CN118043048A - M2或m2样巨噬细胞的诱导或激活剂、m2或m2样巨噬细胞的诱导或激活方法、用于预防和/或改善真皮的色素沉积的组合物、以及预防和/或改善真皮的色素沉积的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供包含烟酰胺或其药学上可容许的盐作为有效成分的、M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活剂；使用其的M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活方法。

Description

M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活剂、M2或M2样巨噬细胞的诱 导或激活方法、用于预防和/或改善真皮的色素沉积的组合 物、以及预防和/或改善真皮的色素沉积的方法
技术领域
本发明涉及M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活剂、M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活方法、用于预防和/或改善真皮的色素沉积的组合物、以及预防和/或改善真皮的色素沉积的方法。
背景技术
人皮肤的老化现象大致分为“自然老化”和“光老化”。光老化为在进行曝光的部位特异性地确认到的现象，为皮肤特异性。对于光老化，被认为是由于UV等的影响而诱发活性氧的产生、细胞的DNA的损伤等，皮肤纤维组织损伤，皱纹、松弛这样的表型出现的原因。例如，通过皮肤光老化而观察到由胶原形成的胶原纤维的减少、由弹性蛋白形成的弹性纤维的改性这样的现象。此外，黑素细胞也受到破坏，黑素色素大量产生，成为引起斑等的原因。
此外，以斑、暗沉为代表的色素沉积通过由位于表皮的基底层的黑素细胞产生出的黑素蓄积而发生。黑素通常存在于表皮、基底层，但表皮由于以较快的周期更新，因此这样的黑素易于被排出。另一方面，通过黑素从基底膜的间隙落入真皮等理由从而有时黑素存在于真皮层。真皮细胞的更新的周期与表皮相比非常慢，因此这样的黑素往往不被排出而被蓄积。由于这样的理由，因而真皮的色素沉积的改善非常困难。
作为抗光老化的美容法，例如，在专利文献1中，公开了一种皮肤光老化的预防或抑制剂，其预防白细胞弹性蛋白酶的抑制。在专利文献2中，公开一种光老化抑制剂组合物，其特征在于，含有具有胶原合成促进作用的苋科无柱苋属的植物提取物和来源于动物的胶原蛋白肽。
作为用于改善真皮中的色素沉积的美容法，在非专利文献6中，提出通过将基底膜增强从而防止黑素向真皮的落入。
此外，也暗示出在皮肤的光老化现象中炎症成为一个原因，也大量开发了抗炎剂。在专利文献3中，公开了包含随着脂联素表达增加而诱导自体吞噬激活的化合物的抗老化用化妆料组合物。也暗示出为了改善真皮的色素沉积而利用由巨噬细胞带来的吞噬作用，在专利文献8中，公开了一种真皮斑预防/改善剂，其将巨噬细胞引诱到摄取了向真皮落入了的黑素的成纤维细胞使其吞噬。
巨噬细胞为在体内的各种组织局部存在，引起对异物、病原体的免疫应答的细胞，已知也参与炎症。巨噬细胞从未分化状态的M0巨噬细胞(以下有时简写为M0)分化为M1型和M2型。M1巨噬细胞(以下有时简写为M1)作为炎症型是已知的，M2巨噬细胞(以下有时简写为M2)作为修复型(抗炎型)是已知的。报导了M1巨噬细胞与M2巨噬细胞的平衡的不均衡与肥胖、2型糖尿病、动脉硬化这样的疾病相关(专利文献4～6、非专利文献1～5)。
以前，本发明人等发现在光接触的皮肤、色素沉积发生的部位，特异性地这些M1巨噬细胞与M2巨噬细胞的平衡(M1/M2平衡)紊乱，并发现了调整M1/M2平衡、特别是使M2巨噬细胞相对于M1巨噬细胞的比率上升在真皮中的光老化、色素沉积的预防/改善中是特别重要的(专利文献11)。因此，本发明人等以M1/M2平衡作为指标，探索了能够预防/改善光老化和/或真皮色素沉积的物质，结果也发现了小连翘提取物、凝血酸甲基酰胺、百里香提取物、黄檗和桉提取物中具有该效果。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本专利第5657723号公报
专利文献2：日本特开2017-203004号公报
专利文献3：日本特开2018-177805号公报
专利文献4：日本特表2014-504629号公报
专利文献5：日本特开2015-140334号公报
专利文献6：日本专利第6178088号公报
专利文献7：日本专利第6273304号公报
专利文献8：日本特开2018-072098号公报
专利文献9：日本专利第4781842号公报
专利文献10：国际公开第2012/057123号
专利文献11：国际公开第2020/213743号
专利文献12：日本特开平3-20207号公报
非专利文献
非专利文献1：Journal of the American College of Cardiology，Vol.62，No.20，2013，November 12，2013:1890-901
非专利文献2：Experimental&Molecular Medicine(2014)46，e70；doi:10.1038/emm.2013.135
非专利文献3：NATURE，VOL495，28MARCH 2013，pp524-530，doi:10.1038/nature11930
非专利文献4：Journal of Investigative Dermatology，2009April；129(4):1016-25.Epub 2008Oct 9.
