CN118147236A - 提高菌株组氨酸产量的新方法 - Google Patents
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Landscapes
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Abstract
本发明公开了一种提高菌株组氨酸产量的新方法，包括下述步骤：对表达L‑组氨酸的大肠杆菌的基因组中flhC基因位点进行改造，敲除flhC基因，插入转醛醇酶基因talB和启动子PTrc；对基因组中ypjC基因位点进行改造，敲除ypjC基因，插入多聚磷酸激酶基因ppk和枯草芽孢杆菌来源的启动子ydoP，筛选阳性克隆。本发明的方法能够将L‑组氨酸生产菌的L‑组氨酸生产能力提高30％以上。
Description
技术领域
本发明属于基因工程领域，涉及一种提高菌株组氨酸产量的新方法、一种L-组氨酸基因工程生产菌及其应用。
背景技术
L-组氨酸是一种半必需氨基酸，生物体自身合成的组氨酸不能完全满足身体所需，需要额外从外界环境中摄取。组氨酸是婴幼儿生长发育必不可少的氨基酸。L-组氨酸已被广泛用于生物医药等各个领域，例如，用于治疗溃疡、胃酸过多等不适症状；过敏、风湿性关节炎等疾病，以及作为营养增补于面包等食物中。目前L-组氨酸的制备方法有水解法及生物发酵法，国内对L-组氨酸的制备大多采用水解法(中国生化药物杂志，1982(02):12-17；CN101125831B)，而国外企业大多采用微生物发酵法进行L-组氨酸的生产(US8071339；CA02319283)。
发明人对于微生物发酵法生产L-组氨酸进行了持续数年的研究，并在CN111996155B中报道了提高L-组氨酸生产菌表达能力的方法。但在经济成本方面相对于水解法不有具有优势，使发酵法具有经济性竞争力的途径是进一步提高生产菌的L-组氨酸生产能力。为实现该目的，有必要对L-组氨酸的代谢途径进行优化。
发明内容
鞭毛是细菌长期进化过程中适应外界环境的结果，其有益于细菌的生存。通过鞭毛的推动，细菌能够逃离不利环境，到达更利于其生存且营养相对丰富的环境。研究表明，鞭毛蛋白合成基因flhC敲除有利于过表达蛋白的合成，组合ptsG敲除菌株可以增强ATP的生成，并使代谢流流向磷酸戊糖途径和三羧酸循化途径(Front Microbiol.2021,12:655072.)。为尽可能多的将碳代谢流引向L-组氨酸的合成，发明人尝试在敲除flhC减少菌体的能量消耗的同时，过表达talB基因以提高氧化磷酸化途径(PPP途径)的代谢流，从而提升L-组氨酸的产量；考虑到多聚磷酸激酶(PPK)可以在一定程度上提升菌体在发酵时的耐受性，还其强化了ppk基因的表达。上述代谢工程策略在CN111996155B中报道的L-组氨酸生产菌W3110::pTrcHisGK136E,S226Ter中得到了验证，提高了工程菌的L-组氨酸表达能力。基于该发现，本发明包括如下技术方案：
一种提高菌株组氨酸产量的方法，包括以下步骤：
A.对表达L-组氨酸的大肠杆菌的基因组中flhC基因位点进行改造，中断flhC基因，插入转醛醇酶基因talB和启动子PTrc，即插入Ptrc-talB片段，由启动子PTrc启动转醛醇酶表达，得到菌株A；和/或
B.对菌株A的基因组中ypjC基因位点进行改造，中断ypjC基因，插入多聚磷酸激酶基因ppk和枯草芽孢杆菌来源的启动子ydoP，即插入PydoP-ppk片段，由枯草芽孢杆菌来源的启动子ydoP启动多聚磷酸激酶(PPK)表达，筛选阳性克隆。
在一种实施方式中，步骤A中所述大肠杆菌是CN111996155B中报道的L-组氨酸生产菌W3110::pTrcHisGK136E,S226Ter。
优选地，步骤A中所述talB基因是大肠杆菌来源的转醛醇酶基因talB(SEQ ID NO:1)。
上述步骤A中所述启动子PTrc可以是大肠杆菌来源的启动子PTrc(SEQ ID NO:2)。
优选地，上述步骤B中所述多聚磷酸激酶基因ppk是谷氨酸棒杆菌来源的多聚磷酸激酶基因ppk(SEQ ID NO:3)。
上述步骤B中所述启动子ydoP可以是枯草芽孢杆菌来源的启动子ydoP(SEQ IDNO:4)。
