*)-5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(70mg，0.216mmol，1.0当量)在盐酸(2mL，4M的二氧杂环己烷溶液)中的溶液在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈白色固体的(S)-2-氨基-3-((R)-5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙酰胺(40mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):224[M+H]⁺。

向(S)-2-氨基-3-((R*)-5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙酰胺(40mg，0.18mmol，1.0当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加(1S,3aR,4R,7S,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(77mg，0.2mmol，1.1当量)、N,N,N,N-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(66mg，0.24mmol，1.3当量)和NMI(74mg，0.9mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将残余物在C18柱上用水:MeCN(3:1)进行色谱分离，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4R,7S,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((R)-5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(50mg，42％)。LC-MS(ESI,m/z):596[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4R,7S,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((R*)-5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(50mg，0.08mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加TFAA(35mg，0.17mmol，2.0当量)和吡啶(23mg，0.29mmol，3.5当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(3mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×5mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内37％ B至52％ B，52％ B；波长：254nm；RT1(min)：5.23)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4R,7S,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((R*)-5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(5.1mg，10％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,80℃)δ10.66(br,1H),8.39-9.09(m,2H),7.24-7.26(m,1H),5.56-5.57(m,1H),4.93-5.10(m,1H),4.61-4.71(m,1H),4.32-4.59(m,2H),3.98-4.06(m,1H),3.78-3.82(m,1H),3.58-3.64(m,1H),2.81-2.92(m,1H),2.58-2.69(m,1H),2.41-2.48(m,2H),2.32-2.36(m,1H),2.21-2.23(m,1H),1.92-2.02(m,1H),1.41-1.55(m,2H),1.18-1.32(m,3H),1.08-1.14(m,1H),0.82-0.95(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):578[M+H]⁺。

与针对17a所述类似地制备化合物17b，使用((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S*)-5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯代替((S)-1-氨基-1-氧代-3-((R*)-5-氧代-4,5,6,7-四氢吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,80℃)δ10.61(br,1H),8.81-8.95(m,1H),8.67-8.69(m,1H),7.24-7.26(m,1H),5.56-5.58(m,1H),5.09-5.11(m,1H),4.62-4.73(m,1H),4.31-4.52(m,2H),3.91-4.05(m,1H),3.71-3.83(m,1H),3.53-3.66(m,1H),2.81-2.96(m,1H),2.62-2.69(m,1H),2.44-2.51(m,2H),2.32-2.37(m,1H),2.18-2.26(m,1H),1.84-2.05(m,1H),1.38-1.56(m,2H),1.19-1.36(m,3H),1.04-1.17(m,1H),0.82-1.11(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):578[M+H]⁺。

实施例18

化合物18

向(2S)-2-[(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-4'-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-8'-烯-3'-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(250mg，0.440mmol，1.0当量)在EtOAc(4mL)中的搅拌混合物中添加10％活性碳钯(100mg)。将混合物在室温处在氢气下搅拌1h。将混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-[(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-4'-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-3'-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(235mg，91％)。LC-MS(ESI,m/z):570[M+H]⁺。

向(2S)-2-[(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-4'-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-3'-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(230mg，0.404mmol，1.0当量)在DCM(5mL)中的搅拌混合物中添加吡啶(111mg，1.41mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(152mg，0.727mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Kinetex EVO C18，21.2*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：10min内40％ B至63％ B，63％ B；波长：254nm；RT1(min)：7.45)纯化，得到呈白色固体的(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4'-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-3'-甲酰胺(44.3mg，19％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.91-9.01(m,1H),8.65-8.83(m,1H),7.38-7.53(m,1H),4.81-4.98(m,1H),4.60-4.75(m,1H),4.50-4.58(m,1H),3.79-3.88(m,1H),3.63-3.78(m,1H),3.09-3.23(m,2H),2.72-2.95(m,1H),2.60-2.68(m,1H),2.30-2.41(m,1H),2.09-2.29(m,2H),1.62-1.86(m,2H),1.57-1.61(m,1H),1.31-1.56(m,4H),1.12-1.30(m,1H),0.89-1.09(m,9H),0.50-0.60(m,2H),0.36-0.49(m,2H)。LC-MS(ESI,m/z):552[M+H]⁺。

实施例19

化合物19

在0℃处，向呋喃-2-甲酸(30.9mg，0.276mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(125mg，0.331mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(213mg，1.65mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(133mg，0.276mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(7:93)进行色谱分离，得到呈浅黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-(呋喃-2-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(120mg，81％)。LC-MS(ESI,m/z):540[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-(呋喃-2-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(120mg，0.222mmol，1.0当量)在二氯甲烷(3mL)中的混合物中添加吡啶(123mg，1.55mmol，7.0当量)和三氟乙酸酐(140mg，0.666mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge制备型Phenyl OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内35％ B至65％ B，65％ B；波长：254nm；RT1(min)：6)纯化，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-2-(呋喃-2-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(17.4mg，15％)。LC-MS(ESI,m/z):522[M+H]⁺。

实施例20

化合物20

在0℃处，向1-(三氟甲基)环丙烷-1-甲酸(43.0mg，0.274mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(125mg，0.329mmol，1.2当量)在DMF(3mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(212mg，1.64mmol，6.0当量)。在0℃处搅拌15min后，添加(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(132mg，0.274mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-1-(三氟甲基)环丙烷-1-甲酰胺(130mg，78％)。LC-MS(ESI,m/z):582[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-1-(三氟甲基)环丙烷-1-甲酰胺(130mg，0.224mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中添加吡啶(71.0mg，0.896mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(85.0mg，0.403mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用DCM(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30x150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：10min内28％ B至53％ B，53％ B；波长：254nm；RT：7.47min)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-{[1-(三氟甲基)环丙基]甲酰胺基}丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(55.9mg，44％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.60-8.80(m,1H),7.35-7.55(m,1H),6.58-7.00(m,1H),5.98-6.20(m,2H),4.70-4.98(m,1H),4.46-4.55(m,1H),4.00-4.15(m,1H),3.55-3.65(m,1H),3.35-3.54(m,1H),3.10-3.25(m,2H),3.00-3.09(m,1H),2.80-2.98(m,2H),2.68-2.79(m,1H),2.30-2.42(m,1H),2.08-2.28(m,2H),1.62-1.89(m,2H),1.30-1.48(m,3H),1.10-1.29(m,3H),0.83-0.98(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):564[M+H]⁺。

实施例21

化合物21

向环丙烷甲酸(27.5mg，0.319mmol，1.1当量)在DMF(2mL)中的搅拌混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(132mg，0.348mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(225mg，1.74mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌10min。添加(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(140mg，0.290mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h，然后通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈白色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]环丙烷甲酰胺(100mg，60％)。LC-MS(ESI,m/z):514[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]环丙烷甲酰胺(100mg，0.195mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸酐(81.7mg，0.390mmol，2.0当量)和吡啶(53.9mg，0.682mmol，3.5当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC用以下条件纯化(柱：XBridge制备型Phenyl OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内32％ B至62％B，62％B；波长：254nm；RT1(min)：6)，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-2-(环丙基甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(16.5mg，16％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.55-8.80(m,1H),7.70-7.85(m,1H),7.30-7.55(m,1H),5.91-6.20(m,2H),4.81-4.98(m,1H),4.40-4.52(m,1H),3.91-4.10(m,1H),3.42-3.62(m,2H),3.08-3.20(m,2H),2.97-3.02(m,1H),2.81-2.95(m,2H),2.63-2.73(m,1H),2.26-2.41(m,1H),2.05-2.22(m,2H),1.60-1.86(m,3H),1.29-1.41(m,2H),0.78-0.96(m,9H),0.66-0.74(m,1H),0.53-0.66(m,3H)。LC-MS(ESI,m/z):496[M+H]⁺。

实施例22

化合物22

将((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.04g，3.83mmol，1.0当量)在氯化氢(10mL，2M的Et₂O溶液)中的混合物在室温处搅拌1h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色油状物的(S)-2-氨基-3-[(S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(0.650g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):172[M+H]⁺。

在0℃处，向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(1.50g，3.82mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(1.74g，4.58mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(3.95g，30.5mmol，8.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min。在0℃处，添加(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酰胺盐酸盐(650mg，3.82mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应用水(50mL)淬灭。混合物用EtOAc(3×80mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(7:93)进行色谱分离，得到呈浅黄色固体的((S)-1-((1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.46g，70％)。LC-MS(ESI,m/z):546[M+H]⁺。

将((S)-1-((1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.275mmol，1.0当量)在氯化氢(2mL，2M的Et₂O溶液)中的混合物在室温处搅拌1h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(133mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):446[M+H]⁺。

在0℃处，向(R)-四氢呋喃-2-甲酸(32.0mg，0.276mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(125mg，0.331mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(213mg，1.65mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min。在0℃处添加(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(133mg，0.276mmol，1.0当量)。将混合物在0℃处搅拌2h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-((R)-四氢呋喃-2-甲酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(80mg，54％)。LC-MS(ESI,m/z):544[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-((R)-四氢呋喃-2-甲酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(50.0mg，0.092mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中加入吡啶(50.9mg，0.644mmol，7.0当量)和三氟乙酸酐(57.9mg，0.276mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱XBridge Shield RP18OBD柱，19*250mm，10μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：10min内30％ B至47％ B，47％ B；波长：254nm；RT1(min)：5.97)纯化，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-((R)-四氢呋喃-2-甲酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(13.9mg，28％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.60-8.90(m,1H),7.35-7.60(m,1H),6.80-7.20(m,1H),5.80-6.20(m,2H),4.65-5.00(m,1H),4.30-4.50(m,1H),4.15-4.30(m,1H),3.95-4.05(m,1H),3.70-3.90(m,2H),3.50-3.65(m,1H),3.30-3.55(m,1H),3.10-3.25(m,2H),2.90-3.05(m,1H),2.65-2.80(m,3H),2.25-2.45(m,1H),2.05-2.25(m,3H),1.65-1.95(m,5H),1.30-1.50(m,2H),0.65-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):526[M+H]⁺。

实施例23

化合物23

向4-叔丁基3-甲基(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3,4-二甲酸酯(1g，3.40mmol，1.0当量)在甲苯(4mL)中的搅拌混合物中加入氟化钠(50.0mg，1.19mmol，0.35当量)。在氮气和115℃下在2h内缓慢添加三甲基甲硅烷基2,2-二氟-2-磺基乙酸酯(4.27g，17.0mmol，5.0当量)。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的4-叔丁基3-甲基(1S,2S,3S,6R,7R,8R,10S)-9,9-二氟-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3,4-二甲酸酯(180mg，13％)。LC-MS(ESI,m/z)：288[M-56+H]⁺。

在室温处，向4-叔丁基3-甲基(1S,2S,3S,6R,7R,8R,10S)-9,9-二氟-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3,4-二甲酸酯(180mg，0.524mmol，1.0当量)在THF(3mL)和H₂O(1mL)中的搅拌混合物中添加氢氧化锂(37.6mg，1.57mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物用盐酸(2M)酸化至pH＝4，然后用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有机层经无水硫酸钠干燥。过滤后，将滤液减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的(1S,2S,3S,6R,7R,8R,10S)-4-(叔丁氧基羰基)-9,9-二氟-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-甲酸(150mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):328[M-H]^-。

在室温处，向(1S,2S,3S,6R,7R,8R,10S)-4-(叔丁氧基羰基)-9,9-二氟-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-甲酸(150mg，0.455mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(207mg，0.546mmol，1.2当量)在DMF(3mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(353mg，2.73mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌10min。添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(104mg，0.501mmol，1.1当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈白色固体的(1S,2S,3S,6R,7R,8R,10S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-9,9-二氟-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-4-甲酸叔丁酯(160mg，65％)。LC-MS(ESI,m/z):483[M+H]⁺。

向(1S,2S,3S,6R,7R,8R,10S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-9,9-二氟-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-4-甲酸叔丁酯(160mg，0.332mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的搅拌混合物中添加氯化氢(5mL，2MEt₂O溶液)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈白色固体的(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R,8R,10S)-9,9-二氟-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(140mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):383[M+H]⁺。

向(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸(83.5mg，0.367mmol，1.1当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(152mg，0.401mmol，1.2当量)在DMF(2mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(259mg，2.00mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌10min。添加(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R,8R,10S)-9,9-二氟-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(140mg，0.334mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R,8R,10S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9,9-二氟-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(140mg，63％)。LC-MS(ESI,m/z):592[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R,8R,10S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9,9-二氟-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(140mg，0.237mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌混合物中添加吡啶(65.5mg，0.829mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(99.4mg，0.474mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用DCM(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC用以下条件纯化(柱：XBridge制备型Phenyl OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内43％ B至73％B，73％ B；波长：254nm；RT1(min)：5；)得到呈白色固体的(1S,2S,3S,6R,7R,8R,10S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9,9-二氟-4-氮杂四环[5.3.1.0^{2,6}.0^{8,10}]十一烷-3-甲酰胺(30.5mg，21％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.91-9.20(m,1H),8.55-8.87(m,1H),7.35-7.55(m,1H),4.81-4.96(m,1H),4.55-4.73(m,2H),3.91-4.10(m,1H),3.58-3.74(m,1H),3.08-3.20(m,2H),2.73 -2.82(m,2H),2.62-2.72(m,1H),2.50-2.60(m,1H),2.26-2.38(m,1H),2.07-2.20(m,2H),1.62-1.87(m,3H),1.45-1.57(m,1H),1.26-1.37(m,1H),1.09-1.23(m,1H),0.84-1.03(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):574[M+H]⁺。

实施例24

化合物24

向氨基(1-甲基环丙基)乙酸盐酸盐(300mg，1.81mmol，1.0当量)在MeOH(5mL)中的混合物中加入三乙胺(733mg，7.24mmol，4.0当量)和2,2,2-三氟乙酸乙酯(309mg，2.17mmol，1.2当量)。将混合物在室温处搅拌过夜。将混合物减压浓缩，得到残余物。将残余物用水(10mL)稀释。用盐酸(1M)将pH调节至6。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体的(1-甲基环丙基)(2,2,2-三氟乙酰胺基)乙酸(380mg，88％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.95(br,1H),9.76(d,J＝7.3Hz,1H),3.78(d,J＝7.3Hz,1H),1.07(s,3H),0.69-0.77(m,1H),0.49-0.57(m,1H),0.41-0.48(m,1H),0.31-0.38(m,1H)。LC-MS(ESI,m/z):226[M+H]⁺。

在0℃处，向(1-甲基环丙基)(2,2,2-三氟乙酰胺基)乙酸(78.0mg，0.347mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(158mg，0.416mmol，1.2当量)在DMF(3mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(269mg，2.08mmol，6.0当量)。在0℃处搅拌15min后，添加(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(128mg，0.347mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[2-(1-甲基环丙基)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)乙酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(110mg，50％)。LC-MS(ESI,m/z):540[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[2-(1-甲基环丙基)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)乙酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(110mg，0.204mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中添加吡啶(65.0mg，0.816mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(77.0mg，0.367mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用DCM(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 ExRS，20×250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：10min内38％ B至59％ B，59％ B；波长：254nm；RT：7.47min)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[2-(1-甲基环丙基)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)乙酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(22.1mg，20％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.85-9.10(m,1H),8.65-8.80(m,1H),7.34-7.55(m,1H),6.12-6.30(m,1H),5.95-6.10(m,1H),4.76-4.95(m,1H),4.35-4.45(m,1H),3.95-4.12(m,1H),3.56-3.70(m,1H),3.30-3.45(m,1H),3.10-3.25(m,2H),2.80-3.05(m,3H),2.63-2.75(m,1H),2.30-2.40(m,1H),1.98-2.28(m,2H),1.60-1.90(m,2H),1.35-1.46(m,2H),0.95-1.10(m,3H),0.63-0.80(m,2H),0.20-0.55(m,2H)。LC-MS(ESI,m/z):522[M+H]⁺。

实施例25

化合物25

在210℃处搅拌三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-3,8-二烯(110g，832mmol，1.0当量)。将环戊二烯于37℃-43℃蒸馏。收集级分以提供作为无色液体的产物(46g，83％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.60-6.69(m,2H),4.43-6.56(m,2H),3.04-3.05(m,2H)。

添加到环戊二烯(42.0g，635mmol，1.0当量)和ional(0.130g，0.572mmol，0.0009当量)在二氯乙烷(62.8g，635mmol，1.0当量)中的搅拌混合物中。搅拌20min后，添加氢氧化钠(139g，3462mmol，5.45当量)和苄基三乙基氯化铵(1.30g，5.72mmol，0.009当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(50mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在130℃处搅拌。在60℃-65℃和0.7MPa下蒸馏螺[2.4]庚-4,6-二烯。收集所需的级分，得到呈无色液体的螺[2.4]庚-4,6-二烯(10g，14％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.47-6.69(m,2H),6.14-6.24(m,2H),1.71-1.72(m,4H)。

向1-叔丁基2-甲基(2R)-2,5-二氢吡咯-1,2-二甲酸酯(6.00g，26.4mmol，1.0当量)在二甲苯(6mL)中的搅拌混合物中添加螺[2.4]庚-4,6-二烯(4.87g，52.8mmol，1.0当量)。将混合物在140℃处搅拌2d，然后减压浓缩。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(30:70)进行色谱分离，得到粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色油状物的4'-叔丁基3'-甲基(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-8'-烯-3',4'-二甲酸酯(1.98g，23％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.03-6.36(m,2H),3.70-3.89(m,1H),3.55-3.69(m,3H),3.22-3.37(m,1H),2.70-3.10(m,3H),2.33-2.42(m,1H),2.22-2.29(m,1H),1.08-1.53(m,9H),0.22-0.48(m,4H)。LC-MS(ESI,m/z):220[M+H-Boc]⁺。

向4'-叔丁基3'-甲基(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸]-8'-烯-3',4'-二甲酸酯(1.00g，3.13mmol，1.0当量)在THF(10mL)中的搅拌混合物中添加氢氧化锂(300mg，12.5mmol，4.0当量，在10mL水中)。将混合物在室温处搅拌2h。用盐酸(2M)将pH调节至6。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-4'-(叔丁氧基羰基)-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸]-8'-烯-3'-甲酸(917mg，89％)。LC-MS(ESI,m/z):250[M+H-56]⁺。

在0℃处，向(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(500mg，2.92mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(1.33g，3.51mmol，1.2当量)在DMF(10mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(3.02g，23.4mmol，8.0当量)。在0℃处搅拌20min后，添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(500mg，2.92mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(1:11)进行色谱分离，得到呈黄色固体的(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-3'-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸]-8'-烯-4'-甲酸叔丁酯(758mg，55％)。LC-MS(ESI,m/z):359[M-H-Boc]⁺。

向(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-3'-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸]-8'-烯-4'-甲酸叔丁酯(750mg，1.63mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(3mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(2S)-2-[(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-8'-烯-3'-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(586mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):359[M+H]⁺。

在0℃处向(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸(371mg，1.63mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(746mg，1.96mmol，1.2当量)在DMF(10mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.69g，13.1mmol，8.0当量)。在0℃处搅拌20min后，添加(2S)-2-[(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-8'-烯-3'-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(586mg，1.63mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(15mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×15mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×15mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，然后得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(1:13)进行色谱分离，得到呈黄色固体的(2S)-2-[(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-4'-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-8'-烯-3'-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(667mg，70％)。LC-MS(ESI,m/z):568[M+H]⁺。

向(2S)-2-[(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-4'-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-8'-烯-3'-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(150mg，0.264mmol，1.0当量)在DCM(4mL)中的搅拌混合物中添加吡啶(73.2mg，0.924mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(99.9mg，0.475mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，然后得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱XBridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：10min内24％ B至46％ B，11min内46％ B至46％B，46％ B；波长：254nm；RT1(min)：10.45)纯化，得到呈白色固体的(1'R,2'S,3'S,6'R,7'S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4'-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,10'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-8'-烯-3'-甲酰胺(43.4mg，29％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.75-9.00(m,1H),8.60-8.74(m,1H),7.32-7.59(m,1H),6.00-6.30(m,2H),4.80-5.00(m,1H),4.45-4.70(m,1H),4.00-4.29(m,1H),3.60-3.98(m,1H),3.36-3.53(m,1H),3.10-3.30(m,2H),2.75-3.02(m,2H),2.40-2.48(m,1H),2.25-2.39(m,2H),2.00-2.24(m,2H),1.60-1.90(m,2H),0.83-1.05(m,9H),0.30-0.45(m,4H)。LC-MS(ESI,m/z):550[M+H]⁺。

实施例26

化合物26

在室温处，向(1S,3R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)环戊烷-1-甲酸(35.0g，109mmol，1.0当量)和碳酸钾(31.7g，229mmol，1.5当量)在DMF(250mL)中的混合物中加入苄基溴(31.3g，183mmol，1.2当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物通过硅藻土垫过滤并用乙酸乙酯(3×100mL)洗涤。用水(200mL)淬灭滤液。将混合物用乙酸乙酯(3×500mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(25％-30％)进行色谱分离，得到呈白色固体的(1S,3R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)环丙烷-1-甲酸苄酯(40.0g，85％)。LC-MS(ESI,m/z):320[M+H]⁺。

在室温处，向(1S,3R)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)环丙烷-1-甲酸苄酯(40.0g，125mmol，1.0当量)在1,4-二氧杂环己烷(200mL)中的混合物中添加氯化氢(400mL，4M的1,4-二氧杂环己烷溶液)。将混合物在室温处搅拌2h然后减压浓缩，得到呈白色固体的(1S,3R)-3-氨基环戊烷-1-甲酸苄酯盐酸盐(25.1g，粗产物)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ8.26(br,3H),7.31-7.42(m,5H),5.12(s,2H),3.42-3.53(m,1H),2.80-2.95(m,1H),2.23-2.33(m,1H),1.60-1.99(m,5H)。LC-MS(ESI,m/z):220[M+H]⁺。

向(1S,3R)-3-氨基环戊烷-1-甲酸苄酯盐酸盐(25.1g，97.8mmol，1.0当量)在DCM(400mL)中的混合物中添加二苯甲酮亚胺(19.5g，108mmol，1.1当量)。将混合物在rt下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤并用DCM(3×100mL)洗涤。将混合物减压浓缩，然后得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(11％-13％)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的(1S,3R)-3-((二苯基亚甲基)氨基)环戊烷-1-甲酸苄酯(33.0g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):384[M+H]⁺。

在-78℃和氮气下，向(1S,3R)-3-((二苯基亚甲基)氨基)环戊烷-1-甲酸苄酯(33.0g，86.2mmol，1.0当量)在THF(400mL)中的混合物中滴加二异丙基氨基锂(56.1mL，112mmol，1.3当量，2M的THF溶液)。在-78℃处搅拌1h后，添加2-溴乙酸甲酯(26.4g，172mmol，2.5当量)。将混合物在-78℃处搅拌1h。将混合物升温至0℃并在0℃和氮气下搅拌2h。用水(200mL)淬灭反应体系。将混合物用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(12％-15％)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的(1S,3R)-3-((二苯基亚甲基)氨基)-1-(2-甲氧基-2-氧代乙基)环戊烷-1-甲酸苄酯(10.7g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):456[M+H]⁺。

向(1S,3R)-3-((二苯基亚甲基)氨基)-1-(2-甲氧基-2-氧代乙基)环戊烷-1-甲酸苄酯(10.7g，23.5mmol，1.0当量)在MeOH(150mL)中的混合物中加入10％活性碳钯(3.5g)。将混合物在室温处在氢气下搅拌过夜，然后过滤。将滤饼用MeOH(3×150mL)洗涤。减压浓缩滤液，得到呈黄色固体的(1S,3R)-3-氨基-1-(2-甲氧基-2-氧代乙基)环戊烷-1-甲酸(4.5g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):202[M+H]⁺。

向(1S,3R)-3-氨基-1-(2-甲氧基-2-氧代乙基)环戊烷-1-甲酸(4.5g，22.4mmol，1.0当量)在DCM(50mL)中的混合物中加入亚硫酰氯(4.26g，35.8mmol，1.6当量)。将混合物在40℃处搅拌3h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用DCM(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(70％-85％)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的2-((1R,4S)-3-氧代-2-氮杂双环[2.2.1]庚-4-基)乙酸甲酯(400mg，9％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.99(br,1H),3.89-3.90(m,1H),3.71(s,3H),2.86-2.91(m,1H),2.68-2.72(m,1H),2.05-2.09(m,1H),1.92-1.99(m,1H),1.82-1.88(m,1H),1.65-1.73(m,1H),1.60-1.63(m,1H),1.51-1.59(m,1H)。LC-MS(ESI,m/z):184[M+H]⁺。

在0℃处向2-((1R,4S)-3-氧代-2-氮杂双环[2.2.1]庚-4-基)乙酸甲酯(400mg，2.18mmol，1.0当量)在THF(5mL)中的混合物中添加硼氢化锂(4.4mL，8.73mmol，4.0当量，2MTHF溶液)。将混合物在室温处搅拌4h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(6×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(2％-4％)进行色谱分离，得到呈浅黄色油状物的(1R,4S)-4-(2-羟乙基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚-3-酮(240mg，70％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.13(br,1H),3.92(s,1H),3.75-3.86(m,2H),3.11(br,1H),2.06-2.14(m,1H),1.92-2.03(m,3H),1.65-1.77(m,3H),1.41-1.44(m,1H)。LC-MS(ESI,m/z):156[M+H]⁺。

向(1R,4S)-4-(2-羟乙基)-2-氮杂双环[2.2.1]庚-3-酮(120mg，0.773mmol，1.0当量)在DMSO(2mL)中的混合物中加入2-碘酰基苯甲酸(650mg，2.31mmol，3.0当量)。将混合物在rt下搅拌过夜。用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)淬灭反应。将混合物用乙酸乙酯(5×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色油状物的2-((1R,4S)-3-氧代-2-氮杂双环[2.2.1]庚-4-基)乙醛(80.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):154[M+H]⁺。

向2-((1R,4S)-3-氧代-2-氮杂双环[2.2.1]庚-4-基)乙醛(80.0mg，0.522mmol，1.0当量)在CH₃OH(2mL)中的溶液中加入氯化铵(83.8mg，1.57mmol，3.0当量)。在室温处搅拌2h后，添加氰化钾(44.1mg，0.679mmol，1.3当量)。将混合物在室温处搅拌2d。将混合物通过硅藻土垫过滤并用CH₃OH(3×20mL)和DCM(3×20mL)洗涤。减压浓缩滤液，得到呈黄色油状物的2-氨基-3-((1R,4R)-3-氧代-2-氮杂双环[2.2.1]庚-4-基)丙腈(80.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):180[M+H]⁺。

在0℃处，向2-氨基-3-((1R,4R)-3-氧代-2-氮杂双环[2.2.1]庚-4-基)丙腈(80.0mg，0.446mmol，1.0当量)、(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(191mg，0.491mmol，1.1当量)和N,N,N,N-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(150mg，0.535mmol，1.2当量)在乙腈(3mL)中的混合物中添加1-甲基-1H-咪唑(367mg，4.46mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(78％-85％)进行色谱分离，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱XBridge ShieldRP18 OBD柱，19*250mm，10μm；流动相A：水(10mmol/L NH₄HCO₃)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：10min内35％ B至55％ B，55％ B；波长：220nm；RT1(min)：8.48；)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-(1-氰基-2-((1R,4S)-3-氧代-2-氮杂双环[2.2.1]庚-4-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(17.4mg，7％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.53-8.94(m,2H),7.47(s,1H),5.93-6.16(m,2H),4.71-4.88(m,1H),4.46(s,1H),3.99-4.15(m,1H),3.66-3.77(m,1H),3.56-3.67(m,1H),3.40-3.44(m,1H),2.97-3.02(m,1H),2.78-2.95(m,2H),2.63-2.75(m,1H),2.05-2.29(m,2H),1.60-1.85(m,3H),1.21-1.51(m,5H),0.85-0.96(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):550[M+H]⁺。

实施例27

化合物27

向(S)-2,4,6-三甲基苯亚磺酰胺(400mg，2.18mmol，1.0当量)和硫酸镁(1.31g，10.9mmol，5.0当量)在DCM(12mL)中的混合物中加入吡咯烷(16.0mg，0.218mmol，0.1当量)和乙醛酸乙酯(1.34g，6.55mmol，3.0当量，50％甲苯溶液)。将混合物在室温处搅拌过夜，然后过滤。减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的2-{[(S)-2,4,6-三甲基苯亚磺酰基]亚氨基}乙酸乙酯(584mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):268[M+H]⁺。

向双环[1.1.1]戊烷-1-甲酸(300mg，2.68mmol，1.0当量)、4,5,6,7-四氯-2-羟基异吲哚-1,3-二酮(805mg，2.68mmol，1.0当量)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(33.0mg，0.268mmol，0.1当量)在DCM(20mL)中的混合物中加入N,N'-二异丙基碳二亚胺(371mg，2.94mmol，1.1当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物在硅胶柱上用EtOAc:PE(15:85)进行色谱分离，得到呈浅黄色固体的4,5,6,7-四氯-1,3-氧代异吲哚-2-基双环[1.1.1]戊烷-1-甲酸酯(540mg，47％)。¹H NMR(300MHz,DMSO-d₆)δ2.60(s,1H),2.30(m,6H)。

向4,5,6,7-四氯-1,3-氧代异吲哚-2-基双环[1.1.1]戊烷-1-甲酸酯(540mg，1.38mmol，1.0当量)、2-{[(S)-2,4,6-三甲基苯亚磺酰基]亚氨基}乙酸乙酯(585mg，2.19mmol，1.6当量)和四水合乙酸镍(II)(85.0mg，0.342mmol，0.25当量)在1-甲基-2-吡咯烷酮(10mL)中的混合物中加入锌(268mg，4.10mmol，3.0当量)。将混合物在室温和氮气下搅拌过夜。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。粗产物通过TLC(流动相：EtOAc:PE＝1:5；Rf＝0.5；检测：UV)纯化，得到呈浅黄色油状物的(2S)-2-{双环[1.1.1]戊烷-1-基}-2-{[(S)-2,4,6-三甲基苯亚磺酰基]氨基}乙酸乙酯(200mg，35％)。LC-MS(ESI,m/z):336[M+H]⁺。

向(2S)-2-{双环[1.1.1]戊烷-1-基}-2-{[(S)-2,4,6-三甲基苯亚磺酰基]氨基}乙酸乙酯(200mg，0.596mmol，1当量)在MeOH(2mL)中的混合物中添加氯化氢(0.60mL，2.38mmol，4.0当量，4M EtOH溶液)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈黄色油状物的(2S)-2-氨基-2-{双环[1.1.1]戊烷-1-基}乙酸乙酯盐酸盐(120mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):170[M+H]⁺。

向(2S)-2-氨基-2-{双环[1.1.1]戊烷-1-基}乙酸乙酯盐酸盐(120mg，0.583mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的混合物中添加三乙胺(295mg，2.91mmol，5.0当量)和二碳酸二叔丁酯(153mg，0.700mmol，1.2当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩以去除DCM。将残余物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色油状物的(2S)-2-{双环[1.1.1]戊烷-1-基}-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙酸乙酯(120mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z)：214[M-56+H]⁺。

向(2S)-2-{双环[1.1.1]戊烷-1-基}-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]乙酸乙酯(120mg，0.446mmol，1.0当量)在THF(1.5mL):水(1.5mL)中的混合物中添加氢氧化锂(54.0mg，2.23mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩以去除THF。用盐酸(1M)将pH调节至6。将混合物用EtOAc(3×3mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×2mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色油状物的(S)-双环[1.1.1]戊烷-1-基[(叔丁氧基羰基)氨基]乙酸(100mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z)：186[M-56+H]⁺。

在室温处，将(S)-双环[1.1.1]戊-1-基[(叔丁氧基羰基)氨基]乙酸(100mg，0.414mmol，1.0当量)在氯化氢(2mL，2M Et₂O溶液)中的混合物搅拌1h。将混合物减压浓缩，得到呈灰白色固体的(S)-氨基(双环[1.1.1]戊-1-基)乙酸盐酸盐(73mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):142[M+H]⁺。

向(S)-氨基(双环[1.1.1]戊-1-基)乙酸盐酸盐(73mg，0.411mmol，1.0当量)在MeOH(2mL)中的混合物中加入三乙胺(166mg，1.64mmol，4.0当量)和2,2,2-三氟乙酸乙酯(117mg，0.822mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，然后减压浓缩以去除MeOH。将混合物用水(5mL)稀释，并用盐酸(1M)将pH调节至6。将混合物用EtOAc(3×5mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色油状物的(S)-双环[1.1.1]戊-1-基(2,2,2-三氟乙酰胺基)乙酸(40mg，37％)。¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δ6.65-6.87(m,1H),4.70-4.77(m,1H),2.61(s,1H),1.79-1.94(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z):236[M-H]^-。

向(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(62.0mg，0.168mmol，1.0当量)、(S)-双环[1.1.1]戊-1-基(2,2,2-三氟乙酰胺基)乙酸(40.0mg，0.168mmol，1.0当量)和N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(61.0mg，0.218mmol，1.3当量)在MeCN(2mL)中的混合物中加入N-甲基咪唑(138mg，1.68mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h，然后通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-{双环[1.1.1]戊-1-基}-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)乙酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(60.0mg，54％)。LC-MS(ESI,m/z):552[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-{双环[1.1.1]戊-1-基}-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)乙酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(60.0mg，0.109mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的混合物中添加吡啶(35.0mg，0.436mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(41.0mg，0.196mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌1h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×5mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19×250mm，10μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内38％ B至68％ B，68％ B；波长：220nm；RT：5.28min)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-{双环[1.1.1]戊-1-基}-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)乙酰基]-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(6.2mg，10％)。LC-MS(ESI,m/z):534[M+H]⁺。

实施例28

化合物28

在0℃处，向(S)-2-((4-甲氧基苯基)氨基)-3,3-二甲基-4-氧代丁酸甲酯(5.17g，18.6mmol，1.1当量)在甲苯中的溶液中加入双(三甲基甲硅烷基)氨基钠(3.42g，18.6mmol，1.1当量)。将混合物在室温处搅拌30min。冷却至0℃后，添加(2S)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]-3,3-二甲基-4-氧代丁酸甲酯(4.50g，16.9mmol，1.0当量)在甲苯(50mL)中的溶液。将混合物在0℃处搅拌30min，然后倒入冰水(50mL)中。将混合物用乙酸乙酯(3×80mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(6:94)进行色谱分离，得到粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈棕色油状物的(S)-2-((4-甲氧基苯基)氨基)-3,3-二甲基戊-4-烯酸甲酯(600mg，粗产物)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.26 -7.33(m,4H),5.64-6.16(m,1H),4.76-5.27(m,2H),3.72-3.87(m,1H),3.37-3.71(m,6H),0.47-1.43(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z):264[M+H]⁺。

在室温处，向(S)-2-((4-甲氧基苯基)氨基)-3,3-二甲基戊-4-烯酸甲酯(0.460g，1.75mmol，1.0当量)在CH₃CN(2.4mL)和H₂O(0.8mL)中的搅拌混合物中添加硝酸铈铵(4.80g，8.73mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，添加THF(2.5mL)、三甲胺(碱化至pH＝8)、二碳酸二叔丁酯(2.28g，10.4mmol，6.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(10:90)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基戊-4-烯酸甲酯(195mg，43％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.75-7.25(m,1H),5.52-6.16(m,1H),4.68-5.20(m,2H),3.80-4.10(m,1H),3.43-3.70(m,3H),1.13-1.73(m,9H),0.64-1.10(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z)：202[M-56+H]⁺。

在室温处，向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基戊-4-烯酸甲酯(195mg,0.758mmol，1.0当量)在THF(3mL)和H₂O(1mL)中的搅拌混合物中添加氢氧化锂(90.7mg，3.79mmol，5.0当量)。将混合物在60℃处搅拌2h，然后用盐酸(1M)酸化至pH＝3。将混合物用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈浅橙色固体的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基戊-4-烯酸(160mg，86％，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z)：188[M-56+H]⁺。

在室温处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基戊-4-烯酸(160mg，0.658mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(1mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕黄色油状物的(2S)-2-氨基-3,3-二甲基戊-4-烯酸(200.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):144[M+H]⁺。

向(2S)-2-氨基-3,3-二甲基戊-4-烯酸(200mg，1.39mmol，1.0当量)和三乙胺(565mg，5.58mmol，4.0当量)在MeOH(3mL)中的搅拌混合物中加入2,2,2-三氟乙酸乙酯(396mg，2.79mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后用盐酸(1M)酸化至pH＝4。将混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机层减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊-4-烯酸(100mg，29％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.19-9.65(m,1H),5.76-6.11(m,1H),4.69-5.29(m,2H),4.13-4.51(m,1H),1.08-1.26(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z):240[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊-4-烯酸(107mg，0.451mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(205mg，0.541mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(349mg，2.70mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(150mg，0.451mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊-4-烯酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(100mg，40％)。LC-MS(ESI,m/z):554[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊-4-烯酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(100mg，0.181mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中添加吡啶(57.1mg，0.724mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(68.2mg，0.326mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：10min内30％ B至47％ B，47％ B；波长：254nm；RT1(min)：5.97)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)戊-4-烯酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(9.3mg，10％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.40-9.00(m,2H),7.30-7.62(m,1H),5.75-6.30(m,3H),4.80-5.10(m,3H),4.45-4.75(m,1H),3.85-4.40(m,1H),3.60-3.80(m,1H),3.30-3.58(m,1H),3.10-3.28(m,3H),2.55-3.00(m,3H),2.00-2.45(m,3H),1.60-1.95(m,2H),1.15-1.50(m,2H),0.80-1.10(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z):536[M+H]⁺。

实施例29

化合物29

向1-(叔丁基)5-甲基(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-亚甲基戊二酸酯(2g，6.07mmol，1.0当量)在二氧杂环己烷(30mL)中的溶液中加入2-氨基苯基硼酸(1.66g，12.1mmol，2.0当量)、氯(1,5-环辛二烯)铑(I)二聚体(89.8mg，0.18mmol，0.03当量)、氢氧化钾溶液(0.6mL，1.52mmol，0.25当量)，在N₂下于115℃搅拌2h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用EA(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用EA:PE(1:4)进行色谱分离，得到呈白色固体的(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙酸叔丁酯(1.5g，57％)。¹HNMR(300MHz,DMSO-d₆)δ10.13(s,1H),7.01-7.24(m,3H),6.82-6.92(m,2H),3.86-4.12(m,1H),2.86-2.95(m,1H),2.59-2.71(m,1H),2.38-2.49(m,1H),2.07-2.18(m,1H),1.54-1.69(m,1H),1.35-1.44(m,18H)。LC-MS(ESI,m/z):391[M+H]⁺。

向(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙酸叔丁酯(1.3g，3.33mmol，1.0当量)在二氧杂环己烷(15mL)中的溶液中添加盐酸(15mL，9mol/L二氧杂环己烷溶液)。将混合物在室温处搅拌过夜，然后减压浓缩，得到呈白色固体的(2S)-2-氨基-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙酸(700mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):235[M+H]⁺。

向(2S)-2-氨基-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙酸(700mg，2.99mmol，1.0当量)在MeOH(10mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(717mg，3.29mmol，1.1当量)和三乙胺(907mg，8.96mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h，然后减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙酸(800mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):335[M+H]⁺。

向(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙酸(800mg，2.39mmol，1.0当量)在DMF(10mL)中的溶液中加入N,N,N,N-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(4.03g，14.4mmol，6.0当量)、NMI(4.91g，59.8mmol，25.0当量)、NH₃(120mL，0.4mol/L二氧杂环己烷溶液，47.8mmol，20.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，然后在C18柱上用MeCN:H₂O(1:4)进行色谱分离，得到呈棕黄色固体的((2S)-1-氨基-1-氧代-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(600mg，68％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.12-10.14(m,1H),7.12-7.24(m,3H),6.84-7.01(m,4H),4.01-4.11(m,1H),2.88-3.18(m,1H),2.63-2.72(m,1H),2.41-2.45(m,1H),2.05-2.18(m,1H),1.49-1.67(m,1H),1.36-1.48(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):334[M+H]⁺。

将((2S)-1-氨基-1-氧代-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.450mmol，1当量)在盐酸(3mL，4M的二氧杂环己烷溶液)中的溶液在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-氨基-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙酰胺(100mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):234[M+H]⁺。

向(2S)-2-氨基-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙酰胺(100mg，0.43mmol，1.0当量)在DMF(3mL)中的溶液中添加(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(183mg，0.47mmol，1.1当量)、N,N,N,N-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(156mg，0.56mmol，1.3当量)和NMI(176mg，2.15mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后在C18柱上用水:MeCN(3:1)进行色谱分离，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-1-氨基-1-氧代-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(200mg，70％)。LC-MS(ESI,m/z):604[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-1-氨基-1-氧代-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(90mg，0.15mmol，1.0当量)在DCM(30mL)中的溶液中添加吡啶(71mg，0.89mmol，6.0当量)和TFAA(94mg，0.45mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(3mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×5mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内45％ B至75％ B，75％B；波长：254nm；RT1(min)：5.88)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((1S)-1-氰基-2-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(24.7mg，28％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,80℃)δ9.86-10.07(m,1H),8.29-8.84(m,2H),6.81-7.24(m,4H),5.98-6.18(m,2H),4.90-5.13(m,1H),4.39-4.52(m,1H),3.98-4.18(m,1H),3.17-3.68(m,2H),3.01-3.03(m,1H),2.88-2.98(m,3H),2.68-2.81(m,2H),2.50-2.52(m,1H),2.29-2.43(m,1H),1.82-1.97(m,1H),1.38-1.47(m,2H),0.51-1.04(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):586[M+H]⁺。

实施例30

化合物30

在0℃处，向1-氟环丙烷-1-甲酸(25.9mg，0.249mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(113mg，0.299mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(193mg，1.49mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(120mg，0.249mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-1-氟环丙烷-1-甲酰胺(70.0mg，52％)。LC-MS(ESI,m/z):532[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-1-氟环丙烷-1-甲酰胺(70.0mg，0.132mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中加入吡啶(41.7mg，0.528mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(49.8mg，0.238mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌3h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内38％ B至68％ B，68％ B；波长：254nm；RT1(min)：4.48)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-2-[(1-氟环丙基)甲酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(29.2mg，42％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.60-8.90(m,1H),7.30-7.60(m,1H),6.90-7.20(m,1H),5.90-6.40(m,2H),4.80-5.00(m,1H),4.40-4.65(m,1H),4.00-4.25(m,1H),3.55-3.80(m,1H),3.35-3.55(m,1H),3.10-3.25(m,2H),2.90-3.00(m,2H),3.70-2.90(m,1H),2.30-2.45(m,1H),2.05-2.30(m,2H),1.60-1.95(m,2H),1.30-1.60(m,3H),1.00-1.30(m,4H),0.70-1.00(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):514[M+H]⁺。

实施例31

化合物31

向50mL圆底烧瓶中加入(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-1-氨基-1-氧代-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(100mg，0.17mmol，1.0当量)、乙酸乙酯(5mL)、10％活性碳钯(50mg)。将烧瓶的内容物置于氢气气氛(3atm)下。将混合物在室温处搅拌2h。滤出固体。将有机层减压浓缩，得到呈白色固体的(1S,3aR,4R,7S,7aS)-N-((2S)-1-氨基-1-氧代-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(50mg，45％)。LC-MS(ESI,m/z):606[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4R,7S,7aS)-N-((2S)-1-氨基-1-氧代-3-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(45mg，0.07mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的溶液中加入TFAA(31mg，0.15mmol，2.0当量)和吡啶(24mg，0.3mmol，4.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(3mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×5mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内48％ B至78％ B，78％B；波长：254nm；RT1(min)：5.67)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4R,7S,7aS)-N-((1S)-1-氰基-2-(2-氧代-1,2,3,4-四氢喹啉-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(24.1mg，55％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆,80℃)δ9.96-10.00(m,1H),8.83-9.01(m,1H),8.64-8.66(m,1H),7.10-7.16(m,2H),6.84-6.90(m,2H),4.93-5.08(m,1H),4.61-4.72(m,1H),4.46-4.56(m,1H),3.75-3.81(m,1H),3.58-3.64(m,1H),2.93-3.07(m,1H),2.51-2.80(m,3H),2.30-2.48(m,3H),2.10-2.22(m,1H),1.82-1.94(m,1H),1.37-1.55(m,2H),1.19-1.34(m,3H),1.03-1.17(m,1H),0.85-0.99(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):588[M+H]⁺。

实施例32

化合物32

向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(200mg，0.515mmol，1.0当量)在EtOAc(5mL)中的混合物中加入10％活性碳钯(80mg)。将混合物在室温处在氘下搅拌3h。过滤混合物。减压浓缩滤液，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4R,5S,6R,7S,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲-5,6-d₂酸(190mg，91％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.73(br,1H),9.14-9.61(m,1H),4.69-4.84(m,1H),4.41-4.59(m,1H),3.76-3.88(m,1H),3.43-3.67(m,1H),2.53-2.82(m,2H),2.26-2.41(m,1H),2.13-2.24(m,1H),1.35-1.54(m,2H),1.15-1.31(m,2H),0.93-1.06(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):393[M+H]⁺。

在0℃处，向(1S,3aR,4R,5S,6R,7S,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲-5,6-d₂酸(144mg,0.366mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(167mg，0.439mmol，1.2当量)在DMF(3mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(284mg，2.20mmol，6.0当量)。在0℃处搅拌15min后，添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(76.0mg，0.366mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1S,3aR,4R,5S,6R,7S,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-5,6-d₂-1-甲酰胺(160mg，75％)。LC-MS(ESI,m/z):546[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4R,5S,6R,7S,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-5,6-d₂-1-甲酰胺(160mg，0.293mmol，1.0当量)在DCM(5mL)中的混合物中加入吡啶(139mg，1.76mmol，6.0当量)和三氟乙酸酐(136mg，0.645mmol，2.2当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用DCM(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，然后得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge制备型Phenyl OBD柱，19×250mm，5μm；流动相A：水(0.05％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内42％ B至72％ B，72％ B；波长：254nm；RT：5min)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4R,5S,6R,7S,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-5,6-d²-1-甲酰胺(45.4mg，28％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.85-9.10(m,1H),8.56-8.80(m,1H),7.32-7.60(m,1H),4.80-4.95(m,1H),4.60-4.75(m,1H),4.45-4.58(m,1H),3.75-3.88(m,1H),3.55-3.73(m,1H),3.10-3.22(m,2H),2.50-2.70(m,1H),2.25-2.48(m,3H),2.06-2.24(m,3H),1.60-1.90(m,2H),1.35-1.58(m,2H),1.20-1.34(m,1H),1.05-1.19(m,1H),0.78-1.04(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):528[M+H]⁺。

实施例33

化合物33

在0℃处，向(R)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸(49.1mg，0.403mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(183mg，0.484mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(312mg，2.41mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(194mg，0.403mmol，1.0当量)，在室温处搅拌2h。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-((R)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(160mg，72％)。LC-MS(ESI,m/z):550[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-((R)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(160mg，0.291mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中添加吡啶(92.1mg，1.16mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(110mg，0.524mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge制备型OBD C18柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内38％ B至68％ B，68％ B；波长：254nm；RT1(min)：4.95)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-2-((R)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(47.0mg，30％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.55-8.75(m,1H),8.05-8.30(m,1H),7.30-7.60(m,1H),5.80-6.30(m,2H),4.80-5.00(m,1H),4.40-4.60(m,1H),3.90-4.15(m,1H),3.45-3.75(m,2H),3.05-3.30(m,2H),2.95-3.00(m,1H),2.85-2.95(m,3H),2.60-2.85(m,1H),2.30-2.50(m,1H),2.05-2.30(m,2H),1.80-2.00(m,1H),1.60-1.80(m,3H),1.30-1.50(m,2H),0.80-1.00(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):532[M+H]⁺。