非专利文献5：Stem Cell Research&Therapy(2018)9:88，https://doi.org/10.1186/s13287-018-0821-5
非专利文献6：Fujifilm Research&Development(No.55-2010):pp33-37
非专利文献7：Nat Immunol，2014.15(9):pp846-855
非专利文献8：Cell Metab.2017Feb 7；25(2):412-427
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的课题是提供具有预防和/或改善光老化和/或真皮色素沉积的效果的、能够诱导或激活M2或M2样巨噬细胞的新的药剂或方法。
用于解决课题的方法
本发明人等深入探索了用于预防和/或改善光老化和/或真皮色素沉积的剂，结果发现了，烟酰胺或烟酰胺与柏子仁提取物的混合物能够将巨噬细胞向M2或M2样巨噬细胞诱导或激活。基于这样的发现，开发了本发明。即，本发明包含以下方案。
[1]一种M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活剂，其包含烟酰胺或其药学上可容许的盐作为有效成分。
[2]根据项目1所述的诱导或激活剂，经由上述M2或M2样巨噬细胞来预防和/或改善真皮中的色素沉积。
[3]根据项目1或2所述的诱导或激活剂，其抑制巨噬细胞的糖酵解系统。
[4]根据项目1～3中任一项所述的诱导或激活剂，其促进巨噬细胞的需氧呼吸。
[5]根据项目1～4中任一项所述的诱导或激活剂，其进一步包含柏子仁提取物。
[6]一种组合物，其包含烟酰胺或其药学上可容许的盐和柏子仁提取物。
[7]一种方法，是有需要的对象中的M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活方法，其包含：
对上述对象应用烟酰胺或其药学上可容许的盐，诱导或激活M2或M2样巨噬细胞。
[8]根据项目7所述的方法，经由上述M2或M2样巨噬细胞来预防和/或改善上述对象的真皮中的色素沉积。
[9]根据项目7或8所述的方法，其抑制巨噬细胞的糖酵解系统。
[10]根据项目7～9中任一项所述的方法，其促进巨噬细胞的需氧呼吸。
[11]根据项目7～10中任一项所述的方法，其进一步包含柏子仁提取物。
[12]一种方法，是预防和/或改善有需要的对象中的真皮的色素沉积的方法，其包含：
对上述对象应用包含烟酰胺或其药学上可容许的盐和柏子仁提取物的组合物。
[13]烟酰胺或其药学上可容许的盐的用途，用于制造用于诱导或激活M2或M2样巨噬细胞的组合物。
[14]根据项目13所述的用途，经由上述M2或M2样巨噬细胞来预防和/或改善对象的真皮中的色素沉积。
[15]根据项目13或14所述的用途，其抑制巨噬细胞的糖酵解系统。
[16]根据项目13～15中任一项所述的用途，其促进巨噬细胞的需氧呼吸。
[17]根据项目13～16中任一项所述的用途，其进一步包含柏子仁提取物。
[18]烟酰胺或其药学上可容许的盐和柏子仁提取物的用途，用于制造用于预防和/或改善真皮中的色素沉积的组合物。
发明的效果
通过应用本发明，能够诱导或激活具有可以预防和/或改善光老化和/或真皮色素沉积的效果的、M2或M2样巨噬细胞。
附图说明
图1a显示从THP-1向M0、M1和M2巨噬细胞的诱导方法的概略。
图1b为从THP-1被诱导了的M0、M1和M2巨噬细胞的显微镜照片。
图1c的上图为显示从THP-1被诱导了的M0、M1和M2巨噬细胞产出的细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-10)的基因表达量的图。图1c的下图为显示M1和M2巨噬细胞的细胞表面标志物(M1：CD86，M2：CD206)的mRNA的表达量的图。用GAPDH的mRNA表达量进行校正，作为将M0的情况设为100％的相对值(％)而显示。
图2为在将对照(柏子仁无水解：对照)设为100％时，将分别添加了各浓度的柏子仁提取物(0.3ppm、1.0ppm、3.0ppm)的情况下的M1与M2的各标志物的表达量(标志物/GAPDH值)以相对值(％)显示的图。
图3a显示在未进行水解的柏子仁(对照)3ppm或添加了柏子仁水解物1.0ppm、3.0ppm的未成熟(M0)的状态的THP-1细胞中进行黑素添加后30分钟后的状况。
图3b为图3a的扩大图。黑箭头表示摄取了黑素的巨噬细胞。
图4显示在实验4中，关于M0巨噬细胞、M1巨噬细胞和M2巨噬细胞的细胞内活性，使用通量分析仪进行了解析的、(A)氧消耗速度(OCR)、(B)细胞外酸化速度(ECAR)、和(C)OCR/ECAR的结果。
图5显示在实验5中，将添加了柏子仁提取物的情况下的M0巨噬细胞的添加48小时后的对细胞内活性的影响使用通量分析仪进行了解析的结果。(A)标准化了的OCR，(B)基础OCR(A计测第3点的OCR的值)。
图6显示在实验5中，将添加了柏子仁提取物的情况下的M0巨噬细胞的添加48小时后的对细胞内活性的影响使用通量分析仪进行了解析的结果。(A)标准化了的OCR，(B)线粒体呼吸的OCR(A计测第3点与第12点之差的值)。
图7显示在实验6中，将由柏子仁提取物所包含的代表性的不饱和脂肪酸单独引起的M0巨噬细胞的添加48小时后的对细胞内活性的影响使用通量分析仪进行了解析的结果。(A)基础OCR，(B)线粒体呼吸的OCR。
图8显示在实验7中，将由柏子仁提取物所包含的各成分引起的M0巨噬细胞的添加24小时后的对细胞内活性的影响使用通量分析仪进行了解析的结果。(A)基础OCR，(B)线粒体呼吸的OCR。
图9显示实验8的方法的概略。
图10显示在实验8中，将由柏子仁提取物、或柏子仁提取物所包含的各成分引起的M1巨噬细胞分化时的对细胞内活性的影响使用通量分析仪进行了解析的结果。(A)基础OCR，(B)线粒体呼吸的OCR，(C)OCR/ECAR。
