KR101404967B1

KR101404967B1 - 광노화로 인한 피부 손상 개선 및 예방용 피부 미용 조성물

Info

Publication number: KR101404967B1
Application number: KR1020070074795A
Authority: KR
Inventors: 전희영; 김정기; 이지은; 이상준
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2007-07-25
Filing date: 2007-07-25
Publication date: 2014-06-13
Also published as: KR20090011339A

Abstract

본 발명은 광노화로 인한 피부 손상 개선 및 예방용 피부 미용 조성물 에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 비타민 C, 비타민 E 및 커큐민을 유효성분으로 함유함으로써 피부 광노화의 주된 원인이 되는 자외선에 의한 유해 작용을 방어함과 동시에 피부 손상을 효과적으로 감소시키고 보습 효능을 나타내는 우수한 피부 항노화 효과를 갖는 경구용 피부 미용 조성물에 관한 것이다.

비타민 C, 커큐민, 비타민 E, 피부 항노화, 경구용 피부 미용 식품

Description

광노화로 인한 피부 손상 개선 및 예방용 피부 미용 조성물{A skin beautifying composition for improving and preventing skin damages caused by photoaging}

본 발명은 광노화로 인한 피부 손상 개선 및 예방 기능을 갖는 피부 미용 조성물 에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 비타민 C, 비타민 E 및 커큐민을 유효성분으로 함유함으로써 피부 광노화의 주된 원인이 되는 자외선에 의한 유해 작용을 방어함과 동시에 피부 손상을 효과적으로 감소시키고 보습 효능을 나타내는 우수한 피부 항노화 효과를 갖는 경구용 피부 미용 조성물에 관한 것이다.

피부는 신체 표면을 완전히 덮고 있는 가장 큰 기관으로 외측으로부터 표피, 진피, 피하 조직으로 구성되어 있다. 표피는 외부 자극이나 병원균의 침입을 방지하고, 체온, 수분을 조절하는 역할을 한다. 진피는 결합조직(connective tissue)으로 구성되며, 아교섬유(collagenous fibers)와 일부 탄력 섬유(elastic fibers)로 인해 피부를 탱탱하고 탄력있게 유지시켜주는 기능을 한다. 피하조직은 결체 조직 으로 이루어진 층으로 여기에 존재하는 지방 세포들은 열을 보존하고 보호하는 완충 역할을 한다.

이와 같이 구성되어 있는 피부는 노화가 진행됨에 따라 주름, 기미, 주근깨 등이 생성되며, 탄력이 감소하게 된다. 피부 노화의 원인은 섬유아세포의 수가 감소하고 그 작용이 저하되어 섬유성분(콜라겐, 엘라스틴)의 합성량이 줄어들고, 피부 내 수분이 손실됨에 따라 유발되는 내인성 노화와 지속적인 자외선 노출에 의한 유해 작용에 의한 광노화로 나누어진다.

피부 노화에 대한 한 연구 결과에 따르면, 자연 노화된 피부와 광노화된 피부를 비교 하여 보았을 때 광에 의한 노화가 여러 가지 피부 노화 지표에 더욱 급격한 변화를 나타내는 것을 확인하여 내인성 노화보다 광에 의한 노화가 피부 노화에 더욱 주요한 영향을 미친다는 것을 밝혔다. 또한, 피부 노화에 관여하는 SOD, GPx, GR 등의 여러 가지 항산화 효소 중 카탈라아제(catalase)의 활성 저하가 가장 뚜렷이 나타남을 확인하였다(Rhie et al, J Ivest Dermatol, 2002 117(5) 1212-1217). 이러한 항산화 효소는 양이 너무 적으면 충분한 항산화 효과를 기대할 수 없으나, 지나치게 증가할 경우에는 오히려 일부 효소의 활성을 억제시키는 등의 부작용에 의해 체내에서 생성된 활성 산소를 적절하게 제거시키지 못하여 이들에 의한 조직의 손상을 유발할 수도 있다(Marta Wrona et al ., Free Radical Biology & Medicine,, 35(10), 1319-1329, 2003; Eun Jeong Choi et al ., Food and Chemical Toxicology, 43, 793-798, 2005).