实施例34

化合物34

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(220mg，0.403mmol，1.0当量)在DCM(6mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(2mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(179mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):379[M+H]⁺。

在0℃处，向螺[2.2]戊烷-1-甲酸(47.3mg，0.422mmol，1.05当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(183mg，0.482mmol，1.2当量)在DMF(5mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(415mg，3.21mmol，8.0当量)。在0℃处搅拌20min后，添加(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(179mg，0.402mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]螺[2.2]戊烷-1-甲酰胺(145mg，65％)。LC-MS(ESI,m/z):540[M+H]⁺

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]螺[2.2]戊烷-1-甲酰胺(120mg，0.222mmol，1.0当量)在DCM(4mL)中的搅拌混合物中加入吡啶(66.8mg，0.844mmol，3.8当量)和三氟乙酸酐(38.8mg，0.400mmol，1.8当量)。。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，然后得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge制备型OBD C18柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内38％ B至68％ B，68％ B；波长：254nm；RT1(min)：4.78)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-{螺[2.2]戊烷-1-基甲酰胺基}丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(34.8mg，29％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.50-8.83(m,1H),7.28-7.70(m,2H),5.84-6.25(m,2H),4.65-5.00(m,1H),4.25-4.64(m,1H),3.81-4.24(m,1H),3.40-3.80(m,2H),3.10-3.39(m,2H),2.97-3.05(m,1H),2.80-2.96(m,2H),2.62-2.79(m,1H),2.44-2.23(m,1H),2.00-2.43(m,3H),1.61-1.90(m,2H),1.34-1.50(m,2H),1.00-1.33(m,2H),0.70-0.99(m,12H),0.47-0.69(m,1H)。LC-MS(ESI,m/z):522[M+H]⁺。

实施例35

化合物35

在0℃处，向[1,1'-二(环丙烷)]-1-甲酸(47.0mg，0.367mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(168mg，0.440mmol，1.2当量)在DMF(3mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(285mg，2.20mmol，6.0当量)。在0℃处搅拌15min后，添加(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(177mg，0.367mmol，1.0当量)。将所得物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈灰白色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-[1,1'-双(环丙烷)]-1-甲酰胺(180mg，81％)。LC-MS(ESI,m/z):554[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-[1,1'-双(环丙烷)]-1-甲酰胺(180mg，0.325mmol，1.0当量)在DCM(5mL)中的混合物中加入吡啶(103mg，1.30mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(123mg，0.585mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用DCM(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge制备型OBD C18柱，19×250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内40％ B至70％ B，70％ B；波长：254nm；RT：5.32min)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-{[1,1'-双(环丙烷)]-1-基甲酰胺基}-3,3-二甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(62.4mg，35％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.60-8.85(m,1H),7.32-7.60(m,1H),6.84-7.13(m,1H),5.90-6.20(m,2H),4.60-4.98(m,1H),4.40-4.53(m,1H),3.96-4.20(m,1H),3.55-3.77(m,1H),3.38-3.54(m,1H),3.10-3.25(m,2H),3.00-3.05(m,1H),2.78-2.99(m,2H),2.60-2.77(m,1H),2.30-2.42(m,1H),2.05-2.29(m,2H),1.63-1.89(m,2H),1.30-1.45(m,2H),1.15-1.29(m,1H),0.85-1.10(m,10H),0.70-0.84(m,1H),0.32-0.65(m,4H),0.05-0.20(m,2H)。LC-MS(ESI,m/z):536[M+H]⁺。

实施例36

化合物36

向氧杂环丁烷-3-甲酸(40.7mg，0.399mmol，1.1当量)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(165mg，0.436mmol，1.2当量)在DMF(4mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(281mg，2.17mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌10min，添加(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(175mg，0.363mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈灰白色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氧杂环丁烷-3-甲酰胺(170mg，83％)。LC-MS(ESI,m/z):530[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氧杂环丁烷-3-甲酰胺(170mg，0.321mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的搅拌混合物中加入吡啶(101mg，1.28mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(155mg，0.738mmol，2.3当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC用以下条件纯化(柱：XBridge制备型Phenyl OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内30％ B至60％B，60％ B；波长：254nm；RT1(min)：6)，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(氧杂环丁烷-3-基甲酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(54.2mg，32％)。¹HNMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.57-8.65(m,1H),7.58-7.65(m,1H),7.30-7.55(m,1H),6.09-6.14(m,1H),5.90-5.96(m,1H),4.83-4.92(m,1H),4.53-4.75(m,3H),4.44-4.52(m,2H),3.92-4.20(m,1H),3.75-3.92(m,1H),3.58-3.67(m,1H),3.50-3.58(m,1H),3.07-3.21(m,2H),2.97-3.02(m,1H),2.83-2.97(m,2H),2.64-2.83(m,1H),2.26-2.40(m,1H),2.04-2.19(m,2H),1.60-1.81(m,2H),1.33-1.42(m,2H),0.80-0.90(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):512[M+H]⁺。

实施例37

化合物37

在0℃处向2-氧代-2-(2-氧代吡咯烷-1-基)乙基膦酸二乙酯(Gansauer等人，Ang.Chem.Int.Ed.(2009)48(47)，8882-8885，S8882/1-S8882/32；5.29g，20.1mmol，1.1当量)在THF(50mL)中的混合物中添加氢化钠(804mg，20.1mmol，1.1当量，60％矿物油溶液)。在0℃处搅拌20min后，添加戊-4-炔醛(1.50g，18.3mmol，1.0当量)在DCM(5mL)中的混合物。将混合物在室温处搅拌过夜。用饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。用DCM(60mL)稀释粗产物，并制成具有100-200硅胶筛目的浆液(3g)。去除DCM后，将浆液加载到柱上。将样品通过柱色谱法(柱尺寸5×24cm，柱体积：300mL，硅胶尺寸(100-200目)，量：120g)纯化，并用EtOAc/PE(0％-50％，30min内)洗脱。收集的级分：选择33％-35％ EtOAc/PE级分作为纯级分。将这些级分合并并减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的1-[(2E)-庚-2-烯-6-炔酰基]吡咯烷-2-酮(2.00g，55％)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃-d)δ7.28-7.37(m,1H),7.06-7.19(m,1H),3.80-3.91(m,2H),2.57-2.67(m,2H),2.45-2.56(m,2H),2.32-2.42(m,2H),1.95-2.14(m,3H)。LC-MS(ESI,m/z):192[M+H]⁺。

向三甲基甲硅烷基叠氮化物(6.02g，52.3mmol，5.0当量)在DCM(50mL)中的混合物中添加乙酸(3.14g，52.3mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌20min，添加1-[(2E)-庚-2-烯-6-炔酰基]吡咯烷-2-酮(2.00g，10.5mmol，1.0当量)和1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯(318mg，2.09mmol，0.2当量)在DCM(50mL)中的溶液。将混合物在室温处搅拌过夜。用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。用DCM(60mL)稀释粗产物，并制成具有100-200硅胶筛目的浆液(5g)。去除DCM后，将浆液加载到柱上。将样品通过柱色谱法(柱尺寸5×24cm，柱体积：300mL，硅胶尺寸(100-200目)，量：120g)纯化，并用EtOAc/PE(0％-50％，30min内)洗脱。收集的级分：选择33％-35％ EtOAc/PE级分作为纯级分。将这些级分合并并减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的1-(3-叠氮基庚-6-炔酰基)吡咯烷-2-酮(2.4g，96％)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃-d)δ4.05-4.22(m,1H),3.78-3.96(m,2H),3.15-3.28(m,1H),2.98-3.10(m,1H),2.55-2.66(m,2H),2.31-2.46(m,2H),1.93-2.17(m,3H),1.64-1.85(m,2H)。LC-MS(ESI,m/z):235[M+H]⁺。

将1-(3-叠氮基庚-6-炔酰基)吡咯烷-2-酮(2.40g，10.2mmol，1.0CDCl₃)在甲苯(20mL)中的溶液在130℃处搅拌过夜。将混合物减压浓缩，得到粗产物。用DCM(50mL)稀释粗产物，并制成具有100-200硅胶筛目的浆液(5g)。去除DCM后，将浆液加载到柱上。将样品通过柱色谱法(柱尺寸5×24cm，柱体积：300mL，硅胶尺寸(100-200目)，量：120g)纯化，并用MeOH:DCM(0％-5％，20min内)洗脱。收集的级分：选择2％-3％MeOH:DCM级分作为纯级分。将这些级分合并并减压浓缩，得到呈棕色半固体的1-(2-{4H,5H,6H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑-6-基}乙酰基)吡咯烷-2-酮(2.20g，73％)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃-d)δ7.38(s,1H),5.00-5.11(m,1H),3.78-3.91(m,3H),3.28-3.40(m,1H),3.04-3.17(m,1H),2.87-2.99(m,2H),2.57-2.64(m,2H),2.44-2.55(m,1H),2.02-2.13(m,2H)。LC-MS(ESI,m/z):235[M+H]⁺。

向1-(2-{4H,5H,6H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑-6-基}乙酰基)吡咯烷-2-酮(1.00g，4.27mmol，1.0当量)在THF(5mL):水(5mL)中的混合物中添加氢氧化锂(307mg，12.8mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩以去除THF，并用HCl(2M)调节至pH＝6。将混合物用EtOAc(5×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色半固体的4H,5H,6H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑-6-基乙酸(600mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):168[M+H]⁺。

在室温处，向4H,5H,6H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑-6-基乙酸(600mg，3.59mmol，1.0当量)在DCM(15mL)中的混合物中添加N,O-二甲基羟胺盐酸盐(350mg，3.59mmol，1.0当量)、1-羟基苯并三唑(485mg，3.59mmol，1.0当量)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(757mg，3.95mmol，1.1当量)和N-甲基吗啉(1.09g，10.77mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(30mL)淬灭。混合物用DCM(4×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。用DCM(30mL)稀释粗产物，并制成具有100-200硅胶筛目的浆液(3g)。去除DCM后，将浆液加载到柱上。将样品通过柱色谱法(柱尺寸5×24cm，柱体积：300mL，硅胶尺寸(100-200目)，量：120g)纯化，并用MeOH:DCM(0％-10％，20min内)洗脱。收集的级分：选择3％ MeOH:DCM级分作为纯级分。将这些级分合并并减压浓缩，得到呈黄色油状物的N-甲氧基-N-甲基-2-{4H,5H,6H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑-6-基}乙酰胺(340mg，40％)。¹H NMR(300MHz,CDCl₃-d)δ7.43(s,1H),4.91-5.05(m,1H),3.70(s,3H),3.46-3.56(m,1H),3.22(s,3H),3.08-3.20(m,1H),2.80-2.98(m,3H),2.45-2.59(m,1H)。LC-MS(ESI,m/z):211[M+H]⁺。

在氮气和0℃下向N-甲氧基-N-甲基-2-{4H,5H,6H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑-6-基}乙酰胺(300mg，1.43mmol，1.0当量)在THF(6mL)中的混合物中滴加氢化铝锂(0.68mL，1.71mmol，1.2当量，2.5M THF溶液)。将混合物在0℃处搅拌2h。用饱和氯化铵水溶液(20mL)淬灭反应。将混合物用氯仿:异丙醇(5/1，4×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色油状物的2-{4H,5H,6H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑-6-基}乙醛(216mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):152[M+H]⁺。

向2-{4H,5H,6H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑-6-基}乙醛(216mg，1.43mmol，1.0当量)在MeOH(5mL)中的混合物中加入氯化铵(153mg，2.86mmol，2.0当量)。在室温处搅拌2h后，添加氰化钾(140mg，2.14mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌2天，然后过滤。将滤液减压浓缩以去除MeOH。将残余物用DCM(5mL)稀释并过滤。减压浓缩滤液，得到呈黄色油状物的2-氨基-3-{4H,5H,6H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑-6-基}丙腈(190mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):178[M+H]⁺。

向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(416mg，1.07mmol，1.0当量)、2-氨基-3-{4H,5H,6H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑-6-基}丙腈(190mg，1.07mmol，1.0当量)和N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(391mg，1.39mmol，1.3当量)在乙腈(10mL)中的混合物中加入N-甲基咪唑(880mg，10.7mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，然后去除EtOAc。将残余物在硅胶柱上用MeOH:DCM(8/92)进行色谱分离，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Xselect CSH C18 OBD柱，30×150mm，5μm，n；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：8min内25％ B至45％ B，45％ B；波长：254/220nm；RT：6.7min)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-(1-氰基-2-{4H,5H,6H-吡咯并[1,2-c][1,2,3]三唑-6-基}乙基)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(56.0mg，9％)。LC-MS(ESI,m/z):548[M+H]⁺。

实施例38

化合物38

暂时指定用“*”表示手性中心。

向2,3-二氢-1H-茚-1-酮(4.0g，30.3mmol，1当量)和甲基三苯基溴化鏻(16.2g，45.4mmol，2当量)在THF(52mL)中的悬浮液中在2h的时间内滴加tBuOK(6.8g，60.5mmol，2当量)在THF(27mL)中的溶液。将混合物在室温处搅拌3h并减压浓缩。将残余物溶解在己烷中。将混合物通过硅胶塞过滤并用己烷冲洗，得到呈无色液体的1-亚甲基-2,3-二氢-1H-茚(2.8g，71％)。

向1-亚甲基-2,3-二氢-1H-茚(2g，15.4mmol，1当量)和Rh₂(OAc)₄(69mg，0.153mmol，0.01当量)在DCM(6mL)中的溶液中在1h的时间内添加重氮乙酸乙酯(4.05mL，38.4mmol，2.5当量)在THF(4mL)中的溶液。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶柱上使用EA(0％至2％)在PE中的梯度来纯化，并通过制备型HPLC(柱：KROMOSIL-C18，25×150mm，7um；流动相A：10mM NH₄HCO₃的水溶液，流动相B：ACN；流速：22mL/min；等度洗脱液：70％B)纯化，得到呈灰白色固体的反式2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-2-甲酸乙酯(650mg，19％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.18-7.24(m,1H),7.11-7.17(m,2H),6.85-6.92(m,1H),4.10(q,2H),2.85-3.02(m,2H),2.13(t,2H),2.03(t,1H),1.45-1.52(m,2H),1.18(t,3H)。LC-MS(ESI,m/z):217[M+H]⁺。

还获得250mg顺式2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-2-甲酸乙酯。

向反式2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-2-甲酸乙酯(350mg，1.62mmol，1当量)在EtOH(3.7mL)中的溶液中加入10％ NaOH水溶液(2.7mL，6.17mmol，4当量)。将混合物在室温处搅拌18h。将混合物用水(10mL)稀释并用Et₂O(3×5mL)萃取。将水相用1M HCl酸化，并且用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体的反式2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-2-甲酸(300mg，98％)。

反式2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-2-甲酸(450mg)通过制备型SFC使用以下条件纯化：柱：Chiralpak AD-H，4.6*25cm，5μm；流动相A：CO₂，流动相B：MeOH；流速：60g/min；梯度：等度15％ B；柱温：30℃；背压：100巴。纯化得到(1S*,2S*)-2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-2-甲酸(210mg)和(1R*,2R*)-2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-2-甲酸(180mg)。

(1S*,2S*)-2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-2-甲酸：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.99(brs,1H),7.18-7.25(m,1H),7.10-7.17(m,2H),6.82-6.88(m,1H),2.88-3.20(m,2H),2.08-2.22(m,2H),1.88-1.95(m,1H),1.38-1.48(m,2H)。[α]²⁵ _D:+444.3°(c 0.1,MeOH)。SFC：Chiralpak IG，4.6*150mm，5μm，30℃，共溶剂：MeOH，在10％保持7min，Rt：2.21min。

(1R*,2R*)-2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-2-甲酸：¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.10(brs,1H),7.18-7.24(m,1H),7.10-7.17(m,2H),6.82-6.87(m,1H),2.90-3.00(m,2H),2.10-2.22(m,2H),1.90-1.94(m,1H),1.38-1.45(m,2H)。[α]²⁵ _D:-335.9°(c 0.1,MeOH)。SFC：Chiralpak IG，4.6*150mm，5μm，30℃，共溶剂：MeOH，在10％保持7min，Rt：2.89min。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(120mg，0.325mmol，1.0当量)在DMF(1.0mL)中的溶液中添加(1R*,2R*)-2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-2-甲酸(61mg，0.324mmol，1.0当量)、EDC·HCl(122mg，0.637mmol，2.0当量)、HOAt(43mg，0.320mmol，1.0当量)和NEt₃(0.170mL，1.28mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶(12g柱)上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((1R*,2R*)-2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(100mg，61％)。LC-MS(ESI,m/z):503[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((1R*,2R*)-2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(80mg，0.159mmol，1.0当量)在DMF(0.8mL)中的溶液中添加吡啶(0.038mL，0.470mmol，3.0当量)和TFAA(0.040mL；0.318mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物用水(10mL)稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过C18硅胶(12g柱)上的快速色谱法使用0.01％碳酸氢铵/ACN纯化，并通过硅胶(12g柱)上的快速色谱法使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((1R*,2R*)-2',3'-二氢螺[环丙烷-1,1'-茚]-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(25mg，35％)。¹H NMR(400MHz,360K,DMSO-d₆)δ8.25-8.55(m,1H),7.00-7.42(m,4H),6.70-6.88(m,1H),5.85-6.22(m,2H),4.25-4.95(m,1H),3.98-4.12(m,1H),3.31-3.67(m,1H),3.00-3.22(m,4H),2.70-2.95(m,5H),2.30-2.42(m,1H),1.94-2.22(m,4H),1.68-1.90(m,2H),1.20-1.55(m,5H)。LCMS(ESI,m/z):485[M+H]⁺。

实施例39

化合物39

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(177mg，0.367mmol，1.0当量)在MeOH(5mL)中的混合物中添加三乙胺(446mg，4.40mmol，12.0当量)和2-氯-2,2-二氟乙酸乙酯(582mg，3.67mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，然后减压浓缩以去除MeOH。将混合物用水(20mL)稀释，并用盐酸(1M)将pH调节至6。将混合物用EtOAc(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(180mg，80％)。LC-MS(ESI,m/z):558[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(180mg，0.323mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的混合物中添加吡啶(102mg，1.29mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(122mg，0.581mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用DCM(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19×250mm，10μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内40％ B至70％ B，70％ B；波长：254nm；RT：5.4min；)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(41.2mg，23％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.65-8.90(m,1H),8.40-8.64(m,1H),7.30-7.62(m,1H),5.95-6.25(m,2H),4.83-5.01(m,1H),4.40-4.75(m,1H),3.95-4.20(m,1H),3.56-3.75(m,1H),3.32-3.55(m,1H),3.06-3.30(m,2H),3.01-3.05(m,1H),2.80-3.00(m,2H),2.60-2.79(m,1H),2.21-2.40(m,1H),2.00-2.20(m,2H),1.60-1.95(m,2H),1.30-1.48(m,2H),0.72-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):540[M+H]⁺。

实施例40

化合物40

向(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(250mg，0.578mmol，1.0当量)在EtOAc(5mL)中的混合物中添加10％活性碳钯(120mg)。将混合物在室温处在氢气下搅拌3h，然后过滤。将滤液减压浓缩，得到呈灰白色固体的(1S,2S,3S,6R,7R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-甲酸叔丁酯(200mg，75％)。LC-MS(ESI,m/z):435[M+H]⁺。

将(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(200mg，0.462mmol，1.0当量)在氯化氢(5mL，2M Et₂O溶液)中的混合物在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(170mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):335[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酸(106mg，0.458mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(209mg，0.550mmol，1.2当量)在DMF(3mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(355mg，2.75mmol，6.0当量)。在0℃处搅拌15min后，添加(2S)-2-[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(170mg，0.458mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的N-[(2S)-1-[(1S,2S,3S,6R,7R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(155mg，59％)。LC-MS(ESI,m/z):548[M+H]⁺。

将N-[(2S)-1-[(1S,2S,3S,6R,7R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(155mg，0.283mmol，1.0当量)在氯化氢(5mL，2M的Et₂O溶液)中的混合物在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(137mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):448[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(137mg，0.283mmol，1.0当量)在MeOH(3mL)中的混合物中添加三乙胺(344mg，3.40mmol，12.0当量)和2-氯-2,2-二氟乙酸乙酯(449mg，2.83mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜。将混合物减压浓缩以去除MeOH。将混合物用水(20mL)稀释，并用盐酸(1M)将pH调节至6。将混合物用EtOAc(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色固体的(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(100mg，57％)。LC-MS(ESI,m/z):560[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(100mg，0.179mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的混合物中添加吡啶(56.0mg，0.716mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(68.0mg，0.322mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用DCM(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，19×250mm，10μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内40％ B至70％ B，70％ B；波长：254nm；RT：5.43min)纯化，得到呈白色固体的(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酰胺(25.2mg，25％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.55-8.80(m,2H),7.35-7.60(m,1H),4.80-4.95(m,1H),4.60-4.75(m,1H),4.40-4.55(m,1H),3.75-3.90(m,1H),3.50-3.74(m,1H),3.10-3.40(m,2H),2.60-2.73(m,1H),2.36-2.44(m,1H),2.26-2.35(m,2H),2.17-2.22(m,1H),2.00-2.16(m,2H),1.61-1.89(m,2H),1.40-1.60(m,2H),1.20-1.38(m,3H),1.05-1.19(m,1H),0.76-1.04(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):542[M+H]⁺。

实施例41

化合物41

使用(S)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸代替(R)-2,2-二氟环丙烷-1-甲酸，与针对化合物33所述类似地制备化合物41。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.55-8.80(m,1H),7.80-8.20(m,1H),7.30-7.60(m,1H),5.85-6.30(m,2H),4.70-5.00(m,1H),4.40-4.60(m,1H),3.90-4.25(m,1H),3.30-3.70(m,2H),3.10-3.25(m,2H),2.95-3.05(m,1H),2.85-2.95(m,2H),2.60-2.85(m,2H),2.30-2.50(m,1H),2.05-2.30(m,2H),1.60-2.00(m,4H),1.30-1.50(m,2H),0.80-1.00(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):532[M+H]⁺。

实施例42

化合物42

向冷却至-78℃的二异丙胺(3.0g，37.7mmol，2.2当量)在THF(30mL)中的溶液中添加1.6M nBuLi的己烷溶液(23mL，37.7mmol，2.2当量)和2-溴-3,3,3-三氟丙-1-烯(3.0g，17.1mmol，1.0当量)。将混合物在-78℃处搅拌30min，添加0.5M ZnCl₂的THF溶液(37mL，18.5mmol，1.1当量)。经1h将混合物升温至室温。将3,3,3-三氟丙-1-炔在THF中的溶液直接原样用于下一步骤。

向(S)-2-叠氮基-3,3-二甲基丁酸甲酯(1.5g，8.77mmol，1.0当量)和3,3,3-三氟丙-1-炔在THF(17.1mmol，2.0当量)中的溶液在n-BuOH(13.5mL)和水(1.5mL)中的混合物中加入硫酸铜(69mg，0.043mmol，0.05当量)和抗坏血酸钠(260mg，1.31mmol，0.15当量)。将混合物在室温处搅拌过夜。添加水(50mL)。过滤所得沉淀，并用水和乙醚洗涤。分离滤液的各相。将有机相用水(3×10mL)和盐水(1×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(5％至10％)在己烷中的梯度来纯化，得到呈浅黄色液体的(S)-3,3-二甲基-2-(4-(三氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酸甲酯(600mg，21％)。¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ8.41(s,1H),5.37(s,1H),3.83(s,3H),1.03(s,9H)。

将(S)-3,3-二甲基-2-(4-(三氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酸酯(600mg，2.26mmol，1.0当量)和2M HCl(4.0mL，8.00mmol)的混合物在100℃处加热48h。冷却至室温后，将混合物用EtOAc(2×50mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物用5％乙醚的戊烷溶液研磨，得到呈白色固体的(S)-3,3-二甲基-2-(4-(三氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酸(0.720g，83％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(100mg，0.271mmol，1.0当量)在DMF(1.0mL)中的溶液中添加(S)-3,3-二甲基-2-(4-(三氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酸(82mg，0.326mmol，1.2当量)、EDC·HCl(104mg，0.543mmol，2.0当量)、HOAt(37mg，0.271mmol，1.0当量)和NEt₃(0.151mL，1.09mmol，4.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶(12g柱)上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-(3,3-二甲基-2-(4-(三氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(100mg，60％)。LC-MS(ESI,m/z):566[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-(3,3-二甲基-2-(4-(三氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(70mg，0.123mmol，1.0当量)在DMF(0.7mL)中的溶液中添加吡啶(0.030mL，0.371mmol，3.0当量)和TFAA(0.034mL；0.247mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物用水(10mL)稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：X-SELECT-C18，19×150mm，5um；流动相A：10mM碳酸氢铵的水溶液，流动相B：ACN；流速：17mL/min；梯度：在8min内20％ B至70％ B)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-(3,3-二甲基-2-(4-(三氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(33mg，47％)。¹H NMR(400MHz,362K,DMSO-d₆)δ8.42-8.76(m,2H),7.34(m,1H),6.16-6.30(m,1H),5.61-5.83(m,1H),5.44(m,1H),4.90-5.01(m,1H),4.01(m,1H),3.75(m,1H),3.40-3.53(m,1H),3.07-3.24(m,4H),2.87(m,1H),2.73-2.85(m,1H),2.37(m,1H),2.03-2.19(m,2H),1.55-1.84(m,2H),1.35-1.44(m,2H),0.94(s,9H)。LCMS(ESI,m/z):546[M-H]^-。

实施例43

化合物43

向(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酸甲酯盐酸盐(1.0g，6.90mmol，1.0当量)在0℃处冷却的饱和NaHCO₃(43mL)和DCM(22mL)的混合物中的溶液中添加三光气(818mg，2.76mmol，0.4当量)。将混合物在0℃处搅拌2h。将混合物用DCM(10mL)稀释并用盐水(10mL)洗涤。分离各相。将有机相用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈浅黄色液体的(S)-2-异氰酸根合-3,3-二甲基丁酸甲酯，其无需进一步纯化即可用于下一步骤。

向(S)-2-异氰酸根合-3,3-二甲基丁酸甲酯(6.90mmol，1.0当量)在二氧杂环己烷(10mL)中的溶液中添加乙酰肼(649mg，8.77mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶(24g柱)上使用EA(40％至60％)在PE中的梯度来纯化，得到呈灰白色固体的(S)-2-(2-乙酰肼-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酸甲酯(1.0g，两步59％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ9.56(s,1H),7.86(s,1H),6.54(d,1H),4.02(d,1H),3.63(s,3H),1.80(s,3H),0.90(s,9H)。

将(S)-2-(2-乙酰肼-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酸甲酯(1.0g，4.08mmol，1.0当量)在POCl₃(4mL)中的溶液在80℃处加热2h。冷却至室温后，将混合物倒入冰/水(20mL)中，用NaHCO₃碱化直至pH＝8，并用EA(2×20mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶(24g柱)上使用EA(20％至40％)在PE中的梯度来纯化，得到呈灰白色固体的(S)-3,3-二甲基-2-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)氨基)丁酸甲酯(800mg，90％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.78(d,1H),3.91(d,1H),3.63(s,3H),2.29(s,3H),0.98(s,9H)。

向(S)-3,3-二甲基-2-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)氨基)丁酸甲酯(200mg，0.881mmol，1.0当量)在THF(1mL)和水(1mL)中的溶液中加入LiOH(42mg，1.76mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物用水(5mL)稀释，用饱和柠檬酸酸化，并用EA(2×20mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈灰白色固体的(S)-3,3-二甲基-2-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)氨基)丁酸(170mg，91％)。LC-MS(ESI,m/z):214[M+H]⁺。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(100mg，0.272mmol，1.0当量)在DMF(1.0mL)中的溶液中添加(S)-3,3-二甲基-2-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)氨基)丁酸(70mg，0.326mmol，1.2当量)、EDC·HCl(103mg，0.544mmol，2.0当量)、HOAt(37mg，0.272mmol，1.0当量)和NEt₃(0.110mL，0.816mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(2×5mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶(12g柱)上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)氨基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(70mg，49％)。LC-MS(ESI,m/z):528[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)氨基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(70mg，0.132mmol，1.0当量)在DMF(0.7mL)中的溶液中加入吡啶(0.030mL，0.398mmol，3.0当量)和TFAA(0.030mL；0.260mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌30min。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(2×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：X-SELECT-C18，19×150mm，5um；流动相A：10mM碳酸氢铵，流动相B：ACN；流速：17mL/min；梯度：在8min内10％B至60％ B)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-((5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)氨基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(35mg，52％)。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.60(br.s.,1H),7.32(s,1H),6.93(br.s.,1H),6.08(m,1H),5.91(m,1H),4.90(m,1H),4.12(s,1H),3.98(m,1H),3.66(m,2H),3.08-3.20(m,3H),2.88(m,2H),2.71(m,1H),2.36(m,1H),2.28(s,3H),2.15(m,2H),1.69-1.79(m,2H),1.39(s,2H),0.94(s,9H)。LCMS(ESI,m/z):508[M-H]^-。

实施例44

化合物44

向4,6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸(83mg，0.36mmol，1.2当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐(149mg，0.39mmol，1.3当量)和N,N-二异丙基乙胺(272mg，2.1mmol，7.0当量)。将混合物在0℃处搅拌30min，添加(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(100mg，0.30mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(3mL)淬灭反应。将混合物用EA(3×5mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3×5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在C18柱上用水:MeCN(2:1)进行色谱分离，得到呈棕黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-(4,6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(70mg，40％)。LC-MS(ESI,m/z):544[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-(4,6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(70mg，0.13mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的溶液中加入TFAA(37.8mg，0.18mmol，1.4当量)和吡啶(35.6mg，0.45mmol，3.5当量)。将混合物在室温处搅拌4h。用水(2mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×3mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内40％ B至70％ B，70％ B；波长：254nm；RT1(min)：5.2；)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-(4,6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(18.3mg，27％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆,80℃)δ11.78(br,1H),8.72-9.00(m,1H),7.44-7.52(m,2H),7.34(s,1H),6.59-6.90(m,1H),6.05-6.25(m,2H),4.80-5.05(m,1H),4.30-4.61(m,1H),3.85-4.05(m,1H),3.63-3.65(m,1H),3.01-3.10(m,3H),2.79-2.96(m,3H),2.01-2.50(m,3H),1.56-1.96(m,2H),1.44(s,2H)。LC-MS(ESI,m/z):526[M+H]⁺。

实施例45

化合物45

将(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-甲酸叔丁酯(400mg，0.8mmol，1.0当量)在盐酸(8mL，4M的二氧杂环己烷溶液)中的溶液在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(300mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):403[M+H]⁺。

向4,7-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-甲酸(63mg，0.27mmol，1.1当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐(123mg，0.32mmol，1.3当量)和N,N-二异丙基乙胺(225mg，1.74mmol，7.0当量)。将混合物在0℃处搅拌30min，并且添加(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(100mg，0.25mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(3mL)淬灭反应。将混合物用EA(3×5mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3×5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用MeOH:DCM(1:12)进行色谱分离，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2-(4,7-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(80mg，47％)。LC-MS(ESI,m/z):615[M+H]⁺。

在0℃和N₂下，向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2-(4,7-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(80mg，0.13mmol，1.0当量)的DCM(2mL)溶液中加入DMP(165mg，0.39mmol，3.0当量)。将混合物在0℃处搅拌2h。用硫代硫酸钠溶液(2mL)和碳酸氢钠溶液(2mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×5mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-(4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2-(4,7-二氯-1H-苯并[d]咪唑-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(30.4mg，38％)。LC-MS(ESI,m/z):613[M+H]⁺。

实施例46

化合物46

向4,6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸(126mg，0.55mmol，1.1当量)在DMF(3mL)中的溶液中添加N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐(246mg，0.65mmol，1.3当量)和N,N-二异丙基乙胺(450mg，3.48mmol，7.0当量)。将混合物在0℃处搅拌30min，并且添加(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(200mg，0.5mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(3mL)淬灭反应。将混合物用EA(3×5mL)萃取。将有机层合并，用盐水(3×5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用MeOH:DCM(1:12)进行色谱分离，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2-(4,6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(70mg，20％)。LC-MS(ESI,m/z):614[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((2S)-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2-(4,6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(70mg，0.11mmol，1.0当量)在DMSO(3mL)中的溶液中添加IBX(96mg，0.34mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜。将反应物用水(3mL)淬灭。将混合物用EA(3×5mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-(4-(环丙基氨基)-3,4-二氧代-1-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丁-2-基)-2-(4,6-二氯-1H-吲哚-2-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(26.5mg，37％)。LC-MS(ESI,m/z):612[M+H]⁺。

实施例47

化合物47

在0℃处，向1-甲基环丙烷-1-甲酸(36.3mg，0.363mmol，1.1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(163mg，0.429mmol，1.3当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(341mg，2.64mmol，8.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(140mg，0.314mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN:水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-1-甲基环丙烷-1-甲酰胺(160mg，91％)。LC-MS(ESI,m/z):528[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-1-甲基环丙烷-1-甲酰胺(160mg，0.303mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中加入吡啶(95.6mg，1.21mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(114mg，0.545mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌3h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内37％ B至67％ B，67％ B；波长：254nm；RT1(min)：5.15)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-[(1-甲基环丙基)甲酰胺基]丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(27.9mg，16％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.55-8.85(m,1H),7.30-7.60(m,1H),6.35-6.60(m,1H),5.90-6.30(m,2H),4.60-5.00(m,1H),4.40-4.55(m,1H),3.95-4.20(m,1H),3.55-3.70(m,1H),3.35-3.55(m,1H),3.15-3.30(m,1H),3.05-3.15(m,2H),2.80-3.00(m,2H),2.60-2.80(m,1H),2.25-2.45(m,1H),2.05-2.25(m,2H),1.60-1.95(m,2H),1.35-1.50(m,2H),1.15-1.35(m,3H),0.75-1.10(m,11H),0.40-0.75(m,2H)。LC-MS(ESI,m/z):510[M+H]⁺。

实施例48

化合物48

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(177mg，0.367mmol，1.0当量)在MeOH(3mL)中的混合物中添加三乙胺(446mg，4.40mmol，12.0当量)和2,2-二氯-2-氟乙酸乙酯(643mg，3.67mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜。将混合物减压浓缩以去除MeOH。将混合物用水(10mL)稀释，并且用盐酸(1M)调节至pH＝6。将所得混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物用Et₂O(5mL)研磨，得到呈灰白色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-(2,2-二氯-2-氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(75.0mg，33％)。LC-MS(ESI,m/z):574[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-(2,2-二氯-2-氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(75.0mg，0.131mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的混合物中添加吡啶(41.0mg，0.524mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(49.0mg，0.236mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌1h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×5mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Kinetex EVO C18，21.2×250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内40％ B至70％ B，70％ B；波长：254nm；RT：5.55min)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-2-(2,2-二氯-2-氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(28.3mg，37％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.60-8.90(m,1H),7.90-8.20(m,1H),7.30-7.62(m,1H),5.90-6.25(m,2H),4.65-5.00(m,1H),4.40-4.52(m,1H),3.95-4.23(m,1H),3.56-3.75(m,1H),3.35-3.55(m,1H),3.08-3.30(m,2H),2.98-3.05(m,1H),2.78-2.97(m,2H),2.63-2.77(m,1H),2.30-2.45(m,1H),2.05-2.29(m,2H),1.62-1.93(m,2H),1.30-1.50(m,2H),0.73-1.15(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):556[M+H]⁺。

实施例49

化合物49

在室温下向1-(叔丁基)5-甲基(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-亚甲基戊二酸酯(5.0g，15.2mmol，1.0当量)在ⁱPrOH(50mL)中的混合物中加入甲基肼(3.50g，75.9mmol，5.0当量)和氢氧化钾(42.6mg，0.759mmol，0.05当量)。在50℃处将混合物搅拌36h，然后减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(90％-100％)进行色谱分离，得到粗产物。将粗产物通过制备型手性SFC-HPLC柱分离(柱：GreenSep Basic，3*15cm，5μm；流动相A：CO₂，流动相B：MeOH(0.1％2M NH₃-MeOH)；流速：75mL/min；梯度：等度13％ B；柱温(℃)：35；背压(巴)：100；波长：220nm；RT1(min)：1.56；RT2(min)：3.85；样品溶剂：MeOH--HPLC；进样体积：1.5mL；)，得到呈白色固体的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(-1-甲基-3-氧代吡唑烷-4-基)丙酸叔丁酯(1.75g，33％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.31-5.58(m,1H),4.13-4.25(m,1H),3.40-3.65(m,1H),2.85-2.99(m,2H),2.66-2.67(m,3H),2.02-2.38(m,1H),1.75-1.93(m,1H),1.46-1.51(m,18H)。LC-MS(ESI,m/z):344[M+H]⁺。

向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(1-甲基-3-氧代吡唑烷-4-基)丙酸叔丁酯(800mg，2.33mmol，1.0当量)在1,4-二氧杂环己烷(8mL)中的溶液中添加氯化氢(8mL，9M的H₂O溶液)。将混合物在室温处搅拌过夜，然后减压浓缩，得到呈黄色固体的(S)-2-氨基-3-(1-甲基-3-氧代吡唑烷-4-基)丙酸盐酸盐(500mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):188[M+H]⁺。

向(S)-2-氨基-3-(1-甲基-3-氧代吡唑烷-4-基)丙酸盐酸盐(500mg，2.23mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(537mg，2.46mmol，1.1当量)和三乙胺(679mg，6.71mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物减压浓缩以去除DCM，并用HCl(1M)调节至pH＝6。将混合物用CHCl₃:ⁱPrOH(4:1)(3×100mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色固体的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(1-甲基-3-氧代吡唑烷-4-基)丙酸(400mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):288[M+H]⁺。

向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((R)-1-甲基-3-氧代吡唑烷-4-基)丙酸(400mg，1.39mmol，1.0当量)在DCM(8mL)中的混合物中添加在0℃处搅拌的1-羟基苯并三唑(225mg，1.67mmol，1.2当量)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(294mg，1.53mmol，1.1当量)、氨(0.04mL，0.280mmol，2.0当量，7M MeOH溶液)和N-甲基吗啉(422mg，4.18mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用CHCl₃:ⁱPrOH(4:1)(5×100mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(12％)进行色谱分离，得到呈黄色固体的((S)-1-氨基-3-(1-甲基-3-氧代吡唑烷-4-基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，粗产物)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.87-6.99(m,2H),5.85-5.99(m,2H),4.36-4.42(m,1H),3.38-3.56(m,1H),2.84-3.14(m,2H),2.64-2.68(m,3H),1.94-2.16(m,2H),1.45-1.48(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):287[M+H]⁺。

将((S)-1-氨基-3-(1-甲基-3-氧代吡唑烷-4-基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，0.384mmol，1.0当量)在氯化氢(3mL，2M乙醚溶液)中的混合物在室温处搅拌3h，然后减压浓缩，得到呈黄色固体的(S)-2-氨基-3-((R)-1-甲基-3-氧代吡唑烷-4-基)丙酰胺盐酸盐(70mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):187[M+H]⁺。

在0℃处，向(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸(129mg，0.330mmol，1.1当量)在二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(137mg，0.360mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(232mg，1.80mmol，6.0当量)。搅拌20min后，添加(S)-2-氨基-3-(1-甲基-3-氧代吡唑烷-4-基)丙酰胺盐酸盐(70mg，0.300mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将级分减压浓缩，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-3-(1-甲基-3-氧代吡唑烷-4-基)-1-氧代丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(50.0mg，29％)。LC-MS(ESI,m/z):557[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-3-(1-甲基-3-氧代吡唑烷-4-基)-1-氧代丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(50.0mg，0.090mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中加入吡啶(28.4mg，0.360mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(32.1mg，0.153mmol，1.7当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用DCM(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内39％ B至69％ B，69％ B；波长：254nm；RT1(min)：5.18；)纯化，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-(1-甲基-3-氧代吡唑烷-4-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(12.6mg，25％)。LC-MS(ESI,m/z):539[M+H]⁺。

实施例50

化合物50

在-78℃处在氮气气氛下，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]戊二酸1,5-二甲酯(60.0g，217mmol，1.0当量)在THF(500mL)中的混合物中添加双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂(80.2g，479mmol，2.2当量)。在-78℃处搅拌1h后，添加2-溴乙腈(28.7g，239mmol，1.1当量)。将混合物在-78℃和氮气下搅拌2h。用甲醇(200mL)和盐酸(300mL，2M)淬灭反应。将混合物用乙酸乙酯(3×250mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×250mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(1:1)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的(2S,4R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(氰基甲基)戊二酸1,5-二甲酯(41.4g，57％)。LC-MS(ESI,m/z):315[M+H]⁺。

向(2S,4R)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-(氰基甲基)戊二酸1,5-二甲酯(1.50g，4.77mmol，1.0当量)和氯化钴(II)(1.24g，9.54mmol，2.0当量)在D₂O(15mL)中的搅拌混合物中加入硼氘化钠(2.00g，47.7mmol，10当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(1:20)进行色谱分离，得到呈黄色固体的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基-5,5-d2)丙酸甲酯(190mg，13％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.53-7.73(m,1H),7.28-7.49(m,1H),3.96-4.11(m,1H),3.54-3.71(m,3H),2.20-2.32(m,1H),2.07-2.18(m,1H),1.91-2.06(m,1H),1.50-1.70(m,2H),1.30-1.44(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):189[M-Boc+H]⁺。

将(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基-5,5-d2)丙酸甲酯(190mg，0.659mmol，1.0当量)与NH₃的MeOH溶液(10mL，7M NH₃的MeOH溶液)搅拌。将混合物在80℃处搅拌过夜，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基-5,5-d2)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(140mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):274[M+H]⁺。

向((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基-5,5-d2)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(140mg，0.512mmol，1.0当量)在DCM(4mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(1.5mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基-5,5-d2)丙酰胺(88mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):174[M+H]⁺。

在0℃处，向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(217mg，0.559mmol，1.1当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(231mg，0.610mmol，1.2当量)在DMF(3mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(525mg，4.06mmol，8.0当量)。在0℃处搅拌20min后，添加(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基-5,5-d2)丙酰胺(88.0mg，0.508mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(15mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×15mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×15mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(9:91)进行色谱分离，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基-5,5-d2)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(170mg，61％)。LC-MS(ESI,m/z):544[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基-5,5-d2)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(170mg，0.313mmol，1.0当量)在DCM(4mL)中的搅拌混合物中加入吡啶(98.9mg，1.25mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(111mg，0.532mmol，1.7当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(15mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×15mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×15mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内40％ B至75％ B，75％ B；波长：254nm；RT1(min)：5.42)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基-5,5-d2)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(58.6mg，35％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.73-9.09(m,1H),8.30-8.72(m,1H),7.29-7.62(m,1H),5.91-6.29(m,2H),4.80-5.01(m,1H),4.40-4.75(m,1H),3.92-4.25(m,1H),3.56-3.79(m,1H),3.30-3.55(m,1H),3.00-3.05(m,1H),2.89-2.99(m,2H),2.60-2.88(m,1H),2.30-2.40(m,1H),2.00-2.29(m,2H),1.60-1.93(m,2H),1.19-1.53(m,2H),0.70-1.15(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):526[M+H]⁺。

实施例51

化合物51

向1-叔丁基5-甲基(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-亚甲基戊二酸酯(1.00g，3.04mmol，1当量)在DMSO(5mL)/MeCN(5mL)中的混合物中添加2-氨基-1,3,4-三唑(383mg，4.55mmol，1.5当量)和碳酸钾(634mg，4.55mmol，1.5当量)。将混合物在70℃处搅拌过夜。将反应用水(50mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc:PE(7:3)进行色谱分离，得到呈白色固体的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{5-氧代-4H,6H,7H-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}丙酸叔丁酯(620mg，49％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.42-11.53(m,1H),7.67-7.75(m,1H),7.19-7.32(m,1H),4.30-4.42(m,1H),3.88-4.14(m,2H),2.88-3.04(m,1H),2.18-2.29(m,1H),1.52-1.88(m,1H),1.31-1.48(m,18H)。LC-MS(ESI,m/z):382[M+H]⁺。

向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{5-氧代-4H,6H,7H-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}丙酸叔丁酯(900mg，2.36mmol，1.0当量)在1,4-二氧杂环己烷(15mL)中的混合物中加入盐酸(15mL，9M)。将混合物在室温处搅拌过夜。将混合物减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-氨基-3-{5-氧代-4H,6H,7H-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}丙酸盐酸盐(616mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):226[M+H]⁺。

向(2S)-2-氨基-3-{5-氧代-4H,6H,7H-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}丙酸盐酸盐(616mg，2.35mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的混合物中添加三乙胺(1.43g，14.1mmol，6.0当量)和二碳酸二叔丁酯(1.03g，4.71mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩以去除DCM。将残余物用水(30mL)稀释，并且用盐酸(1M)调节至pH＝6。将混合物用IPA:氯仿(1:4，3×30mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{5-氧代-4H,6H,7H-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}丙酸(768mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z)：270[M-56+H]⁺。

向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{5-氧代-4H,6H,7H-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}丙酸(384mg，1.18mmol，1.0当量)在DCM(5mL)中的混合物中加入1-羟基苯并三唑(191mg，1.42mmol，1.2当量)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(249mg，1.30mmol，1.1当量)和氨(1.69mL，11.8mmol，10.0当量，7M MeOH溶液)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用IPA:氯仿(1:4，3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(11:89)进行色谱分离，得到呈灰白色固体的N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-{5-氧代-4H,6H,7H-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}乙基]氨基甲酸叔丁酯(60.0mg，14％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.41-11.51(m,1H),7.69-7.75(m,1H),7.29-7.40(m,1H),7.09(s,1H),6.94-7.02(m,1H),4.31-4.50(m,1H),3.94-4.06(m,2H),2.82-2.98(m,1H),2.09-2.34(m,1H),1.53-1.79(m,1H),1.27-1.48(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z)：269[M-56+H]⁺。

将N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-{5-氧代-4H,6H,7H-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}乙基]氨基甲酸叔丁酯(60.0mg，0.185mmol，1.0当量)在氯化氢(3mL，2M Et₂O溶液)中的混合物在室温处搅拌1h。将混合物减压浓缩，得到呈白色固体的(2S)-2-氨基-3-{5-氧代-4H,6H,7H-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}丙酰胺盐酸盐(48.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):225[M+H]⁺。

向(2S)-2-氨基-3-{5-氧代-4H,6H,7H-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}丙酰胺盐酸盐(48.0mg，0.184mmol，1.0当量)、(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(72.0mg，0.184mmol，1.0当量)和N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(67.0mg，0.239mmol，1.3当量)在MeCN(3mL)中的混合物中添加N-甲基咪唑(151mg，1.84mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)乙酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-{5-氧代-4H,6H,7H-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}丙酰胺(80.0mg，68％)。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-{5-氧代-4H,6H,7H-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}丙酰胺(80.0mg，0.135mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中加入吡啶(43.0mg，0.540mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(42.0mg，0.203mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物用水(10mL)淬灭。将混合物用DCM(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge制备型Phenyl OBD柱，19×250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内37％ B至67％ B，67％ B；波长：254nm；RT：5min)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-{5-氧代-4H,6H,7H-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基}乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(23.5mg，30％)。LC-MS(ESI,m/z):577[M+H]⁺。

