CN118076593A - 3CLpro蛋白酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

提供一种3CLpro的蛋白酶抑制剂，含有式(I)所述化合物的药物组合物以及利用该化合物治疗冠状病毒的方法。

Description

3CLpro蛋白酶抑制剂
本申请要求申请日为2021年9月7日的中国专利申请202111044417.4、申请日为2021年10月21日的中国专利申请202111226591.0、申请日为2021年12月3日的中国专利申请202111470155.8、申请日为2021年12月31日的中国专利申请202111674718.5、申请日为2022年8月26日的中国专利申请202211031927.2的优先权，本申请引用上述中国专利申请的全文。
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及冠状病毒3CLpro蛋白酶抑制剂，含有所述化合物的药物组合物以及利用本发明化合物治疗冠状病毒感染的方法。
背景技术
冠状病毒属于单正链RNA病毒，冠状病毒家族主要包括新型冠状病毒(SARS-CoV-2)，SARS冠状病毒(SARS-CoV)，人冠状病毒229E、人冠状病毒NL63、人冠状病毒OC43、人冠状病毒HKU1、严重急性呼吸综合征冠状病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome associated Coronavirus，SARS-CoV)、中东呼吸综合征病毒(Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus，MERS-CoV)，其中SARS-CoV和MERS-CoV是高致病性HCoV，可引起严重的急性呼吸道综合征并且有较高的致死率。感染新型冠状病毒(2019-nCoV)可引起轻度、中度或重度疾病(包括重症肺炎、脓毒血症和ARDS等)。
3CLPro(3C-like protease，又称3C样蛋白酶)是新型冠状病毒(COVID-19,SARS-CoV-2)产生的主要蛋白酶，冠状病毒大多数功能蛋白(非结构蛋白)由ORF1ab基因编码，先翻译成一个多蛋白体(7096aa)，再由3CLPro切割成多个有活性的蛋白如病毒复制蛋白RdRp。此外，该蛋白可能切割胞内蛋白NEMO从而抑制干扰素信号途径的活化。因此抑制3CLPro能够有效抑制病毒的感染与复制。
与SARS相比，新冠病毒造成的疾病症状更为复杂、传播性更强，截止目前已经在全球确诊5亿多例，由于3C样蛋白酶在冠状病毒复制中起着至关重要的作用，因此开发针对3CLPro抑制剂的冠状病毒治疗药物有非常重要的价值与意义。
发明内容
本发明提供一种式(I)所示的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，
其中，环A选自C 6-10芳基、5-10元杂芳基、C 3-12环烷基或3-12元杂环基；
X选自-(CH 2) s-C(＝O)-或-NH-C(＝O)-；
Y选自NH或化学键；
环B选自C 3-12环烷基、3-12元杂环基或5-10元杂芳基；
Z选自-O-、-S-、-CH 2-、-C(＝O)-NH-或-(CH 2) tNH-；
环C选自C 6-10芳基或5-10元杂芳基；
环D选自3-12元杂环基或5-6元杂芳基；或者环D不存在；R 1选自卤素、OH、O、氰基、-NR 1aR 1b、 C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 3-8环烷基、C 6-10芳基、-NR 1aCOR 1c、-SR 1d或-CONR 1aR 1b，所述的C 1-4烷基和C 1-4烷氧基可进一步被一个或多个卤素取代；
R 1a、R 1b、R 1c和R 1d各自独立地选自H、C 1-4烷基或卤代C 1-4烷基，所述C 1-4烷基可以被一个或多个氘取代；
或者，位于环A同一个C原子上的两个R 1可以一起形成＝CH 2、＝S或者C 3-5环烷基；
R 2选自氘、氰基、C 2-4炔基、卤素、C 1-4烷基、羟基、C 1-4烷氧基、氘代C 1-4烷氧基、-C(＝O)-NR 2aR 2b、-C 2-4炔基-R 2c、5-6元的杂芳基或-O-(CH 2) y-R 2d；
R 2c选自5-6元的杂芳基，所述的5-6元的杂芳基可进一步被C 1-4烷基所取代；
R 2a和R 2b各自独立地选自H、C 1-4烷基、苯基、5-9元的杂芳基、5-6元的杂环基或C 3-5环烷基，所述的C 1-4烷基、苯基、5-9元的杂芳基、5-6元的杂环基、C 3-5环烷基可进一步被一个或多个选自甲基、乙基、环丙基、卤素、CF 3、-CH 2CF 3、苯基、甲氧基、吡啶基、嘧啶基、四氢吡喃基或-CH 2CH 2OCH 3的取代基所取代，所述的吡啶基、嘧啶基或四氢吡喃基可进一步被一个或多个甲基、CF 3、卤素、-NHCH 3或-CHF 2所取代；
或者，R 2a、R 2b与其相连的N原子一起形成4-9元的杂环基或5-9元的杂芳基，所述的4-9元的杂环基或5-9元的杂芳基可进一步被一个或多个选自C 1-4烷基、卤素、羟基或-CH 2CH 2OCH 3的取代基所取代；
R 2d选自C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、苯基、5-6元杂芳基或5-6元的杂环基，所述的苯基、5-6元杂芳基或5-6元的杂环基可进一步被一个或多个选自卤素、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤代C 1-4烷基的取代基所取代；y选自0、1或2；
R 3选自硝基、卤素、羟基、氰基、C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、-NR 3aR 3b或-N(R 3aR 3bR 3c) +；
R 3a、R 3b或R 3c各自独立地选自H或C 1-4烷基；
R 4选自卤素、羟基、C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、3-8元杂环基、-C(＝O)R 4a、-NHC(＝O)R 4a、-(CH 2) rOR 4b、-NR 4cR 4d、C 1-4烷氧基、-(CH 2) x-C 3-6环烷基、-NR 4a-(CH 2) x-C 6-10芳基，所述的芳基可进一步被卤素取代；
R 4a、R 4b、R 4c或R 4d各自独立地选自H、C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、5-6元杂环基或C 3-6环烷基；
或者R 4c、R 4d与其相连的N原子一起形成六元杂环；
x为0、1或2；r选自0、1、2或3；
m、n、p和q各自独立选自0、1、2、3、4或5；
s和t各自独立选自0或1。
本发明某些实施方案，环A为C 6-10芳基、5-10元杂芳基、C 3-12环烷基或3-12元杂环基；
X为-(CH 2) s-C(＝O)-或-NH-C(＝O)-；
Y选自NH或化学键；
环B选自C 3-12环烷基、3-12元杂环基或5-10元杂芳基；
Z选自-O-、-S-、-CH 2-、-C(＝O)-NH-或-(CH 2) tNH-；
环C选自C 6-10芳基或5-10元杂芳基；
环D为3-12元杂环基；或者环D不存在；
R 1选自卤素、OH、O、氰基、-NR 1aR 1b、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 3-8环烷基、C 6-10芳基、-NR 1aCOR 1c、-SR 1d或-CONR 1aR 1b，所述的C 1-4烷基和C 1-4烷氧基可进一步被一个或多个卤素取代；
R 1a、R 1b、R 1c和R 1d各自独立地选自H、C 1-4烷基或卤代C 1-4烷基；
或者，位于环A同一个C原子上的两个R 1可以一起形成＝CH 2、＝S或者C 3-5环烷基；
R 2选自卤素、C 1-4烷基、羟基或C 1-4烷氧基；
R 3选自硝基、卤素、羟基、氰基、C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、-NR 3aR 3b或-N(R 3aR 3bR 3c) +；
R 3a、R 3b或R 3c各自独立地选自H或C 1-4烷基；
R 4选自卤素、羟基、C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、3-8元杂环基、-C(＝O)R 4a、-NHC(＝O)R 4a、-(CH 2) rOR 4b、-NR 4cR 4d、C 1-4烷氧基、-(CH 2) x-C 3-6环烷基、-NR 4a-(CH 2) x-C 6-10芳基，所述的芳基可进一步被卤素取代；
R 4a、R 4b、R 4c或R 4d各自独立地选自H、C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、5-6元杂环基或C 3-6环烷基；
或者R 4c、R 4d与其相连的N原子一起形成六元杂环；
x为0、1或2；
r选自0、1、2或3；
m、n、p和q各自独立选自0、1、2、3、4或5；
s和t各自独立选自0或1。
本发明某些实施方案，环A为C 6-10芳基、5-10元杂芳基、C 3-12环烷基或3-12元杂环基；
X为-(CH 2) s-C(＝O)-或-NH-C(＝O)-；
Y选自NH或化学键；
环B选自C 3-12环烷基、3-12元杂环基或5-10元杂芳基；
Z选自-O-、-S-、-CH 2-、-C(＝O)-NH-或-(CH 2) tNH-；
环C选自C 6-10芳基或5-10元杂芳基；
环D为3-8元杂环基；或者环D不存在；
R 1选自卤素、OH、O、氰基、-NR 1aR 1b、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 3-8环烷基、C 6-10芳基，所述的C 1-4烷基和C 1-4烷氧基可进一步被一个或多个卤素取代；
R 1a和R 1b各自独立地选自H或C 1-4烷基；
R 2选自卤素或C 1-4烷基；
R 3选自硝基、卤素、羟基、氰基、C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、-NR 3aR 3b或-N(R 3aR 3bR 3c) +；
R 3a、R 3b或R 3c各自独立地选自H或C 1-4烷基；
R 4选自卤素、羟基、C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、3-8元杂环基、-C(＝O)R 4a、-NHC(＝O)R 4a、-(CH 2) rOR 4b或-NR 4cR 4d；
R 4a、R 4b、R 4c或R 4d各自独立地选自H、C 1-4烷基或卤代C 1-4烷基；
r选自0、1、2或3；
m、n、p和q各自独立选自0、1、2或3；
s和t各自独立选自0或1。
当环D不存在时，(R 4)q和与环C相连的-C(＝O)-键连接。
优选地，当环A为9元或10元杂芳基、环D不存在时，R 4不为甲氨基。
在本发明某些实施方案中，
其中环A为C 6-10芳基、5-10元杂芳基或7-10元杂环基；
X为-(CH 2) s-C(＝O)-或-NH-C(＝O)-；
Y选自NH或化学键；
环B选自C 3-12环烷基、3-12元杂环基或5-10元杂芳基；
Z选自-O-、-S-、-CH 2-、-C(＝O)-NH-或-(CH 2) tNH-；
环C选自C 6-10芳基或5-10元杂芳基；
环D为3-8元杂环基；
R 1选自卤素、OH、O、氰基、-NR 1aR 1b、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 3-8环烷基、C 6-10芳基，所述的C 1-4烷基和C 1-4烷氧基可进一步被一个或多个卤素取代；
R 1a和R 1b各自独立地选自H或C 1-4烷基；
R 2选自卤素或C 1-4烷基；
R 3选自硝基、卤素、羟基、氰基、C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、-NR 3aR 3b或-N(R 3aR 3bR 3c) +；
R 3a、R 3b或R 3c各自独立地选自H或C 1-4烷基；
R 4选自卤素、羟基或C 1-4烷基；
m、n、p和q各自独立选自0、1或2；
s和t各自独立选自0、1或2。
本发明某些实施方案，环A选自苯基、环己基、5-10元杂芳基或6-10元杂环基，且所述的杂芳基或杂环基含有1-3个选自N、O或S的杂原子。
本发明某些实施方案，环A选自苯基、环己基、5-6元单杂芳基、8-10元稠杂芳基、6元单杂环基、8元螺杂环基、7-10元稠杂环基，且所述的杂环基或杂芳基含有1-3个选自N或O的杂原子。
本发明某些实施方案，所述环A选自吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、苯基、咪唑基、噻吩基、异恶唑基、苯并三氮唑基、
本发明某些实施方案，所述环A选自吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、苯基、咪唑基、噻吩基、异恶唑基、苯并三氮唑基、
本发明某些实施方案，所述环A选自
本发明某些实施方案，所述环A选自吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、苯基、咪唑基、噻吩基、异恶唑基、苯并三氮唑基、
本发明某些实施方案中，所述环A选自吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、苯基、咪唑基、噻吩基、异恶唑基、苯并三氮唑基、
本发明某些实施方案中，所述环A选自
本发明某些实施方案中，所述R 1选自F、Cl、Br、I、O、羟基、甲基、甲氧基、三氟甲基、-NH 2、-NHCH 3、-N(CH 3) 2、 氰基、环丙基、苯基、-NHCH 2CH 3、-SCH 3、-CONH 2、-NHCOCF 3或-NHCOCH 3；
或者，位于环A同一个C原子上的两个R 1可以一起形成＝CH 2、＝S或者环丙基；
m选自0、1、2或3。
本发明某些实施方案中，所述R 1选自F、Cl、Br、I、O、羟基、甲基、甲氧基、三氟甲基、-NH 2、-NHCH 3、-N(CH 3) 2、 氰基、环丙基、苯基、-NHCH 2CH 3、-SCH 3、-CONH 2、-NHCOCF 3或-NHCOCH 3；
或者，位于环A同一个C原子上的两个R 1可以一起形成＝CH 2、＝S或者环丙基；
m选自0、1、2或3。
本发明某些实施方案中，所述R 1选自F、Cl、Br、I、O、羟基、甲基、甲氧基、三氟甲基、-NH 2、-NHCH 3、 -N(CH 3) 2-、 氰基、环丙基或苯基；
本发明某些实施方案中，所述R 1选自F、Cl、Br、I、O、羟基、甲基、甲氧基、三氟甲基、-NH 2、-NHCH 3、 氰基、环丙基或苯基；
在本发明某些实施方案中，R 1选自F、Cl、Br、羟基、甲基、-NH 2、-NHCH 3、氰基或环丙基。
本发明某些实施方案，所述结构单元 选自
本发明某些实施方案中，结构单元 选自
本发明某些实施方案中，结构单元 选自
本发明某些实施方案中，所述结构单元 选自
在本发明某些实施方案中，结构单元 选自
本发明某些实施方案中，所述X选自-CH 2-C(＝O)-、-C(＝O)-或-NH-C(＝O)-；
本发明某些实施方案中，所述X选自-C(＝O)-。
本发明某些实施方案中，所述环B选自C 5-6环烷基、4-10元杂环基或5-6元杂芳基。
本发明某些实施方案中，所述环B选自C 5-6环烷基、4-6元单杂环基、6元螺杂环基、6-9元稠杂环基或6元杂芳基，且所述的杂环基或杂芳基含有1-2个选自N或O的杂原子。
本发明某些实施方案中，所述环B选自
本发明某些实施方案中，所述环B选自
本发明某些实施方案中，所述环B选自
本发明某些实施方案中，环B选自
本发明某些实施方案中，所述R 2选自F、甲基、羟基或甲氧基，n选自0、1或2。
本发明某些实施方案中，所述R 2选自氘、氰基、乙炔基、F、甲基、羟基、甲氧基、-CONH 2、-CONHCH 3、
n选自0、1、2、3、4或5。
本发明某些实施方案中，所述R 2选自F或甲基，n选自0、1或2。
本发明某些实施方案，结构单元 选自
本发明某些实施方案中，结构单元 选自
本发明某些实施方案中，结构单元 选自
在本发明某些实施方案中，结构单元 选自
本发明某些实施方案中，所述Z选自-NH-、-O-、-S-、-CH 2-、-CH 2NH-或-C(＝O)-NH-。
本发明某些实施方案中，所述Z选自-NH-、-O-、-CH 2-、-CH 2NH-或-C(＝O)-NH-；在本发明某些实施方案中，Z为-NH-。
本发明某些实施方案中，所述环C选自苯基或吡啶基；在本发明某些实施方案中，环C为苯基。
本发明某些实施方案中，所述R 3选自硝基、Br、Cl、I、CN、CF 3、或-N(CH 3) 3 +；在本发明某些实施方案中，R 3选自硝基、Br、Cl或CF 3。
本发明某些实施方案中，结构单元 选自
本发明某些实施方案中，结构单元 选自
在本发明某些实施方案中，结构单元 选自
本发明某些实施方案，所述环D选自3-12元杂环基，所述的杂环基含有1-3个选自N、O、或S的杂原子。
本发明某些实施方案，所述环D选自4-7元单杂环基、6-9元的稠杂环基、7-11元的螺杂环基或7-9元 桥杂环基，且所述的杂环基含有1-3个选自N、O、或S的杂原子。
本发明某些实施方案，所述环D选自5-6元杂芳基；
本发明某些实施方案，所述环D选自 或者环D不存在；
本发明某些实施方案，所述环D选自 或者环D不存在。
本发明某些实施方案中，所述环D选自
或者环D不存在。
本发明某些实施方案中，所述环D选自
在本发明某些实施方案中，环D选自
本发明某些实施方案，所述R 4选自氘、F、Cl、甲基、叔丁基、甲氧基、氨基、羟基、 -CH 2CF 3、-CH 2F、-CH 2Cl、乙烯基、乙炔基、-CF 3、-CHF 2、 -C(＝O)CF 3、-NHC(＝O)CF 3、-CH 2CH 2OCH 3、-CH 2CH 2OH、 环丙基、 q选自0、1、2、3、4或5；
本发明某些实施方案中，所述R 4选自F、Cl、甲基、叔丁基、甲氧基、氨基、羟基、 -CH 2CF 3、 -CH 2F、-CHF 2、 -C(＝O)CF 3、-NHC(＝O)CF 3、-CH 2CH 2OCH 3、-CH 2CH 2OH、 q选自0、1、2、3、4或5。
本发明某些实施方案中，所述R 4选自F、甲基、 -CH 2CF 3、-CH 2F、-C(＝O)CF 3、-NHC(＝O)CF 3、-CH 2CH 2OCH 3、 q选自0、1、2或3。
本发明某些实施方案中，所述R 4选自F、甲基、 -CH 2CF 3、-C(＝O)CF 3、-NHC(＝O)CF 3、-CH 2CH 2OCH 3、 q选自0、1、2或3。
在本发明某些实施方案中，R 4选自F、甲基、 -CH 2CF 3或-C(＝O)CF 3。
本发明某些实施方案中，所述R 4选自F或甲基，q选自0、1或2。
本发明某些实施方案，所述结构单元 选自
本发明某些实施方案中，结构单元 选自
本发明某些实施方案中，所述结构单元 选自
本发明的某些实施方案，所述结构单元 选自
本发明的某些实施方案，所述结构单元 选自
本发明的某些实施方案，所述结构单元 选自
本发明某些实施方案中，结构单元 选自
在本发明某些实施方案中，结构单元 选自
在本发明某些实施方案中，当环D不存在时，环A为吡啶基或 R 4为 q为1。
本发明某些实施方案中，所述化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其选自：
其中，环A、环B、环D、X、Y、Z、R 1、R 2、R 3、R 4、m、n、p和q如式(I)所定义。
本发明某些实施方案中，所述化合物选自：
其中，环B、环D、X、Y、Z、R 1、R 2、R 3、R 4、m、n、p和q如式(I)所定义。
本发明某些实施方案中，所述的化合物及其异构体，其选自：
其中，环B、环D、R 1、R 2、R 3、R 4、m、n、p和q如式(I)所定义。
本发明还提供了化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其选自：
本发明还提供式(I)化合物的制备方法：其通过式(I-A)化合物与式(I-B)化合物发生缩合反应制备得到；
其中，所述的环A、环B、环C、环D、X、Y、Z、R 1、R 2、R 3、R 4、m、n、p和q如式(I)所定义。
本发明还涉及药物组合物，其包含式(I)所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明还涉及所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂或所述的药物组合物在制备治疗由冠状病毒引起的疾病的药物中的应用。
优选地，所述疾病为呼吸道传染病。优选地所述呼吸道传染病为严重急性呼吸综合征。优选地，所述冠状病毒为SARS-CoV-2。
本发明还提供式(I)所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，在治疗冠状病毒引起的疾病中的应用，优选地，所述疾病为呼吸道传染病。优选地所述呼吸道传染病为严重急性呼吸综合征。优选地，所述冠状病毒为SARS-CoV-2。
本发明还提供式(I)所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐在制备3CLpro蛋白酶抑制剂中的应用。
本发明还提供一种治疗冠状病毒引起的疾病的方法，其给予有效量的式(I)所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐；优选地，所述疾病为呼吸道传染病。优选地所述呼吸道传染病为严重急性呼吸综合征。优选地，所述冠状病毒为SARS-CoV-2。
本发明化合物的有益效果包括但不限于：对SARS-CoV-2 3CLpro/Mpro蛋白酶具有良好的抑制作用，具有更好的药代动力学性质，且具有更好的成药性。
术语解释
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语旨在具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。
术语“药学上可接受的”指在合理的医学判断范围内适合与人类和动物的组织接触使用而无过度的毒性、刺激、过敏反应或其它的问题或并发症，与合理的收益/风险比相当的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与相对无毒的酸或碱制备得到的衍生物。这些盐可以在化 合物合成、分离、纯化期间就被制备，或者单独使用经过纯化的化合物的游离形式与适合的酸或碱反应。当化合物中含有相对酸性的官能团时，与碱金属、碱土金属氢氧化物或有机胺反应得到碱加成盐，包括基于碱金属与碱土金属的阳离子。当化合物中含有相对碱性的官能团时，与有机酸或无机酸反应得到酸加成盐。
本发明所述的异构体包含几何异构体和立体异构体，例如顺反异构体、对映异构体、非对映异构体、及其外消旋混合物和其他混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。
术语“对映异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
术语“顺反异构体”是指分子中双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而存在的构型。
本发明中， 代表反式异构体，两个甲基取代基在环的不同侧，如
本发明中， 代表环D中含有N原子。
本发明中，环A同一个C原子上的两个R 1可以一起形成＝CH 2、＝S，例如
除非另有说明，用楔形实线键 和楔形虚线键 表示一个立体中心的绝对构型。
本发明化合物的立体异构体可以通过手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备。例如本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称催化技术或者手性助剂衍生技术制备得到。或者通过手性拆分技术，从混合物中得到单一立体构型的化合物。或者用手性起始原料，直接制备得到。本发明中的光学纯化合物的分离通常是使用制备色谱完成的，采用手性色谱柱，达到分离手性化合物的目的。
本发明还包括同位素标记的化合物，包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分别例如 2H、 3H、 13C、 11C、 14C、 15N、 18O、 17O、 31P、 32P、 35S、 18F和 36Cl。含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本发明化合物都属于本发明的范围。优选地，同位素选自下组： 2H、 3H、 11C和 18F。更优选地，放射性同位素是 2H。具体地说，氘代的化合物旨在包含在本发明的范围内。
除非另有规定，术语“化学键”是一种粒子间的结合模式，其中粒子可以是原子或离子。例如结构单元 当Y为化学键时代表X与环B直接相连，即为
当一个连接基团的数量为0时，比如-(CH 2) s-C(＝O)-，s＝0表示该连接基团为化学键，即为-C(＝O)-。
当一个取代基的键可以交叉连接到一个环上时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。例如，结构单元 表示取代基R 1可以在环A上的任意一个位置发生取代。
在本发明中，结构单元 其中X、Y取代基的连接方式为从左至右，例如当X为-(CH2) s-C(＝O)-时，结构单元 为 当X为-NH-C(＝O)-时，结构单元 为
在本发明中，当环D不存在时，结构单元 代表-C(＝O)与R 4直接相连，即 q为1；
优选地，当环A为9元或10元杂芳基，环D不存在时，R 4不为甲氨基(-NHCH 3)；
在本发明中，R 1中可选取代基为O时表示其连接的原子被氧化，例如环A中含有N原子时可以形成氮氧化物，如
术语“药学上可接受的载体”是指本领域通常可接受的用于将生物活性药剂递送给动物、特别是哺乳动物的介质，根据给药方式和剂型的性质包括佐剂、赋形剂或赋形物，例如稀释剂、防腐剂、填充剂、流动调节剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂。药学上可接受的载体在本领域普通技术人员的眼界范围内根据大量因素配制。其包括但不限于：配制的活性药剂的类型和性质，要将含有该药剂的组合物给药的对象，组合物的预期给药途径，和目标治疗适应症。药学上可接受的载体包括含水介质和非水介质这两者以及多种固体和半固体剂型。除了活性药剂以外，这样的载体包括许多不同的成分和添加剂，因多种原因(例如稳定活性药剂、粘合剂等)在处方中包括的另外的成分对于本领域普通技术人员是众所周知的。术语“赋形剂”通常是指配制有效的药物组合物所需要载体、稀释剂和/或介质。
术语“有效预防或治疗量”是指本发明化合物或其药学上可接受的盐指以适用于任何医学治疗和/或预防的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本发明式(I)所示化合物或其药学上可接受的盐和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。
术语“任选被取代”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的，例如，术语“可任选地被一个或多个卤素取代”是指可以被一个或多个卤素取代，也可以不被卤素取代。
除非另有规定，“环”是指饱和的、部分饱和的或不饱和的单环以及多环。
除非另有规定，术语“杂环基”是指取代或未取代的饱和或不饱和的非芳香环，且包含1-3个选自N、O或S的杂原子。包括饱和或部分饱和的单环杂环基和多环杂环基；所述杂环基与连接位置无关(即，可以通过碳原子或杂原子结合)。所述多环杂环基包括稠杂环基、螺杂环基、桥杂环基。
所述的杂环基可被氧代，例如
所述的“稠杂环基”是指两个或两个以上的环相互间共用两个相邻的环原子所形成的环状结构，且其中至少一个环为杂环；所述稠杂环基包括单杂环基与单杂环基或环烷基或芳基或杂芳基稠和而成的环状结构，亦包括杂芳基与环烷基或单杂环基稠和而成的环状结构。
所述的“螺杂环基”是指两个或两个以上的环相互间共用一个环原子所形成的环状结构、且至少一个环为杂环。
所述的“桥杂环基”是指两个或两个以上的环相互间共用非相邻的环原子所形成的环状结构、且至少一个环为杂环。
杂环基可选自4-7元单杂环、6-10元稠杂环、8-11元螺杂环或7-9元桥杂环。
“杂环基”实例包括但不限于
除非另有规定，术语“芳基”是指不饱和的、通常为芳族的烃基，其可为单环或稠合在一起的多个环。C 6- 10芳基的实例包括但不限于苯基、萘基。
除非另有规定，术语“杂芳基”意指稳定的单环或者多环的芳族烃，优选包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子。所述的杂芳基可被氧代，例如 优选5-12元杂芳基，更优选5-10元杂芳基；杂芳基的实例包括但不限于吡咯基、吡唑基、 咪唑基、吡嗪基、 (异恶唑基)、噻唑基、呋喃基、噻吩基、嘧啶基、吡啶基、异喹啉基、 (噌啉基)、 (酞嗪基)、
除非另有规定，“环烷基”是指饱和的单环或多环烃基环烷基优选C 3-12环烷基，更优选C 3-8环烷基，进一步优选C 3-6环烷基，环烷基的实例包括但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基或 环烷基还可进一步被氧代，例如
除非另有规定，术语“烷基”用于表示直链或支链的饱和烃基。优选C 1-6的烷基，更优选C 1-4的烷基，烷基的实例包括，但不限于甲基，乙基，正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基，新戊基、正己基等。
除非另有规定，术语“烷氧基”用于表示-O-烷基，烷氧基优选C 1-6的烷氧基，更优选C 1-4的烷氧基，烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基等。
除非另有规定，术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘原子。
除非另有规定，术语“卤代烷基”是指被一个或多个卤素取代的烷基，卤代烷基优选卤代C 1-4烷基，卤代C 1-4烷基的实例包括但不限于CF 3、CH 2Cl、CH 2F等。
在本发明中，严重急性呼吸道综合征，英语全称Severe Acute Respiratory Syndrome，缩写为SARS，是非典型肺炎的一种。严重急性呼吸道综合征冠状病毒2(缩写为SARS-CoV-2)，是冠状病毒科乙型冠状病毒属严重急性呼吸道综合征相关冠状病毒种的一个分型，它的基因序列和SARS病毒及MERS病毒属于同一谱系但不同进化枝，是已知的第七种可感染人类的冠状病毒。病毒的宿主包括哺乳动物和禽类动物，它造成了于2019年底爆发的2019冠状病毒病(COVID-19)。该病毒可通过人类上呼吸道入侵人体，以多种细胞表面表达的ACE2为受体达到感染；主要感染器官包括肺部、心脏、肾脏等多个主要器官。
特别说明，本文中所有的取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
实验仪器汇总：
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)，或超高效液质联用色谱(UPLC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker Neo 400M或者Bruker Ascend 400核磁仪器，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d 6)，氘代甲醇(CD 3OD)和氘代氯仿(CDCl 3)，重水(D 2O)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent 1260-6125B single quadrupole mass spectrometer，柱子为Welch Biomate column(C18,2.7μm,4.6×50mm)或者waters H-Class SQD2，柱子为Welch Ultimate column(XB-C18,1.8μm,2.1×50mm)质谱仪(离子源为电喷雾离子化)。
超高效液质联用色谱UPLC-MS的测定用Waters UPLC H-class SQD质谱仪(离子源为电喷雾离子化)。
HPLC的测定使用Waters e2695-2998或Waters ARC和Agilent 1260或Agilent Poroshell HPH高效液相色谱。
薄层层析硅胶板使用烟台江友硅胶开发有限公司GF254硅胶板或乳山市上邦新材料有限公司GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.20mm，制备型20×20cm，柱层析一般使用于成化工200～300目硅胶为载体。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气气氛下进行，溶剂为干燥溶剂，反应温度单位为摄氏度或℃。如无特别说明，室温指25±5℃。
4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液中的M为浓度单位，代表mol/L。
实施例1
N-((1S,2R)-2-((4-溴-2-(3，3-二氟氮杂环丁烷-1-羰基)-6-硝基苯基)氨基)环己基)异喹啉-4-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温下，氮气保护，将化合物1-1(100mg,0.38mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)。随后，将上述溶液降温至0℃，然后依次加入N,N-二异丙基乙胺(147mg,1.14mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(216mg,0.57mmol)和3,3-二氟三甲叉亚胺盐酸盐(58.3mg,0.46mmol)。反应体系在0℃下搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物1-2(108mg，收率84％)。
MS(ESI)M/Z:339.0[M+H] +。
步骤B：在室温下，氮气保护，将化合物1-2(108mg,0.32mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)。随 后，向上述溶液中依次加入叔丁基((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸酯(77mg,0.36mmol)和N,N-二异丙基乙胺(123.3mg,0.96mmol)。反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物1-3(150mg，收率88.1％)。
MS(ESI)M/Z:555.0[M+Na] +。
步骤C：在室温下，氮气保护，将化合物1-3(150mg,0.28mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中。随后，在0℃条件下，向反应体系中缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(2mL)。反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到粗品化合物1-4(140mg)。
MS(ESI)M/Z:433.0[M+H] +。
步骤D：在室温下，氮气保护，将化合物1-4(140mg,0.32mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入异喹啉-4-羧酸(55mg,0.32mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(182mg,0.48mmol)和N,N-二异丙基乙胺(123mg,0.96mmol)。反应体系在0℃下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物1(68.2mg，收率36.3％)。
MS(ESI)M/Z:588.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.37(s,1H),8.71(d,J＝8.0Hz,1H),8.34(s,1H),8.27(d,J＝2.4Hz,1H),8.17(d,J＝8.0Hz,1H),8.05(d,J＝10.0Hz,1H),7.94(d,J＝8.4Hz,1H),7.87(d,J＝2.4Hz,1H),7.80-7.76(m,1H),7.72(d,J＝7.0Hz,1H),4.73-4.43(m,4H),4.33(brs,1H),3.85(brs,1H),1.88-1.36(m,8H). 19F NMR(376MHz,DMSO-d 6)δ-100.04(s).