图11显示在实验9中，在M0巨噬细胞中添加烟酰胺而将24小时后的细胞内活性使用通量分析仪进行了解析的结果。(A)实验9的概略，(B)基础OCR，(C)线粒体呼吸的OCR，(D)OCR/ECAR，(E)标准化了的ECAR。
图12显示实验10的方法的概略。
图13显示在实验10中，在M1分化中的巨噬细胞中添加烟酰胺而将24小时后的细胞内活性使用通量分析仪进行了解析的结果。(A)基础OCR，(B)线粒体呼吸的OCR，(C)OCR/ECAR，(D)标准化了的ECAR。
图14显示实验11的方法的概略。
图15显示在实验11中，在M2分化中的巨噬细胞中添加烟酰胺而将24小时后的细胞内活性使用通量分析仪进行了解析的结果。(A)基础OCR，(B)线粒体呼吸的OCR，(C)OCR/ECAR，(D)标准化了的ECAR。
图16显示在实验12中，在M0巨噬细胞中添加柏子仁提取物、烟酰胺或它们的混合物(Mix)而将24小时后的细胞内活性使用通量分析仪进行了解析的结果。(A)实验12的概略，(B)线粒体呼吸的OCR。
图17显示在实验13中，在M1分化中的巨噬细胞中添加柏子仁提取物、烟酰胺或它们的混合物(Mix)而将24小时后的细胞内活性使用通量分析仪进行了解析的结果。(A)实验13的概略，(B)线粒体呼吸的OCR，(C)OCR/ECAR。
图18显示在实验14中，在M2分化中的巨噬细胞中添加柏子仁提取物、烟酰胺或它们的混合物(Mix)而将24小时后的细胞内活性使用通量分析仪进行了解析的结果。(A)实验14的概略，(B)线粒体呼吸的OCR。
具体实施方式
巨噬细胞为在体内的各种组织局部存在，引起对异物、病原体的免疫应答的细胞，已知也参与炎症。巨噬细胞从未分化状态的M0巨噬细胞(以下有时简写为M0)分化为M1型和M2型。M1巨噬细胞(以下有时简写为M1)作为炎症型是已知的，M2巨噬细胞(以下有时简写为M2)作为修复型(抗炎型)是已知的。
本发明人等以前发现在光接触的皮肤、色素沉积发生的部位，特异性地这些M1巨噬细胞与M2巨噬细胞的平衡(M1/M2平衡)紊乱，并发现了调整M1/M2平衡在真皮中的光老化、色素沉积的预防/改善中是特别重要的(专利文献11)。因此，本发明人等以M1/M2平衡作为指标，探索了能够预防/改善光老化和/或真皮色素沉积的物质，结果发现烟酰胺和柏子仁能够诱导或激活M2或M2样巨噬细胞，从而开发了本发明。已报导在柏子仁中，具有作用于成纤维细胞而使成纤维细胞增殖、或使胶原、透明质酸的产生促进的效果、抑制黑素生成的效果(专利文献9和10)。此外，在烟酰胺中，已知血液循环促进作用、肌肤粗糙改善作用、美白作用等(例如，专利文献12)。然而，通过本发明人等这次首次发现了柏子仁和烟酰胺诱导或激活修复型的M2巨噬细胞或M2样巨噬细胞，由此能够调整/改善M1/M2平衡。
在一实施方案中，本发明提供包含烟酰胺或其药学上可容许的盐作为有效成分的、M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活剂。此外，本发明涉及的M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活剂经由通过该剂而被诱导了或被激活了的M2或M2样巨噬细胞而能够预防和/或改善真皮中的色素沉积。
在一实施方案中，本发明提供包含烟酰胺或其药学上可容许的盐和柏子仁提取物的组合物。
此外，在一实施方案中，本发明提供一种方法，是有需要的对象中的M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活方法，其包含：
对上述对象应用烟酰胺或其药学上可容许的盐，诱导或激活M2或M2样巨噬细胞。
此外，在一实施方案中，本发明提供一种方法，是预防和/或改善有需要的对象中的真皮的色素沉积的方法，其包含：
对上述对象应用包含烟酰胺或其药学上可容许的盐和柏子仁提取物的组合物。
此外，本发明提供烟酰胺或其药学上可容许的盐的用途，用于制造用于诱导或激活M2或M2样巨噬细胞的组合物。
此外，本发明提供烟酰胺或其药学上可容许的盐和柏子仁提取物的用途，用于制造用于预防和/或改善真皮中的色素沉积的组合物。
在本说明书中，所谓色素沉积，是指真皮和表皮中的色素的沉积，例如，除了由光老化引起的黑素等色素沉积以外，也包含被人为注入了的色素(例如，刺青、纹身)。本发明在真皮和表皮中都是有效的，但特别是，在由噬黑素细胞引起的吞噬以外改善方法有限这样的意图下作为对真皮的色素沉积的对策而大受期待。通过本发明的应用，可以使由色素沉积引起的斑、暗沉、黑眼圈等被改善。此外，对于为了在真皮层注入色素而暂时加入色素则消失困难的刺青、纹身等的消色也是有效的。
在本说明书中，“M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活”，是指将巨噬细胞(例如，M0巨噬细胞或M1巨噬细胞)向M2巨噬细胞分化诱导、或将巨噬细胞(例如，M0巨噬细胞、M1巨噬细胞或M2巨噬细胞)的细胞内活性向M2巨噬细胞所具有的细胞内活性(例如，需氧呼吸(线粒体呼吸)的促进和/或糖酵解系统的抑制(优选为与M1巨噬细胞所具有的细胞内活性进行了比较的情况下))诱导或激活。因此，所谓“M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活”，可以为使M2或M2样巨噬细胞的绝对数增加，也可以为使M1或M1样巨噬细胞的数相对于M2或M2样巨噬细胞的数，即，比率(M1/M2平衡)减少。在本说明书中所谓“M2样巨噬细胞”，是指显示M2巨噬细胞所具有的细胞内活性(例如，需氧呼吸(线粒体呼吸)的促进和/或糖酵解系统的抑制(优选为与M1巨噬细胞所具有的细胞内活性进行了比较的情况下))的巨噬细胞，可以不一定与M2巨噬细胞的标志物一致。
在本说明书中，所谓M1样巨噬细胞，是指显示M1巨噬细胞所具有的细胞内活性(例如，需氧呼吸(线粒体呼吸)的抑制和/或糖酵解系统的促进(优选为与M2巨噬细胞所具有的细胞内活性进行了比较的情况下))的巨噬细胞，可以不一定与M1巨噬细胞的标志物一致。