实施例52

化合物52

根据上述合成方案制备化合物52。向1-(叔丁基)2-甲基(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸酯(20.0g，81.5mmol，1.0当量)、邻硝基苯酚(11.3g，81.5mmol，1.0当量)和三苯基膦(25.7g，97.8mmol，1.2当量)在THF(300mL)中的溶液中添加在0℃和氮气下搅拌下的偶氮二甲酸二异丙酯(19.8g，97.9mmol，1.2当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(200mL)淬灭反应体系。将混合物用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(45:100)进行色谱分离，得到呈浅黄色固体的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(2-硝基苯氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(23g，76％)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.83-7.87(m,1H),7.49-7.57(m,1H),7.05-7.11(m,1H),6.94-6.97(m,1H),4.97-5.03(m,1H),4.47-4.65(m,1H),3.71-3.89(m,5H),2.47-2.65(m,2H),1.41-1.52(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):367[M+H]⁺。

将高碘酸钠(21.0g，98.3mmol，7.2当量)和氧化钌(IV)(1.03g，6.82mmol，0.5当量)在H₂O(150mL)中的溶液在室温处在氮气下搅拌5min。然后添加1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(2-硝基苯氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(5.00g，13.6mmol，1.0当量)的乙酸乙酯(150mL)溶液。将混合物在50℃处搅拌过夜。将混合物用乙酸乙酯(200mL)稀释并通过硅藻土垫过滤。用饱和亚硫酸氢钠水溶液(100mL)洗涤滤液。将有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(46:100)进行色谱分离，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，5um，19*150mm；流动相A：水(10mmol/L NH₄HCO₃)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内25％ B至70％ B；254nm；Rt：5.30min)纯化，得到呈白色固体的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(2-硝基苯氧基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(650mg，12％)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.83-7.86(m,1H),7.54-7.64(m,2H),7.12-7.17(m,1H),4.90-4.94(m,1H),4.67-4.71(m,1H),3.87(s,3H),2.78-2.87(m,1H),2.45-2.54(m,1H),1.49-1.59(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):381[M+H]⁺。

向1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(2-硝基苯氧基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(650mg，1.71mmol，1.0当量)在甲醇(8mL)和H₂O(2mL)中的溶液中添加铁(477mg，8.55mmol，5.0当量)和氯化铵(219mg，4.10mmol，2.4当量)。将混合物在70℃处搅拌24h。将混合物通过硅藻土垫过滤并用甲醇(3×50mL)洗涤。滤液经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色固体的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)丙酸甲酯(500mg，粗产物)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.72-10.77(m,1H),7.25-7.49(m,1H),6.70-7.00(m,4H),4.44-4.74(m,1H),4.03-4.30(m,1H),3.51-3.70(m,3H),1.98-2.22(m,2H),1.25-1.57(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):351[M+H]⁺。

将(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)丙酸甲酯(500mg，1.43mmol，1.0当量)在氨(8mL，7M甲醇溶液)中的混合物在70℃处搅拌过夜。将混合物减压浓缩，得到呈红色固体的((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(460mg，粗产物)。LCMS(ESI,m/z):336[M+H]⁺。

向((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.895mmol，1.0当量)在1,4-二氧杂环己烷(4mL)中的混合物中添加氯化氢(6mL，4M的1,4-二氧杂环己烷溶液)。将混合物在室温处搅拌3h，然后减压浓缩，得到呈黄色固体的(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)丙酰胺盐酸盐(250mg，粗产物)。LCMS(ESI,m/z):236[M+H]⁺。

在0℃处，向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(357mg，0.920mmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(385mg，1.01mmol，1.1当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(714mg，5.52mmol，6.0当量)。搅拌20min后，添加(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)丙酰胺盐酸盐(250mg，0.920mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h，然后通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(430mg，77％)。LCMS(ESI,m/z):606[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(250mg，0.413mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的混合物中添加吡啶(131mg，1.65mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(130mg，0.619mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用DCM(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱XBridge Shield RP18 OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内38％ B至58％ B，58％B；波长：254nm；RT1(min)：6.4；)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]噁嗪-2-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(101.6mg，42％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ10.55-10.56(m,1H),8.70-8.93(m,2H),6.86-6.99(m,4H),5.95-6.16(m,2H),5.04-5.06(m,1H),.4.44-4.82(m,2H),4.01-4.16(m,1H),3.62-3.70(m,1H),3.40-3.49(m,1H),2.95-3.05(m,2H),2.82-2.94(m,2H),2.75-2.80(m,1H),2.20 -2.39(m,1H),1.31-1.46(m,2H),0.74-0.96(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):588[M+H]⁺。

实施例53

化合物53

使用(S)-3,3-二甲基-2-(4-甲基-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酸甲酯代替(S)-3,3-二甲基-2-(4-(三氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酸甲酯，与针对化合物42所述类似地制备化合物53。¹H NMR(500MHz,365K,DMSO-d₆)δ8.62-8.78(m,1H),7.74(m,1H),7.36(br.s.,1H),6.21(m,1H),5.83(m,1H),5.51(m,1H),5.20(s,1H),4.92(m,1H),3.97(m,1H),3.74(m,1H),3.07-3.24(m,4H),2.89-3.09(m,1H),2.83(m,1H),2.73(m,1H),2.33-2.42(m,1H),2.10-2.29(m,4H),1.67-1.88(m,2H),1.31-1.35(m,2H),0.91-0.95(s,9H)。LCMS(ESI,m/z):492[M-H]^-。

(S)-3,3-二甲基-2-(4-甲基-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酸甲酯：向4-甲基苯磺酰肼(1.57g，8.46mmol，1.0当量)在DMSO(4.0mL)中的溶液中加入1,1-二甲氧基丙-2-酮(1.0g，8.46mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h，然后用水(100mL)稀释。将混合物剧烈搅拌10min。将沉淀过滤并在高真空下干燥，得到呈白色固体的N'-(1,1-二甲氧基丙-2-亚基)-4-甲基苯磺酰肼(800mg，41％)。

将N'-(1,1-二甲氧基丙-2-亚基)-4-甲基苯磺酰肼(0.800g，2.89mmol，1.0当量)、(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酸甲酯(0.400g，2.79mmol，1.0当量)和NEt₃(0.428mL，3.07mmol，1.1当量)在MeOH(16mL)中的溶液在75℃处加热18小时。冷却至室温后，将混合物用水(80mL)稀释，并用EA(3×100mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用15％ EA的PE溶液作为洗脱液来纯化，得到呈无色固体的(S)-3,3-二甲基-2-(4-甲基-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酸甲酯(0.500g，84％)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δppm 7.78(s,1H),5.25(s,1H),3.78(s,3H),2.37(s,3H),1.02(s,9H)。

实施例54

化合物54

使用(S)-2-环丙氧基-3,3-二甲基丁酸代替(S)-3,3-二甲基-2-(4-(三氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酸，与针对化合物42所述类似地制备化合物54。¹H NMR(500MHz,362K,DMSO-d₆)δ8.63(d,1H),7.33(m,1H),6.17(m,1H),6.10(m,1H),4.90(m,1H),4.07(m,1H),3.72(s,1H),3.62(m,1H),3.49(m,1H),3.12(m,2H),3.07(m,2H),2.93-3.00(m,2H),2.70(m,1H),2.40(m,1H),2.12-2.18(m,2H),1.68-1.77(m,2H),1.43(m,2H),0.82(s,9H),0.33-0.57(m,4H)。LCMS(ESI,m/z):467[M-H]^-。

(S)-2-环丙氧基-3,3-二甲基丁酸：(S)-2-羟基-3,3-二甲基丁酸甲酯(2.0g，13.7mmol，1.0当量)、氯-1,5-环辛二烯铱(I)二聚体(453mg，0.674mmol，0.05当量)、碳酸钠(870mg，8.21mmol，0.6当量)和乙酸乙烯酯(5mL，54.8mmol，4.0当量)在甲苯(20mL)中的混合物在100℃下加热3h。将混合物减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(5％至10％)在PE中的梯度来纯化，得到呈浅黄色液体的(S)-3,3-二甲基-2-(乙烯氧基)丁酸甲酯(900mg，40％)。

向在0℃处冷却的(S)-3,3-二甲基-2-(乙烯氧基)丁酸甲酯(1.0g，5.81mmol，1.0当量)的DCM(10mL)溶液中加入1M二乙基锌的THF溶液(14.53mL，14.53mmol，2.5当量)，然后加入二碘甲烷(2.3mL，29.1mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。通过添加冷水(20mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×20mL)萃取。将有机相合并，用水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(15％至20％)在PE中的梯度来纯化，得到呈浅黄色液体的(S)-2-环丙氧基-3,3-二甲基丁酸甲酯(700mg，65％)。

向在0℃处冷却的(S)-2-环丙氧基-3,3-二甲基丁酸甲酯(400mg，2.15mmol，1.0当量)在THF(1.3mL)、MeOH(1.3mL)和水(1.3mL)中的溶液中加入LiOH(180mg，4.30mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌16h，然后减压浓缩。将残余物用水吸收，用饱和柠檬酸酸化，并用10％MeOH/DCM(3×10mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈浅黄色液体的(S)-2-环丙氧基-3,3-二甲基丁酸(70mg，97％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.59(br.s.,1H),3.46(s,1H),3.26(m,1H),0.87(s,9H),0.57(m,1H),0.31-0.50(m,3H)。

实施例55

化合物55

暂时指定用“*”表示手性中心。

向在0℃处冷却的甲基三苯基溴化鏻(14.5g，40.5mmol，1.2当量)在THF(50mL)中的悬浮液中加入1M LiHMDS的THF溶液(40.5mL，40.5mmol，1.2当量)。将混合物在室温处搅拌1h。冷却至-5℃后，滴加苯并二氢吡喃-4-酮(5.0g，33.8mmol，1.0当量)的THF(10mL)溶液。将混合物在室温处搅拌1.5h。将反应物料通过添加饱和NH₄Cl(100mL)淬灭反应。将水相用EA(3×50mL)萃取。将有机相合并，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(20％至25％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色液体的4-亚甲基苯并二氢吡喃(3.1g，63％)。

向4-亚甲基苯并二氢吡喃(2.1g，14.4mmol，1.0当量)、Rh₂(OAc)₄(64mg，0.142mmol，0.01当量)在DCM(8.8mL)中的溶液在1h的时间内添加重氮乙酸乙酯(3.8mL，35.9mmol，2.5当量)在THF(4.2mL)中的溶液。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶柱上使用EA(3％至5％)在PE中的梯度来纯化，并通过制备型HPLC(柱：X-SELECT-C18，19×250mm，5um；流动相A：10mM NH₄HCO₃的水溶液，流动相B：ACN；流速：17mL/min；梯度：8min内20％B至70％ B)纯化，得到呈无色液体的反式螺[苯并二氢吡喃-4,1'-环丙烷]-2'-甲酸乙酯(800mg，24％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.07-7.14(m,1H),6.81-6.89(m,2H),6.75-6.78(m,1H),4.20-4.28(m,1H),3.98-4.15(m,3H),1.98-2.12(m,3H),1.65-1.72(m,1H),1.44(t,1H),1.18(t,3H)。LC-MS(ESI,m/z):233[M+H]⁺。(还获得顺式螺[苯并二氢吡喃-4,1'-环丙烷]-2'-甲酸乙酯(500mg)。)

向在0℃处冷却的反式螺[苯并二氢吡喃-4,1'-环丙烷]-2'-甲酸乙酯(800mg，3.44mmol，1.0当量)在MeOH(3.5mL)、DME(3.5mL)和水(1.4mL)中的溶液中加入LiOH(289mg，6.89mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。添加10％柠檬酸(15mL)。将混合物用EA(4×20mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体的反式螺[苯并二氢吡喃-4,1'-环丙烷]-2'-甲酸(690mg，98％)。

反式螺[苯并二氢吡喃-4,1'-环丙烷]-2'-甲酸(690mg)通过制备型SFC使用以下条件纯化：柱：Chiralcel OJ-H，30*250mm，5μm；流动相A：CO₂，流动相B：MeOH；流速：90g/min；梯度：等度20％ B；柱温：30℃；背压：100巴。纯化得到(2'S*,4R*)-螺[苯并二氢吡喃-4,1'-环丙烷]-2'-甲酸(270mg)和(2'R*,4S*)-螺[苯并二氢吡喃-4,1'-环丙烷]-2'-甲酸(280mg)。

(2'S*,4R*)-螺[苯并二氢吡喃-4,1'-环丙烷]-2'-甲酸：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.41(br.s.,1H),7.05-7.12(m,1H),6.82-6.87(m,2H),6.76(d,1H),4.28-4.30(m,1H),4.00-4.08(m,1H),1.98-2.08(m,3H),1.60-1.65(m,1H),1.39(t,1H)。[α]²⁵ _D:+311.7°(c0.1,MeOH)。SFC：Chiralcel OJ-H，4.6*250mm，3μm，30℃，共溶剂：MeOH，在20％保持5分钟，Rt：1.29min。

(2'R*,4S*)-螺[苯并二氢吡喃-4,1'-环丙烷]-2'-甲酸：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.38(br.s.,1H),7.05-7.12(m,1H),6.82-6.87(m,2H),6.76(d,1H),4.28-4.30(m,1H),4.00-4.08(m,1H),1.98-2.08(m,3H),1.60-1.65(m,1H),1.39(t,1H)。[α]²⁵ _D:-321.8°(c0.1,MeOH)。SFC：Chiralcel OJ-H，4.6*250mm，3μm，30℃，共溶剂：MeOH，在20％保持5min，Rt：1.76min。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(120mg，0.325mmol，1.0当量)在DMF(1.2mL)中的溶液中添加(2'R*,4S*)-螺[苯并二氢吡喃-4,1'-环丙烷]-2'-甲酸(65mg，0.318mmol，1.0当量)、EDC·HCl(122mg，0.637mmol，2.0当量)、HOAt(43mg，0.320mmol，1.0当量)和NEt₃(0.170mL，1.28mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(3×5mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((2'R*,4S*)-螺[苯并二氢吡喃-4,1'-环丙烷]-2'-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(110mg，65％)。LC-MS(ESI,m/z):519[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((2'R*,4S*)-螺[苯并二氢吡喃-4,1'-环丙烷]-2'-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(90mg，0.174mmol，1.0当量)在DMF(0.9mL)中的溶液中添加吡啶(0.042mL，0.521mmol，3.0当量)和TFAA(0.040mL；0.390mmol，2.2当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物用水(10mL)稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，并且通过快速色谱法在C18硅胶上使用ACN(30％至40％)的水溶液的梯度进行纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((2'R*,4S*)-螺[苯并二氢吡喃-4,1'-环丙烷]-2'-羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(30mg，34％)。¹H NMR(500MHz,365K,DMSO-d₆)δ8.52(br.s.,1H),7.29-7.46(m,1H),6.95-7.10(m,1H),6.62-6.88(m,3H),6.25-6.00(m,2H),4.35-4.92(m,1H),4.17(m,1H),3.91-4.12(m,2H),3.75(m,1H),3.10-3.40(m,4H),2.70-2.95(m,3H),2.38(m,1H),1.90-2.22(m,4H),1.68-1.86(m,3H),1.40(m,4H)。LCMS(ESI,m/z):501[M+H]⁺。

实施例56

化合物56

使用(S)-2-(环丙基甲氧基)-3,3-二甲基丁酸代替(S)-3,3-二甲基-2-(4-(三氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酸，与针对化合物42所述类似地制备化合物56。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.63(br.s.,1H),7.34-7.50(m,1H),6.05-6.18(m,2H),4.91(m,1H),4.00-4.12(m,1H),3.67(s,1H),3.59(m,1H),3.47(m,1H),3.05-3.25(m,5H),2.90-3.00(m,2H),2.71(m,1H),2.40(m,1H),2.17(m,2H),1.68-1.84(m,2H),1.43(m,2H),1.00(m,1H),0.90(m,9H),0.40-0.50(m,2H),0.10-0.22(m,2H)。LCMS(ESI,m/z):483[M+H]⁺。

(S)-2-(环丙基甲氧基)-3,3-二甲基丁酸：向在0℃处冷却的(S)-2-羟基-3,3-二甲基丁酸甲酯(100mg，0.684mmol，1.0当量)和(溴甲基)环丙烷(0.140mL，1.37mmol，2.0当量)在DMF(1mL)中的溶液中分批加入NaH(30mg，0.750mmol，1.1当量)。将混合物在0℃处搅拌6h。通过添加冷水(5mL)淬灭反应。将混合物用Et₂O(3×10mL)萃取。将有机相合并，用水和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用Et₂O(5％至10％)在戊烷中的梯度来纯化，得到呈无色液体的(S)-2-(环丙基甲氧基)-3,3-二甲基丁酸甲酯(30mg，22％)。

向在0℃处冷却的(S)-2-(环丙基甲氧基)-3,3-二甲基丁酸甲酯(350mg，1.75mmol，1.0当量)在THF(1.5mL)、MeOH(1.5mL)和水(0.4mL)中的溶液中加入LiOH(221mg，5.25mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌8h。将混合物用EA(3mL)和水(2mL)稀释，然后用1N HCl酸化。分离各相。将水相用EA(2×5mL)萃取。将有机相用水和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈灰白色固体的(S)-2-(环丙基甲氧基)-3,3-二甲基丁酸(100mg，36％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.43(br.s.,1H),3.45(s,1H),3.26-3.35(m,1H),3.09-3.15(m,1H),0.95-1.02(m,1H),0.92(s,9H),0.40-0.50(m,2H),0.12-0.22(m,2H)。

实施例57

化合物57

向在-10℃冷却的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯1(1.5g，12.2mmol，1.0当量)在DCM(20mL)中的溶液中添加DBU(2.2mL，14.6mmol，1.2当量)。将混合物在-10℃处搅拌30min。添加2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲醛(4.34g，14.6mmol，1.2当量)，并将混合物在室温处搅拌16h。混合物用水(20mL)稀释，并用EA(2×20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈灰白色固体的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙烯酸甲酯(1.5g，42％)。

向2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙烯酸甲酯(1.5g，5.10mmol，1.0当量)在MeOH(15mL)中的溶液中添加10％Pd/C(1.0g)。将混合物在氢气囊压力下搅拌3h，然后通过硅藻土床过滤。滤液在减压下浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色固体的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙酸甲酯(1.4g，91％)。

2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙酸甲酯(1.2g)通过制备型SFC使用以下条件纯化：柱：Chiralpak-IG，25*200mm，5μm；流动相A：CO₂，流动相B：MeOH；流速：100g/min；梯度：等度15％ B；柱温：30℃；背压：110巴。纯化得到(R*)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙酸甲酯(500mg)和(S*)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙酸甲酯(480mg)。

(R*)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙酸甲酯：¹HNMR(500MHz,DMSO-d₆)δ11.64(s,1H),7.22-7.31(m,3H),6.12(t,1H),4.24-4.29(m,1H),3.58(s,3H),2.87(dd,1H),2.54-2.60(m,1H),1.20-1.37(m,9H)。[α]²⁵ _D:+70.2°(c 0.1,MeOH)。SFC：Chiralpak-IG，4.6*150mm，3μm，30℃，共溶剂：0.5％ DEA的MeOH溶液，在20％保持12min，Rt：1.74min。

(S*)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙酸甲酯：¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.63(s,1H),7.22-7.31(m,3H),6.12(t,1H),4.24-4.29(m,1H),3.58(s,3H),2.87(dd,1H),2.58(dd,1H),1.23-1.33(m,9H)。[α]²⁵ _D:-97.9°(c 0.1,MeOH)。SFC：Chiralpak-IG，4.6*150mm，3μm，30℃，共溶剂：0.5％ DEA的MeOH溶液，在20％保持12min，Rt：3.73min。

将(S*)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙酸甲酯(300mg，1.01mmol，1.0当量)在7M NH₃的MeOH(10mL)溶液中的溶液中在密封管中于室温处搅拌32h。将混合物减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(S*)-(1-氨基-1-氧代-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(260mg，91％)。

向在0℃处冷却的(S*)-(1-氨基-1-氧代-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(260mg，0.925mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加4N HCl的二氧杂环己烷(0.920mL，3.70mmol，4.0当量)溶液。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈白色固体的(S*)-2-氨基-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙酰胺盐酸盐(150mg，89％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(150mg，0.386mmol，1.0当量)在DMF(1.5mL)中的溶液中添加(S*)-2-氨基-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙酰胺盐酸盐(100mg，0.463mmol，1.2当量)、EDC·HCl(147mg，0.772mmol，2.0当量)、HOAt(52mg，0.386mmol，1.0当量)和NEt₃(0.16mL，1.15mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(10mL)稀释并用EA(2×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在C18硅胶上使用0.01％ FA的ACN溶液纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S*)-1-氨基-1-氧代-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(150mg，70％)。LC-MS(ESI,m/z):552[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S*)-1-氨基-1-氧代-3-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(150mg，0.272mmol，1.0当量)在DMF(1.5mL)中的溶液中加入吡啶(0.060mL，0.816mmol，3.0当量)和TFAA(0.070mL，0.544mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(2×5mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：KROMOSIL-C18，25×150mm，7um；流动相A：10mM碳酸氢铵的水溶液，流动相B：ACN；流速：22mL/min；梯度：在8min内20％ B至70％ B)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S*)-1-氰基-2-(2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(60mg，41％)。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ10.5(br.s.,1H),8.73(br.s.,1H),7.38(d,1H),7.30(d,1H),6.14(t,1H),5.99(m,2H),4.97(m,1H),4.46(m,1H),4.01-4.10(m,1H),3.65(m,1H),3.43(m,1H),2.82-3.10(m,6H),2.65(m,1H),1.37(m,2H),0.94(s,9H)。LCMS(ESI,m/z):532[M-H]^-。

实施例58

化合物58

向在0℃处冷却的(3aR,4R,7S,7aS)-六氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1,3(2H)-二酮(260mg，1.55mmol，1.0当量)在THF(5mL)中的溶液中添加2MLiAlH₄的THF(3.1mL，6.20mmol，4当量)溶液。将混合物回流搅拌16h。在冷却至室温后，将反应用饱和Na₂SO₄(10mL)淬灭。将混合物通过硅藻土过滤，并用THF(10mL)洗涤固体。将滤液减压浓缩，定量地得到呈浅黄色粘稠液体的(3aR,4S,7R,7aS)-八氢-1H-4,7-环氧异吲哚。

向(3aR,4S,7R,7aS)-八氢-1H-4,7-环氧异吲哚(1.8g，12.9mmol，1.0当量)在DCM(20mL)中的溶液中添加IBX(3.6g，12.9mmol，1.0当量)。将混合物在60℃处在密封管中搅拌1h。在冷却至室温后，将混合物用饱和连二硫酸钠(10mL)洗涤。分离各相。用饱和碳酸钠(70mL)和盐水(30mL)洗涤有机相。将水相用DCM(3×50mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(2％至5％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈浅黄色油状物的(3aS,4R,7S,7aR)-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1H-4,7-环氧异吲哚(1.2g，68％)。

向在0℃处冷却的(3aS,4R,7S,7aR)-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1H-4,7-环氧异吲哚(1.2g，8.75mmol，1.0当量)在DCM(12mL)和MeOH(1.2mL)中的溶液中加入TMSCN(2.7mL，21.9mmol，2.5当量)。将混合物在室温处搅拌16h，然后减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至3％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈灰白色固体的(+/-)-(1S,3aR,4S,7R,7aS)-八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲腈(800mg，56％)。

向在0℃处冷却的(+/-)-((1S,3aR,4S,7R,7aS)-八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲腈(300mg，1.82mmol，1.0当量)在MeOH(3mL)中的溶液中添加TMSCl(0.600mL，5.48mmol，3.0当量)。将混合物在60℃处搅拌6h。将混合物减压浓缩，定量地得到呈浅黄色固体的(+/-)-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐。

向在0℃处冷却的(+/-)-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐(360mg，1.82mmol，1.0当量)在DMF(3.6mL)中的溶液中加入(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酸(506mg，2.19mmol，1.2当量)、HATU(1.05g，2.73mmol，1.5当量)和DIPEA(1.0mL，5.46mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌5h。将混合物用水(5mL)稀释并用EtOAc(2×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(30％至60％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色粘稠液体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酸甲酯(350mg，50％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酸甲酯(350mg，0.853mmol，1.0当量)在THF(3mL)和水(3mL)中的溶液中添加LiOH(53mg，1.28mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩。将残余物用1N HCl吸收并用EA(2×20mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酸(280mg，82％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酸(250mg，0.631mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(0.350mL，3.15mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈油状物的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酸的酸式三氟乙酸盐(250mg)。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酸的酸式三氟乙酸盐(250mg，0.844mmol，1.0当量)在MeOH(2.5mL)中的溶液中加入2,2,2-三氟乙酸乙酯(0.300mL，4.22mmol，5.0当量)和NEt₃(0.600mL，4.22mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌32h，然后减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在C18硅胶上使用0.01％TFA的ACN溶液纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酸(90mg，2步36％)。

在0℃处向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酸(90mg，0.229mmol，1.0当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酰胺盐酸盐(60mg，0.276mmol，1.2当量)、EDC·HCl(88mg，0.646mmol，2.8当量)、HOAt(31mg，0.228mmol，1.0当量)和TEA(0.1mL，0.717mmol，3.1当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(10mL)稀释并用EA(2×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在C18硅胶上使用0.01％ FA的ACN溶液纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酰胺(75mg，60％)。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酰胺(70mg，0.128mmol，1.0当量)在DMF(0.7mL)中的搅拌溶液中加入吡啶(0.036mL，0.256mmol，3.0当量)和TFAA(0.03mL，0.384mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(2×5mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：X-SELECT-C18，19×250mm，5um；流动相A：10mM碳酸氢铵的水溶液，流动相B：ACN；流速：17mL/min；梯度：在8min内10％ B至60％ B)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酰胺(25mg，40％)。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.60-8.90(m,2H),7.30 -7.40(m,1H),4.89(m,1H),4.46-4.66(m,4H),3.55-3.85(m,2H),3.08-3.16(m,2H),2.70-2.81(m,1H),2.59(m,1H),2.35(m,1H),2.05-2.22(m,2H),1.69-1.82(m,2H),1.31-1.61(m,4H),0.97(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):528[M+H]⁺。

实施例58-1

化合物58a

使用2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-八氢-2H-4,7-环氧异吲哚-1,2-二甲酸酯代替2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯，与针对化合物59a所述类似地制备化合物58a。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.90(br.s.,1H),8.51-8.74(m,1H),7.40(br.s.,1H),4.81-4.97(m,1H),4.68(d,1H),4.33-4.59(m,3H),3.76(m,1H),3.51-3.58(m,1H),3.18(m,2H),2.80(m,1H),2.60(m,1H),2.33(m,1H),2.23(m,1H),2.10(m,1H),1.67-1.88(m,2H),1.21-1.58(m,4H),0.89-1.10(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):528[M+H]⁺。

2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-八氢-2H-4,7-环氧异吲哚-1,2-二甲酸酯：向在0℃处冷却的(+/-)-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐(800mg，1.82mmol，1.0当量)在THF(8mL)和水(8mL)中的溶液中添加NaHCO₃(1.7g，20.3mmol，5.0当量)和Boc₂O(1.3g，6.09mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(15％至20％)在PE中的梯度来纯化，得到(+/-)-2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-八氢-2H-4,7-环氧异吲哚-1,2-二甲酸酯(800mg，66％)。

(+/-)-2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-八氢-2H-4,7-环氧异吲哚-1,2-二甲酸酯(1.7g)通过制备型SFC使用以下条件纯化：柱：Chiralpak IG，30*250mm，5μm；流动相A：CO₂，流动相B：0.5％ DEA的MeOH溶液；流速：90g/min；梯度：等度10％ B；柱温：30℃；背压：100巴。纯化得到2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-八氢-2H-4,7-环氧异吲哚-1,2-二甲酸酯(700mg)和2-(叔丁基)1-甲基(1S*,3aR*,4S*,7R*,7aS*)-八氢-2H-4,7-环氧异吲哚-1,2-二甲酸酯(600mg)。

2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-八氢-2H-4,7-环氧异吲哚-1,2-二甲酸酯：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.66(m,1H),4.55(m,1H),4.16-4.31(m,1H),3.73(s,3H),3.38-3.54(m,2H),2.79(m,2H),1.61-1.69(m,4H),1.47(m,9H)。[α]²⁵ _D:+30.2°(c 0.16,CHCl₃)。SFC：CHIRALPAK IG，4.6*150mm，3μm，流动相A：CO₂，流动相B：MeOH；流速：3g/min；梯度：等度10％ B；柱温：30℃；背压：100巴，Rt：1.29min。

2-(叔丁基)1-甲基(1S*,3aR*,4S*,7R*,7aS*)-八氢-2H-4,7-环氧异吲哚-1,2-二甲酸酯：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.66(m,1H),4.55(m,1H),4.16-4.31(m,1H),3.73(s,3H),3.38-3.54(m,2H),2.79(m,2H),1.61-1.69(m,4H),1.47(m,9H)。[α]²⁵ _D:-41.3°(c 0.16,CHCl₃)。SFC：CHIRALPAK IG，4.6*150mm，3μm，流动相A：CO₂，流动相B：MeOH；流速：3g/min；梯度：等度10％B；柱温：30℃；背压：100巴，Rt：1.65min。

实施例58-2

化合物58b

使用2-(叔丁基)1-甲基(1S*,3aR*,4S*,7R*,7aS*)-八氢-2H-4,7-环氧异吲哚-1,2-二甲酸酯代替2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯，与针对化合物59a所述类似地制备化合物58b。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.91(br.s.,1H),8.50-8.74(m,1H),7.37(br.s.,1H),4.91(m,1H),4.67(m,1H),4.57(m,1H),4.30-4.54(m,2H),3.71-3.83(m,1H),3.55-3.70(m,1H),3.06-3.37(m,2H),2.83(m,1H),2.58(m,1H),2.34(m,1H),2.08-2.24(m,2H),1.62-1.87(m,2H),1.22-1.59(m,4H),0.89-1.06(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):528[M+H]⁺。

实施例59

化合物59

使用(+/-)-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐代替(+/-)-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐，与针对化合物58所述类似地制备化合物59。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.40-8.79(m,2H),7.32-7.44(m,1H),6.09-6.23(m,2H),4.91(m,1H),4.51-4.70(m,1H),3.99-4.10(m,1H),3.80(m,1H),3.30-3.60(m,1H),3.06-3.21(m,2H),2.80(m,1H),2.57-2.69(m,2H),2.00-2.45(m,4H),1.68-1.80(m,2H),1.40-1.51(m,2H),1.06-1.20(m,2H),0.88-1.00(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):538[M+H]⁺。

(+/-)-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐：向(3aR,4S,7R,7aS)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚(1.1g，7.37mmol，1.0当量)在DCM(35mL)中的溶液中添加IBX(2.06g，7.37mmol，1.0当量)。将混合物在60℃处在密封管中搅拌1h。在冷却至室温后，将混合物用饱和连二硫酸钠(40mL)洗涤。分离各相。用饱和碳酸钠(70mL)和盐水(30mL)洗涤有机相。将水相用DCM(3×100mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至5％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色油状物的(3aS,4R,7S,7aR)-3a,4,7,7a-四氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚(780mg，71％)。

向在0℃处冷却的(3aS,4R,7S,7aR)-3a,4,7,7a-四氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚(780mg，5.31mmol，1.0当量)在DCM(8mL)和MeOH(0.6mL)中的溶液中添加TMSCN(1.8mL，13.3mmol，2.5当量)。将混合物在0℃至10℃处搅拌4h。将混合物减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至5％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈棕色油状物的(+/-)-(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲腈(550mg，59％)。

将(+/-)-(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲腈(550mg，3.16mmol，1.0当量)在4N HCl的MeOH(5.5mL)溶液中的溶液在60℃处搅拌6h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色油状物的(+/-)-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐(580mg，88％)。

实施例59-1

化合物59a

暂时指定用“*”表示手性中心。

向在0℃处冷却的(+/-)-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐(1g，4.10mmol，1.0当量)在二氧杂环己烷(15mL)中的溶液中添加Na₂CO₃(870mg，8.21mmol，2.0当量)和Boc₂O(1.8g，8.21mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌24h。冷却至0℃后，添加Na₂CO₃(870mg，8.21mmol，2.0当量)和Boc₂O(1.8g，8.21mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌24h。将混合物用EA(50mL)稀释并用水洗涤。分离各相。将水相用EA萃取两次。将有机相合并，用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(0％至30％)在PE中的梯度来纯化，得到呈棕色油状物的(+/-)-2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯(1.1g，74％)。

(+/-)-2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯(900mg)通过制备型SFC使用以下条件纯化：柱：Lux Cellulose-2，30*250mm，5μm；流动相A：CO₂，流动相B：MeOH；流速：60g/min；梯度：等度10％ B；柱温：30℃；背压：100巴。纯化得到2-(叔丁基)1-甲基(1S*,3aR*,4S*,7R*,7aS*)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯(370mg)和2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯(370mg)。

2-(叔丁基)1-甲基(1S*,3aR*,4S*,7R*,7aS*)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.22-6.33(m,2H),3.87-4.02(m,1H),3.71(s,3H),3.52-3.70(m,1H),3.14-3.28(m,1H),2.78(m,1H),2.59(m,1H),2.40-2.52(m,2H),1.32-1.50(m,11H),1.18-1.30(m,2H)。[α]²⁵ _D:-29.1°(c 0.1,CHCl₃)。SFC：LuxCellulose-2，4.6*150mm，3μm，流动相A：CO₂，流动相B：0.5％ DEA的MeOH溶液；流速：3g/min；梯度：等度15％ B；柱温：30℃；背压：100巴，Rt：0.98min。

2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.22-6.33(m,2H),3.87-4.02(m,1H),3.71(s,3H),3.52-3.70(m,1H),3.14-3.28(m,1H),2.78(m,1H),2.59(m,1H),2.40-2.52(m,2H),1.32-1.50(m,11H),1.18-1.30(m,2H)。[α]²⁵ _D:+21.6°(c 0.1,CHCl₃)。SFC：LuxCellulose-2，4.6*150mm，3μm，流动相A：CO₂，流动相B：0.5％ DEA的MeOH溶液；流速：3g/min；梯度：等度15％ B；柱温：30℃；背压：100巴，Rt：1.12min。

向在0℃处冷却的2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯(100mg，0.325mmol，1.0当量)在THF(1mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH(21mg，0.500mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后部分减压浓缩以去除THF。通过添加1N HCl酸化残余物直至pH＝2。将混合物用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈油状物的(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-2-(叔丁氧基羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酸(82mg，86％)。

向在0℃处冷却的(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-2-(叔丁氧基羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酸(160mg，0.546mmol，1.0当量)在DMF(1.6mL)中的溶液中添加(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酰胺盐酸盐(141mg，0.655mmol，1.2当量)、EDC·HCl(208mg，1.09mmol，2.0当量)、HOAt(74mg，0.546mmol，1.0当量)和NEt₃(0.380mL，2.73mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(10mL)稀释并用EA(2×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在C18上使用0.01％ FA的ACN溶液纯化，得到呈白色固体的(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-2-甲酸叔丁酯(180mg，74％)。LC-MS(ESI,m/z):447[M+H]⁺。

将(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-2-甲酸叔丁酯(170mg，0.381mmol，1.0当量)在2M HCl的乙醚溶液(20mL)中的溶液在室温处搅拌5h。将混合物减压浓缩，定量地得到呈白色固体的(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐。

向在0℃处冷却的(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(170mg，0.445mmol，1.0当量)在DMF(1.7mL)中的溶液中加入(S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸(121mg，0.533mmol，1.2当量)、HATU(253mg，0.667mmol，1.5当量)和DIPEA(0.380mL，2.18mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在C18上使用0.01％ FA的ACN溶液纯化，得到呈灰白色固体的(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酰胺(125mg，55％)。

向(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酰胺(100mg，0.180mmol，1.0当量)在DMF(1mL)中的溶液中加入吡啶(0.043mL，0.540mmol，3.0当量)和TFAA(0.050mL，0.360mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(3×5mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：X-SELECT-C18柱，19*250mm，5μm；流动相A：10mM NH₄HCO₃的水溶液，流动相B：ACN；流速：17mL/min；梯度：在8min内10％ B至60％ B)，得到呈白色固体的(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酰胺(45mg，40％)。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.52-8.87(m,2H),7.39(s,1H),6.02-6.22(m,2H),4.91(dd,1H),4.52(s,1H),4.08-4.31(m,1H),3.79(t,1H),3.49(d,1H),3.11-3.37(m,2H),2.78(m,1H),2.51-2.61(m,2H),2.04-2.36(m,4H),1.82(m,1H),1.72(m,1H),1.44(d,2H),1.13(m,2H),0.96(s,9H)。LCMS(ESI,m/z):536[M-H]^-。

实施例59-2

化合物59b

使用2-(叔丁基)1-甲基(1S*,3aR*,4S*,7R*,7aS*)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯代替2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯，与针对化合物59a所述类似地制备化合物59b。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.56-8.85(m,2H),7.30-7.48(m,1H),6.06-6.26(m,2H),4.90(m,1H),4.50-4.72(m,1H),3.98-4.10(m,1H),3.80(m,1H),3.28-3.57(m,1H),3.08-3.20(m,2H),2.82(m,1H),2.53-2.62(m,2H),2.25-2.45(m,2H),2.10-2.20(m,2H),1.65-1.90(m,2H),1.41-1.52(m,2H),1.07-1.23(m,2H),0.85-1.02(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):536[M-H]^-。

实施例60

化合物60

在-30℃处，向4-叔丁基3-甲基(1S,2S,3S,6R,7S)-9-亚甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(400mg，1.30mmol，1.0当量)和重氮甲烷(15mL，在Et₂O中过量)在Et₂O(4mL)中的混合物中加入乙酸钯(II)(88.0mg，0.390mmol，0.3当量)。将混合物在-30℃处搅拌30min。将混合物自然升至室温，过滤并减压浓缩，得到粗产物(将该过程重复5次，直至原料完全转化)。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc:PE(1:9)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的4'-叔丁基5'-甲基(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-4',5'-二甲酸酯(350mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):222[M-100+H]⁺。

将4'-叔丁基5'-甲基(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-4',5'-二甲酸酯(350mg，1.09mmol，1.0当量)在氯化氢(10mL，2MEt₂O溶液)中的溶液在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色固体的(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-5'-甲酸甲酯盐酸盐(280mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):222[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酸(251mg，1.09mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(496mg，1.30mmol，1.2当量)在DMF(5mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(842mg，6.52mmol，6.0当量)。在0℃处搅拌15min后，添加(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-5'-甲酸甲酯盐酸盐(280mg，1.09mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc:PE(14:86)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-5'-甲酸甲酯(300mg，57％)。LC-MS(ESI,m/z):435[M+H]⁺。

向(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-5'-甲酸甲酯(300mg，0.690mmol，1.0当量)在THF(3mL)/水(3mL)中的混合物中添加氢氧化锂(83.0mg，3.45mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩以去除THF，然后用盐酸(1M)调节至pH＝6。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-5'-甲酸(280mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):421[M+H]⁺。

向(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-5'-甲酸(280mg，0.667mmol，1.0当量)在DCM(6mL)中的溶液中加入三氟乙酸(2mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色半固体的(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-5'-甲酸(213mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):321[M+H]⁺。

向(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-5'-甲酸(213mg，0.667mmol，1.0当量)在MeOH(5mL)中的混合物中添加三乙胺(807mg，7.97mmol，12.0当量)和2,2,2-三氟乙酸乙酯(945mg，6.67mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌2天。将混合物减压浓缩以去除MeOH。将混合物用水(30mL)稀释，并且用盐酸(1M)调节至pH＝6。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-5'-甲酸(240mg，75％)。LC-MS(ESI,m/z):417[M+H]⁺。

将N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(150mg，0.553mmol，1.0当量)在氯化氢(10mL，2M Et₂O溶液)中的混合物在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(115mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):172[M+H]⁺。

在0℃处，向(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-5'-甲酸(221mg，0.530mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(241mg，0.635mmol，1.2当量)在DMF(5mL)中的混合物中加入N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(411mg，3.18mmol，6.0当量)。在0℃处搅拌15min后，添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(110mg，0.530mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(2S)-2-[(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-5'-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(180mg，52％)。LC-MS(ESI,m/z):570[M+H]⁺。

向(2S)-2-[(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-4'-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-5'-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(180mg，0.316mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的混合物中添加吡啶(87.0mg，1.11mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(100mg，0.474mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌1h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×5mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30×150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内34％ B至64％ B，64％ B；波长：254nm；RT1(min)：5.33)纯化，得到呈灰白色固体的(1'S,2'R,5'S,6'S,7'S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4'-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4'-氮杂螺[环丙烷-1,8'-三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷]-5'-甲酰胺(61.3mg，34％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.90-9.18(m,1H),8.60-8.89(m,1H),7.30-7.65(m,1H),4.82-5.02(m,2H),4.63-4.81(m,1H),3.82-3.95(m,1H),3.61-3.81(m,1H),3.10-3.39(m,2H),2.63-2.85(m,1H),2.30-2.50(m,3H),2.05-2.25(m,2H),1.68-1.90(m,3H),1.60-1.67(m,1H),1.50-1.59(m,1H),1.25-1.42(m,2H),0.95-1.05(m,9H),0.70-0.90(m,1H),0.70-0.90(m,2H),-0.15--0.03(m,1H)。LC-MS(ESI,m/z):552[M+H]⁺。

实施例61

化合物61

在氮气下将4-叔丁基3-甲基(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3,4-二甲酸酯(4.00g，13.6mmol，1.0当量)溶解于甲苯(8mL)中并冷却至0℃。连续加入(S)-MOP(S)-(-)-2-二苯基膦基-2'-甲氧基-1,1'-联萘(15.9mg，0.034mmol，0.0025当量)、[Pd(C3H5)Cl]2烯丙基氯化钯二聚体(3.00mg，0.008mmol，0.0006当量)和三氯硅烷(5.87g，43.5mmol，3.2当量)。使混合物升温至室温，然后搅拌3d。将混合物减压浓缩。将残余物重新溶解于THF(36mL)和MeOH(36mL)中。在0℃处将混合物倒入氟化钾(6.26g，108mmol，8.0当量)和KHCO₃(13.6g，136mmol，10.0当量)在THF(36mL)和MeOH(36mL)中的悬浮液中。然后添加H₂O₂(20mL)。将混合物在室温处搅拌1d。将混合物用EtOAc(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(40:60)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7S)-9-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(2.00g，47％)。LC-MS(ESI,m/z)：256[M-56+H]⁺。

向4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7S)-9-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(2.00g，6.43mmol，1.0当量)在DMSO(20mL)中的搅拌混合物中添加2-碘酰基苯甲酸(5.29g，18.9mmol，3.0当量)。将混合物在rt下搅拌过夜。用饱和碳酸氢钠(50mL)淬灭反应。混合物用EtOAc(3×80mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(50:50)进行色谱分离，得到呈白色油状物的4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7S)-9-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(1.5g，78％)。LC-MS(ESI,m/z):310[M+H]⁺。

将4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7S)-9-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(1.00g，3.23mmol，1.0当量)在二乙基氨基三氟化硫(20mL)中的混合物在70℃处搅拌6h。将混合物用二氯甲烷(50mL)稀释。在0℃处，用饱和碳酸氢钠(100mL)淬灭反应。将混合物用二氯甲烷(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×60mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法用PE:EA(7:3)纯化，得到呈黄色油状物的4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7S)-9,9-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(300mg，28％)。LC-MS(ESI,m/z):310[M+H]⁺。

在室温处，向4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7S)-9,9-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(300mg，0.905mmol，1.0当量)在THF(3mL)和H₂O(3mL)中的搅拌混合物中添加氢氧化锂(108mg，4.52mmol，5.0当量)。将混合物搅拌2h，并用盐酸(1M H₂O溶液)酸化至pH＝3。将水层用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1S,2R,3S,6R,7S)-4-(叔丁氧基羰基)-9,9-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸(270mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):318[M+H]⁺。

在0℃处，向(1S,2R,3S,6R,7S)-4-(叔丁氧基羰基)-9,9-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸(270mg，0.851mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(387mg，1.02mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(658mg，5.10mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(145mg，0.851mmol，1.0当量)。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1S,2R,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-9,9-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0{2,6}]癸烷-4-甲酸叔丁酯(200mg，50％)。LC-MS(ESI,m/z):471[M+H]⁺。

将(1S,2R,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-9,9-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-甲酸叔丁酯(200mg，0.425mmol，1.0当量)在氯化氢(1mL，2M Et₂O溶液)中的混合物在室温处搅拌1h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色固体的(2S)-2-{[(1S,2R,3S,6R,7S)-9,9-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(160mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):371[M+H]⁺。

在室温处，向(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸(154mg，0.680mmol，1.6当量)在MeCN(2mL)中的混合物中添加N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(238mg，0.850mmol，2.0当量)和N-甲基咪唑(522mg，6.37mmol，15当量)。将混合物搅拌20min，然后在室温处添加(2S)-2-{[(1S,2R,3S,6R,7S)-9,9-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(160mg，0.425mmol，1.0当量)。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(2S)-2-{[(1S,2R,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9,9-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(105mg，42％)。LC-MS(ESI,m/z):580[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1S,2R,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9,9-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(100mg，0.173mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的混合物中添加吡啶(47.7mg，0.605mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(54.3mg，0.259mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Xselect CSH C18 OBD柱30*150mm5μm，n；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：8min内30％ B至60％ B，60％ B；波长：254/220nm；RT1(min)：6)纯化，得到呈灰白色固体的(1S,2R,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9,9-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酰胺(4.7mg，4％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.95-9.30(m,1H),8.60-8.95(m,1H),7.30-7.65(m,1H),4.80-5.10(m,1H),4.45-4.80(m,2H),3.60-4.00(m,2H),3.10-3.20(m,2H),2.80-2.95(m,1H),2.55-2.80(m,2H),2.40-2.50(m,1H),2.30-2.40(m,1H),2.05-2.25(m,2H),1.55-1.95(m,6H),0.80-1.40(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):562[M+H]⁺。

实施例62

化合物62

向溴(甲基)三苯基-λ⁵-膦(2.96g，8.27mmol，1.6当量)在甲苯(48mL)中的混合物中加入叔丁醇钾(928mg，8.27mmol，1.6当量)。在110℃处搅拌2h后，添加4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7S)-9-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(1.60g，5.17mmol，1.0当量)。将混合物在110℃处搅拌过夜。用冰水(50mL)淬灭反应。将混合物用EtOAc(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(15:85)进行色谱分离，得到呈浅黄色油状物的4-叔丁基3-甲基(1S,2S,3S,6R,7S)-9-亚甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(480mg，29％)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.89-4.96(m,1H),4.71-4.80(m,1H),4.17-4.33(m,1H),3.72(s,3H),3.52-3.66(m,1H),3.35-3.44(m,1H),2.56-2.85(m,3H),2.33-2.42(m,1H),1.98-2.22(m,2H),1.62-1.71(m,1H),1.52-1.60(m,1H),1.36-1.50(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):208[M-100+H]⁺。