实施例2
N-((1S，2R)-2-((4-溴-2-硝基-6-(哌啶-1-羰基)苯基)氨基)环己基)异喹啉-4-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(200mg,0.76mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL) 中。随后，将上述溶液降温至-10℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(292mg,2.3mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(381mg,1.06mmol)和哌啶(77mg,0.91mmol)。反应体系搅拌3分钟。
TLC监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物2-2(100mg，收率40％)。
MS(ESI)M/Z:331.2[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物2-2(100mg,0.30mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中。随后，向上述反应液中依次加入叔丁基((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸酯(77mg,0.36mmol)和N,N-二异丙基乙胺(96mg,0.75mmol)。反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物2-3(120mg，收率75.5％)。
MS(ESI)M/Z:547.4[M+Na] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物2-3(120mg,0.23mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(5mL)。反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到粗品化合物2-4(100mg)。
MS(ESI)M/Z:425.0[M+H] +。
步骤D：在室温下，氮气保护，将化合物2-4(100mg,0.24mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入异喹啉-4-羧酸(44mg,0.26mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(133mg,0.35mmol)和N,N-二异丙基乙胺(90mg,0.71mmol)。反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物2(50mg，收率36.8％)。
MS(ESI)M/Z:580.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.39(s,1H),8.81(d,J＝4.4Hz,0.5H),8.59(d,J＝5.6Hz,0.5H),8.52(s,1H),8.25-8.02(m,4H),7.81-7.73(m,2H),7.61(d,J＝2.0Hz,1H),4.45(brs,1H),3.86-3.62(m,3H),3.46-3.38(m,1H),3.27-3.11(m,1H),1.99-1.27(m,14H).
实施例3
N-((1S，2R)-2-((4-溴-2-硝基-6-(吡咯烷-1-羰基)苯基)氨基)环己基)异喹啉-4-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(200mg,0.76mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3.8mL)中。随后，将上述溶液降温至-10℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(292mg,2.3mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(404mg,1.06mmol)和吡咯烷(65mg,0.91mmol)。反应体系继续搅拌30分钟。
TLC监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物3-2(80mg，收率33％)。
MS(ESI)M/Z:317.0[M+H] +。
步骤B：在室温下，氮气保护，将化合物3-2(80mg,0.25mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.3mL)中。随后，向混合液中依次加入叔丁基((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸酯(64mg,0.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(97mg,0.75mmol)。反应体系在80℃搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向上述反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到粗品化合物3-3(127mg)。
MS(ESI)M/Z:513.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物3-3(127mg,0.25mmol)溶于干燥的二氯甲烷溶液(1.3mL)中。随后，在0℃条件下，向反应体系中缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.63mL)。反应体系升至室温，继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物3-4(200mg，收率100％)。
MS(ESI)M/Z:413.0[M+H] +。
步骤D：在室温下，氮气保护，将化合物3-4(60mg,0.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.75mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入异喹啉-4-羧酸(26mg,0.15mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(86mg,0.23mmol)和N,N-二异丙基乙胺(97mg,0.75mmol)。反应体系在0℃搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向上述反应液中加入水(35mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物3(42.4mg，收率50％)。
MS(ESI)M/Z:566.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.38(s,1H),8.75(d,J＝8.4Hz,1H),8.44(s,1H),8.26(d,J＝2.4Hz,1H),8.18(d,J＝7.6Hz,1H),8.14(d,J＝10.0Hz,1H),8.02(d,J＝8.4Hz,1H),7.79(t,J＝7.0Hz,1H),7.73(t,J＝7.0Hz,1H),7.69(d,J＝2.4Hz,1H),4.36(brs,1H),3.83(brs,1H),3.48(t,J＝6.8Hz,2H),3.31-3.27(m,2H),1.97-1.73(m,6H),1.71-1.29(m,6H).
实施例4
(R)-(5-溴-2-((1-烟碱酰哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(200mg,0.76mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中。随后，将上述溶液降温至-10℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(292mg,2.3mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(381mg,1.06mmol)和哌啶(77mg,0.91mmol)。反应体系搅拌3分钟。
TLC监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物2-2(100mg,收率40％)。
MS(ESI)M/Z:331.2[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(120mg,0.60mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(145mg,0.72mmol)和N,N-二异丙基乙胺(193mg,1.5mmol)。反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物4-3(160mg,收率80.5％)。
MS(ESI)M/Z:411.0[M-99] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-2(160mg,0.31mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(5mL)。反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物4-4(130mg,收率101.1％)。
MS(ESI)M/Z:411.0[M+H] +。
步骤D：在室温下，氮气保护，将化合物1-3(130mg,0.31mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入烟酸(46mg,0.37mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(299mg,0.78mmol)和N,N-二异丙基乙胺(201mg,1.56mmol)。反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物4(37.5mg,收率23.1％)。
MS(ESI)M/Z:516.3[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.71-8.42(m,2H),8.25(brs,1H),7.97-7.31(m,4H),3.91-3.32(m,7H),3.24-3.12(m,2H),2.01-1.83(m,1H),1.80-1.34(m,9H).
实施例5
(R)-(5-溴-2-((1-(5-溴代鸟嘌呤基)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(2g,7.6mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(38mL)中。随后，将上述溶液降温至-10℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(4.05g,10.6mmol)、N,N-二异丙基乙胺(2.95g,23mmol)和哌啶(777mg,9.1mmol)。反应体系搅拌3分钟。
TLC监测显示原料消失后，向反应液中加入水(120mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(35mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(120mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(得到产物2-2(1.03g,收率41.2％)。
MS(ESI)M/Z:331.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.40(dd,J＝6.4,2.0Hz,1H),8.10(dd,J＝4.6,2.2Hz,1H),3.61(brs,2H),3.33(brs,2H),1.76-1.35(m,6H).
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-2(1.03g,3.1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)。随后，依次加入(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(744mg,3.7mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.2g,9.3mmol)。反应体系在80℃搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(25mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到粗品化合物4-3(1.2g,收率76％)。
MS(ESI)M/Z:411.0[M-99] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.25(d,J＝2.4Hz,1H),7.85(d,J＝9.6Hz,1H),7.60(d,J＝2.4Hz,1H),3.72-3.76(m,5H),3.29-3.00(m,4H),1.88-1.77(m,1H),1.71-1.16(m,18H),
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-3(1.2g,2.34mmol)溶于干燥的二氯甲烷溶液(11.8mL)。随后，向反应体系中缓慢滴加1,4-二氧六环的盐酸溶液(5.9mL)。反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到粗品化合物4-4(1.2g)。
MS(ESI)M/Z:411.0[M+H] +。
步骤D：在室温下，氮气保护，将化合物5-溴烟酸(30mg,0.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.75mL)。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(86mg, 0.23mmol)、化合物1-4(60mg,0.15mmol)和N,N-二异丙基乙胺(97mg,0.75mmol)。反应体系在0℃搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(35mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物5(19mg,收率21％)。
MS(ESI)M/Z:594.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.86-8.71(m,1H),8.65-8.54(m,1H),8.42-8.25(m,1H),8.15-7.35(m,3H),4.02-3.39(m,7H),3.25-2.95(m,2H),2.01-1.29(m,10H).
实施例6
(R)-(5-溴-2-((1-(异喹啉-4-羰基)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(4，4-二氟哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(2g,7.5mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中。随后，依次加入N,N-二异丙基乙胺(2.9g,22.5mmol)和(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.5g,7.5mmol)。反应体系搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，向反应液中加入水(120mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(35mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(120mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到粗品6-2(3.03g)。
MS(ESI)M/Z:466.0[M+Na] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物6-2(120mg,0.27mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)。随后，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(154mg,0.41mmol)、N,N-二异丙基乙胺(105mg,0.81mmol)和4,4-二氟哌啶(33mg,0.27mmol)。该反应体系升至80℃，搅拌5小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(25mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到产物6-3(58mg,收率39.2％)。
MS(ESI)M/Z:447.0[M-99] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物6-3(58mg,0.1mmol)溶于干燥的二氯甲烷溶液(0.4mL)。随后，向反应体系中缓慢滴加三氟乙酸(0.1mL)。反应体系在室温下继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到粗品化合物6-4(50mg)。
MS(ESI)M/Z:447.0[M+H] +。
步骤D：在室温下，氮气保护，将化合物异喹啉-4-羧酸(17mg,0.1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)。随后，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(57mg,0.15mmol)、N,N-二异丙基乙胺(39mg,0.3mmol)和化合物6-4(50mg,0.1mmol)。反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(35mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物6(3.07mg,收率4.6％)。
MS(ESI)M/Z:602.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.39(s,0.6H),9.29(s,0.4H),8.47-8.10(m,3H),7.97-7.47(m,5H),4.38-3.37(m,7H),3.24-2.88(m,2H),2.25-1.22(m,8H).
实施例7
(5-溴-2-((R)-1-(异喹啉-4-羰基)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(6，6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物6-2(120mg,0.27mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。随后，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(154mg,0.41mmol)、N,N-二异丙基乙胺(105mg,0.81mmol)和4,4-二氟哌啶(33mg,0.27mmol)。反应体系在80℃搅拌5小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(25mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物7-2(77mg,收率53.0％)。
MS(ESI)M/Z:437.0[M-99] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物7-2(77mg,0.14mmol)溶于干燥的二氯甲烷溶液(0.6mL)。随后，向反应体系中缓慢滴加三氟乙酸(0.15mL)。反应体系在室温下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到粗品化合物7-3(65mg)。
MS(ESI)M/Z:437.0[M+H] +。
步骤C：在室温下，氮气保护，将化合物异喹啉-4-羧酸(24.3mg,0.14mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(80mg,0.21mmol)、N,N- 二异丙基乙胺(54mg,0.42mmol)和化合物7-3(65mg,0.14mmol)。反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(35mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物7(10.8mg,收率12.3％)。
MS(ESI)M/Z:592.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.39-9.25(m,1H),8.55-8.10(m,3H),7.91-7.22(m,5H),4.17-3.88(m,1H),3.86-3.40(m,5H),3.16-2.70(m,3H),1.92-1.22(m,5.7H),1.11-0.30(m,6.3H).
实施例8
(R)-(5-溴-2-((1-(7-氯异喹啉-4-羰基)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物8-1(300mg,1.84mmol)溶于硝基苯(6mL)中。随后，将上述溶液升温至180℃，缓慢滴加液溴(315mg,2.02mmol)。反应体系在180℃下继续搅拌16小时。
待反应完毕，反应液降至室温，向反应液中加入水(20mL)，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物8-2(155mg,收率35％)。
MS(ESI)M/Z:241.9[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.32(s,1H),8.80(s,1H),8.40(d,J＝2.4Hz,1H),8.12(d,J＝9.2Hz,1H),7.99(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H).
步骤B：在室温条件下，将化合物8-2(155mg,0.64mmol)溶于甲醇(6mL)中。随后，向上述反应液中依次加入三乙胺(1.3g,12.86mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(95mg,0.13mmol)。在一氧化碳气氛下，该反应体系在90℃下搅拌24小时。
待反应完毕，反应液降至室温，将反应液通过硅藻土过滤，收集滤液。然后向滤液中加入水(15mL)，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物8-3(45mg,收率32％)。
MS(ESI)M/Z:222.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将化合物8-3(45mg,0.20mmol)溶于四氢呋喃/甲醇/水(1mL/0.5mL0.1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，加入氢氧化锂一水化合物(42mg,1.00mmol)。然后反应体系升至室温，继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL),混合液用1摩尔/升的稀盐酸调节pH至3。 混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到化合物8-4(35mg,收率83％)。所得化合物直接用于下一步，不需进一步纯化。
MS(ESI)M/Z:208.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物8-4(30mg,0.15mmol)和(R)-(5-溴-2-((1-(7-氯异喹啉-4-羰基)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(哌啶-1-基)甲酮(66mg,0.16mmol)(4-4)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(55mg,0.15mmol)和N,N-二异丙基乙胺(56mg,0.45mmol)。反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(6mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物8(46.2mg,收率53％)。
MS(ESI)M/Z:600.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.39(s,0.6H),9.29(s,0.4H),8.63-8.29(m,3H),8.28-7.20(m,4H),4.32-3.32(m,6H),3.21-2.92(m,3H),2.03-1.18(m,10H).
实施例9
N-((1S，2R)-2-((4-溴-2-(哌啶-1-羰基)-6-(三氟甲基)苯基)氨基)环己基)异喹啉-4-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在0℃下，将化合物9-1(400mg,1.92mmol)溶于三氟乙酸(4mL)/浓硫酸(1mL)中。随后，向上述溶液中加入N-溴代琥珀酰亚胺(512.6mg,2.88mmol)。然后该反应体系升至室温，并继续搅拌18小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(80mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物9-2(390mg,收率71％)。
HNMR: 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ14.03(s,1H),8.23-8.26(m,2H).
步骤B：在0℃条件下，氮气保护，将化合物9-2(390mg,1.36mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中。随后，向上述反应液中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(770mg,2.05mmol)、N,N-二异丙基乙胺(526mg,4.08mmol)和哌啶(115mg,1.36mmol)。反应体系继续搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(50mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃 取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物9-3(385mg,收率80.2％)。
MS(ESI)M/Z:354.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物9-3(385mg,1.1mmol)和叔丁基((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸酯(233mg,1.1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中。随后，向上述反应液中滴加N,N-二异丙基乙胺(425mg,3.3mmol)。该反应体系升至135度，继续搅拌16小时。
LCMS监测显示原料转化为产物后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物9-4(181mg,收率30.1％)。
MS(ESI)M/Z:548.1[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将化合物9-4(181mg,0.33mmol)溶于二氯甲烷中(3mL)中。随后，降至0℃，向反应液中缓慢滴加4M盐酸-1,4-二氧六环溶液(1.5mL,6.6mmol)。然后该反应体系升至室温，继续搅拌1个小时。
LCMS显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物9-5(161mg，收率109.1％)
MS(ESI)M/Z:448.0[M+H] +。
步骤E：在室温下，氮气保护，将化合物9-5(161mg,0.36mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入异喹啉-4-羧酸(62mg,0.36mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(205.2mg,0.54mmol)和N,N-二异丙基乙胺(139mg,1.08mmol)。然后该反应体系继续搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物9(30.5mg,收率14.1％)。
MS(ESI)M/Z:603.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.36(s,1H),8.57(s,1H),8.39(brs,1H),8.15(t,J＝7.8Hz,2H),7.79(t,J＝7.6Hz,1H),7.71(t,J＝7.4Hz,1H),7.61(d,J＝2.4Hz,1H),7.44(d,J＝2.0Hz,1H),4.62(d,J＝9.6Hz,1H),4.49(s,1H),3.75-3.64(m,2H),3.38-3.26(m,2H),1.93-1.87(m,1H),1.79-1.35(m,12H),1.30-1.17(m,1H). 19F NMR(376MHz,DMSO-d 6)δ-59.56(s),-59.93(s).
实施例10
(R)-(3-氯-2-(1-(异喹啉-4-羰基)哌啶-3-基)氨基)-5-硝基苯基)(哌嗪-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温下，氮气保护，将化合物1-1(200mg,0.76mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(403mg,1.06mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(169mg,0.91mmol)和N,N-二异丙基乙胺(297mg,2.28mmol)。反应体系继续搅拌10分钟。
TLC监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物10-2(200mg,收率61.2％)。
MS(ESI)M/Z:376.0[M-55] +。
步骤B:在室温条件下，氮气保护，将化合物异喹啉-4-羧酸(103mg,0.6mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(266mg,0.7mmol)、化合物10-3(100mg,0.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(196mg,1.50mmol)。反应体系继续搅拌10分钟。
TLC监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物10-4(175mg,收率98.8％)。
MS(ESI)M/Z:356.2[M+H] +。
步骤C:在0℃下，将化合物10-4(175mg,0.49mmol)溶于二氯甲烷(2.5mL)中。随后，向反应体系中缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(2.5mL)。然后反应体系升至室温，搅拌1.5小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到粗品化合物10-5(144mg)。
MS(ESI)M/Z:256.2[M+H] +。
步骤D：在室温下，氮气保护，将化合物10-5(125mg,0.49mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2.5mL)中。随后，依次加入化合物10-2(210mg,0.32mmol)和N,N-二异丙基乙胺(380mg,2.94mmol)。该反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(25mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到化合物10-6(210mg,收率64.4％)。
MS(ESI)M/Z:667.2[M+H] +。
步骤E：在0℃下，将化合物10-6(60mg,0.09mmol)溶于二氯甲烷(0.46mL)中。随后，向反应体系 中缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.23mL)。反应体系升至室温，继续搅拌1.5小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。所得残余物溶于水(1.5mL)，混合液用10％wt氨水调pH＝8。所得溶液经反相色谱柱纯化得到标题化合物10(22.1mg,收率43.3％)。
MS(ESI)M/Z:567.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.39(s,0.6H),9.28(s,0.4H),8.57-8.05(m,3H),7.98-7.19(m,6H),4.26-3.42(m,6H),3.20-2.99(m,3H),2.94-2.58(m,4H),2.01-1.35(m,4H).
实施例11
(R)-(5-溴-2-((1-(4-噌啉-羰基)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温下，氮气保护，将化合物4-噌啉羧酸(26mg,0.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(86mg,0.23mmol)、N,N-二异丙基乙胺(97mg,0.75mmol)和(R)-(5-溴-3-硝基-2-(哌啶-3-基氨基)苯基)(哌啶-1-基)甲酮(60mg,0.15mmol)(4-4)。该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物11(40mg,收率47％)。
MS(ESI)M/Z:567.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.31(s,0.6H),9.14(s,0.4H),8.58(d,J＝8.4Hz,0.6H),8.50(brs,0.4H),8.30(d,J＝2.4Hz,0.6H),8.08-7.75(m,4.4H),7.67(d,J＝2.4Hz,0.6H),7.44-7.18(m,0.4H),4.07-3.40(m,6H),3.25-3.00(m,3H),2.00-1.28(m,10H).
实施例12
(R)-(5-溴-2-((1-(异喹啉-4-羰基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(400mg,1.5mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(7.6mL)中。随后，将上述溶液降温至-10℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(587mg,4.5mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(806mg,2.1mmol)和哌啶(155mg,1.8mmol)。该反应体系继续搅拌3分钟。
TLC监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×5次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物2-2(185mg,收率37％)。
MS(ESI)M/Z:331.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物2-2(85mg,0.26mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.3mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(R)-3-氨基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(57mg,0.31mmol)和N,N-二异丙基乙胺(100mg,0.77mmol)。反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×3次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到化合物12-3(150mg)，所得粗品直接用于下一步反应。
MS(ESI)M/Z:397.0[M-99] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物12-3(75mg,0.15mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.38mL)。反应体系在室温下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物12-4(60mg)。
MS(ESI)M/Z:397.0[M+H] +。
步骤D：在室温下，氮气保护，将化合物12-4(60mg,0.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.76mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入4-甲酸异喹啉(26mg,0.15mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(86mg,0.23mmol)和N,N-二异丙基乙胺(96mg,0.76mmol)。反应体系在0摄氏下搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL×3次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相柱纯化得到标题化合物12(10.6mg,收率12.8％)。
MS(ESI)M/Z:552.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.39(s,0.4H),9.37(s,0.6H),8.50(s,0.4H),8.47-8.40(m,0.6H),8.26-8.12(m,2H),7.88-7.66(m,4.4H),7.44(d,J＝2.4Hz,0.6H),4.21(s,0.4H),4.03(s,0.6H),3.84-3.60(m,3H),3.53-3.36(m,2H),3.25-2.87(m,3H),2.32-2.22(m,0.6H),2.18-2.06(m,1H),1.98-1.89(m,0.4H),1.73-1.02(m,6H).
实施例13
(R)-(5-溴-2-((1-(异喹啉-4-羰基)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物4-4(50mg,0.12mmol)和4-异喹啉甲酸(23mg,0.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(46mg,0.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(47mg,0.36mmol)。反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(6mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物13(11.7mg,收率17％)。
MS(ESI)M/Z:566.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6))δ9.40(s,0.6H),9.30(s,0.4H),8.59-8.06(m,3H),8.01-7.27(m,5H),4.37-3.42(m,6H),3.26-2.96(m,3H),2.04-1.16(m,10H).
实施例14
5-溴-N-((1S，2R))-2-((4-溴-2-硝基-6-(哌啶-1-羰基)苯基)氨基)环己基)烟酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物2-2(60mg,0.18mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(47mg,0.22mmol)和N,N-二异丙基乙胺(70mg,0.54mmol)。反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物2-3(90mg,收率95％)。
MS(ESI)M/Z:547.1[M+Na] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物2-3(90mg,0.17mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.4mL)中。反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物2-4(80mg)。
MS(ESI)M/Z:425.2[M+H] +。
步骤D：在室温下，氮气保护，将化合物2-4(80mg,0.19mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入烟酸(32mg,0.16mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(85mg,0.22mmol)和N,N-二异丙基乙胺(103mg,0.80mmol)。反应体系在0℃下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物14(37.5mg,收率23.1％)。
MS(ESI)M/Z:610.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.90-8.75(m,2H),8.64(d,J＝6.8Hz,0.5H),8.38-8.14(m,2.5H),7.97-7.76(m,1H),7.56(d,J＝2.0Hz,1H).4.26(s,1H),3.86-3.45(m,3H),3.16(s,2H),1.83-1.24(m,14H).
实施例15
((3R)-3-((2-(3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羰基)-4-溴-6-硝基苯基)氨基)哌啶-1-基)(异喹啉-4-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在冰盐浴条件下，氮气保护，将化合物1-1(100mg,0.38mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中。随后，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(216mg,0.57mmol)、三乙胺(115mg,1.14mmol)和3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸盐(45.3mg,0.38mmol)。该反应体系继续搅拌10分钟。
TLC监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物15-2(70mg,收率56.1％)。
MS(ESI)M/Z:329.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物15-2(70mg,0.21mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。随后，依次加入N,N-二异丙基乙胺(82.5mg,0.63mmol)和(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(51mg,0.25mmol)。该反应体系搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到粗品15-3(70mg)。
MS(ESI)M/Z:409.4[M-99] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物15-3(70mg,0.15mmol)溶于干燥的二氯甲烷溶液(0.6mL)。随后，向反应体系中缓慢滴加三氟乙酸(0.15mL)。该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到粗品化合物15-4(90mg)。
MS(ESI)M/Z:409.2[M+H] +。
步骤D：在室温下，氮气保护，将化合物异喹啉-4-羧酸(25mg,0.14mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(80mg,0.21mmol)、N,N-二异丙基乙胺(54mg,0.42mmol)和化合物15-4(90mg,0.1mmol)。反应体系搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(35mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物15(20.5mg,收率25.1％)。
MS(ESI)M/Z:564.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.39-9.27(m,1H),8.52-8.02(m,3H),7.95-7.27(m,5H),4.17-3.36(m,6H),3.28-2.79(m,3H),1.99-1.17(m,6H),0.83-0.50(m,1H),0.29-0.18(m,1H).
实施例16
N-((1S，2R)-2-((4-溴-2-(4，4-二氟哌啶-1-羰基)-6-硝基苯基)氨基)环己基)-2-氧代-1，2-二氢喹啉-4-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物1-1(200mg,0.76mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(294mg,2.28mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(404mg,1.06mmol)和4,4-二氟哌啶(144mg,0.91mmol)。然后反应体系在0℃下搅拌5分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物16-2(217mg,收率78％)。
MS(ESI)M/Z:367.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物16-2(217mg,0.59mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(152mg,0.71mmol)和N,N-二异丙基乙胺(228mg,1.77mmol)。然后反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物16-3(300mg,收率90％)。
MS(ESI)M/Z:461.0[M-99] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物16-3(300mg,0.53mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(1.3mL)中。然后反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物16-4(250mg,收率100％)。
MS(ESI)M/Z:461.27[M+H] +。
步骤D：在室温下，氮气保护，将化合物16-4(60mg,0.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-羧酸(20mg,0.11mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(58mg,0.15mmol)和N,N-二异丙基乙胺(71mg,0.55mmol)。然后反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物16(21.8mg,收率36％)。
MS(ESI)M/Z:632.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.90(s,1H),8.83(s,0.5H),8.66(s,0.5H),8.26(s,1H),7.99(d,J＝10.0Hz,1H),7.88-7.75(m,1H),7.59-7.40(m,2H),7.33(d,J＝8.4Hz,1H),7.12(t,J＝8.0Hz,1H),6.48(s,0.5H),6.39(s,0.5H),4.31(s,1H),4.06(s,1H),3.74(s,1H),3.63-3.45(m,3H),2.30-1.84(m,4H),1.83-1.24(m,8H).