M1巨噬细胞例如能够以CD86、CD80、iNOS等标志物作为指标而测定。M2巨噬细胞例如能够以CD206、CD163、Agr1等标志物作为指标而测定。作为包含M1和M2的巨噬细胞整体的标志物，可举出CD11b、CD68等。追加地或代替地，可以通过将IL-1β、TNF-α这样的M1特异性的细胞因子、IL-10这样的M2特异性的细胞因子定量来测定M1和M2巨噬细胞。然而，只要是能够测定M1/M2平衡的标志物，就不限定于上述标志物。
在本说明书中，所谓M1/M2平衡，如上述那样可以是指M1巨噬细胞和/或M1样巨噬细胞的数、与M2巨噬细胞和/或M2样巨噬细胞的数的比率，例如，可以是指M1巨噬细胞的标志物(例如，CD86、CD80、iNOS等)的mRNA量与M2巨噬细胞的标志物(例如，CD206、CD163、Agr1等)的mRNA量的比率。对于光老化状态的皮肤，M1的比率变高，M2的比率变低，此外黑素吞噬作用高的是M2，因此M1/M2平衡的调整/改善可以使M2相对于M1的比率(M2的数/M1的数、和/或M2标志物的mRNA量/M1标志物的mRNA量)上升。上升例如可以为具有将显著性水平设为5％的统计学显著性差异(例如学生的t检验)的上升，和/或例如可以为1％以上、5％以上、10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、100％以上的上升。或者，M1/M2平衡的调整/改善可以为使M2相对于M1的比率(M2的数/M1的数、和/或M2标志物的mRNA量/M1标志物的mRNA量)为一定的范围内，例如可以为约4/6～约9/1、约5/5～约8/2、约5/5～约7/3等，可以接近于上述范围，可以维持在上述范围内，可以以上述范围为中心而保持恒有度。
在本说明书中，所谓M1/M2平衡，可以是指M1巨噬细胞的细胞内活性与M2巨噬细胞的细胞内活性的平衡，例如，可以使用M1巨噬细胞主要使用的细胞内活性(例如，糖酵解系统的状态)的指标、和/或M2巨噬细胞主要使用的细胞内活性(例如，需氧呼吸(线粒体呼吸)的状态)的指标而表示。细胞内活性例如可以通过测定细胞的氧消耗速度(OCR值)、细胞外酸化速度(ECAR值)、或OCR/ECAR值来评价。在本说明书中，所谓“使M2相对于M1的比率上升”，可以是指M2巨噬细胞主要使用的细胞内线粒体活性上升，例如，可以是指在包含M1巨噬细胞和M2巨噬细胞的群体中需氧呼吸(线粒体呼吸)上升(例如，在包含M1巨噬细胞和M2巨噬细胞的群体中需氧呼吸(线粒体呼吸)成为优势)、和/或在包含M1巨噬细胞和M2巨噬细胞的群体中作为厌氧呼吸的糖酵解系统的活性降低，例如，可以是指在包含M1巨噬细胞和M2巨噬细胞的群体中OCR值上升、和/或在包含M1巨噬细胞和M2巨噬细胞的群体中ECAR值降低、和/或在包含M1巨噬细胞和M2巨噬细胞的群体中OCR/ECAR值上升。细胞内活性例如通过使用Agilent Technologies(旧Seahorse Bioscience)社制的细胞外通量分析仪XFe24(24well用)从而可以将作为细胞的主要能量代谢途径的糖酵解系统、和采用线粒体的需氧呼吸的状态对细胞以无侵入/高灵敏度进行经时计测，但该装置为例示，细胞内活性的测定可以使用任意的装置、方法进行评价，因此不限定于该装置的利用。
光老化状态的皮肤，M1的比率变高，M2的比率变低，此外黑素吞噬作用高的是M2，因此M1/M2平衡的调整/改善可以使M2相对于M1的细胞内活性的比率、例如包含M1巨噬细胞和M2巨噬细胞的群体中的OCR值上升、和/或使包含M1巨噬细胞和M2巨噬细胞的群体中的ECAR值降低。在本说明书中，所谓“上升或降低”，例如，可以为具有将显著性水平设为5％的统计学显著性差异(例如学生的t检验)的上升或降低，和/或例如可以为1％以上、5％以上、10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、100％以上的上升或降低。
柏子仁(柏子仁，ハクシジン)为使柏科(Cupressaceae)的侧柏(Platycladusorientalis Franco，Thuja orientalis L.，Biota orientalis Endl.)的种子干燥后的生药。作为本发明所使用的柏子仁，优选使用种仁(胚乳部分)，但由于在种子整体中也包含有效成分，因此也可以使用种子整体。柏子仁可以通过常规方法制造，也可以使用市售品。
调制本发明能够使用的柏子仁提取物的方法可以以公知的方法(例如，专利文献9和10)为参考来制造，但不限定于它们。例如，作为本发明中能够使用的柏子仁提取物的调制方法，有对将植物的种子提取而获得的植物提取物实施碱处理的方法(以下，称为第1方法。)、和将植物的种子粉碎而在温度10～35℃、相对湿度20～90％下熟化了1周以上后提取的方法(以下，称为第2方法。)。
上述第1方法和第2方法所使用的提取溶剂只要是通常提取所使用的挥发性溶剂就可以为任何溶剂，特别是可以将甲醇、乙醇等醇类、含水醇类、丙酮、乙酸乙酯、己烷、醚等极性/非极性有机溶剂单独或组合使用，但丙酮、乙酸乙酯、己烷在为低价格，减压浓缩容易方面是特别优选的。其它，也可以使用采用超临界二氧化碳的提取。与此相对，大量包含水的提取溶剂由于活性成分的提取被抑制因此是不优选的。
在提取时，对种子的质量用1～100倍、优选为1～30倍左右的质量的溶剂进行一定期间提取。所使用的种子也能够根据需要适度地粉碎，但在过滤时堵塞成为问题的情况下等可以未粉碎直接使用。此外，也能够用少量的溶剂反复提取，可以使用索格利特那样的回流装置。在用超临界二氧化碳进行提取的情况下可以在40℃附近在20～40MPa的一般的条件下提取。