광노화는 태양광 중의 자외선에 의해 기인하는 것으로, 피부가 자외선에 노 출되면 체내에서 활성산소(oxygen free radical)가 생성되며, 활성 산소는 피부 세포 및 조직의 손상, 멜라닌 생성 증가, 표피의 각질화 등을 유발한다. 각질층이 손상을 입으면서 각질층의 두께가 증가하고, 자외선에 의해 유발되는 유해한 신호 전달 작용에 의하여 진피층의 콜라겐 생성능이 감소하게 되면서 그 결과 진피층이 얇아져 굵고 깊은 주름이 생성된다.

광노화의 주된 원인이 되는 자외선으로부터 피부를 보호하기 위하여 주로 UV 차단제를 함유하는 화장품이나 의약품을 피부에 도포하는 방법이 사용되고 있다. 그러나 이런 제품은 진피층까지 흡수되지 못하고 표피에만 작용하므로 피부 노화 방지 효과가 일시적이며, 체내에 있는 활성 산소를 제거하지 못하여 활성 산소에 의한 노화 작용을 막기에는 한계가 있다. 이러한 단점을 극복하기 위하여 식품을 통한 전신적인 피부 노화 억제에 대한 관심이 증가하고 있는 추세이다.

이에 경구용으로 체내에 투여할 수 있는 미용 식품 개발이 시도되었다. 대한민국 공개 특허 공보 제 2005-0119384호에는 대두 추출물 분말과 홍삼 농축액 분말 함유하는 경구용 피부 미용 개선용 조성물이 개시되었으며, 대한민국 특허 공보 제 2006-0039788호에는 사상자 추출물을 함유하는 피부 미용 증진 및 피부 노화 방지를 위한 건강기능 식품 조성물이 개시되어 있다.

본 발명에서 사용하는 비타민 C, 비타민 E, 커큐민은 항산화 물질로서 산화적 스트레스에 기인하는 피부 질환, 피부암, 동맥경화 및 혈전과 같은 각종 질병을 예방·치유할 목적으로 건강 보조 식품을 비롯한 다양한 분야에서 사용되고 있다. 본 발명자들은 비타민 C, 비타민 E 및 커큐민을 함께 사용했을 때 항산화 효능의 상승효과가 나타남을 발견하고, 이 조성물의 최적 조합비를 도출하여 그 조성물이 이들을 개별적으로 사용했을 때보다 피부 항노화 효능의 상승 작용이 있으며 뛰어난 보습 효능을 가짐을 확임함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명은 자외선에 의한 유해 작용을 방어함과 동시에 피부 손상을 효과적으로 감소시키고 보습 효능을 나타냄으로써 부작용이 없으면서 우수한 피부 항노화 효과를 갖는 경구용 피부 미용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에서는 비타민 C, 비타민 E 및 커큐민을 유효성분으로 함유하는 경구용 피부 미용 조성물을 제공한다.

상기 비타민 C는 조성물의 유효성분 총 중량에 대하여 40~80중량% 함유되고, 상기 비타민 E는 조성물의 유효성분 총 중량에 대하여 1~40중량% 함유되며, 상기 커큐민은 조성물의 유효성분 총 중량에 대하여 10~50중량% 함유됨을 특징으로 한다.

상기 경구용 피부 미용 조성물은 자외선에 의한 피부 유해 작용, 피부 손상 및 표피 수분 손실을 방지하는 것을 특징으로 한다.

본 발명은 비타민 C, 비타민 E 및 커큐민을 유효성분으로써 적절히 혼합하여 함께 사용함으로써 피부 광노화의 주된 원인이 되는 자외선에 의한 유해 작용을 방어함과 동시에 피부 손상을 효과적으로 감소시키고 보습 효능이 있어 우수한 항노화 효과를 제공한다. 따라서, 본 발명에 따른 조성물은 경구용 피부 미용 조성물의 형태로 제공될 수 있으며, 이러한 경구용 피부 미용 조성물은 통상의 음료, 환, 과립, 정제, 캡슐 등의 건강 보조 식품을 비롯한 여러 제형의 식품으로 그 응용이 가능하다.