实施例17
(2-((R)-1-(1H-吡咯[2，3-c]吡啶-4-羰基)哌啶-3-基)氨基)-5-溴-3-硝基苯基)((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(1g,3.80mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(19mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，向上述反应液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(1.4g,11.4mmol)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(2g,5.32mmol)和(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉(526mg,4.56mmol)。该反应体系在0℃下继续搅拌5分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(100mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃 取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物17-2(600mg,收率44％)。
MS(ESI)M/Z:361.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物17-2(600mg,1.67mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(8.4mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(400mg,2.00mmol)和N,N-二异丙基乙胺(649mg,5.01mmol)。然后该反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物17-3(810mg,收率89.8％)。
MS(ESI)M/Z:441.0[M-99] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物17-3(810mg,1.50mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(2.8mL)。然后该反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物17-4(720mg,收率100％)。
步骤D：
在室温条件下，氮气保护，将化合物17-1(20mg,0.05mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(17mg,0.14mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(24mg,0.06mmol)和1H-吡咯并[2,3-c]吡啶-4-羧酸(9mg,0.05mmol)。然后反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(5mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相柱纯化得到标题化合物17(8.4mg,收率31.7％)。
MS(ESI)M/Z:585.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.84(s,1H),8.77(s,1H),8.38-7.79(m,3H),7.75-7.43(m,2H),6.39(s,1H),4.38(s,1H),4.11-3.36(m,7H),3.27-3.08(m,2H),3.01-2.77(m,1H),1.96-1.79(m,1H),1.77-1.37(m,3H),1.20-0.91(m,6H).
实施例18
4-((R)-3-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羰基)哌啶-2-酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温下，氮气保护，将化合物17-1(30mg,0.068mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-氧亚基哌啶-4-羧酸(10mg,0.068mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(39mg,0.78mmol)和N,N-二异丙基乙胺(44mg,0.34mmol)。反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题产物18(12mg,收率38.4％)。
MS(ESI)M/Z:566.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.26-8.25(m,1H),7.87-7.64(m,2H),7.47-7.44(m,1H),4.37-4.34(m,1H),3.72-3.40(m,6H),3.15-2.77(m,5H),2.33-1.38(m,10H),1.16-1.14(m,3H),1.02(s,3H).
实施例19
(R)-(5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(4-吗啉哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物1-1(150mg,0.57mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(205mg,1.59mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(303mg,0.80mmol)和4-(4-哌啶基)吗啉(97mg,0.57mmol)。然后反应体系在0℃下搅拌40分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物19-2(200mg,收率85％)。
MS(ESI)M/Z:416.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物19-2(200mg,0.48mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(116mg,0.58mmol)和N,N-二异丙基乙胺(186mg,1.44mmol)。然后反应体系在100℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物19-3(270mg,收率94％)。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物19-3(270mg,0.45mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(1.2mL)中。然后反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物19-4(230mg,收率100％)。
MS(ESI)M/Z:496.2[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将化合物19-4(60mg,0.12mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入5-甲氨基烟酸(15mg,0.10mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲 基脲六氟磷酸酯(53mg,0.14mmol)和N,N-二异丙基乙胺(65mg,0.50mmol)。然后反应体系在0摄氏下继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物19(12.6mg,收率20％)。
MS(ESI)M/Z:630.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.25(s,1H),8.04-7.42(m,4H),6.75(s,1H),6.16(s,1H),4.56-4.28(m,1H),4.17-3.40(m,9H),3.26-2.97(m,2H),2.93-2.76(m,1H),2.69(s,3H),2.48-2.20(m,5H),1.97-1.20(m,8H).
实施例20
(5-溴-2-((R)-5-(5-(甲氨基)烟碱酰)-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-7-基)氨基)-3-硝基苯基)((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉)甲酮
反应路线：
操作步骤:
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物20-1(60mg,0.39mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(1.0mL)中。将上述溶液降温至-10℃，依次加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(187.4mg,0.49mmol)、N,N-二异丙基乙胺(212mg,1.64mmol)和叔丁基(R)-(5-氮杂螺环[2.4]庚烷-7-基)氨基甲酸酯(65.1mg,0.30mmol)。然后反应体系在-10℃条件下搅拌10分钟。
TLC监测显示原料消失后，向反应液中加入水(35mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物用硅胶柱层析纯化得到化合物20-2(100mg,收率94％)。
MS(ESI)M/Z:347.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.98(d,J＝2.8Hz,0.5H),7.96(d,J＝2.8Hz,0.5H),7.86(d,J＝1.6Hz,0.5H),7.84(d,J＝1.6Hz,0.5H),7.37-7.17(m,1H),7.00-6.85(m,1H),6.21-6.02(m,1H),3.85-3.56(m,3H),3.51-3.41(m,1H),3.28-3.14(m,1H),2.71(dd,J＝4.8,2.7Hz,3H),1.40(s,5H),1.34(s,4H),0.85-0.34(m,4H).
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物20-2(100mg,0.28mmol)溶于干燥的二氯甲烷溶液(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(1mL)。然后反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物20-3(50mg,收率61％)。
MS(ESI)M/Z:247.2[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物20-3(50mg,0.17mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.73mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2R,6S)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(53mg,014mmol)和N,N-二异丙基乙胺(94.9mg,0.73mmol)。然后反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并的有机相，有机相用饱和食盐水(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。 所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物20(21mg,收率20％)。
MS(ESI)M/Z:587.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.33-8.17(m,1H),7.98(s,1H),7.90-7.45(m,3H),6.93-6.64(m,1H),6.12(s,1H),4.44-4.16(m,1H),3.93-3.38(m,7H),3.23-2.61(m,6H),1.23-0.50(m,10H).
实施例21
(5-溴-2-((R)-5-(5-(甲氨基)烟碱酰)-5-氮杂螺环[2.4]庚烷-7-基)氨基)-3-硝基苯基)((3R，5S)-3，5-二甲基哌嗪-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤:
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物20-3(50mg，0.18mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.9mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(114mg,0.89mmol)和(2R,6S)-4-(5-溴-2-氟-3-硝基苯甲酰基)-2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(98mg,0.21mmol)。反应体系在80℃下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭。反应混合液用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得混合物用硅胶柱层析纯化得到化合物21-2(100mg,收率82.3％)。
MS(ESI)M/Z:686.2[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物21-2(100mg，0.15mmol)溶于二氯甲烷溶液(1.4mL)中。随后，向上述溶液中加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.74mL)。然后反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。所得粗品溶于水(2mL)中，然后用25％wt氨水调节pH＝8。所得混合液经反相色谱柱纯化得到标题化合物21(34.6mg,收率40％)。
MS(ESI)M/Z:586.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.35-8.15(m,1H),8.05-7.92(m,1H),7.88-7.49(m,3H),6.89-6.70(m,1H),6.20-6.04(m,1H),4.45-4.13(m,1H),3.86-3.36(m,4H),3.24-2.61(m,7H),2.39-1.84(m,2H),1.05-0.61(m,10H).
实施例22
(R)-(5-溴-2-(1-(5-(甲氨基)烟酰基)哌啶-3-基)-3-硝基苯基)-(4-(2，2，2-三氟乙基)哌嗪-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤:
步骤A：在室温条件下，将化合物22-1(30mg,0.061mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(33mg,0.085mmol)、N,N-二异丙基乙胺(26mg,0.183mmol)和5-(甲胺基)烟酸(11mg,0.073mmol)。该反应体系在0℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(5mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(6mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(8mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物22(4.8mg,收率12.6％)。
MS(ESI)M/Z:628.0[M+1] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.26(s,1H),8.04-7.46(m,4H),6.75(s,1H),6.16(s,1H),4.15-3.41(m,6H),3.28-3.12(m,5H),2.90-2.56(m,7H),1.99-1.39(m,4H).
实施例23
(R)-1-(4-(5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯甲酰)哌嗪-1-基)-2，2，2-三氟乙烷-1-酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物23-1(500mg,2.69mmol)溶于二氯甲烷(13mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入三氟醋酸酐(846mg,4.03mmol)和三乙胺(815mg,8.07mmol)。然后反应体系在0℃下搅拌50分钟。
TLC监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到化合物23-2(500mg,收率66％)。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物23-2(600mg,2.12mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(5.0mL)中。然后反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物22-3(400mg,收率100％)。
MS(ESI)M/Z:183.2[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将化合物5-溴-2-氟-3-硝基苯甲酸(200mg,0.75mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(484mg,3.75mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(399mg,1.05mmol)和化合物23-3(166mg,0.90mmol)。然后反应体系在0℃下搅拌40分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物23-4(160mg,收率50％)。
MS(ESI)M/Z:428.06[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物22-4(160mg,0.37mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(90mg,0.45mmol)和N,N-二异丙基乙胺(143mg,1.11mmol)。然后反应体系在100℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物23-5(200mg,收率94％)。
MS(ESI)M/Z:508.23[M-99] +。
步骤E：在室温条件下，氮气保护，将化合物23-5(200mg,0.33mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.80mL)中。然后反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物23-6(180mg,收率100％)。
MS(ESI)M/Z:508.0[M+H] +。
步骤F：在室温条件下，氮气保护，将化合物23-6(80mg,0.16mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入5-甲氨基烟酸(20mg,0.13mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(69mg,0.18mmol)和N,N-二异丙基乙胺(84mg,0.65mmol)。然后反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物23(25.7mg,收率25％)。
MS(ESI)M/Z:642.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.29(s,1H),8.04-7.49(m,4H),6.76(s,1H),6.15(s,1H),4.04-3.36(m,12H),3.25-3.07(m,1H),2.69(d,J＝1.6Hz,3H),1.97-1.67(m,2H),1.66-1.24(m,2H).
实施例24
(R)-4-(3-((4-溴-2-(4，4-二氟哌啶-1-羰基)-6-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羰基)吡啶-2(1H)-酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-羧酸(13mg,0.09mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.45mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(48mg,0.11mmol)、N,N-二异丙基乙胺(35mg,0.27mmol)和化合物6-4(50mg,0.11mmol)。然后反应体系在0℃下搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物24(11.7mg,收率22.9％)。
MS(ESI)M/Z:568.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.75(s,1H),8.44-8.18(m,1H),7.89-7.61(m,2H),7.48(d,J＝6.4Hz,0.7H),7.32(s,0.3H),6.22(s,0.7H),6.17-5.99(m,1H),5.92(d,J＝5.2Hz,0.3H),4.00-3.47(m,7H),3.26-2.96(m,2H),2.25-1.33(m,8H).
实施例25
N-((1S，2R)-2-((4-溴-2-硝基-6-(3-氧哌嗪-1-羰基)苯基)氨基)环己基)-7-氯异喹啉-4-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(100mg,0.39mmol)和2-哌嗪酮(38mg,0.39mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(216mg,0.57mmol)和N,N-二异丙基乙胺(245mg,1.89mmol)。然后反应体系在0摄氏下继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所 得残留物经硅胶柱层析纯化得到化合物25-2(30mg,收率22.9％)。
MS(ESI)M/Z:346.1[M+H] +。
步骤B:在室温条件下，氮气保护，将化合物25-2(30mg,0.087mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，向上述反应液中依次加入叔丁基((1S,2R)-2-氨基环己基)氨基甲酸酯(19mg,0.087mmol)和N,N-二异丙基乙胺(56mg,0.433mmol)。然后该反应体系升至80℃，搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到化合物25-3(32mg,收率68.3％)。
MS(ESI)M/Z:440.3[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将化合物25-3(160mg,0.27mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，滴加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(3mL)中。然后反应体系在室温下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物25-4(130mg,粗品)。
MS(ESI)M/Z:440.3[M+H] +。
步骤D:在室温条件下，氮气保护，将化合物25-4(23mg,0.048mmol)和7-氯异喹啉-4-羧酸(10mg,0.048mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(27.47mg,0.072mmol)和N,N-二异丙基乙胺(32mg,0.241mmol)。然后反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(6mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物25(11.8mg,收率38.9％)。
MS(ESI)M/Z:629.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.38(s,1H),8.98-8.60(m,1H),8.54(s,1H),8.34(s,1H),8.27(s,1H),8.21(s,1H),8.15-7.95(m,2H),7.81(dd,J＝9.0,1.8Hz,1H),7.70(s,0.5H),7.65(s,0.5H),4.45-4.33(m,1H),4.28-4.04(m,1H),4.03-3.64(m,3H),3.61-3.46(m,1H),3.27-3.09(m,2H),1.84-1.48(m,6H),1.47-1.27(m,2H).
实施例26
(R)-4-(3-((4-溴-2-(吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羰基)-6-甲基吡啶-2(1H)-酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物26-1(15mg,0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.50mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(53mg,0.14mmol)、N,N-二异丙基乙胺(39mg,0.30mmol)和化合物(R)-(5-溴-3-硝基-2-(哌啶-3-基氨基)苯基)(吗啉基)甲酮(50mg,0.12mmol)。然后反应体系在0℃下搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓 缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物26(6.7mg,收率12.2％)。
MS(ESI)M/Z:548.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.77(s,1H),8.27(s,1H),7.85-7.57(m,2H),6.03((s,0.7H),5.95-5.79(m,1H),5.70-5.53(m,0.3H),4.04-3.49(m,11H),3.25-3.08(m,2H),2.19(s,2H),2.08(s,1H),1.97-1.32(m,4H).
实施例27
4-((R)-3-((4-溴-2-((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羰基)-6-甲基吡啶-2(1H)-酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物26-1(20mg,0.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.65mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(49mg,0.18mmol)、N,N-二异丙基乙胺(50mg,0.39mmol)和(5-溴-3-硝基-2-((R)-哌啶-3-基)氨基)苯基((2R,6S)-2,6-二甲基吗啉基)甲酮(48mg,0.11mmol)。然后反应体系在0℃下继续搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物27(36.2mg,收率57.2％)。
MS(ESI)M/Z:576.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.75(s,1H),8.27(s,1H),7.88-7.51(m,2H),6.10-5.56(m,2H),4.45-4.23(m,1H),3.93-3.36(m,7H),3.27-3.00(m,2H),2.94-2.72(m,1H),2.18(s,2H),2.09(s,1H),1.97-1.30(m,4H),1.22-0.91(m,6H).
实施例28
(R)-(2-((1-(1氢-吡咯[2，3-c]吡啶-4-羰基)哌啶-3-基)氨基)-5-溴-3-硝基苯基)(4，4-二氟哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温下，氮气保护，将化合物6-4(34mg,0.077mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-氧亚基哌啶-4-羧酸(12mg,0.077mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(44mg,0.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(50mg,0.39mmol)。反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题产物28(12.3mg,收率27.0％)。
MS(ESI)M/Z:591.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.83(s,1H),8.76(s,1H),8.25-7.69(m,5H),6.39(s,1H),4.00-3.24(m,9H),2.06-1.89(m,5H)1.70-1.54(m,3H).
实施例29
(R)-(5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(300mg,1.14mmol)和1-甲基哌嗪(125mg,1.25mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(648mg,1.71mmol)和N,N-二异丙基乙胺(587mg,4.55mmol)。然后反应体系在0摄氏下继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经硅胶柱层析纯化得到化合物29-2(195mg,收率49.57％)。
MS(ESI)M/Z:346.1[M+H] +。
步骤B:在室温条件下，氮气保护，将化合物29-2(200mg,0.58mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(115.7mg,0.58mmol)和N,N-二异丙基乙胺(224mg,1.73mmol)。然后该反应体系升至80℃，搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到化合物29-3(355mg,粗品)。
MS(ESI)M/Z:526.4[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将化合物29-3(355mg,0.67mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(5mL)。然后反应体系在室温下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物29-4(320mg,粗品)。
MS(ESI)M/Z:426.3[M+H] +。
步骤D:在室温条件下，氮气保护，将化合物29-4(60mg,0.13mmol)和5-(甲氨基)烟酸(19.7mg,0.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(74mg,0.194mmol)和N,N-二异丙基乙胺(83.8mg,0.65mmol)。然后反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(6mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物29(27.5mg,收率37.9％)。
MS(ESI)M/Z:560.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.26(s,1H),8.07-7.43(m,4H),6.75(s,1H),6.16(s,1H),4.07-3.46(m,7H),3.29-3.11(m,2H),2.70(s,3H),2.44-2.00(m,6.5H),1.99-1.29(m,4.5H).
实施例30
(5-溴-2-((R)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物23-4(80mg,0.16mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-4-羧酸(20mg,0.13mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(69mg,0.18mmol)和N,N-二异丙基乙胺(84mg,0.65mmol)。然后反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物30(22.7mg,收率27％)。
MS(ESI)M/Z:643.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.77(s,1H),8.34-8.22(m,1H),7.87-7.59(m,2H),6.04(s,0.7H),5.91(s,0.3H),5.87(s,0.7H),5.63(s,0.3H),3.90-3.36(m,12H),3.26-3.11(m,1H),2.18(s,2H),2.08(s,1H),1.93-1.64(m,2H),1.62-1.32(m,2H).
实施例31
(R)-(5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物31-1(80mg,0.48mmol)溶于四氢呋喃(2mL)/水(0.5mL)中。随后，向上述反应液中加入氢氧化锂一水合物(40mg,0.96mmol)。该反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(2mL)稀释，混合液用1M稀盐酸调至pH＝5，然后减压浓缩。得到化合物31-2(80mg,收率100％)。
MS(ESI)M/Z:153.05[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物31-2(50mg,0.33mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入(R)–(5-溴-3-硝基-2-(哌啶-3-基氨基)苯基)(哌啶-1-基)甲酮(162mg,0.26mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(108mg,0.46mmol)和N,N-二异丙基乙胺(213mg,1.65mmol)。该反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物31(21.5mg,收率12％)。
MS(ESI)M/Z:545.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.24(s,1H),8.03-7.78(m,2H),7.73-7.42(m,2H),6.86-6.56(m,1H),6.26-5.89(m,1H),4.03-3.43(m,6H),3.25-3.04(m,3H),2.70(s,3H),1.89(s,1H),1.79-1.22(m,9H).
实施例32
(5-溴-2-((4，4-二氟-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(3g,11.4mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(57mL)中。然后，在冰盐浴条件下，向上述溶液中再加入N,N-二异丙基乙胺(4.42g,34.2mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(6.08g,16mmol)和哌啶(1.17g,13.7mmol)。然后该反应体系在冰盐浴条件下继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到化合物2-2(1.7g,收率45％)。
MS(ESI)M/Z:332.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物2-2(350mg,1.06mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5.3mL)中。随后，向上述溶液中加入4-氨基-3,3-二氟吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(282.5mg,1.27mmol)和N,N-二异丙基乙胺(410.2mg,3.18mmol)。然后该反应体系在100℃下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应体系中加水(35mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残留物用硅胶柱层析纯化得到化合物32-3(320mg,收率57％)。
MS(ESI)M/Z:555.0[M+23] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物32-3(320mg,0.60mmol)溶于干燥的二氯甲烷溶液(3mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(1.5mL)。然后该反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物32-4(260mg,收率100％)。
MS(ESI)M/Z:433.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物5-(甲氨基)烟酸(5.4mg,0.03mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(0.2mL)中。随后，将上述溶液降温至-10℃，依次加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(20mg,0.05mmol)、N,N-二异丙基乙胺(22.9mg,0.17mmol)和化合物32-4(20mg,0.04mmol)。然后反应体系在-10℃条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并的有机相，有机相用饱和食盐水(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物32(2.3mg,收率11.5％)。
MS(ESI)M/Z:567.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.25(s,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.80-7.50(m,1.6H),7.18(s,0.4H),6.93(s,1H),6.18(s,1H),4.46-3.51(m,6H),3.27-2.83(m,3H),2.72(d,J＝5.2Hz,3H),1.71-1.07(m,6H).
实施例33
(4R，6S)-4-((R)-3-((4-溴-2-((S)-3-甲基哌啶-1-羰基)-6-硝基苯基)氨基)哌啶-1-羰基)-6-甲基哌啶-2-酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物1-1(37mg,0.11mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.54mL)中。随后，加入(R)-1-叔丁氧羰基-3-氨基哌啶(26mg,0.13mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.05mL,0.32mmol)。然后该反应体系在80℃搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物33-2(50mg)。
步骤B：在室温条件下，将化合物33-2(50mg,0.10mmol)溶于二氯甲烷中(0.5mL)中。随后，降至0℃，向反应液中缓慢滴加4M盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.7mL,2.86mmol)。然后该反应体系升至室温，继续搅拌1个小时。
LCMS显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物33-3粗品(45mg)
MS(ESI)M/Z:425.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将(2S,4R)-2-甲基-6-氧哌啶-4-羧酸(19mg,0.12mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.44mL)。随后，向上述反应液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.06mL,0.35mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(37mg,0.10mmol)和化合物33-3(45mg,0.11mmol)。然后该反应体系在室温搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物33(16.6mg)。
MS(ESI)M/Z:564.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.23(s,1H),7.84-7.43(m,3H),4.45-4.21(m,1H),4.00-3.34(m,6H),3.22-2.73(m,3H),2.49-2.40(m,1H),2.16-1.99(m,2H),1.97-1.08(m,14H),1.01-0.67(m,3H).
实施例34
(5-溴-2-((R)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(1g,3.80mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(19mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，向上述反应液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(1.4g,11.4mmol)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(2g,5.32mmol)和(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉(526mg,4.56mmol)。该反应体系在0℃下继续搅拌5分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(100mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物17-2(600mg)。
MS(ESI)M/Z:361.0[M+H] +。
步骤B:在室温条件下，氮气保护，将化合物17-2(600mg,1.67mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(8.4mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(400mg,2.00mmol)和N,N-二异丙基乙胺(649mg,5.01mmol)。然后该反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物17-3(810mg)。
MS(ESI)M/Z:441.0[M-99] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物17-3(810mg,1.50mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(2.8mL)。然后该反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物17-4粗品(720mg)。
MS(ESI)M/Z:441.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物5-(甲氨基)烟酸(23mg,0.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入(5-溴-3-硝基-2-((R)-哌啶-3-基)氨基)苯基((2R,6S)-2,6-二甲基吗啉基)甲酮(80mg,0.18mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(108mg,0.46mmol)和N,N-二异丙基乙胺(79mg,0.21mmol)。该反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物34(21.5mg)。
MS(ESI)M/Z:575.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.26(s,1H),8.06-7.45(m,4H),6.74(s,1H),6.16(s,1H),4.52-4.16(m,1H),4.04-3.34(m,7H),3.30-2.98(m,2H),2.91-2.77(m,1H),2.70(s,3H),2.02-1.25(m,4H),1.15(brs,3H),1.03(brs,3H).
实施例35
(5-溴-2-((R)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((R)-2-甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物31-2(500mg,3.29mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(16mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，向上述反应液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(1.3g,9.87mmol)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.4g,3.62mmol)和叔丁基(R)-哌啶-3-基氨基甲酸酯(725mg,3.62mmol)。然后该反应体系在0℃下继续搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(40mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物35-1(788mg)。
MS(ESI)M/Z:335.2[M+H] +。
步骤B:在室温条件下，氮气保护，将化合物35-1(788mg,2.27mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(11mL)中。然后该反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物35-2粗品(682mg)。
MS(ESI)M/Z:235.2[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物35-2(682mg,2.78mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(11.6mL)中。随后，向上述反应液中依次加入5-溴-2-氟-3-硝基苯甲酸(610mg,2.32mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.2mL,6.96mmol)。然后该反应体系在80℃下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩，然后用二氯甲烷(10mL)稀释，用3M稀盐酸调至pH＝5-6，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到标题化合物35-3(1.02g)。
MS(ESI)M/Z:478.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物35-3(200mg,0.41mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(2.0mL)中。随后，将上述溶液降温至-10℃，依次加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(191.2mg,0.50mmol)、N,N-二异丙基乙胺(162.2mg,1.25mmol)和(R)-2-甲基吗啉(70mg,0.50mmol)。然后反应体系在-10℃条件下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物35(89.1mg)。
MS(ESI)M/Z:561.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.26(s,1H),8.08-7.34(m,4H),6.75(s,1H),6.15(s,1H),4.50-3.35(m, 8H),3.28-2.51(m,7H),1.98-1.31(m,4H),1.22-0.96(m,3H).
实施例36
(R)-(5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(3，3-二氟哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物36-1(15mg,0.084mmol)和(R)-5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯甲酸(40mg,0.084mmol，化合物35-3)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(32mg,0.084mmol)和N,N-二异丙基乙胺(32mg,0.252mmol)。然后该反应体系在0摄氏下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(6mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物36(14.2mg)。
MS(ESI)M/Z:581.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.28(s,1H),8.08-7.33(m,4H),6.73(s,1H),6.14(s,1H),4.49-3.35(m,7H),3.27-2.87(m,2H),2.70(s,3H),2.24-1.95(m,2H),1.94-1.29(m,6H).
实施例37
(5-溴-2-((R)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((S)-2-(氟甲基)吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物37-1(300mg,1.96mmol)溶于乙腈(1mL)和水(1mL)中。随后， 向上述反应液中依次加入氯甲酸苄酯(503mg,2.94mmol)和碳酸氢钠(412mg,4.90mmol)。然后该反应体系在室温下继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物37-2(350mg)。
MS(ESI)M/Z:252.2[M+H] +。
步骤B：在冰浴下，氮气保护，将化合物37-2(300mg,1.20mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中。随后，向上述反应液中缓慢滴加二乙胺基三氟化硫(503mg,2.94mmol)。然后反应体系升至室温，继续搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物37-3(70mg)。
MS(ESI)M/Z:276.0[M+23] +。
步骤C：在室温条件下，将化合物37-3(70mg,0.28mmol)溶于甲醇(5mL)中。随后，向上述反应液中依次加入10％钯/碳(10mg)和浓盐酸(5mg)。然后反应体系在室温下氢化1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩。得到化合物37-4粗品(60mg)。
MS(ESI)M/Z:120.2[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物37-4(20mg,0.14mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入(R)-5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯甲酸(40mg,0.08mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(43mg,0.11mmol)和N,N-二异丙基乙胺(52mg,0.14mmol)。然后该反应体系在0℃下继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化、得到标题化合物37(13mg)。
MS(ESI)M/Z:579.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.28(s,1H),8.14-7.40(m,4H),6.75(s,1H),6.16(s,1H),5.13-3.44(m,11H),3.24-2.61(m,6H),2.12-1.29(m,4H).
参考上述实施例的合成方法制备如下目标化合物：
实施例55
(5-溴-2-((R)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((S)-2-(二氟甲基)吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物37-1(500mg,3.27mmol)加入到乙腈(5.0mL)和水(5.0mL)中。随后，向反应液中依次加入氯甲酸苄酯(833mg,4.90mmol)和碳酸氢钠(1.13g,8.2mmol)。然后该反应体系继续搅拌15小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(8mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物37-2(750mg)。
MS(ESI)M/Z:252.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ7.41-7.27(m,5H),5.09(s,2H),4.77(t,J＝5.4Hz,1H),3.93(d,J＝13.2Hz,1H),3.86-3.72(m,2H),3.48-3.34(m,2H),2.92(brs,1H),2.50(brs,1H).
步骤B：在氮气保护下，将草酰氯(760mg,5.98mmol)加入到无水二氯甲烷(5.0mL)中。随后，将上述溶液降温至-78℃，滴加无水二甲基亚砜(700mg,8.96mmol)，继续搅拌30分钟。然后缓慢滴加化合物37-2(600mg,2.39mmol)的二氯甲烷(5.0mL)溶液，继续搅拌1小时。最后在此温度下，滴加三乙胺(1.93g,19.1mmol)，将反应体系升至室温，继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入二氯甲烷(20mL)稀释，混合液依次用水(15mL)、1N稀盐酸(15mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(15mL)以及饱和氯化钠水溶液(15mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到化合物55-3(630mg)。
步骤C：在氮气保护下，将化合物55-3(220mg,0.88mmol)溶解于无水二氯甲烷(5.0mL)中，随后，将上述溶液降温至-78℃，滴加二乙胺基三氟化硫(500mg,3.09mmol)。然后该反应体系升至室温，继续搅拌15小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入二氯甲烷(20mL)稀释，混合液用饱和碳酸氢钠水溶液 (10mL)萃取，收集有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物55-4(55mg)。
步骤D：在室温下，将化合物55-4(50mg,0.18mmol)和10％钯/碳(10mg)溶于甲醇(3mL)中，然后该反应体系在室温下氢化反应16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，所得滤液减压浓缩，得到化合物55-5(22mg)。
MS(ESI)M/Z:138.2[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，将化合物(R)-5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯甲酸(30mg,0.06mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中。随后，向上述溶液中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(28mg,0.07mmol)、N,N-二异丙基乙胺(16mg,0.12mmol)和化合物1-5(10mg,0.07mmol)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化，得到标题化合物55(10.7mg)。
MS(ESI)M/Z:597.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.28(s,1H),8.09-7.40(m,4H),6.88-6.47(m,1H),6.42-5.83(m,2H),4.58-4.15(m,1H),4.13-3.36(m,8H),3.29-2.86(m,3H),2.70(brs,3H),2.03-1.30(m,4H).