上述步骤A中所述flhC基因和步骤B中所述ypjC基因的中断方式选自基因的敲除、缺失、失活。
上述步骤A和步骤B中基因的中断可以是该基因的丧失或者功能大幅度下调，包括该基因的敲除、缺失、失活，一般可以通过敲除、插入失活、移码突变、引入终止密码子提前翻译终止等常规的基因操作手段实现。所述基因失活可选自下组方式：核苷酸序列全部删除，核苷酸序列部分删除，基因突变，阅读框内突变终止密码子。
步骤A和步骤B中基因的下调表达选自下组方式：蛋白泛素化修饰，RNA干涉(RNAi)，表达系统发生结构改变，转录水平发生负性调控，转录后水平发生负性调控，基因的转录降低，基因的翻译降低，蛋白质降解的增强，它们中两种以上的组合。
步骤A和步骤B中基因的中断和下调表达通过基因编辑技术实施，所述通过基因编辑技术选自下组：同源双交换，TALEN系统，CRISPR-Cas9系统，CRISPR-Cpf1系统，CRISPR-Cas12系统，CRISPR-BEST系统，MuGENT(multiplex genome editing by naturaltransformation，通过自然转化进行多重基因组编辑)，CRISPRi。
优选地，上述步骤A和步骤B中基因的插入和/或中断通过基因编辑技术实施。
根据本发明的第二个方面，提供了一种基因工程菌，其按照上述的方法构建得到。
根据本发明的第三个方面，提供了上述基因工程菌在生产L-组氨酸中的应用。
优选通过上述基因工程菌的发酵来生产L-组氨酸。
当上述基因工程菌发酵时，种子液培养基组成可以为：20g/L葡萄糖，4g/L酵母提取物，3g/L蛋白胨，1.2g/L磷酸二氢钾，0.5g/L硫酸镁·7H2O，10mg/L硫酸亚铁，10mg/L硫酸锰，1mg/L VB1，1mg/L VB3，1mg/L VB5，1mg/L VB12，1mg/L VH，氢氧化钠调节至pH7.0-7.2。
摇瓶发酵培养基组成可以为：20g/L葡萄糖，4g/L酵母提取物，3g/L蛋白胨，2g/L一水合柠檬酸钠，2g/L磷酸二氢钾，2g/L硫酸镁·7H2O，20mg/L硫酸亚铁，20mg/L硫酸锰，2mg/L VB1，2mg/L VB3，2mg/L VB5，2mg/L VB12，和2mg/L VH，氢氧化钠调节pH7.0-7.2之间，发酵每隔4h补加氨水至ph7.2-7.4。
本发明以现有菌株W3110::pTrcHisGK136E,S226Ter(CN111996155B)为基础，在该菌株基因组flhC位点整合转醛醇酶基因talB，并在ypjC位点整合谷氨酸棒杆菌来源的多聚磷酸激酶(PPK)，最终获得一株组氨酸产生菌，摇瓶发酵48h，产物浓度达到1.92g/L，比出发菌株提高32％，促进了发酵法生产L-组氨酸的工业化应用。
具体实施方式
本发明通过代谢工程来提高L-组氨酸生产菌的产物表达量，具体包括将基因组中flhC基因替换为转醛醇酶基因talB、将ypjC基因替换为多聚磷酸激酶基因ppk，得到L-组氨酸产量进一步提高的基因工程菌。
在一些实施方案中，术语“(L-组氨酸生产能力)提高”或“提升”可以表示相较于参考水平增加至少10％，例如相较于参考水平增加至少约20％、或至少约30％、或至少约40％、或至少约50％、或至少约60％、或至少约70％、或至少约80％、或至少约90％、或最高达并包括100％的增加，或者在10％-100％之间的任意增加，甚至相较于参考水平的至少约2倍、或至少约3倍、或至少约4倍、或至少约5倍、或至少约10倍的增加。
本文中的术语“L-组氨酸基因工程生产菌”、“L-组氨酸生产菌”、“基因工程菌”、“L-组氨酸基因工程生产菌”表示相同的意义，都是指对出发菌株做进行基因工程改造后L-组氨酸生产能力提高的菌株。
所述出发菌株尤其指具有L-组氨酸生产能力的菌株，包括但不限于CN111996155B中报道的W3110::pTrcHisGK136E,S226Ter。
在本文中，为了描述简便起见，有时会将某种蛋白比如多聚磷酸激酶(PPK)与其编码基因(DNA)名称混用，本领域技术人员应能理解它们在不同描述场合表示不同的物质。本领域技术人员根据语境和上下文容易理解它们的含义。例如，对于PPK，用于描述多聚磷酸激酶功能或类别时，指的是蛋白质；在作为一种基因描述时，指的是编码该多聚磷酸激酶的基因。