向4-叔丁基3-甲基(1S,2S,3S,6R,7S)-9-亚甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(220mg，0.716mmol，1.0当量)在四氢呋喃(2mL)/水(2mL)中的混合物中添加氢氧化锂(86.0mg，3.58mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h。将反应用水(5mL)淬灭并用EtOAc(5mL)萃取。将水相用HCl(1M)调节至pH＝6。将混合物用EtOAc(3×5mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1S,2S,3S,6R,7S)-4-(叔丁氧基羰基)-9-亚甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸(170mg，76％，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):194[M-Boc+H]⁺。

在0℃处，向(1S,2S,3S,6R,7S)-4-(叔丁氧基羰基)-9-亚甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸(201mg，0.684mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(312mg，0.821mmol，1.2当量)在DMF(5mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(530mg，4.10mmol，6.0当量)。在0℃处搅拌15min后，添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(142mg，0.684mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1S,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-9-亚甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0{2,6}]癸烷-4-甲酸叔丁酯(180mg，50％)。LC-MS(ESI,m/z):447[M+H]⁺。

将(1S,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-9-亚甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-甲酸叔丁酯(160mg，0.358mmol，1.0当量)在氯化氢(5mL，2M Et₂O溶液)中的混合物在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7S)-9-亚甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(137mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):540[M+H]⁺。

在室温处，向(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7S)-9-亚甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(137mg，0.358mmol，1.0当量)、(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸(81.0mg，0.358mmol，1.0当量)和N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(130mg，0.465mmol，1.3当量)在MeCN(3mL)中的混合物中添加N-甲基咪唑(294mg，3.58mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9-亚甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(160mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):556[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9-亚甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(160mg，0.288mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的混合物中添加吡啶(80.0mg，1.01mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(91.0mg，0.432mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌1h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×5mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge Shield RP18 OBD柱，30×150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内32％ B至62％ B，62％ B；波长：254nm；RT：5.07min)纯化，得到呈白色固体的(1S,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9-亚甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酰胺(30.2mg，19％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.48-9.05(m,2H),7.35-7.55(m,1H),4.81-5.10(m,1H),4.75-4.80(m,1H),4.53-4.74(m,1H),4.40-4.52(m,1H),4.20-4.39(m,1H),3.45-3.90(m,2H),3.10-3.43(m,2H),2.65-2.95(m,2H),2.50-2.64(m,1H),2.28-2.45(m,2H),1.82-2.26(m,4H),1.25-1.81(m,4H),0.80-1.15(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):538[M+H]⁺。

实施例63

化合物63

向(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(250mg，0.578mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的搅拌混合物中添加氯化氢(3mL，4M的1,4-二氧杂环己烷溶液)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(220mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):333[M+H]⁺。

在室温处，向(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(220mg，0.596mmol，1.0当量)和(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基戊-4-炔酸(143mg，0.596mmol，1.0当量)在DMF(3mL)中的搅拌混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(272mg，0.715mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(462mg，3.57mmol，6.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代戊-4-炔-2-基]氨基甲酸叔丁酯(260mg，77％)。LC-MS(ESI,m/z):556[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代戊-4-炔-2-基]氨基甲酸叔丁酯(260mg，0.484mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的搅拌混合物中添加氯化氢(3mL，4M的二氧杂环己烷溶液)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基戊-4-炔酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(240mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):456[M+H]⁺。

在室温处，向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基戊-4-炔酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(240mg，0.488mmol，1.0当量)和1-氟环丙烷-1-甲酸(50.7mg，0.488mmol，1.0当量)在DMF(3mL)中的搅拌混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(222mg，0.586mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(378mg，2.92mmol，6.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代戊-4-炔-2-基]-1-氟环丙烷-1-甲酰胺(170mg，61％)。LC-MS(ESI,m/z):542[M+H]⁺。

在室温处，向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代戊-4-炔-2-基]-1-氟环丙烷-1-甲酰胺(170mg，0.314mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌混合物中添加吡啶(99.3mg，1.25mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(118mg，0.565mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用DCM(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC用以下条件纯化(柱：Xselect CSH F-PhenylOBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内33％ B至63％ B，63％ B；波长：254nm；RT1(min)：4.95)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-2-[(1-氟环丙基)甲酰胺基]-3,3-二甲基戊-4-炔酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(60mg，36％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d_6,80℃)δ8.50-8.90(m,1H),7.30-7.60(m,1H),6.80-7.20(m,1H),5.92-6.24(m,2H),4.68-4.95(m,1H),4.54-4.65(m,1H),3.94-4.32(m,1H),3.57-3.71(m,1H),3.33-3.52(m,1H),3.06-3.21(m,2H),2.67-3.02(m,5H),2.25-2.45(m,1H),2.06-2.24(m,2H),1.58-1.87(m,2H),1.01 -1.45(m,12H)。LC-MS(ESI,m/z):524[M+H]⁺。

实施例64

化合物64

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(600mg，1.10mmol，1.0当量)在EtOAc(20mL)中的混合物中添加10％活性碳钯(300mg)。将混合物在室温处在氢气下搅拌2h。将混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩，得到呈灰白色固体的N-[(2S)-1-[(1S,2S,3S,6R,7R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(590mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):548[M+H]⁺。

将N-[(2S)-1-[(1S,2S,3S,6R,7R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(590mg，1.08mmol，1.0当量)在氯化氢(20mL，2M的Et₂O溶液)中的混合物在室温处搅拌1h。将混合物减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(520mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):448[M+H]⁺。

在0℃处，向1-氟环丙烷-1-甲酸(112mg，1.07mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(490mg，1.29mmol，1.2当量)在DMF(10mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(833mg，6.44mmol，6.0当量)。在0℃处，搅拌15min后，添加(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(520mg，1.07mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的N-[(2S)-1-[(1S,2S,3S,6R,7R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-1-氟环丙烷-1-甲酰胺(500mg，84％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.16-8.26(m,1H),7.60(s,1H),7.27-7.37(m,2H),6.94-7.08(m,1H),4.70-4.78(m,1H),4.54-4.62(m,1H),4.19-4.33(m,1H),3.75-3.86(m,1H),3.57-3.67(m,1H),3.01-3.19(m,2H),2.53-2.63(m,1H),2.42-2.49(m,1H),2.25-2.39(m,2H),2.08-2.21(m,2H),1.92-1.99(m,1H),1.59-1.70(m,1H),1.44-1.53(m,2H),1.33-1.42(m,3H),1.20-1.30(m,4H),1.06-1.15(m,2H),0.93-1.01(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):534[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1S,2S,3S,6R,7R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-1-氟环丙烷-1-甲酰胺(500mg，0.937mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的混合物中添加吡啶(259mg，3.28mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(295mg，1.40mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用DCM(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge制备型OBD C18柱，30×150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内30％ B至60％ B，60％ B；波长：254nm；RT1(min)：6)纯化，得到呈白色固体的(1S,2S,3S,6R,7R)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-2-[(1-氟环丙基)甲酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酰胺(217.4mg，44％)。¹HNMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.60-8.88(m,1H),7.32-7.60(m,1H),6.72-7.26(m,1H),4.80-5.00(m,1H),4.62-4.79(m,1H),4.21-4.60(m,1H),3.75-3.95(m,1H),3.30-3.70(m,1H),3.05-3.25(m,2H),2.55-2.74(m,1H),2.38-2.45(m,1H),2.26-2.37(m,2H),1.98 -2.25(m,3H),1.65-1.90(m,2H),1.40-1.58(m,2H),1.20-1.39(m,6H),1.05-1.19(m,2H),0.75-1.04(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):516[M+H]⁺。

实施例65

化合物65

在0℃处，向1-氟环丁烷-1-甲酸(66.0mg，0.555mmol，1.2当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(349mg，0.916mmol，2.0当量)在DMF(5mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(593mg，4.58mmol，10.0当量)。在0℃处搅拌20分钟后，添加(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(200mg，0.458mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。过滤混合物。将滤液通过反相色谱法纯化(柱：Agela C₁₈柱，120g；流动相A：水(10mM NH₄HCO₃)，流动相B：ACN；流速：50mL/min；梯度：30min内0％ B至60％ B；波长：210nm)。将收集的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-(1-氟环丁烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(210mg，84％)。LC-MS(ESI,m/z):546[M+H]⁺。

在室温处，向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-(1-氟环丁烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(210mg，0.385mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的溶液中添加吡啶(124mg，1.56mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(147mg，0.700mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌3h。将混合物用水(50mL)稀释并用DCM(3×100mL)萃取。将有机层用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。滤液在减压下浓缩。将粗产物通过反相色谱法纯化(柱：Agela C₁₈柱，120g；流动相A：水(10mM NH₄HCO₃)，流动相B：ACN；流速：50mL/min；梯度：50min内0％ B至100％ B；波长：210nm)，然后通过制备型HPLC再纯化(柱：XBridge Shield RP₁₈ OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内28％ B至58％ B，58％B；波长：254nm；RT(min)：5.18)，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-2-(1-氟环丁烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(73.4mg，36％收率)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.62-8.85(m,1H),7.39-7.59(m,1H),6.80-6.83(m,1H),6.00-6.05(m,1H),5.90-5.96(m,1H),4.90-4.91(m,1H),4.40-4.50(m,1H),4.00-4.15(m,1H),3.64-3.70(m,1H),3.40-3.52(m,1H),2.93-3.20(m,5H),2.70-2.80(m,1H),2.49-2.60(m,1H),2.22-2.48(m,4H),2.05-2.20(m,2H),1.80-1.95(m,1H),1.60-1.80(m,3H),1.30-1.50(m,2H),0.90(s,9H)。LC-MS(ESI,m/z):528[M+H]⁺。

实施例66

化合物66

在0℃处，向双环[1.1.1]戊烷-1-甲酸(62mg，0.555mmol，1.2当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(349mg，0.916mmol，2当量)在DMF(5mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(593mg，4.58mmol，10.0当量)。在0℃处搅拌20分钟后，添加(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(200mg，0.458mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后过滤。将滤液通过反相色谱法纯化(柱：Agela C₁₈柱，120g；流动相A：水(10mM NH₄HCO₃)，流动相B：ACN；流速：50mL/min；梯度：25min内0％ B至50％ B；波长：210nm)。将收集的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-(双环[1.1.1]戊烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(210mg，两步收率85％)。LC-MS(ESI,m/z):540[M+H]⁺。

在室温处，向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-(双环[1.1.1]戊烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(210mg，0.389mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的溶液中添加吡啶(124mg，1.56mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(147mg，0.700mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌3h。将混合物用水(50mL)稀释并用DCM(3×100mL)萃取。将有机层用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。滤液在减压下浓缩。将粗产物通过反相色谱法纯化(柱：Agela C₁₈柱，120g；流动相A：水(10mM NH₄HCO₃)，流动相B：ACN；流速：50mL/min；梯度：50min内0％ B至100％ B；波长：210nm)，然后通过制备型HPLC再纯化(柱：XBridge Shield RP₁₈ OBD柱，30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内28％ B至48％ B，48％B；波长：254nm；RT(min)：4.75)，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-(双环[1.1.1]戊烷-1-甲酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(89.2mg，44％收率)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.61-8.78(m,1H),7.38-7.41(m,1H),6.75(d,J＝9.6Hz,1H),5.96-6.00(m,2H),4.90-4.91(m,1H),4.44(d,J＝8.8Hz,1H),3.98-4.10(m,1H),3.40-3.61(m,2H),3.06-3.30(m,2H),2.90-3.05(m,1H),2.80-2.90(m,2H),2.70-2.80(m,1H),2.40-2.49(m,2H),2.00-2.20(m,2H),1.98(s,6H),1.60-1.80(m,2H),1.30-1.38(m,2H),0.81-0.88(s,9H)。LC-MS(ESI,m/z):522[M+H]⁺。

实施例67

化合物67

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(500mg，0.916mmol，1.0当量)和10％活性碳钯(250mg)的EtOAc(5mL)溶液中的搅拌混合物中。将混合物在室温处在氢气下搅拌1h。将混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩，得到呈灰白色固体的N-[(2S)-1-[(1S,2S,3S,6R,7R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(480mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):548[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1S,2S,3S,6R,7R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(480mg，0.876mmol，1.0当量)在DCM(15mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(5mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(390mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):448[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(480mg，1.07mmol，1.0当量)和2,2-二氯-2-氟乙酸乙酯(938mg，5.36mmol，5.0当量)在甲醇(5mL)中的搅拌混合物中添加三乙胺(1.41g，13.9mmol，13.0当量)。将混合物在室温处搅拌5d，然后减压浓缩以去除甲醇。将混合物用水(20mL)稀释，并且用盐酸(1M)调节至pH＝6。混合物用EtOAc(3×80mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-2-(2,2-二氯-2-氟乙酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(220mg，35％，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):576[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1S,2S,3S,6R,7R)-4-[(2S)-2-(2,2-二氯-2-氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(220mg，0.382mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的搅拌混合物中添加吡啶(120mg，1.52mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(136mg，0.649mmol，1.7当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(15mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×15mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×15mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱XBridge Shield RP18 OBD柱，19*250mm，10μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内40％ B至70％ B，70％ B；波长：254nm；RT1(min)：6.02)纯化，得到呈白色固体的(1S,2S,3S,6R,7R)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-2-(2,2-二氯-2-氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酰胺(57.9mg，26％)。¹HNMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.69-8.89(m,1H),8.08-8.30(m,1H),7.34-7.80(m,1H),4.80-5.00(m,1H),4.60-4.76(m,1H),4.45-4.59(m,1H),3.78-3.90(m,1H),3.52-3.72(m,1H),3.05-3.25(m,2H),2.60-2.73(m,1H),2.30-2.48(m,3H),2.08-2.29(m,3H),1.61-1.92(m,2H),1.38-1.45(m,1H),1.46-1.60(m,1H),1.18-1.32(m,3H),1.08-1.15(m,1H),0.70-1.15(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):558[M+H]⁺。

实施例68

化合物68

向4-甲氧基苯胺(7.00g，56.8mmol，1.0当量)在DCM(100mL)中的溶液中添加2-羟基-2-甲氧基乙酸甲酯(6.83g，56.8mmol，1.0当量)和硫酸镁(34.2g，284mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h。将混合物通过硅藻土垫过滤并用DCM(3×100mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到呈黄色油状物的(Z)-2-((4-甲氧基苯基)亚氨基)乙酸甲酯(11.0g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):194[M+H]⁺。

在室温处，向粉末状分子筛(5.5g)、2-氨基-3-(叔丁氧基)丁酸(499mg，2.85mmol，0.05当量)、磺酰胺(274mg，2.85mmol，0.05当量)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(348mg，2.85mmol，0.05当量)在DCM(60mL)中的混合物中添加(Z)-2-((4-甲氧基苯基)亚氨基)乙酸甲酯(11.0g，56.9mmol，1.0当量)和环丁酸醇(7.66g，91.1mmol，1.6当量)。将混合物在室温处搅拌过夜。将反应用水(50mL)淬灭。将混合物用DCM(3×150mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(16:100)进行色谱分离，得到呈红色油状物的(S)-2-(1-甲酰基环丁基)-2-((4-甲氧基苯基)氨基)乙酸甲酯(2.6g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):278[M+H]⁺。

在氮气和0℃下向甲基三苯基溴化膦(4.69g，13.1mmol，1.4当量)在甲苯(30mL)中的搅拌混合物中添加双(三甲基甲硅烷基)氨基钠(6.55mL，13.1mmol，1.4当量，2M的THF溶液)。将混合物在0℃处搅拌1h，然后添加(S)-2-(1-甲酰基环丁基)-2-((4-甲氧基苯基)氨基)乙酸甲酯(2.6g，9.38mmol，1.0当量)。将混合物在0℃处搅拌1h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(11:100)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的(S)-2-((4-甲氧基苯基)氨基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酸甲酯(820mg，31％)。LC-MS(ESI,m/z):276[M+H]⁺。

向(S)-2-((4-甲氧基苯基)氨基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酸甲酯(820mg，2.98mmol，1.0当量)在CH₃CN(20mL)和H₂O(5mL)中的搅拌混合物中添加硝酸铈铵(8.19g，14.9mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。添加THF(5mL)，并用三乙胺将混合物碱化至pH＝8。添加二碳酸二叔丁酯(3.90g，17.9mmol，6.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用H₂O(30mL)淬灭反应。将混合物用EA(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(6:100)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酸甲酯(470mg，粗产物)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ5.72-5.80(m,1H),5.35-5.52(m,2H),4.45-4.50(m,1H),3.72(s,3H),2.25-2.45(m,1H),2.10-2.21(m,2H),1.75-2.00(m,3H),1.47(s,9H)。LC-MS(ESI,m/z):270[M+H]⁺。

向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酸甲酯(470mg，1.75mmol，1.0当量)在THF(3mL)、H₂O(2mL)和MeOH(1mL)中的混合物中添加氢氧化锂(209mg，8.73mmol，5.0当量)。将混合物在50℃处搅拌1h，然后减压浓缩以去除MeOH。用HCl(1M)将混合物调节至pH＝5。将混合物用EA(3×80mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈灰白色固体的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酸(420mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):256[M+H]⁺。

在0℃处，向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酸(467mg，1.83mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(834mg，2.19mmol，1.2当量)在二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.42g，11.0mmol，6.0当量)。搅拌20min后，添加(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯盐酸盐(420mg，1.83mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。用水(5mL)淬灭反应。将粗产物通过C18柱用CH3CN/水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(430mg，54％)。LC-MS(ESI,m/z):431[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(430mg，1.00mmol，1.0当量)在THF(3mL)、MeOH(1mL)和H₂O(2mL)中的混合物中添加氢氧化锂(120mg，4.99mmol，5.0当量)。将混合物在50℃处搅拌1h。将混合物减压浓缩以去除MeOH。用HCl(1M)将混合物调节至pH＝5。将混合物用EA(3×80mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(310mg，71％)。LC-MS(ESI,m/z):417[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(310mg，0.744mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加在室温处搅拌的三氟乙酸(1mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色半固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-氨基-2-(1-乙烯基环丁基)乙酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(280mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):317[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-氨基-2-(1-乙烯基环丁基)乙酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(280mg，0.885mmol，1.0当量)在MeOH(3mL)中的溶液中添加三乙胺(1.07g，10.6mmol，12.0当量)和2,2,2-三氟乙酸乙酯(1.26g，8.85mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌2d。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物减压浓缩以去除MeOH。将混合物用HCl(1M)调节至pH＝4，然后用EtOAc(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(260mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):413[M+H]⁺。

在0℃处，向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-(1-乙烯基环丁基)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)乙酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(260mg，0.630mmol，1.00当量)在CH₃CN(5mL)中的混合物中添加N,N,N,N-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(212mg，0.756mmol，1.2当量)和1-甲基-1H-咪唑(311mg，3.78mmol，6.0当量)。搅拌20min后，添加(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酰胺(108mg，0.630mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(130mg，36％)。LC-MS(ESI,m/z):566[M+H]+。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(130mg，0.230mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的混合物中添加吡啶(90.9mg，1.15mmol，5.0当量)和三氟乙酸酐(86.9mg，0.414mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Xselect CSH C18 OBD柱30*150mm 5μm，n；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：8min内30％ B至60％ B，60％ B；波长：254/220nm；RT1(min)：6；)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)-2-(1-乙烯基环丁基)乙酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(46.2mg，36％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.94-9.00(m,1H),8.60-8.77(m,1H),7.38-7.52(m,1H),5.99-6.18(m,2H),5.83-5.98(m,1H),5.15-5.20(m,2H),4.79-4.92(m,1H),4.52-4.69(m,1H),3.88-4.02(m,1H),3.56-3.64(m,1H),3.27-3.34(m,1H),3.00-3.21(m,3H),2.84-2.97(m,2H),2.66-2.79(m,1H),2.24-2.40(m,2H),1.97-2.21(m,3H),1.56-1.66(m,3H),1.68-1.89(m,3H),1.31-1.43(m,2H)。LC-MS(ESI,m/z):548[M+H]⁺。

实施例69

化合物69

在0℃处，向甲基三苯基溴化膦(13.2g，37.2mmol，1.1当量)在甲苯(100mL)中的溶液中添加双(三甲基甲硅烷基)氨基钠(6.80g，37.2mmol，1.1当量)。将混合物升温至室温并搅拌30min。冷却至0℃后，添加(2S)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]-3,3-二甲基-4-氧代丁酸甲酯(9.00g，33.9mmol，1.0当量)在甲苯中的溶液。将混合物搅拌过夜并倒入冰水(100mL)中。将混合物用乙酸乙酯(3×200mL)萃取。将有机相合并，用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(12:88)进行色谱分离，得到呈棕色油状物的(2S)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]-3,3-二甲基戊-4-烯酸甲酯(5.00g，56％)。LC-MS(ESI,m/z):264[M+H]⁺。

在室温处，向(2S)-2-[(4-甲氧基苯基)氨基]-3,3-二甲基戊-4-烯酸甲酯(5.00g，18.9mmol，1.0当量)在CH₃CN(45mL)和H₂O(15mL)中的搅拌混合物中添加硝酸铈铵(52.2g，94.9mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。向混合物中添加THF(10mL)并用三乙胺碱化至pH＝8。添加二碳酸二叔丁酯(24.8g，113mmol，6.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水淬灭反应。将混合物用EA(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(1:9)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基戊-4-烯酸甲酯(3.2g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):158[M-100+H]⁺。

在-30℃处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基戊-4-烯酸甲酯(1.80g，7.00mmol，1.0当量)在Et₂O(20mL)中的溶液中添加重氮甲烷(54.0g，210mmol，30.0当量)和乙酸钯(II)(0.235g，1.05mmol，0.15当量)。将混合物在室温处搅拌1h，然后过滤。将滤饼用乙醚(3×80mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(13:87)进行色谱分离，得到呈浅黄色油状物的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-环丙基-3-甲基丁酸甲酯(0.800g，42％)。LC-MS(ESI,m/z):272[M+H]⁺。

在室温处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-环丙基-3-甲基丁酸甲酯(800mg，2.95mmol，1.0当量)在THF(18mL)和H₂O(18mL)中的搅拌混合物中添加氢氧化锂(338mg，14.7mmol，5.0当量)。将混合物在60℃处搅拌3h。将混合物用盐酸(2M)酸化至pH＝3。将水层用EA(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-环丙基-3-甲基丙酸(500mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):258[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-环丙基-3-甲基丁酸(500mg，1.94mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(886mg，2.33mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.50g，11.6mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃添加(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯(375mg，1.94mmol，1.00当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-环丙基-3-甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯(450mg，53％)。LC-MS(ESI,m/z):433[M+H]⁺。

在室温处，向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-环丙基-3-甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯(450mg，1.04mmol，1.0当量)在THF(5mL)和H₂O(5mL)中的搅拌混合物中添加氢氧化锂(119mg，5.20mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h，然后用盐酸(1M)酸化至pH＝3。将水层用EA(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，并经无水硫酸钠干燥。将混合物减压浓缩，得到呈浅橙色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-环丙基-3-甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(400mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):419[M+H]⁺。

在室温处，向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-环丙基-3-甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(400mg，0.956mmol，1.0当量)在DCM(5mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(1.7mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕黄色油状物的(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3-环丙基-3-甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(338mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):319[M+H]⁺。

向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3-环丙基-3-甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(0.338g，1.06mmol，1.0当量)和三乙胺(1.28g，12.7mmol，12当量)在MeOH(4mL)中的搅拌混合物中添加2,2,2-三氟乙酸乙酯(1.50g，10.6mmol，10当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，然后用盐酸(1M)酸化至pH＝4。将混合物用EA(3×20mL)萃取。将合并的有机层减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3-环丙基-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(0.33g，75％)。LC-MS(ESI,m/z):415[M+H]⁺。

在0℃处，向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3-环丙基-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(285mg，0.688mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(313mg，0.825mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(531mg，4.12mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(117mg，0.688mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3-环丙基-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(160mg，40％)。LC-MS(ESI,m/z):568[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3-环丙基-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(160mg，0.282mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中添加吡啶(77.9mg，0.987mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(94.7mg，0.451mmol，1.6当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用EtOAc(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Kinetex EVO C18柱，30*150，5um；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内39％ B至59％ B，59％ B；波长：254nm；RT1(min)：5)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3-环丙基-3-甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(79.8mg，51％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.10-9.15(m,2H),7.30-7.65(m,1H),5.95-6.30(m,2H),4.80-5.00(m,1H),4.55-4.75(m,1H),3.85-4.30(m,1H),3.60-3.80(m,1H),3.35-3.60(m,1H),3.10-3.30(m,2H),3.00-3.05(m,1H),2.80-3.00(m,2H),2.65-2.80(m,1H),2.25-2.45(m,1H),2.00-2.25(m,2H),1.60-1.95(m,2H),1.30-1.50(m,2H),0.60-0.98(m,7H),0.20-0.35(m,3H),0.05-0.20(m,1H)。LC-MS(ESI,m/z):550[M+H]⁺。

实施例70

化合物70

使用(S)-3,3-二甲基-2-(2-氧代吡咯烷-1-基)丁酸代替(S)-3,3-二甲基-2-(4-(三氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酸甲酯，与针对化合物42所述类似地制备化合物70。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.54(d,1H),7.30-7.44(m,1H),5.97-6.12(m,2H),4.77-4.94(m,1H),4.21-4.55(m,1H),3.95-4.06(m,1H),3.62(m,1H),3.41-3.56(m,1H),3.25-3.40(m,2H),3.07-3.24(m,2H),3.09(m,1H),2.85-2.95(m,2H),2.68-2.82(m,1H),2.29-2.41(m,2H),2.05-2.24(m,3H),1.65-1.98(m,4H),1.39(m,2H),0.94(s,9H)。LCMS(ESI,m/z):496[M+H]⁺。

(S)-3,3-二甲基-2-(2-氧代吡咯烷-1-基)丁酸：向在0℃处冷却的(S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酸甲酯盐酸盐(1g，5.52mmol，1.0当量)在DCM(30mL)中的悬浮液中添加吡啶(0.91mL，11.0mmol，2.0当量)和4-溴丁酰氯(0.76mL，6.62mmol，1.2当量)。将混合物在室温处搅拌16h，然后用水洗涤。分离各相。将水相用DCM(3×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(15mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(10％至15％)在己烷中的梯度来纯化，得到呈黄色液体的(S)-2-(4-溴丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酸甲酯(1.1g，68％)。

向在0℃处冷却的(S)-2-(4-溴丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酸甲酯(500mg，1.70mmol，1.0当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加NaH(68mg，2.83mmol，1.7当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将反应通过添加饱和NH₄Cl淬灭。将混合物用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，用冷水(3×10mL)和盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(10％至15％)在己烷中的梯度来纯化，得到呈黄色液体的(S)-3,3-二甲基-2-(2-氧代吡咯烷-1-基)丁酸甲酯(250mg，69％)。

向在0℃处冷却的(S)-3,3-二甲基-2-(2-氧代吡咯烷-1-基)丁酸甲酯(400mg，1.86mmol，1.0当量)在THF(2mL)和水(2mL)中的溶液中添加LiOH(197mg，4.67mmol，2.5当量)。将混合物在室温处搅拌16h，然后部分减压浓缩以去除THF。将残余物用水(5mL)稀释并用Et₂O(2×10mL)萃取。将水层用2N HCl酸化，并用10％iPrOH的DCM溶液(5×10mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物用5％ Et₂O的戊烷溶液研磨，提供呈白色固体的(S)-3,3-二甲基-2-(2-氧代吡咯烷-1-基)丁酸(250mg，67％)。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ12.76(s,1H),4.42(s,1H),3.64(m,1H),3.51(m,1H),2.19-2.27(m,2H),1.90(m,2H),1.00(s,9H)。

实施例71

化合物71

使用(+/-)-甲基(1S,3aR,4R,7S,7aS)-八氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐代替(+/-)-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-八氢-1H-4,7-环氧异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐，与针对化合物58所述类似地制备化合物71。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.50-8.98(m,2H),7.32-7.46(m,1H),4.91(m,1H),4.59-4.77(m,1H),4.27-4.54(m,1H),3.57-3.94(m,2H),3.05-3.22(m,2H),2.10-2.44(m,4H),1.65-1.85(m,3H),1.22-1.62(m,10H),0.90-1.09(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):540[M+H]⁺。

(+/-)-甲基(1S,3aR,4R,7S,7aS)-八氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐：将(3aR,4S,7R,7aS)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚(7g，46.9mmol，1.0当量)和10％ Pd/C(700mg)在MeOH(150mL)中的混合物在H₂压力(60psi)下于室温处搅拌16h。混合物通过硅藻土过滤，并且固体用MeOH(50mL)洗涤。将滤液减压浓缩，得到呈无色油状物的(3aR,4R,7S,7aS)-八氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚(6.1g，86％)。

向(3aR,4R,7S,7aS)-八氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚(500mg，3.31mmol，1.0当量)在DCM(15mL)中的溶液中添加IBX(926mg，3.31mmol，1.0当量)。将混合物在60℃处在密封管中搅拌1h。在冷却至室温后，将混合物用饱和连二硫酸钠(10mL)洗涤。分离各相。用饱和碳酸钠(10mL)和盐水(10mL)洗涤有机相。将水相用DCM(3×30mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(2％至3％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈灰白色固体的(3aS,4S,7R,7aR)-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚(335mg，68％)。

向在0℃处冷却的(3aS,4S,7R,7aR)-3a,4,5,6,7,7a-六氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚(330mg，2.21mmol，1.0当量)在DCM(3.3mL)和MeOH(0.3mL)中的溶液中添加TMSCN(0.7mL，5.53mmol，2.5当量)。将混合物在0℃至10℃处搅拌4h。将混合物减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(15％至20％)在PE中的梯度来纯化，得到呈白色油状物的(+/-)-(1S,3aR,4R,7S,7aS)-八氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲腈(330mg，85％)。

将(+/-)-(1S,3aR,4R,7S,7aS)-八氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲腈(330mg，1.87mmol，1.0当量)在4N HCl/MeOH(6.6mL)中的溶液在60℃处搅拌6h。将混合物减压浓缩，得到呈白色油状物的(+/-)-甲基(1S,3aR,4R,7S,7aS)-八氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐(400mg，87％)。

实施例71-1

化合物71a

使用2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4S*,7R*,7aR*)-八氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯代替2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯，与针对化合物59a所述类似地制备化合物71a。¹HNMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.53-8.91(m,2H),7.36(s,1H),4.92(m,1H),4.65(s,1H),4.25-4.54(m,1H),3.71-3.94(m,2H),3.17(m,2H),2.45(m,1H),2.17-2.38(m,2H),1.99-2.13(m,1H),1.66-1.87(m,3H),1.20-1.64(m,10H),0.90-1.08(s,9H)。LCMS(ESI,m/z):538[M-H]^-。

2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4S*,7R*,7aR*)-八氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯：向在0℃处冷却的(+/-)-甲基(1S,3aR,4R,7S,7aS)-八氢-1H-4,7-亚乙基异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐(1.8g，7.33mmol，1.0当量)在二氧杂环己烷(36mL)中的溶液中添加Na₂CO₃(3.1g，29.3mmol，4.0当量)和Boc₂O(6.4g，29.3mmol，4.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用EA(100mL)稀释并用水洗涤。分离各相。将有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(10％至20％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色油状物的(+/-)-2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aR,4R,7S,7aS)-八氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯(2.0g，95％)。

(+/-)-2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aR,4R,7S,7aS)-八氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯(2.0g)通过制备型SFC使用以下条件纯化：柱：Chiralpak IG，30*250mm，5μm；流动相A：CO₂，流动相B：己烷/iPrOH(1/1)；流速：90g/min；梯度：等度10％ B；柱温：30℃；背压：100巴。纯化得到2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4S*,7R*,7aR*)-八氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯(400mg)和2-(叔丁基)1-甲基(1S*,3aR*,4R*,7S*,7aS*)-八氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯(350mg)。

2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4S*,7R*,7aR*)-八氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.21-4.35(m,1H),3.72(s,3H),3.48-3.70(m,2H),2.37(m,2H),1.30-1.75(m,19H)。[α]²⁵ _D:+30.1°(c 0.1,CHCl₃)。SFC：CHIRALPAK IG，4.6*150mm，5μm，流动相A：CO₂，流动相B：己烷/iPrOH(1/1)；流速：3g/min；梯度：等度10％ B；柱温：30℃；背压：100巴，Rt：2.02min。

2-(叔丁基)1-甲基(1S*,3aR*,4R*,7S*,7aS*)-八氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.21-4.35(m,1H),3.72(s,3H),3.48-3.70(m,2H),2.37(m,2H),1.30-1.75(m,19H)。[α]²⁵ _D:-33.1°(c 0.1,CHCl₃)。SFC：CHIRALPAK IG，4.6*150mm，5μm，流动相A：CO₂，流动相B：己烷/iPrOH(1/1)；流速：3g/min；梯度：等度10％ B；柱温：30℃；背压：100巴，Rt：2.43min。

实施例71-2

化合物71b

使用2-(叔丁基)1-甲基(1S*,3aR*,4R*,7S*,7aS*)-八氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯代替2-(叔丁基)1-甲基(1R*,3aS*,4R*,7S*,7aR*)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚乙基异吲哚-1,2-二甲酸酯，与针对化合物59a所述类似地制备化合物71b。¹HNMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.65-8.98(m,2H),7.37-7.50(m,1H),4.92(m,1H),4.62-4.72(m,1H),4.28-4.52(m,1H),3.90(m,1H),3.80-3.85(m,1H),3.06-3.20(m,2H),2.33-2.43(m,1H),2.22-2.13(m,3H),1.67-1.81(m,3H),1.22-1.64(m,10H),0.95-1.05(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):540[M+H]⁺。

实施例72

化合物72

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(120mg，0.249mmol，1.0当量)在DMF(1.2mL)中的溶液中添加2,2-二氟乙酸(60mg，0.625mmol，1.0当量)、EDC·HCl(96mg，0.501mmol，2.0当量)、HOAt(35mg，0.257mmol，1.0当量)和NEt₃(0.172mL，1.25mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(10mL)稀释并用10％ MeOH的DCM溶液(3×10mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-(2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(65mg，50％)。LC-MS(ESI,m/z):524[M+H]⁺。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-(2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(65mg，0.124mmol，1.0当量)在DMF(0.7mL)中的溶液中添加吡啶(0.030mL，0.372mmol，3.0当量)和TFAA(0.035mL；0.248mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物用水(10mL)稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：X-SELECT-C18柱，19*250mm，5μm；流动相A：10mM NH₄HCO₃的水溶液，流动相B：ACN；流速：17mL/min；梯度：在8min内10％ B至60％ B)，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-2-(2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(26mg，42％)。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.57-8.85(m,1H),7.93-8.38(m,1H),7.28-7.45(m,1H),6.10-6.45(m,1H),5.94-6.06(m,2H),4.62-4.96(m,1H),4.48(d,1H),3.96-4.15(m,1H),3.66(m,1H),3.37-3.51(m,1H),3.03-3.22(m,3H),2.89-2.95(m,2H),2.73(m,1H),2.37(m,1H),2.14(m,2H),1.64-1.83(m,2H),1.32-1.45(m,2H),0.83-0.97(s,9H)。LCMS(ESI,m/z):506[M+H]⁺。

实施例73

化合物73

使用2,2-二氟丙酸代替2,2-二氟乙酸，与针对化合物72所述类似地制备化合物73。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.58-8.82(m,1H),6.95-7.50(m,2H),5.92-6.18(m,2H),4.69-4.95(m,1H),4.46(d,1H),3.97-4.13(m,1H),3.65(m,1H),3.36-3.49(m,1H),3.02-3.25(m,3H),2.90-3.00(m,2H),2.74(m,1H),2.34(m,1H),2.15(m,2H),1.63-1.85(m,5H),1.31-1.45(m,2H),0.80-0.99(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):520[M+H]⁺。

实施例74

化合物74

使用2-氟-2-甲基丙酸代替2,2-二氟乙酸，与针对化合物72所述类似地制备化合物74。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.54-8.81(m,1H),7.28-7.47(m,1H),6.57-6.90(m,1H),5.92-6.20(m,2H),4.68-4.95(m,1H),4.44(d,1H),3.98-4.12(m,1H),3.63(m,1H),3.35-3.55(m,1H),3.02-3.25(m,3H),2.98-2.88(m,2H),2.74(m,1H),2.34(m,1H),2.14(m,2H),1.64-1.88(m,2H),1.32-1.58(m,8H),0.83-0.96(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):516[M+H]⁺。

实施例75

化合物75

使用3,3,3-三氟-2,2-二甲基丙酸代替2,2-二氟乙酸，与针对化合物72所述类似地制备化合物75。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.56-8.79(m,1H),7.29-7.47(m,1H),6.39-6.78(m,1H),5.84-6.23(m,2H),4.68-4.95(m,1H),4.52(d,1H),4.00-4.13(m,1H),3.61(m,1H),3.36-3.51(m,1H),3.03-3.22(m,3H),2.90-3.00(m,2H),2.74(m,1H),2.33(m,1H),2.15(m,2H),1.62-1.90(m,2H),1.21-1.46(m,8H),0.78-0.98(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):566[M+H]⁺。

实施例76

化合物76

向在0℃处冷却的三甲基硅醇钾(67mg，0.522mmol，1.0当量)在Et₂O(1mL)中的悬浮液中滴加2,2,3,3,3-五氟丙酸乙酯(100mg，0.521mmol，1.0当量)在Et₂O(1mL)中的溶液。将混合物在室温处搅拌16h，然后减压浓缩。将残余物用Et₂O研磨。过滤并且减压干燥固体，得到呈灰白色固体的2,2,3,3,3-五氟丙酸钾(85mg，80％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(60mg，0.124mmol，1.0当量)、2,2,3,3,3-五氟丙酸钾(25mg，0.195mmol，1.6当量)和50％ T3P在EA(0.390g，1.25mmol，10.0当量)中的混合物中添加吡啶(0.050mL，0.620mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(10mL)稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶柱上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度，并通过制备型HPLC(柱：YMC-TRIART-C18，25*150mm，10μm；流动相A：10mM NH₄HCO₃的水溶液，流动相B：ACN；流速：22mL/min；梯度：在8min内20％ B至80％B)纯化，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(30mg，40％)。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.49-8.83(m,2H),7.29-7.46(m,1H),5.91-6.22(m,2H),4.60-4.97(m,1H),4.55(s,1H),4.00-4.16(m,1H),3.65(m,1H),3.36-3.51(m,1H),3.03-3.23(m,3H),2.88-2.96(m,2H),2.72(m,1H),2.37(m,1H),2.15(m,2H),1.64-1.94(m,2H),1.35-1.46(m,2H),0.82-1.00(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):574[M+H]⁺。

实施例77

化合物77

使用2-甲氧基-2-甲基丙酸代替2,2-二氟乙酸，与针对化合物72所述类似地制备化合物77。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.57-8.80(m,1H),7.29-7.47(m,1H),6.78-7.01(m,1H),5.86-6.20(m,2H),4.70-4.96(m,1H),4.41(d,1H),3.98-4.12(m,1H),3.62(m,1H),3.33-3.54(m,1H),3.05-3.23(m,6H),2.86-2.94(m,2H),2.73(m,1H),2.33(m,1H),2.15(m,2H),1.64-1.84(m,2H),1.17-1.43(m,8H),0.80-0.96(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):528[M+H]⁺。

实施例78

化合物78

使用(R)-3,3,3-三氟-2-甲氧基-2-甲基丙酸代替2,2-二氟乙酸，与针对化合物72所述类似地制备化合物78。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.56-8.74(m,1H),7.30-7.46(m,1H),6.94-7.20(m,1H),5.87-6.22(m,2H),4.75-4.98(m,1H),4.44(m,1H),3.97-4.13(m,1H),3.62(m,1H),3.36-3.54(m,1H),3.29-3.33(m,3H),3.02-3.25(m,3H),2.87-2.97(m,2H),2.75(m,1H),2.32(m,1H),2.15(m,2H),1.62-1.93(m,2H),1.33-1.58(m,5H),0.78-0.93(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):580[M-H]^-。

实施例79

化合物79

使用(S)-3,3,3-三氟-2-甲氧基-2-甲基丙酸代替2,2-二氟乙酸，与针对化合物72所述类似地制备化合物79。¹H NMR(500MHz,362K,DMSO-d₆)δ8.64(br.s.,1H),7.36(s,1H),6.95-7.21(m,1H),5.84-6.22(m,2H),4.55-4.93(m,1H),4.46(m,1H),4.01-4.13(m,1H),3.62(m,1H),3.47(m,1H),3.37-3.44(m,3H),3.05-3.21(m,3H),2.87-2.94(m,2H),2.73(m,1H),2.34(m,1H),2.14(m,2H),1.65-1.87(m,2H),1.50-1.57(m,3H),1.37(m,2H),0.83-0.95(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):580[M-H]^-。

实施例80

化合物80

使用O-甲基-L-苏氨酸代替(2S,3R)-2-氨基-3-(叔丁氧基)丁酸，与针对化合物3所述类似地制备化合物80。¹H NMR(500MHz,362K,DMSO-d₆)δ8.98-9.26(br.s.,1H),8.44-8.70(m,1H),7.27-7.49(m,1H),5.92-6.22(m,2H),4.75-4.95(m,1H),4.20-4.46(m,1H),3.90-4.02(m,1H),3.54-3.74(m,2H),3.33-3.52(m,1H),3.15-3.30(m,3H),3.04-3.14(m,3H),2.88-2.97(m,2H),2.74(m,1H),2.34(m,1H),2.14(m,2H),1.62-1.89(m,2H),1.30-1.45(m,2H),0.94-1.12(m,3H)。LCMS(ESI,m/z):524[M-H]^-。

实施例81

化合物81

使用3,3,3-三氟丙酸代替2,2-二氟乙酸，与针对化合物72所述类似地制备化合物81。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)8.60-8.74(m,1H),7.80-8.10(m,1H),7.34-7.46(m,1H),5.93-6.18(m,2H),4.67-4.94(m,1H),4.15-4.48(m,1H),3.97-4.11(m,1H),3.64(m,1H),3.49(m,1H),3.34(m,2H),3.05-3.23(m,3H),2.87-2.96(m,2H),2.72(m,1H),2.37(m,1H),2.14(m,2H),1.64-1.89(m,2H),1.35-1.45(m,2H),0.83-0.97(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):538[M+H]⁺。

实施例82

化合物82

将1,2,3,4-四氯-5,5-二甲氧基环戊-1,3-二烯(17.4g，66.0mmol，1.5当量)和1-叔丁基2-甲基(2S)-2,5-二氢吡咯-1,2-二甲酸酯(10.0g，44.0mmol，1.0当量)在甲苯(10mL)中的混合物在110℃和氮气下搅拌过夜，然后减压浓缩。将残余物在硅胶柱上用EA:PE(17:100)进行色谱分离，得到粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的4-叔丁基3-甲基(1S,2S,3S,6R,7R)-1,7,8,9-四氯-10,10-二甲氧基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3,4-二甲酸酯(7.5g，31％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ4.02-4.23(m,1H),3.65-3.77(m,3H),3.51-3.58(m,3H),3.45-3.49(m,3H),3.31-3.44(m,4H),1.23-1.47(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):392[M-Boc+H]⁺。

向4-叔丁基3-甲基(1S,2S,3S,6R,7R)-1,7,8,9-四氯-10,10-二甲氧基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3,4-二甲酸酯(7.50g，15.2mmol，1.0当量)在THF(40mL)/水(40mL)中的搅拌溶液中添加氢氧化锂(1.46g，61.0mmol，4.0当量)。将混合物在50℃处搅拌2h，然后减压浓缩以去除四氢呋喃。将混合物用盐酸(2M)酸化至pH＝6，并用EtOAc(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈灰白色固体的(1S,2S,3S,6R,7R)-4-(叔丁氧基羰基)-1,7,8,9-四氯-10,10-二甲氧基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(6.3g，86％，粗产物)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ3.99-4.08(m,1H),3.50-3.58(m,3H),3.43-3.47(m,3H),3.22-3.42(m,4H),1.25-1.48(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):378[M-Boc+H]⁺。

在氮气和-40℃下向钠(6×1.68g，438mmol，35.0当量)在液体NH₃(6×34mL)中的搅拌溶液中滴加(1S,2S,3S,6R,7R)-4-(叔丁氧基羰基)-1,7,8,9-四氯-10,10-二甲氧基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(6×1.00g，12.5mmol，1.0当量)的EtOH/乙醚(6×16mL，1:1比率)溶液20min。将混合物在-40℃处搅拌20min，然后添加NH₄Cl(6×2g)。将混合物在2h内升温至室温，然后用水(6×50mL)稀释。将混合物用EtOAc(300mL)萃取。将水相用盐酸(2M)酸化至pH＝6。将混合物用EtOAc(3×300mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈棕色油状物的(1R,2R,3S,6S,7S)-4-(叔丁氧基羰基)-10,10-二甲氧基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(3.4g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):240[M-Boc+H]⁺。

向(1R,2R,3S,6S,7S)-4-(叔丁氧基羰基)-10,10-二甲氧基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(3.40g，10.0mmol，1.0当量)和碳酸钾(2.22g，16.0mmol，1.6当量)在DMF(30mL)中的搅拌混合物中添加碘甲烷(1.49g，10.5mmol，1.05当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(100mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(31:100)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的4-叔丁基3-甲基(1R,2R,3S,6S,7S)-10,10-二甲氧基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3,4-二甲酸酯(1.62g，41％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.07-6.23(m,2H),3.70-3.86(m,1H),3.60-3.69(m,3H),3.26-3.33(m,1H),3.08-3.12(m,3H),3.01-3.07(m,2H),2.97-3.00(m,3H),2.78-2.96(m,3H),1.23-1.44(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):254[M-Boc+H]⁺。

向4-叔丁基3-甲基(1R,2R,3S,6S,7S)-10,10-二甲氧基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3,4-二甲酸酯(1.62g，4.58mmol，1.0当量)在二氧杂环己烷(3mL)中的搅拌混合物中添加氯化氢(20mL，4M二氧杂环己烷溶液)。将混合物在80℃处搅拌过夜，然后减压浓缩，得到呈灰白色固体的(1R,2R,3S,6S,7S)-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯(949mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):208[M+H]⁺。

向(1R,2R,3S,6S,7S)-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯(949mg，4.57mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的搅拌混合物中添加三乙胺(1.39g，13.7mmol，3.0当量)和二碳酸二叔丁酯(1.30g，5.95mmol，1.3当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(50mL)淬灭。将混合物用DCM(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(29:100)进行色谱分离，得到呈灰白色固体的4-叔丁基3-甲基(1R,2R,3S,6S,7S)-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3,4-二甲酸酯(800mg，56％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.46-6.71(m,2H),3.80-4.00(m,1H),3.57-3.75(m,3H),3.38-3.48(m,1H),2.95-3.27(m,5H),1.11-1.49(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):208[M-Boc+H]⁺。

将2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aS,4S,7R,7aR)-8-氧代-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯(500mg，1.63mmol，1.0当量)在二乙基氨基三氟化硫(10mL)中的混合物在45℃处搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷(30mL)稀释。在0℃处，用饱和碳酸氢钠(50mL)淬灭反应。将混合物用二氯甲烷(3×80mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法用PE:EA(7:3)纯化，得到呈黄色油状物的2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aS,4S,7R,7aR)-8,8-二氟-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯(350mg，65％)。LC-MS(ESI,m/z):230[M-Boc+H]⁺。