参考上述实施例的合成方法制备如下目标化合物：
实施例321
(5-溴-2-((3S，4S)-4-甲氧基-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(886mg,3.37mmol)、(3S,4S)-3-氨基-4-甲氧基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(800mg,3.70mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.3g,10.11mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(17mL)中。然后该反应体系在80℃下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(60mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物321-2(1.7g,收率90％)。
MS(ESI)M/Z:457.0[M-99] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物321-2(1.7g,3.06mmol)溶于二氯甲烷溶液(15mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(7.6mL)。然后该反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物321-3粗品(1.6g)。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将5-(甲氨基)烟酸(630mg,4.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(17mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(2.23g,17.3mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(1.97g,5.19mmol)和化合物321-3(1.7g,3.46mmol)。然后该反应体系在0℃条件下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(60mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和碳酸氢钠溶液(20mL×2次)洗涤。然后向所得有机相中加入水(30mL)，混合液用盐酸调节pH至4～5，所得有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)、饱和食盐水(20mL)洗涤。最后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化得到标题化合物321(1.088g,收率53％)。
MS(ESI)M/Z:591.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.36-8.16(m,1H),8.08-7.94(m,1H),7.91-7.59(m,2H),7.56-7.22(m,1H),6.96-6.75(m,1H),6.23-6.06(m,1H),4.48-4.19(m,1H),4.14-3.39(m,9H),3.29-3.01(m,4H),2.99-2.65(m,4H),1.25-0.81(m,6H).
实施例325
(5-溴-2-((R)-1-((R)-5，5-二氟哌啶-3-羰基)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在0℃条件下，将化合物325-1(16mg,0.06mmol)和((5-溴-3-硝基-2-((R)-哌啶-3-基)氨基)苯基((2R,6S)-2,6-二甲基吗啉基)甲酮(32mg,0.72mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)中。随后，向上述溶液中依次加入2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(14.9mg,0.04mmol)和N,N-二异丙基乙胺(11.7mg,0.09mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物325-2(36mg)。
MS(ESI)M/Z:588.2[M-99]。
步骤B:在室温条件下，将化合物325-2(36mg,0.052mmol)溶于二氯甲烷(0.6mL)中。随后，向上述溶液中加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.6mL)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。所得残余物用饱和碳酸氢铵水溶液调节pH至8，所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物325(21.77mg)。
MS(ESI)M/Z:588.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.26(d,J＝2.0Hz,1H),7.97-7.55(m,2H),4.48-4.23(m,1H),3.97-3.32(m,7H),3.28-3.13(m,1H),3.12-2.58(m,6H),2.47-2.18(m,2H),2.17-1.24(m,6H),1.15(d,,J＝6.0Hz,3H),1.01(brs,3H).
实施例327
(5-溴-2-((3R)-1-(5，5-二氟哌啶-3-羰基)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(2，2-二氟吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物1-1(120mg,0.454mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2,2-二氟吗啉(80.58mg,0.505mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(288mg,0.757mmol)和N,N-二异丙基乙胺(326.37mg,2.53mmol)。然后该反应体系在0℃下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物327-2(120mg)。
MS(ESI)M/Z:369.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物327-2(120mg,0.325mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(78.14mg,0.390mmol)和N,N-二异丙基乙胺(98mg,0.975mmol)。然后该反应体系升至80℃，搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物327-3(180mg).
MS(ESI)M/Z:449.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物327-3(180mg,0.327mmol)溶于二氯甲烷(4mL)中。随后，缓慢滴加4M盐酸-1,4-二氧六环溶液(2mL)。然后该反应体系在室温下搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤蒸馏浓缩。得到化合物327-4(100mg)。
MS(ESI)M/Z:451.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将化合物327-4(10.99mg,0.023mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入1-(叔丁氧羰基)-5,5-二氟哌啶-3-羧酸(5mg,0.019mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(10.7mg,0.028mmol)和N,N-二异丙基乙胺(12.18mg,0.094mmol)。然后该反应体系在0℃下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物327-5(10mg)。
MS(ESI)M/Z:640.0[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，氮气保护，将化合物327-5(10mg,0.014mmol)溶于1,4-二氧六环(2mL)中。随后，缓慢滴加4M盐酸-1,4-二氧六环溶液(1mL)。然后该反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液蒸馏浓缩。所得残留物经反相柱纯化得到标题化合物327(6.14mg,产率：71.71％)。
MS(ESI)M/Z:596.0[M+H] +。
1HNMR(400MHz,MeOD-d 4)δ8.45-8.36(m,1H),7.68-7.59(m,1H),4.32-3.60(m,9H),3.13-3.00(m,3H),2.91-2.69(m,1.5H),2.62-2.37(m,1.5H),2.31-1.89(m,4H),1.88-1.55(m,3H).
实施例331
(5-溴-2-((3R)-1-(5，5-二氟哌啶-3-羰基)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(3，3-二氟哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物331-1(50mg,0.19mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.95mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(70mg,0.57mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(101mg,0.27mmol)和3,3-二氟吡啶(36mg,0.23mmol)。然后该反应体系在0℃下搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(5mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(10mL×3次)洗涤。所得残留物所得残余物用硅胶柱层析纯化得到产物331-2(51mg)。
MS(ESI)M/Z:367.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，将化合物331-2(51mg,0.14mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中。随后，向上述溶液中依次加入(R)-3-氨基哌啶-1-羧酸叔丁酯(33mg,0.17mmol)和N,N-二异丙基乙胺(55mg,0.42mmol)。然后该反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(25mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物331-3(70mg)。
MS(ESI)M/Z:447.0[M-99]。
步骤C：在室温条件下，将化合物331-3(70mg,0.13mmol)溶于二氯甲烷(0.33mL)中。随后，向反应体系中缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.33mL)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应体系减压浓缩。得到化合物331-4(58mg)。
MS(ESI)M/Z:447.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将化合物1-(叔丁氧羰基)-5,5-二氟哌啶-3-羧酸(5.4mg,0.02mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.10mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(7.7mg,0.06mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(10mg,0.03mmol)和化合物1-4(11mg,0.03mmol)。然后该反应体系继续搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物用硅胶柱层析纯化得到化合物331-5(11.8mg)。
MS(ESI)M/Z:594.0[M-99]。
步骤E：在室温条件下，将化合物331-5(11.8mg,0.02mmol)溶于二氯甲烷(0.1mL)中。随后，向反应体系中缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.1mL)。然后该反应体系继续搅拌12小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。所得残余物溶于水(1.5mL)，混合液用10％wt氨水调pH＝8。所得溶液经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物331(1.76mg)。
MS(ESI)M/Z:594.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.28(s,1H),8.01-7.46(m,2H),4.66-3.50(m,7H),3.19-2.67(m,8H),2.22-1.93(m,4H),1.90-1.35(m,6H).
实施例336
(R)-(5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(3,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
反应路线：
操作步骤:
步骤A：在室温条件下，将化合物(R)-5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯甲酸(40mg,0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，在冰水浴条件下向其中加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(38mg,0.1mmol)、N,N-二异丙基乙胺(55mg,0.42mmol)和化合物336-1(12mg,0.1mmol)。然后该反应体系在冰水浴条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应体系中加水(15mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物336(18.20mg)。
MS(ESI)M/Z:543.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.27(s,1H),8.05-7.45(m,4H),6.75(s,1H),6.16(s,1H),5.96-5.57(m,2H),4.27-3.48(m,7H),3.29-3.13(m,2H),2.70(s,3H),2.27-1.37(m,6H).
实施例337
(R)-(5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(4-氟-3，6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲酮
反应路线：
操作步骤:
步骤A：在室温下，将三乙胺三氢氟酸盐(486mg,3.02mmol)加入到N,N-二甲基乙酰胺(5.0mL)中。随后，向上述溶液中，依次加入三乙胺(153mg,1.51mmol)、(二乙氨基)二氟化硫四氟硼酸盐(1.03g,4.52mmol)和N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮(300mg,1.51mmol)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物337-2(180mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO -d 6)δ5.31(d,J＝16.0Hz,1H),3.86-3.78(m,2H),3.53-3.50(m,2H),2.29-
2.22(m,2H),1.41(s,9H).
步骤B：在室温条件下，将化合物337-2(80mg,0.40mmol)溶于1,4-二氧六环(1mL)中。随后，缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(2mL)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到337-3(60mg)。
MS(ESI)M/Z:102.2[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将化合物(R)-5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯甲酸(30mg,0.06mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中。随后，向上述溶液中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(28mg,0.07mmol)、N,N-二异丙基乙胺(16mg,0.12mmol)和化合物1-3(10mg,0.07mmol)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经反相色谱柱纯化得到标题化合物337(12.14mg)。
MS(ESI)M/Z:561.05[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO -d 6)δ8.27(s,1H),8.10-7.40(m,4H),6.75(s,1H),6.14(s,1H),5.54-5.06(m,1H),4.42-3.34(m,8H),3.28-3.01(m,1H),2.70(s,3H),2.46-2.17(m,2H),1.96-1.28(m,4H).
实施例341
(5-溴-2-((R)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((S)-2-(氯甲基)吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物341-1(1.12g,10.9mmol)溶于环己烷(5mL)中。随后，向上述溶液中加入(S)-2-(氯甲基)环氧乙烷(1.00g,10.9mmol)。然后该反应体系继续搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入异丙醇(20mL)淬灭，混合液过滤得到化合物341-2(800mg)。
MS(ESI)M/Z:200.2[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物341-2(300mg,3.02mmol)、氢氧化钠(600mg,30.2mmol)溶于氯仿(3.3mL)和水(1.3mL)中。随后，将上述溶液降至0℃，2-溴乙酰溴(800mg,8.15mmol)溶于氯仿(0.82mL)并加入上述溶液中，搅拌1小时。然后该反应体系在室温下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用二氯甲烷(10mL×2次)萃取，合并有机相，有机相用水溶液(20mL×3次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物341-3(234mg)。
MS(ESI)M/Z:240.2[M+H]+。步骤C：在室温条件下，氮气保护，将1M的硼烷四氢呋喃溶液(0.25mL)溶于四氢呋喃(0.4mL)中。随后，向上述溶液中加入化合物341-3(40mg,0.17mmol)。然后该反应体系在70℃下加热搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，在0℃下，向反应液中滴加0.5M的稀盐酸(5mL)淬灭，混合液用饱和的碳酸氢钠溶液调节pH至10，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物341-4(34mg)。
MS(ESI)M/Z:226.2[M+H] +。
步骤D：在室温下，将化合物341-4(34mg,0.15mmol)和钯/碳(7mg)溶于甲醇(2mL)中。然后该反应体系置换氢气，搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液用硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到化合物341-5(22mg)。
MS(ESI)M/Z:136.2[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，将化合物(R)-5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯甲酸(67mg,0.14mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.70mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(55mg,0.42mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(64mg,0.17mmol)和化合物1-5(22.8mg,0.17mmol)。然后该反应体系继续搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(5mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物341(21.52mg)。
MS(ESI)M/Z:595.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.27(s,1H),8.10-7.34(m,4H),6.91-6.44(m,1H),4.62-4.12(m,1H),4.09-3.37(m,10H),3.32-2.88(m,3H),2.87-2.68(m,3H),2.00-1.38(m,5H).
实施例342
(5-溴-2-((R)-1-(5-(甲胺基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((R)-2-环丙基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物342-1(30mg,0.12mmol)溶于四氢呋喃(2.0mL)中。随后，向上述溶液中加入醋酸钯(16mg,0.08mmol)，并继续搅拌1小时。然后将上述溶液降温至-60℃，滴加重氮甲烷乙醚溶液(48mg，2.4mmol)，并升至0℃，搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用二氯甲烷(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物342-2(28mg)。
MS(ESI)M/Z:262.2[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，将化合物342-2(28mg,0.11mmol)溶于甲醇(1.25mL)中。随后，向上述溶液中加入10％钯/碳(6mg)，反应体系在氢气气氛中继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤减压浓缩。得到化合物342-3(11mg)。
MS(ESI)M/Z:128.2[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将化合物342-3(11mg,0.086mmol)和(R)-5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯甲酸(41mg,0.086mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(44mg,0.115mmol)和N,N-二异丙基乙胺(45mg,0.345mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(6mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化，得到标题化合物342(9.5mg)。
MS(ESI)M/Z:587.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.26(s,1H),8.08-7.38(m,4H),6.88-6.44(m,1H),4.51-4.12(m,1H),4.09-3.36(m,6H),3.34-3.06(m,3H),3.05-2.67(m,5H),1.97-1.29(m,4H),0.98-0.63(m,1H),0.57-0.18(m,3.6H),0.13-0.01(m,0.4H).
实施例344
(5-溴-2-((R)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((R)-2-乙烯基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物344-1(154mg,1.00mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入三乙胺(202mg,2.00mmol)和二碳酸二叔丁酯(327mg,1.50mmol)。然后该反应体系在25℃条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，向所得残余物中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物344-2(218mg)。
MS(ESI)M/Z:118.2[M-99]。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物344-2(100mg,0.46mmol)溶于乙酸乙酯(2mL)中，随后，将上述溶液降温至-5℃，依次加入2,2,6,6-四甲基哌啶氧化物(1.0mg,0.0046mmol)、碳酸氢钠(116mg,1.38mmol)和三氯异氰尿酸(112mg,0.48mmol)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和硫代硫酸钠溶液(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL)和硫代硫酸钠溶液(10mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到化合物344-3(45mg)。
MS(ESI)M/Z:160.2[M-55]。
步骤C：在0℃条件下，将化合物甲基三苯基溴化膦(114mg,0.32mmol)和双三甲基硅烷基氨基钾(64mg,0.32mmol)溶于干燥的四氢呋喃(3mL)中，继续搅拌0.5小时。随后，向上述溶液中加入化合物344-3(45mg,0.21mmol)，并在室温条件下搅拌0.5小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入饱和氯化铵溶液(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物344-4(21mg)。
MS(ESI)M/Z:158.2[M-55]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ5.93-5.74(m,1H),5.31(d,J＝17.6Hz,1H),5.18(d,J＝10.4Hz,1H),3.96-3.74(m,3H),3.69(d,J＝12.4Hz,1H),3.57-3.42(m,2H),2.87(brs,1H),1.41(s,9H).
步骤D：在0℃条件下，将化合物344-4(21mg,0.098mmol)溶于二氯甲烷(0.9mL)中。随后，向上述溶液中加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.49mL,1.96mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物344-5(13mg)。
MS(ESI)M/Z:114.2[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，将化合物344-5(13mg,0.115mmol)和(R)-5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯甲酸(60mg,0.126mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(44mg,0.115mmol)和N,N-二异丙基乙胺(45mg,0.345mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(6mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物344(15.53mg)。
MS(ESI)M/Z:573.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.27(s,1H),8.10-7.39(m,4H),6.75(s,1H),6.15(s,1H),5.97-5.52(m,1H),5.36(d,J＝17.6Hz,0.5H),5.31-5.19(m,1H),5.15(d,J＝10.8Hz,0.5H),4.52-4.16(m,1H),4.15-3.37(m,7H),3.30-2.85(m,3H),2.70(s,4H),2.04-1.30(m,4H).
实施例345
(5-溴-2-((R)-1-(5-(甲胺基)烟酰胺基)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯)((2S，6S)-2-甲基-6-(三氟甲基)吗啉)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A:在-10℃条件下，氮气保护，将三氟甲磺酸锂(73mg,0.47mmol)溶于乙腈(11mL)中。随后，向上述溶液中加入化合物345-1(250mg,2.34mmol),然后该反应体系继续搅拌5分钟。随后，向上述溶液中加入苄胺(262mg,2.34mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物345-2(200mg)。
MS(ESI)M/Z:220.2[M+H] +。
步骤B:在0℃条件下，氮气保护，将化合物345-2(230mg,1.14mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中。随后，向上述溶液中加入2-溴丙酰氯(214mg,1.25mmol)和三乙胺(150mg,1.48mmol)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所 得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物345-3(202mg)。
MS(ESI)M/Z:354.0[M+H] +。
步骤C：在0℃条件下，氮气保护，将化合物345-3(202mg,0.57mmol)溶于四氢呋喃(3mL)中，随后，向上述溶液中缓慢加入氢化钠(21mg,0.85mmol)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物345-4(150mg,收率96％)。
MS(ESI)M/Z:274.2[M+H] +。
步骤D：在0℃条件下，氮气保护，将化合物345-4(150mg,0.55mmol)溶于四氢呋喃(2.5mL)中。随后，向上述溶液中加入铝锂氢(0.4mL,1.09mmol)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中缓慢加入十水合硫酸钠(20mg)，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物345-5(140mg)。
MS(ESI)M/Z:260.2[M+H] +。
步骤E:在室温条件下，氮气保护，将化合物345-5(140mg,0.54mmol)溶于甲醇(5mL)中。随后，向上述溶液中加入10％钯/碳(32mg)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将过滤，减压浓缩。得到化合物345-6(100mg)。
MS(ESI)M/Z:170.2[M+H] +。
步骤F：在室温条件下，氮气保护，将化合物345-6(67mg,0.33mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入(R)-5-溴-2-(1-(5-(甲胺基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯甲酸(130mg,0.27mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.38mg,143mmol)和N,N-二异丙基乙胺(174mg,1.35mmol)。然后该反应体系继续搅拌5分钟。
LCMS监测显示原料消失后，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物345(29mg)。
MS(ESI)M/Z:629.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.29(s,1H),8.09-7.46(m,4H),6.75(s,1H),6.15(s,1H),4.70-4.19(m,2H),4.18-3.34(m,6H),3.29-3.05(m,1.5H),3.04-2.79(m,1.5H),2.70(brs,3H),2.00-1.34(m,4H),1.29-0.96(m,3H).
实施例346
(5-溴-2-((R)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((R)-2-乙炔基吗啉)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在0℃条件下，将化合物346-1(120mg,0.56mmol)溶于甲醇(2.8mL)中。随后，向上述溶液中加入碳酸钾(232mg,1.68mmol)和1-重氮基-2-氧代丙基)膦酸二甲酯(108mg,0.56mmol)。然后该反 应体系在室温条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物346-2(48mg)。
MS(ESI)M/Z:156.2[M-55]。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ4.38-4.30(m,1H),3.83-3.75(m,1H),3.61-3.49(m,2H),3.49-3.43(m,1H),3.41-3.32(m,1H),3.30-3.12(m,2H),1.40(s,9H).
步骤B：在0℃条件下，将化合物346-2(48mg,0.227mmol)溶于二氯甲烷(1.1mL)中，随后，向上述溶液中加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.85mL,3.41mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物346-3(30mg)。
MS(ESI)M/Z:112.2[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将化合物346-3(30mg,0.27mmol)和(R)-5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯甲酸(129mg,0.27mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.3mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(103mg,0.27mmol)和N,N-二异丙基乙胺(105mg,0.81mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(6mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化，得到标题化合物346(28.46mg)。
MS(ESI)M/Z:571.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.28(s,1H),8.14-7.37(m,4H),6.89-6.49(m,1H),6.26-5.92(m,1H),4.80-4.32(m,1H),4.31-3.32(m,10H),3.30-2.94(m,2H),2.71(s,3H),2.02-1.31(m,4H).
实施例353
(R)-(2-(1-(5-(甲胺基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(吗啉-2，2，6，6-d 4)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物353-1(5.0g,26.5mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(60mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入碳酸钾(11.0g,80.5mmol)和溴化苄(5.4g,31.7mmol)。然后该反应体系继续搅拌12小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(180mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(150mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物353-2(6.2g)。
MS(ESI)M/Z:280.4[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物353-2(460mg,1.65mmol)溶于无水四氢呋喃(5.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，加入氘代氢化锂铝(200.0mg,4.94mmol)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，在0℃下将反应液缓慢地加入水(25mL)淬灭，混合液过滤，所得滤液用二氯甲烷(8mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物353-3(200mg)。
MS(ESI)M/Z:200.4[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物353-3(90mg,0.45mmol)溶于浓硫酸(1mL)中。随后，将上述溶液升温至150℃搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，在0℃下将反应液缓慢地滴加入水中(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物353-4(36mg)。
MS(ESI)M/Z:182.4[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将化合物353-4(36mg,0.20mmol)溶于甲醇(2mL)中。随后，向上述溶液中加入钯碳(20mg)。然后将该反应体系置换氢气三次，搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩得到化合物353-5(13mg)。
MS(ESI)M/Z:92.2[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，氮气保护，将化合物353-5(9.0mg,0.1mmol)和(R)-5-溴-2-(1-(5-(甲胺基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯甲酸(40.0mg,0.1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(45mg,0.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(45mg,0.33mmol)。然后该反应体系继续搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物353(21.3mg)。
MS(ESI)M/Z:550.6[M+H] +。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ8.34(s,1H),8.25-7.77(m,2.7H),7.48(s,1.3H),7.00(s,1H),4.04-3.10(m,9H),2.91(s,3H),2.23-1.76(m,3H),1.56-1.38(m,1H).
实施例355
(5-溴-2-((R)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯)((R)-3-甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物35-3(900mg,0.19mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(1.0mL)中。随后，向上述溶液中，依次加入(R)-3-甲基吗啉盐酸盐(23mg,0.23mmol)、N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸脲(78mg,0.21mmol)和N,N-二异丙基乙胺(73mg,0.57mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物355(43.97mg)。
MS(ESI)M/Z:561.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.26(s,1H),8.08-7.32(m,4H),6.75(s,1H),6.16(s,1H),4.64-3.36(m,9.5H),43.28-2.84(m,2.5H),2.70(brs,3H),2.08-1.07(m,7H).
实施例357
((3R)-3-((2-(3-氧杂-6-氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-羰基)-4-溴-6-硝基苯基)氨基)哌啶-1-基)(5-(甲氨基)吡啶-3-基)甲酮
反应路线：
操作步骤:
步骤A：在室温条件下，将化合物35-3(32mg,0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.34mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.03mL,0.20mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(28mg,0.07mmol)和3-氧杂-6-氮杂双环[3.1.1]庚烷4-甲苯磺酸盐(20mg,0.07mmol)。然后该反应体系在室温下搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物357(13.87mg)。
MS(ESI)M/Z:558.9[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.26(s,1H),7.97(s,1H),7.85-7.49(m,3H),6.79(s,1H),6.24-5.94(m,1H),4.64-3.95(m,3H),3.94-3.50(m,6H),3.26-2.94(m,2H),2.90-2.59(m,4H),2.10-1.38(m,5H).
实施例358
(5-溴-2-((R)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(2-甲基-1，4-恶氮杂环-4-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷(11mg,0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.40mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(31mg,0.24mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(38mg,0.10mmol)和化合物35-3(40mg,0.08mmol)。然后该反应体系继续搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL×3次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物358(17.28mg)。
MS(ESI)M/Z:573.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.27(s,1H),8.10-7.36(m,4H),6.75(s,1H),6.38-5.83(m,1H),4.75-4.36(m,1H),4.18-3.37(m,9H),3.24-3.06(m,1H),2.70(s,3H),2.11-1.30(m,8H).
实施例360
(3S，4S)-3-(2-(8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羰基)-4-溴-6-硝基苯基氨基)-4-甲氧基吡咯烷-1-基)5-甲氨基吡啶-3-甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物1-1(97.3mg,0.37mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.18mL,1.1mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(195.7mg,0.52mmol)和8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷(50mg,0.44mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(6mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物得到化合物360-2(100.7mg)。
MS(ESI)M/Z:358.9[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，将化合物360-2(36mg,0.1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，向上述溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.05mL,0.3mmol)和叔丁基(3S,4S)-3-氨基-4-甲氧基吡咯烷-1-羧酸酯(21.7mg,0.1mmol)。然后该反应体系在80℃条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(2mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物得到化合物360-3(74mg)。
MS(ESI)M/Z:455.9[M-99]。
步骤C：在室温条件下，将化合物360-3(66mg,0.11mmol)溶于二氯甲烷(0.6mL)中。随后，向上述溶液中加入4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(0.6mL)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，反应液减压浓缩得到化合物360-4(67mg)。
MS(ESI)M/Z:455.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将5-(甲氨基)烟酸(15mg,0.1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.08mL,0.50mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(52.6mg,0.14mmol)和化合物360-4(54mg,0.12mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(2mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物360(22.37mg)。
MS(ESI)M/Z:589.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.33-8.10(m,1H),8.08-7.92(m,1H),7.90-7.57(m,2.3H),7.46-7.10(m,0.7H),7.01-6.68(m,1H),6.25-6.04(m,1H),4.53-3.38(m,9H),3.32-2.83(m,6H),2.79-2.61(m,3H),2.00-1.34(m,4H).
实施例362
(2S，4R)-4-(4-溴-2-(2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基氨基)-1-(5-(甲基氨基)烟酰基)吡咯烷-2-甲腈
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物17-2(118mg,0.33mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中。随后，向上述溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.16mL,0.98mmol)和2-甲基-2-叔丁基-4-氨基吡咯烷-1，2-二羧酸酯(80mg,0.33mmol)。然后该反应体系在80℃条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(8mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物362-2(163mg)。
MS(ESI)M/Z:485.0[M-99]。
步骤B：在室温条件下，将化合物362-2(58mg,0.14mmol)溶于四氢呋喃(1.5mL)和水(0.3mL)中。随后，向上述溶液中加入氢氧化锂(23mg,0.56mmol)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩得到化合物362-3。
MS(ESI)M/Z:471.0[M-99]。
步骤C：在室温条件下，将化合物362-3溶于四氢呋喃(1.5mL)中。随后，将上述溶液降温至-20℃，依次加入氯甲酸异丁酯(57mg,0.42mmol)和三乙胺(56.4mg,0.56mmol)，并搅拌30分钟。接着，升温至0℃，向上述溶液中加入氨水(48.8mg,1.4mmol)。然后该反应体系继续搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(2mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物362-4(129mg)。
MS(ESI)M/Z:469.9[M-99]。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物362-4(129mg,0.22mmol)溶于二氯甲烷(1.5mL)中。随后，向上述溶液中加入伯吉斯试剂(523.6mg,2.2mmol)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(6mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物362-5(127mg)。
MS(ESI)M/Z:451.9[M-99]。
步骤E：在室温条件下，氮气保护，将化合物362-5(117mg,0.21mmol)溶于甲酸(3mL)中。然后该反应体系在0℃条件下搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，在0℃条件下，滴加氨水至pH＝9。所得粗品经制备型高效液相色谱纯化得到化合物362-6(30mg)。
MS(ESI)M/Z:452.0[M+H] +。
步骤F：在室温条件下，氮气保护，将5-(甲氨基)烟酸(8.1mg,0.05mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.04mL,0.26mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(28.2mg,0.07mmol)和化合物362-6(30mg,0.06mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(2mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取， 合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物362(7.66mg)。
MS(ESI)M/Z:586.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.34-8.14(m,1H),8.11-7.95(m,1H),7.94-7.77(m,1H),7.74-7.58(m,1H),7.53-7.26(m,1H),6.99-6.78(m,1H),6.23(s,1H),5.12-4.86(m,1H),4.53-3.40(m,6.5H),3.30-3.08(m,1.5H),3.00-2.67(m,4H),2.66-2.53(m,1H),2.45-2.35(m,1H),1.11(brs,3H),1.06-0.84(m,3H).