본 발명은 비타민 C, 비타민 E 및 커큐민을 유효성분으로써 동시에 함유하는 피부 보습 및 피부 항노화 기능을 갖는 경구용 피부 미용 조성물을 제공한다.

상기 비타민 C는 조성물의 유효성분 총 중량에 대하여 40~80중량% 함유된다. 비타민 C는 주요한 효능 물질로서 그 양이 많을수록 우수한 효능 작용을 보이지만, 단독으로 사용되었을 때는 혼합 사용했을 때보다 오히려 그 효능이 감소된다. 즉, 함량이 40중량% 미만일 때에는 항산화 효과가 기대치에 미치지 못하고, 80중량%를 초과할 경우에는 조성물의 효능이 오히려 더 감소하게 된다.

상기 비타민 E는 조성물의 유효성분 총 중량에 대하여 1~40중량% 함유된다. 비타민 E는 비타민 C에 이해 리사이클링(recycling)되는 것으로 알려져 있어 비타민 C와 함께 처리하였을 시에는 소량을 사용하여도 충분한 효능을 발휘하는 것으로 판단된다. 따라서, 다른 물질의 함량의 고려할 때 함량이 40중량%가 초과하는 것은 비경제적이다.

상기 커큐민은 조성물의 유효성분 총 중량에 대하여 10~50중량% 함유된다. 비타민 C와 일정 용량 이상 혼합하여 사용하면 동일 용량에서도 항산화 효과의 상승 작용이 있는 것으로 확인되었으나, 주요 항산화 효능은 비타민 C에 의해 나타나는 것으로 보여지므로, 적정한 상승 효과의 비율범위는 10~50중량%이다.

본 발명에 따른 조성물에서 상기 유효성분은 조성물 총 중량에 대하여 0.001% 이상 사용할 수 있고, 조성물의 100%까지 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 경구용 피부 미용 조성물은 자외선에 의한 피부 유해 작용, 피부 손상 및 표피 수분 손실을 방지하여 피부 보습 및 피부 항노화 기능을 제공한다.

본 발명에 따른 경구용 피부 미용 조성물은 통상의 음료, 환, 과립, 정제, 캡슐 등의 건강 보조 식품을 비롯한 여러 제형으로 제조할 수 있다.

이하, 시험예를 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 하지만 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.

[시험예 1] 항산화 물질의 복합 처리에 따른 활성 산소 소거능 평가

피부 각질 세포주를 이용하여 비타민 C, 비타민 E, 커큐민을 단독·혼합 사용하였을 때 UV에 의해 발생되는 활성 산소 소거능의 차이를 평가하였다.

<세포 배양과 물질 처리>

본 실험에 사용한 Hacat 세포주(human keratinocyte cell line)는 Dr. N.E. Fusenig(Heidelberg, Germany)에게 기증받아 사용하였으며, 10% FBS, 100IU/ml 페니실린과 100g/ml 스트렙토 마이신을 포함하는 DMEM(Dulbeccos Modification of Eagles Medium, Sigma Co.)을 배양액으로 하여 37℃ 배양기에서 공기(95%)와 CO₂(5%)의 혼합기체를 지속적으로 공급하여 주며 배양하였다. Hacat 세포를 배양용기에 이식하고 24시간 후 배양액을 FBS free DMEM으로 교체하고 활성을 측정하고자 하는 시료를 배양 세포에 처리하였다. 시험 시료를 넣고 24시간 배양 후에 HCSS(HEPES-buffered control salt solution)로 세척하여 남아있는 배지를 제거하였으며, HCSS의 조성은 다음과 같다.