在室温处，向2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aS,4S,7R,7aR)-8,8-二氟-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯(350mg，1.06mmol，1.0当量)在二氯甲烷(4mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(1.3mL)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1S,3aS,4S,7R,7aR)-8,8-二氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(243mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):230[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酸(246mg，1.06mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(485mg，1.28mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(825mg，6.38mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(1S,3aS,4S,7R,7aR)-8,8-二氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(243mg，1.06mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(1S,3aS,4S,7R,7aR)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-8,8-二氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(300mg，63％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.58-6.72(m,1H),6.02-6.35(m,2H),4.19-4.31(m,1H),4.05-4.13(m,1H),3.70-3.87(m,1H),3.61-3.69(m,3H),3.43-3.59(m,1H),3.19-3.36(m,2H),2.93-3.16(m,2H),1.30-1.49(m,9H),0.77-1.00(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):443[M+H]⁺。

在室温处，向搅拌的(1S,3aS,4S,7R,7aR)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-8,8-二氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(300mg，0.680mmol，1.0当量)在四氢呋喃(3mL)和水(3mL)中的溶液中添加氢氧化锂(81.2mg，3.39mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物用盐酸(2M)酸化至pH＝3，然后用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩，得到呈橙色固体的(1S,3aS,4S,7R,7aR)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-8,8-二氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(265mg，粗产物)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.51-13.00(m,1H),6.43-6.78(m,1H),5.93-6.33(m,2H),4.10-4.19(m,1H),3.65-3.89(m,1H),3.48-3.60(m,1H),3.15-3.44(m,3H),2.90-3.13(m,2H),1.22-1.60(m,9H),0.61-1.04(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):429[M+H]⁺。

在室温处，向(1S,3aS,4S,7R,7aR)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-8,8-二氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(265mg，0.618mmol，1.0当量)在二氯甲烷(3mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(1mL)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1S,3aS,4S,7R,7aR)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-8,8-二氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(203mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):329[M+H]⁺。

向(1S,3aS,4S,7R,7aR)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-8,8-二氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(203mg，0.618mmol，1.0当量)和三甲胺(750mg，7.41mmol，12当量)在MeOH(2mL)中的搅拌混合物中添加2,2,2-三氟乙酸乙酯(878mg，6.18mmol，10当量)。将混合物在室温处搅拌2天，然后用盐酸(2M)酸化至pH＝4。将混合物用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，并经无水硫酸钠干燥。将合并的有机层减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的(1S,3aS,4S,7R,7aR)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-8,8-二氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(250mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):425[M+H]⁺。

在0℃处，向(1S,3aS,4S,7R,7aR)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-8,8-二氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(250mg，0.590mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(269mg，0.708mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(457mg，3.54mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(101mg，0.590mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(1S,3aS,4S,7R,7aR)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-8,8-二氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(170mg，50％)。LC-MS(ESI,m/z):578[M+H]⁺。

向(1S,3aS,4S,7R,7aR)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-8,8-二氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(170mg，0.294mmol，1.0当量)在二氯甲烷(2mL)中的混合物中添加吡啶(92.4mg，1.17mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(92.6mg，0.441mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge制备型OBD C18柱，30*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：60mL/min；梯度：7min内30％ B至60％ B，60％ B；波长：254nm；RT1(min)：6)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aS,4S,7R,7aR)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-8,8-二氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(49.1mg，28％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.30-9.20(m,2H),7.30-7.70(m,1H),6.00-6.40(m,2H),4.60-5.05(m,1H),4.30-4.55(m,1H),4.10-4.28(m,1H),3.65-3.90(m,1H),3.40-3.65(m,1H),3.25-3.40(m,1H),3.05-3.20(m,4H),2.80-2.95(m,1H),2.25-2.45(m,1H),2.05-2.25(m,2H),1.60-2.00(m,2H),0.80-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):560[M+H]⁺。

实施例83

化合物83、化合物83a和化合物83b

在氮气下，向1-叔丁基5-甲基(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-亚甲基戊二酸酯(1.00g，3.03mmol，1.0当量)、2,4,5,6-四-9H-咔唑-9-基-1,3-苯二腈(24.0mg，0.030mmol，0.01当量)和四丁基叠氮化铵(86.0mg，0.303mmol，0.1当量)在乙腈(20mL)中的混合物中添加3,3-二氟环丁-1-胺(325mg，3.03mmol，1.0当量)。将混合物在25℃和氮气下用450nm LED灯搅拌3天。将混合物减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(3:97)进行色谱分离，得到呈棕色固体的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸叔丁酯(830mg，60％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.13-8.23(m,1H),7.17-7.31(m,1H),3.76-4.09(m,1H),2.82-3.01(m,1H),2.59-2.81(m,3H),2.31-2.45(m,2H),1.94-2.08(m,1H),1.80-1.93(m,1H),1.48-1.60(m,1H),1.29-1.47(m,18H)。LC-MS(ESI,m/z):405[M+H]⁺。

将(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸叔丁酯(800mg，1.98mmol，1.0当量)在盐酸(10mL，9M)/甲醇(10mL)中的混合物在室温处搅拌2天。将混合物减压浓缩，得到呈棕色固体的(2S)-2-氨基-3-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸甲酯盐酸盐(590mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):263[M+H]⁺。

向(2S)-2-氨基-3-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸甲酯盐酸盐(590mg，1.98mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的混合物中添加三乙胺(600mg，5.92mmol，3.0当量)和二碳酸二叔丁酯(517mg，2.37mmol，1.2当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用DCM(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈棕色油状物的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸甲酯(720mg，粗产物)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.23(s,1H),7.23-7.45(m,1H),4.00-4.31(m,1H),3.55-3.69(m,3H),2.59-3.05(m,4H),2.27-2.47(m,2H),1.94-2.17(m,1H),1.77-1.89(m,1H),1.52-1.62(m,1H),1.32-1.40(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):363[M+H]⁺。

将(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸甲酯(720mg，1.99mmol，1.0当量)在氨(10mL，7M MeOH溶液)中的混合物在80℃处搅拌过夜。将混合物减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(1:9)进行色谱分离，得到呈浅黄色固体的N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]氨基甲酸叔丁酯(260mg，35％)。LC-MS(ESI,m/z):348[M+H]⁺。

向N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]氨基甲酸叔丁酯(230mg，0.662mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的溶液中添加三氟乙酸(3mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(2S)-2-氨基-3-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酰胺(164mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):248[M+H]⁺。

在0℃处，向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(258mg，0.663mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(303mg，0.796mmol，1.2当量)在DMF(5mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(514mg，3.98mmol，6.0当量)。在0℃处搅拌15min后，添加(2S)-2-氨基-3-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酰胺(164mg，0.663mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈灰白色固体的(2S)-3-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}丙酰胺(350mg，82％)。LC-MS(ESI,m/z):618[M+H]⁺。

向(2S)-3-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}丙酰胺(350mg，0.567mmol，1.0当量)在DCM(5mL)中的混合物中添加吡啶(157mg，1.98mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(178mg，0.850mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用DCM(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19×250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内46％ B至70％ B，70％ B；波长：254nm；RT：6.45min)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(129.9mg，38％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.75-9.00(m,1H),8.35-8.74(m,1H),7.95-8.23(m,1H),5.94-6.26(m,2H),4.82-5.00(m,1H),4.40-4.68(m,1H),3.95-4.22(m,1H),3.55-3.75(m,1H),3.32-3.53(m,1H),3.05-3.28(m,1H),2.75-2.98(m,3H),2.48-2.74(m,5H),2.08-2.46(m,2H),1.86-2.02(m,1H),1.68-1.85(m,1H),1.30-1.50(m,2H),0.80-1.05(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):600[M+H]⁺。

N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]氨基甲酸叔丁酯(650mg，1.87mmol，1.0当量)通过制备型SFC-HPLC柱(柱：Lux 5umCelluloes-3，5×25cm，5μm；流动相A：CO₂，流动相B：MeOH(0.1％2M NH₃-MeOH)；流速：100mL/min；梯度：等度20％ B；柱温(℃)：35；背压(巴)：100；波长：220nm；RT1(min)：5.3；RT2(min)：6.07；样品溶剂：MeOH(0.1％2M NH₃-MeOH)；进样体积：2mL；)分离，得到呈白色固体的第1峰(异构体1，(N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(7*S)-2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(270mg，41％)，de>99％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.16(s,1H),7.25-7.40(m,1H),7.03(s,1H),6.82-6.93(m,1H),3.84-4.04(m,1H),2.82-3.02(m,1H),2.58-2.80(m,3H),2.31-2.48(m,2H),2.01-2.12(m,1H),1.80-1.94(m,1H),1.32-1.51(m,10H)。LC-MS(ESI,m/z):348[M+H]⁺，和呈灰白色固体的第2峰(异构体2(N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(7*R)-2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，14％)，de>98％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.18(s,1H),7.14-7.38(m,1H),6.97-7.12(m,1H),6.86-6.95(m,1H),3.86-3.97(m,1H),2.83-3.02(m,1H),2.62-2.78(m,3H),2.29-2.44(m,2H),1.83-1.96(m,2H),1.45-1.58(m,1H),1.39(s,9H)。LC-MS(ESI,m/z):348[M+H]⁺。将异构体1转化为化合物83a(LC-MS(ESI,m/z):600[M+H]⁺.)并将异构体2转化为化合物83b(LC-MS(ESI,m/z):600[M+H]⁺)，与针对异构体混合物化合物83所述类似。

实施例84

化合物84

使用3,3-二甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丁酸代替(S)-3,3-二甲基-2-(4-(三氟甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酸，与针对化合物42所述类似地制备化合物84。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.28-8.75(m,1H),7.55-7.79(m,1H),7.24-7.52(m,2H),6.07-6.32(m,2H),5.32-5.85(m,1H),4.60-4.98(m,2H),3.90-4.24(m,1H),3.71(m,1H),3.26-3.43(m,1H),3.01-3.26(m,3H),2.70-3.00(m,3H),2.32-2.44(m,1H),2.07-2.30(m,2H),1.64-1.95(m,2H),1.20-1.46(m,2H),0.86-1.01(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):479[M+H]⁺。

3,3-二甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丁酸：向在0℃处冷却的(R)-2-氨基-3,3-二甲基丁酸(10g，76.3mmol，1.0当量)在水(100mL)中的溶液中添加47％HBr(55mL)和NaNO₂(6.2g，91.5mmol，1.2当量)在水(100mL)中的溶液。将混合物在室温处搅拌16h，然后用EA(3×50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(15％至50％)在PE中的梯度来纯化，得到呈灰白色固体的(R)-2-溴-3,3-二甲基丁酸(6g，41％)。

向在0℃处冷却的(R)-2-溴-3,3-二甲基丁酸(3.0g，15.5mmol，1.0当量)在甲醇(30mL)中的溶液中添加浓H₂SO₄(0.3mL)。将混合物回流18h。在冷却至室温后，将混合物用水(20mL)稀释并用EA(3×20mL)萃取。将有机相合并，用水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(20％至30％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色液体的(R)-2-溴-3,3-二甲基丁酸甲酯(1.4g，44％)。

向吡唑的钾盐(0.500g，4.71mmol，1.0当量)在二氧杂环己烷(5mL)中的溶液中添加(R)-2-溴-3,3-二甲基丁酸甲酯(1.4g，7.07mmol，1.5当量)和15-冠-5(1.5g，7.07mmol，1.5当量)。将混合物在100℃处在微波炉中照射3h。冷却至室温后，将混合物减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在C18上使用0.01％ TFA的ACN溶液纯化，得到呈灰白色固体的3,3-二甲基-2-(1H-吡唑-1-基)丁酸(70mg，9％)。

实施例85

化合物85

向4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-9-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(200mg，0.642mmol，1.0当量)在四氢呋喃(2mL)/水(2mL)中的混合物中添加lithiumol(76.9mg，3.21mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h，然后用盐酸(1MH₂O溶液)酸化至pH＝4。将混合物用EA(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色油状物的(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-4-(叔丁氧基羰基)-9-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸(190mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):298[M+H]⁺。

将N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(173mg，0.638mmol，1.0当量)在氯化氢(3mL，2M Et₂O溶液)中的混合物在室温处搅拌1h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色固体的甲基(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(131mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):172[M-Boc+H]⁺。

在0℃处，向(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-4-(叔丁氧基羰基)-9-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸(189mg，0.636mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(290mg，0.763mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(493mg，3.82mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(132mg，0.636mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-9-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0{2,6}]癸烷-4-甲酸叔丁酯(190mg，66％)。LC-MS(ESI,m/z):451[M+H]⁺。

将(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-9-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-4-甲酸叔丁酯(190mg，0.422mmol，1.0当量)在氯化氢(4mL，2M Et₂O溶液)中的混合物在室温处搅拌1h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色固体的(2S)-2-{[(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-9-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(155mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):351[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酸三乙胺(138mg，0.400mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(182mg，0.480mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(309mg，2.40mmol，6.0当量)。在0℃处将混合物搅拌20min，然后在0℃处添加(2S)-2-{[(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-9-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(155mg，0.400mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(2S)-2-{[(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(60mg，27％)。LC-MS(ESI,m/z):560[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(60mg，0.107mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的混合物中添加吡啶(33.9mg，0.429mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(33.8mg，0.161mmol，1.50当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge制备型Phenyl OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内33％ B至63％ B，63％ B；波长：254nm；RT1(min)：5)纯化，得到呈白色固体的(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酰胺(4mg，10％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.80-9.10(m,1H),8.60-8.80(m,1H),7.25-7.50(m,1H),4.70-4.90(m,1H),4.50-4.65(m,1H),4.40-4.50(m,1H),4.38-4.00(m,1H),3.60-3.80(m,1H),3.50-3.60(m,1H),3.30-3.50(m,1H),3.00-3.28(m,2H),2.45-2.65(m,1H),2.30-2.40(m,1H),2.20-2.30(m,1H),2.15-2.20(m,1H),1.98-2.15(m,3H),1.58-1.85(m,4H),1.15-1.35(m,1H),0.75-1.10(m,10H)。LC-MS(ESI,m/z):542[M+H]⁺。

实施例86

化合物86

将4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-9-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(500mg，1.60mmol，1.0当量)在二乙基氨基三氟化硫(10mL)中的混合物在45℃处搅拌6h。将混合物用二氯甲烷(80mL)稀释，并在0℃处将反应用饱和碳酸氢钠(50mL)淬灭。将混合物用二氯甲烷(3×80mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法用PE:EA(7:3)纯化，得到呈黄色油状物的4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(210mg，42％)。LC-MS(ESI,m/z)：258[M-56+H]⁺。

在室温处，向4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(210mg，0.670mmol，1.0当量)在二氯甲烷(3mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(1mL)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈黄色油状物的产物(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸甲酯(155mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):213[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酸(155mg，0.671mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(305mg，0.805mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(520mg，4.026mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸甲酯(143mg，0.671mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸甲酯(190mg，66％)。LC-MS(ESI,m/z):427[M+H]⁺。

在室温处，向搅拌的(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸甲酯(190mg，0.445mmol，1.0当量)的四氢呋喃(2mL)和水(2mL)溶液中添加氢氧化锂(53.3mg，2.22mmol，5.0当量)。将混合物搅拌2h，并用盐酸(2M)酸化至pH＝3。将混合物用EA(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，并经无水硫酸钠干燥。将混合物减压浓缩，得到呈橙色固体的(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸(180mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):413[M+H]⁺。

在室温处，向(1S,2R,3S,6R,7S,9S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸(160mg，0.388mmol，1.0当量)在二氯甲烷(2mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(0.6mL)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1S,2R,3S,6R,7S,9S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸(121mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):313[M+H]⁺。

向(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸(121mg，0.387mmol，1.0当量)和三甲胺(470mg，4.64mmol，12.0当量)在MeOH(1mL)中的搅拌混合物中添加2,2,2-三氟乙酸乙酯(550mg，3.870mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌2天。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物减压浓缩以去除MeOH，然后用盐酸(2M)酸化至pH＝4。将混合物用EA(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，并经无水硫酸钠干燥。将合并的有机层减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸(160mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):409[M+H]⁺。

在0℃处，向(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酸(160mg，0.392mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(178mg，0.470mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(303mg，2.35mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(67.0mg，0.392mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(2S)-2-{[(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(130mg，59％)。LC-MS(ESI,m/z):562[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(130mg，0.231mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的混合物中添加吡啶(109mg，1.38mmol，6.0当量)和三氟乙酸酐(58.0mg，0.508mmol，2.2当量)。将混合物在室温处搅拌5h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用二氯甲烷(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内30％ B至60％ B，60％ B；波长：254nm；RT1(min)：6.12)纯化，得到呈白色固体的(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酰胺(50mg，39％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.95-9.25(m,1H),8.55-8.95(m,1H),7.30-7.60(m,1H),4.80-5.05(m,1H),4.55-4.80(m,2H),4.15-4.55(m,1H),3.45-4.05(m,2H),3.10-3.35(m,2H),2.60-2.90(m,2H),2.50-2.60(m,1H),2.25-2.45(m,2H),2.05-2.25(m,2H),1.85-2.05(m,1H),1.60-1.85(m,3H),1.20-1.55(m,2H),0.90-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):544[M+H]⁺。

实施例87

化合物87

在0℃处，向(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(130mg，0.284mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(129mg，0.340mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(219mg，1.70mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酰胺(50mg，0.284mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(90mg，52％)。LC-MS(ESI,m/z):612[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(90mg，0.147mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的混合物中添加吡啶(46.5mg，0.588mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(55.7mg，0.265mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌4h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用二氯甲烷(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Xselect CSH F-Phenyl OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内35％ B至65％ B，65％ B；波长：220nm；RT1(min)：6.22)纯化，得到呈白色固体的所需产物(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(21.0mg，23％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.55-9.12(m,2H),7.20-7.70(m,1H),4.80-5.10(m,1H),4.65-4.80(m,1H),4.50-4.65(m,1H),4.25-4.50(m,1H),3.50-3.80(m,2H),3.10-3.30(m,2H),2.50-2.75(m,3H),2.25-2.40(m,2H),2.00-2.25(m,2H),1.20-2.00(m,6H),0.75-1.20(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):594[M+H]⁺。

实施例88

化合物88

向环庚-1,3,5-三烯(3.13g，34.0mmol，1.1当量)在二甲苯(15mL，81.0mmol，2.6当量)中的溶液中添加1H-吡咯-2,5-二酮(3.0g，30.9mmol，1.0当量)。将混合物在140℃处搅拌24h，然后冷却至室温。过滤奶油色混合物，并用DCM(2×30mL)洗涤滤饼。合并滤饼，得到呈灰白色固体的(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-4,4a,5,5a,6,6a-六氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1,3(2H,3aH)-二酮(5.0g，85％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.94(s,1H),5.72-5.76(m,2H),3.14-3.18(m,2H),2.96-2.97(m,2H),1.07-1.11(m,2H),0.21-0.25(m,1H),0.01-0.06(m,1H)。LC-MS(ESI,m/z):190[M+H]⁺。

在0℃处搅拌(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-4,4a,5,5a,6,6a-六氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1,3(2H,3aH)-二酮(5.00g，26.4mmol，1.0当量)在甲苯中的溶液，然后滴加双(2-甲氧基乙氧基)氢化铝钠(38.4g，133mmol，5.0当量，70％甲苯溶液)。将混合物在0℃处搅拌20min。将溶液在100℃处搅拌2天，然后冷却至室温。在0℃处滴加氢氧化钠水溶液(100mL，30％)。将混合物用EA(3×150mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈红色油状物的(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚(3.5g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):162[M+H]⁺。

向(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚(3.50g，21.7mmol，1.0当量)在DCM(60mL)中的溶液中添加2-碘酰基苯甲酸(6.69g，23.9mmol，1.1当量)。将混合物在60℃处搅拌3h。用硫代硫酸钠水溶液(30mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×100mL)萃取。将有机层合并，用饱和硫代硫酸钠水溶液(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(60％-70％)进行色谱分离，得到呈灰白色固体的外消旋-(3aS,4S,4aS,5aR,6R,6aR)-1,3a,4,4a,5,5a,6,6a-八氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚(1.7g，粗产物)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.32-7.33(m,1H),5.71-5.73(m,2H),3.83-3.91(m,1H),3.31-3.38(m,1H),3.13-3.17(m,1H),3.00-3.04(m,1H),2.85-2.89(m,1H),2.52-2.59(m,1H),0.92-1.03(m,2H),0.16-0.29(m,2H)。LC-MS(ESI,m/z):160[M+H]⁺。

向外消旋-(3aS,4S,4aS,5aR,6R,6aR)-1,3a,4,4a,5,5a,6,6a-八氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚(1.7g，10.7mmol，1.0当量)在甲苯(40mL)中的溶液中添加碘化锌(409mg，1.28mmol，0.12当量)和氰化三甲基甲硅烷(4.77g，48.0mmol，4.5当量)。将混合物在室温处搅拌过夜。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用EA(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(60％-80％)进行色谱分离，得到呈浅黄色油状物的外消旋-(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲腈(1.1g，49％)。LC-MS(ESI,m/z):187[M+H]⁺。

将外消旋-(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲腈(800mg，4.30mmol，1.0当量)在氯化氢(7.5mL，4M MeOH溶液)中的混合物在50℃搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色固体的外消旋-(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酸甲酯盐酸盐(800mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):220[M+H]⁺。

向外消旋-(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酸甲酯盐酸盐(800mg，3.65mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的溶液中添加三乙胺(1.11g，10.9mmol，3.0当量)和二碳酸二叔丁酯(1.04g，4.74mmol，1.3当量)。将混合物在室温处搅拌1h。用H₂O(20mL)淬灭反应。将混合物用EA(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(10％-15％)进行色谱分离，得到呈无色油状物的外消旋-2-(叔丁基)1-甲基(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-八氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1,2(1H)-二甲酸酯(830mg，71％)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD-d₄)δ5.81-5.89(m,2H),3.92-3.98(m,1H),3.74-3.75(m,3H),3.52-3.58(m,1H),3.20-3.29(m,1H),3.02-3.06(m,1H),2.88-2.92(m,1H),2.55-2.66(m,2H),1.38-1.46(m,9H),0.94-0.99(m,2H),0.13-0.21(m,2H)。LC-MS(ESI,m/z):320[M+H]⁺。

向外消旋-2-(叔丁基)1-甲基(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-八氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1,2(1H)-二甲酸酯(400mg，1.25mmol，1.0当量)在1,4-二氧杂环己烷(4mL)中的混合物中添加在室温处搅拌的氯化氢(4mL，4M 1,4-二氧杂环己烷溶液)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈浅黄色固体的外消旋-甲基(1S,3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐(300mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):220[M+H]⁺。

在0℃处，向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酸(271mg，1.17mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(535mg，1.41mmol，1.2当量)在二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(910mg，7.04mmol，6.0当量)。搅拌20min后，添加外消旋-甲基(1S,3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酸酯盐酸盐(300mg，1.17mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用EA(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(11％-13％)进行色谱分离，得到(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酸甲酯(350mg，62％，白色固体)，为非对映体混合物。LC-MS(ESI,m/z):433[M+H]⁺。

向THF(4mL)和H₂O(2mL)中含有(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酸甲酯(350mg，0.809mmol，1.0当量)的非对映体混合物中添加氢氧化锂(96.9mg，4.05mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩以去除THF。将混合物用盐酸(1M)酸化至pH＝5。将混合物用EA(3×50mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酸(320mg，94％，白色固体)，为非对映体混合物。LC-MS(ESI,m/z):419[M+H]⁺。

向二氧杂环己烷(3mL)中含有(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酸(320mg，0.772mmol，1.0当量)的非对映体混合物中添加在室温处搅拌的氯化氢(3mL，4M 1,4-二氧杂环己烷溶液)。将混合物在室温处搅拌5h。将混合物减压浓缩，得到(3aR,4R,4aR,5aS)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酸盐酸盐(240mg，粗产物，黄色固体)，为非对映体混合物。LC-MS(ESI,m/z):319[M+H]⁺。

向MeOH(2.5mL)中含有(3aR,4R,4aR,5aS)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酸盐酸盐(240mg，0.759mmol，1.0当量)的非对映体混合物中添加三乙胺(921mg，9.11mmol，12.0当量)和2,2,2-三氟乙酸乙酯(1.08g，7.59mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌3天。将反应物用水(50mL)淬灭，然后减压浓缩以去除MeOH。将混合物用盐酸(1M)酸化至pH＝4。将混合物用EA(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酸(260mg，粗产物，黄色固体)，为非对映体混合物。LC-MS(ESI,m/z):415[M+H]⁺。

在0℃处，向含有(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酸(260mg，0.627mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(286mg，0.752mmol，1.2当量)的非对映体混合物在二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(487mg，3.76mmol，6.0当量)。搅拌20min后，添加(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酰胺盐酸盐(143mg，0.690mmol，1.1当量)。将混合物在室温处搅拌1h，然后通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到(1S,3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酰胺(150mg，42％，白色固体)，为非对映体混合物。LC-MS(ESI,m/z):568[M+H]⁺。

向含有(1S,3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酰胺(150mg，0.264mmol，1当量)在DCM(1.5mL)中的混合物中添加吡啶(105mg，1.32mmol，5.0当量)和三氟乙酸酐(99.9mg，0.475mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用DCM(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XBridge制备型Phenyl OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内37％ B至67％B，67％B；波长：254nm；RT1(min)：6)纯化，得到(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酰胺(46.4mg，31％，白色固体)，为非对映体混合物。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.75-9.10(m,1H),8.43-8.73(m,1H),7.32-7.52(m,1H),5.45-5.77(m,2H),4.84-4.93(m,1H),4.20-4.65(m,1H),3.94-4.07(m,1H),3.70-3.80(m,1H),3.32-3.61(m,1H),3.01-3.23(m,3H),2.76-2.95(m,1H),2.58-2.67(m,1H),2.24-2.43(m,2H),1.97-2.23(m,2H),1.62-1.88(m,2H),0.84-1.02(m,11H),0.07-0.15(m,1H),0.00-0.02(m,1H)。LC-MS(ESI,m/z):550[M+H]⁺。

实施例89

化合物89

在室温处，向4-叔丁基3-甲基(1R,2R,3S,6S,7S)-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3,4-二甲酸酯(400mg，1.30mmol，1.0当量)在DCM(15mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(5mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(1R,2R,3S,6S,7S)-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯(269mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):208[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酸(301mg，1.30mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(644mg，1.69mol，1.3当量)在DMF(4mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.34g，10.4mmol，8.0当量)。在0℃处搅拌20min后，添加(1R,2R,3S,6S,7S)-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯(270mg，1.30mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(3:10)进行色谱分离，得到呈白色固体的(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯(330mg，57％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃-d)δ6.33-6.69(m,2H),5.11-5.26(m,1H),4.43-4.56(m,1H),4.15-4.30(m,1H),3.85-3.94(m,1H),3.69-3.83(m,4H),3.27-3.38(m,1H),3.16-3.25(m,1H),3.04-3.13(m,2H),1.37-1.55(m,9H),0.90-1.07(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):421[M+H]⁺。

在室温处，向搅拌的(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲基甲酯(300mg，0.713mmol，1.0当量)的THF(3mL)/水(3mL)溶液中添加氢氧化锂(85.4mg，3.56mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物用盐酸(2M)酸化至pH＝6，并用EA(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩，得到呈灰白色固体的(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(250mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):407[M+H]⁺。

在室温处，向(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(250mg，0.615mmol，1.0当量)在DCM(6mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(2mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(188mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):307[M+H]⁺。

向(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(188mg，0.614mmol，1当量)在MeOH(2mL)中的搅拌混合物中添加三甲胺(745mg，7.37mmol，12.0当量)和2,2,2-三氟乙酸乙酯(872mg，6.14mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌2天，然后用盐酸(2M)酸化至pH＝6。将反应物用水(15mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×15mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×15mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色固体的(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(166mg，67％，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):403[M+H]⁺。

向(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(68.1mg，0.398mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(196mg，0.517mmol，1.3当量)在DMF(2mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(411mg，3.18mmol，8.0当量)。在0℃处搅拌20min后，添加(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(160mg，0.398mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(2S)-2-{[(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(90mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):556[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(90.0mg，0.162mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌混合物中添加吡啶(51.2mg，0.648mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(51.0mg，0.243mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内30％ B至60％ B，60％ B；波长：254nm；RT1(min)：6)纯化，得到呈白色固体的(1R,2R,3S,6S,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(6.9mg，7％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.75-9.08(m,2H),7.32-7.50(m,1H),6.35-6.65(m,2H),4.82-5.00(m,1H),4.30-4.75(m,1H),4.10-4.28(m,1H),3.72-3.90(m,1H),3.56-3.70(m,1H),3.20-3.30(m,1H),3.10-3.19(m,4H),2.81-2.92(m,1H),2.30-2.40(m,1H),2.10-2.20(m,2H),1.62-1.90(m,2H),0.81-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):538[M+H]⁺。

实施例90

化合物90

与针对化合物88所述类似地制备化合物90，使用(1S,3aS,4S,7R,7aR,8R)-8-羟基-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯的TFA盐代替外消旋-(3aR,4R,4aR,5aS,6S,6aS)-1,2,3,3a,4,4a,5,5a,6,6a-十氢-4,6-乙烯环丙[f]异吲哚-1-甲酸甲酯盐酸盐，得到(1R,2R,3S,6S,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-10-羟基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺，为非对映体混合物。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.60-9.10(m,2H),7.30-7.60(m,1H),5.80-6.20(m,2H),5.00-5.30(m,1H),4.80-5.00(m,1H),4.40-4.75(m,1H),4.05-4.30(m,1H),3.70-3.90(m,1H),3.40-3.68(m,2H),3.10-3.58(m,2H),2.85-3.05(m,2H),2.25-2.85(m,2H),2.30-2.50(m,1H),2.10-2.21(m,2H),1.60-1.90(m,2H),0.80-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):540[M+H]⁺。

在0℃处，向2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aS,4S,7R,7aR)-8-氧代-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯(950mg，3.09mmol，1.0当量)在甲醇(10mL)中的溶液中添加硼氢化钠(114mg，3.09mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。用饱和氯化铵(水溶液)淬灭反应。将混合物用EA(3×80mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色油状物的2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aS,4S,7R,7aR,8R)-8-羟基-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯(700mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):210[M-Boc+H]⁺。

在室温处，向2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aS,4S,7R,7aR)-8-羟基-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯(450mg，1.45mmol，1.0当量)在DCM(4.5mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(1.5mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1S,3aS,4S,7R,7aR,8R)-8-羟基-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(305mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):210[M+H]⁺。

实施例91

化合物91

与针对化合物89所述制备化合物91，使用(1S,3aS,4S,7R,7aR,8*S)-8-氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯代替(1R,2R,3S,6S,7S)-10-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸甲酯，得到(1S,3aS,4S,7R,7aR,8S)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰氨基)丁酰基)-8-氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.85-9.05(m,1H),8.40-8.85(m,1H),7.30-7.60(m,1H),5.80-6.20(m,2H),4.60-5.05(m,1H),4.40-4.58(m,1H),4.30-4.38(m,1H),4.05-4.25(m,1H),3.70-3.90(m,1H),3.40-3.68(m,1H),3.12-3.40(m,3H),3.00-3.10(m,1H),2.90-3.00(m,1H),2.70-2.90(m,1H),2.30-2.45(m,1H),2.05-2.30(m,2H),1.60-1.95(m,2H),0.80-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):542[M+H]⁺。

将2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aS,4S,7R,7aR,8R)-8-羟基-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯(1.0g，3.23mmol，1.0当量)在二乙基氨基三氟化硫(20mL)中的混合物在45℃处搅拌5h。将混合物用二氯甲烷(100mL)稀释。在0℃处，用饱和碳酸氢钠(80mL)淬灭反应。将混合物用二氯甲烷(3×80mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelectCSH制备型C18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(0.05％TFA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：10min内32％ B至52％B，52％ B；波长：254nm；RT1(min)：8.78/9.3)纯化，得到呈白色油状物的2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aS,4S,7R,7aR,8S)-8-氟-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯(350mg，35％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.05-6.24(m,2H),4.25-4.57(m,1H),3.81-4.03(m,1H),3.56-3.76(m,3H),3.34-3.48(m,1H),3.10-3.26(m,1H),2.83-3.09(m,4H),1.19-1.51(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z)：256[M-56+H]⁺。

在室温处，向2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aS,4S,7R,7aR,8*S)-8-氟-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯(350mg，1.12mmol，1.0当量)在二氯甲烷(3mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(1mL)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1S,3aS,4S,7R,7aR,8*S)-8-氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(240mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):212[M+H]⁺。

实施例92

化合物92

在氢气下，向化合物82(30.0mg，0.054mmol，1.0当量)在(2mL)中的混合物中添加10％活性碳钯(15mg)。将所得混合物在室温处搅拌2天。将混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Kinetex EVO C18，21.2*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内35％B至65％ B，65％ B；波长：254nm；RT1(min)：5)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aS,4S,7R,7aR)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-8,8-二氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(2.1mg，6％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.95-9.20(m,1H),8.70-8.90(m,1H),7.35-7.55(m,1H),4.85-5.00(m,1H),4.65-4.75(m,1H),4.55-4.65(m,1H),3.90-4.05(m,1H),3.70-3.85(m,1H),3.10-3.20(m,2H),2.90-3.00(m,1H),2.60-2.80(m,1H),2.30-2.45(m,2H),2.20-2.30(m,1H),2.10-2.20(m,2H),1.50-1.90(m,5H),1.20-1.35(m,1H),0.90-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):562[M+H]⁺。

实施例93

化合物93

向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-(叔丁氧基羰基)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(3.5g，12.5mmol，1.0当量)在DMF(40mL)中的溶液中添加N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐(6.19g，16.3mmol，1.3当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(11.3g，87.7mmol，7.0当量)。将混合物在0℃处搅拌30min，并且添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酸甲酯(2.57g，13.8mmol，1.1当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将级分减压浓缩，得到呈棕黄色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-氧代-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙-2-基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(5.00g，89％)。LC-MS(ESI,m/z):448[M+H]⁺。

向5mL ElectraSyn小瓶中添加(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-氧代-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙-2-基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(370mg，0.825mmol，1.0当量)、四甲基铵离子(1.40g，20.0mmol，2.3当量)和TFE(110mL)。组装包含RVC阳极和Ni板阴极的盖，并在6F/mol的恒定电流(5mA)下进行电解。平行进行另外9个反应。将反应内容物转移到圆底烧瓶中，用DCM剧烈冲洗两个电极，并将所得溶液真空浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱用DCM:MeOH(32:1)纯化，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-甲氧基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-3-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-甲酸叔丁酯(2.5g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):546[M+H]⁺。

在0℃和氮气下，向(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-氧代-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙-2-基]氨基甲酰基}-5-(2,2,2-三氟乙氧基)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(2.50g，4.58mmol，1.0当量)在MeCN(30mL)中的溶液中添加二甲基锌(13.7mL，13.7mmol，3.0当量)。将混合物在0℃处搅拌5min，然后添加BF₃·Et₂O(3.5mL，27.5mmol，6.0当量)。在相同温度下将混合物搅拌2h。用饱和氯化铵溶液(50mL)淬灭反应。将溶液用DCM(3×60mL)萃取。将有机层合并，用盐水(80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1R,2S,3S,5S,6R,7S)-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-氧代-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙-2-基]氨基甲酰基}-5-甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(380mg，两步收率2％)。LC-MS(ESI,m/z):462[M+H]⁺。

将(1R,2S,3S,5S,6R,7S)-3-{[(2S)-1-甲氧基-1-氧代-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙-2-基]氨基甲酰基}-5-甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(380mg，0.820mmol，1.0当量)在氨(7M MeOH溶液，6mL)中的混合物在40℃处搅拌2天。将混合物减压浓缩，得到呈棕黄色固体的(1R,2S,3S,5S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-5-甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(340mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):447[M+H]⁺。

向(1R,2S,3S,5S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-5-甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-甲酸叔丁酯(200mg，0.448mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加三氟乙酸(1mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色半固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,5S,6R,7S)-5-甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(155mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):347[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酸(103mg，0.447mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(204mg，0.536mmol，1.2当量)在DMF(3mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(347mg，2.68mmol，6.0当量)。在0℃处搅拌15min后，添加(2S)-2-{[(1R,2S,3S,5S,6R,7S)-5-甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(155mg，0.447mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h，然后通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈棕色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,5S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-5-甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(140mg，53％)。LC-MS(ESI,m/z):560[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,5S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-5-甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(70.0mg，0.125mmol，1.0当量)在DCM(1.5mL)中的混合物中添加三氟乙酸(0.5mL)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物减压浓缩，得到呈棕色半固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,5S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-5-甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(57.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):460[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,5S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-5-甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(57.0mg，0.124mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中添加吡啶(39.0mg，0.496mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(47.0mg，0.223mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌1h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×5mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19×150mm，5μm；流动相A：水(0.05％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内35％ B至65％ B，65％ B；波长：254nm；RT1(min)：5.97)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,5S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-5-甲基-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(12.0mg，17％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.70-9.50(m,1H),8.55-8.65(m,1H),7.35-7.60(m,1H),5.80-6.20(m,2H),4.60-5.02(m,1H),4.40-4.58(m,1H),4.00-4.19(m,1H),3.64-3.80(m,1H),3.10-3.30(m,3H),2.90-3.01(m,1H),2.76-2.89(m,1H),2.48-2.70(m,1H),2.06-2.46(m,3H),1.60-1.95(m,2H),1.30-1.50(m,4H),1.16-1.29(m,1H),0.84-1.05(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):538[M+H]⁺。

实施例94

化合物94

在氮气和-78℃下向1-叔丁基2-甲基(2S)-4-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(15.0g，61.7mmol，1.0当量)在THF(240mL)中的溶液中添加双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(74mL，74.0mmol，1.2当量，1M THF溶液)。在-78℃处搅拌1h后，滴加comins试剂(29.0g，74.0mmol，1.2当量)在THF(60mL)中的溶液。将混合物在氮气和-78℃下搅拌1h。将反应物用水(600mL)淬灭。混合物用EtOAc(3×500mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc:PE(1:9)进行色谱分离，得到呈无色油状物的1-叔丁基2-甲基(2S)-4-(三氟甲磺酰氧基)-2,5-二氢吡咯-1,2-二甲酸酯(12.3g，48％)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ5.70-5.80(m,1H),5.00-5.12(m,1H),4.24-4.47(m,2H),3.79(s,3H),1.42-1.53(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z)：320[M-56+H]⁺。

向1-叔丁基2-甲基(2S)-4-(三氟甲磺酰氧基)-2,5-二氢吡咯-1,2-二甲酸酯(10.0g，26.6mmol，1.0当量)、氯化锂(3.95g，93.2mmol，3.5当量)和四(三苯基膦)铂(0)(4.62g，4.00mmol，0.15当量)在THF(120mL)中的混合物中添加六甲基二锡烷(13.1g，40.0mmol，1.5当量)。将混合物在60℃和氮气下搅拌过夜。将反应物用水(300mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×300mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc:PE(6:94)进行色谱分离，得到呈无色油状物的1-叔丁基2-甲基(2S)-4-(三甲基甲锡烷基)-2,5-二氢吡咯-1,2-二甲酸酯(5.45g，49％)。¹HNMR(400MHz,氯仿-d)δ5.70-5.82(m,1H),4.93-5.09(m,1H),4.19-4.41(m,2H),3.74-3.79(m,3H),1.42-1.53(m,9H),0.14-0.31(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z)：336[M-56+H]⁺。

在氮气下，向三氟甲磺酸银(4.67g，18.2mmol，1.3当量)和1-氯甲基-4-氟-1,4-双氮杂双环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸盐)(9.90g，27.9mmol，2.0当量)在无水丙酮(165mL)中的混合物中滴加1-叔丁基2-甲基(2S)-4-(三甲基甲锡烷基)-2,5-二氢吡咯-1,2-二甲酸酯(5.45g，14.0mmol，1.0当量)在无水丙酮(55mL)中的溶液。将混合物在室温处搅拌1h。用饱和氯化铵水溶液(300mL)淬灭反应。将混合物用MTBE(3×300mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc/PE(5:95)进行色谱分离，得到呈浅黄色油状物的1-叔丁基2-甲基(2S)-4-氟-2,5-二氢吡咯-1,2-二甲酸酯(780mg，20％)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ5.11-5.22(m,1H),4.87-4.99(m,1H),4.24-4.36(m,1H),4.12-4.23(m,1H),3.75-3.80(m,3H),1.42-1.53(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z)：190[M-56+H]⁺。

将1-叔丁基2-甲基(2S)-4-氟-2,5-二氢吡咯-1,2-二甲酸酯(400mg，1.63mmol，1.0当量)在二环戊二烯(10mL)中的混合物在170℃处搅拌过夜。将混合物在硅胶柱上用EtOAc:PE(3:7)进行色谱分离，得到粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈棕色油状物的2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aS,4S,7R,7aR)-3a-氟-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯(140mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):212[M-Boc+H]⁺。

向2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aS,4S,7R,7aR)-3a-氟-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯(140mg，0.450mmol，1.0当量)在DCM(1.5mL)中的溶液中添加三氟乙酸(0.5mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(1S,3aS,4S,7R,7aR)-3a-氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(95mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):212[M+H]⁺。

在0℃处，向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酸(104mg，0.450mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(205mg，0.540mmol，1.2当量)在DMF(3mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(349mg，2.70mmol，6.0当量)。搅拌15min后，添加(1S,3aS,4S,7R,7aR)-3a-氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(95.0mg，0.450mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc:PE(15:85)进行色谱分离，得到呈浅黄色半固体的(1S,3aS,4S,7R,7aR)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-3a-氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(65.0mg，24％)。LC-MS(ESI,m/z):425[M+H]⁺。

向(1S,3aS,4S,7R,7aR)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-3a-氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(65.0mg，0.153mmol，1.0当量)在THF(0.5mL)/水(0.5mL)中的混合物中添加氢氧化锂(11.0mg，0.459mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物用水(2mL)稀释，并且用盐酸(1M)调节至pH＝6。将混合物用EtOAc(3×2mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×1mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥、过滤并减压浓缩，得到呈浅黄色固体的(1S,3aS,4S,7R,7aR)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-3a-氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(60.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):411[M+H]⁺。

在0℃处，向(1S,3aS,4S,7R,7aR)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-3a-氟-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(61.0mg，0.149mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(68.0mg，0.179mmol，1.2当量)在DMF(2mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(116mg，0.894mmol，6.0当量)。在相同温度下搅拌15min后，添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺盐酸盐(31.0mg，0.149mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ NH₄HCO₃+NH₃.H₂O，pH～10)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈灰白色固体的((S)-1-((1S,3aS,4S,7R,7aR)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-3a-氟-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(50.0mg，47％)。LC-MS(ESI,m/z):564[M+H]⁺。

向((S)-1-((1S,3aS,4S,7R,7aR)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-3a-氟-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(50.0mg，0.089mmol，1.0当量)在DCM(1.5mL)中的混合物中添加三氟乙酸(0.5mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色半固体的(2S)-2-{[(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-6-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺；三氟乙酸(51.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):464[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-6-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺；三氟乙酸(51.0mg，0.088mmol，1.0当量)在2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷-2,4,6-三氧化物(562mg，0.880mmol，10.0当量，50％ EtOAc溶液)中的混合物添加吡啶(35.0mg，0.440mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜。将反应物用水(2mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×2mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×2mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18OBD柱，19×250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内37％B至67％ B，67％ B；波长：254nm；RT1(min)：6.45)纯化，得到呈白色固体的(1R,2R,3S,6S,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-6-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(12.6mg，26％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.70-9.05(m,2H),7.30-7.60(m,1H),5.90-6.60(m,2H),4.84-5.03(m,1H),4.30-4.55(m,1H),3.75-4.29(m,3H),2.93-3.12(m,4H),2.55-2.70(m,1H),2.30-2.45(m,1H),2.08-2.22(m,2H),1.45-2.07(m,4H),0.82-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):542[M+H]⁺。

实施例95

化合物95

使用(S)-2-氨基-3-环丁基丙酸代替(2S,3R)-2-氨基-3-(叔丁氧基)丁酸，与针对化合物3所述类似地制备化合物95。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.40-9.00(m,2H),7.28-7.45(m,1H),5.98-6.26(m,2H),4.78-5.00(m,1H),4.08-4.40(m,1H),3.90-4.00(m,1H),3.52-3.70(m,1H),3.33-3.45(m,1H),3.08-3.22(m,3H),3.00-3.08(m,1H),2.90-2.98(m,1H),2.74(m,1H),2.22-2.40(m,2H),2.09-2.21(m,2H),1.86-2.05(m,2H),1.55-1.85(m,8H),1.34-1.48(m,2H)。LCMS(ESI,m/z):536[M+H]⁺。

实施例96

化合物96

使用R-MOP代替S-MOP，与针对(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸所述类似，由2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯制备(1S,3aS,4R,5S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-5-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸。由(1S,3aS,4R,5S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-5-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸制备化合物96，与针对由(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸制备化合物86所述类似。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.55-9.10(m,2H),7.25-7.50(m,1H),4.82-5.00(m,1H),4.65-4.80(m,1H),4.55-4.65(m,1H),4.30-4.50(m,1H),3.85-4.00(m,1H),3.55-3.80(m,1H),3.05-3.25(m,2H),2.60-2.90(m,1H),2.50-2.55(m,1H),2.40-2.50(m,2H),2.25-2.40(m,1H),2.05-2.25(m,2H),1.75-1.90(m,2H),1.65-1.75(m,2H),1.30-1.60(m,2H),0.90-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):544[M+H]⁺。

实施例97

化合物97

使用(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3,4-三甲基戊-4-烯酸代替(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-环丙基-3-甲基丁酸，与针对化合物69所述类似地制备化合物97。¹HNMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.23-9.00(m,2H),7.44-7.65(m,1H),5.91-6.23(m,2H),4.86-4.95(m,1H),4.54-4.82(m,3H),3.88-4.33(m,1H),3.60-3.75(m,1H),3.33-3.45(m,1H),3.05-3.30(m,3H),3.01-3.04(m,1H),2.86-3.00(m,1H),2.61-2.72(m,1H),2.06-2.41(m,3H),1.54-1.93(m,5H),1.27-1.45(m,2H),0.82-1.24(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z):550[M+H]⁺。

在0℃处，向(S)-2-((4-甲氧基苯基)氨基)-3,3-二甲基-4-氧代丁酸甲酯(12.0g，45.2mmol，1.0当量)和溴化镁(29.2g，113mmol，2.5当量)在Et₂O(200mL)中的溶液中添加(三甲基甲硅烷基)重氮甲烷(11.4g，99.5mmol，2.2当量)。将混合物在0℃处搅拌0.5h，然后在室温处搅拌过夜。在0℃处添加MeOH(60mL)和盐酸(40mL，2M)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物用EA(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(17％)进行色谱分离，得到呈黄色固体的(S)-2-((4-甲氧基苯基)氨基)-3,3-二甲基-4-氧代丁酸甲酯(3.2g，22％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.68-6.75(m,4H),5.26-5.31(m,1H),4.38-4.67(m,1H),3.64(s,3H),3.59(s,3H),2.16(s,3H),1.06-1.15(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z):280[M+H]⁺。