为了使转醛醇酶和多聚磷酸激酶在L-组氨酸生产菌中过表达来提高L-组氨酸产量，还分别对转醛醇酶(transaldolase，TAL)和多聚磷酸激酶(PPK)的来源即序列进行筛选。研究发现，在大肠杆菌W3110中表达谷氨酸棒杆菌来源的多聚磷酸激酶和大肠杆菌来源的转醛醇酶能够有效提高组氨酸表达量。
为了使谷氨酸棒杆菌来源的多聚磷酸激酶和大肠杆菌来源的转醛醇酶能够在大肠杆菌W3110中高效地表达，本发明还对两种酶的启动子进行了广泛筛选比较，相比lacUV5、lac、T7等等常用的启动子，组成型启动子PTrc与大肠杆菌来源的转醛醇酶基因talB能够形成较好的匹配，使该转醛醇酶保持较高的表达水平；条件诱导性枯草芽孢杆菌来源的启动子ydoP与谷氨酸棒杆菌来源的多聚磷酸激酶基因ppk能够形成较好的匹配，通过感知体内ADP/ATP的浓度来调控该多聚磷酸激酶表达的水平。
应理解，在具体的基因工程实施方案中，步骤A和步骤B的排序并非完全根据英文字母顺序由前到后地固定不变，它们可以交叉、颠倒地操作，只要每个步骤能实现各自的功能、完成宿主细胞基因型的定向改变即可。
本发明的技术方案描述中，所用术语诸如“A和/或B”中使用的术语“和/或”旨在包括A和B两者；A或B；A(单独)；和B(单独)。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于举例说明目的，而不是对本发明的限制。此外应理解，在阅读了本发明的构思之后，本领域技术人员对其作出的各种改变或调整，均应落入本发明的保护范围内，这些等价形式同样属于本发明的范围。
本文中涉及到多种物质的添加量、含量及浓度，其中所述的百分含量，除特别说明外，皆指质量百分含量。
实施例
材料和方法
实施例中的全基因合成、引物合成及测序皆由南京金唯智生物技术有限公司完成。
实施例中的分子生物学实验操作包括质粒构建、酶切、感受态细胞制备、转化等主要参照《分子克隆实验指南》(第三版)，J.萨姆布鲁克，D.W.拉塞尔(美)编著，黄培堂等译，科学出版社，北京，2002)进行。比如感受态细胞转化方法及感受态制备方法均参照《分子克隆实验指南》(第三版)第1章96页进行。必要时可以通过简单试验确定具体实验条件。
主要培养基：
LB培养基：10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，10g/L氯化钠。(固体培养基另加20g/L琼脂粉。)
摇瓶发酵种子培养基(1L)：20g葡萄糖，4g酵母提取物，3g蛋白胨，1.2g磷酸二氢钾，0.5g硫酸镁·7H2O，10mg硫酸亚铁，10mg硫酸锰，1mg VB1，1mg VB3，1mg VB5，1mg VB12，1mg VH，氢氧化钠调节pH7.0-7.2之间。
摇瓶发酵培养基(1L)：20g葡萄糖，4g酵母提取物，3g蛋白胨，2g一水合柠檬酸钠，2g磷酸二氢钾，2g硫酸镁·7H2O，20mg硫酸亚铁，20mg硫酸锰，2mg VB1，2mg VB3，2mg VB5，2mg VB12，和2mg VH，氢氧化钠调节pH7.0-7.2之间，发酵每隔4h补加氨水至ph7.2-7.4。
以下实施例中，当使用含氨苄霉素抗性的培养基时，所述抗生素浓度为100μg/ml；使用卡那霉素和壮观霉素的培养基时，所述抗生素在培养基中的终浓度为50μg/ml。
PCR试剂购买自东洋纺TOYOBO的KOD FX系列。
PCR扩增实验根据质粒或DNA模板供应商提供的反应条件或试剂盒说明书进行。必要时可以通过简单试验予以调整。
实施例中使用的引物序列信息如表1所示。
表1、引物序列
表1中，名称中的“-F”代表正向；“-R”代表反向。
实施例1：大肠杆菌W3110::PTrcHisGK136E,S226Ter flhC基因位点改造
以CN111996155B中报道的大肠杆菌W3110::pTrcHisGK136E,S226Ter为出发菌株，进行flhC基因位点的改造，敲除flhC基因，插入大肠杆菌来源的talB基因和大肠杆菌来源的启动子PTrc，具体操作如下。
以pTarget质粒(Invitrogen)为模板，采用表1中所示引物对flhC-3110-N20-F和pTarget-R，进行PCR扩增。