在第1方法中，通过在从这些提取物除去了提取溶剂后，进行碱处理，由此将提取物水解。碱处理在对溶剂除去后的提取物添加了0.2～2倍容量的浓碱水溶液后，充分搅拌混合，进行30分钟～数天左右熟化。作为混合时的温度，优选为室温～70℃的范围，进一步优选为30～60℃的范围。期望在熟化时以成分亲水性成分与亲油性成分不分离的方式适当进行搅拌。作为浓碱水溶液，可举出由1～10N的浓度的NaOH、KOH等构成的水溶液。
如果将如上述那样进行碱处理而水解了的提取物进一步用酸进行中和直到中性附近则油状物质分离出来。该油状物质一边发挥极其高的抗真皮色素沉积作用，一边对肌肤显示高的安全性。为了油状物质回收促进，可以将醇、丙酮类等在碱处理后适当加入，进一步也可以然后根据需要加入脱色、脱臭、脱盐、蒸馏等操作。
根据调制柏子仁提取物的第2方法，在提取的前阶段将种子适度地粉碎或压成片，直接在室温附近熟化一定期间。关于熟化期间，只要是获得作为目的效果的范围，就没有特别问题，但如果熟化期间短至一周以内则难以获得充分的美白效果，如果相反持续数年，则发生腐败、氧化变臭的问题，是不优选的。此外在熟化中根据需要，通过进行抗氧化剂添加、氮气置换等，也能够抑制变臭。
从这样地熟化了的种子，使用上述提取溶剂/提取法进行提取。提取后根据需要，进行溶剂除去/脱色/脱臭/蒸馏等操作。通过将这样的特定的种子粉碎而熟化后进行提取从而获得的提取物与上述进行了碱处理的提取物同样地一边发挥抗真皮色素沉积作用，一边对肌肤显示高的安全性。
在本发明中，可以提供由上文所述那样的从植物的种子通过第1方法或第2方法而调制出的提取物构成的安全且抗真皮色素沉积效果优异的植物性的、预防和/或改善光老化和/或真皮色素沉积的剂，进一步可以提供混配了本剂的皮肤外用剂。
烟酰胺(CAS No.98-92-0)为烟酸的酰胺化合物，已知血液循环促进作用、肌肤粗糙改善作用、美白作用等。然而，通过本发明人等这次首次发现了烟酰胺调整M1/M2平衡、例如能够诱导或激活M2或M2样巨噬细胞。本发明所使用的烟酰胺或药学上可容许的盐可以为从天然物的提取物，可以为通过公知的方法而合成了的物质。例如，具体而言，可以使用第17修订日本药典所收载的物质。药学上可容许的盐可举出例如，盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等无机酸盐、例如乙酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、马来酸盐、甲苯磺酸盐、甲磺酸盐等有机酸盐、例如钠盐、钾盐、钙盐、铝盐等金属盐、例如三乙胺盐、胍盐、铵盐、肼盐、奎宁盐、辛可宁盐等与碱的盐等。
本发明的剂可以与任意的物质例如专利文献4～7等所记载的物质这样的已知M1/M2平衡调整/改善的公知的物质组合使用。其施与途径例如也可以任意地选择经皮施与、经口施与、皮下施与、经粘膜施与、肌肉内施与等，但为了预防和/或改善真皮的色素沉积而也有时优选为可以在皮肤的特定位置施与的经皮施与。此外，在表皮、真皮发生的色素沉积，为了可以从皮肤到达表皮、真皮，也有时优选为经皮施与。此外，M1/M2平衡的调整/改善例如可以为分化诱导为M2巨噬细胞，也可以采用其它任意的M1/M2平衡调整/改善法。
例如，本发明能够使用的剂或组合物调整/改善M1/M2平衡，其结果，抑制光老化和/或真皮色素沉积。本发明的M1/M2平衡调整/改善剂、抗光老化剂、色素沉积抑制剂、抗真皮色素沉积剂(以下将它们总称，有时称为“本发明的剂”。)可以单独含有上述有效成分的任1种，也可以以任意的组合和比率含有2种以上。
本发明的剂也可以为将上述有效成分与1种或2种以上其它成分例如赋形剂、载体和/或稀释剂等组合了的组合物。组合物的组成、形态是任意的，只要根据有效成分、用途等条件来适当选择即可。该组合物可以根据其剂型而以与赋形剂、载体和/或稀释剂等和其它成分适当组合了的处方，使用常规方法来制造。
本发明的剂可以混配于化妆品等而使用于人和动物，或作为医药制剂而施与人和动物。此外，可以混配于各种饮食品、饲料而使人和动物摄取。
在将本发明应用于化妆品、药品、准药品等皮肤外用剂的情况下，植物体或其提取物的混配量(干燥质量)可以根据它们的种类、目的、形态、利用方法等来适当确定。例如，在化妆料总量中，可以混配烟酰胺或药学上可容许的盐、以及/或柏子仁提取物0.00001％～50％(在提取物或生药的情况下，干燥质量换算)。
除了上述成分以外，进一步根据需要，在不损害本发明的效果的范围内，通常可以根据需要适当混配化妆品、药品、准药品等皮肤外用剂所使用的成分，例如抗氧化剂、油分、紫外线防御剂、表面活性剂、增稠剂、醇类、粉末成分、色料、水性成分、水、各种皮肤营养剂等。
本发明的皮肤外用剂能够作为被应用于外皮的化妆料、准药品等、特别适合地作为化妆料而应用，其剂型也只要可以应用于皮肤就没有限定，应用溶液系、增溶系、乳化系、粉末分散系、水-油二层系、水-油-粉末三层系、软膏、化妆水、凝胶、气雾剂等任意的剂型。
在使用本发明的剂作为化妆品的情况下，可以作为化妆水、乳液、粉底、口红、唇膏、卸妆霜、按摩霜、面膜、护手霜、洗手粉、洗澡液、爽身水、润体霜、浴用化妆品等形态而使用。
然而，本发明的剂和组合物的可采用形态不限定于上述剂型、形态。此外，本发明的剂或组合物可以与本发明的装置或方法或其它装置或方法等并用。
应用本发明的方法、装置、剂和组合物的对象可以为客观或主观上确认到皮肤光老化和/或色素沉积(例如，真皮色素沉积)的对象，也可以为希望想要预防色素沉积的对象。例如，可以为被判断为M1/M2平衡崩溃了的对象。在1实施方式中，可以为以皮肤中的M1/M2平衡作为指标而被判断为色素沉积度(例如，真皮色素沉积度)高的对象。或者，可以为担心皮肤的光老化特异性地的表型，例如斑、皱纹、松弛等的对象，也可以为担心表皮、色素沉积、例如斑、暗沉、胎记、刺青的痕迹等的对象。斑、皱纹、松弛、暗沉、胎记、刺青的痕迹等可以通过使用视觉判定、公知的指标来确定。