在氮气和0℃下向甲基三苯基溴化膦(7.37g，20.6mmol，1.8当量)在THF(50mL)中的搅拌混合物中添加叔丁醇钾(2.31g，20.6mmol，1.8当量)。搅拌1h后，添加(S)-2-((4-甲氧基苯基)氨基)-3,3-二甲基-4-氧代戊酸甲酯(3.2g，11.456mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h。将反应用水(50mL)淬灭。将混合物用EA(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(5％)进行色谱分离，得到呈黄色固体的(S)-2-((4-甲氧基苯基)氨基)-3,3,4-三甲基戊-4-烯酸甲酯(820mg，25％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ6.69-6.73(m,2H),6.59-6.64(m,2H),5.01-5.10(m,1H),4.78-4.81(m,2H),3.99-4.02(m,1H),3.63(s,3H),2.56(s,3H),1.76(s,3H),1.11-1.16(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z):278[M+H]⁺。

向(S)-2-((4-甲氧基苯基)氨基)-3,3,4-三甲基戊-4-烯酸甲酯(800mg，2.88mmol，1.0当量)在CH₃CN(20mL)和H₂O(5mL)中的搅拌混合物中添加硝酸铈铵(7.94g，14.4mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。向混合物中添加THF(5mL)。用三乙胺将混合物碱化至pH＝8。添加二碳酸二叔丁酯(3.78g，17.3mmol，6.0当量)。将混合物在室温处搅拌5h，然后用H₂O(30mL)稀释。将混合物用EA(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(9％-13％)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3,4-三甲基戊-4-烯酸甲酯(160mg，20％)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ5.01-5.11(m,1H),4.77-4.86(m,2H),4.37-4.39(m,1H),3.67-3.71(m,3H),1.82(s,3H),1.45(s,9H),1.10-1.12(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z):272[M+H]⁺。

向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3,4-三甲基戊-4-烯酸甲酯(160mg，0.590mmol，1.0当量)在THF(2mL)、H₂O(1mL)和MeOH(0.5mL)中的混合物中添加氢氧化锂(70.6mg，2.95mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩以去除MeOH和THF。将混合物用盐酸(1M)酸化至pH＝5。将混合物用EA(3×50mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈灰白色固体的所需产物(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3,4-三甲基戊-4-烯酸(130mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):258[M+H]⁺。

实施例98

化合物98

向(叔丁氧基羰基)-L-苏氨酸甲酯(2.5g，10.7mmol，1.0当量)在ACN(20mL)中的溶液中添加CuI(0.38g，2.00mmol，0.2当量)。将混合物在45℃处加热，并在30min内添加2,2-二氟-2-(氟磺酰基)乙酸(2.5mL，21.4mmol，2.0当量)在ACN(10mL)中的溶液。将混合物减压浓缩。将残余物在水和EA(20mL)之间分配。将相分离，并将水相用EA(2×20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(10％至15％)在己烷中的梯度来纯化，得到呈黄色油状物的N-(叔丁氧基羰基)-O-(二氟甲基)-L-苏氨酸甲酯(0.8g，26％)。

向N-(叔丁氧基羰基)-O-(二氟甲基)-L-苏氨酸甲酯(0.8g，2.83mmol，1.0当量)在DCE(10mL)中的溶液中添加三甲基氢氧化锡(2.54g，14.1mmol，5.0当量)。将混合物在80℃处加热5h，然后减压浓缩。将残余物用2N HCl吸收并用EA(5×15mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(30％至40％)在己烷中的梯度来纯化，得到呈棕色固体的N-(叔丁氧基羰基)-O-(二氟甲基)-L-苏氨酸(0.55g，72％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯盐酸盐(115mg，0.502mmol，1.0当量)和N-(叔丁氧基羰基)-O-(二氟甲基)-L-苏氨酸(169mg，0.628mmol，1.2当量)在DMF(1.1mL)中的溶液中添加DIPEA(0.26mL，1.50mmol，3.0当量)。在0℃处5min后，添加HATU(286mg，0.752mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌3h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(30％至40％)在己烷中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(N-(叔丁氧基羰基)-O-(二氟甲基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(170mg，76％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(N-(叔丁氧基羰基)-O-(二氟甲基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(100mg，0.225mmol，1.0当量)在THF(1mL)和水(1mL)中的溶液中添加LiOH(14mg，0.334mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌4h。将混合物用1N HCl酸化并用EA(10×10mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到((1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(N-(叔丁氧基羰基)-O-(二氟甲基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(65mg，67％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(N-(叔丁氧基羰基)-O-(二氟甲基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(110mg，0.256mmol，1.0当量)在DCM(1.1mL)中的溶液中添加TFA(0.020mL，1.25mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(O-(二氟甲基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸的TFA盐形式(100mg，91％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(O-(二氟甲基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸三氟乙酸盐(100mg，0.233mmol，1.0当量)在MeOH(1mL)中的溶液中添加2,2,2-三氟乙酸乙酯(0.14mL，1.06mmol，5.0当量)和NEt₃(0.16mL，1.06mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌48h，然后减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在C18上使用ACN(30％至40％)在0.01％ FA水溶液中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(O-(二氟甲基)-N-(2,2,2-三氟乙酰基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(60mg，60％)。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(O-(二氟甲基)-N-(2,2,2-三氟乙酰基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(60mg，0.141mmol，1.0当量)和(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酰胺盐酸盐(35mg，0.169mmol，1.2当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加EDC●HCl(53mg，0.261mmol，2.0当量)、HOAt(19mg，0.140mmol，1.0当量)和NEt₃(0.06mL，0.433mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌4h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-(O-(二氟甲基)-N-(2,2,2-三氟乙酰基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(60mg，74％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-(O-(二氟甲基)-N-(2,2,2-三氟乙酰基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(60mg，0.104mmol，1.0当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加吡啶(0.03mL，0.372mmol，3.6当量)和TFAA(0.03mL，0.216mmol，2.1当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物用水(10mL)稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Sunfire-C18柱，19*150mm，5μm；流动相A：10mM NH4HCO3的水溶液，流动相B：ACN；流速：17mL/min；梯度：在8min内20％ B至60％ B)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-(O-(二氟甲基)-N-(2,2,2-三氟乙酰基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(12mg，21％)。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ9.50(br.s.,1H),8.64(d,1H),7.36(s,1H),6.37-6.74(m,1H),5.98-6.22(m,2H),4.89(m,1H),4.52-4.77(m,1H),4.41(m,1H),3.94-4.25(m,1H),3.71(m,1H),3.29-3.49(m,1H),3.04-3.22(m,3H),2.80-2.97(m,2H),2.75(m,1H),2.25-2.39(m,1H),2.08-2.22(m,2H),1.61-1.89(m,2H),1.41(m,2H),1.19-1.28(m,3H)。LCMS(ESI,m/z):562[M+H]⁺。

实施例99

化合物99

使用N-(叔丁氧基羰基)-O-(环丙基甲基)-L-苏氨酸代替N-(叔丁氧基羰基)-O-(二氟甲基)-L-苏氨酸，与针对化合物98所述类似地制备化合物99。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.90-9.20(br.s.,1H),8.51-8.79(m,1H),7.29-7.50(m,1H),5.99-6.25(m,2H),4.75-4.95(m,1H),4.21-4.52(m,1H),3.96-4.04(m,1H),3.60-3.78(m,2H),3.50(m,1H),3.21-3.39(m,2H),3.07-3.20(m,2H),3.00-3.06(m,1H),2.79-2.98(m,2H),2.74(m,1H),2.36(m,1H),2.08-2.31(m,2H),1.65-1.88(m,2H),1.35-1.46(m,2H),1.03-1.12(m,3H),0.91(m,1H),0.35-0.46(m,2H),0.08-0.18(m,2H)。LCMS(ESI,m/z):566[M+H]⁺。

N-(叔丁氧基羰基)-O-(环丙基甲基)-L-苏氨酸：向(叔丁氧基羰基)-L-苏氨酸甲酯(2g，8.57mmol，1.0当量)在THF(72mL)中的溶液中添加碳酸烯丙基甲酯(1.27mL，11.2mmol，1.3当量)和Pd(PPh₃)₄(198mg，0.171mmol，0.02当量)。将混合物在60℃处加热3h，然后减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用10％ EA的PE溶液作为洗脱液来纯化，得到呈无色油状物的O-烯丙基-N-(叔丁氧基羰基)-L-苏氨酸甲酯(1.8g，76％)。

向在0℃处冷却的O-烯丙基-N-(叔丁氧基羰基)-L-苏氨酸甲酯(1.0g，3.66mmol，1.0当量)在Et₂O(10mL)中的溶液中添加重氮甲烷在Et₂O(100mL)和Pd(OAc)₂(164mg，0.732mmol，0.2当量)中的溶液。将混合物在室温处搅拌16h。将反应混合物通过硅藻土过滤，并将滤液减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(10％至20％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色油状物的N-(叔丁氧基羰基)-O-(环丙基甲基)-L-苏氨酸甲酯(900mg，85％)。

重氮甲烷的Et₂O溶液在0℃处由40％ KOH(30mL)和乙醚(100mL)中的N-甲基N-亚硝基脲(10g)产生。分离各相。将有机相直接用于反应。

向在0℃处冷却的N-(叔丁氧基羰基)-O-(环丙基甲基)-L-苏氨酸甲酯(900mg，3.13mmol，1.0当量)在THF(6mL)和水(3mL)中的溶液中添加LiOH(197mg，4.70mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌12h。在冷却至0℃后，将混合物用1M HCl酸化并用EA(4×5mL)萃取。将有机相合并，用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈棕色油状物的N-(叔丁氧基羰基)-O-(环丙基甲基)-L-苏氨酸(800mg，93％)。¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δ12.65(br.s.,1H),6.26(d,1H),4.00(m,1H),3.89(m,1H),3.29(m,1H),3.17(m,1H),1.38(s,9H),1.08(d,3H),0.92(m,1H),0.42(m,2H),0.14(m,2H)。LCMS(ESI,m/z):274[M+H]⁺。

实施例100

化合物100

向3-甲氧基-2,2-二甲基丙酸(3.0g，22.7mmol，1.0当量)、4,5,6,7-四氯-2-羟基异吲哚-1,3-二酮(6.81g，22.7mmol，1.0当量)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(0.277g，2.27mmol，0.1当量)在DCM(30mL)中的混合物中添加N,N'-二异丙基碳二亚胺(3.15g，25.0mmol，1.1当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物在硅胶柱上用EA:PE(1:9)进行色谱分离，得到呈浅黄色固体的3-甲氧基-2,2-二甲基丙酸4,5,6,7-四氯-1,3-二氧代异吲哚-2-酯(2.8g，30％)。LC-MS(ESI,m/z):416[M+H]⁺。

向3-甲氧基-2,2-二甲基丙酸4,5,6,7-四氯-1,3-二氧代异吲哚-2-酯(2.8g，6.75mmol，1.0当量)、(S,E)-2-((对甲苯基亚磺酰基)亚氨基)乙酸乙酯(2.58g，10.8mmol，1.6当量)和四水合乙酸镍(II)(0.419g，1.69mmol，0.25当量)在1-甲基-2-吡咯烷酮(50mL)中的混合物中添加锌(1.32g，20.3mmol，3.0当量)。将混合物在室温和氮气下搅拌过夜。用水(150mL)淬灭反应。混合物用EtOAc(3×200mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(1:4)进行色谱分离，得到所需粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ NH₄HCO₃)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的(S)-4-甲氧基-3,3-二甲基-2-(((S)-对甲苯基亚磺酰基)氨基)丁酸乙酯(1.27g，58％)。LC-MS(ESI,m/z):328[M+H]⁺。

向(S)-4-甲氧基-3,3-二甲基-2-(((S)-对甲苯基亚磺酰基)氨基)丁酸乙酯(770mg，2.35mmol，1.0当量)在MeOH(8mL)中的混合物中添加氯化氢(338mg，9.40mmol，4.0当量，4M EtOH溶液)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈黄色油状物的(S)-2-氨基-4-甲氧基-3,3-二甲基丁酸乙酯(444mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):190[M+H]⁺。

向(S)-2-氨基-4-甲氧基-3,3-二甲基丁酸乙酯(444mg，2.35mmol，1.0当量)在DCM(4mL)中的混合物中添加三甲胺(1.19g，11.8mmol，5.0当量)和二碳酸二叔丁酯(615mg，2.82mmol，1.2当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应用水(50mL)淬灭。将混合物用二氯甲烷(3×100mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(1:9)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲氧基-3,3-二甲基丁酸乙酯(370mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):290[M+H]⁺。

向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲氧基-3,3-二甲基丁酸乙酯(370mg，1.28mmol，1.0当量)在THF(4mL)/水(4mL)中的混合物中添加氢氧化锂(147mg，6.40mmol，5.0当量)。将混合物在50℃处搅拌2h。将混合物减压浓缩以去除THF，并用盐酸(2M)调节至pH＝5。混合物用EtOAc(3×80mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色油状物的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲氧基-3,3-二甲基丁酸(205mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z)：206[M-56+H]⁺。

在0℃处，向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲氧基-3,3-二甲基丁酸(205mg，0.785mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(358mg，0.942mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(608mg，4.71mmol，6.0当量)。将混合物搅拌20min，然后在0℃处添加(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(260mg，0.783mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色固体的((S)-1-((1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-4-甲氧基-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(110mg，24％)。将产物(110mg)通过非手性纯化，得到呈白色固体的((S)-1-((1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-4-甲氧基-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(65mg，第2峰)。LC-MS(ESI,m/z):576[M+H]^-。

在室温处，向((S)-1-((1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-4-甲氧基-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(50mg，0.087mmol，1.0当量)在二氯甲烷(0.6mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(0.3mL)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-氨基-4-甲氧基-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(41mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):476[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-氨基-4-甲氧基-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(41mg，0.086mmol，1.0当量)在MeOH(0.5mL)中的混合物中添加三乙胺(60.8mg，0.602mmol，7.0当量)、N-甲基咪唑(21.1mg，0.258mmol，3.0当量)和五氟丙酸乙酯。将混合物在rt下搅拌过夜。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱法纯化并用甲醇:二氯甲烷(6:94)洗脱，得到呈黄色油状物的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-4-甲氧基-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(60mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):622[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-4-甲氧基-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-2,2,3,3,3-五氟丙酰胺(60mg，0.097mmol，1.0当量)在DCM(0.5mL)中的混合物中添加吡啶(26.7mg，0.340mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(24.3mg，0.116mmol，1.2当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用DCM(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内37％ B至67％ B，67％ B；波长：220nm；RT1(min)：6.12)纯化，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-4-甲氧基-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(11.6mg，19％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.60-9.00(m,2H),7.35-7.60(m,1H),5.90-6.30(m,2H),4.85-5.05(m,1H),4.50-4.70(m,1H),3.95-4.20(m,1H),3.60-3.75(m,1H),3.40-3.60(m,1H),3.25-3.35(m,1H),3.00-3.20(m,7H),2.80-3.00(m,2H),2.65-2.80(m,1H),2.25-2.45(m,1H),2.08-2.25(m,2H),1.60-1.90(m,2H),1.30-1.50(m,2H),0.85-1.10(m,6H)。LC-MS(ESI,m/z):604[M+H]⁺。

实施例101

化合物101

向(叔丁氧基羰基)-L-苏氨酸甲酯(1g，4.29mmol，1.0当量)、乙酸乙烯酯(1.58mL，17.1mmol，4.0当量)和Na₂CO₃(273mg，2.57mmol，0.6当量)在甲苯(10mL)中的混合物中添加二氯化双(1,5环辛二烯)二铱(I)(144mg，0.214mmol，0.05当量)。将混合物在100℃处在密封管中搅拌4h。在冷却至室温后，将混合物用EA(50mL)稀释并用水(20mL)洗涤。分离各相。将有机相用盐水(20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(10％至20％)在PE中的梯度来纯化，得到呈棕色油状物的N-(叔丁氧基羰基)-O-乙烯基-L-苏氨酸甲酯(600mg，54％)。

向在0℃处冷却的N-(叔丁氧基羰基)-O-乙烯基-L-苏氨酸甲酯(600mg，2.32mmol，1.0当量)在DCM(6mL)中的溶液中添加0.9M Et₂Zn在己烷(6mL，5.79mmol，2.5当量)和CH₂I₂(0.93mL，11.6mmol，5.0当量)中的溶液。将混合物在室温处搅拌16h。添加冰/水(5mL)，分离各相。将水相用EA(3×5mL)萃取。将有机相合并，用水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈棕色油状物的O-环丙基-L-苏氨酸甲酯(600mg)。

向在0℃处冷却的O-环丙基-L-苏氨酸甲酯(600mg，3.46mmol，1.0当量)的DCM(6mL)溶液中添加NEt₃(0.96mL，6.93mmol，2.0当量)和Boc₂O(1.2mL，5.20mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌3h。将混合物用DCM(50mL)稀释并用水洗涤。分离各相。将有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(10％至20％)在PE中的梯度来纯化，得到呈黄色液体的N-(叔丁氧基羰基)-O-环丙基-L-苏氨酸甲酯(500mg，两步79％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.16(d,1H),4.27(m,1H),4.14(m,1H),3.73(s,3H),3.27(m,1H),1.45(s,9H),1.26(d,3H),0.51(m,2H),0.38(m,2H)。LCMS(ESI,m/z):274[M+H]⁺。

向在0℃处冷却的N-(叔丁氧基羰基)-O-环丙基-L-苏氨酸甲酯(500mg，1.83mmol，1.0当量)在THF(3.5mL)和水(1.5mL)中的溶液中添加LiOH(115mg，2.74mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌6h。在冷却至0℃后，将混合物用1M HCl酸化至pH＝2并用EA(4×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在C18上使用ACN(50％至60％)在0.1％ FA水溶液中的梯度来纯化，得到呈无色油状物的N-(叔丁氧基羰基)-O-环丙基-L-苏氨酸(350mg，74％)。

向在0℃处冷却的N-(叔丁氧基羰基)-O-环丙基-L-苏氨酸(150mg，0.578mmol，1.0当量)和(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯盐酸盐(133mg，0.578mmol，1.0当量)在DMF(1.5mL)中的溶液中添加HATU(286mg，0.752mmol，1.3当量)和DIPEA(0.26mL，1.45mmol，2.5当量)。将混合物在室温处搅拌7h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(4×5mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(20％至30％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(N-(叔丁氧基羰基)-O-环丙基-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(180mg，71％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(N-(叔丁氧基羰基)-O-环丙基-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸甲酯(195mg，0.449mmol，1.0当量)在THF(1.3mL)和水(0.7mL)中的溶液中添加LiOH(28.2mg，0.673mmol，1.5当量)。将反应混合物在室温处搅拌4h。冷却至0℃后，用1M HCl酸化混合物直至pH～2，然后用EA(4×5mL)萃取。将有机相合并，用盐水(5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(N-(叔丁氧基羰基)-O-环丙基-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(180mg，95％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(N-(叔丁氧基羰基)-O-环丙基-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(180mg，0.428mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(0.13mL，1.71mmol，4.0当量)。将混合物在室温处搅拌3h，然后减压浓缩，定量地得到呈棕色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(O-环丙基-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸的三氟乙酸盐形式(180mg)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(O-环丙基-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸三氟乙酸盐(180mg，0.414mmol，1.0当量)在MeOH(2mL)中的溶液中添加2,2,3,3,3-五氟丙酸乙酯(398mg，2.07mmol，5.0当量)、NEt₃(0.3mL，2.07mmol，5.0当量)和1-甲基咪唑(0.07mL，0.829mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌18h。将混合物减压浓缩。将残余物用水(5mL)吸收，在0℃处冷却并用1N HCl酸化至pH～2。将沉淀过滤，用冷水和己烷洗涤，并通过快速色谱法在C18上使用ACN(30％至40％)在0.1％FA水溶液中的梯度来纯化，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(O-环丙基-N-(2,2,3,3,3-五氟丙酰基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(125mg，62％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(O-环丙基-N-(2,2,3,3,3-五氟丙酰基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(115mg，0.247mmol，1.0当量)在DMF(1.2mL)中的溶液中添加(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酰胺盐酸盐(61mg，0.296mmol，1.2当量)、EDC·HCl(95mg，0.493mmol，2.0当量)、HOAt(33mg，0.247mmol，1.0当量)和NEt₃(0.10mL，0.714mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌18h。将混合物用水(3mL)稀释并用EA(4×5mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在C18上使用ACN(40％至50％)在0.1％ FA水溶液中的梯度进行纯化，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-(O-环丙基-N-(2,2,3,3,3-五氟丙酰基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(90mg，59％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-(O-环丙基-N-(2,2,3,3,3-五氟丙酰基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(85mg，0.137mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的溶液中添加吡啶(0.024mL，0.302mmol，2.2当量)和TFAA(0.021mL，0.151mmol，1.1当量)。将混合物在0℃处搅拌1h。将混合物用水(3mL)稀释，搅拌5min并用EA(5×5mL)萃取。将有机相合并，用饱和NaHCO₃(2mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：YMC-TRIART-C18柱，25*150mm，10μm；流动相A：10mM NH4HCO3的水溶液，流动相B：ACN；流速：17mL/min；梯度：在8min内30％ B至70％ B)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-(O-环丙基-N-(2,2,3,3,3-五氟丙酰基)-L-苏氨酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(32mg，39％)。¹H NMR(400MHz,362K,DMSO-d₆)δ9.23(m,1H),8.39-8.79(m,1H),7.19-7.44(m,1H),5.95-6.23(m,2H),4.71-4.96(m,1H),4.22-4.52(m,1H),3.96-4.20(m,1H),3.76-3.91(m,1H),3.67(m,1H),3.45-3.56(m,1H),3.27-3.41(m,1H),3.03-3.24(m,3H),2.82-2.98(m,2H),2.73(m,1H),2.29-2.41(m,1H),2.08-2.25(m,2H),1.65-1.88(m,2H),1.36-1.46(m,2H),1.06-1.17(m,3H),0.26-0.55(m,4H)。LCMS(ESI,m/z):602[M+H]⁺。

实施例102

化合物102a和102b

向四氯化钛(35.5g，187mmol，1.0当量)在THF(750mL)和四氯化碳(90mL)中的溶液中添加在氮气和0℃下搅拌的1,1,1-三氟丙酮(21.0g，187mmol，1.0当量)和丙二酸二乙酯丙二酸二乙酯(30g，187mmol，1.0当量)。在0℃处搅拌0.5h后，添加吡啶(60mL)在THF(75mL)中的溶液，然后在0℃处搅拌1h。将混合物在室温处搅拌过夜。将反应物用水(300mL)淬灭。将混合物用EA(3×500mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×300mL)和饱和碳酸氢钠(2×300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(4％-10％)进行色谱分离，得到呈浅黄色油状物的2-(1,1,1-三氟丙-2-亚基)丙二酸二乙酯(26g，54％)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.20-4.36(m,4H),2.24(s,3H),1.26-1.36(m,6H)。

向2-(1,1,1-三氟丙-2-亚基)丙二酸二乙酯(20.0g，78.7mmol，1.0当量)和碘化亚铜(7.49g，39.3mmol，0.5当量)在THF:DCM(250mL，1:5)中的溶液中在氮气和-20℃下在1h内滴加甲基碘化镁(39.3mL，118mmol，1.5当量，3M Et₂O溶液)。将混合物在-20℃处搅拌1h。将混合物倒入冰水(200mL)中，并添加饱和氯化铵水溶液(200mL)。将混合物搅拌30min。将混合物用EA(3×500mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×300mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈无色油状物的2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)丙二酸二乙酯(10.0g，47％，粗产物)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δ4.11-4.23(m,4H),3.66(s,1H),1.30-1.41(m,6H),1.26-1.29(m,6H)。LCMS(ESI,m/z):271[M+H]⁺。

向2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙-2-基)丙二酸二乙酯(10g，37.0mmol，1.0当量)在EtOH(100mL)中的溶液中添加在室温处搅拌的氢氧化钠(1.48g，37.0mmol，1.0当量，100mLH₂O溶液)。将混合物在室温处搅拌过夜。将混合物减压浓缩以去除EtOH，然后用EA(2×300mL)萃取。将水层用2M盐酸水溶液酸化至pH＝3。将混合物用EA(3×300mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色油状物的2-(乙氧基羰基)-4,4,4-三氟-3,3-二甲基丁酸(6.5g，72％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.11(br,1H),4.10-4.16(m,2H),3.60(s,1H),1.34-1.35(m,6H),1.16-1.21(m,3H)。LCMS(ESI,m/z):243[M+H]⁺。

向2-(乙氧基羰基)-4,4,4-三氟-3,3-二甲基丁酸(6.50g，26.8mmol，1.0当量)在2-甲基-2-丙醇(100mL)中的混合物中添加在氮气和室温下搅拌的二碳酸二叔丁酯(23.4g，107mmol，4.0当量)、三乙胺(3.53g，34.9mmol，1.3当量)和二苯基膦基叠氮化物(8.86g，32.2mmol，1.2当量)。将混合物在85℃处搅拌2h。将反应用水(100mL)淬灭。将混合物用EA(3×300mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×150mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(5％)进行色谱分离，得到呈灰白色固体的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4,4,4-三氟-3,3-二甲基丁酸乙酯(4.2g，粗产物)。LCMS(ESI,m/z):214[M-Boc+H]⁺。

在0℃处，向2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4,4,4-三氟-3,3-二甲基丁酸乙酯(4.2g，13.4mmol，1.0当量)在THF(40mL)、H₂O(20mL)和EtOH(20mL)中的溶液中添加氢氧化锂(1.61g，67.0mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩以去除THF和EtOH。将混合物用水(30mL)稀释并用EA(2×100mL)萃取。将水层用2M盐酸水溶液酸化至pH＝5。将混合物用EA(3×100mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4,4,4-三氟-3,3-二甲基丁酸(1.0g，粗产物)。LCMS(ESI,m/z):186[M-Boc+H]⁺。

在0℃处，向2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4,4,4-三氟-3,3-二甲基丁酸(350mg，1.23mmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(5mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(560mg，1.47mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(793mg，6.14mmol，5.0当量)。在搅拌20min后，添加(2S)-2-[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基甲酰胺基]-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(408mg，1.23mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。用水(5mL)淬灭反应。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ FA)(42％)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-4,4,4-三氟-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(400mg，54％)。将产物通过制备型SFC-HPLC分离(柱：CHIRALPAK IH，3*25cm，5μm；流动相A：CO₂，流动相B：MeOH(0.1％2M NH₃-MeOH)；流速：100mL/min；梯度：等度25％ B；柱温(℃)：35；背压(巴)：100；波长：220nm；RT1(min)：2.93；RT2(min)：7.78；)。纯化得到呈白色固体的异构体1(130mg，17％，化合物B)和呈白色固体的异构体2(165mg，22％，化合物A)。LCMS(ESI,m/z):600[M+H]⁺。

向((S)-1-((1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-4,4,4-三氟-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(160mg，0.267mmol，1.0当量)在二氯甲烷(3mL)中的混合物中添加三氟乙酸(1mL)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-氨基-4,4,4-三氟-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸盐(133mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):500[M+H]⁺。

在室温处，向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-氨基-4,4,4-三氟-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸盐(133mg，0.266mmol，1.0当量)和丙基膦酸酐(1.69g，2.66mmol，10.0当量，50％ EtOAc溶液)的搅拌混合物中添加吡啶(105mg，1.33mmol，5.0当量)。将混合物在rt下搅拌过夜。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Sunfire Prep C18OBD柱，19*250mm，10μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内42％ B至72％ B，72％B；波长：220nm；RT1(min)：6.55)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-2-((S)-4,4,4-三氟-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(47.9mg，31％，化合物102a)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ9.45-9.80(m,1H),8.60-9.20(m,1H),7.20-7.70(m,1H),5.85-6.30(m,2H),5.00-5.30(m,1H),4.50-5.00(m,1H),3.90-4.20(m,1H),3.60-3.90(m,1H),3.35-3.60(m,1H),3.15-3.35(m,2H),2.90-3.10(m,3H),2.60-2.89(m,1H),2.05-2.45(m,3H),1.65-1.90(m,2H),0.90-1.50(m,8H)。LC-MS(ESI,m/z):578[M+H]⁺。

使用中间体B代替中间体A，与针对化合物120a所述类似地获得化合物120b。LC-MS(ESI,m/z):578[M+H]⁺。

实施例103

化合物103

使用(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(环丙基甲氧基)-3-甲基丁酸甲酯代替N-(叔丁氧基羰基)-O-环丙基-L-苏氨酸甲酯，与针对化合物101所述类似地制备化合物103。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.32-8.84(m,2H),7.35(br.s.,1H),5.92-6.25(m,2H),4.90(m,1H),4.63-4.80(m,1H),3.99-4.29(m,1H),3.75(m,1H),3.34-3.54(m,1H),3.02-3.25(m,5H),2.81-2.96(m,2H),2.75(m,1H),2.22-2.41(m,1H),2.14(m,2H),1.62-1.91(m,2H),1.34-1.47(m,2H),1.10-1.24(m,6H),0.87(m,1H),0.39(m,2H),0.13(m,2H)。LCMS(ESI,m/z):630[M+H]⁺。

(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(环丙基甲氧基)-3-甲基丁酸甲酯：向(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-羟基-3-甲基丁酸甲酯(2.0g，8.10mmol，1.0当量)在THF(20mL)中的溶液中添加碳酸烯丙基甲酯(1.1mL，9.71mmol，1.2当量)和Pd(PPh₃)₄(467mg，0.404mmol，0.05当量)。将混合物在70℃处搅拌16h。将混合物减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(5％至20％)在PE中的梯度来纯化，得到呈黄色油状物的(S)-3-(烯丙氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸甲酯(1.5g，65％)。

向在-30℃处冷却的(S)-3-(烯丙氧基)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲基丁酸甲酯(1.0g，3.48mmol，1.0当量)在Et₂O(5mL)中的溶液中添加重氮甲烷在Et₂O(100mL)和Pd(OAc)₂(468mg，0.696mmol，0.2当量)中的溶液。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物通过硅藻土过滤。滤液在减压下浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(5％至20％)在PE中的梯度来纯化，得到呈灰白色固体的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-(环丙基甲氧基)-3-甲基丁酸甲酯(950mg，91％)。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ5.33(d,1H),4.29(m,1H),3.73(s,3H),3.15-3.27(m,2H),1.44(s,9H),1.30-1.40(m,6H),0.95(m,1H),0.48(m,2H),0.16(m,2H)。LCMS(ESI,m/z):302[M+H]⁺。

重氮甲烷的Et₂O溶液在0℃处由40％ KOH(30mL)和乙醚(100mL)中的N-甲基N-亚硝基脲(10g)产生。分离各相。将有机相直接用于反应。

实施例104

化合物104

向(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰氨基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(50.0mg，0.083mmol，1.0当量)在EtOAc(2mL)中的混合物中添加10％活性碳钯(25.0mg)。将混合物在室温处在氢气下搅拌1h。将混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Kinetex EVOC18，21.2×250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内42％ B至72％ B，72％ B；波长：220nm；RT：5min)纯化，得到呈白色固体的(1S,2S,3S,6R,7R)-N-[(1S)-1-氰基-2-{2,2-二氟-6-氧代-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酰胺(13.6mg，27％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.85-9.05(m,1H),8.55-8.84(m,1H),7.95-8.18(m,1H),4.80-4.95(m,1H),4.60-4.75(m,1H),4.25-4.59(m,1H),3.75-3.86(m,1H),3.52-3.74(m,1H),2.58-3.00(m,5H),2.50-2.57(m,1H),2.30-2.45(m,3H),2.02-2.29(m,2H),1.86-2.00(m,1H),1.68-1.85(m,1H),1.40-1.56(m,2H),1.20-1.39(m,3H),1.05-1.19(m,1H),0.78-1.04(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):602[M+H]⁺。

实施例105

化合物105

在氮气下，向L-谷氨酸二甲酯氯化氢(5.00g，23.63mmol，1.0当量)在乙腈(200mL)和水(30mL)中的溶液中加入氯甲酸苄基酯(3.70mL，26.00mmol，1.1当量)和N,N-二异丙基乙胺(10.1mL，59.20mmol，2.5当量)。将混合物在室温处搅拌1小时，然后减压浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱法纯化，用0-50％叔丁基甲基醚的二氯甲烷溶液洗脱，得到呈无色油状物的((苄氧基)羰基)-L-谷氨酸二甲酯(4.99g，68％收率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.77(d,J＝7.8Hz,1H),7.24-7.45(m,5H),5.04(s,2H),4.06-4.09(m,1H),3.63(s,2H),3.58(s,3H),2.31-2.48(m,2H),1.93-2.06(m,1H),1.82-1.90(m,1H)。LC-MS(ESI,m/z):310[M+H]⁺。

在-78℃和氮气下，向N-苄氧基羰基-L-谷氨酸二甲酯(1.40g，4.76mmol，1.0当量)和3-苯基-N-苯磺酰基氧氮丙啶(1.87g，7.14mmol，1.5当量)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中滴加双(三甲基甲硅烷基)氨基锂(1M的THF溶液，14.3mL，14.3mmol，3.0当量)。在-78℃处搅拌30min后，通过添加樟脑磺酸(4.76g，20.94mmol，4.4当量)在THF(21mL)中的溶液淬灭反应。将混合物用EA(100mL)稀释，然后用HCl水溶液(浓HCl水溶液:水，v:v＝1:4，100mL)稀释。将混合物升温至室温，然后搅拌16h。将混合物用EA(3×100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并过滤。将滤液减压浓缩，得到呈浅棕色半固体的(2S,4S)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-4-羟基戊二酸二甲酯(2.00g，粗产物)，其无需任何进一步纯化即可用于下一步骤。LC-MS(ESI,m/z):326[M+H]⁺。

将(2S,4S)-2-(((苄氧基)羰基)氨基)-4-羟基戊二酸二甲酯(2.00g粗产物，1.00当量)在NH₃(g)的MeOH(7M溶液，40mL)溶液中的悬浮液在60℃处搅拌16h。将混合物冷却至室温。通过过滤收集沉淀的白色固体，用MeOH(2×10mL)洗涤，并高真空干燥，得到呈白色固体的((2S,4S)-1,5-二氨基-4-羟基-1,5-二氧代戊-2-基)氨基甲酸苄酯(902mg，两步收率67％)。LC-MS(ESI,m/z):296[M+H]⁺。

向((2S,4S)-1,5-二氨基-4-羟基-1,5-二氧代戊-2-基)氨基甲酸苄酯(300mg，1.02mmol，1.0当量)在丙酮(10mL)中的悬浮液中添加浓H₂SO₄(0.1mL)。将混合物在室温处搅拌24h。将混合物减压浓缩。将残余物溶解于DMSO中并通过反相色谱法纯化(柱：Agela C₁₈柱，120g；流动相A：水(10mM NH₄HCO₃+0.1％ NH₃.H₂O)，流动相B：ACN；流速：50mL/min；梯度：60min内0％ B至100％ B；波长：200nm)。将收集的级分直接冻干，得到呈白色固体的((S)-1-氨基-3-((S)-2,2-二甲基-4-氧代噁唑烷-5-基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸苄酯(144mg，42％收率)。LC-MS(ESI,m/z):336[M+H]⁺。

将((S)-1-氨基-3-((S)-2,2-二甲基-4-氧代噁唑烷-5-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸苄酯(120mg，0.36mmol，1.0当量)和钯黑(67mg，0.63mmol，1.75当量)在甲醇(20mL)中的混合物脱气并用氢气(3x)再填充。将混合物在室温处在氢气下搅拌3h(氢气袋，1atm.-2atm.)。将混合物通过硅藻土垫过滤。将滤液减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的(S)-2-氨基-3-((S)-2,2-二甲基-4-氧代噁唑烷-5-基)丙酰胺(70.0mg，粗产物)，其无需任何进一步纯化即可用于下一步骤。LC-MS(ESI,m/z):20 2[M+H]⁺。

向(S)-2-氨基-3-((S)-2,2-二甲基-4-氧代噁唑烷-5-基)丙酰胺(70.0mg，0.35mmol，1.0当量)和(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(163mg，0.42mmol，1.2当量)在DMF(5mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(0.60mL，3.50mmol，10.0当量)和2-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(330mg，0.87mmol，2.5当量)。将混合物在室温处搅拌2h。用尼龙注射过滤器(13mm*0.45um)过滤混合物。将滤液通过反相色谱法纯化(柱：Agela C₁₈柱，120g；流动相A：水(10mM NH₄HCO₃+0.1％NH₃.H₂O)，流动相B：ACN；流速：40mL/min；梯度：60min内0％ B至100％ B；波长：210nm)。将收集的级分减压浓缩，得到呈浅橙色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-3-((S)-2,2-甲基-4-氧代噁唑烷-5-基)-1-氧代丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(157mg，79％)。LC-MS(ESI,m/z):572[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-3-((S)-2,2-二甲基-4-氧代噁唑烷-5-基)-1-氧代丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(140mg，0.24mmol，1.0rt)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加Burgess试剂(300mg，1.26mmol，5.0rt)。将混合物在室温处搅拌16h，然后浓缩。将残余物通过反相色谱法纯化(柱：Agela C₁₈柱，120g；流动相A：水(0.05％ TFA)，流动相B：ACN；流速：40mL/min；梯度：60min内0％ B至100％ B；波长：210nm)。将收集的级分直接冻干，得到呈浅橙色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2,2-二甲基-4-氧代噁唑烷-5-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(43.4mg，32％收率)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.70-8.85(m,2H),8.61-8.63(m,1H),5.99-6.20(m,2H),4.70-4.83(m,1H),4.35-4.50(m,1H),4.10-4.30(m,1H),4.04(d,J＝2.4Hz,1H),3.60-3.65(m,1H),3.44-3.46(m,1H),3.00-3.20(m,1H),2.92-3.05(m,2H),2.70-2.85(m,1H),2.03-2.22(m,2H),1.31-1.40(m,8H),0.78-0.94(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):554[M+H]⁺。

实施例106

化合物106

在氮气下，向1-叔丁基5-甲基(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-亚甲基戊二酸酯(3.00g，9.11mmol，1.0当量)、2,4,5,6-四-9H-咔唑-9-基-1,3-苯二腈(72.0mg，0.091mmol，0.01当量)和四丁基叠氮化铵(259mg，0.911mmol，0.1当量)在MeCN(40mL)中的混合物中添加氧杂环丁烷-3-胺(666mg，9.11mmol，1.0当量)。将混合物在室温和氮气下在450nm LED灯下搅拌3天。将混合物减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(1:12)进行色谱分离，得到呈浅黄色固体的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸叔丁酯(1.08g，32％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.52-8.62(m,1H),6.70-7.40(m,1H),4.60-4.70(m,1H),4.40-4.59(m,3H),3.75-4.10(m,1H),2.54-2.65(m,1H),2.27-2.39(m,1H),1.80-2.10(m,2H),1.48-1.60(m,1H),1.32-1.47(m,18H)。LC-MS(ESI,m/z):371[M+H]⁺。

向(2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸叔丁酯(1.08g，2.70mmol，1.0当量)在DCM(30mL)中的混合物中添加三氟乙酸(15mL)。将混合物在室温处搅拌2天，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(2S)-2-氨基-3-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸(578mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):215[M+H]⁺。

向(2S)-2-氨基-3-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸(578mg，2.70mmol，1.0当量)在DCM(10mL)中的混合物中添加三乙胺(1.10g，10.9mmol，4.03当量)和二碳酸二叔丁酯(707mg，3.24mmol，1.2当量)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸(850mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):315[M+H]⁺。

向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸(847mg，2.70mmol，1.0当量)在DMF(15mL)中的混合物中添加碳酸钾(1.2g，8.08mmol，3.0当量)和甲基碘(459mg，3.23mmol，1.2当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈黄色油状物的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸甲酯(438mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):329[M+H]⁺。

将(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酸甲酯(438mg，1.33mmol，1.0当量)在氨(15mL，7M MeOH溶液)中的混合物在室温处搅拌3天。将混合物减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(8:92)进行色谱分离，得到呈白色固体的N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]氨基甲酸叔丁酯(180mg，40％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.51-8.59(m,1H),7.24-7.32(m,1H),6.96-7.05(s,1H),6.86-6.94(m,1H),4.61-4.70(m,1H),4.41-4.57(m,3H),3.74-4.15(m,1H),2.54-2.69(m,1H),2.29-2.39(m,1H),1.70-2.05(m,2H),1.33-1.55(m,10H)。LC-MS(ESI,m/z):314[M+H]⁺。

向N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.319mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的混合物中添加三氟乙酸(1mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(2S)-2-氨基-3-{2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酰胺(68mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):214[M+H]⁺。

在0℃处，向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(126mg，0.321mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(145mg，0.381mmol，1.2当量)在DMF(3mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(248mg，1.919mmol，6.00当量)。在0℃处搅拌15min后，添加(2S)-2-氨基-3-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酰胺(68.0mg，0.319mmol，1.0当量)。将混合物在0℃处搅拌1h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ NH₄HCO₃+NH₃.H₂O，pH～13)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈白色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，52％)。LC-MS(ESI,m/z):588[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(40.0mg，0.068mmol，1.0当量)在DCM(0.9mL)中的混合物中添加三氟乙酸(0.3mL)。将混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酰胺(34.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):488[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酰胺(34.0mg，0.068mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的混合物中添加吡啶(22.0mg，0.272mmol，4.0当量)和2,2,3,3,3-五氟丙酸酐(38.0mg，0.123mmol，1.8当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(2mL)淬灭。将混合物用DCM(3×2mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×2mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈棕色油状物的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(30.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):566[M+H]⁺。

粗制(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(30.0mg)通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH Prep C18OBD柱，19×150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内31％ B至61％ B，61％ B；波长：220nm；RT1(min)：5.6；)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(9.8mg，19％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.78-8.98(m,1H),8.62-8.75(m,1H),8.36-8.58(m,1H),5.94-6.20(m,2H),4.89-4.99(m,1H),4.61-4.70(m,1H),4.37-4.60(m,4H),3.98-4.15(m,1H),3.58-3.72(m,1H),3.32-3.51m,1H),3.11-3.21(m,1H),2.67-2.99(m,4H),2.51-2.62(m,1H),2.39-2.47(m,1H),1.92-2.33(m,1H),1.67-1.89(m,1H),1.34-1.48(m,2H),0.84-1.06(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):566[M+H]⁺。

实施例107

化合物107

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}丙酰胺(66.0mg，0.136mmol，1.0当量)在MeOH(4mL)中的混合物中添加三乙胺(69.0mg，0.680mmol，5.0当量)、N-甲基咪唑(22.0mg，0.272mmol，2.0当量)和五氟丙酸乙酯(261mg，1.36mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×10mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(7:93)进行色谱分离，然后减压浓缩，得到呈灰白色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-2,2,3,3,3-五氟丙酰胺(60.0mg，66％)。LC-MS(ESI,m/z):634[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2S,3S,6R,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]氨基甲酰基}-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]-2,2,3,3,3-五氟丙酰胺(60.0mg，0.095mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的混合物中添加吡啶(27.0mg，0.333mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(28.0mg，0.133mmol，1.4当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(3mL)淬灭。将混合物用DCM(3×3mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×3mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19×150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内34％ B至64％ B，64％ B；波长：220nm；RT1(min)：6.25)，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-{6-氧代-2-氧杂-5-氮杂螺[3.4]辛-7-基}乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(9.8mg，16％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.60-8.96(m,2H),8.08-8.59(m,1H),5.91-6.25(m,2H),4.80-5.03(m,1H),4.60-4.75(m,1H),4.33-4.59(m,4H),3.95-4.20(m,1H),3.60-3.75(m,1H),3.35-3.59(m,1H),2.80-3.00(m,2H),2.60-2.79(m,2H),2.50-2.59(m,1H),2.35-2.40(m,1H),1.90-2.34(m,2H),1.65-1.86(m,1H),1.32-1.46(m,2H),0.80-1.02(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):616[M+H]+。

实施例108

化合物108

向1-叔丁基5-甲基(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-亚甲基戊二酸酯(5.00g，15.2mmol，1.0当量)在THF(50mL)/水(50mL)中的混合物中添加氢氧化锂(1.09g，45.5mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。添加水(50mL)，并用盐酸(1M)将混合物调节至pH＝6。将混合物用EtOAc(3×100mL)萃取。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色半固体的(4S)-5-(叔丁氧基)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-亚甲基-5-氧代戊酸(2.56g，51％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.57(s,1H),6.64-7.14(m,1H),6.06-6.13(m,1H),5.60-5.74(m,1H),3.92-4.14(m,1H),2.55-2.67(m,1H),2.37-2.48(m,1H),1.30-1.45(m,18H)。LC-MS(ESI,m/z):316[M+H]⁺。

向(2R)-1,1,1-三氟丁-3-烯-2-胺盐酸盐(1.33g，8.23mmol，1.0当量)和(4S)-5-(叔丁氧基)-4-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-亚甲基-5-氧代戊酸(2.60g，8.23mmol，1.0当量)在DCM(40mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(4.26g，32.9mmol，4.0当量)和2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷-2,4,6-三氧化物(5.24g，8.23mmol，1.0当量，50％ EtOAc溶液)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(50mL)淬灭。将混合物用DCM(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc:PE(13:87)进行色谱分离，得到呈浅黄色半固体的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-{[(2R)-1,1,1-三氟丁-3-烯-2-基]氨基甲酰基}戊-4-烯酸叔丁酯(1.66g，45％)。LC-MS(ESI,m/z):423[M+H]⁺。

向(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-4-{[(2R)-1,1,1-三氟丁-3-烯-2-基]氨基甲酰基}戊-4-烯酸叔丁酯(1.66g，3.93mmol，1.0当量)在THF(40mL)中的混合物中添加二碳酸二叔丁酯(3.43g，15.7mmol，4.0当量)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(240mg，1.96mmol，0.5当量)。将混合物在60℃处搅拌过夜。将反应物用水(80mL)淬灭。将混合物用DCM(3×80mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc:PE(7:93)进行色谱分离，得到呈浅黄色半油状物的(2S)-2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-4-{[(叔丁氧基羰基)[(2R)-1,1,1-三氟丁-3-烯-2-基]氨基]羰基}戊-4-烯酸叔丁酯(1.68g，67％)。LC-MS(ESI,m/z)：423[M-200+H]⁺。

在氮气下，向(2S)-2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-4-{[(叔丁氧基羰基)[(2R)-1,1,1-三氟丁-3-烯-2-基]氨基]羰基}戊-4-烯酸叔丁酯(1.0g，1.61mmol，1.0当量)在甲苯(100mL)中的混合物中添加第2Grubbs(409mg，0.482mmol，0.3当量)。将混合物在80℃处搅拌过夜。用水(200mL)淬灭反应体系。混合物用EtOAc(3×200mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EtOAc:PE(11:89)进行色谱分离，得到呈浅黄色半固体的(5R)-3-[(2S)-2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(叔丁氧基)-3-氧代丙基]-2-氧代-5-(三氟甲基)-5H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(580mg，56％)。LC-MS(ESI,m/z)：395[M-200+H]⁺。

向(5R)-3-[(2S)-2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(叔丁氧基)-3-氧代丙基]-2-氧代-5-(三氟甲基)-5H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(1.00g，1.68mmol，1.0当量)在EtOAc(20mL)中的混合物中添加10％活性碳钯(500mg)。将混合物在室温处在氢气下搅拌2h。将混合物通过硅藻土垫过滤，并将滤液减压浓缩，得到呈黄色油状物的(5R)-3-[(2S)-2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(叔丁氧基)-3-氧代丙基]-2-氧代-5-(三氟甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(980mg，96％)。LC-MS(ESI,m/z)：397[M-200+H]⁺。