50μL PCR扩增体系为：KOD FX 1μL，KOD FX Buffer 25μL，dNTP 3μL，基因组模板(pTarget质粒)0.5μL，上下游引物各2μL，ddH2O补足至50μL。
PCR程序为：105℃热盖，95℃预变性5min；98℃变性30s，57℃退火30s，68℃延伸60s，30个循环；最后68℃延伸10min；16℃降温10min。
PCR扩增得到的基因即为pTarget-flhC-3110-N20单环质粒，用限制性内切酶DpnI1μL于37℃消化60min后，用氯化钙法转化入大肠杆菌DH5α感受态(Invitrogen)中，涂布LB+Spe.平板，挑取单菌落，采用表1中所示引物对flhC-3110-N20-V-F和pTarget-R进行菌落PCR验证，取扩增片段大小在600bp左右的菌落，提取质粒后测序，获得pTarget-flhC-3110-N20质粒。
以大肠杆菌W3110基因组为模板，采用引物对flhC-UP-F和flhC-UP-R，进行PCR扩增，扩增得到flhC位点上游同源臂，扩增片段大小为500bp左右，割胶回收。
以大肠杆菌W3110基因组为模板，采用引物对flhC-DN-F和flhC-DN-R，进行PCR扩增，扩增得到flhC位点下游同源臂，扩增片段大小为500bp左右，割胶回收。
以大肠杆菌W3110基因组为模板，采用引物对Ptrc-talB-F1和Ptrc-talB-R，进行PCR扩增，扩增得到994bp左右片段；取1μL该994bp左右片段作为模板，采用引物对Ptrc-talB-F2和Ptrc-talB-R，进行PCR扩增，得到1029bp片段，割胶回收，得到Ptrc-talB基因片段。
以上述的flhC位点上游同源臂、flhC位点下游同源臂、Ptrc-talB基因片段为模板，采用引物对flhC-UP-F和flhC-DN-R进行OEPCR，得到2000bp左右PCR产物，割胶回收，得到flhCup-Ptrc-talB-flhCdn基因。
然后用电转化法将pTarget-flhC-3110-N20和flhCup-Ptrc-talB-flhCdn共转化入W3110::PtrcHisGK136E,S226Ter菌株感受态细胞。涂布LB+Kan.+Spe.平板，采用引物对flhC-V-F和flhC-V-R进行单菌落鉴定，阳性转化子条带大小688bp，阴性无条带，确认获得flhC基因位点改造后的基因工程菌W3110::PtrcHisGK136E,S226TerΔflhC::Ptrc-talB菌株。
实施例2：基因工程菌ypjC基因位点改造
继续对实施例1中得到的基因工程菌W3110::PtrcHisGK136E,S226TerΔflhC::Ptrc-talB进行ypjC基因位点的改造，敲除ypjC基因，插入谷氨酸棒杆菌来源的ppk基因和枯草芽孢杆菌来源的启动子ydoP，具体操作如下。
以pTarget质粒为模板，采用表1中所示引物对ypjC-N20-F和pTarget-R进行PCR扩增。
50μL PCR扩增体系为：KOD FX 1μL，KOD FX Buffer 25μL，dNTP 3μL，基因组模板(pTarget质粒)0.5μL，上下游引物各2μL，ddH2O补足至50μL。
PCR程序为：105℃热盖，95℃预变性5min；98℃变性30s，57℃退火30s，68℃延伸60s，30个循环；最后68℃延伸10min；16℃降温10min。
PCR扩增得到的基因即为pTarget-ypjC-N20单环质粒，用限制性内切酶DpnI 1μL于37℃消化60min后，用氯化钙法转化入大肠杆菌DH5α感受态中，涂布LB+Spe.平板，挑取单菌落，采用引物对ypjC-N20-V-F和pTarget-R进行菌落PCR验证，取扩增片段大小在600bp左右的菌落，提取质粒后测序，获得pTarget-ypjC-N20质粒。
以W3110基因组为模板，采用引物对ypjC-up-F和ypjC-up-R进行PCR扩增，扩增得到ypjC位点上游同源臂，扩增片段大小为300bp左右，割胶回收。
以W3110基因组为模板，采用引物对ypjC-dn-F和ypjC-dn-R进行PCR扩增，扩增得到ypjC位点下游同源臂，扩增片段大小为400bp左右，割胶回收。