作为美容处置，没有特别限定，包含例如被认为包含本发明的剂或其它成分的化妆料的涂抹等对光老化和/或色素沉积抑制有效的任意的处置。所谓化妆料，是指被应用于皮肤的化妆料，是指例如化妆水、乳液、美容液、霜、粉底等，但不限定于它们，不是以皮肤状态的改善作为直接的目的的物质，但是指包含被涂抹于皮肤的物质全部，例如，也包含防晒剂等。或者，美容处置例如可以为对皮肤给予伸展刺激、按下刺激、按摩等物理刺激。美容处置可以为一次的处置，也可以为经数天～数周进行的继续的处置。美容处置可以个人地进行，也可以在美容室、化妆品的销售店、美容沙龙等中进行。
实施例
接下来通过实施例进一步详细地说明本发明。需要说明的是，本发明不限定于此。
实验1：THP-1的M0、M1和M2分化诱导实验
按照非专利文献1所记载的方法，使用作为来源于人的确立细胞株的THP-1，进行了向M1、M2巨噬细胞的分化诱导。具体而言，通过图1a所示的方法，在RPMI1640(Nakalai)中添加1mM丙酮酸钠(Nakalai)、2mM L谷氨酰胺(Nakalai)、10％ FBS而将THP-1进行了培养。然后，进一步加入100nM PMA(abcam)而刺激24小时使其分化为巨噬细胞。在分化为M1时进一步加入100ng/mL LPS(sigma)和20ng/mL IFNγ(R&D)而刺激24小时，在使其分化为M2时进一步加入20ng/ml IL-4(R&D)和20ng/mL IL13(R&D)而刺激了24小时。用显微镜观察，确认了如图1b所示那样形态变化了。
此外，提取各自的分化后或未分化的状态原样的细胞的mRNA，使用IL-1β、TNF-α、IL-10的探针(Applied Biosystems)通过TaqMan Gene expression assay进行realtimePCR，定量了表达量(图1c上图)。进一步，使用CD86抗体(R&D)、CD206抗体(BD)，同样地进行PCR而定量了表达量(图1c下图)。各自的值用GAPDH的mRNA表达量进行了校正。
如图1c所示那样，显示出通过上述方法而分化了的巨噬细胞分别产生对M1特征性的炎症性细胞因子(IL-1β、TNF-α)和对M2特征性的抗炎性细胞因子(IL-10)。进一步，这些分化诱导巨噬细胞分别显示出作为M1、M2巨噬细胞的表面标志物的CD86、CD206表达的增加。由这些结果确认了分化诱导成功了。因此，在以下实验中使用了通过上述方法而分化了的M1、M2巨噬细胞和未分化的M0巨噬细胞。
实验2：M1抑制/M2诱导剂的探索(1)
通过使用M1/M2的各种标志物，调整或改善M1/M2平衡，从而探索了能够预防和/或改善光老化和/或真皮色素沉积的剂，结果在对柏子仁中发现了强有力的M2诱导效果。需要说明的是，这里所使用的柏子仁提取物(无水解、或有水解)是参照日本专利第4781842号公报(专利文献9)、国际公开第2012/0571243号(专利文献10)而被调制出的，通过以下步骤而被调制出。需要说明的是，需要注意，在本发明中能够使用的调制柏子仁提取物的步骤不限定于以下所记载的步骤。
＜柏子仁提取物的调制＞
将柏子仁的种子(未粉碎、根据需要除去外壳)在5倍量(v/w)的丙酮或乙酸乙酯(酢エチ)或己烷中浸渍，在室温下进行了10天提取。用尼龙网(100目)预先除去残渣，进一步利用滤纸进行了过滤。在用旋转蒸发器从滤液除去了溶剂后，一边用搅拌叶片搅拌一边以NaOH的形式在100～300g/l提取物的范围内添加0.5～15N的NaOH(温度50℃)。一边以200rpm搅拌，一边进行了5小时处理。然后，缓慢地添加5N H2SO4，一边搅拌一边将pH降低直到1附近，回收了分离出来的油状物质。在回收了的油状物质中加入等容量的水进行水洗，除去了杂质/盐/过剩的酸。将油状物质减压干燥，制成了碱处理物(有水解的柏子仁提取物)。作为比较对照，使用了碱处理前的提取物(无水解的柏子仁提取物)。
将THP-1细胞在M0的未分化的状态直接使用，在37℃下培养了一晚。然后，将用溶剂(DMSO)溶解了的无水解(无碱处理)的柏子仁(对照)以成为3ppm、或将柏子仁水解物以成为0.3ppm、1ppm、或3ppm的方式添加，在37℃下培养了二晚。回收细胞而提取RNA，将CD86、CCR7、TNF-α、CD206、CD163、IL-10和GAPDH的表达量用real time PCR定量，将各基因的表达量除以GAPDH的表达量。其结果，柏子仁水解物浓度依赖地使CD86基因、TNF-α基因表达量降低，使CD206基因、IL-10基因增加了。因此可知柏子仁水解物具有M1诱导抑制并且M2诱导促进效果(图2)。
实验3：由柏子仁带来的黑素吞噬能力增加效果
在未成熟(M0)的状态的THP-1细胞中，将用溶剂(DMSO)溶解了的无水解(无碱处理)的柏子仁(对照)以成为3ppm、或将柏子仁水解物以成为1.0ppm、3.0ppm的方式添加了。在37℃下培养，在48小时后添加黑素溶液(Sigma社)，利用显微镜(Bio Station CT(Nikon))进行了观察。
将结果示于图3a～b中。在黑素添加30分钟后，添加了柏子仁的巨噬细胞开始摄取黑素(图3b的黑箭头)。进一步在3小时后，对照中未摄取黑素的细胞仍然大量存在，但对于添加了柏子仁水解物的样品，全部细胞摄取了黑素。
通过光老化，具有M1的比例增加，M2的比例越高皮肤胶原量越多，色素吞噬作用也越高的倾向(专利文献11)，因此暗示了作为M2诱导剂而被筛选出的柏子仁在真皮中色素沉积抑制效果高。
实验4：巨噬细胞的细胞内活性
关于用与实验1同样的方法从THP-1分化诱导了的M0巨噬细胞、M1巨噬细胞和M2巨噬细胞，使用Agilent Technologies(旧Seahorse Bioscience)社制的细胞外通量分析仪XFe24(24well用)(以下，称为“通量分析仪”)，以Nat Immunol，2014.15(9)：pp846-855(非专利文献7)为参考而计测了细胞内活性。需要说明的是，通量分析仪为能够将作为细胞的主要能量代谢途径的糖酵解、和利用线粒体的需氧呼吸的状态对细胞无侵入/高灵敏度地经时计测的装置。