实施例366
(2S，4R)-4-(4-溴-2-(2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基氨基)-N-甲基-1-(5-(甲基氨基)烟酰基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物17-2(295mg,0.82mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中。随后，向上述溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.4mL,2.46mmol)和2-甲基-2-叔丁基-4-氨基吡咯烷-1,2-二羧酸酯(200mg,0.82mmol)。然后该反应体系在80℃条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(6mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。 所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物366-2(386mg)。
MS(ESI)M/Z:485.0[M-99]。
步骤B：在室温条件下，将化合物366-2(40mg,0.07mmol)溶于四氢呋喃(0.3mL)和水(0.1mL)中。随后，向上述溶液中加入氢氧化锂(5.7mg,0.14mmol)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，反应液减压浓缩得到化合物366-3(45mg)。
MS(ESI)M/Z:470.9[M-99]。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物366-3(45mg,0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.4mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.05mL,0.03mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(36.2mg,0.09mmol)和甲胺(3.6mg,0.08mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(6mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物366-4(47mg)。
MS(ESI)M/Z:484.0[M-99]。
步骤D：在室温条件下，将化合物366-4(47mg,0.08mmol)溶于二氯甲烷(0.4mL)中。随后，向上述溶液中加入4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(0.4mL)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，反应液减压浓缩得到化合物366-5(52mg)。
MS(ESI)M/Z:484.0[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，氮气保护，将5-(甲氨基)烟酸(12.1mg,0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.07mL,0.4mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(42.5mg,0.11mmol)和化合物366-5(52mg,0.1mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(6mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到标题化合物336(15.2mg)。
MS(ESI)M/Z:618.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.24(s,0.3H),8.20(s,0.7H),8.02-7.75(m,2.7H),7.71-7.47(m,2H),6.91-6.77(m,0.7H),6.72-6.63(m,0.3H),6.24-6.08(m,0.7H),4.60-4.12(m,2.5H),4.08-3.37(m,5H),3.24-2.97(m,1H),2.92-2.57(m,6.5H),2.30-1.86(m,3H),1.23-0.85(m,6H).
实施例367
(5-溴-2-((3S，4S)-4-甲氧基-1-(5-(甲胺基)烟碱酰)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯)((R)-3-甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物1-1(100mg,0.38mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.9mL)中。随后，将上述溶液降温至-10℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.19mL,1.14mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(173mg,0.45mmol)和(R)-3-甲基吗啉(45mg,0.45mmol)。然后该反应体系继续搅拌5分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物367-2(56mg)。
MS(ESI)M/Z:347.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，将化合物367-2(56mg,0.16mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.8mL)中。随后，向上述溶液中依次加入叔丁基(3S,4S)-3-氨基-4-甲氧基吡咯烷-1-羧酸酯(35mg,0.16mmol)和N,N-二异丙基乙胺(104mg,0.81mmol)。然后该反应体系在80℃下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(25mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(25mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物367-3(60mg)。
MS(ESI)M/Z:443.0[M-99]。
步骤C：在室温条件下，将化合物367-3(60mg,0.11mmol)溶于二氯甲烷(1.1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.6mL,2.21mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS显示原料消失后，将反应液减压浓缩。得到化合物367-4(53mg)
MS(ESI)M/Z:443.0[M+H] +。
步骤D：在0℃条件下，将化合物367-4(52mg,0.12mmol)和5-(甲氨基)烟酸(27mg,0.18mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(45mg,0.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(46mg,0.35mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(25mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物367(26.33mg)。
MS(ESI)M/Z:577.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.32-8.15(m,1H),8.06-7.92(m,1H),7.90-7.51(m,2H),7.49-7.13(m,1H),7.00-6.70(m,1H),6.29-6.00(m,1H),4.68-3.38(m,11H),3.30-2.83(m,5H),2.79-2.62(m,3H),1.46-0.96(m,3H).
实施例368
(R)-(5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(2，2，6，6-四氟吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将(R)-5-溴-2-((1-(5-(甲氨基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯甲酸(54mg,0.11mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.45mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(34mg,0.27mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(42mg,0.11mmol)和化合物368-1(15mg,0.09mmol)。然后该反应体系在0℃搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物368(29.07mg)。
MS(ESI)M/Z:619.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.35(s,1H),8.10-7.81(m,2H),7.79-7.44(m,2H),6.75(s,1H),6.28-5.89(m,1H),4.80-3.94(m,4H),3.92-3.35(m,4H),3.29-3.11(m,1H),2.70(s,3H),1.94-1.65(m,2H),1.63-1.32(m,2H).
实施例369
(2S，4R)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-N-(异恶唑-4-基)-1-(5-(甲氨基)烟酰胺基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物366-3(40mg,0.07mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(28mg,0.21mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(27mg,0.07mmol)和异恶唑-4-胺(11mg,0.08mmol)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物369-2(50mg)。
MS(ESI)M/Z:536.8[M-99]。
步骤B：在室温条件下，将化合物369-2(50mg,0.08mmol)溶于二氯甲烷(0.8mL)中。随后，将向上述溶液降温至0℃，加入4M的盐酸-1,4-二氧六环(0.8mL)。然后该反应体系在室温下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物369-3(50mg)。
MS(ESI)M/Z:536.8[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将5-(甲氨基)烟酸(11mg,0.07mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，将上述溶液中降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(47mg,0.36mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(41mg,0.11mmol)和化合物369-3(50mg,0.09mmol)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物369(10.89mg)。
MS(ESI)M/Z:671.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.68-10.26(m,1H),9.25-8.93(m,1H),8.77-8.52(m,1H),8.34-8.14(m,1H),8.05-7.46(m,4H),6.92-6.60(m,1H),6.28-6.01(m,1H),4.82-4.56(m,1H),4.47-3.48(m,7H),2.84-2.69(m,3H),2.62-2.54(m,1H),2.40-2.11(m,3H),1.18-0.83(m,6H).
实施例371
((3S，4S)-3-(2-(1R，5S)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-羰基)-4-溴-6-硝基苯基)氨基)-4-甲氧基吡咯烷-1-基)(5-(甲胺基)吡啶-3-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物1-1(21.65g,82.32mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(400mL)中。随后，将上述溶液降温至-10℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(43.79g,115.25mmol)、N,N-二异丙基乙胺(31.86g,246.96mmol)和(1R,5S)-3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷盐酸盐(16.2g,98.78mmol)。然后该反应体系在0℃条件下搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(1.2L)淬灭，混合液用乙酸乙酯(400mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物371-2(29g)。
MS(ESI)M/Z:372.9[M+H] +。
步骤B:在室温条件下，氮气保护，将化合物371-2(53mg,0.14mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(1mL)中。随后，向上述溶液中依次加入叔丁基(3S,4S)-3-氨基-4-甲氧基吡咯烷-1-羧酸酯(37mg,0.17mmol)和N,N-二异丙基乙胺(54mg,0.42mmol)。然后该反应体系在80℃条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(9mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物371-3(60mg)。
MS(ESI)M/Z:469.0[M-99]。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物371-3(60mg,0.11mmol)溶于干燥的二氯甲烷(0.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.27mL)。然后该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩。得到化合物371-4(50mg)。
MS(ESI)M/Z:469.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将5-(甲胺基)烟酸(19mg,0.12mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(75mg,0.15mmol)、N,N-二异丙基乙胺(85mg,0.5mmol)和化合物371-4(50mg,0.10mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(9mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物371(6.45mg)。
MS(ESI)M/Z:603.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.30-8.15(m,1H),8.08-7.93(m,1H),7.91-7.60(m,2H),7.48-7.04(m, 1H),7.01-6.70(m,1H),6.20-6.05(m,1H),4.58-4.29(m,1H),4.22-3.37(m,10H),3.27-2.95(m,3H),2.81-2.65(m,3H),2.47-2.35(m,1H),2.05-1.44(m,5H).
实施例374
(5-溴-2-((3S，4S)-4-甲氧基-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)(3，3-二氟哌啶-1-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物1-1(80mg,0.30mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(117mg,0.90mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(160mg,0.42mmol)和3,3-二氟吡啶(58mg,0.37mmol)。然后该反应体系在0℃搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物所得残余物用硅胶柱层析纯化得到产物374-2(75mg)。
MS(ESI)M/Z:366.8[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，将化合物374-2(42mg,0.12mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.6mL)中。随后，依次加入(3S,4S)-3-氨基-4-甲氧基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(30mg,0.14mmol)和N,N-二异丙基乙胺(46mg,0.36mmol)。然后该反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(25mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物用硅胶柱层析纯化得到化合物374-3(60mg)。
MS(ESI)M/Z:462.8[M-99]。
步骤C：在室温条件下，将化合物374-3(60mg,0.11mmol)溶于二氯甲烷(0.28mL)中。随后，向反 应体系中缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.28mL)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应体系减压浓缩。得到化合物374-4(50mg)。
MS(ESI)M/Z:463.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将5-(甲氨基)烟酸(19mg,0.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.55mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(43mg,0.33mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(49mg,0.13mmol)和化合物374-4(50mg,0.11mmol)。然后该反应体系在0℃搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(30mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物374(11.98mg)。
MS(ESI)M/Z:597.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.34-8.15(m,1H),8.06-7.93(m,1H),7.90-7.71(m,1H),7.69-7.22(m,2H),6.98-6.70(m,1H),6.24-6.05(m,1H),4.60-3.39(m,9H),3.29-2.99(m,4H),2.81-2.67(m,3H),2.26-1.93(m,2H),1.85-1.58(m,2H).
实施例379
(2S，4R)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-1-(5-(甲基氨基)烟酰基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物366-3(44mg,0.08mmol)溶于四氢呋喃(0.5mL)中。随后，将上述溶液降温至-20℃，加入氯甲酸异丁酯(16mg,0.12mmol)和三乙胺(15mg,0.15mmol)。然后该体系继续搅拌30分钟。然后将上述溶液升温到0℃，加入氨水(13mg,0.39mmol)。然后该体系继续搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中滴加1M的盐酸水溶液调pH到4，将上述溶液升至室温。然后向上述溶液中加入水(3mL)，混合液用乙酸乙酯(3mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合 物379-2(23mg)。
MS(ESI)M/Z:469.9[M-99]。
步骤B：在室温条件下，将化合物379-2(23mg,0.04mmol)溶于二氯甲烷(0.4mL)中。随后，加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.4mL)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物379-3(52mg)。
MS(ESI)M/Z:470.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将5-(甲氨基)烟酸(16.7mg,0.11mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.09mL,0.55mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(58.5mg,0.15mmol)和化合物379-3(52mg,0.11mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物379(13.09mg)。
MS(ESI)M/Z:603.6[M+H]+。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.29-8.12(m,1H),8.04-7.92(m,1H),7.91-7.22(m,4H),7.20-6.66(m,2H),6.23-6.01(m,1H),4.60-3.91(m,3H),3.89-3.36(m,4.4H),3.27-3.05(m,0.6H),2.95-2.64(m,4H),2.62-2.54(m,0.4H),2.43-2.09(m,2.6H),1.21-0.79(m,6H).
实施例383
(2S，4R)-N-(4-溴-1-甲基-1H-吡唑-3-基)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物366-3(77mg,0.135mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入4-溴-1-甲基-1H-吡唑-3-胺(23mg,0.135mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(61mg,0.16mmol)和N,N-二异丙基乙胺(52mg,0.40mmol)。然后该反应体系在40℃下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(25mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物383-2(45mg)。
MS(ESI)M/Z:627.8[M-99]。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物383-2(45mg,0.06mmol)溶于二氯甲烷(0.5mL)中，随后，向上述溶液中加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.25mL)然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物383-3(42mg)。
MS(ESI)M/Z:627.5[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物383-3(42mg,0.06mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入5-(甲氨基)烟酸(10mg,0.06mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(30mg,0.08mmol)和N,N-二异丙基乙胺(26mg,0.20mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物383(15.8mg)。
MS(ESI)M/Z:761.6[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.98-9.50(m,1H),8.34-8.14(m,1H),8.06-7.94(m,1H),7.92-7.46(m,4H),6.95-6.67(m,1H),6.25-5.99(m,1H),4.81-4.46(m,1H),4.45-3.94(m,2H),3.92-3.37(m,8H),3.28-3.00(m,1H),2.98-2.63(m,4H),2.43-2.10(m,2H),1.18-0.83(m,6H).
实施例405
(5-溴-2-((3S，4S)-4-(2-甲氧基乙氧基)-1-(5-(甲胺基)烟碱酰)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物405-1(80mg,0.35mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(2mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢加入氢化钠(28mg,0.7mmol)，并搅拌30分钟。然后向上述溶液中加入1-溴-2-甲氧基乙烷(72mg,0.53mmol)，并在室温条件下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(35mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物405-2(60mg)。
MS(ESI)M/Z:309.0[M+23] +。
步骤B:在室温条件下，将化合物405-2(60mg,0.2mmol)溶于无水甲醇(5mL)中。随后，向上述溶液中加入20％wt二氧化铂(12mg)。然后该反应体在氢气保护条件下继续搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到化合物405-3(60mg,收率92％)。
MS(ESI)M/Z:161.2[M-99]。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物405-3(60mg,0.23mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(1mL)中。随后，向上述溶液中加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(83mg,0.23mmol)和N,N-二异丙基乙胺(89mg,0.69mmol)。然后该反应体系在80℃条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(9mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物405-4(77mg)。
MS(ESI)M/Z:501.0[M-99]。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物405-4(65mg,0.11mmol)溶于干燥的二氯甲烷(0.6mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.3mL)。然后该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物405-5(65mg)。
MS(ESI)M/Z:501.0[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，将5-(甲胺基)烟酸(22mg,0.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(68mg,0.18mmol)、N,N-二异丙基乙胺(77mg,0.6mmol)和化合物405-5(65mg,0.12mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(9mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物405(31.68mg)。
MS(ESI)M/Z:635.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.31-8.17(m,1H),8.01(brs,1H),7.91-7.30(m,3H),6.97-6.78(m,1H),6.23-6.06(m,1H),4.52-3.47(m,12H),3.29-3.01(m,5H),2.97-2.65(m,4H),2.61-2.53(m,0.5H),2.47-2.38(m,0.5H),1.19-0.88(m,6H).
实施例408
2-(3S，4S)-1-(3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-羰基)-4-甲氧基吡咯烷-3-基氨基)-5-溴-3-硝基苯基)(2S，6R)-2，6-二甲基吗啉甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将3H-咪唑并[4,5-C]吡啶-7-羧酸(8mg,0.04mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，向上述溶液中次加入N,N-二异丙基乙胺(0.03mL,0.16mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(19mg,0.05mmol)和化合物408-1(18.2mg,0.04mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(6mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物408(4.01mg)。
MS(ESI)M/Z:601.9[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.13(s,1H),9.02(s,1H),8.65-8.09(m,3H),7.85-7.19(m,2H),4.55-3.40(m,9H),3.29-3.01(m,4H),2.99-2.73(m,1H),2.60-2.52(m,0.5H),2.42-2.25(m,0.5H),1.23-0.68(m,6H).
实施例418
(2S，4R)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-1-(5-(甲氨基)烟酰胺基)-N-((S-5-氧吡咯烷-3-基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物418-1(40mg，0.21mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后,向上述溶液中依次加入1-溴-2-甲氧基乙烷(35mg，0.25mmol)和碳酸钾(145mg，1.05mmol)。然后该反应体系在50℃条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物418-2(42mg)。
MS(ESI)M/Z:250.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物418-2(42mg，0.17mmol)溶于乙醇(0.6mL)和水(0.3mL)中。随后,向上述溶液中依次加入铁粉(48mg，0.85mmol)和氯化铵固体(46mg，0.85mmol)。然后该反应体系在80℃条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，反应液趁热过滤，滤液减压浓缩。向所得残余物中加入水(5mL)，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到化合物418-3(42mg)。
MS(ESI)M/Z:220.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将(2S,4R)-4-((4-溴-2-((2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-羧酸(50mg，0.09mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(57mg,0.44mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(40mg,0.11mmol)和化合物418-3(23mg,0.11mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌8小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×2次)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物418-4(45mg)。
MS(ESI)M/Z:671.8[M-99]。
步骤D：在室温条件下，将化合物418-4(45mg，0.06mmol)溶于二氯甲烷(0.6mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.6mL)。然后该反应体系在室温下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物418-5(46mg)。
MS(ESI)M/Z:671.8[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，将化合物5-(甲氨基)烟酸(13mg，0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入N,N-二异丙基乙胺(45mg,0.35mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(32mg,0.08mmol)和化合物418-5(46mg,0.07mmol)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物418(16.19mg)。
MS(ESI)M/Z:805.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.08-9.54(m,1H),8.34-8.12(m,1H),8.04-7.46(m,5H),6.97-6.63(m,1H),6.26-6.00(m,1H),4.76-4.46(m,1H),4.42-3.35(m,11H),3.30-3.00(m,4H),2.96-2.75(m,1H),2.74-2.63(m,3H),2.46-2.35(m,1H),2.31-2.10(m,1H),1.19-0.82(m,6H).
实施例419
(2S，4R)-4-(4-溴-2-(2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯)氨基)-1-(5-(甲胺基)烟酰胺基)-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物419-1(100mg,0.564mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入三乙胺(114.26mg,1.13mmol)和甲基磺酰氯(77.6mg,0.677mmol)。然后该反应体系在室温下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入氯化铵水溶液(20mL)淬灭，混合液用二氯甲烷(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物419-2(150mg)。
MS(ESI)M/Z:256.2[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物419-2(140mg,0.548mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，向上述反应液中加入叠氮化钠(53.49mg,0.822mmol)。然后该反应体系升至80℃，搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物419-3(100mg).
MS(ESI)M/Z:203.1[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氢气保护，化合物419-3(30mg,0.148mmol)溶于四氢呋喃(2mL)中。随后，向上述反应液中加入10％钯/碳(10mg)。然后该反应体系在室温下搅拌6小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩。得到化合物419-4(30mg)。
MS(ESI)M/Z:176.2[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将化合物(2S,4R)-4-(4-溴-2-(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯)氨基)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-羧酸(60mg,0.105mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入化合物419-4(18.5mg,0.105mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(59.73mg,0.157mmol)和N,N-二异丙基乙胺(54.28mg,0.42mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物419-5(70mg)。
MS(ESI)M/Z:753.3[M+23] +。
步骤E：在室温条件下，氮气保护，将化合物419-5(70mg,0.096mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中。随后，缓慢滴加4M盐酸-1,4-二氧六环溶液(2mL)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩。得到化合物419-6(60mg,收率99.35％)。
步骤F：在室温条件下，将化合物419-6(80mg,0.127mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入5-(甲胺基)烟酸(19.34mg,0.127mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-
N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(72.3mg,0.190mmol)和N,N-二异丙基乙胺(82.14mg,0.635mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)
萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相柱纯化得到标题化合物419(27.5mg)。
MS(ESI)M/Z:764.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.87-8.75(m,0.8H),8.69(d,J＝4.8Hz,0.8H),8.63(d,J＝4.8Hz,0.2H),8.57-8.48(m,0.2H),8.26(s,0.2H),8.21(d,J＝2.0Hz,0.8H),8.05-7.94(m,1H),7.90-7.53(m,4.8H),7.16-7.03(m,0.2H),6.91-6.80(m,0.8H),6.71(s,0.2H),6.24-6.08(m,1H),4.76-3.95(m,5H),3.93-3.72(m,1H),3.70-3.40(m,3H),3.26-3.10(s,1H),2.90-2.64(m,4H),2.48-2.14(m,3H),1.16-0.86(m,6H).
实施例420
(2S，4R)-N-(4-溴-1-环丙基-1H-吡唑-3-基)-4-(4-溴-2-(2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯)氨基)-1-(5-(甲胺基)烟酰胺基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，氧气保护，将化合物420-1(525mg,2.73mmol)、环丙基硼酸(258mg,3.0mmol)、吡啶(216mg,2.73mmol)、碳酸钠(435mg,4.1mmol)溶于干燥的二氧六环(14mL)中，继续搅拌0.5小时。随后，向上述溶液中加入醋酸铜(498mg,2.73mmol)，并在70℃条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物420-2(56mg)。
MS(ESI)M/Z:232.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物420-2(56mg,0.24mmol)溶于乙醇(2mL)和水(2mL)中。随后，向上述溶液中依次加入铁粉(68mg,1.2mmol)和氯化铵(65mg,1.2mmol)。然后该反应体系在70℃条件下搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩得到化合物420-3(45mg)。
MS(ESI)M/Z:202.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将(2S,4R)-4-(4-溴-2-(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯)氨基)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-羧酸(376mg,0.66mmol)溶于干燥的二氯甲烷(6.5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入吡啶(43mg,0.55mmol)和二氯亚砜(31mg,0.26mmol)，并继续搅拌2小时。然后向上述溶液中依次加入化合物420-3(45mg,0.22mmol)和三乙胺(67mg,0.66mmol)，并搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物420-4(24mg)。
MS(ESI)M/Z:653.8[M-99]。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物420-4(24mg,0.03mmol)溶于干燥的二氯甲烷(0.2mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.1mL)。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物420-5(24mg)。
MS(ESI)M/Z:653.8[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，将5-(甲胺基)烟酸(7mg,0.05mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(0.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(23mg,0.06mmol)、N,N-二异丙基乙胺(26mg,0.2mmol)和化合物420-5(24mg,0.04mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(9mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物420(11.16mg)。
MS(ESI)M/Z:787.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.03-9.59(m,1H),8.32-8.14(m,1H),8.10-7.49(m,5H),6.97-6.61(m,1H),6.26-5.84(m,1H),4.79-4.46(m,1H),4.43-3.39(m,8H),3.29-3.07(m,1H),2.91-2.66(m,4H),2.46-2.37(m,1H),2.31-2.12(m,1H),1.20-0.81(m,10H).
实施例422
(5-溴-2-(3R，SR)-5-甲氧基-1-(5-(甲胺基)烟碱酰)哌啶-3-基)氨基)-3-硝基苯)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在0℃条件下，将化合物422-1(25g,191mmol)溶于甲醇(900mL)中。随后，向上述溶液中缓慢滴加二氯亚砜(80g,669mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩得到化合物422-2(27g,收率97.5％)。
MS(ESI)M/Z:146.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，将化合物422-2(27g,186.2mmol)溶于二氯甲烷(480mL)中。随后，将上述溶液降至0℃，依次加入三乙胺(56.3g,558.6mmol)和溴化苄(37.7g,223.4mmol)。然后该反应体系在50℃条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，向所得残余物中加入水(200mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(200mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物422-3(31g,收率70.9％)。
MS(ESI)M/Z:236.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物422-3(31g,131.9mmol)溶于二氯甲烷(500mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入三乙胺(39.9g,395.7mmol)、叔丁基二甲基氯硅烷(23.9g,158.3mmol)和4-二甲氨基吡啶(158.6mg,1.3mmol)。然后该反应体系在50℃条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩后，向所得残余物中加入水(250mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(250mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(200mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物422-4(21g,收率45.5％)。
MS(ESI)M/Z:350.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物422-4(21g,60.0mmol)溶于无水四氢呋喃(180mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢加入硼氢化锂(3.27g,150.0mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢加入冰水(150mL)中淬灭，混合液用二氯甲烷(150mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物422-5(14g,收率72.7％)。
MS(ESI)M/Z:322.0[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，氮气保护，将化合物422-5(14g,43.6mmol)溶于无水四氢呋喃(150mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入三乙胺(13.2g,130.8mmol)和三氟乙酸酐(13.7g,65.4mmol)。然后该反应体系在90℃条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢加入冰水(150mL)中淬灭，混合液用二氯甲烷(150mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物422-6(7.3g,收率52.1％)。
MS(ESI)M/Z:322.0[M+H] +。
步骤F：在室温条件下，将化合物422-6(850mg,2.64mmol)溶于无水乙醇(13mL)中。随后，向上述溶液中加入10％钯/碳(85mg)。然后该反应体系置换氢气三次，继续搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，反应液过滤，减压浓缩得到化合物422-7粗品(610mg,)。
MS(ESI)M/Z:232.2[M+H] +。
步骤G：在室温条件下，氮气保护，将化合物422-7(610mg,2.64mmol)溶于二氯甲烷(13mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入三乙胺(799.9mg,7.9mmol)和二碳酸二叔丁酯(863.3g,3.96mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢加入冰水(15mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物422-8(600mg,收率68.6％)。
MS(ESI)M/Z:354.0[M+23]。
步骤H：在室温条件下，氮气保护，将化合物422-8(600mg,1.81mmol)溶于二氯甲烷(9mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入三乙胺(548.4mg,5.4mmol)和甲基磺酰氯(310.0mg,2.71mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢加入冰水(10mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(6mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到化合物422-9(700mg,收率95.1％)。
步骤I：在室温条件下，氮气保护，将化合物422-9(700mg,1.71mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(8mL)中。随后向上述溶液中加入叠氮化钠(330.4mg,5.1mmol)。然后该反应体系在70℃条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液缓慢加入水(25mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物422-10(320mg,收率52.6％)。
MS(ESI)M/Z:257.2[M-99]。
步骤J：在室温条件下，将化合物422-10(320mg,0.90mmol)溶于无水四氢呋喃(10mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢加入1M的四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(0.99mL,0.99mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液缓慢加入水(15mL)淬灭，混合液用二氯甲烷(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物422-11(150mg,收率68.8％)。
MS(ESI)M/Z:143.2[M-99]。
步骤K：在室温条件下，将化合物422-11(150mg,0.62mmol)溶于碘甲烷(3mL)中。随后，向上述溶液中加入氧化银(214.8mg,0.93mmol)。然后该反应体系在60℃条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到化合物422-12(130mg,收率81.9％)。
MS(ESI)M/Z:157.2[M-99]。
步骤L：在室温条件下，将化合物422-12(130mg,0.51mmol)溶于无水甲醇(5mL)中。随后，向上述溶液中加入10％钯/碳(25mg)，然后该反应体系置换氢气三次，继续搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，减压浓缩。得到化合物422-13粗品(130mg)。
MS(ESI)M/Z:231.2[M+H] +。
步骤M：在室温条件下，氮气保护，将化合物422-13(130mg,0.56mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2.5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(201mg,0.56mmol)和N,N-二异丙基乙胺(216.7mg,1.68mmol)。然后该反应体系在80℃条件下搅拌12小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(8mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物422-14(95mg,收率29.7％)。
MS(ESI)M/Z:471.2[M-99]。
步骤N：在室温条件下，氮气保护，将化合物422-14(95mg,0.16mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.4mL)和二氯甲烷(0.8mL)中。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物422-15粗品(78mg)。
MS(ESI)M/Z:471.0[M+H] +。
步骤O：在室温条件下，将化合物422-15(78mg,0.16mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入5-(甲氨基)烟酸(24mg,0.16mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(68.4mg,0.18mmol)和N,N-二异丙基乙胺(61.9mg,0.48mmol)。然后该反应体系继续搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物422(30.2mg,收率31.2％)。
MS(ESI)M/Z:605.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.23(s,1H),7.98(s,1H),7.78-7.35(m,3H),6.77(d,J＝16.8Hz,1H),6.15(s,1H),4.64-3.98(m,2H),3.92-3.36(m,6H),3.30-2.80(m,6H),2.70(d,J＝4.8Hz,3H),2.47-1.63(m,3H),1.28-0.87(m,6H).
实施例424
(2S，4R)-N-(4-溴-1-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-基)-4-(4-溴-2-(2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-1-(5-(甲胺基)烟酰胺基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物424-1(213mg,1.73mmol)、4-溴-3-硝基-1H-吡唑(300mg,1.57mmol)、碳酸钠(250mg,2.36mmol)和吡啶(124mg,1.57mmol)溶于1,4-二氧六环(8mL)中，并搅拌30分钟。然后向上述溶液中加入醋酸铜(286mg,1.57mmol)，并在70℃条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得混合物用硅胶柱层析纯化得到化合物424-2(110mg)。
MS(ESI)M/Z:269.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物424-2(110mg,0.41mmol)、铁粉(115mg,2.05mmol)和氯化铵固体(110mg,2.05mmol)溶于EtOH/H 2O(v/v,1/1,2.1mL)中。然后该反应液在90℃条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到化合物424-3(80mg)。
MS(ESI)M/Z:239.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将化合物(2S,4R)-4-(4-溴-2-(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯)氨基)-1- (叔丁氧羰基)吡咯烷-2-羧酸(80mg,0.14mmol)、吡啶(28mg,0.35mmol)和二氯亚砜(20mg,0.17mmol)溶于二氯甲烷(0.7mL)中，并搅拌1小时。然后向上述溶液中依次加入化合物424-3(40mg,0.17mmol)和三乙胺(43mg,1.4mmol)，并继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得混合物用硅胶柱层析纯化得到化合物424-4(40mg)。
MS(ESI)M/Z:690.9[M-99]。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物424-4(40mg,0.05mmol)溶于二氯甲烷(0.5mL)中。随后，在冰水浴条件下，向上述溶液中加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.25mL)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将上述反应液减压浓缩，得到化合物424-5(25mg)。
MS(ESI)M/Z:691.0[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，将化合物424-5(8mg,0.05mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，在冰水浴条件下，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(26mg,0.2mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(19mg,0.05mmol)和(2S,4R)-N-(4-溴-1-(吡啶-3-基)-1H-吡唑-3-基)-4-(4-溴-2-(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)吡咯烷-2-甲酰胺(25mg,0.04mmol)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(60mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物424(1.86mg)。
MS(ESI)M/Z:824.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.42-9.95(m,1H),9.06(d,J＝2.4Hz,0.75H),9.01(d,J＝2.0Hz,0.25H),8.88(d,J＝2.8Hz,0.75H),8.83(s,0.25H),8.58-8.48(m,1H),8.28-8.11(m,2H),8.03-7.96(m,1H),7.91-7.73(m,1H),7.70-7.44(m,3H),6.93-6.63(m,1H),6.26-6.06(m,1H),4.86-3.36(m,7H),3.15-3.01(m,1H),2.93-2.79(m,1H),2.75-2.68(m,3H),2.63-2.55(m,1H),2.43-2.36(m,1H),2.34-2.19(m,1H),1.12-0.87(m,6H).