※ HCSS(HEPES-buffered control salt solution) 조성

NaCl 120mM(7.0128g/L), KCl 5mM(0.37275g/L), MgCl2 1.6mM(327ul/L), CaCl2 2.3mM(0.2553g/L), 글루코스 15mM(2.703g/L), HEPES 20mM(4.766g/L), NaOH 10mM(0.4g/L)

배지를 제거한 후, HCSS에 20μM로 준비된 DCFH-DA(2’,7’- dichlorodihydro-fluorescein diacetate, Molecular Probes, Inc)를 100ml 가하고 37℃, 5% CO₂ 조건에서 20분간 배양하고 HCSS로 세척하였다. HCSS를 100ml 가한 후 초기에 ROS로 산화된 DCF(dichlorofluorescein)의 형광도를 형광플레이트 리더(Ex=485nm, Em=530nm)로 형광 강도를 측정하였다. 이후 UVA(5, 10 J/m²)과 UVB(10, 20, 30mJ/cm²)를 각각의 실험조건의 세기로 처리하고, 처리직후 및 처리 3시간까지의 형광도를 형광플레이트 리더(Ex=485 nm, Em=530nm)로 형광 강도를 측정하였다. 각 실험군은 하기 표 1과 같이 처리하였으며, 비교예는 수용성 비타민 E 유도체로서 항산화제인 트롤록스(trolox)(sigma. Co ltd.)를 처리한 것으로 하였다.

구 분	내 용
비교예 1	트롤록스(trolox)를 최종 농도가 10μM가 되도록 처리하였다.
실시예 1	비타민 C의 최종 농도가 각각 10μM가 되도록 처리하였다.
실시예 2	비타민 E의 최종 농도가 각각 10μM가 되도록 처리하였다.
실시예 3	커큐민의 최종 농도가 각각 10μM가 되도록 처리하였다.
실시예 4	비타민 C와 비타민 E(CE)의 최종 농도가 각각 5μM가 되도록 처리하였다.
실시예 5	비타민 C, 비타민 E, 커큐민(CECur)의 최종 농도가 각각 3.3μM가 되도록 처리하였다.

* 실시예에서 사용한 비타민 C, 비타민 E, 및 커큐민은 모두 sigma 사로부터 구입하여 사용

시료의 활성 산소계 소거능은 하기 수학식 1을 이용하여 나타내었으며, 그 결과는 하기 표 2와 도 1에 나타내었다.

구 분	활 성 (%)
비교예 1	21.7 ± 6.28
실시예 1	20.2 ± 0.68
실시예 2	24.1 ± 2.72
실시예 3	25.6 ± 2.54
실시예 4	31.6 ± 3.55
실시예 5	42.3 ± 2.24

상기 표 2 및 도 1를 보면, 비타민 C, 비타민 E, 커큐민을 단독 처리했을 때에는 트롤록스를 처리한 비교예 1의 경우와 활성 산소계 소거능이 비슷하였으나, 비타민 C와 비타민 E를 함께 처리하였을 때에는 활성 산소계 소거능이 단독 처리시보다 우수하며, 비타민 C, 비타민 E 및 커큐민을 함께 처리하였을 때에는 활성 산소계 소거능이 훨씬 더 우수하게 나오는 것을 확인할 수 있었다. 이를 통해 비타민 C, 비타민 E 및 커큐민을 동시에 사용하면 활성 산소계 소거능의 상승효과가 나타남을 알 수 있다.

[시험예 2] 비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 혼합 조성 비율 변화에 따른 활성 산소 소거능 평가

상기 시험예 1에서 비타민 C, 비타민 E 및 커큐민을 동시에 사용하였을 때 활성 산소 소거 활성의 상승효과가 나타남을 확인하여 이들 물질간의 최적 비율을 산정하기 위하여 하기와 같은 방법으로 실험을 수행하였다.

<세포 배양과 물질 처리>

활성 산소 소거 활성의 평가는 시험예 1과 같은 방법으로 실시하였고, 실험군은 비교예 1과 실시예 6~11로 정하고, 각 실험군은 하기 표 3과 같은 방법으로 처리하였다.