使用通量分析仪，将寡霉素(ATP合成酶抑制剂)(“Oligo”)、FCCP(解偶联剂)、和鱼藤酮(线粒体复合体I抑制剂)+抗霉素A(线粒体复合体III抑制剂)(“Rot+Ant”)在规定的时间添加，计测了氧消耗速度(OCR)和细胞外酸化速度(ECAR)。ECAR、OCR的值使用了计测后18.3分钟后的基础OCR的值、基础ECAR的值。各自的计测值用将添加Hoechst而被染色了的细胞核进行计数而获得的细胞数进行了校正。
其结果显示出，按照M2巨噬细胞、M0巨噬细胞、M1巨噬细胞的顺序，利用线粒体的呼吸活性高(图4)。
实验5：由柏子仁提取物引起的对巨噬细胞的细胞内活性的影响
用与实验1同样的方法，准备从THP-1分化诱导了的M0、M1、M2，在M0中添加了用与实验2同样的方法而调整了的柏子仁提取物(柏子仁水解物)(0.3ppm、1ppm或3ppm)。在培育了48小时后，用通量分析仪计测了氧消耗速度(OCR)。各自的计测值用将添加Hoechst而被染色了的细胞核进行计数而获得的细胞数进行了校正(图5)。
其结果明确了，通过添加柏子仁提取物，从计测开始18.3分钟后(第3点的计测值)的基础OCR的值(图5)、和线粒体呼吸的值(从计测开始18.3分钟后的基础OCR的值减去了计测开始95.1分钟后的non mitochondrial respiration(与线粒体没有关联的氧消耗量)的值)(图6)显著增加。
实验6：由柏子仁提取物所包含的各成分引起的对巨噬细胞的细胞内活性的影响(1)
已知在柏子仁提取物中，包含作为ω3脂肪酸的亚麻酸、刺柏油酸、作为ω6脂肪酸的亚油酸等不饱和脂肪酸。报导了不饱和脂肪酸(EPA、DHA)作用于M1的炎症相关基因，抑制炎症(非专利文献8(Cell Metab.2017Feb7；25(2)：412-427))。因此，对柏子仁提取物所包含的不饱和脂肪酸对巨噬细胞的细胞内活性带来的影响进行了调查。
用与实验1同样的方法，准备从THP-1分化诱导了的M0、M2，在M0中添加亚油酸、亚麻酸或刺柏油酸(3ppm)，在48小时后，用与实验15同样的方法用通量分析仪计测了氧消耗速度(OCR)。各自的计测值用将添加Hoechst而被染色了的细胞核进行计数而获得的细胞数进行了校正。
其结果，由柏子仁提取物所包含的亚油酸、亚麻酸、刺柏油酸的添加引起的对M0巨噬细胞的基础OCR和线粒体呼吸的值确认不到与仅添加了溶剂(DMSO)的对照的显著性差异(图7)。
实验7：由柏子仁提取物所包含的各成分引起的对巨噬细胞的细胞内活性的影响(2)
调查了将添加了柏子仁提取物、或不饱和脂肪酸后的培育时间变更为24小时的情况下的M0的基础OCR和线粒体呼吸的值。实验方法是，将添加柏子仁提取物或不饱和脂肪酸后的培育时间变更为24小时，除此以外，实施了与实验6所记载的方法相同的方法。
其结果，在添加柏子仁提取物和各不饱和脂肪酸后24小时，观察不到基础OCR和线粒体呼吸的值的增加(图8)。
实验8：由柏子仁提取物所包含的各成分引起的对M1分化中的巨噬细胞的细胞内活性的影响
将在将用与实验1同样的方法从THP-1分化诱导了的M0进一步分化诱导为M1的工序中添加了柏子仁提取物或不饱和脂肪酸(亚油酸、亚麻酸、或刺柏油酸)的情况下的细胞内活性的变化使用通量分析仪进行了解析(图9)。
在将从THP-1分化诱导了的M0进一步分化诱导为M1时，添加柏子仁提取物、或不饱和脂肪酸而在24小时后使用通量分析仪，计测了氧消耗速度(OCR值)和细胞外酸化速度(ECAR值)。
其结果，基础OCR和线粒体呼吸仅在添加了柏子仁提取物的情况下确认到显著的上升(图10(A)和(B))。仅被报导了强的抗炎作用的亚麻酸，观察到ECAR值的强的抑制效果，其结果确认了OCR/ECAR值的上升。
M1分化中的巨噬细胞的线粒体呼吸虽然通过柏子仁提取物而显著地上升了，但对于柏子仁提取物所包含的单独不饱和脂肪酸，未确认到显著的上升，暗示出线粒体呼吸的上升这样的效果是由柏子仁提取物所包含的各种成分的混合带来的特异性的效果的可能性。
实验9：M1抑制/M2诱导剂的探索(2)
如在上述实验4中也显示出地那样，修复型的M2巨噬细胞与未分化状态的M0巨噬细胞和炎症型的M1巨噬细胞相比，线粒体呼吸高，通过线粒体呼吸而获得能量，另一方面，炎症型的M1巨噬细胞依赖糖酵解系统而获得能量。因此，以细胞内活性(线粒体呼吸和糖酵解系统)作为指标，探索了能够诱导M2或M2样巨噬细胞的物质，结果发现了烟酰胺能够使巨噬细胞的线粒体活性显著上升(图11)。
具体而言，用与实验1同样的方法，准备从THP-1分化诱导了的M0，在M0中添加了烟酰胺(0mM(对照)、0.6mM或3.0mM)。在培育了24小时后，用通量分析仪计测了氧消耗速度(OCR)和细胞外酸化速度(ECAR)。各自的计测值用将添加Hoechst而被染色了的细胞核进行计数而获得的细胞数进行了校正。
其结果明确了，通过添加烟酰胺，从计测开始18.3分钟后的基础OCR的值(图11(B))和OCR/ECAR值(图11(D))显著上升，线粒体呼吸的值(从计测开始18.3分钟后的基础OCR的值减去了计测开始95.1分钟后的non mitochondrial respiration(与线粒体没有关联的氧消耗量)的值)(图11(C))具有增加倾向。
由以上明确了，烟酰胺为能够使M0巨噬细胞的作为M2或M2样巨噬细胞特征的氧消耗速度(OCR)上升的物质。
实验10：由烟酰胺引起的对M1分化中的巨噬细胞的细胞内活性的影响
将在用与实验1同样的方法从THP-1分化诱导了的M0进一步分化诱导为M1的工序中添加了烟酰胺的情况下的细胞内活性的变化使用通量分析仪进行了解析(图12、图13)。
在将从THP-1分化诱导了的M0进一步分化诱导为M1时，添加烟酰胺，在24小时后使用通量分析仪，计测了氧消耗速度(OCR值)和细胞外酸化速度(ECAR值)。
其结果，如果在向M1的分化诱导中添加烟酰胺，则观察到ECAR值的抑制效果(图13(D))，其结果，确认了OCR/ECAR值的上升(图13(C))。
实验11：由烟酰胺引起的对M2分化中的巨噬细胞的细胞内活性的影响