实施例427
(2S，4R)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯)氨基)-1-(5-(甲胺基)烟酰胺基)-N-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在0℃条件下，将化合物366-3(108mg,0.19mmol)和2-三氟甲基-4-氨基吡啶(30mg,0.19mmol)溶于二氯甲烷(1.5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入吡啶(45mg,0.57mmol)和1-丙基磷酸酐(154mg,0.29mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物427-2(100mg)。
MS(ESI)M/Z:715.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，将化合物427-2(100mg,0.14mmol)溶于二氯甲烷(1.4mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.7mL，2.80mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS显示原料消失后，将反应液减压浓缩。得到化合物427-3(86mg)。
MS(ESI)M/Z:615.0[M+H] +。
步骤C：在0℃条件下，将化合物427-3(80mg,0.13mmol)和5-(甲氨基)烟酸(24mg,0.16mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.3mL)中。随后，向上述溶液中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(61mg,0.16mmol)和N,N-二异丙基乙胺(84mg,0.65mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物427(36.66mg)。
MS(ESI)M/Z:749.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.16-10.89(m,0.8H),10.67(s,0.2H),8.71-8.57(m,1H),8.47-8.16(m,1.8H),8.15-7.98(m,1H),7.95-7.82(m,1H),7.81-7.48(m,3.2H),6.97-6.81(m,0.8H),6.66(s,0.2H),6.29-6.13(m,0.8H),6.11-6.00(m,0.2H),4.81-4.64(m,0.8H),4.57-4.44(m,0.2H),4.43-3.36(m,6.5H),3.30-3.14(m,0.5H),2.94-2.53(m,4H),2.49-2.15(m,3H),1.13-0.83(m,6H).
实施例428
(2S，4R)-4-(4-溴-2-(2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯)氨基)-1-(5-(甲胺基)烟酰胺基)-N-(2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，氮气保护，将化合物366-3(245mg,0.43mmol)、2-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(70mg,0.43mmol)、吡啶(170mg,2.15mmol)溶于干燥的1,4-二氧六环(2mL)中。随后，将反应体系溶液降温至0℃，加入三氯氧磷(198mg,1.29mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌0.5小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物428-2(120mg)。
MS(ESI)M/Z:616.0[M-99]。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物428-2(120mg,0.03mmol)溶于干燥的二氯甲烷(0.8mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.4mL)。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物428-3(110mg)。
MS(ESI)M/Z:616.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将5-(甲胺基)烟酸(33mg,0.22mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺溶液(4mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(103mg,0.27mmol)、N,N-二异丙基乙胺(116mg,0.9mmol)和化合物428-3(110mg,0.18mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(9mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物428(43.18mg)。
MS(ESI)M/Z:750.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.79-11.61(m,0.8H),11.48-11.34(m,0.2H),9.00-8.84(m,1H),8.40-7.46(m,6H),6.99-6.77(m,0.8H),6.66(s,0.2H),6.21(s,0.8H),6.10(s,0.2H),4.96-4.63(m,1H),4.48-3.42(m,6.2H),3.28-3.07(m,0.8H),2.90-2.68(m,3.5H),3.59-2.54(m,0.5H),2.49-2.09(m,3H),1.21-0.81(m,6H).
实施例434
(2S，4R)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-N-((1S，3R)-3-甲氧基环戊基)-1-(5-(甲胺基)烟碱基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物434-1(200mg,1.5mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，加入氢化钠(125mg,3.1mmol)，并搅拌30分钟。然后向上述反应溶液中加入溴化苄(590mg,3.5mmol)，并在室温条件下继续搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢加入冰水(50mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物434-2(300mg)。
MS(ESI)M/Z:282.2[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物434-2(320mg,1.2mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，加入氢化钠(90mg,2.2mmol)，并搅拌30分钟。然后向上述反应溶液中加入碘甲烷(310mg,2.2mmol)，并在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢滴加入冰水(40mL)中淬灭，混合液用二氯甲烷(40mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物434-3(320mg)。
MS(ESI)M/Z:296.2[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将化合物434-3(100mg,0.34mmol)溶于甲醇(2.0mL)中。随后，向上述溶液中加入10％钯/碳(20mg)。然后该反应体系在氢气气氛下继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，减压浓缩得到化合物434-4(35mg)。
MS(ESI)M/Z:116.2[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将化合物434-4(35mg,0.30mmol)和(2S,4R)-4-(4-溴-2-(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯)氨基)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-羧酸(171mg,0.3mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(138mg,0.36mmol)和N,N-二异丙基乙胺(120mg,0.90mmol)。然后该反应体系继续搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。 所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物434-5(124mg)。
MS(ESI)M/Z:568.0[M-99]。
步骤E：在室温条件下，氮气保护，将化合物434-5(122mg,0.18mmol)溶于干燥的二氯甲烷(2mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.8mL)。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物434-6(110mg)。
MS(ESI)M/Z:567.8[M+H] +。
步骤F：在室温条件下，将化合物434-6(110mg,0.18mmol)和5-(甲胺基)烟酸(30mg,0.20mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(100mg,0.26mmol)和N,N-二异丙基乙胺(85mg,0.6mmol)。然后该反应体系继续搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(35mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物434(15.5mg)。
MS(ESI)M/Z:702.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.26(d,J＝2.0Hz,0.4H),8.21(s,0.6H),8.06-7.90(m,1.6H),7.86-7.53(m,3.4H),6.89-6.76(m,0.6H),6.67(s,0.4H),6.24-6.12(m,0.6H),6.11-6.02(m,0.4H),4.61-4.11(m,2.6H),4.09-3.90(m,1H),3.88-3.35(m,6H),3.27-3.06(m,3.4H),2.96-2.64(m,4H),2.63-2.54(m,0.4H),2.48-2.37(m,0.6H),2.34-1.96(m,3H),1.91-1.18(m,5H),1.16-0.86(m,6H).
实施例436
(2S，4R)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-1-(5-(甲基氨基)烟酰基)-N-(6-(三氟甲基)嘧啶-4-基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物366-3(153.9mg,0.27mmol)和6-(三氟甲基)嘧啶-4-胺(30mg,0.18mmol)溶于二氯甲烷(0.5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入三氯氧磷(82.6mg,0.54mmol)和 吡啶(71mg,0.9mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(6mL)淬灭，混合液用二氯甲烷(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物436-2(124.7mg,收率96％)。
MS(ESI)M/Z:616.0[M-99]。
步骤B：在室温条件下，将化合物436-2(124.7mg,0.17mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中。随后，向上述溶液中加入4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(1mL)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，反应液减压浓缩得到化合物436-3粗品。
MS(ESI)M/Z:616.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将5-(甲氨基)烟酸(40mg,0.27mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.24mL,1.33mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(140mg,0.37mmol)和化合物436-3(164mg,0.27mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(6mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物436(53.01mg,收率26.6％)。
MS(ESI)M/Z:750.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.978(s,0.8H),11.48(s,0.2H),9.16(s,0.8H),9.10(s,0.2H),8.56-8.40(m,0.8H),8.39-8.13(m,1.2H),8.05-7.99(m,0.8H),7.94-7.81(m,1H),7.80-7.53(m,2.2H),6.95-6.83(m,0.8H),6.65(s,0.2H),6.27-6.14(m,0.8H),6.13-6.02(m,0.2H),4.87(s,0.8H),4.71(s,0.2H),4.51-3.75(m,3H),3.72-3.44(m,3H),3.29-3.10(m,1H),2.92-2.68(m,3.4H),2.65-2.55(m,0.6H),2.46-2.12(m,3H),1.19-0.83(m,6H).
实施例437
(2S，4R)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-N-((S)-1-甲基-5-氧吡咯烷-3-基)-1-(5-(甲氨基)烟酰胺基)吡咯烷基-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在0℃条件下，氮气保护，将化合物437-1(80mg,0.40mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。随后，向上述溶液中加入氢化钠(36.0mg,0.6mmol)，并搅拌30分钟。然后向上述溶液中加入碘甲烷(113.6mg,0.80mmol)，升至室温，继续搅拌2小时。
LCMS监测显示产物生成后，将反应液缓慢滴加入水(20mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(8mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物437-2(45mg,收率52.5％)。
MS(ESI)M/Z:215.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物437-2(45mg,0.21mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.5mL)和二氯甲烷(1.0mL)中。然后反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物437-3粗品(24mg)。
MS(ESI)M/Z:115.2[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物437-3(24mg,0.21mmol)和(2S,4R)-4-(4-溴-2-(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯)氨基)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-羧酸(123.9mg,0.21mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(117.8mg,0.31mmol)和N,N-二异丙基乙胺(81.3mg,0.63mmol)。然后反应体系在0℃下搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物437-4(110mg,收率78.6％)。
MS(ESI)M/Z:567.0[M-99]。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物437-4(55mg,0.08mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(1.0mL)和二氯甲烷(2.0mL)中。然后反应体系在室温下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物437-5(44mg,收率97.1％)。
MS(ESI)M/Z:567.0[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，将化合物437-5(44mg,0.08mmol)和5-(甲胺基)烟酸(12.0mg,0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(38mg,0.10mmol)和N,N-二异丙基乙胺(31.0mg,0.24mmol)。然后该反应体系在0℃下搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(25mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物437(25.3mg,收率45.2％)。
MS(ESI)M/Z:701.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.58-8.41(m,0.7H),8.38-8.13(m,1.3H),8.07-7.94(m,1H),7.90-7.52(m,3H),6.93-6.77(m,0.65H),6.68(s,0.35H),6.27-6.06(m,1H),4.58-3.93(m,4H),3.91-3.38(m,5.7H),3.29-3.02(m,1.3H),3.01-2.59(m,8H),2.48-1.99(m,3.7H),1.86-1.68(m,0.3H),1.24-1.10(m,3H),1.09-0.83(m,3H).
实施例438
(2S，4R)-N-(4-溴-1-(2，6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-基)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-1-(5-(甲氨基)烟碱基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在0℃条件下，氮气保护，将化合物438-1(500mg,3.8mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入吡啶(1.2g,15.2mmol)、对甲苯磺酰氯(1.45g,7.60mmol)和4-二甲氨基吡啶(46mg,0.38mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物438-2(500mg,收率46％)。
MS(ESI)M/Z:307.0[M+23] +。
步骤B:在室温条件下，氮气保护，将化合物438-2(200mg,0.65mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3.3mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入1,4-二溴-3-硝基-1H-吡唑(78mg,0.41mmol)和碳酸钾(113mg,0.82mmol)。然后该反应体系在80℃搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂:二氯甲烷/甲醇＝15/1)得到化合物438-3(60mg,收率30％)。
MS(ESI)M/Z:304.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物438-3(60mg,0.20mmol)溶于乙醇(3mL)和水(3mL)中。随后，向上述溶液中加入铁粉(56mg,1mmol)和氯化铵(56mg,1mmol)。然后该反应体系在90℃下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液热过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物438-4(40mg,收率73％)。
MS(ESI)M/Z:274.4[M-99]。
步骤D：在室温条件下，将化合物438-4(40mg,0.15mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入(2S,4R)-4-(4-溴-2-(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯)氨基)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-羧酸(86mg,0.15mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(76mg,0.20mmol)和N,N-二异丙基乙胺(97mg,0.75mmol)。然后该反应体系继续搅拌5分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃 取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物438-5(70mg,收率64％)。
MS(ESI)M/Z:728.8[M+H] +。
步骤E:在室温条件下，氮气保护，将化合物438-5(70mg,0.80mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.4mL)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到438-6(60mg,收率73％)。
步骤F：在室温条件下，将化合物438-6(60mg,0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入5-甲氨基烟酸(11mg,0.07mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(37mg,0.10mmol)和N,N-二异丙基乙胺(36mg,0.28mmol)。然后该反应体系继续搅拌5分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物438(13.44mg,收率19％)。
MS(ESI)M/Z:682.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ10.23-9.42(m,1H),8.33-7.38(m,6H),6.98-6.59(m,1H),6.36-5.96(m,1H),4.88-3.41(m,10H),3.25-3.04(m,1H),2.97-2.61(m,4H),2.46-2.11(m,5H),1.67-1.40(m,2H),1.21-0.82(m,12H).
实施例439
(5-溴-2-(((3S，4S)-4-甲氧基-1-(3-甲基-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-4-羰基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物439-1(1g,4.7mmol)溶于乙醇(30mL)中。随后，向上述溶液中依次加入三乙胺(6.5mL,47mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(575mg,0.7mmol)。氢气保护，然后该反应体系在85℃，30MPa压力条件下搅拌20小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤并用甲醇(20mL×3次)洗涤，所得滤液用硅胶柱层析纯化得到产物439-2(808mg,，收率83％)。
MS(ESI)M/Z:206.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物439-2(868mg,4.21mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中。随后，将氢氧化锂(530mg,12.6mmol)溶于水(10mL)并加入至上述溶液中。然后该反应体系继续搅拌4小时。
LCMS监测显示原料消失后，在0℃条件下，向反应液中滴加稀盐酸调节pH至4，随后，将上述溶液减压浓缩,向所得残余物中加入甲醇(2mL)和水(15mL)，过滤得到化合物439-3(702mg,收率96％)。
MS(ESI)M/Z:178.2[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物439-3(60mg,0.33mmol)和(5-溴-2-((3S,4S)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(103mg,0.23mmoL)溶于乙腈(1.6mL)中。随后，将上述溶液中依次加入N-甲基咪唑(94mg,1.15mmol)和四甲基氯代脲六氟磷酸酯(92mg,0.33mmol)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×2次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物439(55.39mg,收率47％)。
MS(ESI)M/Z:616.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.50(s,1H),9.13-8.94(m,1H),8.33-8.00(m,2H),7.80-7.31(m,2H),4.52-4.34(m,0.4H),4.29-3.42(m,7.6H),3.31-3.24(m,2H),3.24-3.02(m,2.7H),2.99-2.70(m,1.3H),2.61-2.54(m,0.3H),2.45-2.30(m,3.7H),1.23-0.93(m,5H),0.89-0.71(m,1H).
实施例440
((3S，4S)-3-((4-溴-2-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-6-硝基苯基)氨基)-4-甲氧基吡咯烷-1-基)(5-(甲氨基)吡啶-3-基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物440-1(1.5g,3.41mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(17mL)中。随后，向上述溶液中加入叠氮钠(443mg,6.82mmol)。然后该反应体系在80℃搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所 得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物440-2(1g,收率60％)。
MS(ESI)M/Z:384.40[M-99]。
步骤B:在室温条件下，氮气保护，将化合物440-2(40mg,0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入碘甲烷(12mg,0.08mmol)和碳酸钾(22mg,0.16mmol)。然后该反应体系在室温下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物440-3(30mg,收率75％)。
MS(ESI)M/Z:398.5[M-99]。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物440-3(40mg,0.08mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.4mL)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩得到440-4(30mg,收率94％)。
MS(ESI)M/Z:398.4[M+H] +。
步骤E:在室温条件下，将化合物440-4(30mg,0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入5-甲氨基烟酸(12mg,0.08mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(43mg,0.11mmol)和N,N-二异丙基乙胺(45mg,0.32mmol)。然后该反应体系继续搅拌5分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物440(10.45mg,收率25％)。
MS(ESI)M/Z:531.8[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.32-8.15(m,2H),8.05-7.93(m,1H),δ7.77(d,J＝1.6Hz,0.45H),7.75(d,J＝1.6Hz,0.55H),7.40(d,J＝7.6Hz,0.45H),7.28(d,J＝8.8Hz,0.55H),6.84(t,J＝2.0Hz,0.45H),6.80(t,J＝2.0Hz,0.55H),6.17-6.06(m,1H),4.49(s,1.6H),4.47(s,1.4H),3.89-3.82(m,0.6H),3.81-3.46(m,4.2H),3.43-3.35(m,1.2H),3.22(s,1.6H),3.12(m,1.4H),2.70(d,J＝4.8Hz,3H).
实施例441
(2S，4R)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基-N-(6-氯嘧啶-4-基)-1-(5-(甲基氨基)烟酰基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物366-3(150mg,0.26mmol)和6-氯嘧啶-4-胺(31.02mg,0.17mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中。随后，向上述溶液中依次加入三氯氧磷(78mg,0.51mmol)和吡啶(0.07mL 0.85mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用二氯甲烷(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物441-2(110mg,收率95％)。
MS(ESI)M/Z:583.0[M-99]。
步骤B：在室温条件下，将化合物441-2(110mg,0.16mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中。随后，向上述溶液中加入4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(1mL)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物441-3(90mg,收率96％)。
MS(ESI)M/Z:583.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将5-(甲氨基)烟酸(15.6mg,0.1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.07mL,0.43mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(45mg,0.12mmol)和化合物441-3(50mg,0.09mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(6mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物441(26.63mg,收率43.3％)。
MS(ESI)M/Z:716.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.39(s,1H),8.81(s,0.8H),8.74(s,0.2H),8.32-7.72(m,4H),7.70-7.56(m,2H),6.94-6.81(m,0.8H),6.65(s,0.2H),6.27-6.15(m,0.8H),6.13-6.05(s,0.2H),4.84(s,0.8H),4.72-4.55(m,0.2H),4.45-3.39(m,6.8H),3.26-3.17(m,0.2H),2.91-2.69(m,3H),2.65-2.54(m,1H),2.47-2.16(m,3H),1.19-0.82(m,6H).
实施例442
(2S，4R)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基-N-(2-氯嘧啶-4-基)-1-(5-(甲基氨基)烟酰基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物366-3(150mg,0.26mmol)和2-氯嘧啶-4-胺(31.02mg,0.17mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中。随后，向上述溶液中依次加入三氯氧磷(78mg,0.51mmol)和吡啶(0.07mL 0.85mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用二氯甲烷(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物442-2(76mg,收率66％)。
MS(ESI)M/Z:583.0[M-99]。
步骤B：在室温条件下，将化合物442-2(76mg,0.13mmol)溶于二氯甲烷(0.65mL)中。随后，向上述溶液中加入4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(0.65mL)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物442-3粗品(80mg)。
MS(ESI)M/Z:583.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将5-(甲氨基)烟酸(31.4mg,0.21mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.18mL,1.05mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(110mg,0.29mmol)和化合物442-3(80mg,0.13mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(6mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物442(4.31mg,收率4.6％)。
MS(ESI)M/Z:716.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.45(s,1H),8.64(d,J＝5.6Hz,1H),8.31-7.80(m,3.8H),7.70-7.53(m,2.2H),6.96-6.79(m,0.8H),6.65(s,0.2H),6.19(s,0.8H),6.08(s,0.2H),4.90-4.52(m,1H),4.45-3.42(m,6H),3.23-3.02(m,1H),2.91-2.69(m,3.5H),2.63-2.55(m,0.5H),2.46-2.16(m,3H),1.16-0.84(m,6H).
实施例443
(5-溴-2-((3S，4S)-4-甲氧基-1-(5-((甲基-d3)氨基)烟碱酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，氮气保护，将化合物443-1(1g,45.58mmol)、三乙胺3.72g,36.8mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(446mg,0.55mmol)溶于甲醇(18mL)中。然后该反应体系置换一氧化碳3次，在90℃条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，减压浓缩，向所得残余物中加水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物443-2(600mg,收率65％)。
MS(ESI)M/Z:253.2[M+H] +。
步骤B:在室温条件下，氮气保护，将化合物443-2(600mg,2.38mmol)溶于无水四氢呋喃(12mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，加入氢化钠(190mg,4.76mmol)，并搅拌30分钟。然后加入氘代碘甲烷(521mg,3.57mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将上述溶液降缓慢滴加到冰水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物443-3(359mg,收率56％)。
MS(ESI)M/Z:270.2[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物443-3(120mg,0.13mmol)溶于干燥的二氯甲烷溶液(2mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(1.1mL)。然后该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩，得到化合物443-4粗品(76mg)。
MS(ESI)M/Z:170.2[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将化合物443-4(76mg,0.45mmol)和氢氧化锂(95mg,2.25mmol)溶于四氢呋喃(1mL)、无水甲醇(0.5mL)和水(0.25mL)中。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将上述溶液降温至0℃，然后用1M的盐酸调节pH至3，减压浓缩，得到化合物443-5(39mg,收率56％)。
MS(ESI)M/Z:156.2[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，将化合物443-5(39mg,0.25mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(120mg,0.32mmol)、N,N-二异丙基乙胺(135mg,1.1mmol)和(5-溴-2-((3S,4S)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基((2R,6S)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(95mg,0.21mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(35mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物443(40.75mg,收率33％)。
MS(ESI)M/Z:594.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.29-8.18(m,1H),8.05-7.92(m,1H),7.90-7.60(m,2H),7.56-7.24(m, 1H),6.95-6.76(m,1H),6.17-6.03(m,1H),4.49-4.20(m,1H),4.15-3.37(m,8H),3.29-3.04(m,4H),2.99-2.69(m,1H),2.62-2.51(m,0.5H),2.47-2.36(m,0.5H),1.26-0.84(m,6H).
实施例444
(5-溴-2-(((3S，4S)-1-(3-氯-1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-4-羰基)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A:在室温条件下，将化合物444-1(1.8g,9.1mmol)、三乙胺(9.2g,91mmol)和[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(1.1g,1.36mmol)溶于乙醇(50mL)中。然后该反应体系置换一氧化碳3次，在90℃条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，向所得残余物中加水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物444-2(1.1g,收率65％)。
MS(ESI)M/Z:192.2[M+H] +。
步骤B:在室温条件下，氮气保护，将化合物444-2(800mg,4.19mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(21mL)中。随后，向上述溶液中加入N-氯代丁二酰亚胺(1.1g,8.38mmol)。然后该反应体系在40℃条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将上述溶液降缓慢滴加到冰水(80mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物444-3(200mg,收率21％)。
MS(ESI)M/Z:226.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将化合物444-3(35mg,0.16mmol)和氢氧化锂(33mg,0.78mmol)溶于四氢呋喃(1mL)、无水甲醇(0.5mL)和水(0.25mL)中。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将上述溶液降温至0℃，然后用1M的盐酸调节pH至3，减压浓缩，得到化合物444-4(30mg,收率94％)。
MS(ESI)M/Z:156.2[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物444-4(30mg,0.25mmol)、(5-溴-2-((3S,4S)-4-甲氧基吡咯 烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基((2R,6S)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(57mg,0.13mmol)、N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(110mg,0.39mmol)和N-甲基咪唑(53mg,0.65mmol)溶于乙腈(1mL)中。然后该反应体系在50摄氏条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(35mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(15mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物444(40.75mg,收率33％)。
MS(ESI)M/Z:636.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.13(s,1H),8.57-7.99(m,2H),7.84-7.32(m,2H),4.50-3.75(m,7H),3.17-2.70(m,6H),2.69-2.54(m,1H),2.45-2.23(m,1H),1.26-0.72(m,6H).
实施例445
(2S，4R)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-N-(5-溴嘧啶-2-yl)-1-(5-(甲氨基)烟酰基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤:
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物366-3(198mg,0.38mmol)和5-溴嘧啶-2-胺(50mg,0.29mmol)溶于二氯甲烷(1.45mL)中。随后，向上述溶液中依次加入三氯氧磷(133mg,0.87mmol)和吡啶(0.11mL 1.45mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(6mL)淬灭，混合液用二氯甲烷(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物445-2(213mg,收率86％)。
MS(ESI)M/Z:627.0[M-99]。
步骤B：在室温条件下，将化合物445-2(213mg,0.29mmol)溶于二氯甲烷1.5mL)中。随后，向上述溶液中加入4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(1.5mL)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物445-3(181mg,收率70％)。
MS(ESI)M/Z:627.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将5-(甲氨基)烟酸(52.8mg,0.35mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.26mL,1.45mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(154mg,0.41mmol)和化合物445-3(181mg,0.29mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(6mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物445(21.06mg,收率9.5％)。
MS(ESI)M/Z:762.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ11.03(s,0.7H),10.79(m,0.3H),8.89-8.64(m,2H),8.29-8.12(m,1H),8.00(s,1H),7.94-7.74(m,1.3H),7.72-7.53(m,2H),6.93-6.78(m,0.7H),6.66(s,0.3H),6.19(s,0.7H),6.08(s,0.3H),5.05-4.55(m,1H),4.43-3.41(m,6H),3.28-3.00(m,1H),2.92-2.56(m,4H),2.46–-1.99(m,3H),1.14-0.74(m,6H).
实施例446
(5-溴-2-((3S，4S)-1-(5-(甲氨基)烟碱基)-4-(吡啶-2-基甲氧基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在0℃、氮气保护下，将化合物446-1(70mg,0.29mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。随后，向上述溶液中加入氢化钠(17.3mg,0.43mmol)，并搅拌30分钟。然后向上述溶液中加入1-溴-2-甲氧基乙烷(120mg,0.87mmol)，升至室温，继续搅拌2小时。
LCMS监测显示产物生成后，将反应液缓慢滴加入水中(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(5mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物446-2(64mg,收率73.5％)。
MS(ESI)M/Z:323.2[M+Na] +。
步骤B：在室温条件下，将化合物446-2(64mg,0.21mmol)溶于甲醇(4mL)中。随后，向上述反应液中加入二氧化铂(12mg)。然后该反应体系在氢气气氛下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到化合物446-3粗品(59mg)。
MS(ESI)M/Z:275.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物446-3(59mg,0.21mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(75.6mg,0.21mmol)和N,N-二异丙基乙胺(80.0mg,0.62mmol)。然后该反应体系在80℃下搅拌12小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物446-4(65mg,收率50.4％)。
MS(ESI)M/Z:515.1[M-99]。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物446-4(65mg,0.11mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.5mL)和二氯甲烷(1.0mL)中。然后该反应体系在室温下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物446-5粗品(59mg)。
MS(ESI)M/Z:515.0[M+H] +。
步骤E：在室温下，将化合物446-5(59mg,0.11mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入5-(甲氨基)烟酸(16.5mg,0.11mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(50.1mg,0.13mmol)和N,N-二异丙基乙胺(42.6mg,0.33mmol)。然后该反应体系在0℃下搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物446(35.7mg,收率50.1％)。
MS(ESI)M/Z:649.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.24(s,1H),8.06-7.84(m,1H),7.82-7.22(m,3H),6.89-6.51(m,1H),6.29-5.88(m,1H),4.61-3.96(m,2H),3.95-3.38(m,9H),3.27-3.00(m,6H),2.99-2.78(m,1H),2.71(d,J＝4.4Hz,3H),2.47-2.25(m,1H),2.20-1.67(m,2H),1.37-0.80(m,6H).