구 분	내 용
비교예 1	트롤록스(trolox)를 최종 농도가 10μM가 되도록 처리하였다.
실시예 6	비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 비율이 0.5:1.5:8이 되도록 하고, 세 물질 총합의 최종 농도가 10μM가 되도록 처리하였다.
실시예 7	비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 비율이 1:5:4가 되도록 하고, 세 물질 총합의 최종 농도가 10μM가 되도록 처리하였다.
실시예 8	비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 비율이 1.5:8:0.5가 되도록 하고, 세 물질 총합의 최종 농도가 10μM가 되도록 처리하였다.
실시예 9	비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 비율이 4:1:5가 되도록 하고, 세 물질 총합의 최종 농도가 10μM가 되도록 처리하였다.
실시예 10	비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 비율이 5:4:1이 되도록 하고, 세 물질 총합의 최종 농도가 10μM가 되도록 처리하였다.
실시예 11	비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 비율이 8:0.5:1.5이 되도록 하고, 세 물질 총합의 최종 농도가 10μM가 되도록 처리하였다.

시료의 활성 산소계 소거능은 상기 수학식 1을 이용하여 나타내었으며, 그 결과는 하기 표 4와 도 2에 나타내었다.

구 분	활 성 (%)
비교예 1	21.2 ± 5.47
실시예 6	14.5 ± 5.58
실시예 7	26.5 ± 2.53
실시예 8	20.8 ± 3.00
실시예 9	34.4 ± 1.48
실시예 10	39.6 ± 3.96
실시예 11	48.1 ± 2.81

상기 표 4 및 도 2를 통해, 활성 산소 소거 활성이 최대치에 이르는 비타민 C, 비타민 E 및 커큐민의 비율이 8:0.5:1.5 임을 알 수 있었다. 또한, 비타민 C의 양은 증가함에 따라 그 활성이 증가하는 양상을 나타내지만, 비타민 E의 함량이 일정 비율이상이 되면 상승효과가 나타나지 않음을 알 수 있었다. 따라서 바람직한 비타민 C, 비타민 E 및 커큐민의 혼합 비율은, 비타민 C는 40~80중량%, 비타민 E는 1~40중량%, 커큐민은 10~50중량% 함유되는 것임을 확인할 수 있었다.

[시험예 3-1] 비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 최적 혼합 조성물의 피부 효능 평가

- 피부 조직의 자유기 소거 활성 평가

본 발명의 최적 조합 조성물이 자외선에 의한 유해작용을 효과적으로 방지하여 주는지 연구하기 위하여 무모쥐(hairless rat, HWY/Slc, SD rat 유래)를 동물 모델로 채택하였다.

<단계 1. 실험동물과 시료의 준비와 처리>

구체적인 실험 방법은, 평균 체중 200-250g의 9~10주령의 암컷 무모쥐(hairless rat)를 20마리 준비하고, 5마리씩 4그룹으로 나누어 각각 정상군, UV 대조군과 실험군 1, 2로 정한 다음 일반 배합 사료로 1주일간 예비 사육하였다. 하기 표 5와 같이 시료 1, 2, 3을 제조하고, 정상군과 UV 대조군은 시료 1을, 실험군 1은 시료 2를, 실험군 2는 시료 3을 하기 표 6와 같은 방법으로 액체 투여용 주사기를 이용하여 총 2주 동안 주 5일 동일한 시간에 각 그룹에 경구 투여하였다. 경구 투여와 동시에 UV 대조군 및 실험군 1, 2에 주 3회 UV를 조사하였으며, 실험 기간중 총 UV 조사량이 9MED가 되도록 하였다.

구 분	내 용
시료 1	증류수에 카르복시 메틸 셀룰로오스(carboxy methyl cellulose, CMC)를 5%w/v가 되도록 용해하였다.
시료 2	비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 비율이 1:1:1가 되도록하고, 세 물질의 총합이 45mg/ml가 되도록 5%w/v CMC 용액에 용해하였다.
시료 3	비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 비율이 8:0.5:1.5가 되도록하고, 세 물질의 총합이 45mg/ml가 되도록 5%w/v CMC 용액에 용해하였다.