向(5R)-3-[(2S)-2-[双(叔丁氧基羰基)氨基]-3-(叔丁氧基)-3-氧代丙基]-2-氧代-5-(三氟甲基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.335mmol，1.0当量)在MeOH(5mL)中的溶液中添加盐酸(5mL，9M水溶液)。将混合物在室温处搅拌3天，然后减压浓缩，得到呈浅棕色半固体的(2S)-2-氨基-3-[(5R)-2-氧代-5-(三氟甲基)吡咯烷-3-基]丙酸甲酯(85.0mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):255[M+H]⁺。

向(2S)-2-氨基-3-[(5R)-2-氧代-5-(三氟甲基)吡咯烷-3-基]丙酸甲酯(85.0mg，0.334mmol，1.0当量)在DCM(5mL)中的混合物中添加二碳酸二叔丁酯(88.0mg，0.401mmol，1.2当量)和三乙胺(102mg，1.00mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用DCM(3×10mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈浅棕色油状物的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[(5R)-2-氧代-5-(三氟甲基)吡咯烷-3-基]丙酸甲酯(100mg，75％)。LC-MS(ESI,m/z):255[M-Boc+H]⁺。

将(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[(5R)-2-氧代-5-(三氟甲基)吡咯烷-3-基]丙酸甲酯(100mg，0.282mmol，1.0当量)在氨(3mL，7M MeOH溶液)中的混合物在室温处搅拌2天。将混合物减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(6:94)进行色谱分离，得到呈灰白色固体的N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(5R)-2-氧代-5-(三氟甲基)吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(40.0mg，39％)。LC-MS(ESI,m/z):240[M-Boc+H]⁺。

向N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(5R)-2-氧代-5-(三氟甲基)吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.118mmol，1.0当量)在DCM(1.5mL)中的混合物中添加三氟乙酸(0.5mL)。将所得混合物在室温处搅拌1h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(2S)-2-氨基-3-[(5R)-2-氧代-5-(三氟甲基)吡咯烷-3-基]丙酰胺(28mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):240[M+H]⁺。

在0℃处，向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(45.0mg，0.117mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(53.0mg，0.140mmol，1.2当量)在DMF(1mL)中的混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(91.0mg，0.702mmol，6.0当量)。在0℃处搅拌15min后，添加(2S)-2-氨基-3-[(5R)-2-氧代-5-(三氟甲基)吡咯烷-3-基]丙酰胺(28.0mg，0.117mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅棕色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(5R)-2-氧代-5-(三氟甲基)吡咯烷-3-基]丙酰胺(50.0mg，58％)。LC-MS(ESI,m/z):610[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(5R)-2-氧代-5-(三氟甲基)吡咯烷-3-基]丙酰胺(50.0mg，0.082mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的混合物中添加吡啶(23.0mg，0.287mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(26.0mg，0.123mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌1h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用DCM(3×5mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19×150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内37％ B至67％ B，67％ B；波长：254nm；RT(min)：6.2)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(5R)-2-氧代-5-(三氟甲基)吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(12.6mg，25％)。LC-MS(ESI,m/z):592[M+H]⁺。

实施例109

化合物109

向在0℃处冷却的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸酯(2.0g，8.16mmol，1.0当量)在THF(20mL)中的溶液中添加3-硝基吡啶-4-醇(1.7g，12.2mmol，1.5当量)、三苯基膦(3.2g，12.2mmol，1.5当量)和DIAD(2.47mL，12.2mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌5h，然后减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(60％至100％)在PE中的梯度来纯化，得到呈黄色油状物的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-((3-硝基吡啶-4-基)氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(2.5g，86％)。

向NaIO₄(7.2g，34.1mmol，5.0当量)在水(15mL)中的溶液中添加Ru₂O.H₂O(135g，1.02mmol，0.15当量)。将混合物在室温处搅拌10min。添加1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-((3-硝基吡啶-4-基)氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(2.5g，6.81mmol，1.0当量)在EA(15mL)中的溶液。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(20mL)稀释并用EA(2×20mL)萃取。将有机相合并，用IPA(50mL)稀释，搅拌10min并通过硅藻土过滤。滤液在减压下浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(60％至100％)在PE中的梯度来纯化，得到呈黄色固体的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-((3-硝基吡啶-4-基)氧基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(2.3g，88％)。

向在0℃处冷却的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-((3-硝基吡啶-4-基)氧基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(2.3g，6.04mmol，1.0当量)在MeOH(11.5mL)和DCM(11.5mL)中的溶液中添加K₂CO₃(83mg，0.603mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物用水(20mL)稀释并用DCM(2×20mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(2S,4S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-((3-硝基吡啶-4-基)氧基)戊二酸二甲酯(2.0g，80％)。

向(2S,4S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-((3-硝基吡啶-4-基)氧基)戊二酸二甲酯(2.0g，4.84mmol，1.0当量)在乙酸(20mL)中的溶液中添加Fe(1.35g，24.2mmol，5.0当量)。将混合物在80℃处加热2h，然后减压浓缩。将残余物用饱和NaHCO₃碱化，并用EA(2×20mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙酸甲酯(1.4g，82％)。

将(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙酸甲酯(500mg，1.42mmol，1.0当量)在7M NH₃的MeOH(5mL)溶液中的溶液在室温处在密封管中搅拌48h。将混合物减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：X-SELECT-C18柱，19*250mm，5μm；流动相A：10mM NH4HCO3的水溶液，流动相B：ACN；流速：17mL/min；梯度：在8min内2％ B至40％ B)纯化，得到呈灰白色固体的((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，63％)。

将((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.595mmol，1.0当量)在2M HCl的Et₂O(5mL)溶液中的溶液在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈白色固体的(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙烯酰胺二盐酸盐(150mg，82％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(150mg，0.386mmol，1.0当量)在DMF(1.5mL)中的溶液中添加(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙酰胺二盐酸盐(104mg，0.364mmol，0.9当量)、EDC·HCl(147mg，0.772mmol，2.0当量)、HOAt(52mg，0.386mmol，1.0当量)和NEt₃(0.16mL，1.16mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(2×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在C18上使用ACN(20％至40％)在0.01％ TFA水溶液中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(150mg，64％)。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(150mg，0.247mmol，1.0当量)在DMF(1.5mL)中的溶液中添加吡啶(0.05mL，0.742mmol，3.0当量)和TFAA(0.06mL，0.495mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌30min。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(2×5mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：KROMOSIL-C18柱，25*250mm，7μm；流动相A：10mM NH4HCO3的水溶液，流动相B：ACN；流速：22mL/min；梯度：在8min内20％ B至70％ B)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(70mg，48％)。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.50-9.10(m,3H),8.09(s,1H),8.07(d,1H),6.87-6.93(m,1H),5.97-6.20(m,2H),4.90-5.08(m,1H),4.70-4.82(m,1H),4.43-4.48(m,1H),3.99-4.16(m,1H),3.65(m,1H),3.37-3.47(m,1H),3.01-3.22(m,1H),2.88-2.96(m,2H),2.73-2.85(m,1H),2.50-2.57(m,1H),2.32-2.40(m,1H),1.37-1.44(m,2H),0.82-0.91(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):589[M+H]⁺。

实施例110

化合物110

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-(叔丁氧基羰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(150mg，0.537mmol，1.0当量)在DMF(1.5mL)中的溶液中添加(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙酰胺二盐酸盐(152mg，0.645mmol，1.2当量)、DIPEA(0.22mL，1.34mmol，2.5当量)和HATU(306mg，0.805mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌2.5h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(2×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-甲酸叔丁酯(150mg，56％)。

将(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-甲酸叔丁酯(150mg，0.301mmol，1.0当量)在2M HCl的Et₂O溶液(2.0mL)中的溶液在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，定量地得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺二盐酸盐。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺二盐酸盐(150mg，0.393mmol，1.0当量)在DMF(1.5mL)中的溶液中添加(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酸(109mg，0.471mmol，1.2当量)、DIPEA(0.17mL，0.982mmol，2.5当量)和HATU(223mg，0.589mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌2.5h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(2×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色固体的((S)-1-((1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(60mg，33％)。

向在0℃处冷却的((S)-1-((1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.098mmol，1.0当量)在DCM(0.6mL)中的溶液中添加4N HCl的二氧杂环己烷溶液(0.09mL，0.393mmol，4.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，定量地得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺二盐酸盐。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺二盐酸盐(60mg，0.110mmol，1.0当量)在DMF(0.6mL)中的溶液中添加3,3,3-三氟丙酸(21mg，0.165mmol，1.5当量)、EDC·HCl(42mg，0.220mmol，2.0当量)、HOAt(15mg，0.110mmol，1.0当量)和NEt₃(0.04mL，0.330mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(2×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(3,3,3-三氟丙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(30mg，50％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(3,3,3-三氟丙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(30mg，0.048mmol，1.0当量)在DCM(0.3mL)中的溶液中添加吡啶(0.008mL，0.105mmol，2.2当量)和TFAA(0.007mL，0.052mmol，1.1当量)。将混合物在室温处搅拌30min。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(2×5mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：X-SELECT-C18柱，19*150mm，5μm；流动相A：10mM NH4HCO3的水溶液，流动相B：ACN；流速：17mL/min；梯度：在8min内20％ B至70％ B)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(3,3,3-三氟丙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(15mg，52％)。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ10.67-10.77(br.s.,1H),8.65(d,1H),8.14-8.07(m,2H),7.79-8.00(m,1H),6.86-6.97(m,1H),5.93-6.21(m,2H),4.96-5.12(m,1H),4.73-4.99(m,1H),4.19-4.47(m,1H),3.96-4.16(m,1H),3.63(m,1H),3.51(m,1H),3.16-3.38(m,2H),3.03(m,1H),2.89-2.98(m,2H),2.78(m,1H),2.52-2.60(m,1H),2.33-2.41(m,1H),1.37-1.46(m,2H),0.73-0.90(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):603[M+H]⁺。

实施例111

化合物111

使用(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[4,3-b][1,4]噁嗪-2-基)丙酰胺二盐酸盐代替(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺，与针对化合物82所述类似地制备化合物111。¹H NMR(500MHz,364K,DMSO-d₆)δ10.70(br.s.,1H),8.58-8.86(m,2H),8.03-8.15(m,2H),6.82-7.05(m,1H),6.04-6.37(m,2H),4.87-5.09(m,1H),4.67-4.89(m,1H),4.28-4.53(m,1H),4.11-4.26(m,1H),3.72(m,1H),3.42-3.64(m,1H),3.22-3.41(m,1H),3.09-3.21(m,2H),2.88-2.96(m,1H),2.42-2.59(m,1H),2.32-2.43(m,1H),0.76-1.01(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):625[M+H]⁺。

实施例112

化合物112

向在0℃处冷却的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4R)-4-羟基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(1.2g，4.63mmol，1.0当量)在THF(20mL)中的溶液中添加2-硝基吡啶-3-醇(648mg，4.63mmol，1.0当量)、三苯基膦(1.8g，6.95mmol，1.5当量)和DIAD(1.36mL，6.95mmol，1.5当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(60％至100％)在PE中的梯度来纯化，得到呈黄色油状物的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-((2-硝基吡啶-3-基)氧基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(1g，56％)。

向在0℃处冷却的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-((2-硝基吡啶-3-基)氧基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(950mg，2.49mmol，1.0当量)在MeOH(10mL)和DCM(10mL)中的溶液中添加K₂CO₃(34mg，0.249mmol，0.1当量)。将混合物在0℃处搅拌1h。添加水(20mL)，并分离各相。将水相用DCM(2×20mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(2S,4S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-((2-硝基吡啶-3-基)氧基)戊二酸二甲酯(900mg，80％)。

向(2S,4S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-((2-硝基吡啶-3-基)氧基)戊二酸二甲酯(850mg，2.06mmol，1.0当量)在乙酸(10mL)中的溶液中添加Fe(576mg，10.3mmol，5.0当量)。将混合物在80℃处加热2h。将混合物减压浓缩。将残余物用饱和NaHCO₃吸收，并用EA(2×20mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(1％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-2-基)丙酸甲酯(550mg，76％)。

将(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-2-基)丙酸甲酯(500mg，1.42mmol，1.0当量)在7M NH₃的MeOH(5mL)溶液中的溶液在室温处在密封管中搅拌48h。将混合物减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：Sunfire-C18柱，19*150mm，5μm；流动相A：10mM NH4HCO3的水溶液，流动相B：ACN；流速：17mL/min；梯度：在8min内20％ B至55％ B)纯化，得到呈灰白色固体的((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(300mg，63％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.25(s,1H),7.91(dd,1H),7.34(d,1H),7.06-7.25(d,2H),7.00(m,2H),4.55(m,1H),4.17(m,1H),2.05-2.10(m,2H),1.37(s,9H)。LCMS(ESI,m/z):337[M+H]⁺。

将((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(250mg，0.744mmol，1.0当量)在2M HCl的Et₂O(5mL)溶液中的溶液在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈白色固体的(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-2-基)丙烯酰胺二盐酸盐(150mg，85％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(120mg，0.309mmol，1.0当量)在DMF(1.2mL)中的溶液中添加(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-2-基)丙酰胺二盐酸盐(87.5mg，0.371mmol，1.2当量)、EDC·HCl(141mg，0.741mmol，2.0当量)、HOAt(42mg，0.309mmol，1.0当量)和NEt₃(0.17mL，1.236mmol，4.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(2×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在C18上使用ACN(20％至40％)在0.01％ FA水溶液中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(140mg，64％)。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-2-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(140mg，0.231mmol，1.0当量)在DMF(1.4mL)中的溶液中添加吡啶(0.06mL，0.693mmol，3.0当量)和TFAA(0.1mL，0.462mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌30min。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(2×5mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：X-SELECT-C18柱，19*150mm，5μm；流动相A：10mM NH4HCO3的水溶液，流动相B：ACN；流速：17mL/min；梯度：在8min内10％ B至70％ B)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-3-氧代-3,4-二氢-2H-吡啶并[3,2-b][1,4]噁嗪-2-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(45mg，46％)。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ11.0(br.s.,1H),8.57-8.80(m,2H),7.90(d,1H),7.22-7.32(m,1H),6.96(m,1H),5.96-6.20(m,2H),4.76-5.11(m,1H),4.63(m,1H),4.43(m,1H),3.98-4.18(m,1H),3.65(t,1H),3.37-3.47(m,1H),3.02-3.23(m,1H),2.80-2.96(m,2H),2.76(m,1H),2.49-2.56(m,1H),2.28-2.36(m,1H),1.37-1.48(m,2H),0.77-0.90(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):589[M+H]⁺。

实施例113

化合物113

使用4-硝基吡啶-3-醇代替2-硝基吡啶-3-醇，与针对化合物112所述类似地制备化合物113。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ10.95(br.s.,1H),8.63-8.82(m,2H),8.06-8.25(m,2H),6.90(m,1H),5.95-6.21(m,2H),4.87-5.13(m,1H),4.65-4.85(m,1H),4.39-4.52(m,1H),3.97-4.20(m,1H),3.65(m,1H),3.36-3.50(m,1H),3.02-3.23(m,1H),2.81-2.96(m,2H),2.77(m,1H),2.44-2.60(m,1H),2.23-2.41(m,1H),1.36-1.47(m,2H),0.76-0.93(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):589[M+H]⁺。

实施例114

化合物114

向1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸酯(2.0g，8.16mmol，1.0当量)在DMF(20mL)中的溶液中添加Ag₂O(5.6g，24.5mmol，3.0当量)和烯丙基碘(2.24mL，24.5mmol，3.0当量)。将混合物在室温处搅拌12h并在50℃处加热5h。冷却至室温后，将混合物通过硅藻土过滤。将滤液用水(50mL)稀释并用EA(3×50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(3×50mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(10％至15％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色油状物的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(烯丙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(2.1g，91％)。

在10min内向1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(烯丙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(2.1g，7.39mmol，1.0当量)在二氧杂环己烷(20mL)中的溶液中添加2.5％ OsO₄在tBuOH(0.2mL)中的溶液和NaIO₄(3.16g，14.8mmol，2.0当量)在水(20mL)中的溶液。将混合物在室温处剧烈搅拌1h。将混合物用水(50mL)稀释，并用EA(3×50mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(40％至50％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色油状物的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(2-氧代乙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(1.25g，60％)。

向在0℃处冷却的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(2-氧代乙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(1.2g，4.21mmol，1.0当量)在甲醇(12mL)中的溶液中分批添加NaBH₄(160mg，4.21mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将混合物用冰冷水(10mL)稀释并用DCM(2×20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(5％至10％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈无色油状物的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(2-羟基乙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(1.1g，91％)。

向在0℃处冷却的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(2-羟基乙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(1.1g，3.80mmol，1.0当量)在DCM(22mL)中的溶液中添加NEt₃(1.6mL，11.4mmol，3.0当量)、DMAP(46mg，0.376mmol，0.1当量)和TsCl(1.45g，7.61mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜。将混合物用冰冷水(10mL)洗涤。分离各相。将水相用DCM(2×20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(40％至45％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色油状物的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(2-(甲苯磺酰氧基)乙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(1.4g，83％)。

向NaIO₄(10.1g，47.4mmol，15.0当量)在水(20mL)中的溶液中添加RuO₂·H₂O(84mg，0.632mmol，0.2当量)。将混合物在室温处搅拌10min。添加1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(2-(甲苯磺酰氧基)乙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(1.4g，3.16mmol，1.0当量)在EA(20mL)中的溶液。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用冰冷水(20mL)稀释。分离各相。将水相用EA(2×30mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(40％至45％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色油状物的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-5-氧代-4-(2-(甲苯磺酰氧基)乙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(770mg，55％)。

向在0℃处冷却的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-5-氧代-4-(2-(甲苯磺酰氧基)乙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(550mg，1.20mmol，1.0当量)在MeOH(2.75mL)和DCM(2.75mL)中的溶液中添加K₂CO₃(33mg，0.239mmol，0.2当量)。将混合物在室温处搅拌1h。添加水(10mL)，并分离各相。将水相用DCM(2×20mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈油状物的(2S,4S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2-甲苯磺酰氧基)乙氧基)戊二酸二甲酯(570mg)。

向(2S,4S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(2-甲苯磺酰氧基)乙氧基)戊二酸二甲酯(570mg，1.16mmol，1.0当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加NaN₃(151mg，2.33mmol，2.0当量)。将混合物在60℃处加热2h。在冷却至室温后，将混合物用冰冷水(10mL)稀释并用EA(2×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(25％至30％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色油状物的(2S,4S)-2-(2-叠氮基乙氧基)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)戊二酸二甲酯(360mg，85％)。

向(2S,4S)-2-(2-叠氮基乙氧基)-4-((叔丁氧基羰基)氨基)戊二酸二甲酯(360mg，0.999mmol，1.0当量)在MeOH(10mL)中的溶液中添加10％Pd/C(70mg，50％湿)。将混合物在室温和H₂气氛下搅拌2h。将混合物通过硅藻土过滤。用DCM(10mL)洗涤该固体。滤液在减压下浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(2％至5％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈无色油状物的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙酸甲酯(225mg，74％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ6.05(bs,1H),5.37(m,1H),4.50(m,1H),4.17(dd,1H),4.04(m,1H),3.74(m,4H),3.61(m,1H),3.30(m,1H),2.36-2.42(m,1H),2.21-2.26(m,1H),1.44(s,9H)。LCMS(ESI,m/z):303[M+H]⁺。

将(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙酸甲酯(225mg，0.733mmol，1.0当量)在7M NH₃的甲醇(5mL)溶液中的溶液在密封管中于室温搅拌24h。将混合物减压浓缩，得到呈灰白色固体的((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，93％)。

将((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.595mmol，1.0当量)在2M HCl的Et₂O(5mL)溶液中的溶液在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈白色固体的(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙酰胺盐酸盐(62mg，95％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(130mg，0.335mmol，1.0当量)在DMF(1.3mL)中的溶液中添加(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙酰胺盐酸盐(64mg，0.335mmol，1.0当量)、EDC·HCl(130mg，0.678mmol，2.0当量)、HOAt(44mg，0.335mmol，1.0当量)和NEt₃(0.22mL，1.67mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(10mL)稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用MeOH(5％至6％)在DCM中的梯度来纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(120mg，65％)。

向(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(100mg，0.179mmol，1.0当量)在DMF(1mL)中的溶液中添加吡啶(0.04mL，0.537mmol，3.0当量)和TFAA(0.028mL，0.359mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物用水(5mL)稀释并用EA(3×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：SUNFIRE-C18柱，19*150mm，5μm；流动相A：10mM NH₄HCO₃的水溶液，流动相B：ACN；流速：18mL/min；梯度：在8min内10％ B至60％ B)，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-3-氧代吗啉-2-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(65mg，67％)。¹H NMR(500MHz,364K,DMSO-d₆)δ8.09-8.80(m,2H),7.70(s,1H),5.94-6.22(m,2H),4.86(m,1H),4.44-4.74(m,1H),4.01-4.24(m,2H),3.88(m,1H),3.57-3.77(m,2H),3.45(m,1H),3.33(m,1H),3.12-3.24(m,1H),3.05(m,1H),2.80-2.95(m,2H),2.75(m,1H),2.38(m,1H),2.07-2.21(m,1H),1.36-1.46(m,2H),0.88-0.97(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):540[M+H]⁺。

实施例115

化合物115

将(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(770mg，1.96mmol，1.0当量)在4N HCl的二氧杂环己烷(4mL)溶液中的混合物在室温处搅拌4h。将混合物减压浓缩，定量地得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸盐酸盐。

向在0℃冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸盐酸盐(100mg，0.304mmol，1.0当量)在MeOH(1mL)中的溶液中添加2,2,3,3,3-五氟丙酸乙酯(292mg，1.52mmol，5.0当量)、NEt₃(0.21mL，1.52mmol，5.0当量)和1-甲基咪唑(0.05mL，1.03mmol，2.0当量)。将混合物在室温处搅拌18h。在冷却至0℃后，将混合物通过添加1N HCl酸化直至pH＝2，用水(0.5mL)稀释并在0℃处老化过夜。将沉淀过滤，用冷水洗涤并减压干燥，得到呈灰白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(60mg，45％)。

向在0℃处冷却的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(100mg，0.228mmol，1.0当量)在DMF(1.0mL)中的溶液中添加(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙酰胺盐酸盐(66mg，0.297mmol，1.3当量)、吡啶(0.18mL，2.28mmol，10.0当量)和50％T₃P的EA(0.54mL，0.912mmol，4.0当量)溶液。将混合物在室温处搅拌7h。添加冷水(5mL)，并分离各相。将水相用EA(4×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水和饱和NaHCO₃洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物溶解于DCM(1mL)中并冷却至0℃。添加吡啶(0.035mL，0.435mmol，2.2当量)和TFAA(0.030mL，0.217mmol，1.1当量)后，将混合物在0℃处搅拌1h。添加水(3mL)。将混合物在室温处搅拌5min，并分离各层。将水相用EA(5×5mL)萃取。将有机相合并，用饱和NaHCO₃(2mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过制备型HPLC(柱：SUNFIRE-C18柱，19*150mm，5μm；流动相A：10mM NH4HCO3的水溶液，流动相B：ACN；流速：17mL/min；梯度：在9min内20％ B至55％ B)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-3-氧代吗啉-2-基)乙基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(40mg，30％)。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.38-8.68(m,2H),7.72(br.s.,1H),5.92-6.22(m,2H),4.63-4.91(m,1H),4.55(s,1H),3.99-4.21(m,2H),3.88(m,1H),3.58-3.76(m,2H),3.47(m,1H),3.29-3.40(m,1H),3.11-3.24(m,1H),3.00-3.10(m,1H),2.81-2.96(m,2H),2.75(m,1H),2.31-2.42(m,1H),2.08-2.23(m,1H),1.36-1.46(m,2H),0.87-1.02(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):590[M+H]⁺。

实施例116

化合物116

使用2-氯-2,2-二氟乙酸甲酯代替2,2,3,3,3-五氟丙酸乙酯，与针对化合物115所述类似地制备化合物116。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.19-8.71(m,2H),7.61-7.85(br.s.,1H),5.92-6.23(m,2H),4.65-4.94(m,1H),4.37-4.61(m,1H),3.97-4.24(m,2H),3.87(m,1H),3.57-3.74(m,2H),3.41-3.56(m,1H),3.33(m,1H),3.12-3.24(m,1H),3.00-3.10(m,1H),2.65-2.95(m,3H),2.38(m,1H),2.13(m,1H),1.30-1.48(m,2H),0.77-1.09(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):556[M+H]⁺。

实施例117

化合物117

使用(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙酰胺盐酸盐代替(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺，与针对化合物82所述类似地制备化合物117。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.22-8.82(m,2H),7.72(br.s.,1H),6.07-6.33(m,2H),4.66-4.91(m,1H),4.32-4.52(m,1H),4.13-4.25(m,1H),4.05(m,1H),3.88(m,1H),3.57-3.77(m3H),3.39-3.51(m,2H),3.08-3.31(m,3H),2.86-2.94(m,1H),2.33-2.46(m,1H),2.09-2.22(m,1H),0.86-1.01(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):576[M+H]⁺。

实施例118

化合物118

向1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸酯(10.0g，40.8mmol，1.0当量)在无水THF(100mL)中的混合物中添加溴乙腈(17.0g，143mmol，3.5当量)和甲醇锂(5.29g，143mmol，3.5当量)。将混合物在rt下搅拌过夜。通过LC-MS监测反应，剩余一些1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸酯(<15％(PDA))。添加另一批甲醇锂(2.26g，61.2mmol，1.5当量)和溴乙腈(7.28g，61.2mmol，1.5当量)。将混合物搅拌3h。将反应物用冰水(200mL)淬灭并用EtOAc(3×400mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×80mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(50％-75％)进行色谱分离，得到1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(氰基甲氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(6.0g，52％)，呈浅黄色油状物(储存后变为固体)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ4.17-4.53(m,4H),3.46-3.83(m,5H),2.24-2.51(m,2H),1.31-1.55(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):185[M-Boc+H]⁺。

在室温处向高碘酸钠(13.4g，63.3mmol，3.0当量)在水(15mL)中的搅拌溶液中添加水合氧化钌(IV)(1.43g，9.50mmol，0.15当量)。将混合物搅拌10min，然后在室温处添加1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(氰基甲氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(6.0g，21.1mmol，1.0当量)的ea(60mL)溶液。将混合物在室温处搅拌1天。将混合物过滤并用EtOAc(3×200mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(70％)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(氰基甲氧基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(5.0g，79％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ4.73-4.86(m,1H),4.50-4.62(m,2H),4.18-4.28(m,1H),3.77-3.86(m,3H),2.64-2.81(m,1H),2.07-2.14(m,1H),1.46-1.55(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):199[M-Boc+H]⁺。

在室温和氢气下向1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(氰基甲氧基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(5.0g，16.8mmol，1.0当量)在MeOH(50mL)中的混合物中添加雷尼镍(2.0g)。将混合物在rt下搅拌过夜。将上清液转移，并且将残余物雷尼镍用DCM洗涤(5x)。将混合物过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(6％)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙酸甲酯(3.5g，70％)。LC-MS(ESI,m/z):203[M-Boc+H]⁺

将(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙酸甲酯(3.5g，11.6mmol，1.0当量)在氨(100mL，7M MeOH溶液)中的混合物在室温处搅拌2天。将混合物减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过硅胶柱色谱法用甲醇:二氯甲烷(15:85)纯化，得到呈黄色固体的((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2.1g，64％)。LC-MS(ESI,m/z):288[M+H]⁺

将((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.348mmol，1.0当量)和氯化氢(5mL，4M 1,4-二氧杂环己烷溶液)的混合物在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈灰白色固体的粗制(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙酰胺(70mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):188[M+H]⁺。

将(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(400mg，0.970mmol，1.0当量)和氯化氢(10mL，4M 1,4-二氧杂环己烷溶液)的混合物在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色固体的(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(303mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):313[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(303mg，0.970mmol，1.0当量)在MeOH(3mL)中的混合物中添加三乙胺(490mg，4.85mmol，5.0当量)、N-甲基咪唑(159mg，1.94mmol，2.0当量)和2,2,3,3,3-五氟丙酸甲酯(863mg，4.850mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2天。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(350mg，78％)。LC-MS(ESI,m/z):459[M+H]⁺。

在0℃处，向(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(150mg，0.327mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(149mg，0.392mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(254mg，1.96mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(S)-2-氨基-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙酰胺(61.2mg，0.327mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(100mg，48％)。LC-MS(ESI,m/z):628[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(100mg，0.159mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的混合物中添加吡啶(50.4mg，0.636mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(56.9mg，0.270mmol，1.7当量)。将混合物在室温处搅拌4h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用二氯甲烷(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内42％ B至72％ B，72％ B；波长：220nm；RT1(min)：6.3)纯化，得到呈白色固体的(1S,2R,3S,6R,7S,9R)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(2S)-3-氧代吗啉-2-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基]-9-氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3-甲酰胺(41.4mg，42％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.80-9.00(m,1H),8.60-8.80(m,1H),7.70-7.95(m,1H),4.80-5.00(m,1H),4.65-4.80(m,1H),4.53-4.65(m,1H),4.20-4.50(m,1H),4.00-4.18(m,1H),3.80-4.00(m,1H),3.70-3.80(m,1H),3.50-3.70(m,2H),3.25-3.45(m,1H),3.10-3.20(m,1H),2.60-2.70(m,2H),2.50-2.60(m,1H),2.25-2.45(m,2H),2.05-2.20(m,1H),1.80-2.00(m,1H),1.45-1.75(m,2H),1.20-1.45(m,1H),0.90-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):610[M+H]⁺。

实施例119

化合物119

由(1S,3aS,4R,5S,7R,7aS)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基)-5-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸制备化合物119，与针对由(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-2-((S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸制备化合物118所述类似。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.50-9.20(m,2H),7.70-7.90(m,1H),4.55-4.95(m,3H),4.30-4.50(m,1H),4.00-4.15(m,1H),3.80-4.00(m,2H),3.50-3.70(m,2H),3.25-3.40(m,1H),3.10-3.20(m,1H),2.55-2.90(m,1H),2.40-2.53(m,1H),2.25-2.40(m,3H),2.05-2.23(m,1H),1.55-1.80(m,2H),1.30-1.55(m,2H),0.85-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):560[M+H]⁺。

实施例120

化合物120

使用(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-5-氧代-7-氧杂-4-氮杂螺[2.5]辛-6-基)丙酸甲酯代替(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-3-氧代吗啉-2-基)丙酸甲酯，与针对化合物114所述类似地制备化合物120。¹H NMR(500MHz,364K,DMSO-d₆)δ8.14-8.74(m,2H),7.75-7.95(br.s.,1H),5.93-6.23(m,2H),4.69-4.93(m,1H),4.49(m,1H),4.02-4.26(m,2H),3.71-3.91(m,1H),3.65(m,1H),3.35-3.57(m,2H),3.00-3.24(m,1H),2.79-2.94(m,2H),2.76(m,1H),2.37-2.50(m,1H),2.10-2.27(m,1H),1.32-1.48(m,2H),0.86-1.03(m,9H),0.57-0.81(m,4H)。LCMS(ESI,m/z):566[M+H]⁺。

(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-5-氧代-7-氧杂-4-氮杂螺[2.5]辛-6-基)丙酸甲酯：向1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸酯(5.0g，20.4mmol，1.0当量)在THF(50mL)中的溶液中添加LiOMe(3.8g，102mmol，5.0当量)和溴乙腈(7.11mL，102mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌4h。将混合物倒入冰冷水(20mL)中并用EA(3×50mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(40％至50％)在PE中的梯度来纯化，得到呈棕色油状物的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(氰基甲氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(1.5g，26％)。

向高碘酸钠(1.6g，7.38mmol，3.0当量)在水(10mL)中的溶液中添加RuO₂·H₂O(49mg，0.369mmol，0.15当量)。将混合物在室温处搅拌10min。添加1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(氰基甲氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(700mg，2.46mmol，1.0当量)在EA(10mL)中的溶液后，将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(20mL)稀释。分离各相。将水相用EA(2×30mL)萃取。将有机相合并，并添加iPrOH(5mL)。搅拌10min后，添加盐水(10mL)。分离各相。将有机相用盐水(10mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(45％至50％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色油状物的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(氰基甲氧基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(650mg，88％)。

向在0℃处冷却的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(氰基甲氧基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(600mg，2.01mmol，1.0当量)在DCM(6mL)和甲醇(6mL)中的溶液中添加K₂CO₃(56mg，0.402mmol，0.2当量)。将混合物在室温处搅拌1h。添加冰冷水(10mL)，并分离各相。将水相用DCM(2×30mL)萃取。将有机相合并，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(35％至40％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色油状物的(2S,4S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(硝基甲氧基)戊二酸二甲酯(550mg，82％)。

向在-78℃处冷却的(2S,4S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-(氰基甲氧基)戊二酸二甲酯(200mg，0.606mmol，1.0当量)在THF(2mL)中的溶液中添加Ti(OiPr)₄(0.45mL，1.33mmol，2.2当量)和3M EtMgBr的Et₂O(1.61mL，4.84mmol，8.0当量)溶液。将混合物在室温处搅拌1h。添加BF₃·Et₂O(0.37mL，2.66mmol，4.4当量)。在室温处1h后，将混合物倒入28％NH₄OH(5mL)中并用EA(3×20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(2×5mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(80％至100％)在PE中的梯度来纯化，得到呈黄色油状物的(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-((S)-5-氧代-7-氧杂-4-氮杂螺[2.5]辛-6-基)丙酸甲酯(33mg，16％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ5.67(br.s.,1H),5.41(m,1H),4.54(m,1H),4.24(m,1H),3.96(m,1H),3.74(s,3H),3.51(m,1H),2.33-2.41(m,1H),2.27-2.31(m,1H),1.44(s,9H),0.79-0.89(m,3H),0.71(m,1H)。LCMS(ESI,m/z):329[M+H]⁺。

实施例121

化合物121

向1-叔丁基2-甲基(2S,4S)-4-羟基吡咯烷-1,2-二甲酸酯(5.00g，20.3mmol，1.0当量)和三甲基膦(2.04mL，2.03mmol，0.1当量)在ACN(20mL)中的搅拌混合物中添加丙烯腈(10.8g，203mmol，10.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色油状物的1-叔丁基2-甲基(2S,4S)-4-(2-氰基乙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(3.9g，60％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ4.24-4.40(m,1H),4.10-4.23(m,1H),3.60-3.70(m,3H),3.50-3.59(m,3H),2.20-2.30(m,1H),2.63-2.70(m,2H),2.25-2.48(m,1H),2.00-2.10(m,1H),1.25-1.48(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):199[M-Boc+H]⁺。

向1-叔丁基2-甲基(2S,4S)-4-(2-氰基乙氧基)吡咯烷-1,2-二甲酸酯(7.00g，23.4mmol，1.0当量)在EA(50mL)中的搅拌混合物中添加高碘酸钠(25.0g，116mmol，4.98当量)和水合氧化钌(IV)(1.56g，11.7mmol，0.5当量)在水(50mL)中的溶液。将混合物在50℃处搅拌过夜。将混合物用EA(500mL)稀释然后通过硅藻土垫过滤。将有机层用盐水(500mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(80％)进行色谱分离，得到呈黄色油状物的1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(2-氰基乙氧基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(5.4g，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):213[M-Boc+H]⁺。

将1-(叔丁基)2-甲基(2S,4S)-4-(2-氰基乙氧基)-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸酯(4.40g，14.1mmol，1.0当量)和雷尼镍(2.30g)在MeOH(20mL)中的混合物在氢气和室温下搅拌过夜。将混合物通过硅藻土垫过滤并用甲醇(3×10mL)洗涤。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(8:100)进行色谱分离，得到呈白色固体的(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[(2S)-3-氧代-1,4-氧杂氮杂环庚烷-2-基]丙酸甲酯(1.9g，40％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.60-7.85(m,1H),7.10-7.31(m,1H),3.90-4.25(m,3H),3.60-3.70(m,3H),3.40-3.59(m,1H),3.10-3.30(m,2H),1.75-1.95(m,2H),1.60-1.70(m,2H),1.30-1.48(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):482[M+H]⁺。

将(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3-[(2S)-3-氧代-1,4-氧杂氮杂环庚烷-2-基]丙酸甲酯(1.90g，6.01mmol，1.0当量)在NH₃(g)(20.0mL，7M MeOH溶液)中的混合物在室温处搅拌2天，然后减压浓缩，得到呈白色固体的N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(2S)-3-氧代-1,4-氧杂氮杂环庚烷-2-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.4g，73％，粗产物)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.60-7.85(m,1H),7.25-7.41(m,1H),6.90-7.10(m,1H),6.70-6.88(m,1H),4.00-4.20(m,2H),3.85-3.95(m,1H),3.45-3.60(m,1H),3.10-3.26(m,2H),1.70-1.93(m,2H),1.55-1.68(m,2H),1.26-1.48(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):302[M+H]⁺。

向N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(2S)-3-氧代-1,4-氧杂氮杂环庚烷-2-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(154mg，0.511mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的搅拌混合物中添加三氟乙酸(1mL)。将混合物在室温处搅拌2h，然后减压浓缩，得到呈棕色油状物的(2S)-2-氨基-3-[(2S)-3-氧代-1,4-氧杂氮杂环庚烷-2-基]丙酰胺(103mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):202[M+H]⁺。

在0℃处，向(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(386mg，0.994mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(491mg，1.29mmol，1.3当量)在DMF(2mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(1.02g，7.95mmol，8.0当量)。在0℃处搅拌20min后，添加N-[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(2S)-3-氧代-1,4-氧杂氮杂环庚烷-2-基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.664mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈白色固体的(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(2S)-3-氧代-1,4-氧杂氮杂环庚烷-2-基]丙酰胺(220mg，36％)。LC-MS(ESI,m/z):572[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2S,3S,6R,7S)-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(2S)-3-氧代-1,4-氧杂氮杂环庚烷-2-基]丙酰胺(210mg，0.367mmol，1.0当量)在DCM(2mL)中的搅拌混合物中添加吡啶(116mg，1.46mmol，4.0当量)和三氟乙酸酐(46.3mg，0.477mmol，1.3当量)。将混合物在室温处搅拌3h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：Xselect CSH F-Phenyl OBD柱，19*250mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内30％ B至60％ B，60％ B；波长：254nm；RT1(min)：6)纯化，得到呈白色固体的(1R,2S,3S,6R,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(2S)-3-氧代-1,4-氧杂氮杂环庚烷-2-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基]-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(115mg，56％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.70-9.00(m,1H),8.20-8.69(m,1H),7.40-7.70(m,1H),5.85-6.25(m,2H),4.80-5.00(m,1H),4.40-4.65(m,1H),3.95-4.10(m,2H),3.80-3.94(m,1H),3.50-3.79(m,2H),3.38-3.49(m,1H),2.80-3.37(m,5H),2.68-2.79(m,1H),2.10-2.30(m,1H),1.80-2.09(m,1H),1.50-1.79(m,2H),1.30-1.49(m,2H),0.85-1.00(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):554[M+H]⁺。

实施例122

化合物122

使用CF₃CF₂CO₂Me代替CF₃CO₂Me，与针对化合物124所述类似地制备化合物122，并在相同反应中另外添加N-甲基咪唑(2当量)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ99.38-9.29(1H,m),9.00-8.80(1H,m),7.77-7.65(1H,m),6.21-5.94(2H,m),4.99-4.88(1H,m),4.60-4.53(1H,m),4.20-3.93(1H,m),3.70-3.60(1H,m),3.50-3.40(1H,m),3.18-2.90(5H,m),2.72-2.62(1H,m),2.41-2.30(1H,m),2.21-2.00(2H,m),1.80-1.61(2H,m),1.42-1.34(2H,m)。LC-MS(ESI,m/z):1188[“2M+Na”]⁺。

实施例123

化合物123

使用ClCF₂CO₂Me代替CF₃CO₂Me，与针对化合物124所述类似地制备化合物123，并在相同反应中另外添加NMI(2当量)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.18-9.09(1H,d),8.99-8.90(1H,m),7.76-7.66(1H,m),6.21-5.97(2H,m),4.99-4.88(1H,m),4.68-4.45(1H,d),4.17-3.94(1H,m),3.71-3.61(1H,t),3.48-3.38(1H,m),3.18-2.90(5H,m),2.74-2.64(1H,m),2.42-2.30(1H,m),2.21-2.00(2H,m),1.80-1.62(2H,m),1.42-1.34(2H,m)。LC-MS(ESI,m/z):1119/1121[“2M+Na”]⁺。

实施例124

化合物124

在Ar下将(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(312mg)和N-Boc-L-叔亮氨酸-d₉(203mg)在反应器中混合。添加二异丙基乙胺(0.6mL)，然后添加无水DMF(15mL)。将混合物冷却至-30℃，然后添加HATU(386mg)。在1h内使混合物升温至0℃，并将温度再保持45min。添加柠檬酸溶液(914mg，在4mL水中)。将混合物用二氯甲烷(2×15mL)萃取。将萃取物合并，然后通过硫酸钠过滤。将混合物浓缩，然后在旋转蒸发器上用50℃水浴完成，得到黄色油状物(1.05g)。将混合物溶解于二氯甲烷(10mL)中，然后加载到50g正相硅胶柱上。施加0至15％甲醇在二氯甲烷中的线性梯度，并使用TLC结合茚三酮染色并加热来寻找产物级分，然后将其浓缩以获得呈白色固体的((S)-1-((1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-3,3-双(甲基-d3)-1-氧代丁-2-基-4,4,4-d3)氨基甲酸叔丁酯(363mg)。LC-MS(ESI,m/z):555[M+H]⁺。

将((S)-1-((1S,3aR,4S,7R,7aS)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-3,3-双(甲基-d3)-1-氧代丁-2-基-4,4,4-d3)氨基甲酸叔丁酯(155mg)与三氟乙酸(10mL/g原料)混合。将混合物搅拌30min，然后浓缩。添加DIEA(10当量)，然后添加甲醇(20mL/g原料)和CF₃COOMe(5当量)。将混合物封盖并搅拌至完全，如通过LC-MS测定的。将混合物浓缩，用二氯甲烷稀释，用柠檬酸水溶液洗涤，通过硫酸钠过滤，并通过正相硅胶色谱法使用0至15％甲醇-二氯甲烷线性梯度来纯化，得到(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-双(甲基-d3)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基-4,4,4-d3)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(137mg)。

将(1S,3aR,4S,7R,7aS)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-3,3-双(甲基-d3)-2-(2,2,2-三氟乙酰胺基)丁酰基-4,4,4-d3)-2,3,3a,4,7,7a-六氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(137mg)与吡啶(5.0当量)和二氯甲烷(20mL/g)混合，然后在冰浴中冷却。依次添加部分TFAA(1当量)以完成反应：每次添加后，将混合物搅拌30min，同时保持冷却。完成后，将混合物与水一起搅拌，然后用二氯甲烷萃取。将萃取物通过硫酸钠过滤，浓缩，通过反相色谱法纯化并浓缩以获得化合物124(47.2mg)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.45-9.37(1H,d),9.08-8.91(1H,m),7.77-7.67(1H,m),6.20-5.99(2H,m),5.00-4.88(1H,m),4.65-4.4.45(1H,m),4.20-3.93(1H,m),3.70-3.60(1H,m),3.50-3.40(1H,m),3.18-2.90(5H,m),2.72-2.62(1H,m),2.40-2.30(1H,m),2.20-2.00(2H,m),1.80-1.61(2H,m),1.45-1.36(2H,m)。LC-MS(ESI,m/z):1087[“2M+Na”]。

实施例125

化合物125

与针对化合物76所述类似地制备化合物125，从2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯-6-d代替2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯开始。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.65-8.85(m,1H),7.30-7.55(m,1H),5.85-6.25(m,1H),4.82-4.98(m,1H),4.50-4.69(m,1H),3.98-4.18(m,1H),3.57-3.70(m,1H),3.35-3.48(m,1H),3.10-3.22(m,3H),2.80-2.98(m,2H),2.68-2.78(m,1H),2.32-2.40(m,1H),2.02-2.18(m,2H),1.63-1.88(m,2H),1.32-1.45(m,2H),0.80-1.05(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):575[M+H]⁺。

在-78℃和氮气下向4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7S)-9-氧代-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸烷-3,4-二甲酸酯(600mg，1.93mmol，1.0当量)在THF(6mL)中的搅拌混合物中滴加二异丙基氨基锂(1.94mL，3.87mmol，2.0当量)。将混合物在0℃处搅拌1h，然后在-78℃处缓慢添加1,1,1-三氟-N-苯基-N-((三氟甲基)磺酰基)甲磺酰胺(1.03g，2.90mmol，1.5当量)。将混合物在0℃处搅拌2h。将反应用水(20mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用EA:PE(3:7)进行色谱分离，得到粗产物。将粗产物通过C₁₈柱用CH₃CN/水(0.05％ FA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色油状物的4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7R)-9-(三氟甲磺酰氧基)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3,4-二甲酸酯(400mg，44％)。LC-MS(ESI,m/z):342[M-Boc+H]⁺。

在氮气下，向4-叔丁基3-甲基(1S,2R,3S,6R,7R)-9-(三氟甲磺酰氧基)-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3,4-二甲酸酯(180mg，0.408mmol，1.0当量)、氯化锂(138mg，3.26mmol，8.0当量)和四(三苯基膦)铂(0)(80.0mg，0.069mmol，0.17当量)在THF(2mL)中的混合物中添加三丁基锡烷-d(834mg，2.86mmol，7.0当量)。将混合物在50℃处搅拌2h。将反应物用水(10mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×20mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ NH₄HCO₃+NH₃.H₂O，pH～13)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈浅黄色半固体的2-(叔丁基)1-甲基(1S,3aR,4S,7R,7aS)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-1,2-二甲酸酯-6-d(60.0mg，44％)。¹H NMR(400MHz,CDCl3-d)δ6.14-6.30(m,1H),3.82-3.98(m,1H),3.61-3.77(m,3H),3.35-3.53(m,1H),3.01-3.24(m,2H),2.73-2.98(m,3H),1.50-1.58(m,1H),1.32-1.49(m,10H)。LC-MS(ESI,m/z):195[M-Boc+H]⁺。

实施例126

化合物126

使用1-甲氧基环丙烷-1-甲酸代替2,2-二氟乙酸，与针对化合物72所述类似地制备化合物126。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.54-8.77(m,1H),7.28-7.44(m,1H),6.85-7.07(m,1H),5.89-6.20(m,2H),4.67-4.94(m,1H),4.47(d,1H),4.01-4.12(m,1H),3.63(m,1H),3.38-3.51(m,1H),3.21-3.31(m,3H),3.06-3.21(m,2H),3.03(m,1H),2.87-2.95(m,2H),2.74(m,1H),2.21-2.40(m,1H),2.11-2.20(m,2H),1.66-1.88(m,2H),1.35-1.46(m,2H),0.97-1.12(m,4H),0.86-0.95(m,9H)。LCMS(ESI,m/z):526[M+H]⁺。

