CN118106486A - 一种在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料及其制备方法和应用 - Google Patents
一种在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118106486A CN118106486A CN202410235434.3A CN202410235434A CN118106486A CN 118106486 A CN118106486 A CN 118106486A CN 202410235434 A CN202410235434 A CN 202410235434A CN 118106486 A CN118106486 A CN 118106486A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gold
- situ
- skin
- solution
- damage model
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000010931 gold Substances 0.000 title claims abstract description 90
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 84
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 79
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 230000006378 damage Effects 0.000 title claims abstract description 36
- 239000000463 material Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims abstract description 29
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 claims abstract description 26
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 206010020112 Hirsutism Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 229910003803 Gold(III) chloride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- RJHLTVSLYWWTEF-UHFFFAOYSA-K gold trichloride Chemical compound Cl[Au](Cl)Cl RJHLTVSLYWWTEF-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims abstract description 7
- 229940076131 gold trichloride Drugs 0.000 claims abstract description 7
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims abstract description 4
- FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M gold monochloride Chemical compound [Cl-].[Au+] FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims description 59
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 42
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 17
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 claims description 16
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 5
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 3
- 230000037380 skin damage Effects 0.000 claims description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 abstract description 5
- 208000028990 Skin injury Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N (2,4-dichlorophenyl) benzenesulfonate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 10
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 8
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 7
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 7