将在将用与实验1同样的方法从THP-1分化诱导了的M0进一步分化诱导为M2的工序中添加了烟酰胺的情况下的细胞内活性的变化使用通量分析仪进行了解析(图14、图15)。
在将从THP-1分化诱导了的M0进一步分化诱导为M2时，添加烟酰胺，在24小时后使用通量分析仪，计测了氧消耗速度(OCR值)和细胞外酸化速度(ECAR值)。
其结果，如果在向M2的分化诱导中添加烟酰胺，则观察到ECAR值的抑制效果(图15(D))，其结果，确认了OCR/ECAR值的上升(图15(C))。
实验12：由烟酰胺和柏子仁提取物引起的对M0巨噬细胞的细胞内活性的影响
准备用与实验1同样的方法从THP-1分化诱导了的M0，在M0中，添加了柏子仁提取物(用与实验2同样的方法来调整。10ppm)、烟酰胺(0.1mM)或柏子仁提取物(10ppm)与烟酰胺(0.1mM)的混合物(mix)。在培育了24小时后，用通量分析仪计测了氧消耗速度(OCR)和细胞外酸化速度(ECAR)。各自的计测值用将添加Hoechst而被染色了的细胞核进行计数而获得的细胞数进行了校正。
其结果明确了，在24小时的添加时不发挥该效果的柏子仁提取物(10ppm)和烟酰胺(0.1mM)通过将它们混合添加而发挥协同效果，使M0巨噬细胞的OCR值显著增加(图16(B))。
实验13：由烟酰胺和柏子仁提取物引起的对M1分化中的巨噬细胞的细胞内活性的影响
将在将用与实验1同样的方法从THP-1分化诱导了的M0进一步分化诱导为M1的工序中添加了柏子仁提取物、烟酰胺或柏子仁提取物与烟酰胺的混合物(mix)的情况下的细胞内活性的变化使用通量分析仪进行了解析(图17)。
在将从THP-1分化诱导了的M0进一步分化诱导为M1时，添加柏子仁提取物(用与实验2同样的方法来调整。10ppm)、烟酰胺(0.1mM)、或柏子仁提取物(10ppm)与烟酰胺(0.1mM)的混合物(mix)，在24小时后使用通量分析仪，计测了氧消耗速度(OCR值)和细胞外酸化速度(ECAR值)。
其结果明确了，如果在向M1的分化诱导中添加烟酰胺，则在24小时的添加时不发挥该效果的柏子仁提取物(10ppm)和烟酰胺(0.1mM)通过将它们混合添加而发挥协同效果，使分化诱导为M1时的巨噬细胞的OCR值增加，此外，使ECAR值减少，使OCR/ECAR值增加(图17(B)、(C))。
实验14：由烟酰胺引起的对M2分化中的巨噬细胞的细胞内活性的影响
将在将用与实验1同样的方法从THP-1分化诱导了的M0进一步分化诱导为M2的工序中添加了柏子仁提取物、烟酰胺或柏子仁提取物与烟酰胺的混合物(mix)的情况下的细胞内活性的变化使用通量分析仪进行了解析(图18)。
将从THP-1分化诱导了的M0进一步分化诱导为M2时，添加柏子仁提取物(用与实验2同样的方法来调整。10ppm)、烟酰胺(0.1mM)、或柏子仁提取物(10ppm)与烟酰胺(0.1mM)的混合物(mix)，在24小时后使用通量分析仪，计测了氧消耗速度(OCR值)和细胞外酸化速度(ECAR值)。
其结果明确了，如果在向M2的分化诱导中添加烟酰胺，则在24小时的添加时不发挥该效果的柏子仁提取物(10ppm)和烟酰胺(0.1mM)通过将它们混合添加而发挥协同效果，使分化诱导为M2时的巨噬细胞的OCR值增加(图18(B))。
通过以上结果，暗示出烟酰胺和柏子仁提取物诱导或激活M2或M2样巨噬细胞，其结果，调整或改善M1/M2的平衡，从而可以预防和/或改善光老化和/或真皮色素沉积。

Claims (18)

1.一种M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活剂，其包含烟酰胺或其药学上可容许的盐作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的诱导或激活剂，经由所述M2或M2样巨噬细胞来预防和/或改善真皮中的色素沉积。
3.根据权利要求1或2所述的诱导或激活剂，其抑制巨噬细胞的糖酵解系统。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的诱导或激活剂，其促进巨噬细胞的需氧呼吸。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的诱导或激活剂，其进一步包含柏子仁提取物。
6.一种组合物，其包含烟酰胺或其药学上可容许的盐和柏子仁提取物。
7.一种方法，是有需要的对象中的M2或M2样巨噬细胞的诱导或激活方法，其包含：
对所述对象应用烟酰胺或其药学上可容许的盐，诱导或激活M2或M2样巨噬细胞。
8.根据权利要求7所述的方法，经由所述M2或M2样巨噬细胞来预防和/或改善所述对象的真皮中的色素沉积。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其抑制巨噬细胞的糖酵解系统。
10.根据权利要求7～9中任一项所述的方法，其促进巨噬细胞的需氧呼吸。
11.根据权利要求7～10中任一项所述的方法，其进一步包含柏子仁提取物。
12.一种方法，是预防和/或改善有需要的对象中的真皮的色素沉积的方法，其包含：
对所述对象应用包含烟酰胺或其药学上可容许的盐和柏子仁提取物的组合物。
13.烟酰胺或其药学上可容许的盐的用途，用于制造用于诱导或激活M2或M2样巨噬细胞的组合物。
14.根据权利要求13所述的用途，经由所述M2或M2样巨噬细胞来预防和/或改善对象的真皮中的色素沉积。
15.根据权利要求13或14所述的用途，其抑制巨噬细胞的糖酵解系统。
16.根据权利要求13～15中任一项所述的用途，其促进巨噬细胞的需氧呼吸。
17.根据权利要求13～16中任一项所述的用途，其进一步包含柏子仁提取物。
18.烟酰胺或其药学上可容许的盐和柏子仁提取物的用途，用于制造用于预防和/或改善真皮中的色素沉积的组合物。
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