以枯草芽孢杆菌基因组为模板，采用引物对ydoP-F和ydoP-R进行PCR扩增，扩增得到500bp左右片段，为ydoP启动子。
以谷氨酸棒状杆菌基因组为模板，采用引物对ppk-F和ppk-R进行PCR扩增，扩增得到1000bp左右片段，为ppk基因。
以ppk基因、ydoP启动子为模板，采用引物对ydoP-F和ppk-R进行PCR扩增，得到1500bp左右片段，即PydoP-ppk片段。
以PydoP-ppk、ypjC位点上游同源臂、ypjC位点下游同源臂为模板，采用引物对ypjC-up-F和ypjC-dn-R进行PCR扩增，得到1900pb左右片段，其为基因ypjCup-PydoP-ppk-ypjCdn。
然后用电转化法将上述pTarget-ypjC-N20和ypjCup-PydoP-ppk-ypjCdn共转化入基因工程菌W3110::PtrcHisGK136E,S226TerΔflhC::Ptrc-talB感受态细胞。涂布LB+Kan.+Spe.平板，采用引物对ypjC-V-F和ypjC-V-R进行单菌落鉴定，阳性转化子条带大小2840bp，阴性1500bp左右，获得基因工程菌W3110::PtrcHisGK136E,S226TerΔflhC::Ptrc-talBΔypjC::PydoP-ppk。
实施例3：菌株发酵及产物L-组氨酸测定
按照专利CN111996155B中实施例6的方法，对菌株进行发酵培养并测定产物L-组氨酸含量。具体步骤如下。
3.1种子摇瓶培养
从LB平板挑新鲜培养的菌落到种子摇瓶(30ml/500ml)，37℃，220rpm震荡过夜培养。
3.2摇瓶发酵
从种子摇瓶取5ml种子培养基到发酵摇瓶中(30ml/500ml单挡板摇瓶)，37℃，220rpm震荡培养约24h(如果2h内发酵液颜色不再变化，可提前结束发酵)。发酵过程中需用20％(v/v)氨水调控pH(注意要边加边震荡，发酵液开始变红时停加氨水)。发酵液高速离心，取上清，稀释5倍，HPLC检测L-组氨酸产量。
3.3高效液相色谱HPLC测定组氨酸含量
使用OPA柱前衍生氨基酸分析法来测定发酵液中L-组氨酸含量。一级氨基酸在巯基试剂存在下与邻苯二醛(OPA)反应生成OPA-氨基酸，生成的氨基酸衍生物经反相高效液相色谱分离后用紫外或荧光检测，在一定的范围内其吸光值与氨基酸浓度成正比。
衍生剂和流动相配制：
硼酸缓冲液：0.4M硼酸缓冲液，准确称取6.183g硼酸，溶于超纯水中，用10N NaOH溶液调至pH 10.2，定容至250ml容量瓶中。
衍生剂：准确称取500mg邻苯二甲醛(OPA)固体，加5ml无水乙醇，加500μl巯基丙酸，用0.4M，pH 10.2的硼酸缓冲液定容至50ml。
流动相A：40mM NaH2PO4溶液，准确称取5.5g NaH2PO4·H2O，溶于超纯水，用10NNaOH溶液调至pH 7.8，定容至1L，0.22μm滤膜过滤后备用。
流动相B：甲醇，试剂纯度为HPLC级。
高效液相色谱测定条件：
色谱柱：伊利特Hypersil BDS C18 4.6x 250mm，5μm；流速：1.0ml/min；停止时间：20min；柱温：40度；DAD设置：UV 334nm，10nm(带宽)，参比390nm，20nm(带宽)。
洗脱程序如表2所示。
表2、HPLC洗脱程序
| 时间(min) | B％ | 流速(ml/min) |
| 0 | 30 | 1.0 |
| 6.0 | 30 | 1.0 |
| 7.0 | 45 | 1.0 |
| 15.00 | 45 | 1.0 |
| 15.50 | 30 | 1.0 |
| 20 | 30 | 1.0 |
自动进样器分别取0.5μl样品，2.5μl硼酸缓冲液，0.5μl衍生剂，32μl超纯水，混合衍生后进样。
实施例4：菌株L-组氨酸生产能力比较
按照实施例3中描述的方法，分别对出发菌株W3110::pTrcHisGK136E,S226Ter、实施例1所得基因工程菌W3110::PtrcHisGK136E,S226TerΔflhC::Ptrc-talB、实施例2所得基因工程菌W3110::PtrcHisGK136E,S226TerΔflhC::Ptrc-talBΔypjC::PydoP-ppk进行摇瓶培养，并测定发酵液中L-组氨酸含量。每个菌株做3个平行实验，结果如表3所示。