实施例447
(5-溴-2-((3R，5S)-5-(甲氧基甲基)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2R，65)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在0℃条件下，氮气保护，将化合物447-1(1g,4.08mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中。随后，向上述溶液中加入三乙胺(824g,8.16mmol)和甲磺酰氯(808g,6.12mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。得到化合物447-2(1.2g,收率91％)。
MS(ESI)M/Z:346.0[M+23] +。
步骤B:在室温条件下，氮气保护，将化合物447-2(1.2g,3.52mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3.3mL)中。随后，向上述溶液加入叠氮钠(457mg,7mmol)。然后该反应体系在80℃搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物447-3(700mg,收率73％)。
MS(ESI)M/Z:293.1[M+23] +。
步骤C：在0℃条件下，氮气保护，将化合物447-3(700mg,2.58mmol)溶于四氢呋喃(18mL)中。随后，向上述溶液中缓慢加入四氢铝锂(2mL,5.16mmol)。然后该反应体系在0℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物447-4(600mg,收率96％)。
MS(ESI)M/Z:265.2[M+23] +。
步骤D：在0℃条件下，氮气保护，将化合物447-4(600mg,2.48mmol)溶于乙腈(10mL)中。随后，向上述溶液中加入氢化钠(994mg,8.28mmol)，并搅拌30分钟。然后向上述溶液加入碘甲烷(1.18g,8.28mmol)，继续搅拌0.5小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物447-5(90mg,收率13％)。
MS(ESI)M/Z:279.1[M+23] +。
步骤E:在室温条件下，将化合物447-5(90mg,0.35mmol)溶于甲醇(5mL)中。随后，向上述溶液中加入二氧化铂(9mg)。然后该反应体系在氢气气氛下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩。得到化合物447-6(30mg,收率37％)。
MS(ESI)M/Z:175.2[M-55]。
步骤F：在室温条件下，将化合物447-6(30mg,0.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2R,6S)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(47mg,0.13mmol)和N,N-二异丙基乙胺(50mg,0.39mmol)。然后该反应体系在80℃下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物447-7(50mg,收率67％)。
MS(ESI)M/Z:471.0[M-99]。
步骤G:在室温条件下，氮气保护，将化合物447-7(50mg,0.09mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.5mL)。然后该反应体系继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到447-8粗品(50mg)。
MS(ESI)M/Z:471.0[M+H] +。
步骤H:在室温条件下，将化合物447-8(50mg,0.11mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入5-甲氨基烟酸(16mg,0.11mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(59mg,0.15mmol)和N,N-二异丙基乙胺(71mg,0.55mmol)。然后该反应体系继续搅拌5分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物447(10.99mg,收率16％)。
MS(ESI)M/Z:603.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.34-8.08(m,1H),8.05-7.86(m,1H),7.84-7.35(m,3H),6.93-6.61(m,1H),6.13(s 1H),4.52-3.45(m,8H),3.30-2.91(m,1H),2.90-2.65(m,4H),2.44-2.32(m,1H),2.25-1.96(m,2H),1.27-0.81(m,6H).
实施例448
(5-溴-2-(3R，5R)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰基)-5-((R)-四氢呋喃-3-基)氧基)哌啶-3-氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物448-1(1g,11.4mmol)溶于二氯甲烷溶液(25mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢依次加入三乙胺(3.45g,34.2mmol)和甲基磺酰氯(1.95g,17.1mmol)。然后该反应体系在室温下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液浓缩后缓慢加入冰水(25mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到化合物448-2(1.2g,收率63.4％)。
1H NMR(400MHz,CDCl 3)δ5.36-5.26(m,1H),4.07-3.87(m,4H),3.05(s,3H),2.30-2.20(m,2H).
步骤B：在0℃条件下，氮气保护，将化合物448-2(760mg,4.57mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中。随后，向上述溶液中加入氢化钠(274mg,6.85mmol)，并搅拌30分钟。然后加入(3R,5R)-3-叠氮-5-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.1g,4.57mmol)，升至70℃，继续搅拌16小时。
LCMS监测显示产物生成后，将反应液缓慢滴加入水(20mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物448-3(30mg,收率2.1％)。
MS(ESI)M/Z:213.0[M-99]。
步骤C：在室温条件下，将化合物448-3(30mg,0.96mmol)溶于甲醇(2mL)中。随后，向上述反应液中加入二氧化铂(6mg)。然后该反应体系在氢气气氛下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到化合物448-4(25mg,收率91.1％)。
MS(ESI)M/Z:231.2[M-55]。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物448-4(25mg,0.09mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(36.1mg,0.1mmol)和N,N-二异丙基乙胺(39.0mg,0.3mmol)。然后该反应体系在80℃下搅拌12小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物448-5(35mg,收率62.1％)。
MS(ESI)M/Z:527.2[M-99]。
步骤E：在室温条件下，氮气保护，将化合物448-5(35mg,0.056mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.3mL)和二氯甲烷(0.6mL)中。然后该反应体系在室温下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物448-6粗品(32mg)。
MS(ESI)M/Z:527.0[M+H] +。
步骤F：在室温条件下，将化合物448-6(32mg,0.06mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入5-(甲氨基)烟酸(9.0mg,0.06mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(26.6mg,0.07mmol)和N,N-二异丙基乙胺(23.2mg,0.18mmol)。然后该反应体系在0℃下搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物448(14.6mg,收率36.8％)。
MS(ESI)M/Z:660.8[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.32-8.07(m,1H),8.03-7.84(m,1H),7.82-7.18(m,3H),6.95-6.65(m,1H),6.26(s,1H),4.60-3.93(m,3H),3.89-3.46(m,10H),3.19-2.77(m,3H),2.72(s,3H),2.45-2.36(m,1H),2.12-1.58(m,4H),1.20-1.08(m,3H),1.01(brs,3H).
实施例449
(5-溴-2-(((3S，4S)-4-甲氧基-1-(2-甲基-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-羰基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉代)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在0℃条件下，将化合物449-1(2.5g,18.11mmol)溶于浓硫酸(24mL)中。随后，向上述溶液中加入硝酸钾(1.8g,18.11mmol)，升至30℃，搅拌30分钟，再升温到70℃，继续搅拌3小时。然后将反应体系冷却到0℃，加入乙醇(9.5mL)，升至60℃，搅拌18小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液滴加到冰的到醋酸钾溶液中淬灭，再用饱和的碳酸氢钠水溶液调节pH为7～8。混合液用乙酸乙酯(100mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(500mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物449-2(880mg,收率23％)。
MS(ESI)M/Z:212.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，将化合物449-2(880mg,4.17mmol)溶于乙醇(21mL)中。随后，向上述溶 液中加入10％钯/碳(88mg)。然后该反应体系在氢气氛围下继续搅拌6小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到化合物449-3(725mg,收率95.6％)。
MS(ESI)M/Z:182[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将化合物449-3(245mg,1.35mmol)和1,1,1-三乙氧基乙烷(2.18g,13.5mmol)溶于醋酸(2.5mL)中。然后该反应体系在120℃条件下搅拌8小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物449-4(231mg,收率83％)。
MS(ESI)M/Z:206.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将化合物449-4(231mg,1.13mmol)溶于四氢呋喃(5.6mL)和水(2.8mL)中。随后，向上述溶液中加入氢氧化锂(94mg,2.25mmol)。然后该反应体系继续搅拌8小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物449-5(197mg,收率98％)。
MS(ESI)M/Z:178.0[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，将化合物449-5(63mg,0.36mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.2mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.13mL,0.72mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(182mg,0.48mmol)和(5-溴-2-(((3S,4S)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(109mg,0.24mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(3mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物449(4.67mg,收率3.2％)。
MS(ESI)M/Z:616.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.13-12.63(m,1H),8.94-8.74(m,1H),8.53-8.12(m,2H),7.83-7.25(m,2H),4.54-3.51(m,7H),3.31-2.76(m,6H),2.66-2.53(m,3H),2.45-1.70(m,1H),1.30-0.63(m,6H).
实施例450
(2S，4R)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-1-(5-(甲氨基)烟碱基)-N-((2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)甲基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物450-1(1.0g,5.49mmol)溶于甲醇(50mL)中。随后，向上述溶液中依次加入醋酸钾(808.2mg,8.24mmol)、1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(4.0g,5.49mmol)，然后该反应体系在一氧化碳气氛、80℃条件下搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，减压浓缩。向所得残余物中加入水(50mL)淬灭，混合液用二氯甲烷(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(40mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物450-2(370mg,收率32.7％)。
MS(ESI)M/Z:207.0[M+H] +。
步骤B：在0℃条件下，氮气保护，将化合物450-2(370mg,1.80mmol)溶于四氢呋喃(10mL)和乙醇(1mL)中。随后，向上述溶液中加入硼氢化钠(138mg,3.6mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢滴加入水(15mL)中淬灭，混合液用二氯甲烷(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物450-3(120mg,收率37.4％)。
MS(ESI)M/Z:179.0[M+H] +。
步骤C：在0℃条件下，氮气保护，将化合物450-3(120mg,0.67mmol)溶于无水四氢呋喃(3.5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入邻苯二甲酰亚胺(191.1mg,1.3mmol)、三苯基膦(340mg,1.3mmol)和偶氮二甲酸二异丙酯(203.0mg,1.0mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌12小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用二氯甲烷(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物450-4(150mg,收率72.9％)。
MS(ESI)M/Z:308.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物450-4(60mg,0.20mmol)溶于甲醇(1.0mL)中。随后，向上述溶液中加入水合肼(50.0mg,1.0mmol)。然后该反应体系在70℃条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到化合物450-5(12mg,收率33.8％)。
步骤E：在室温条件下，将化合物450-5(12mg,0.067mmol)和(2S,4R)-4-(4-溴-2-(2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯)氨基)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-羧酸(41.0mg,0.067mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺 (1.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(31.9mg,0.084mmol)和N,N-二异丙基乙胺(25.9mg,0.20mmol)。然后该反应体系继续搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入冰水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物450-6(32mg,收率65.5％)。
MS(ESI)M/Z:629.5[M-99]。
步骤F：在室温条件下，氮气保护，将化合物450-6(32mg,0.044mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.5mL)和二氯甲烷(1.0mL)中。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物450-7(30mg,收率108.4％)。
MS(ESI)M/Z:630.0[M+H] +。
步骤G：在室温条件下，将化合物450-7(30mg,0.044mmol)和5-(甲胺基)烟酸(6.7mg,0.044mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(19.0mg,0.05mmol)和N,N-二异丙基乙胺(16.8mg,0.13mmol)。然后该反应体系继续搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物450(17.2mg,收率51.2％)。
MS(ESI)M/Z:763.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.17-8.75(m,2H),8.35-8.16(m,1H),8.10-7.94(m,1H),7.94-7.45(m,4H),6.98-6.80(m,0.8H),6.72(s,0.2H),6.36-6.10(m,1H),4.75-3.47(m,9H),3.30-3.07(m,1H),2.89-2.63(m,4H),2.44-2.12(m,3H),1.14-0.77(m,6H).
实施例451
(5-溴-2-((3S，4S)-4-(甲氧基-d 3)-1-(5-((甲基-d 3)氨基)烟碱酰)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物451-1(200mg,0.88mmol)和氘代碘甲烷(1.02g,7.04mmol)溶于乙 腈(3.0mL)和水(0.6mL)中。随后，加入氧化银(600mg,2.59mmol)。然后该反应体系在60℃下继续搅拌48小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(25mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物451-2(165mg,收率76.7％)。
MS(ESI)M/Z:146.0[M-99]。
步骤B：在室温条件下，将化合物451-2(100mg,0.41mmol)溶于甲醇(2.0mL)中。随后，向上述溶液加入二氧化铂(30mg)。然后该反应体系在氢气气氛下室温搅拌2个小时。
LCMS显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到化合物451-3粗品(100mg)。
MS(ESI)M/Z:120.2[M-99]。
步骤C：在室温条件下，将化合物451-3(100mg,0.46mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2.3mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(166mg,0.46mmol)和N,N-二异丙基乙胺(297mg,2.30mmol)。然后该反应体系在80℃下继续搅拌1个小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物451-4(55mg,收率22.0％)。
MS(ESI)M/Z:460.0[M-99]。
步骤D：在室温条件下，将化合物451-4(55mg,0.10mmol)溶于二氯甲烷(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(1mL)。然后该反应体系在室温下继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩。得到化合物451-5(45mg,收率101％)。
MS(ESI)M/Z:460.0[M+H] +。
步骤E：在0℃条件下，将化合物451-5(38mg,0.08mmol)和5-((甲基-d 3)氨基)烟酸(13mg,0.08mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.8mL)中。随后，向上述反应液中依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(32mg,0.08mmol)和N,N-二异丙基乙胺(32mg,0.25mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物451(30.8mg,收率62.8％)。
MS(ESI)M/Z:596.8[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.25-8.22(m,1H),8.01(s,1H),7.93-7.76(m,1H),7.75-7.60(m,1H),7.55-7.28(m,1H),6.96-6.78(m,1H),6.17(s,1H),4.47-4.20(m,1H),4.19-3.44(m,9H),3.30-3.05(m,1H),3.01-2.72(m,1H),1.24-0.84(m,6H).
实施例452
(5-溴-2-(((3R，5R)-1-(5-(甲氨基)烟碱基)-5-((S)-四氢呋喃-3-基)氧基)哌啶-3-氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温下，氮气保护，将化合物448-1(800mg,9.1mmol)溶于二氯甲烷溶液(20mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢依次加入三乙(2.75g,27.3mmol)和甲基磺酰氯(1.55g,13.65mmol)。然后该反应体系在室温下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢加入冰水(20mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得到化合物448-2(1.1g,收率72.8％)。
步骤B：在0℃条件下，氮气保护，将化合物448-2(700mg,4.21mmol)溶于无水N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中。随后，向上述溶液中加入氢化钠(252.6mg,6.32mmol)，并搅拌30分钟。然后加入(3R,5R)-3-叠氮-5-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.02g,4.21mmol)，升至70℃，继续搅拌16小时。
LCMS监测显示产物生成后，将反应液缓慢滴加入水(20mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物452-3(32mg,收率2.4％)。
MS(ESI)M/Z:213.0[M-99]。
步骤C：在室温条件下，将化合物452-3(32mg,0.1mmol)溶于甲醇(2mL)中。随后，向上述反应液中加入二氧化铂(6mg)。然后反应体系在氢气气氛下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到化合物452-4(27mg,收率94.4％)。
MS(ESI)M/Z:187.0[M-99] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物452-4(27mg,0.09mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(36.1mg,0.1mmol)和N,N-二异丙基乙胺(39.0mg,0.3mmol)。然后反应体系在80℃下搅拌12小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物452-5(38mg,收率60.7％)。
MS(ESI)M/Z:527.0[M-99] +。
步骤E：在室温条件下，氮气保护，将化合物452-5(38mg,0.06mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.3mL)和二氯甲烷(0.6mL)中。然后反应体系在室温下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物452-6粗品(32mg)。
MS(ESI)M/Z:527.0[M+H] +。
步骤F：在室温下，将化合物452-6(32mg,0.06mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将 上述溶液降温至0℃，依次加入5-(甲氨基)烟酸(9.0mg,0.06mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(26.6mg,0.07mmol)和N,N-二异丙基乙胺(23.2mg,0.18mmol)。然后反应体系在0℃下搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物452(12.5mg,收率31.5％)。
MS(ESI)M/Z:660.8[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.24(s,1H),8.05-7.82(m,1H),7.79-7.24(m,3H),6.86-6.54(m,1H),6.24-5.88(m,1H),4.64-4.06(m,2H),4.02-3.36(m,11H),3.28-2.76(m,3H),2.70(d,J＝4.4Hz,3H),2.47-2.35(m,1H),2.16-1.61(m,4H),1.21-1.08(m,3H),1.02(brs,3H).
实施例453
(2S，4R)-4-((4-溴-2-((2R，6S)-2，6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-N-(-3，3-二氟-1-(2-甲氧基乙基)哌啶-4-基)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰)吡咯烷-2-甲酰胺
反应路线：
操作步骤：
步骤A在室温条件下，将化合物453-1(258mg,1.09mmol)溶于乙腈(5.0mL)中。随后，加入碳酸钾(449mg,3.25mmol)和1-溴-2-甲氧基乙烷(362mg,2.62mmol)。该反应体系在50℃条件下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(60mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物453-2(136mg,收率45.8％)。
MS(ESI)M/Z:295.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，将化合物453-2(136mg,0.46mmol)溶于二氯甲烷(2.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，滴加4M盐酸-1,4-二氧六环溶液(2.0mL)。然后该反应体系在室温搅拌3个小时。
LCMS显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物453-3粗品(140mg)。
MS(ESI)M/Z:195.2[M+H] +。
步骤C：在0℃条件下，将化合物453-3(140mg,0.72mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3.6mL)。随后，向上述溶液中依次加入(2S,4R)-4-((4-溴-2-((2R,6S)-2,6-二甲基吗啉-4-羰基)-6-硝基苯基)氨基)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-羧酸(400mg,0.72mmol)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(356mg,0.94mmol)和N,N-二异丙基乙胺(279mg,2.2mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(60mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物453-4(125mg,收率23％)。
MS(ESI)M/Z:747.1[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将化合物453-4(125mg,0.17mmol)溶于二氯甲烷(16.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，滴加4M盐酸-1,4-二氧六环溶液(8.0mL)。然后该反应体系在室温搅拌3个小时。
LCMS显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物453-5粗品(130mg)。
MS(ESI)M/Z:647.2[M+H] +。
步骤E：在0℃条件下，将化合物453-5(130mg,0.20mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.0mL)中。随后，向上述溶液中依次加入5-(甲氨基)烟酸(30.6mg,0.20mmol)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸盐(99.3mg,0.26mmol)和N,N-二异丙基乙胺(77.8mg,0.60mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(30mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到化合物453-6。所得残留物经SFC手性拆分，手性色谱柱：YMC Cellulose-SC(4.6*100mm,3μm)，流动相：二氧化碳/甲醇(含有0.2％氨)＝60/40,流速：3mL/分钟，收集产品得到化合物453-P1(14.72mg，保留时间2.985min)和化合物453-P2(15.20mg，保留时间4.548min)。
化合物453-P1：
MS(ESI)M/Z:781.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.37-8.14(m,1.7H),8.13-7.88(m,1.3H),7.87-7.72(m,1H),7.71-7.52(m,2H),6.88-6.76(m,0.7H),6.65(s,0.3H),6.22-6.09(m,0.7H),6.04-5.90(m,0.3H),4.77-4.54(m,0.7H),4.51-3.36(m,10.3H),3.22-3.19(m,3H),3.18-2.97(m,1H),2.94-2.63(m,5H),2.62-2.54(m,2H),2.47-1.89(m,5H),1.78-1.36(m,2H),1.19-1.09(m,3H),1.08-0.88(m,3H).
化合物453-P2：
MS(ESI)M/Z:781.1[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.36-8.14(m,1.6H),8.09-7.90(m,1.4H),7.88-7.52(m,3H),6.87-6.75(m,0.6H),6.66(s,0.4H),6.24-6.12(m,0.6H),6.11-6.01(m,0.4H),4.72-4.56(m,0.6H),4.53-3.35(m,10.4H),3.25-3.18(m,3H),3.17-2.97(m,1H),2.94-2.64(m,5H),2.62-2.53(m,2H),2.45-1.92(m,5H),1.79-1.36(m,2H),1.18-0.88(m,6H).
实施例454
(5-溴-2-(((3S，4S)-4-甲氧基-1-(2-甲基-3H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-羰基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉代)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在0℃下，将化合物440-1(2.2g,15.9mmol)溶于浓硫酸(21mL)中。随后，向上述溶液中加入硝酸钾(1.6g,15.9mmol)，升至30℃，搅拌30分钟，再升温到70℃，继续搅拌3小时。然后将反应体系冷却到0℃，加入乙醇(8.4mL)，升至60℃，搅拌18小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液滴加到冰的到醋酸钾溶液中淬灭，再用饱和的碳酸氢钠水溶液调节pH至7～8。混合液用乙酸乙酯(100mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(500mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物440-2(788mg,收率23.5％)。
MS(ESI)M/Z:212.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，将化合物440-2(788mg,3.73mmol)溶于乙醇(18mL)中。随后，向上述溶液中加入10％钯/碳(78mg)。然后该反应体系在氢气氛围下继续搅拌6小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液过滤，滤液减压浓缩，得到化合物440-3(672mg,收率99％)。
MS(ESI)M/Z:182[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，将化合物440-3(200mg,1.1mmol)溶于盐酸(6mL)中。随后，将亚硝酸钠(343mg,4.97mmol)溶于水(6mL)，并滴加到上述溶液中。然后该反应体系在室温条件下搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(36mL)稀释，用饱和的碳酸氢钠水溶液调节pH值至7～8。然后将混合液减压冻干，得到化合物454-4(178mg,收率84％)。
MS(ESI)M/Z:193.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将化合物454-4(70mg,0.36mmol)溶于四氢呋喃(1.8mL)和水(0.9mL)中。随后，向上述溶液中加入氢氧化锂(31mg,0.72mmol)。然后该反应体系继续搅拌8小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物454-5(46mg,收率78％)。
MS(ESI)M/Z:165.2[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，将化合物454-5(63mg,0.36mmol)和(5-溴-2-(((3S,4S)-4-甲氧基吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(52mg,0.12mmol)溶于乙腈(0.6mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N-甲基咪唑(42.2mg,0.57mmol)和N,N,N',N'-四甲基氯甲脒六氟磷酸盐(48mg,0.17mmol)。然后该反应体系继续搅拌30分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(3mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物454(23.65mg,收率33％)。
MS(ESI)M/Z:603.2[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ9.62-9.47(m,1H),8.76-8.53(m,1H),8.33-8.12(m,1H),7.82-7.31(m,2H),4.52-3.53(m,9H),3.21-2.71(m,5H),2.47-2.21(m,1H),1.24-0.94(m,5H),0.90-0.72(m,1H).
实施例455
(2-((35，45)-4-(苄氧基)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-5-溴-3-硝基苯)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物455-1(53.2mg,0.1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入5-(甲氨基)烟酸(15.2mg,0.1mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(45mg,0.12mmol)和N,N-二异丙基乙胺(39mg,0.3mmol)。然后该反应体系在0℃下搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经反相色谱柱纯化。得到标题化合物455(35.6mg,收率53.3％)。
MS(ESI)M/Z:667.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.31-8.16(m,1H),8.00(s,1H),7.91-7.76(m,1H),7.75-7.61(m,1H),7.60-7.02(m,6H),6.94-6.79(m,1H),6.15(s,1H),4.69-3.38(m,11H),3.27-3.01(m,1H),2.95-2.65(m,4H),2.47-1.82(m,1H),1.18-0.77(m,6H).
实施例456
(5-溴-2-(((3S，4S)-4-((6-甲氧基吡啶-3-基)甲氧基)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰基)吡咯烷-3-氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤:
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物456-1(80mg,0.35mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.7mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，加入氢化钠(21.2mg,0.53mmol)，并继续搅拌30分钟。接着加入5-(氯甲基和2-甲氧基吡啶)(66mg,0.42mmol)，升至室温，继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物456-2(87mg,收率71％)。
MS(ESI)M/Z:294.1[M-55]。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物456-2(87mg,0.25mmol)溶于四氢呋喃(12.5mL)和水(0.13mL)中。随后，向上述溶液中加入三苯基磷(97mg,0.37mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌48小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，加入六滴1M的盐酸水溶液，混合液用乙酸乙酯(15mL×2次)萃取。水相减压浓缩得到化合物456-3(77mg,收率96％)。
MS(ESI)M/Z:268.1[M-55]。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物456-3(77mg,0.24mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.2mL)中。随后，向上述溶液中依次加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(86mg,0.24mmol)和N,N-二异丙基乙胺(93mg,0.72mmol)。然后该反应体系在80℃条件下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物456-4(120mg,收率70％)。
MS(ESI)M/Z:663.8[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物456-4(120mg,0.18mmol)溶于二氯甲烷(4.5mL)中。 随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(4.5mL)。然后该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物456-5粗品(110mg)。
MS(ESI)M/Z:564.0[M+H] +。
步骤E:在室温条件下，将5-甲氨基烟酸(15mg,0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(38mg,0.10mmol)、N,N-二异丙基乙胺(35mg,0.27mmol)和化合物456-5(50mg,0.09mmol)。然后该反应体系继续搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物456(19.69mg,收率31％)。
MS(ESI)M/Z:697.5[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.36-7.14(m,6H),7.05-6.52(m,2H),6.15(s,1H),4.70-3.99(m,4H),3.94-3.71(m,4H),3.69-3.43(m,4H),3.19-2.97(m,3H),2.91-2.81(m,1H),2.76-2.64(m,3H),2.39-2.29(m,1H),1.33-0.45(m,6H).
实施例457
(5-溴-2-((3S，4S)-1-(5-(甲氨基)烟碱基)-4-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲氧基)吡咯烷-3-氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤:
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物456-1(50mg,0.22mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，加入氢化钠(13mg,0.33mmol)，并继续搅拌30分钟。接着加入5-(溴甲基)-2-(三氟甲基)吡啶(63mg,0.26mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物457-2(60mg,收率70％)。
MS(ESI)M/Z:332.0[M-55]。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物457-2(60mg,0.16mmol)溶于四氢呋喃(1mL)和水(0.1mL)中。随后，向上述溶液中加入三苯基磷(60mg,0.23mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌48小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(2mL)淬灭，加入两滴1M的盐酸水溶液，混合液用乙酸乙酯(5mL×2次)萃取。然后所得水相经减压浓缩，得到化合物457-3粗品(60mg)。
MS(ESI)M/Z:306.0[M-55]。
步骤C：在室温条件下，将化合物457-3(60mg,0.17mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中。随后，向上述溶液中依次加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(60mg,0.17mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.14mL,0.85mmol)。然后该反应体系在80℃条件下搅拌5小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物457-4(60mg,收率50％)。
MS(ESI)M/Z:602.0[M-99]。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物457-4(36mg,0.05mmol)溶于二氯甲烷(0.3mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.5mL)。然后该反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩得到化合物457-5粗品(52mg)。
MS(ESI)M/Z:602.0[M+H] +。
步骤E:在室温条件下，将5-甲氨基烟酸(6mg,0.04mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(18mg,0.05mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.05mL,0.30mmol)和化合物457-5(25mg,0.04mmol)。然后该反应体系继续搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物457(4.70mg,收率16％)。
MS(ESI)M/Z:734.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.83-8.52(m,1H),8.33-8.15(m,1H),8.13-7.77(m,4H),7.74-7.28(m,2H),6.98-6.77(m,1H),6.22(s,1H),4.88-4.50(m,2H),4.46-3.42(m,9H),3.28-3.03(m,1H),2.92-2.68(m,4H),2.45-2.35(m,1H),1.16-0.83(m,6H).
实施例458
(5-溴-2-((3S，4S)-1-(5-(甲氨基)烟碱基)-4-(吡啶-2-基甲氧基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温下，氮气保护，将化合物456-1(60.0mg,0.26mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，加入60％氢化钠(26mg,0.65mmol)，并搅拌30分钟。然后向上述反应体系中加入2-(氯甲基)吡啶(49.5mg,0.39mmol)，升至室温，继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢滴加入冰水(15mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物458-2(45mg,收率54.2％)。
MS(ESI)M/Z:320.0[M+H] +。
步骤B：在室温下，氮气保护，将化合物458-2(45.0mg,0.14mmol)溶于四氢呋喃(0.9mL)和水(0.1mL)中。随后，向上述溶液中加入三苯基磷(55.0mg,0.21mmol)，继续搅拌16小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液缓慢滴加入水(5mL)中淬灭，混合液用乙酸乙酯(8mL×3次)萃取，收集水相，减压浓缩，得到化合物458-3(28mg,收率68.2％)。
MS(ESI)M/Z:294.2[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物458-3(28mg,0.1mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，向上述反应液中依次加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(36mg,0.1mmol)和N,N-二异丙基乙胺(39mg,0.3mmol)。然后该反应体系在80℃下搅拌12小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用氯化钠水溶液(10mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物458-4(39mg,收率29.7％)。
MS(ESI)M/Z:634.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物458-4(39mg,0.06mmol)溶于4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.6mL)和二氯甲烷(0.6mL)中。然后反应体系在室温下搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物458-5粗品(35mg)。
MS(ESI)M/Z:534.0[M+H] +。
步骤E：在室温下，将化合物458-5(35mg,0.06mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入5-(甲氨基)烟酸(9mg,0.06mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(31mg,0.08mmol)和N,N-二异丙基乙胺(31mg,0.24mmol)。然后该反应体系在0℃下继续搅拌15分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(5mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所 得残留物经反相色谱柱纯化得到标题化合物458(12.3mg,收率30.7％)。
MS(ESI)M/Z:667.5[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.58-8.35(m,1H),8.31-8.14(m,1H),8.00(s,1H),7.92-7.15(m,6H),6.99-6.75(m,1H),6.14(s,1H),4.91-4.03(m,10H),3.28-2.98(m,2H),2.94-2.80(m,1H),2.71(s,3H),2.44-2.23(m,1H),1.26-0.73(m,6H).