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 4
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- 238000004833 X-ray photoelectron spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 230000003661 hair follicle regeneration Effects 0.000 description 3
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- -1 superoxide anions Chemical class 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 208000002271 trichotillomania Diseases 0.000 description 3
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 230000035617 depilation Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 2
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 2
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 2
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 2
- 150000002343 gold Chemical class 0.000 description 2
- 210000000442 hair follicle cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002173 high-resolution transmission electron microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 210000004918 root sheath Anatomy 0.000 description 2
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 102000004722 NADPH Oxidases Human genes 0.000 description 1
- 108010002998 NADPH Oxidases Proteins 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N Silver ion Chemical compound [Ag+] FOIXSVOLVBLSDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229910000420 cerium oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000013211 curve analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000005868 electrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002149 energy-dispersive X-ray emission spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000002514 epidermal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000003781 hair follicle cycle Effects 0.000 description 1
- 230000003779 hair growth Effects 0.000 description 1
- 230000003660 hair regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008798 inflammatory stress Effects 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 1
- 229940031182 nanoparticles iron oxide Drugs 0.000 description 1
- 230000009707 neogenesis Effects 0.000 description 1
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N nitrogen oxide Inorganic materials O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 1
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 1
- BMMGVYCKOGBVEV-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoceriooxy)cerium Chemical compound [Ce]=O.O=[Ce]=O BMMGVYCKOGBVEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000000554 physical therapy Methods 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000019254 respiratory burst Effects 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料及其制备方法和应用，包括以下步骤：将金前驱体溶液处理损伤模型即得原位生成的金纳米簇材料，所述金前驱体溶液包括氯金酸溶液、氯金酸钠溶液、八氯化四金溶液、三氯化金溶液或一氯化金溶液中的一种或几种。本发明以前驱体原位合成金纳米材料，该纳米材料生物相容性良好、荧光特性稳定，可以实现对正常皮肤与损伤皮肤的成像鉴别；本发明的方法可对皮肤损伤相关多毛症起抑毛作用。
Description
技术领域
本发明属于材料原位合成及生物医学技术领域，具体涉及一种在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料及其制备方法和应用，尤其涉及以金前驱体在体内原位制备金纳米簇材料，以及该方法用于对多毛症的抑毛中的应用。
背景技术
由于长期反复不当的使用外用激素或广泛使用含激素的护肤品导致激素依赖性皮炎发病呈逐年上升趋势，顽固难治愈；病症具体表现为外用糖皮质激素之后原发皮损消失，但是停用后再次出现炎性损害，需要反复使用糖皮质激素来控制症状并且皮炎逐步加重。长期用药后出现多毛、色素沉着等症状。多毛症是指女性在面部、上下肢和躯干等部位出现男性类型的终(粗)毛，粗毛过分增多而超出正常范围或毳毛部位长出粗黑的毛。研究更为有效的方法来消除激素依赖性皮炎，抑制多毛一直是皮肤科医生的努力方向。
目前治疗多毛的方法并不理想。药物治疗，比如依氟鸟氨酸副作用严重，治疗效果不佳。通过光脱毛和电解等物理疗法去除不必要的毛发是痛苦和反复的，这会破坏毛囊并耗尽皮肤干细胞库，不利于伤口愈合。长期来看，这种疾病会给患者造成心理困扰。因此，开发一种更安全、更有效的策略显得尤为重要。
当皮肤受损时，正常的毛囊周期就会被打乱。同时，皮肤损伤通常伴随着大量活性氧(ROS)的产生，是由吞噬细胞的呼吸爆发和角化细胞、成纤维细胞和内皮细胞的NADPH氧化酶所介导的。生物体内ROS是细胞在有氧代谢时产生的含氧及其代谢产物的一类高生物活性物质，包括羟自由基、超氧阴离子、过氧化氢，以及单线态氧、激发态的氧、极不稳定的一氧化氮自由基等。正常情况下，体内代谢仅产生少量ROS，主要为超氧阴离子(约占总耗氧量的5％)，适量的ROS可对机体起保护作用，如吞噬细胞产生ROS可清除病毒等外来入侵物；少量ROS也可以作为第二信使激活MAPK、ERK、Rac等信号通路，调节细胞增殖、分化及成熟。由于存未配对的电子，ROS是不稳定的，很容易与其他分子发生反应。特别是，过量的ROS会对细胞膜上的脂质和蛋白质以及细胞核和线粒体中的DNA造成氧化损伤。在氧化应激下，细胞需要增加总的抗氧化剂的产量来维持平衡状态。因此，损伤皮肤中存在氧化应激微环境(OSM)。表皮干细胞在健康和氧化应激条件下起维持皮肤上皮的作用，它们是皮肤组织适应创伤的关键介质。在炎症胁迫下，毛囊干细胞(HFSCs)处于激活状态，在损伤后驱动毛囊新生，导致毛发再生。
近年来，研究发现许多体外合成的金属和金属氧化物纳米颗粒已被用于保护皮肤细胞免受ROS的侵害，包括金纳米颗粒、银纳米颗粒、氧化铁纳米颗粒、氧化铈纳米颗粒、铂纳米颗粒和硒纳米颗粒。由于这些体外合成的纳米颗粒直径较大，并且在合成过程中引入了稳定剂和还原剂，因此会对生物体产生毒性。金纳米材料，荧光特性稳定，生物相容性好，在生物医学中具有广阔的应用前景：如用于肿瘤成像诊断与治疗；负载药物提高靶向性。金纳米材料在进入靶细胞后可以调节细胞增殖、分化及凋亡等相关生物学效应。金纳米簇具有很好的生理稳定性，容易逃脱网状内皮系统的捕获，在正常组织中代谢而荧光信号逐渐消失，最终通过肾清除过滤以尿液的形式排除体外。尤其是原位生物合成的荧光纳米簇具有良好的生物相容性，在许多研究中被用于癌症成像和治疗。然而，荧光纳米簇能否在正常或受损皮肤细胞中合成尚不清楚。
发明内容
发明目的：本发明所要解决的第一个技术问题是提供了一种能够抑制损伤皮肤毛囊再生的在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料的制备方法。
本发明所要解决的第二个技术问题是提供了一种能够显著抑制多毛症的原位生成的金纳米簇材料。
本发明所要解决的第三个技术问题是提供了原位生成的金纳米簇材料在制备损伤皮肤病相关多毛症的抑毛的药物中的应用。
技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料的制备方法，包括以下步骤：将金前驱体溶液处理损伤模型即得原位生成的金纳米簇材料，所述金前驱体溶液包括氯金酸溶液、氯金酸钠溶液、八氯化四金溶液、三氯化金溶液或一氯化金溶液中的一种或几种。
其中，所述金前驱体溶液是将金前驱体溶于PH缓冲液中制备得到。
其中，所述PH缓冲液包括磷酸盐缓冲液。
其中，所述金前驱体溶液的浓度为1.5～2.0mmol/L。
其中，所述损伤模型包括小鼠拔毛损伤模型或小鼠全层皮肤缺失模型。
其中，所述小鼠拔毛损伤模型的构建方法包括：选取处于毛囊静止期的小鼠，无皮肤病且无抓痕损伤，采用松蜡合剂拔去背毛，形成拔毛损伤模型。
其中，所述小鼠全层皮肤缺失模型的构建方法如下：选取处于毛囊静止期的小鼠，无皮肤病且无抓痕损伤，造模器在小鼠背部皮肤形成一个直径3～5mm的圆形全层皮肤缺损。
本发明内容还包括所述的制备方法制备得到的原位生成的金纳米簇材料。
本发明内容还包括所述的原位生成的金纳米簇材料在损伤皮肤成像鉴别中的应用，所述应用不涉及疾病的治疗和诊断目的。