구 분	uv 조사	내 용
정상군	X	실험 동물에 시료 1을 1ml씩 경구 투여하였다.
UV 대조군	O	실험 동물에 시료 1을 1ml씩 경구 투여하여 항산화 물질이 150mg/kg로 섭취되도록 하였다.
실험군 1	O	실험 동물에 시료 2을 1ml씩 경구 투여하여 항산화 물질이 150mg/kg로 섭취되도록 하였다.
실험군 2	O	실험 동물에 시료 3을 1ml씩 경구 투여하여 항산화 물질이 150mg/kg로 섭취되도록 하였다.

<단계 2. 피부 조직 적출 및 단백질 정량>

정상군과 UV 대조군 및 실험군 1, 2 동물 모델의 피부 조직의 자유기 소거 활성을 평가하기 위하여 무모쥐(hairless rat)의 피부 조직을 적출하였다. 헤모글로빈에 의한 실험의 치우침(bias)을 방지하기 위해 피부 조직을 식염수로 충분히 세척(washing)해 주었다. 0.5g 피부 조직에 1ml의 라이시스 버퍼(lysis buffer)첨가한 후 균질기(homogenizer)를 이용해 피부 조직을 분쇄하고 이를 원심분리하여 (16000g, 5min) 상등액을 분석 시료로 사용하였다. 분석을 위하여 각 샘플의 단백질을 정량하고 각 시료가 1mg protein/ml이 되도록 하였다.

<단계 3. 피부 조직의 자유기 소거능 평가>

ABTS(2,2’-Azino-bis(3-ethylbenzthiazoline 6-sulfonic acid))를 pH5.0인 0.05M의 인산-시트르산(phosphate-citrate) 버퍼에 최종 농도가 150μM이 되도록 첨가하여 ABTS 용액을 제조하였다. 상기 ABTS 용액에 과산화수소(H₂O₂)와 퍼옥시다아제(본 실험에서는 퍼록시다아제로서 메트미오글로빈(metmyoglobin)을 시그마 사에서 구입하여 사용)를 각기 75μM과 2.5μM이 되도록 첨가하여 반응시켜 ABTS 라디칼(ABTS^·+)을 생성하였다. 분석 시료 2ml를 200ml의 ABTS 라디칼 용액에 첨가하고 완전히 혼합한 후, 상온에서 차광시킨 다음 15분간 반응시키고, 반응이 완료된 후 405nm에서 시료의 흡광도를 측정하였다. 이와 동시에 pH5.0인 0.05M의 인산-시트르산 버퍼에 트롤록스를 최종농도가 10mM, 2mM, 1mM, 100μM 및 10μM가 되도록 첨가하여 트롤록스 시료를 제조한 다음 상기 ABTS 라티칼 용액을 사용하여 위와 동일한 방법으로 반응시키고 흡광도를 측정하여 표준 곡선을 작성하였고, 혈장샘플의 자유기 소거능은 작성된 표준 곡선으로부터 도출된 수학식 2를 이용하여 TEAC(Trolox Equivalence Antioxidant Activity) 값으로 나타내었으며, 그 결과는 표 7과 도 3에 나타내었다. 여기에서 TEAC는 Trolox Equivalence Antioxidant Activity의 약어로, 평가 샘플의 자유기 소거능을 이와 동등한 활성을 발휘하는 트롤록스의 용량으로 표시해 주는 것으로 항산화 물질 간 활성의 상대비교가 가능하게 해주는 단위이다(Miller NJ. et al., Clinical Science, 84, 407-412, 1993).

시험군	자유기 소거 활성(mM/mg protein)
정상군	0.364 ± 0.059
UV 대조군	0.308 ± 0.069
실험군 1	0.360 ± 0.041
실험군 2	0.445 ± 0.044

상기 표 7 및 도 3의 결과를 통해, 본 발명의 최적 조합 조성물(실험군 2)이 각 물질을 1:1:1로 혼합하여 사용한 것(실험군 1)보다 우수한 자유기 소거 활성을 가짐을 확인할 수 있었다.