表3、菌株发酵的L-组氨酸水平比较
由表4可见，相比出发菌株W3110::PtrcHisGK136E,Y226Ter，对flhC基因位点进行改造后的基因工程菌株(实施例1所得菌株)的L-组氨酸产量提高了约8.7％；相对于实施例1所得的基因工程菌株，对ypjC基因位点进行改造后的基因工程菌株(实施例2所得菌株)的L-组氨酸产量提高了约21.5％，表明单独对flhC基因位点进行改造、或者单独对ypjC基因位点进行改造都能够提高菌株的L-组氨酸表达量。相比出发菌株，实施例2所得基因工程菌株摇瓶发酵的L-组氨酸产量提高了约32.4％，能够达到1.92g/L的浓度水平，表明对flhC基因位点和ypjC基因位点的组合改造有效提高了菌株的L-组氨酸生产能力，开发潜力巨大。
Claims (10)
1.一种提高菌株组氨酸产量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
A.对表达L-组氨酸的大肠杆菌的基因组中flhC基因位点进行改造，中断flhC基因，插入转醛醇酶基因talB和启动子PTrc，即插入Ptrc-talB片段，得到菌株A；和/或
B.对菌株A的基因组中ypjC基因位点进行改造，中断ypjC基因，插入多聚磷酸激酶基因ppk和枯草芽孢杆菌来源的启动子ydoP，即插入PydoP-ppk片段，筛选阳性克隆。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A中所述大肠杆菌是CN111996155B中报道的L-组氨酸生产菌W3110::pTrcHisGK136E , S226Ter。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤A中所述talB基因是大肠杆菌来源的转醛醇酶基因talB(SEQ ID NO:1)，所述启动子PTrc是大肠杆菌来源的启动子PTrc(SEQ IDNO:2)。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B中所述多聚磷酸激酶基因ppk是谷氨酸棒杆菌来源的多聚磷酸激酶基因ppk(SEQ ID NO:3)。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B中所述启动子ydoP是枯草芽孢杆菌来源的启动子ydoP(SEQ ID NO:4)。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A中所述flhC基因和步骤B中所述ypjC基因的中断方式选自基因的敲除、缺失、失活。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A和步骤B中基因的插入和/或中断通过基因编辑技术实施。
8.一种基因工程菌，其特征在于，按照如权利要求1-7中任一项所述的方法构建得到。
9.如权利要求8所述基因工程菌用于生产L-组氨酸的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，通过所述基因工程菌的发酵来生产L-组氨酸。
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|---|---|---|---|
| CN202211553870.2A Pending CN118147236A (zh) | 2022-12-06 | 2022-12-06 | 提高菌株组氨酸产量的新方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN118147236A (zh) |
-
2022
- 2022-12-06 CN CN202211553870.2A patent/CN118147236A/zh active Pending
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