本发明内容还包括所述的原位生成的金纳米簇材料或金纳米簇材料在制备针对皮肤损伤相关的多毛症的抑毛药物中的应用。
有益效果：与现有技术相比，本发明用金离子作为前驱体，利用受损皮肤中的OSM原位合成金纳米簇，实现对正常皮肤与受损皮肤的成像鉴别；在损伤模型中原位合成的金纳米簇进一步还可抑制毛囊再生，对皮肤损伤相关多毛症起抑毛作用。这种简便、安全、无毒的原位生物合成方法在未来应用于抑制皮肤损伤相关的多毛症具有很大的潜力。
附图说明
图1为本发明实施例中480nm光激发下的活体成像图(注射1.5mmol/L的氯金酸溶液3h、8h和24h后)。
图2为本发明实施例中480nm光激发下的器官体外成像图(注射1.5mmol/L的氯金酸溶液2天后)。
图3为第一次给药(1.5mmol/L的氯金酸溶液)后第9天对照模型组(DPBS)、实验模型组(DAu)和实验对照组(HAu)小鼠的背部照片和各组小鼠石蜡包埋皮肤组织切片HE染色图；其中，图3a是第一次给药后第9天对照模型组(DPBS)、实验模型组(DAu)和实验对照组(HAu)小鼠的背部照片，图3b是各组小鼠石蜡包埋皮肤组织切片HE染色，虚线框表示给药后抑制毛囊再生的部位。
图4是从DAu组皮肤中提取的荧光金纳米簇(FGNCs)的表征结果。
图5中(a)是三组小鼠首次用药后12天主要脏器的HE染色，(b)是各组小鼠12d内体重变化情况。
图6是RT-PCR和Western Blot检测小鼠皮肤中NFKB信号通路关键分子的表达。
图7是ELISA实验显示在拔毛后1天到4天、8天，小鼠皮肤中TNF-a的表达水平，(a)是TNFa的标准曲线，(b)是实验模型组DAu与对照模型组DPBS小鼠皮肤中TNF-a的表达水平。
图8是石蜡包埋的皮肤组织切片进行免疫荧光染色细胞增殖标志物Ki67。红色荧光代表Ki67，蓝色荧光代表细胞核染色，Merge代表红色和蓝色荧光合并图片，图中白色虚线划分左右两部分，白色虚线左边为给药部位皮肤(the dosed site，DAu-A)，白色虚线右边为非给药部位(the non-dosed site,DAu-NA)。
图9是各组小鼠的毛囊长度统计。
图10为给药6h时间点的不同浓度的氯金酸溶液对试验结果的影响；
图11为给药12h时间点的不同浓度的氯金酸溶液对试验结果的影响；
图12为给药24h时间点的不同浓度的氯金酸溶液对试验结果的影响；
图13为给药24h时间点的2mmol/L氯金酸溶液对试验结果的影响；
图14是给药24h时间点的1.5mmol/L三氯化金溶液对试验结果的影响。
具体实施方式
下面结合附图和实施例，对本发明的技术方案进行详细说明。
本实验的氯金酸、氯金酸钠、八氯化四金、三氯化金、一氯化金等试剂购于国药集团化学试剂有限公司。
实施例1氯金酸溶液在拔毛损伤模型中原位合成金纳米簇及其表征
1、金前驱体溶液的制备
将氯金酸溶于PBS缓冲液(pH＝7，10mmol/L)，制得浓度为1.5mmol/L的氯金酸溶液。
2、拔毛损伤模型和未拔毛正常小鼠模型的构建
选取处于毛囊静止期的C57小鼠(7-8周龄)，背部皮肤呈粉红色，无皮肤病且无抓痕损伤。采用松蜡合剂拔去背毛，形成拔毛损伤模型。用眼科剪小心剪去小鼠的背毛(裸露出背皮即可，不要损伤皮肤)，作为未拔毛正常小鼠模型。
3、金前驱体溶液注射到拔毛损伤皮肤中得到原位合成的金纳米簇
拔毛30分钟后，将浓度为1.5mmol/L的氯金酸溶液25μl皮内注射进入拔毛损伤小鼠体内，作为实验模型组(DAu组)。注射25μl PBS缓冲液(pH＝7，10mmol/L)进入拔毛损伤小鼠皮肤内，作为对照模型组(DPBS组)；同时将浓度为1.5mmol/L的氯金酸溶液25μl皮内注射进入未拔毛正常小鼠体内，作为实验对照组(HAu组)。每天一次，连续注射三次，注意要注射至皮肤内浅表部位且形成一个临时性的小皮丘。
4、活体荧光成像、安全性分析和相关蛋白表达等结果表征
活体荧光成像仪观察，分别选取3小时、8小时、24小时不同时间点。用5％异氟烷将小鼠进行气体麻醉后置于小动物活体成像仪暗箱内，选择480nm作为激发波长采集荧光图像。
分别提取各组注射部位皮肤组织中的金纳米材料做分析表征：荧光光谱、高分辨透射电镜(HR-TEM)、X射线光电子能谱(XPS)、能谱分析(EDS)；解剖实验模型组、对照模型组、实验对照组小鼠取器官心、肺、肝、脾、肾制备病理切片，HE染色，以及取血做血液检查，分析局部注射金前驱体对C57小鼠的安全性。提取总RNA和蛋白质分别进行RT-PCR与Western Blot实验，检测NFKB信号通路表达情况。
分别提取第1天，4天，和8天注射部位全层皮肤组织中的蛋白，BCA法测总蛋白浓度，酶联免实验ELISA检测TNFa的表达。
以上表征结果如下：注射3小时后实验模型组(DAu组)、对照模型组(DPBS组)、实验对照组(HAu组)小鼠背皮均无荧光；8小时后仅实验模型组(DAu组)小鼠背皮注射部位有荧光，平均荧光强度(Average radiant efficiency)高达1.04ⅹ108[p/s/cm2/sr]/[μW/cm2]，并且荧光一直持续到24h，其平均荧光强度为1.03ⅹ108[p/s/cm2/sr]/[μW/cm2]，而对照模型组(DPBS组)和实验对照组(HAu组)均没有荧光，表明金前驱体溶液只有在拔毛损伤皮肤中才能够原位生成得到金纳米簇，而在正常皮肤中并不能原位生成得到金纳米簇。两天后在主要的组织器官(liv，肝脏；kid，肾脏；spl，脾脏；lun，肺；hea，心脏)中无荧光纳米材料的累积(见图2)，各组之间相对荧光强度(Relative fluorescent intensity)无变化。
在拔毛后的第9天实验模型组(DAu组)小鼠背皮注射部位出现抑毛现象，而对照模型组(DPBS组)小鼠背皮注射部位皮肤开始变黑长毛，实验对照组(HAu组)小鼠背皮无明显变化且毛囊仍处于静止期(见图3)。