[시험예 3-2] 비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 최적 혼합 조성물의 피부 효능 평가

- 피부 조직의 지질 과산화(lipid peroxidation) 정도 평가

상기 시험예 3-1에서 얻어진 정상군, UV 대조군 및 실험군 1, 2의 무모쥐(hairless rat)의 피부 조직 분석 시료를 이용하여 피부 조직의 지질 과산화(lipid perxidation) 정도를 평가하였다. 평가는 Northewest life science speicialries, LLC 로부터 말론디알데히드(malondialdehyde, MDA) 분석 키트(assay kit, MDA-01)를 구매하여 사용하였으며, 그 결과는 하기 표 8와 도 4에 나타내었다.

시험군	말론디알데히드(MDA)(nmol/mg protein)
정상군	4.26 ± 1.6
UV 대조군	15.11 ± 3.1
실험군 1	7.15 ± 1.5
실험군 2	3.56 ± 0.8

상기 표 8 및 도 4의 결과를 통해, 본 발명의 최적 조합 조성물(실험군 2)이 각 물질을 1:1:1로 혼합하여 사용한 것(실험군 1)보다 자외선에 의해 유발되는 지질 과산화(lipid peroxidation) 정도를 방지하는 효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

[시험예 3-3] 비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 최적 혼합 조성물의 피부 효능 평가

- 피부 조직의 카탈라아제 활성 평가

상기 시험예 3-1에서 얻어진 정상군, UV 대조군 및 실험군 1, 2의 무모쥐(hairless rat)의 피부 조직 분석 시료를 이용하여 피부 조직의 카탈라아제(catalse) 활성을 평가하였으며, 평가는 Aebi의 카탈라아제 활성 평가법(Aebi H, Meth Enzymol (1984) 105, 121-126)을 사용하였다. 실험법을 간단히 요약하자면, 0.015M H₂O₂가 들어있는 pH7.0의 0.01M 인산염 버퍼(phosphate buffer) 1ml에 50㎍ 단백질(protein)의 분석 시료를 처리한 후 H₂O₂의 감소율을 1분 동안 240nm의 흡광도에서 측정해 그 값을 카탈라아제 U/mg protein의 값으로 나타내었다. 실험에 따른 결과는 하기 표 9과 도 5에 나타내었다.

시험군	카탈라아제 활성(U/mg protein)
정상군	11.5 ± 1.6
UV 대조군	15.6 ± 1.1
실험군 1	12.7 ± 1.5
실험군 2	11.4 ± 1.8

상기 표 9 및 도 5의 결과를 통해, 본 발명의 최적 조합 조성물(실험군 2)이 각 물질을 1:1:1로 혼합하여 사용한 것(실험군 1)보다 자외선에 의해 카탈라아제가 비정상적으로 활성화하는 것을 억제하며, 카탈라아제 활성 정도가 정상군의 경우와 비슷함을 확인할 수 있었다.

[시험예 4-1] 비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 최적 혼합 조성물의 피부 효능 평가

- 피부 조직의 표피 수분 손실량(TEWL, transepidermal water loss) 평가

본 발명의 최적 조합 조성물이 자외선에 의한 유해작용을 효과적으로 방지하여 주는 것을 발견하여 상기 조성물이 자외선에 의한 표피 수분 증발을 방지하고 피부 손상을 완화하는 지를 평가하기 위하여 실험을 진행하였다.

<단계 1. 실험동물과 시료의 준비와 처리>

구체적인 실험 방법은, 상기 시험예 3-1과 같은 방법으로 동물을 준비하고, 4그룹으로 분류한 다음 상기 표 5와 같이 준비한 시료를 상기 표 6과 같은 방법으로 액체 투여용 주사기를 이용하여 총 4주 동안 주 5일 동일한 시간에 각 그룹에 경구 투여하였다. 경구 투여와 동시에 UV 대조군 및 실험군 1, 2에 주 3회 UV를 조사하였으며, 실험 기간 중 총 UV 조사량이 24MED가 되도록 하여 UV 에 의한 표피 수분 증발 및 피부 손상을 유발하였다.