实施例459
(5-溴-2-((3S，4S)-4-((5-氟吡啶-2-基)甲氧基)-1-(5-(甲氨基)烟碱酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物456-1(228mg,1.00mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，加入氢化钠(80mg,2.00mmol)，并继续搅拌30分钟。接着加入2-(氯甲基)-5-氟吡啶(189mg,1.30mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物459-2(310mg,收率91％)。
MS(ESI)M/Z:282.0[M-55]。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物459-2(310mg,0.92mmol)溶于四氢呋喃(4.6mL)和水(0.5mL)中。随后，向上述溶液中加入三苯基磷(724mg,2.76mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌24小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，加入两滴1M的盐酸水溶液，混合液用乙酸乙酯(10mL×2次)萃取。水相减压浓缩得到化合物459-3粗品(120mg)。
MS(ESI)M/Z:312.2[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物459-3(120mg,0.39mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.9mL)中。随后，向上述溶液中依次加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(212mg,0.59mmol)和N,N-二异丙基乙胺(252mg,1.95mmol)。然后该反应体系在80℃条件下搅拌5小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物459-4(155mg,收率62％)。
MS(ESI)M/Z:652.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物459-4(155mg,0.24mmol)溶于二氯甲烷(1.2mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(1.0mL)。然后该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物459-5粗品(135mg)。
MS(ESI)M/Z:552.0[M+H] +。
步骤E:在室温条件下，将化合物459-5(100mg,0.18mmol)和5-甲氨基烟酸(33mg,0.22mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.9mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(68mg,0.18mmol)和N,N-二异丙基乙胺(116mg,0.90mmol)。然后该反应体系继续搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物459(30mg,收率24％)。
MS(ESI)M/Z:685.4[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.58-8.33(m,1H),8.30-8.14(m,1H),8.01(s,1H),7.92-7.22(m,5H),6.99-6.77(m,1H),6.15(s,1H),4.77-3.40(m,11H),3.28-3.00(m,1H),2.95-2.63(m,4H),2.47-2.26(m,1H),1.17-0.82(m,6H).
实施例460
(5-溴-2-((3S，4S)-1-(5-(甲氨基)烟碱基)-4-(恶唑-2-基甲氧基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物456-1(100mg,0.44mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2.2mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，加入氢化钠(26mg,0.66mmol)，并继续搅拌30分钟。然后加入2-氯甲基恶唑(62mg,0.53mmol)，并在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物460-2(70mg,收率51.7％)。
MS(ESI)M/Z:254.0[M-55]。
步骤B：在室温条件下，将化合物460-2(70mg,0.23mmol)溶于四氢呋喃(1mL)和水(0.1mL)中。随后，向上述溶液中加入三苯基磷(89mg,0.34mmol)。然后该反应体系继续搅拌48小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(2mL)淬灭，加入两滴1M的盐酸水溶液，混合液用乙酸乙酯(5mL×2次)萃取，水相减压浓缩得到化合物460-3(40mg,收率62.5％)。
MS(ESI)M/Z:184.2[M-99]。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物460-3(40mg,0.14mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.7mL)中。随后，向上述溶液中饭依次加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(56mg,0.16mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.07mL,0.42mmol)。然后该反应体系在80℃条件下搅拌5小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物460-4(60mg,收率68.2％)。
MS(ESI)M/Z:524.0[M-99]。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物460-4(60mg,0.10mmol)溶于二氯甲烷(0.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢加入4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(0.5mL)。然后该反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物460-5粗品(52mg)。
MS(ESI)M/Z:524.0[M+H] +。
步骤E:在室温条件下，将5-甲氨基烟酸(15mg,0.10mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(42mg,0.11mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.05mL,0.30mmol)和化合物460-5(52mg,0.10mmol)。然后该反应体系继续搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(15mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物460(22.16mg,收率33.9％)。
MS(ESI)M/Z:658.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.34-8.18(m,1H),8.17-7.94(m,2H),7.90-7.29(m,3H),7.27-7.06(m,1H),6.96-6.77(m,1H),6.21-6.06(m,1H),4.75-4.50(m,2H),4.48-3.39(m,9H),3.29-3.00(m,1H),2.94-2.67(m,4H),2.49-2.36(m,1H),1.20-0.87(m,6H).
实施例461
(5-溴-2-((3S，4S)-1-(5-(甲氨基)烟碱基)-4-(噻唑-2-基甲氧基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉基)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，氮气保护，将化合物456-1(200mg,0.88mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(4.0mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，加入氢化钠(70mg,1.76mmol)，并继续搅拌30分钟。接着加入2-(氯甲基)噻唑(141mg,1.06mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物461-2(95mg,收率33％)。
MS(ESI)M/Z:270.0[M-55]。
步骤B：在室温条件下，氮气保护，将化合物461-2(95mg,0.29mmol)溶于四氢呋喃(3.1mL)和水(0.5mL)中。随后，向上述溶液中加入三苯基磷(228mg,0.87mmol)。然后该反应体系在室温条件下搅拌24小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(20mL)淬灭，加入两滴1M的盐酸水溶液，混合液用乙酸乙酯(10mL×2次)萃取。水相减压浓缩得到化合物461-3粗品(45mg)。
MS(ESI)M/Z:300.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物461-3(40mg,0.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(1.9mL)中。随后，向上述溶液中依次加入(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉)甲酮(58mg,0.16mmol)和N,N-二异丙基乙胺(50mg,0.39mmol)。然后该反应体系在80℃条件下搅拌5小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(40mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物461-4(15mg,收率18％)。
MS(ESI)M/Z:640.0[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，氮气保护，将化合物461-4(15mg,0.023mmol)溶于二氯甲烷(1.2mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，缓慢滴加4M的盐酸-1,4-二氧六环溶液(1.0mL)。然后该反应体系在室温下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压蒸馏浓缩。得到化合物461-5粗品(15mg)。
MS(ESI)M/Z:540.0[M+H] +。
步骤E:在室温条件下，将化合物461-5(15mg,0.028mmol)和5-甲氨基烟酸(5mg,0.034mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.4mL)中。随后，将上述溶液降温至0℃，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(21mg,0.056mmol)和N,N-二异丙基乙胺(18mg,0.14mmol)。然后该反应体系继续搅拌10分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(30mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物461(2.7mg,收率17％)。
MS(ESI)M/Z:674.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.33-8.15(m,1H),8.01(s,1H),7.91-7.27(m,5H),6.99-6.74(m,1H),6.16(s,1H),5.01-4.68(m,2H),4.48-3.43(m,9H),3.29-3.00(m,1H),2.95-2.66(m,4H),2.48-1.94(m,1H),1.16-0.88(m,6H).
实施例462
(5-溴-2-(((3S，4S)-4-((1-甲基-1H--咪唑-5-基)甲氧基)-1-(5-(甲基氨基)烟酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-3-硝基苯基)((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉代)甲酮
反应路线：
操作步骤：
步骤A：在室温条件下，将化合物456-1(100mg,0.44mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中。随后，向上述溶液中加入氢化钠(26.4mg,0.66mmol)，并搅拌30分钟。然后向溶液中加入5-(氯甲基)-1-甲基-1H-咪唑(68.4mg,0.58mmol)，升至室温，继续搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(10mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物462-2(76mg,收率53％)。
MS(ESI)M/Z:323.0[M+H] +。
步骤B：在室温条件下，将化合物1-2(76mg,0.23mmol)溶于四氢呋喃(2.2mL)和水(0.25mL)中。随后，向上述溶液中加入三苯基膦(93.9mg,0.35mmol)。然后该反应体系继续搅拌10小时。
LCMS监测显示原料消失后，用1mol/L的盐酸调节反应溶液的pH至5，减压浓缩得到化合物462-3(43mg,收率63％)。
MS(ESI)M/Z:297.0[M+H] +。
步骤C：在室温条件下，氮气保护，将化合物462-3(43mg,0.14mmol)和(5-溴-2-氟-3-硝基苯基)((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)甲酮(52mg,0.14mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，向上述溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(0.08mL,0.42mmol)。然后该反应体系在80℃的条件下搅拌1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(15mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(20mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到化合物462-4(15mg,收率16.8％)。
MS(ESI)M/Z:636.8[M+H] +。
步骤D：在室温条件下，将化合物462-4(15mg,0.03mmol)溶于二氯甲烷(0.5mL)中。随后，向上述溶液中加入4M盐酸的1,4-二氧六环溶液(0.5mL)。然后该反应体系继续搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液减压浓缩，得到化合物462-5粗品(15mg)。
MS(ESI)M/Z:536.8[M+H] +。
步骤E：在室温条件下，将5-(甲氨基)烟酸(5mg,0.03mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(0.5mL)中。随后，向上述溶液中依次加入N,N-二异丙基乙胺(0.03mL,0.14mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(14.8mg,0.04mmol)和化合物462-5(15mg,0.03mmol)。然后该反应体系继续搅拌20分钟。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入水(6mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(2mL×3次)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠水溶液(6mL×2次)洗涤。然后用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品经制备型高效液相色谱纯化得到标题化合物462(5.06mg,收率25％)。
MS(ESI)M/Z:671.0[M+H] +。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ8.31-8.15(m,1H),8.08-7.94(m,1H),7.91-7.24(m,4H),6.97-6.73(m,2H),6.23-6.05(m,1H),4.67-3.39(m,14H),3.25-2.98(m,1H),2.94-2.65(m,4H),2.42-2.03(m,1H),1.21-0.80(m,6H).
生物学测试评价
测试例1:评价本发明化合物对SARS-CoV-2 3CL pro/M pro靶点的抑制效果
本实验采用荧光共振能量转移的方法来检测SARS-CoV-2 3CL pro/M pro蛋白酶的活性，并得出化合物对SARS-CoV-2 3CL pro/M pro蛋白酶的半数抑制浓度IC 50。
1.实验材料
新型冠状病毒M pro/3CL pro抑制剂筛选试剂盒(P0315M)购自Beyotime公司。
2.实验方法
1)用反应缓冲液配置酶溶液，在各孔中加49.5μL的酶溶液；在Min孔中加49.5μL的反应缓冲溶液。
2)化合物检测IC 50，测试终浓度为10μM起始，3倍稀释，10个浓度，每个浓度设置复孔测试。将待测化合物稀释成200倍终浓度的溶液，使用D300e(TECAN)超微量加样器加入250nL梯度稀释的待测化合物到384孔反应板中。Max孔和Min孔中均转移250nL的100％DMSO。
3)置冰上孵育10分钟。
4)用D300e(TECAN)在各孔中加入250nL底物溶液。
5)将反应板1000rpm离心1min，使用Envision酶标仪(PerkinElmer)连续读取30分钟的荧光信号。
6)使用GraphPad Prism 8软件进行数据分析，计算化合物的IC 50。
3.实验结果
本发明化合物对3CLpro蛋白酶的抑制作用结果见表1，活性数据分为A、B、C、D四个区间，IC 50≤10nM的化合物用A标识，10nM＜IC 50≤50nM的化合物用B标识，50nM＜IC 50≤100nM的化合物用C标识，100nM＜IC 50＜200nM的化合物用D标识。
表1对SARS-CoV-2 3CL pro/M pro蛋白酶的抑制结果
实施例 IC 50(nM) 实施例 IC 50(nM) 实施例 IC 50(nM)
1 B 2 A 3 A
4 C 5 A 6 A
7 B 8 A 9 A
10 B 11 C 12 B
13 A 14 B 15 B
16 B 17 B 18 D
19 B 20 B 21 B
22 B 23 B 24 D
25 B 26 B 27 B
28 B 29 B 30 B
31 B 32 B 33 B
34 B 35 B 36 B
37 B 38 A 39 A
40 B 41 B 42 B
43 B 44 A 45 B
46 B 47 B 48 B
49 B 50 C 51 B
52 B 53 C 54 B
55 B 56 B 57 B
59 B 60 C 61 C
62 B 63 B 64 B
65 B 66 B 67 B
68 C 69 C 70 B
71 B 72 A 73 B
74 C 75 A 76 A
77 B 78 B 79 C
80 B 81 B 82 B
83 B 84 B 85 B
86 B 87 B 88 B
89 B 90 B 91 B
92 B 93 B 94 B
95 B 96 C 97 B
98 B 99 D 100 B
101 C 102 B 103 B
104 B 105 C 106 B
107 B 108 B 109 B
110 B 111 A 112 B
113 A 114 B 115 B
116 A 117 B 118 B
119 B 120 A 121 A
122 B 123 A 124 B
125 A 126 B 127 B
128 B 129 B 130 B
131 B 132 B 133 B
134 B 135 B 136 A
137 B 138 B 139 B
140 B 141 B 142 B
143 B 144 B 145 B
146 B 147 B 148 C
149 B 150 C 151 B
152 B 153 B 154 C
155 C 156 B 157 C
158 B 159 A 160 B
161 B 162 B 163 B
164 B 165 B 166 B
167 B 168 B 169 B
170 B 171 B 172 B
173 B 174 B 175 B
176 B 177 B 178 C
179 C 180 C 181 B
182 B 183 B 184 A
185 B 186 B 187 B
188 B 189 B 190 B
191 B 192 B 193 B
194 B 195 B 196 B
197 B 198 B 199 C
200 B 201 B 202 B
203 B 204 B 205 A
206 C 207 B 208 B
209 B 210 B 211 B
212 B 213 B 214 B
215 B 216 B 217 C
218 B 219 B 220 C
221 B 222 B 223 B
224 B 225 A 226 B
227 B 228 B 229 B
230 A 231 B 232 B
233 C 234 B 235 B
236 B 237 B 238 B
239 B 240 B 241 B
242 B 243 B 244 B
245 C 246 B 247 B
248 B 249 B 250 B
251 C 252 B 253 C
254 B 255 B 256 B
257 B 258 B 259 B
260 B 261 B 262 B
263 B 264 B 265 B
266 B 267 B 268 A
269 B 270 B 271 B
272 B 273 B 274 A
275 B 276 B 277 B
278 B 279 B 280 B
281 C 282 B 283 B
284 B 285 B 286 B
287 B 288 B 289 B
290 B 291 B 292 B
293 B 294 B 295 B
296 B 297 B 298 B
299 B 300 B 301 C
302 D 303 B 304 C
305 B 306 B 307 B
308 B 309 B 310 B
311 B 312 B 313 B
314 B 315 B 316 B
317 B 318 B 319 C
320 B 321 B 322 B
323 B 324 D 325 B
326 B 327 B 328 B
329 B 330 B 331 B
332 B 333 B 334 B
335 B 336 B 337 B
338 B 339 B 340 B
341 B 342 B 343 B
344 B 345 B 346 B
347 B 348 B 349 B
350 C 351 B 352 B
353 B 354 B 355 B
356 B 357 B 358 B
359 B 360 B 361 B
362 C 364 C 365 C
366 B 367 B 368 B
369 C 370 C 371 B
372 B 373 C 374 B
375 B 376 C 377 C
378 B 379 B 380 B
381 C 382 C 383 B
385 B 386 C 387 B
388 C 389 C 390 B
391 C 392 C 393 C
394 C 395 C 396 C
397 C 398 B 399 C
400 D 401 C 402 C
403 C 404 D 405 B
406 C 407 C 408 B
409 C 410 D 411 C
412 C 413 D 414 D
415 C 416 D 417 C
418 C 419 C 420 C
421 D 422 C 423 B
424 C 425 D 426 D
427 D 428 C 429 D
430 D 431 C 432 D
433 D 434 D 435 C
436 C 437 C 438 B
439 B 440 C 441 B
442 B 443 B 444 B
445 C 446 B 447 C
448 B 449 C 450 B
451 B 452 C 453-P1 C
454 B 455 B 456 B
457 D 458 B 459 B
460 B 461 B 462 B
结论：从表1中可以看出，本发明化合物对SARS-CoV-2 3CL pro/M pro蛋白酶具有良好的抑制作用。
测试例2:CD1小鼠的体内药代动力学实验
以雄性CD1小鼠为受试动物，研究本发明化合物对雄性CD1小鼠在剂量为10mg/kg时经口服给药后的体内药代动力学行为。
1.试验方案
1.1供试品：
对照化合物和本发明部分化合物。
1.2试验动物
动物基本信息
种属：雄性CD1小鼠(3只/组)
等级：SPF级
体重：约20～30g
年龄：6～8周
来源：维通利华
1.3给药：
雄性CD1小鼠灌胃给予供试品溶液，给药剂量为10mg/kg，给药体积为10mL/kg。
供试品溶液的配制：供试品采用溶媒(10％DMSO+50％PEG400+40％纯净水)溶解，配制时依次加入DMSO、PEG400和纯净水。
对照组：CN113072497A专利化合物2，其结构式如下：
实验组：本发明部分化合物。
1.5样品采集：
分别于给药前(0h)和给药后0.25h,0.5h,1h,2h,4h,8h,24h，
按照设置的采血时间点，从小鼠足背静脉采集约0.025～0.03mL全血(用EDTA-K2抗凝)，置于湿冰条件下，并在采集后30min内以4000g离心力、4℃、离心5min，分离血浆并转移到检测管中。
2.实验结果与分析
药代动力学主要参数用WinNonlin(Phoenix TM,version 6.1)计算得到，药代动力学参数参见如下表2，结果显示与对照组相比，口服给药，本发明化合物在小鼠体内具有较高的暴露量和生物利用度，具有良好的药代动力学性质。
表2-1 CD1小鼠静脉给药的药代动力学参数
表2-2 CD1小鼠口服给药的药代动力学参数
备注：NA代表无相应数据。
测试例3：食蟹猴的体内药代动力学实验
以雄性食蟹猴为受试动物，研究本发明化合物在10mg/kg下口服给药在食蟹猴体内血浆的药代动力学行为。
1.试验方案
1.1供试品：
本发明部分化合物。
1.2试验动物
动物基本信息
种属：食蟹猴
等级：普通级
数量：18只食蟹猴(雄)用于给药实验
体重：约2.5～4.5kg
年龄：约3～5岁
来源：从化市华珍动物养殖场(普通合伙)
1.3给药：
9只雄性食蟹猴，3只/组，共3组。动物给药前禁食12小时，灌胃给药供试品溶液(10mg/kg)，给药体积2.5mL/kg。
供试品溶液的配制：供试品采用10％DMSO+50％PEG400+40％纯净水溶解，配制时依次加入DMSO、PEG400和纯净水。
1.4样品采集：
分别于给药前(0min)、给药后0.25h，0.5h，1h，2h，4h，6h，8h，12h，24h和48h(11个)。
按照设置的采血时间点，由从猴后肢静脉采血约1.5mL，置于湿冰条件下，并在采集后1.5h内离心，以1700g离心力，4℃，离心10min。离心之后，取血浆加入到检测管中。离心后2小时内可将血浆样本置于-20℃以下的冰箱中保存。
2.实验结果与分析
药代动力学主要参数用WinNonlin 8.1.0.3530计算得到，结果显示，本发明化合物具有良好的药代动力学性质。
表3食蟹猴口服给药的药代动力学参数
备注：NA代表无相应数据。

Claims (23)

  1. 式(I)所示的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，
    其中，环A选自C 6-10芳基、5-10元杂芳基、C 3-12环烷基或3-12元杂环基；
    X选自-(CH 2) s-C(＝O)-或-NH-C(＝O)-；
    Y选自NH或化学键；
    环B选自C 3-12环烷基、3-12元杂环基或5-10元杂芳基；
    Z选自-O-、-S-、-CH 2-、-C(＝O)-NH-或-(CH 2) tNH-；
    环C选自C 6-10芳基或5-10元杂芳基；
    环D选自3-12元杂环基或5-6元杂芳基；或者环D不存在；
    R 1选自卤素、OH、O、氰基、-NR 1aR 1b、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 3-8环烷基、C 6-10芳基、-NR 1aCOR 1c、-SR 1d或-CONR 1aR 1b，所述的C 1-4烷基和C 1-4烷氧基可进一步被一个或多个卤素取代；
    R 1a、R 1b、R 1c和R 1d各自独立地选自H、C 1-4烷基或卤代C 1-4烷基，所述C 1-4烷基可以被一个或多个氘取代；
    或者，位于环A同一个C原子上的两个R 1可以一起形成＝CH 2、＝S或者C 3-5环烷基；
    R 2选自氘、氰基、C 2-4炔基、卤素、C 1-4烷基、羟基、C 1-4烷氧基、氘代C 1-4烷氧基、-C(＝O)-NR 2aR 2b、-C 2-4炔基-R 2c、5-6元的杂芳基或-O-(CH 2) y-R 2d；
    R 2c选自5-6元的杂芳基，所述的5-6元的杂芳基可进一步被C 1-4烷基所取代；
    R 2a和R 2b各自独立地选自H、C 1-4烷基、苯基、5-9元的杂芳基、5-6元的杂环基或C 3-5环烷基，所述的C 1-4烷基、苯基、5-9元的杂芳基、5-6元的杂环基、C 3-5环烷基可进一步被一个或多个选自甲基、乙基、环丙基、卤素、CF 3、-CH 2CF 3、苯基、甲氧基、吡啶基、嘧啶基、四氢吡喃基或-CH 2CH 2OCH 3的取代基所取代，所述的吡啶基、嘧啶基或四氢吡喃基可进一步被一个或多个甲基、CF 3、卤素、-NHCH 3或-CHF 2所取代；
    或者，R 2a、R 2b与其相连的N原子一起形成4-9元的杂环基或5-9元的杂芳基，所述的4-9元的杂环基或5-9元的杂芳基可进一步被一个或多个选自C 1-4烷基、卤素、羟基或-CH 2CH 2OCH 3的取代基所取代。
    R 2d选自C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、苯基、5-6元杂芳基或5-6元的杂环基，所述的苯基、5-6元杂芳基或5-6元的杂环基可进一步被一个或多个选自卤素、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、卤代C 1-4烷基的取代基所取代；y选自0、1或2。
    R 3选自硝基、卤素、羟基、氰基、C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、-NR 3aR 3b或-N(R 3aR 3bR 3c) +；
    R 3a、R 3b或R 3c各自独立地选自H或C 1-4烷基；
    R 4选自卤素、羟基、C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、3-8元杂环基、-C(＝O)R 4a、-NHC(＝O)R 4a、-(CH 2) rOR 4b、-NR 4cR 4d、C 1-4烷氧基、-(CH 2) x-C 3-6环烷基、-NR 4a-(CH 2) x-C 6-10芳基，所述的芳基可进一步被卤素取代；
    R 4a、R 4b、R 4c或R 4d各自独立地选自H、C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、5-6元杂环基或C 3-6环烷基；
    或者R 4c、R 4d与其相连的N原子一起形成六元杂环；
    x为0、1或2；r选自0、1、2或3；
    m、n、p和q各自独立选自0、1、2、3、4或5；
    s和t各自独立选自0或1。
  2. 根据权利要求1所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，
    其中，环D为3-12元杂环基；或者环D不存在；
    R 1选自卤素、OH、O、氰基、-NR 1aR 1b、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 3-8环烷基、C 6-10芳基、-NR 1aCOR 1c、-SR 1d或-CONR 1aR 1b，所述的C 1-4烷基和C 1-4烷氧基可进一步被一个或多个卤素取代；
    R 1a、R 1b、R 1c和R 1d各自独立地选自H、C 1-4烷基或卤代C 1-4烷基；
    或者，位于环A同一个C原子上的两个R 1可以一起形成＝CH 2、＝S或者C 3-5环烷基；
    R 2选自卤素、C 1-4烷基、羟基或C 1-4烷氧基；
    环A、环B、环C、X、Y、Z、R 3、R 4、m、n、p和q各自定义同式(I)化合物。
  3. 根据权利要求1所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中：
    环D为3-8元杂环基；或者环D不存在；
    R 1选自卤素、OH、O、氰基、-NR 1aR 1b、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 3-8环烷基、C 6-10芳基，所述的C 1-4烷基和C 1-4烷氧基可进一步被一个或多个卤素取代；
    R 1a和R 1b各自独立地选自H或C 1-4烷基；
    R 2选自卤素或C 1-4烷基；
    R 4选自卤素、羟基、C 1-4烷基、卤代C 1-4烷基、3-8元杂环基、-C(＝O)R 4a、-NHC(＝O)R 4a、-(CH 2) rOR 4b或-NR 4cR 4d；
    R 4a、R 4b、R 4c或R 4d各自独立地选自H、C 1-4烷基或卤代C 1-4烷基；
    r选自0、1、2或3；
    m、n、p和q各自独立选自0、1、2或3；环A、环B、环C、X、Y、Z、R 3各自定义同式(I)化合物。
  4. 根据权利要求1或2所述的化合物其异构体或药学上可接受的盐，其中，
    环A为C 6-10芳基、5-10元杂芳基或7-10元杂环基；
    环D为3-8元杂环基；
    R 1选自卤素、OH、O、氰基、-NR 1aR 1b、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 3-8环烷基、C 6-10芳基，所述的C 1-4烷基和C 1-4烷氧基可进一步被一个或多个卤素取代；
    R 1a和R 1b各自独立地选自H或C 1-4烷基；
    R 2选自卤素或C 1-4烷基；
    R 4选自卤素、羟基或C 1-4烷基；
    m、n、p和q各自独立选自0、1或2；
    环B、环C、X、Y、Z、R 3各自定义同式(I)化合物。
  5. 根据权利要求1-4中任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中，环A选自吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、苯基、咪唑基、噻吩基、异恶唑基、苯并三氮唑基、
  6. 根据权利要求1-5中任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中R 1选自F、Cl、Br、I、O、羟基、甲基、甲氧基、三氟甲基、-NH 2、-NHCH 3、-N(CH 3) 2、 氰基、环丙基、苯基、-NHCH 2CH 3、-SCH 3、-CONH 2、-NHCOCF 3或-NHCOCH 3；
    或者，位于环A同一个C原子上的两个R 1可以一起形成＝CH 2、＝S或者环丙基；
    m选自0、1、2或3。
  7. 根据权利要求5或6所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中结构单元 选自
  8. 根据权利要求1-7中任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中X选自-CH 2-C(＝O)-、-C(＝O)-或-NH-C(＝O)-。
  9. 根据权利要求1-8中任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中环B选自C 5-6环烷基、4-10元杂环基或5-6元杂芳基；
    优选地，环B选自
  10. 根据权利要求1-9中任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中R 2选自氘、氰基、乙炔基、F、甲基、羟基、甲氧基、-CONH 2、-CONHCH 3、
    n选自0、1、2、3、4或5。
  11. 根据权利要求9或10所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，结构单元 选自
  12. 根据权利要求1-11中任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中Z选自-NH-、-O-、-S-、-CH 2-、-CH 2NH-或-C(＝O)-NH-。
  13. 根据权利要求1-12中任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中环C选自苯基或吡啶基。
  14. 根据权利要求1-13中任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中R 3选自硝基、Br、Cl、I、CN、CF 3、或-N(CH 3) 3 +。
  15. 根据权利要求13或14所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中结构单元 选自
  16. 根据权利要求1-15中任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中环D选自
    或者环D不存在。
  17. 根据权利要求1-16任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中R 4选自氘、F、Cl、甲基、叔丁基、甲氧基、氨基、羟基、 -CH 2CF 3、-CH 2F、-CH 2Cl、乙烯基、乙炔基、-CF 3、-CHF 2、 -C(＝O)CF 3、-NHC(＝O)CF 3、-CH 2CH 2OCH 3、-CH 2CH 2OH、 环丙基、 q选自0、1、2、3、4或5。
  18. 根据权利要求16或17所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其中结构单元 选自
    优选地，结构单元 选自
  19. 根据权利要求1-18中任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，其选自：
    优选地，其选自：
    优选地，其选自：
    其中，环A、环B、环D、X、Y、Z、R 1、R 2、R 3、R 4、m、n、p和q如权利要求1-18所定义。
  20. 化合物、其异构体或药学上可接受的盐，所述化合物选自：
  21. 根据权利要求1-20任一项所述的式(I)化合物的制备方法：其特征在于，通过式(I-A)化合物与式(I-B)化合物发生缩合反应制备得到；
    其中，所述的环A、环B、环C、环D、X、Y、Z、R 1、R 2、R 3、R 4、m、n、p和q如式(I)所定义。
  22. 一种药物组合物，其包含权利要求1-20任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
  23. 权利要求1-20任一项所述的化合物、其异构体或药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂或权利要求22所述的药物组合物在制备用于治疗由冠状病毒引起的疾病的药物中的应用；
    优选地，所述疾病为呼吸道传染病；
    优选地，所述呼吸道传染病为严重急性呼吸综合征；
    优选地，所述冠状病毒为SARS-CoV-2。
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