图4为从DAu组皮肤中提取的荧光金纳米簇(FGNCs)的表征结果，材料表征分析发现在拔毛损伤皮肤中原位合成了金纳米簇(见图4)，高价的金前驱体被还原成了低价的金簇(0价和1价)，直径小于2nm的金簇由于具有很强的量子约束效应(对Au原子的数量甚至价电子的数量都很敏感)，表现出与更大直径的金纳米颗粒不同的物理和化学性质，因此被称为纳米团簇。图4a是荧光金纳米簇的透射电镜成像，工作电压(Voltage)为200KV，左上角插入的蓝色直方图显示了荧光金纳米簇的粒径(Diameter)分布百分比(Percentage)，TEM图像显示，FGNCs的平均尺寸为1.99nm，图4b是荧光金纳米簇的高分辨率透射电镜成像，其面间距为0.23nm，与Au的(111)面相对应。图4c是从皮肤中提取的FGNCs进行荧光光谱分析其荧光强度(Intensity)，最大激发波长(Ex max wavelength)为462nm，最大发射波长(Emmax wavelength)为525nm；图4d是XPS分析和(e)是EDS分析，一价金和零价金4f轨道的电子结合能(Binding energy)所对应相对光电子流强度(intensity)的拟合曲线分析表明两种价态的Au(0)和Au(I)共存，样品中Au(0)和Au(I)共存的原子比分别为83.7％和16.3％。因此，它属于金纳米团簇的范围。
图5a是三组小鼠在首次给药后12天主要脏器的HE染色，图5b是各组小鼠12d内体重变化情况，从图看出，局部药物注射对实验模型组(DAu组)、对照模型组(DPBS组)、实验对照组(HAu组)小鼠心(Heart)、肝(Liver)、脾(Spleen)、肺(Lung)、肾(Kidney)等主要器官无影响，12天(day)内体重(Body weight)平稳增加，因此，FGNCs安全性好(见图5和表1与表2)。表1为各组小鼠首次给药后12天的血常规分析，表2为各组小鼠首次给药后12天的血生化分析。
表1
| 组别 | 白细胞(109/L) | 红细胞(1012/L) | 血小板(109/L) |
| DPBS | 4.26±0.21 | 8.90±0.36 | 893.50±51.62 |
| DAu | 3.82±1.77 | 8.46±0.63 | 970.00±70.00 |
| HAu | 4.63±1.89 | 8.68±0.28 | 845.67±40.50 |
| 参考范围 | 0.8-6.8 | 6.36-9.42 | 450-1590 |
表2
从表1和表2的结果表明各指标均在正常范围之内，因此本发明的原位合成荧光金纳米簇是安全的。
图6是RT-PCR和Western Blot检测小鼠皮肤中NFKB信号通路关键分子的表达。第一次给药后8天，从DAu组、DPBS组和HAu组小鼠皮肤中提取总RNA和蛋白分别进行RT-PCR与Western Blot实验，结果表明原位合成的金纳米簇抑制NFKB信号通路(见图6)。
图7是ELISA实验显示在拔毛后1天到4天、8天，小鼠皮肤中TNF-a的表达水平，实验模型组(DAu组)小鼠皮肤中TNF-a的表达水平逐渐下降，而在对照模型组(DPBS组)小鼠的皮肤中TNF-a的表达水平保持不变，表明原位合成的金纳米簇抑制TNF-a表达。
为观察毛囊细胞的增殖情况，第一次给药后第9天皮肤组织石蜡包埋切片。免疫荧光染色观察细胞增殖标志物Ki67的表达(见图8)。DPBS组和DAu-NA组(DAu组皮肤的非给药部位，the non-dosed site,DAu-NA)组中的毛基质完全包裹真皮乳头，而DAu-A(DAu组给药部位的皮肤，the dosed site，DAu-A)中的毛基质未包裹或部分包裹真皮乳头。由箭头所示可知，Ki67在DPBS和DAu-NA的毛基质和根外鞘中表达强烈，但在DAu-A的次级毛芽和根外鞘中表达弱，表明DAu-A的毛囊细胞增殖弱。图9是各组小鼠的毛囊长度统计。与DPBS组皮肤的正常生长期毛囊和DAu组皮肤的非给药部位(the non-dosed site,DAu-NA)毛囊相比，DAu组给药部位皮肤(the dosed site，DAu-A)的毛囊体积更小，长度更短(见图9)。DAu-A毛囊长度(the length of hair follicle)显著短于DPBS组生长期毛囊，而且DAu-A毛囊长度跟HAu组静止期的毛囊长度无明显差异(No significance，NS)，说明DAu-A组抑制效果具备显著性。因此，上述结果表明原位合成的金纳米簇通过负性调控NFKB/TNF-a信号轴抑制毛囊再生。
实施例2
考察不同浓度的金前驱体对试验结果的影响，具体方法同实施例1，不同之处在于考察金前驱体的不同浓度对于结果的影响，所考察的金前驱体(氯金酸)的浓度分别是：1mmol/L、2mmol/L、2.5mmol/L。
结果表明，当浓度低于1.5mmol/L(比如0.5mmol/L和1mmol/L)时荧光强度低且抑毛效果不明显(见图10、11和12)。图12中拔毛损伤DAu组与正常皮肤HAu组荧光强度值(ROI)两者无者明显差异，其值均在104-105之间的水平(与未给药的皮肤荧光强度值无异)，而且远低于108。如实施例1中所示，当浓度为1.5mmol/L时，DAu组荧光明显且其荧光强度(Radiant efficiency)显著高于另外两组，且其在24h时的荧光强度为1.03ⅹ108[p/s/cm2/sr]/[μW/cm2](见图1)；当浓度为2mmol/L时，DAu组荧光明显且其荧光强度(Radiantefficiency)显著高于另外两组，且其荧光强度高达1.3ⅹ108[p/s/cm2/sr]/[μW/cm2](见图13)；当浓度高于2mmol/L时(比如2.5mmol/L)反而会加重皮肤损伤，不利损伤愈合。因此，浓度对金前驱体发挥作用有一定的影响，并且在1.5mmol/L～2mmol/L内能原位合成荧光金纳米簇并表现出明显的抑毛效果。考虑到，有明显抑毛效果的同时用药浓度低安全性更好，所以后续采用1.5mmol/L为最佳浓度。