<단계 2. 피부 조직의 TEWL 평가>

각 실험 동물은 표피 수분 증발량을 평가하기 전에 마취하였으며, Delfin Technologies ltd에서 vapometer wireless (SWL 4102)를 구매하여 평가에 사용하였다. 실험에 따른 결과는 하기 표 10과 도 6에 나타내었다.

시험군	TEWL(g/m²/hr))
정상군	10.3 ± 2.1
UV 대조군	18.6 ± 1.4
실험군 1	15.2 ± 2.6
실험군 2	11.3 ± 2.4

상기 표 10 및 도 6의 결과를 통해, 본 발명의 최적 조합 조성물이 각 물질을 1:1:1로 혼합하여 사용하였을 때 보다 효과적으로 자외선에 의하여 유발되는 표피 수분 손실을 방지함을 확인할 수 있었다.

[시험예 4-2] 비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 최적 혼합 조성물의 피부 효능 평가

- 피부 조직의 손상 정도 육안 평가

상기 시험예 4-1의 각 실험군 개체의 UV에 의한 피부 손상 정도를 육안으로 평가하여 본 발명의 최적 조합물이 각 물질을 1:1:1로 혼합하여 사용하였을 때 보다 우수하게 피부 손상을 완화하는 것을 확인하였고, 그 결과는 도 7에 나타내었다.

도 1은 항산화 물질의 복합 처리에 따른 활성 산소계 소거능을 피부 각질 세포주를 이용하여 평가한 그래프이다.

도 2는 비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 혼합 조성 비율 변화에 따른 활성 산소계 소거능을 피부 각질 세포주를 이용하여 평가한 그래프이다(*: p-value<0.01).

도 3은 비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 최적 혼합 조성물 처리에 따른 무모쥐(hairless rat) 피부 조직의 자유기 소거 활성의 변화를 나타낸 그래프이다

도 4는 비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 최적 혼합 조성물 처리에 따른 무모쥐(hairless rat) 피부 조직 내 지질 과산화(lipid peroxidation)의 정도의 변화를 나타낸 그래프이다.

도 5는 비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 최적 혼합 조성물 처리에 따른 무모쥐(hairless rat) 피부 조직 내 카탈라아제의 활성 변화를 나타낸 그래프이다.

도 6은 비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 최적 혼합 조성물 처리에 따른 무모쥐(hairless rat)의 표피 수분 증발량의 변화를 나타낸 그래프이다.

도 7은 UV에 의한 피부 손상이 비타민 C, 비타민 E, 커큐민의 최적 혼합 조성물 처리에 따라 완화되는 정도를 보여주는 사진이다.

Claims

비타민 C, 비타민 E 및 커큐민을 유효성분으로서 동시에 함유하는 광노화로 인한 피부 손상 개선 및 예방용 피부 미용 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 비타민 C는 조성물의 유효성분 총 중량에 대하여 40~80중량%, 상기 비타민 E는 조성물의 유효성분 총 중량에 대하여 1~40중량%, 상기 커큐민은 조성물의 유효성분 총 중량에 대하여 10~50중량% 함유됨을 특징으로 하는 광노화로 인한 피부 손상 개선 및 예방용 피부 미용 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 자외선에 의한 피부 유해 작용을 개선 및 예방하는 것임을 특징으로 하는 광노화로 인한 피부 손상 개선 및 예방용 피부 미용 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 자외선에 의한 피부 손상을 개선 및 예방하는 것임을 특징으로 하는 광노화로 인한 피부 손상 개선 및 예방용 피부 미용 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 자외선에 의한 표피 수분 손실을 개선 및 예방하는 것임을 특징으로 하는 광노화로 인한 피부 손상 개선 및 예방용 피부 미용 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 음료, 환, 과립, 정제 또는 캡슐로 제형화됨을 특징으로 하는 광노화로 인한 피부 손상 개선 및 예방용 피부 미용 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 경구용임을 특징으로 하는 광노화로 인한 피부 손상 개선 및 예방용 피부 미용 조성물.