实施例127

化合物127

使用1-甲氧基环丁烷-1-甲酸代替2,2-二氟乙酸，与针对化合物72所述类似地制备化合物127。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.36-8.82(m,1H),7.29-7.47(m,1H),6.54-6.83(m,1H),5.85-6.22(m,2H),4.72-4.99(m,1H),4.39-4.50(m,1H),4.03-4.10(m,1H),3.35-3.76(m,3H),3.00-3.24(m,5H),2.87-2.98(m,2H),2.68-2.86(m,1H),2.22-2.41(m,3H),2.00-2.19(m,3H),1.65-1.83(m,3H),1.33-1.46(m,3H),0.82-0.94(d,10H)。LCMS(ESI,m/z):540[M+H]⁺。

实施例128

化合物128

向(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(400mg，0.934mmol，1.0当量)在1,4-二氧杂环己烷(1mL)中的搅拌混合物中添加盐酸(10mL，4M 1,4-二氧杂环己烷溶液)。将混合物在室温处搅拌3h然后减压浓缩，得到呈白色固体的(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(306mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):329[M+H]⁺。

向(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(306mg，0.932mmol，1.0当量)在甲醇(5mL)中的搅拌混合物中添加2-氯-2,2-二氟乙酸乙酯(738mg，4.66mmol，5.0当量)、三乙胺(471mg，4.66mmol，5.0当量)和N-甲基咪唑(153mg，1.86mmol，2.0当量)。将混合物在rt下搅拌过夜。将混合物用盐酸(2M)酸化至pH＝6，并用EtOAc(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈白色固体的c(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(350mg，80％，粗产物)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.43-13.25(m,1H),8.96-9.31(m,1H),6.02-6.33(m,2H),4.47-4.55(m,1H),4.16-4.32(m,1H),3.60-3.66(m,1H),3.09-3.36(m,4H),2.93-3.04(m,1H),0.86-1.05(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):441[M+H]⁺。

在0℃处，向(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(350mg，0.794mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(392mg，1.03mmol，1.3当量)在DMF(5mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(820mg，6.35mmol，8.0当量)。在0℃处搅拌20min后，添加(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(135mg，0.794mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的(2S)-2-{[(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(250mg，50％)。LC-MS(ESI,m/z):59 4[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(250mg，0.421mmol，1.0当量)在DCM(3mL)中的搅拌混合物中添加吡啶(116mg，1.47mmol，3.5当量)和三氟乙酸酐(123mg，0.589mmol，1.4当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将反应物用水(30mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内36％ B至66％ B，66％ B；波长：220nm；RT1(min)：5)纯化，得到呈白色固体的(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(93mg，38％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.70-8.88(m,1H),8.50-8.69(m,1H),7.32-7.54(m,1H),6.06-6.40(m,2H),4.63-5.00(m,1H),4.30-4.54(m,1H),4.05-4.23(m,1H),3.65-3.85(m,1H),3.55-3.64(m,1H),3.23-3.50(m,1H),3.10-3.22(m,4H),2.80-2.92(m,1H),2.08-2.45(m,3H),1.62-1.92(m,2H),0.81-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):576[M+H]⁺。

实施例129

化合物129

在0℃处，向(2S)-2-氨基-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(159mg，0.934mmol，1.0当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(461mg，1.21mmol，1.3当量)在DMF(6mL)中的搅拌混合物中添加N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(965mg，7.47mmol，8.0当量)。在0℃处搅拌20min后，添加(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-3,3-二甲基丁酰基]-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酸(400mg，0.934mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌1h。将反应用水(50mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物在硅胶柱上用MeOH:DCM(7:100)进行色谱分离，得到呈黄色固体的N-[(2S)-1-[(1R,2R,3S,6S,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(350mg，61％)。LC-MS(ESI,m/z):58 2[M+H]⁺。

向N-[(2S)-1-[(1R,2R,3S,6S,7S)-3-{[(1S)-1-氨基甲酰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]氨基甲酰基}-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-4-基]-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基]氨基甲酸叔丁酯(350mg，0.602mmol，1.0当量)在1,4-二氧杂环己烷(1mL)中的搅拌混合物中添加盐酸(15mL，4M 1,4-二氧杂环己烷溶液)。将混合物在室温处搅拌3h，然后减压浓缩，得到呈白色固体的(2S)-2-{[(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(289mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):482[M+H]⁺。

向(2S)-2-{[(1R,2R,3S,6S,7S)-4-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-基]甲酰胺基}-3-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]丙酰胺(289mg，0.600mmol，1.0当量)和2,2,3,3,3-五氟丙酸钾(121mg，0.600mmol，1.0当量)在三丙基-1,3,5,2l^[5],4l^[5],6l^[5]-三氧杂三磷杂环己烷-2,4,6-三酮(1.91g，6.00mmol，10当量)中的搅拌混合物中添加吡啶(237mg，3.00mmol，5.0当量)。将混合物在室温处搅拌2d。将反应用水(50mL)淬灭。将混合物用EtOAc(3×50mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：10min内30％ B至60％ B，60％ B；波长：220nm；RT1(min)：8.73)纯化，得到呈白色固体的(1R,2R,3S,6S,7S)-N-[(1S)-1-氰基-2-[(3S)-2-氧代吡咯烷-3-基]乙基]-4-[(2S)-3,3-二甲基-2-(2,2,3,3,3-五氟丙酰胺基)丁酰基]-10,10-二氟-4-氮杂三环[5.2.1.0^{2,6}]癸-8-烯-3-甲酰胺(45.7mg，12％)。¹H NMR(400MHz,80℃,DMSO-d₆)δ8.70-8.91(m,2H),7.32-7.54(m,1H),6.00-6.40(m,2H),4.83-5.00(m,1H),4.50-4.70(m,1H),4.10-4.40(m,1H),3.65-3.85(m,1H),3.55-3.64(m,1H),3.23-3.50(m,1H),3.10-3.22(m,4H),2.80-2.92(m,1H),2.08-2.45(m,3H),1.62-1.92(m,2H),0.81-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):610[M+H]⁺。

实施例130

化合物131

使用(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲氧基-3-甲基丁酸甲酯代替N-(叔丁氧基羰基)-O-环丙基-L-苏氨酸甲酯，与针对化合物101所述类似地制备化合物131。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.09-8.89(m,2H),7.29-7.43(br.s.,1H),5.93-6.24(m,2H),4.91(m,1H),4.65-4.81(m,1H),4.00-4.23(m,1H),3.62-3.75(m,1H),3.34-3.54(m,1H),3.02-3.24(m,6H),2.80-2.98(m,2H),2.74(m,1H),2.22-2.41(m,1H),2.04-2.20(m,2H),1.63-1.91(m,2H),1.30-1.48(m,2H),1.05-1.22(m,6H)。LCMS(ESI,m/z):590[M+H]⁺。

实施例131

化合物132

使用(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲氧基-3-甲基丁酸甲酯代替N-(叔丁氧基羰基)-O-环丙基-L-苏氨酸甲酯，与针对化合物101所述类似地制备化合物131。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.09-8.89(m,2H),7.29-7.43(br.s.,1H),5.93-6.24(m,2H),4.91(m,1H),4.65-4.81(m,1H),4.00-4.23(m,1H),3.62-3.75(m,1H),3.34-3.54(m,1H),3.02-3.24(m,6H),2.80-2.98(m,2H),2.74(m,1H),2.22-2.41(m,1H),2.04-2.20(m,2H),1.63-1.91(m,2H),1.30-1.48(m,2H),1.05-1.22(m,6H)。LCMS(ESI,m/z):590[M+H]⁺。

实施例132

化合物133

使用(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲氧基-3-甲基丁酸甲酯代替N-(叔丁氧基羰基)-O-环丙基-L-苏氨酸甲酯，与针对化合物101所述类似地制备化合物131。¹H NMR(400MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.09-8.89(m,2H),7.29-7.43(br.s.,1H),5.93-6.24(m,2H),4.91(m,1H),4.65-4.81(m,1H),4.00-4.23(m,1H),3.62-3.75(m,1H),3.34-3.54(m,1H),3.02-3.24(m,6H),2.80-2.98(m,2H),2.74(m,1H),2.22-2.41(m,1H),2.04-2.20(m,2H),1.63-1.91(m,2H),1.30-1.48(m,2H),1.05-1.22(m,6H)。LCMS(ESI,m/z):590[M+H]⁺。

实施例133

化合物134

在0℃处，向(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-2-((S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酸(180mg，0.437mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(199mg，0.524mmol，1.2当量)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(338mg，2.62mmol，6.0当量)。将混合物在0℃处搅拌20min，然后在0℃处添加(S)-2-氨基-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙酰胺(75.0mg，0.437mmol，1.0当量)。将混合物在室温处搅拌2h。将混合物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色固体的((S)-1-((1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-6-氟八氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(190mg，78％)。LC-MS(ESI,m/z):566[M+H]⁺。

将((S)-1-((1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-1-(((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)氨基甲酰基)-6-氟八氢-2H-4,7-亚甲基异吲哚-2-基)-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(190mg，0.336mmol，1.0当量)在氯化氢(5mL，4M 1,4-二氧杂环己烷溶液)中的混合物在室温处搅拌2h。将混合物减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(156mg，粗产物)。LC-MS(ESI,m/z):466[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺盐酸盐(156mg，0.336mmol，1.0当量)在MeOH(3mL)中的混合物中添加2-氯-2,2-二氟乙酸乙酯(530mg，3.36mmol，10.0当量)和三甲胺(407mg，4.03mmol，12.0当量)。将混合物在室温处搅拌过夜，然后用盐酸(2M)酸化至pH＝3。将水层用EA(3×60mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×20mL)洗涤，并经无水硫酸钠干燥。将混合物减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过C18柱用CH₃CN/水(0.05％ TFA)纯化。将所需的级分减压浓缩，得到呈黄色油状物的(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(80mg，41％)。LC-MS(ESI,m/z):578[M+H]⁺。

向(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-N-((S)-1-氨基-1-氧代-3-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)丙-2-基)-2-((S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(80.0mg，0.138mmol，1.0当量)在DCM(1mL)中的混合物中添加吡啶(49.1mg，0.621mmol，4.5当量)和三氟乙酸酐(60.9mg，0.290mmol，2.1当量)。将混合物在室温处搅拌5h。用水(5mL)淬灭反应。将混合物用二氯甲烷(3×30mL)萃取。将有机层合并，用盐水(2×10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。将粗产物通过制备型HPLC(柱：XSelect CSH制备型C18 OBD柱，19*150mm，5μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：25mL/min；梯度：7min内33％ B至63％ B，63％ B；波长：220nm；RT1(min)：5.87)纯化，得到呈白色固体的(1S,3aR,4S,6R,7S,7aR)-2-((S)-2-(2-氯-2,2-二氟乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-氰基-2-((S)-2-氧代吡咯烷-3-基)乙基)-6-氟八氢-1H-4,7-亚甲基异吲哚-1-甲酰胺(29.6mg，38％)。¹H NMR(400MHz,100℃,DMSO-d₆)δ9.65-8.80(m,1H),8.50-8.65(m,1H),7.35(br,1H),4.80-4.95(m,1H),4.55-4.70(m,1H),4.45-4.55(m,1H),4.30-4.45(m,1H),4.70-4.80(m,1H),4.60-4.70(m,1H),3.15-3.25(m,1H),3.05-3.15(m,1H),2.60-2.70(m,2H),2.50-2.60(m,1H),2.30-2.40(m,2H),2.10-2.20(m,2H),1.90-2.05(m,1H),1.85-1.95(m,1H),1.75-1.85(m,1H),1.65-1.75(m,1H),1.40-1.60(m,1H),1.20-1.40(m,1H),0.90-1.10(m,9H)。LC-MS(ESI,m/z):560[M+H]⁺。

实施例134

化合物135

使用(2S,3R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲氧基-4-甲基戊酸代替N-(叔丁氧基羰基)-O-环丙基-L-苏氨酸，与针对化合物101所述类似地制备化合物135。¹H NMR(500MHz,363K,DMSO-d₆)δ8.57-8.89(m,2H),7.29-7.42(m,1H),5.96-6.28(m,2H),4.76-4.94(m,1H),4.26-4.67(m,1H),3.95-4.10(m,1H),3.67(t,1H),3.34-3.46(m,2H),3.30-3.33(m,3H),3.03-3.37(m,3H),2.84-2.96(m,2H),2.73(m,1H),2.30-2.40(m,1H),2.08-2.19(m,2H),1.65-1.87(m,3H),1.36-1.47(m,2H),0.82-0.96(m,6H)。LCMS(ESI,m/z):604[M+H]⁺。

(2S,3R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲氧基-4-甲基戊酸：向在0℃处冷却的(R)-4-((R)-1-羟基-2-甲基丙基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(1.7g，6.23mmol，1.0当量)在DMF(17mL)中的溶液中添加NaH(373mg，9.34mmol，1.5当量)。将混合物在0℃处搅拌1h。添加碘甲烷(0.46mL，7.47mmol，1.2当量)。将混合物在室温处搅拌16h。将混合物用水(30mL)稀释，然后用EA(2×20mL)萃取。将有机相合并，用盐水(20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩。将残余物通过快速色谱法在硅胶上使用EA(1％至5％)在PE中的梯度来纯化，得到呈无色油状物的(R)-4-((R)-1-甲氧基-2-甲基丙基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(1.5g，88％)。

向在0℃处冷却的(R)-4-((R)-1-甲氧基-2-甲基丙基)-2,2-二甲基噁唑烷-3-甲酸叔丁酯(580mg，2.02mmol，1.0当量)在丙酮(6mL)中的溶液中添加Jones试剂(2.5mL，5.00mmol，2.5当量)。将混合物在室温处搅拌5h，然后减压浓缩。将残余物用iPrOH(5mL)吸收，通过添加NaHCO₃直至pH＝7来中和，并用EA(2×10mL)萃取。将有机相合并，用盐水(20mL)洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并减压浓缩，得到呈无色油状物的(2S,3R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-甲氧基-4-甲基戊酸(450mg，85％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.7(br.s.,1H),6.23(d,1H),4.14(dd,1H),3.25-3.35(m,4H),1.70(m,1H),1.38(s,9H),1.03(d,2H),0.93(d,3H),0.84(d,3H)。LCMS(ESI,m/z):262[M+H]⁺。

实施例135

LC-MS方法

最终化合物在一些情况下可作为与对应立体异构体的混合物获得。主要异构体的保留时间示于上表中。

LC-MS方法的描述

实施例139

附加化合物

附加的式(I)化合物可使用本文所述的类似材料和方法制备，诸如本文所述的那些。

包括其药学上可接受的盐。

实施例A

SARS-Cov-2 3CLpro和HRV3C双重测定

在环境温度处，在384孔低体积聚丙烯微量滴定板中进行蛋白酶测定。对于双重测定，3CLpro和HRV3C使用Multidrop Combi(Thermo Scientific；Waltham,MA)添加并用小分子预孵育30min。通过添加两种肽底物引发反应。将反应温育30min，并通过添加0.5％甲酸(最终)淬灭，随后使用1％碳酸氢钠(最终)中和。添加20mM Hepes pH 8.0中的内标肽用于定量蛋白酶产物。对于SAMDI-MS分析，使用384通道自动液体处理器将2μL的每种反应混合物转移到用中和亲和素呈递自组装单层官能化的SAMDI生物芯片阵列。将SAMDI阵列在加湿室中温育1h以允许生物素酰化肽底物、切割产物和内标的特异性固定。通过用去离子超滤水洗涤SAMDI阵列来纯化样品，并用压缩空气干燥。将在80％乙腈:20％柠檬酸铵水溶液中包含α-氰基肉桂酸的基质通过分配50nL至阵列中的每个点以自动形式施加。在AB SciexTOF-TOF 5800系统(AB Sciex,Framingham,MA)上使用反射正离子模式进行SAMDI-MS，在随机光栅采样中分析400次发射/点。对于数据分析，使用TOF/TOF Series Explorer(ABSciex)计算产物和内标的曲线下面积(峰)(AUC)，并使用等式(AUC产物/AUC内标)计算所形成的产物的量。使用产物曲线下面积(AUC)除以内标的AUC的比率计算所生成的产物的量。用0.5％甲酸(最终)预淬灭阴性对照。通过Z-因子确定该测定的稳健性。通过使用GraphpadPrism 8中的四参数方程拟合曲线来确定IC₅₀s。

表1示出了测试化合物的相关IC₅₀值，其中“A”表示EC₅₀<20nM，“B”表示IC₅₀≥20nM且<200nM，“C”表示IC₅₀≥200nM且<2000nM，“D”表示IC₅₀≥2000nM且<20000nM，并且“E”表示IC₅₀≥20000nM且<100000nM。如表1中的数据所示，本文所述的化合物(包括其药学上可接受的盐)可有效抑制并用于治疗冠状病毒和鼻病毒。

表1

实施例B

冠状病毒测定

HeLa细胞中的OC43冠状病毒测定

人β冠状病毒OC43购自ATCC(Manassas,VA)，并使用HCT-8人结肠直肠上皮细胞(ATCC)繁殖。使用HeLa人宫颈上皮细胞(ATCC)作为易感宿主细胞系，并使用补充有10％胎牛血清(FBS)、1％(v/v)青霉素/链霉素(P/S)、1％(v/v)HEPES和1％(v/v)cellgroglutagro^TM补充剂(均得自Corning,Manassas,VA)的EMEM培养基在37℃处培养。对于OC43抗病毒测定，将每孔1.5×10⁴个HeLa细胞在37℃处在具有透明底部的白色96孔板中的100μL完全培养基中铺板达24h，以促进附着并允许细胞从接种应激中恢复。第二天，去除细胞培养基。将在100μL测定培养基(EMEM，2％ FBS，1％ P/S，1％cellgro glutagro^TM补充剂，1％HEPES)中连续稀释的化合物添加到细胞中，并在加湿的5％ CO₂培养箱中在37℃处温育4h。将100μL OC43病毒原液稀释至已知产生最佳细胞病变效应的浓度，引起细胞活力降低80％-90％。将96孔板在33℃处温育6(HeLa)天；每个板含有未感染的对照孔以及未用化合物处理的病毒感染孔。平行地测定不添加OC43病毒的细胞毒性板。在温育期结束时，用100μL cell-titer-glo试剂(Promega,Madison,WI)替换100μL细胞培养上清液，并在室温处温育至少10min，然后测量发光。在Perkin Elmer(Waltham,MA)Envision酶标仪上测量发光。抗病毒抑制％如下计算：[(经化合物处理的感染细胞样品)-(无化合物的感染对照)]/[(未感染的对照)-(无化合物的感染对照)]*100；使用GraphPad(San Diego,CA)prism软件8.3.1版，生成抗病毒剂量-响应图作为S形拟合、log(抑制剂)对比响应-可变斜率(四参数)模型，并计算EC₅₀，其为对应于病毒细胞病变效应的50％抑制的预测化合物浓度。

表2示出了测试化合物的相关EC₅₀和CC₅₀值，“A”表示EC₅₀<100nM，“B”表示EC₅₀≥100nM且<1000nM，“C”表示EC₅₀≥1000nM且<10000nM，并且“D”表示EC₅₀≥10000nM且<100000nM。对于CC₅₀，值以微摩尔(μm)报告，“A”表示CC₅₀≥10000nM，并且“B”表示CC₅₀≥1μM且<10μM。

表2

VeroE6细胞中的SARS-CoV-2感染模型

SARS-CoV-2抗病毒测定来源于先前建立的SARS-CoV测定(PMID：15961169)。在该测定中，由于病毒的致细胞病变效应，在感染SARS-CoV-2后，Vero E6-eGFP细胞的荧光下降。在抗病毒化合物的存在下，细胞致病性被抑制，并且荧光信号被挽救。在第-1天，将测试化合物在测定培养基(补充有2％v/v FCS的DMEM)中连续稀释。将板温育(37℃，5％CO₂和95％相对湿度)过夜。在第0天，将稀释的化合物与Vero E6-eGFP细胞(25,000个细胞/孔)、SARS-CoV-2-GHB-03021/2020(20TCID₅₀/孔)和MDR1抑制剂CP-100356(最终浓度0.5μM)在96孔blackview板(Greiner Bio-One,Vilvoorde,Belgium)中混合。将板在加湿培养箱中在37℃和5％ CO₂下温育。在感染后第4天，使用氩激光扫描显微镜检查孔的eGFP表达。显微镜设置为488nm激发和510nm发射，并将孔的荧光图像转换为信号值。结果表示为EC₅₀值，其被定义为与未经处理的病毒感染对照细胞相比，从病毒减少的eGFP信号实现50％挽救的化合物浓度。在不存在病毒的情况下，在如先前所述的标准MTS测定(PMID：22575574)中评价化合物的毒性。

表3示出了测试化合物的相关EC₅₀和CC₅₀值，“A”表示EC₅₀<100nM，“B”表示EC₅₀≥100nM且<1000nM，“C”表示EC₅₀≥1000nM且<10000nM，并且“D”表示EC₅₀≥10000nM且<50000nM。对于CC₅₀，值以微摩尔(μm)报告。“A”表示CC₅₀≥10μm。“B”表示CC₅₀≥1μm且<10μm。

表3

B.1.1.7A549-dual_ACE2_TMPRSS2细胞中的感染模型

将A549-dual_ACE2_TMPRSS2细胞(InvivoGen目录号a549-cov2r)在潮湿的5％CO₂温育箱中的生长培养基中于37℃进行增殖，该生长培养基通过在DMEM(gibco目录号41965-039)中补充10％v/v热灭活的FCS和10μg/mL杀稻瘟菌素(InvivoGen ant-bl-05)、100μg/mL潮霉素(InvivoGen ant-hg-1)、0.5μg/mL嘌呤霉素(InvivoGen ant-pr-1)和100μg/mL zeocin(InvivoGen ant-zn-05)来制备。通过在DMEM(gibco目录号41965-039)中补充2％v/v热灭活的FCS来制备测定培养基。

所用的病毒分离株来自B.1.1.7谱系(来源于hCoV-19/Belgium/rega-12211513/2020；EPI_ISL_791333,2020-12-21；参见Abdelnabi等人，“Comparing infectivity andvirulence of emerging SARS-CoV-2variants in Syrian hamsters”EBioMedicine 2021年6月；68:103403。doi:10.1016/j.ebiom.2021.103403)。

对于抗病毒测试，将细胞以15,000个细胞/孔的密度接种在96孔板(Falcon)中的测定培养基中。过夜生长后，用指定浓度的化合物处理细胞，并以0.001TCID50/细胞的MOI进行感染(在测定培养基中最终体积为200μL/孔)。在感染后第4天，使用如先前所述的MTS(PMID：22575574)分析由病毒诱导的CPE或由化合物特异性副作用引起的细胞活力的差异。

对于毒性测试，使用相同的实验设置，不同的是将不含病毒的测定培养基添加到细胞中并且将不含细胞的孔的另外对照加入到板中。

表4示出了测试化合物的相关EC₅₀和CC₅₀值，“A”表示EC₅₀<100nM，“B”表示EC₅₀≥100nM且<1000nM，“C”表示EC₅₀≥1000nM且<10000nM。对于CC₅₀，值以微摩尔(μM)报告。“A”表示CC₅₀≥10μM。“B”表示CC₅₀≥1μM且<10μM。

表4

表2、表3和表4证明了本文所述的化合物(包括其药学上可接受的盐)可有效抑制和治疗冠状病毒。

实施例C

小核糖核酸病毒和诺罗病毒测定

式(I)的化合物(包括其药学上可接受的盐)按照与以下文章之一中所述方案类似的方案进行测试：Kim等人，Journal of Virology(2012)86(21):11754-11762；Zhang等人，JACS(2020)(https://dx.doi.org/10.1021/acs.jmedchem.9b01828)；以及美国专利9,603,864。

Kim等人和Zhang等人的方案可用于测试针对小核糖核酸病毒和诺罗病毒的活性。

实施例D

对于组织蛋白酶L测定，将10pM人组织蛋白酶L(R&D Systems；Minneapolis,MN)与测试化合物预孵育30min。通过添加肽底物Z-FR-AMC(最终浓度2μM，Anaspec；Fremont,CA)引发反应。在Envision酶标仪(Perkin Elmer；Waltham,MA)上使用355/460激发/发射过滤模块，以2分钟间隔测量荧光，持续30min。通过使用GraphPad Prism中的四参数方程拟合曲线来计算每个测定的IC₅₀值。

表5示出了测试化合物的相关IC₅₀值，其中“A”表示IC₅₀≥10000nM，“B”表示IC₅₀≥1000nM且<10000nM，“C”表示IC₅₀≥100nM且<1000nM，“D”表示IC₅₀<100nM。

表5

此外，尽管前述已出于清楚和理解的目的通过举例说明和示例的方式进行了一些详细描述，但本领域技术人员将会理解，在不脱离本公开的实质的情况下，可进行许多和各种修改。因此，应当清楚地理解，本文公开的形式仅是例示性的，并且不旨在限制本公开的范围，而是还涵盖符合本公开的真实范围和实质的所有修改和替代方案。

Claims (136)

1.一种式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐，所述式(I)的化合物，或其药学上可接受的盐具有以下结构：

其中：

环A¹为 并且其中环A¹任选地被一个或多个部分取代，所述一个或多个部分独立地选自＝O、＝CH₂、氘、卤素、羟基、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基；

R¹选自氰基、未取代的或取代的C_2-5炔基、未取代的或取代的酰基、未取代的或取代的酮酰胺、-CH(OH)-(S(＝O)₂-O^-)、-CH(OH)((P＝O)(OR⁶)₂)和-C(＝O)CH₂-O-((P＝O)(OR⁷)₂)；

每个R⁶和每个R⁷独立地为氢、未取代的C_1-6烷基、未取代的C_2-6烯基、未取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的芳基或者未取代的或取代的芳基(C_1-4烷基)；

R²为氢、氘或卤素；

R³为未取代的或取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)、未取代的或取代的双环含氮杂环基(C_1-4烷基)、未取代的或取代的单环含氮杂芳基(C_1-4烷基)；

R⁴为氢、氘或卤素；

R⁵为取代的单环C_3-6环烷基或取代的4元至6元单环杂环基；

R⁸和R¹⁰独立地选自未取代的或取代的C_2-6烷基、未取代的或取代的C_2-6烯基、未取代的或取代的C_2-6炔基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的或取代的双环C_5-8环烷基、未取代的或取代的单环4元至6元杂环基和未取代的单环C_3-6环烷基(CH₂)-，

其中当所述C_2-6烷基被取代时，所述C_2-6烷基被独立地选自卤素、氰基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基、未取代的C_1-4烷氧基和未取代的C_1-4卤代烷氧基的取代基取代1、2、3或4次，或者所述C_2-6烷基被氘取代1至13次；

其中当所述C_2-6烯基、所述C_2-6炔基、所述单环C_3-6环烷基、所述双环C_5-8环烷基和所述单环4元至6元杂环基是取代的，所述C_2-6烯基、所述C_2-6炔基、所述单环C_3-6环烷基、所述双环C_5-8环烷基和所述单环4元至6元杂环基被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_2-4烯基、未取代的C_2-4炔基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的或取代的单环C_3-6环烷基和未取代的C_1-4烷氧基；并且

R⁹选自未取代的或取代的C_1-6烷基、未取代的或取代的C_1-6卤代烷基、取代的单环C_3-6环烷基、未取代的或取代的双环C_5-6环烷基、未取代的或取代的单环杂芳基和未取代的或取代的单环杂环基，其中所述取代的C_1-6烷基被未取代的C_1-4烷氧基取代1或2次，其中所述取代的单环C_3-6环烷基被独立地选自以下的取代基取代1、2、3或4次：卤素、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4烷氧基、未取代的C_1-4卤代烷基和未取代的单环C_3-6环烷基，并且其中所述取代的C_1-6卤代烷基被未取代的C_1-4烷氧基取代1或2次；并且

R¹¹为任选取代的单环4元至6元杂环基、-(NH)_m-任选取代的5元至6元单环杂芳基、-O-任选取代的C_1-6烷基、-O-任选取代的C_3-8环烷基和-O-任选取代的C_3-8环烷基(C_1-4烷基)，其中m为0或1。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹为未取代的或取代的酮酰胺。

3.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹为未取代的或取代的酰基。

4.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹为-CH(OH)-(S(＝O)₂-O^-)。

5.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹为-CH(OH)((P＝O)(OR⁶)₂)，其中每个R⁶独立地为氢、未取代的C_1-6烷基、未取代的C_2-6烯基、未取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的芳基或者未取代的或取代的芳基(C_1-4烷基)。

6.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹为-C(＝O)CH₂-O-((P＝O)(OR⁷)₂)，其中每个R⁷独立地为氢、未取代的C_1-6烷基、未取代的C_2-6烯基、未取代的C_1-6卤代烷基、未取代的或取代的芳基或者未取代的或取代的芳基(C_1-4烷基)。

7.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹为氰基。

8.根据权利要求1所述的化合物，其中R¹为未取代的或取代的C_2-5炔基。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为未取代的

10.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为被一个或多个部分取代的取代所述一个或多个部分独立地选自＝O、＝CH₂、氘、卤素、羟基、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基。

11.根据权利要求10所述的化合物，其中环A¹为

12.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为未取代的

13.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为被一个或多个部分取代的取代所述一个或多个部分独立地选自＝O、＝CH₂、氘、卤素、羟基、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基。

14.根据权利要求13所述的化合物，其中环A¹为

15.根据权利要求13所述的化合物，其中环A¹为

16.根据权利要求13所述的化合物，其中环A¹为

17.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为未取代的

18.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为被一个或多个部分取代的取代所述一个或多个部分独立地选自＝O、＝CH₂、氘、卤素、羟基、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基。

19.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为未取代的

20.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为被一个或多个部分取代的取代所述一个或多个部分独立地选自＝O、＝CH₂、氘、卤素、羟基、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基。

21.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为未取代的

22.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为被一个或多个部分取代的取代所述一个或多个部分独立地选自＝O、＝CH₂、氘、卤素、羟基、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基。

23.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为未取代的

24.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为被一个或多个部分取代的取代所述一个或多个部分独立地选自＝O、＝CH₂、氘、卤素、羟基、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基。

25.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为未取代的

26.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为被一个或多个部分取代的取代所述一个或多个部分独立地选自＝O、＝CH₂、氘、卤素、羟基、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基。

27.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为未取代的

28.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹为被一个或多个部分取代的取代所述一个或多个部分独立地选自＝O、＝CH₂、氘、卤素、羟基、未取代的C_1-4烷基、未取代的C_1-4卤代烷基、未取代的C_2-4烯基和未取代的或取代的C_3-6单环环烷基。

29.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中环A¹选自：

30.根据权利要求1至29中任一项所述的化合物，其中R⁵为

31.根据权利要求30所述的化合物，其中R⁸为未取代的C_2-6烷基。

32.根据权利要求30所述的化合物，其中R⁸为取代的C_2-6烷基。

33.根据权利要求30所述的化合物，其中R⁸为未取代的C_2-6烯基。

34.根据权利要求30所述的化合物，其中R⁸为取代的C_2-6烯基。

35.根据权利要求30所述的化合物，其中R⁸为未取代的C_2-6炔基。

36.根据权利要求30所述的化合物，其中R⁸为取代的C_2-6炔基。

37.根据权利要求30所述的化合物，其中R⁸为未取代的单环C_3-6环烷基。

38.根据权利要求30所述的化合物，其中R⁸为取代的单环C_3-6环烷基。

39.根据权利要求30所述的化合物，其中R⁸为未取代的双环C_5-8环烷基。

40.根据权利要求30所述的化合物，其中R⁸为取代的双环C_5-8环烷基。

41.根据权利要求30所述的化合物，其中R⁸为未取代的单环4元至6元杂环基。

42.根据权利要求30所述的化合物，其中R⁸为取代的单环4元至6元杂环基。

43.根据权利要求30所述的化合物，其中R⁸为未取代的单环C_3-6环烷基(CH₂)-。

44.根据权利要求30至43中任一项所述的化合物，其中R⁹为未取代的C_1-6烷基。

45.根据权利要求30至43中任一项所述的化合物，其中R⁹为取代的C_1-6烷基。

46.根据权利要求30至43中任一项所述的化合物，其中R⁹为未取代的C_1-6卤代烷基。

47.根据权利要求30至43中任一项所述的化合物，其中R⁹为取代的C_1-6卤代烷基。

48.根据权利要求30至43中任一项所述的化合物，其中R⁹为未取代的或取代的单环C_3-6环烷基。

49.根据权利要求30至43中任一项所述的化合物，其中R⁹为未取代的或取代的双环C_5-6环烷基。

50.根据权利要求30至43中任一项所述的化合物，其中R⁹为未取代的或取代的单环杂芳基或者未取代的或取代的单环杂环基。

51.根据权利要求1至29中任一项所述的化合物，其中R⁵为

52.根据权利要求51所述的化合物，其中R¹⁰为未取代的C_2-6烷基。

53.根据权利要求51所述的化合物，其中R¹⁰为取代的C_2-6烷基。

54.根据权利要求51所述的化合物，其中R¹⁰为未取代的C_2-6烯基。

55.根据权利要求51所述的化合物，其中R¹⁰为取代的C_2-6烯基。

56.根据权利要求51所述的化合物，其中R¹⁰为未取代的C_2-6炔基。

57.根据权利要求51所述的化合物，其中R¹⁰为取代的C_2-6炔基。

58.根据权利要求51所述的化合物，其中R¹⁰为未取代的单环C_3-6环烷基。

59.根据权利要求51所述的化合物，其中R¹⁰为取代的单环C_3-6环烷基。

60.根据权利要求51所述的化合物，其中R¹⁰为未取代的双环C_5-8环烷基。

61.根据权利要求51所述的化合物，其中R¹⁰为取代的双环C_5-8环烷基。

62.根据权利要求51所述的化合物，其中R¹⁰为未取代的单环4元至6元杂环基。

63.根据权利要求51所述的化合物，其中R¹⁰为取代的单环4元至6元杂环基。

64.根据权利要求51所述的化合物，其中R⁸为未取代的单环C_3-6环烷基(CH₂)-。

65.根据权利要求51至64中任一项所述的化合物，其中R¹¹为任选取代的5元至6元单环杂芳基。

66.根据权利要求51至64中任一项所述的化合物，其中R¹¹为-(NH)-任选取代的5元至6元单环杂芳基。

67.根据权利要求51至64中任一项所述的化合物，其中R¹¹为任选取代的单环杂环基。

68.根据权利要求51至64中任一项所述的化合物，其中R¹¹为-O-任选取代的烷基。

69.根据权利要求51至64中任一项所述的化合物，其中R¹¹为-O-任选取代的环烷基。

70.根据权利要求51至64中任一项所述的化合物，其中R¹¹为-O-任选地取代的环烷基(C_1-4烷基)。

71.根据权利要求1至29中任一项所述的化合物，其中R⁵为取代的单环C_3-6环烷基。

72.根据权利要求1至29中任一项所述的化合物，其中R⁵为取代的4元至6元单环杂环基。

73.根据权利要求1至29中任一项所述的化合物，其中R⁵选自：

74.根据权利要求1至29中任一项所述的化合物，其中R⁵选自：

其中每个部分是未取代的或取代的。

75.根据权利要求1至74中任一项所述的化合物，其中R³为未取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)。

76.根据权利要求1至74中任一项所述的化合物，其中R³为取代的单环含氮杂环基(C_1-4烷基)。

77.根据权利要求75或76所述的化合物，其中所述单环含氮杂环基(C_1-4烷基)为5元单环含氮杂环基(C_1-4烷基)。

78.根据权利要求75或76所述的化合物，其中所述单环含氮杂环基(C_1-4烷基)为6元单环含氮杂环基(C_1-4烷基)。

79.根据权利要求75或76所述的化合物，其中所述单环含氮杂环基(C_1-4烷基)为氮杂环庚烷-2-酮(C_1-4烷基)、咪唑烷-2-酮(C_1-4烷基)、四氢嘧啶-2-酮(C_1-4烷基)、吡咯烷-2-酮(C_1-4烷基)、哌啶-2-酮(C_1-4烷基)、吡唑烷-3-酮(C_1-4烷基)、吗啉-3-酮(C_1-4烷基)、噁唑烷-4-酮(C_1-4烷基)、1,4-氧杂氮杂环庚烷-3-酮(C_1-4烷基)或吗啉-3-酮(C_1-4烷基)。

80.根据权利要求1至74中任一项所述的化合物，其中R³为未取代的双环含氮杂环基(C_1-4烷基)。

81.根据权利要求1至74中任一项所述的化合物，其中R³为取代的双环含氮杂环基(C_1-4烷基)。

82.根据权利要求80或81所述的化合物，其中所述双环含氮杂环基(C_1-4烷基)为9元或10元双环含氮杂环基(C_1-4烷基)。

83.根据权利要求80或81所述的化合物，其中R³为

其中每个m1独立地为1、2、3或4。

84.根据权利要求1至74中任一项所述的化合物，其中R³为未取代的单环含氮杂芳基(C_1-4烷基)。

85.根据权利要求1至74中任一项所述的化合物，其中R³为取代的单环含氮杂芳基(C_1-4烷基)。

86.根据权利要求1至74中任一项所述的化合物，其中R³选自：

87.根据权利要求1至74中任一项所述的化合物，其中R³选自：

88.根据权利要求1至74中任一项所述的化合物，其中R³为

89.根据权利要求1至88中任一项所述的化合物，其中R²为氢。

90.根据权利要求1至88中任一项所述的化合物，其中R²为氘。

91.根据权利要求1至88中任一项所述的化合物，其中R²为卤素。

92.根据权利要求1至91中任一项所述的化合物，其中R⁴为氢。

93.根据权利要求1至91中任一项所述的化合物，其中R⁴为氘。

94.根据权利要求1至91中任一项所述的化合物，其中R⁴为卤素。

95.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下项组成的组：

或前述中任一者的药学上可接受的盐。

96.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下项组成的组：

或前述中任一者的药学上可接受的盐。

97.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下项组成的组：

或前述中任一者的药学上可接受的盐。

98.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自由以下项组成的组：

或前述中任一者的药学上可接受的盐。

99.一种药物组合物，所述药物组合物包含有效量的根据权利要求1至99中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及赋形剂。

100.根据权利要求1至99中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗冠状病毒感染的药物中的用途。

101.根据权利要求101所述的用途，其中所述用途还包括使用选自以下的附加药剂：ACE抑制剂、抗凝剂、抗炎剂、ARB、ASO、Covid-19恢复期血浆、进入抑制剂、H₂泵拮抗剂、H-传导通道、HIV蛋白酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、免疫球蛋白、免疫抑制剂、免疫治疗剂、神经氨酸苷酶抑制剂、核苷抑制剂、核苷类似物抑制剂、聚合酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、siRNA、他汀类、组织纤溶酶原活化剂、抗生素、抗微生物剂和疫苗。

102.根据权利要求102所述的用途，其中所述附加药剂选自抗坏血酸、安纳金、阿奇霉素、巴洛沙韦、巴瑞替尼、磷酸氯喹、秋水仙碱、皮质类固醇、依前列醇、法莫替丁、法匹拉韦、IGIV、干扰素、IVIG、伊维菌素、γ-球蛋白、洛匹那韦、甲泼尼龙、氯硝柳胺、莫努匹韦(MK-4482或EIDD-2801)、硝唑尼特、一氧化氮、奥司他韦、帕拉米韦、RANTES、利巴韦林、瑞德西韦、鲁索替尼、沙利鲁单抗、司妥昔单抗、西罗莫司、他汀类、他克莫司、托珠单抗、乌米那韦、扎那米韦、卡西瑞单抗、依米得韦单抗、巴尼韦单抗、埃特司韦单抗和AT-527。

103.根据权利要求101至103中任一项所述的用途，其中所述冠状病毒是β冠状病毒。

104.根据权利要求101至103中任一项所述的用途，其中所述冠状病毒是选自CoV229E、CoV NL63、CoV OC43、CoV HKU1、中东呼吸综合征(MERS)-CoV、严重急性呼吸综合征(SARS)-CoV和SARS-CoV-2的冠状病毒。

105.根据权利要求1至99中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗小核糖核酸病毒感染的药物中的用途。

106.根据权利要求106所述的用途，其中所述小核糖核酸病毒感染是鼻病毒感染。

107.根据权利要求1至99中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗诺罗病毒感染的药物中的用途。

108.根据权利要求1至99中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物或其药学上可接受的盐用于治疗冠状病毒感染。

109.根据权利要求109所述的化合物，其中所述化合物与附加药剂组合使用，所述附加药剂选自ACE抑制剂、抗凝剂、抗炎剂、ARB、ASO、Covid-19恢复期血浆、进入抑制剂、H₂泵拮抗剂、H-传导通道、HIV蛋白酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、免疫球蛋白、免疫抑制剂、免疫治疗剂、神经氨酸苷酶抑制剂、核苷抑制剂、核苷类似物抑制剂、聚合酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、siRNA、他汀类、组织纤溶酶原活化剂、抗生素、抗微生物剂和疫苗。

110.根据权利要求110所述的化合物，其中所述附加药剂选自抗坏血酸、安纳金、阿奇霉素、巴洛沙韦、巴瑞替尼、磷酸氯喹、秋水仙碱、皮质类固醇、依前列醇、法莫替丁、法匹拉韦、IGIV、干扰素、IVIG、伊维菌素、γ-球蛋白、洛匹那韦、甲泼尼龙、莫努匹韦(MK-4482或EIDD-2801)、氯硝柳胺、硝唑尼特、一氧化氮、奥司他韦、帕拉米韦、RANTES、利巴韦林、瑞德西韦、鲁索替尼、沙利鲁单抗、司妥昔单抗、西罗莫司、他汀类、他克莫司、托珠单抗、乌米那韦、扎那米韦、卡西瑞单抗、依米得韦单抗、巴尼韦单抗、埃特司韦单抗和AT-527。

111.根据权利要求109至111中任一项所述的化合物，其中所述冠状病毒是β冠状病毒。

112.根据权利要求109至111中任一项所述的化合物，其中所述冠状病毒是选自CoV229E、CoV NL63、CoV OC43、CoV HKU1、中东呼吸综合征(MERS)-CoV、严重急性呼吸综合征(SARS)-CoV和SARS-CoV-2的冠状病毒。

113.根据权利要求1至99中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物或其药学上可接受的盐用于治疗小核糖核酸病毒感染。

114.根据权利要求114所述的化合物，其中所述小核糖核酸病毒感染是鼻病毒感染。

115.根据权利要求1至99中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物或其药学上可接受的盐用于治疗诺罗病毒感染。

116.一种用于治疗受试者的冠状病毒感染的方法，所述方法包括向对其有需要的所述受试者施用有效量的根据权利要求1至99中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

117.根据权利要求117所述的方法，所述方法还包括施用附加药剂，所述附加药剂选自ACE抑制剂、抗凝剂、抗炎剂、ARB、ASO、Covid-19恢复期血浆、进入抑制剂、H₂泵拮抗剂、H-传导通道、HIV蛋白酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、免疫球蛋白、免疫抑制剂、免疫治疗剂、神经氨酸苷酶抑制剂、核苷抑制剂、核苷类似物抑制剂、聚合酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、siRNA、他汀类、组织纤溶酶原活化剂、抗生素、抗微生物剂和疫苗。

118.根据权利要求118所述的方法，其中所述附加药剂选自抗坏血酸、安纳金、阿奇霉素、巴洛沙韦、巴瑞替尼、磷酸氯喹、秋水仙碱、皮质类固醇、依前列醇、法莫替丁、法匹拉韦、IGIV、干扰素、IVIG、伊维菌素、γ-球蛋白、洛匹那韦、甲泼尼龙、莫努匹韦(MK-4482或EIDD-2801)、氯硝柳胺、硝唑尼特、一氧化氮、奥司他韦、帕拉米韦、RANTES、利巴韦林、瑞德西韦、鲁索替尼、沙利鲁单抗、司妥昔单抗、西罗莫司、他汀类、他克莫司、托珠单抗、乌米那韦、扎那米韦、卡西瑞单抗、依米得韦单抗、巴尼韦单抗、埃特司韦单抗和AT-527。

119.根据权利要求117至119中任一项所述的方法，其中所述冠状病毒是β冠状病毒。

120.根据权利要求117至119中任一项所述的方法，其中所述冠状病毒是选自CoV229E、CoV NL63、CoV OC43、CoV HKU1、中东呼吸综合征(MERS)-CoV、严重急性呼吸综合征(SARS)-CoV和SARS-CoV-2的冠状病毒。

121.一种用于治疗受试者的小核糖核酸病毒感染的方法，所述方法包括向对其有需要的所述受试者施用有效量的根据权利要求1至99中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

122.根据权利要求122所述的方法，其中所述小核糖核酸病毒感染是鼻病毒感染。

123.一种用于治疗受试者的诺罗病毒感染的方法，所述方法包括向对其有需要的所述受试者施用有效量的根据权利要求1至99中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

124.根据权利要求101至108中任一项所述的用途、根据权利要求109至116中任一项所述的化合物或根据权利要求117至124中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。

125.根据权利要求125所述的用途、化合物或方法，其中所述受试者为60岁或以上。

126.根据权利要求125所述的用途、化合物或方法，其中所述受试者是非人灵长类动物。

127.根据权利要求125所述的用途、化合物或方法，其中所述受试者是猫。

128.根据权利要求123所述的用途、化合物或方法，其中所述受试者是骆驼。

129.根据权利要求101至108中任一项所述的用途、根据权利要求109至116中任一项所述的化合物或根据权利要求117至124中任一项所述的方法，其中所述冠状病毒引起一种或多种选自以下的症状：咳嗽、喉咙痛、流涕、打喷嚏、头痛、发烧、气短、肌痛、腹痛、疲劳、呼吸困难、持续性胸痛或压迫、觉醒困难、嗅觉和味觉丧失、肌肉或关节疼痛、寒颤、恶心或呕吐、鼻塞、腹泻、咳血、结膜充血、痰液产生、胸闷和心悸。

130.根据权利要求101至108中任一项所述的用途、根据权利要求109至116中任一项所述的化合物或根据权利要求117至124中任一项所述的方法，其中所述冠状病毒引起选自窦炎、中耳炎、肺炎、急性呼吸窘迫综合征、弥散性血管内凝血、心包炎和肾衰竭的并发症。

131.根据权利要求101至108中任一项所述的用途、根据权利要求109至116中任一项所述的化合物或根据权利要求117至124中任一项所述的方法，其中所述化合物经静脉内、皮下、口服或经由吸入施用。

132.根据权利要求103所述的用途、根据权利要求111所述的化合物或根据权利要求119所述的方法，其中所述干扰素选自重组干扰素α2b、IFN-α和PEG-IFN-α-2a。

133.一种用于抑制冠状病毒蛋白酶的方法，所述方法包括使感染冠状病毒的细胞与有效量的根据权利要求1至99中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐接触，其中与宿主蛋白酶相比，根据权利要求1至99中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐选择性地抑制所述冠状病毒蛋白酶。

134.根据权利要求134所述的方法，其中所述式(I)的化合物相对于所述宿主蛋白酶选择性地抑制所述冠状病毒蛋白酶，所述宿主蛋白酶选自组织蛋白酶L、组织蛋白酶B、组织蛋白酶D、组织蛋白酶K、白细胞弹性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、凝血酶、胃蛋白酶、半胱天冬酶2、弹性蛋白酶和钙蛋白酶。

135.根据权利要求134或135所述的方法，其中所述宿主蛋白酶选自组织蛋白酶L和组织蛋白酶B。

136.根据权利要求134至136中任一项所述的方法，其中所述选择性>2倍。