实施例3
考察不同金前驱体对试验结果的影响，试验方法同实施例1，不同之处在于考察不同金前驱体对于结果的影响，所考察的金前驱体是(浓度是1.5mmol/L)：三氯化金。结果如下：DAu组荧光明显且强度显著高于另外两组，其荧光强度高达1.23ⅹ108[p/s/cm2/sr]/[μW/cm2](见图14)；而且表现出明显的抑毛效果。可见，在损伤皮肤中，三氯化金作为前驱体，原位合成了荧光金纳米簇。
实施例4
不同损伤模型下的抑毛效果，试验方法同实施例1，不同之处在于考察不同损伤模型下对于抑毛效果的影响，所构建的损伤模型为全层皮肤缺失损伤模型。
1、全层皮肤缺失模型：选取处于毛囊静止期的C57小鼠(7-8周龄)，背部皮肤呈粉红色，无皮肤病且无抓痕损伤。用造模器在小鼠背部皮肤形成一个直径大约3mm的圆形全层皮肤缺损构建全层皮肤缺失模型。
2、实验过程：将金前驱体从全层皮损小鼠的尾静脉注射或病灶部位原位给药作为实验组，同时设置给予PBS对照组小鼠；用小动物活体成像仪对各组小鼠进行实时原位成像观察并记录病灶的变化情况；与对照组相比，成像信号能快速识别实验组小鼠的病变部位并富集在该区域，皮肤组织切片进行HE染色以及Ki67增殖标记物免疫荧光染色等实验观察可见实验组小鼠毛囊再生受抑制。
Claims (10)
1.一种在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将金前驱体溶液处理损伤模型即得原位生成的金纳米簇材料，所述金前驱体溶液包括氯金酸溶液、氯金酸钠溶液、八氯化四金溶液、三氯化金溶液或一氯化金溶液中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料的制备方法，其特征在于，所述金前驱体溶液是将金前驱体溶于PH缓冲液中制备得到。
3.根据权利要求2所述的在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料的制备方法，其特征在于，所述PH缓冲液包括磷酸盐缓冲液。
4.根据权利要求2所述的在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料的制备方法，其特征在于，所述金前驱体溶液的浓度为1.5~2.0 mmol/L。
5.根据权利要求1所述的在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料的制备方法，其特征在于，所述损伤模型包括小鼠拔毛损伤模型或小鼠全层皮肤缺失模型。
6.根据权利要求1所述的在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料的制备方法，其特征在于，所述小鼠拔毛损伤模型的构建方法包括：选取处于毛囊静止期的小鼠，无皮肤病且无抓痕损伤，采用松蜡合剂拔去背毛，形成拔毛损伤模型。
7.根据权利要求1所述的在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料的制备方法，其特征在于，所述小鼠全层皮肤缺失模型的构建方法如下：选取处于毛囊静止期的小鼠，无皮肤病且无抓痕损伤，造模器在小鼠背部皮肤形成直径3~5mm的圆形全层皮肤缺损。
8.权利要求1~7任一项所述的制备方法制备得到的在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料。
9.权利要求8所述的在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料在损伤皮肤成像鉴别中的应用，所述应用不涉及疾病的治疗和诊断目的。
10.权利要求9所述的在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料或金纳米簇材料在制备针对皮肤损伤相关的多毛症的抑毛药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410235434.3A CN118106486A (zh) | 2024-03-01 | 2024-03-01 | 一种在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410235434.3A CN118106486A (zh) | 2024-03-01 | 2024-03-01 | 一种在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料及其制备方法和应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN118106486A true CN118106486A (zh) | 2024-05-31 |
Family
ID=91220482
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410235434.3A Pending CN118106486A (zh) | 2024-03-01 | 2024-03-01 | 一种在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN118106486A (zh) |
-
2024
- 2024-03-01 CN CN202410235434.3A patent/CN118106486A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR850001724B1 (ko) | 화장품 및 약제에 유용한 조성물의 제조방법 | |
| Meng et al. | Stem cell membrane-coated Au-Ag-PDA nanoparticle-guided photothermal acne therapy | |
| CN113355290B (zh) | 一种抗肿瘤的工程化外泌体、制备方法和应用 | |
| Gao et al. | Hyaluronic acid/serotonin-decorated cerium dioxide nanomedicine for targeted treatment of ulcerative colitis | |
| CN109513000A (zh) | 一种运载蜂毒肽的光敏性纳米载体制备方法及应用 | |
| Duan et al. | ZIF-8 as a protein delivery system enhances the application of dental pulp stem cell lysate in anti-photoaging therapy | |
| Yang et al. | Curcumin-zinc framework encapsulated microneedle patch for promoting hair growth | |
| Miao et al. | Multiple cell death pathways triggered by temperature-mediated synergistic effect derived from chiral phototheranostic ablation nanoagents | |
| TWI476012B (zh) | 使用茄屬植物的水溶性萃取物來治療和／或預防發炎與皮膚光損害以及光防護皮膚 | |
| US10695428B2 (en) | Use of a photosensitive agent capable of producing reactive oxygen species in the production of a drug for the photodynamic therapy of a disease related to stem cells, in vitro use, and pharmaceutical composition | |
| KR101582980B1 (ko) | 은 나노입자 및 하수오 추출물을 포함하는 조성물 및 그의 용도 | |
| CN118106486A (zh) | 一种在损伤模型中原位生成的金纳米簇材料及其制备方法和应用 | |
| CN111329837B (zh) | 一种褪黑素柔性脂质体及其制备方法和应用 | |
| RU2642957C2 (ru) | Липосома, фармацевтическая композиция и лекарственное средство для лечения местных радиационных поражений кожи, применение липосом и способ для лечения местных радиационных поражений кожи | |
| Morokuma et al. | Hair growth stimulatory effect by a combination of 5‐aminolevulinic acid and iron ion | |
| Liu et al. | A novel delivery vehicle for copper peptides | |
| CN115227819A (zh) | 一种介导光动力抑制皮肤光老化的自产氧纳米粒及其制备方法和应用 | |
| CN114796120B (zh) | 一种防脱生发的脂质体及其制备方法与应用 | |
| Zou et al. | Prussian blue nanoparticles coated with tumor cell membranes for precise photothermal therapy and subsequent inflammation reduction | |
| CN111012922B (zh) | 一种靶向、控释治疗结直肠癌药物及其制备方法 | |
| RU2821779C1 (ru) | Способ комплексной коррекции нерубцовых алопеций в эксперименте | |
| WO2023089462A1 (en) | Medicinal products based on exosomes derived from plants, humans, algae, and medicinal mushrooms to treat the skin diseases | |
| Yasuzumi et al. | Effects of bleomycin on human tongue carcinoma cells as revealed by electron microscopy | |
| Wang et al. | Pharmacodynamics of Dracorhodin Perchlorate and Its Inflammation-Targeting Emulsion Gel for Wound Healing. Gels 2022, 8, 712 | |
| Dayel et al. | Beneficial role of Vitamin C on radiation-induced skin cellular injury |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |