CN118010893A - 类花生酸在用于评估急性冠脉综合征患者血运重建术后发生不良心血管事件风险中的应用 - Google Patents
类花生酸在用于评估急性冠脉综合征患者血运重建术后发生不良心血管事件风险中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118010893A CN118010893A CN202410420962.6A CN202410420962A CN118010893A CN 118010893 A CN118010893 A CN 118010893A CN 202410420962 A CN202410420962 A CN 202410420962A CN 118010893 A CN118010893 A CN 118010893A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- eicosanoids
- acs
- risk
- adverse cardiovascular
- revascularization
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000002066 eicosanoids Chemical class 0.000 title claims abstract description 78
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 title claims abstract description 58
- 230000002411 adverse Effects 0.000 title claims abstract description 41
- 230000007211 cardiovascular event Effects 0.000 title claims abstract description 40
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 201000011244 Acrocallosal syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 51
- 208000019905 acrocephalosyndactyly Diseases 0.000 claims abstract description 51
- 206010051895 acute chest syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 51
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 41
- JSFATNQSLKRBCI-UHFFFAOYSA-N 15-Hydroxyeicosatetraenoic acid Chemical compound CCCCCC(O)C=CC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JSFATNQSLKRBCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims abstract description 22
- JBSCUHKPLGKXKH-ILYOTBPNSA-N 14,15-EET Chemical compound CCCCCC1OC1C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JBSCUHKPLGKXKH-ILYOTBPNSA-N 0.000 claims abstract description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 22
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- SYAWGTIVOGUZMM-ILYOTBPNSA-N (5Z,8Z,11Z)-14,15-dihydroxyicosatrienoic acid Chemical compound CCCCCC(O)C(O)C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O SYAWGTIVOGUZMM-ILYOTBPNSA-N 0.000 claims description 17
- JSFATNQSLKRBCI-VAEKSGALSA-N 15-HETE Natural products CCCCC[C@H](O)\C=C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JSFATNQSLKRBCI-VAEKSGALSA-N 0.000 claims description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000012224 working solution Substances 0.000 claims description 14
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 9
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 claims description 8
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 6
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N acetic acid;hydrate Chemical compound O.CC(O)=O PQLVXDKIJBQVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 claims description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 3
- 238000012937 correction Methods 0.000 claims description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 claims description 3
- 231100001160 nonlethal Toxicity 0.000 claims description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 3
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 2
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 claims description 2
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 claims description 2
- 125000001822 15-HETE group Chemical group 0.000 claims 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 abstract description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N all-cis-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 description 9
- YGJTUEISKATQSM-USWFWKISSA-N 15-oxo-ETE Chemical compound CCCCCC(=O)\C=C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YGJTUEISKATQSM-USWFWKISSA-N 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 235000020669 docosahexaenoic acid Nutrition 0.000 description 7
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 7
- YUFFSWGQGVEMMI-JLNKQSITSA-N (7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCC(O)=O YUFFSWGQGVEMMI-JLNKQSITSA-N 0.000 description 4
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 4
- MBMBGCFOFBJSGT-RPBOKJFVSA-N (4z,7z,10z,13z,16z,19z)-21,21,22,22,22-pentadeuteriodocosa-4,7,10,13,16,19-hexaenoic acid Chemical compound [2H]C([2H])([2H])C([2H])([2H])\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-RPBOKJFVSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JAZBEHYOTPTENJ-YSTLBCQOSA-N EPA (d5) Chemical compound [2H]C([2H])([2H])C([2H])([2H])\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-YSTLBCQOSA-N 0.000 description 3
- XEYBRNLFEZDVAW-YOLMOHOWSA-N PGE2-d4 Chemical compound OC(=O)CC([2H])([2H])C([2H])([2H])\C=C/C[C@@H]1[C@@H](\C=C\[C@@H](O)CCCCC)[C@H](O)CC1=O XEYBRNLFEZDVAW-YOLMOHOWSA-N 0.000 description 3
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021294 Docosapentaenoic acid Nutrition 0.000 description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 description 2
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 229940090949 docosahexaenoic acid Drugs 0.000 description 2
- 229960005135 eicosapentaenoic acid Drugs 0.000 description 2
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- HLHYXXBCQOUTGK-FHCQLJOMSA-N (7R,14S)-dihydroxy-(4Z,8E,10E,12Z,16Z,19Z)-docosahexaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C[C@H](O)\C=C/C=C/C=C/[C@H](O)C\C=C/CCC(O)=O HLHYXXBCQOUTGK-FHCQLJOMSA-N 0.000 description 1
- GCZRCCHPLVMMJE-RLZWZWKOSA-N 11-HETE Chemical class CCCCC\C=C/C=C/C(O)C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O GCZRCCHPLVMMJE-RLZWZWKOSA-N 0.000 description 1
- 101800000407 Brain natriuretic peptide 32 Proteins 0.000 description 1
- 102400000667 Brain natriuretic peptide 32 Human genes 0.000 description 1
- 101800002247 Brain natriuretic peptide 45 Proteins 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010023302 HDL Cholesterol Proteins 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 238000013211 curve analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000004139 eicosanoid metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000024924 glomerular filtration Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- VNYSSYRCGWBHLG-AMOLWHMGSA-N leukotriene B4 Chemical compound CCCCC\C=C/C[C@@H](O)\C=C\C=C\C=C/[C@@H](O)CCCC(O)=O VNYSSYRCGWBHLG-AMOLWHMGSA-N 0.000 description 1
- IXAQOQZEOGMIQS-SSQFXEBMSA-N lipoxin A4 Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\C=C/C=C/C=C/[C@@H](O)[C@@H](O)CCCC(O)=O IXAQOQZEOGMIQS-SSQFXEBMSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- HPNRHPKXQZSDFX-OAQDCNSJSA-N nesiritide Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 HPNRHPKXQZSDFX-OAQDCNSJSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013146 percutaneous coronary intervention Methods 0.000 description 1
- 229940127293 prostanoid Drugs 0.000 description 1
- 150000003814 prostanoids Chemical class 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000013517 stratification Methods 0.000 description 1
- OYPPJMLKAYYWHH-NXJDUNGTSA-N thromboxane B3 Chemical compound CC\C=C/C[C@H](O)\C=C\[C@H]1OC(O)C[C@H](O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O OYPPJMLKAYYWHH-NXJDUNGTSA-N 0.000 description 1
- DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N tristearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了类花生酸在用于评估急性冠脉综合征患者血运重建术后发生不良心血管事件风险中的应用。本发明还公开了一种评估或辅助评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的试剂盒，其包括用于检测ACS患者生物样品中类花生酸含量的产品。所述试剂盒还包括记载有如下判断标准的载体：对于ACS患者，当所述生物样品中15‑羟基二十碳四烯酸和14，15环氧二十碳三烯酸浓度较高时，则判定所述患者血运重建术后具有不良心血管事件的升高风险。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及类花生酸在用于评估急性冠脉综合征患者血运重建术后发生不良心血管事件风险中的应用。
背景技术
急性冠脉综合征（Acute coronary syndrome，ACS）是心肌血液供应突然减少所致的心脏急性不良综合征。血运重建治疗（包括经皮冠状动脉介入治疗）和冠状动脉旁路移植手术的发展使更多的ACS患者获益，但是约10%的ACS患者血运重建术后3年内仍发生死亡和复发性缺血性事件。因此，预测ACS患者血运重建后不良心血管事件发生风险，对改善患者预后具有重要意义。
目前已有风险评分机制对ACS患者进行危险分层，但这些评分机制未涵盖一些与ACS患者再发事件相关的标志物，未能识别ACS患者血运重建术后发生不良事件的残余风险，因此需要有新的生物标志物协助对ACS患者血运重建术后的风险进行全面评估。
发明内容
本发明的目的是提供类花生酸在用于评估急性冠脉综合征患者血运重建术后发生不良心血管事件风险中的应用。
第一方面，本发明提供了类花生酸、检测类花生酸的产品或类花生酸作为标志物在制备用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的产品中的应用；所述类花生酸为15-羟基二十碳四烯酸和/或14,15环氧二十碳三烯酸。
所述ACS患者是指，以2019年中华医学会发布的ACS诊断和治疗指南为依据，由于心肌血液供应突然减少所致的心脏急性缺血综合征患者。
所述不良心血管事件风险是指，ACS血运重建术后全因死亡、非致命性心肌梗死或缺血驱动的紧急血运重建的升高风险。
所述应用中，所述类花生酸的含量与ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险成正比。
所述评估包括：
1）如果单个ACS患者体内的类花生酸的含量高于预设阈值，则评估所述ACS患者在血运重建术后发生不良心血管事件的风险高；或，
2）如果存在多个ACS患者，则评估类花生酸含量高的ACS患者在血运重建术后发生不良心血管事件的风险高于类花生酸含量低的ACS患者。
第二方面，本发明提供一种筛选用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物的方法，包括如下步骤：
1) 获取来自ACS患者的生物样品，对生物样品进行前处理；
2) 利用LC-MS/MS法检测经前处理的生物样品中的各类花生酸水平；优选地，所述各类花生酸包括花生四烯酸(Arachidonic acid，ARA)，二十碳五烯酸(Eicosapentaenoicacid，EPA)，二十二碳五烯酸(Docosapentaenoic acid，DPA)，二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid，DHA)以及它们各自的衍生物；
3) 将所述ACS患者根据无不良心血管事件发生分为事件组和非事件组，将在事件组中的含量水平统计学显著地高于非事件组的类花生酸作为候选标志物；
4) 利用受试者工作特征（ROC）曲线分析，获得每个候选标志物的截止值，将所有患者分为高于截止值的高水平组和低于截止值的低水平组；
5) 再比较高水平组和低水平组中的患者之间发生不良心血管事件的发生率，使用多因素Cox回归分析，经过多因素校正后，其中高水平组发生主要终点事件风险统计学显著地高于低水平组的类花生酸，被确定为用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物。
所述生物样品为体液样品，选自尿液样品、浆膜腔积液样品、血液样品、血清样品、血浆样品或由此获得的血液脂质部分或血液脂蛋白部分。
所述类花生酸具体如下。
所述用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物为15-HETE和/或14,15-DHET。
所述主要终点事件包括全因死亡、非致死性心肌梗死和非计划内的血运重建中的任一种或多种，或其任意组合。
第三方面，本发明提供一种检测生物样品中类花生酸含量的方法，包括如下步骤：
（1）对生物样品进行前处理；
（2）使用LC-MS/MS法检测经前处理的生物样品中类花生酸；
（3）根据标准曲线方程，计算得到类花生酸含量。
步骤（1）中，所述前处理按照下述操作进行：将生物样品中加入乙腈、内标工作液、含BHT的乙醇溶液，涡旋混匀；4℃、14000 r/min 离心15 min；取上清液，吹干；将吹干后样本加入50%甲醇溶液复溶，涡旋混匀；4℃、14000 r/min离心5 min；取上清液，待测。
所述内标工作液的配制按照下述操作进行：取6-keto-PGF1a-d4、PGE2-d4、LTB4-d4、11,12-DHET-d11、20-HETE-d6、5-HETE-d8、8,9-EET-d11、EPA-d5、DHA-d5、ARA-d8内标液各10μL，共计100μL，加入100μL50%甲醇溶液[H2O：纯甲醇=1：1（体积比）]，配置得到内标工作液。其中，ARA-d8内标液的浓度为100μg/mL，其余内标液的浓度为10μg/mL，对应得到的其余内标工作液浓度为500ng/mL，ARA-d8内标工作液浓度为5μg/mL。
所述含BHT的乙醇溶液的配制按照下述操作进行：称量100mgBHT粉末，将其与10mL乙醇混合，振荡混匀。
步骤（2）中，所述检测的条件为：
色谱柱：C18；
流动相A：0.1%乙酸-水；
流动相B：乙腈：异丙醇的混合体积比为9:1；
流速：0.6 mL/min；
洗脱梯度：
步骤（3）中，所述标准曲线的建立按照下述操作进行：通过类花生酸外标/内标的峰面积比对实际浓度作图，构建得到各类花生酸对应的标准曲线。
步骤（3）中，所述标准曲线建立使用的内标物选自6-keto-PGF1a-d4、PGE2-d4、LTB4-d4、11,12-DHET-d11、20-HETE-d6、5-HETE-d8、8,9-EET-d11、EPA-d5、DHA-d5、ARA-d8。
步骤（3）中，所述标准曲线建立使用的梯度浓度标准溶液为15个浓度：0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.02ng/mL、0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL（其中EPA、ARA和DHA浓度为0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL）。
第四方面，本发明提供一种用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的试剂盒，其包括检测类花生酸含量的产品。
所述类花生酸为15-羟基二十碳四烯酸和/或14,15环氧二十碳三烯酸。
所述产品为用于检测来自ACS患者的生物样品中的类花生酸含量的试剂。进一步地，所述试剂为利用LC-MS/MS法检测类花生酸含量的试剂。
所述试剂盒还包括记录载体；所述载体记载如下判断信息：所述类花生酸的含量与ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险成正比；即，待测ACS患者生物样品中类花生酸含量越高，血运重建术后发生不良心血管事件的风险越高；其具体体现为：15-羟基二十碳四烯酸≥0.84ng/mL、14,15环氧二十碳三烯酸≥0.20ng/mL水平的患者，血运重建术后发生不良心血管事件的风险更高。
与现有技术相比，本发明取得的有益效果是：
1、本发明提供了以类花生酸作为标志物，用于评估和/或辅助评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险，对改善患者预后具有重要意义。
2、类花生酸的早期检测方法有酶联免疫测定和放射免疫测定方法，但这些方法仅能分析少量类二十烷酸分子，限制了对类二十烷酸代谢过程的研究效率。此外，对于结构相似的类二十烷酸分子，免疫学测定方法特异性较低。因此，现有类花生酸的检测方法在研究类二十烷酸代谢时具有局限性。而本发明使用LC-MS/MS法检测血中类花生酸含量，该方法使用的样本量较少，并能够同时检测出多种类花生酸的同分异构体，且具有灵敏度高、操作简便、重复性好的特点，易于临床推广。
附图说明
图1为ACS患者事件组和非事件组中有统计学差异的类花生酸含量。
图2为血浆15-HETE、14,15-DHET截断值分组预测ACS患者血运重建术后不良心血管事件的森林图。
图3为EPA、ARA、DHA、DPA、TXB2、TXB3、LXA4和LTB4。
图4为11种前列腺素类物质。
图5为11种HETE的同分异构体。
图6为10种HDoHE的同分异构体。
图7为4种DHET和3种DiHETE的同分异构体。
图8为4种EET、2种EDP和2种resolvin的同分异构体。
图9为7种HEPE的同分异构体。
图10为4种EEQ和2种oxo-ETE的同分异构体。
图11为2种DiHOME、2种EpOME的同分异构体、10,17-DiHDoHE和maresin-1。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。
下述实施例中生物样品（所述生物样品为体液样品，包括但不限于血液样品、血清样品、血浆样品或由此获得的血液脂质部分或血液脂蛋白部分以及尿液样品、浆膜腔积液样品）中类花生酸的检测方法按照下述方法进行：
1）LC-MS/MS样品加标蛋白沉淀。
2）在配备有超高压液相色谱串联质谱系统Acquity®串联Xevo TQS三重四级杆质谱仪(Waters Corp .)进行检测类花生酸水平。
3）将通过质谱法获得的所检测峰的质量和计数转化为相应类花生酸浓度列表，产生标准曲线(calibration curve)，以确定所检测的各类类花生酸的动态定量范围。
应用严格的阈值，从而将背景噪声与实际类花生酸分离。控制每个样品，并且仅当满足接受标准时方能接受。将所检测峰的质量和计数转化为相应各类花生酸名称的列表，并根据所测得类花生酸与内标的比值，应用标准曲线进行定量，并由样品体积获得它们的浓度。标准曲线由将已知量的内参与各类类花生酸标准品混合制得。
所述的内参物质如下表所示：
样本提取操作步骤如下：
1、标准品稀释
配制混合内标工作液：取6-keto-PGF1a-d4、PGE2-d4、LTB4-d4、11,12-DHET-d11、20-HETE-d6、5-HETE-d8、8,9-EET-d11、EPA-d5、DHA-d5、ARA-d8（其中除ARA-d8内标液浓度为100μg/mL，其余内标液浓度为10μg/mL）内标各10μL共计100μL，加入100μL50%甲醇[H2O:纯甲醇=1：1（体积比）]，配置成浓度500ng/mL（ARA-d8为5μg/mL）的内标工作液200μL，待用。
配制混合外标工作液：取74个类花生酸系列标品，用50%甲醇作为溶剂，制备1μg/mL（其中EPA、ARA和DHA浓度为10μg/mL）的混合外标工作液。
配制纯标梯度：取混合外标工作液（1μg/mL）20μL加入80μL 50%甲醇中配置200ng/mL混和外标稀释液。随后用50%甲醇将200μg/mL外标混合液稀释成系列浓度工作液15个浓度：0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.02ng/mL、0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL（其中EPA、ARA和DHA浓度为0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL）。
2、类花生酸样品前处理
（1）取50μL血清或标准系列工作液到新的1.5mL离心管中；
（2）往离心管中依次加入544μL乙腈、5μL混合内标工作液、1μL含BHT的乙醇溶液，涡旋混匀；
含BHT的乙醇溶液的配制：天平称量100mgBHT粉末，将其与10mL乙醇混合，振荡混匀；
（3）使用高速冷冻离心机，4℃、14000 r/min 离心15 min；
（4）取500μL上清液转移至新的1.5mL离心管，使用氮吹仪吹干；
（5）每个样本加50μL 50%甲醇溶液复溶，涡旋混匀；
（6）使用高速冷冻离心机，4℃、14000 r/min离心5 min；
（7）每个样本取上清液50μL加入进样瓶中，待测。
3、高效液相色谱串联质谱检测
具体步骤如下：将样品提取物(50μL)在45℃的柱温下加载到连接在Waters液相上的ACQUITY UPLCC18 1.7μm色谱柱上，进行检测；然后使用MassLynx操作软件进行分析，通过类花生酸外标/内标的峰面积比对实际浓度作图，构建得到各类花生酸对应的标准曲线；根据标准曲线和样品中类花生酸/内标的峰面积比，计算出样本中相应类花生酸的含量。
以15-HETE、14,15-DHET为例，其标准曲线方程如下：
15-HETE标准曲线方程为：y=0.056× x+0.003；
14,15-DHET标准曲线方程为：y=0.003× x+0.00008。
x是浓度，y是质谱响应信号强度。
类花生酸的线性范围是0.005-200ng/mL，标准曲线r2>0.995。
图3-图11为74种类花生酸的色谱图。
检测条件如下：
色谱柱型号为：ACQUITY UPLC C18 1.7 μm色谱柱。
配制流动相A（0.1%乙酸-水）：将40μL乙酸加入40mL水，混匀。
配制流动相B（乙腈：异丙醇的混合体积比为9:1）：将90mL乙腈与10mL异丙醇混合。
流速：0.3mL/min；
柱温：45℃；
洗脱梯度如下。
另外，色谱柱新换上时，对于类花生酸检测，要先用100%流动相B冲洗30min，再用100% 流动相A冲洗30min；长时间不检测样本时，要用100%流动相B封柱。
4、样品检测
15-HETE与14,15-DHET的批内与批间精密度通过动态范围内的三个浓度（0.2，2和50ng/mL）进行检测。
结果显示：
（1）15-HETE的批内精密度分别为13.4%、8.7%、3.8%，批间精密度分别为2.6%、1.2%、5.1%；
（2）14,15-DHET的批内精密度分别为6.4%、2.4%、2.5%，批间精密度分别为9.2%、0.9%、3.5%。
实施例
纳入2019年6月-2019年12月就诊于北京安贞医院诊断为住院行血运重建治疗的ACS患者309例。排除患者的标准为：严重身体残疾、非心脏原因导致预期寿命不足1年、失访的患者。
在医院病历管理系统及检验系统收集患者一般资料，包括：①个人资料：年龄、性别；②心血管危险因素：高血压病史、高脂血症病史、糖尿病史、吸烟史、体重指数；③临床检查：入院后进行GRACE评分，以及检验科首次检测的高敏肌钙蛋白、高敏C反应蛋白、B型脑钠肽、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖估算肾小球滤过率、左室射血分数。
对患者进行电话随访，中位随访时间为3.8年。
观察不良心血管事件发生情况，包括全因死亡、非致死性心肌梗死和非计划内的血运重建。
实验结果如下：
（1）根据有无不良心血管事件发生将患者分为事件组和非事组；其中33例（10.7%）发生不良心血管事件（事件组），非事件组276例。
（2）采用高效液相色谱串联质谱的方法测定血浆74种类花生酸水平，两组（事件组和非事件组）有统计学差异的类花生酸含量的结果如图1所示，事件组血浆15-HETE、15-oxo-ETE和14,15-DHET水平显著高于非事件组，即0.84(0.43-1.07)比0.47(0.32-0.73)、0.31(0.24-0.46)比0.19(0.13-0.33)和0.43(0.25-0.61)比0.18(0.10-0.51)，均P<0.05。由此得到初筛的候选标志物15-HETE、15-oxo-ETE和14,15-DHET。
（3）利用受试者工作特征（ROC）曲线分析15-HETE、15-oxo-ETE和14,15-DHET水平，获得三种类花生酸水平的截断值（依次为0.84ng/mL、0.15ng/mL、0.20ng/mL）；根据血浆15-HETE、15-oxo-ETE和14,15-DHET水平的截断值分别将患者分为两组，即15-HETE≥0.84ng/mL组、15-HETE<0.84ng/mL组；15-oxo-ETE≥0.15ng/mL组、15-oxo-ETE<0.15ng/mL组；14,15-DHET≥0.20ng/mL组和14,15-DHET<0.20ng/mL组；比较每两组患者之间不良心血管事件的发生情况；结果如图2所示，经过多因素校正后，15-HETE≥0.84ng/mL组患者发生主要终点事件风险是15-HETE<0.84ng/mL组的4.06倍(HR=4.06，95%CI: 1.60～10.31，P<0.003)，15-oxo-ETE≥0.15ng/mL组患者发生主要终点事件风险是15-oxo-ETE<0.15ng/mL组的2.43倍(HR=2.43，95%CI: 0.84～7.00，P=0.10)；14,15-DHET≥0.20ng/mL组是14,15-DHET<0.20ng/mL组的4.62倍(HR=4.62，95%CI:1.50～14.25，P<0.008)。因此，确定15-HETE、14,15-DHET为用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.类花生酸、检测类花生酸的产品或类花生酸作为标志物在制备用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的产品中的应用；
所述类花生酸为15-羟基二十碳四烯酸和/或14,15环氧二十碳三烯酸。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ACS患者是指由于心肌血液供应突然减少所致的心脏急性缺血综合征患者；
所述不良心血管事件风险是指，ACS血运重建术后全因死亡、非致命性心肌梗死或缺血驱动的紧急血运重建的升高风险；
其中所述类花生酸的含量与ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险成正比。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述评估包括：
1）如果单个ACS患者体内的类花生酸的含量高于预设阈值，则评估所述ACS患者在血运重建术后发生不良心血管事件的风险高；或
2）如果存在多个ACS患者，则评估类花生酸含量高的ACS患者在血运重建术后发生不良心血管事件的风险高于类花生酸含量低的ACS患者。
4.一种筛选用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物的方法，包括如下步骤：
1) 获取来自ACS患者的生物样品，对生物样品进行前处理；
2) 利用LC-MS/MS法检测经前处理的生物样品中的各类花生酸水平；
3) 将所述ACS患者根据有无不良心血管事件发生分为事件组和非事件组，将在事件组中的含量水平统计学显著地高于非事件组的类花生酸作为候选标志物；
4) 利用受试者工作特征曲线分析候选标志物水平，获得每个候选标志物的截止值，将所有患者分为高于截止值的高水平组和低于截止值的低水平组；
5) 再比较高水平组和低水平组中的患者之间发生不良心血管事件的发生率，使用多因素Cox回归分析，经过多因素校正后，其中高水平组发生主要终点事件风险统计学显著地高于低水平组的类花生酸，被确定为用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物为15-HETE和/或14,15-DHET；
所述主要终点事件包括全因死亡、非致死性心肌梗死和非计划内的血运重建中的任一种或多种，或其任意组合。
6.一种检测生物样品中类花生酸含量的方法，包括如下步骤：
（1）对生物样品进行前处理；
（2）使用LC-MS/MS法检测经前处理的生物样品中类花生酸；
（3）根据标准曲线方程，计算得到类花生酸含量。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述前处理按照下述操作进行：将生物样品中加入乙腈、内标工作液、含BHT的乙醇溶液，涡旋混匀；4℃、14000 r/min离心15 min；取上清液，吹干；将吹干后样本加入50%甲醇溶液复溶，涡旋混匀；4℃、14000r/min离心5 min；取上清液，待测。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述LC-MS/MS法检测的条件为：
色谱柱：C18；
流动相A：0.1%乙酸-水；
流动相B：乙腈：异丙醇的混合体积比为9:1；
流速：0.6 mL/min；
洗脱梯度：
。
9.一种用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的试剂盒，所述试剂盒包括检测类花生酸含量的产品；
所述类花生酸为15-羟基二十碳四烯酸和/或14,15环氧二十碳三烯酸。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述产品为用于检测来自ACS患者的生物样品中的类花生酸含量的试剂；
所述试剂盒还包括记录载体；
所述生物样品为体液样品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410420962.6A CN118010893A (zh) | 2024-04-09 | 2024-04-09 | 类花生酸在用于评估急性冠脉综合征患者血运重建术后发生不良心血管事件风险中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410420962.6A CN118010893A (zh) | 2024-04-09 | 2024-04-09 | 类花生酸在用于评估急性冠脉综合征患者血运重建术后发生不良心血管事件风险中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN118010893A true CN118010893A (zh) | 2024-05-10 |
Family
ID=90944718
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202410420962.6A Pending CN118010893A (zh) | 2024-04-09 | 2024-04-09 | 类花生酸在用于评估急性冠脉综合征患者血运重建术后发生不良心血管事件风险中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN118010893A (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107427221A (zh) * | 2015-01-09 | 2017-12-01 | 全球基因集团有限责任公司 | 用于诊断冠状动脉粥样硬化性疾病的基于血液的生物标志物 |
| CN109212087A (zh) * | 2018-10-22 | 2019-01-15 | 嘉兴迈维代谢生物科技有限公司 | 一种类花生四烯酸类物质检测方法 |
| CN111351881A (zh) * | 2020-04-01 | 2020-06-30 | 上海中科新生命生物科技有限公司 | 一种人血浆中花生四烯酸及其代谢产物检测方法 |
| CN111830163A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-10-27 | 南京品生医学检验实验室有限公司 | 超高效液相色谱串联质谱检测血清中18种脂肪酸的方法 |
-
2024
- 2024-04-09 CN CN202410420962.6A patent/CN118010893A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107427221A (zh) * | 2015-01-09 | 2017-12-01 | 全球基因集团有限责任公司 | 用于诊断冠状动脉粥样硬化性疾病的基于血液的生物标志物 |
| CN109212087A (zh) * | 2018-10-22 | 2019-01-15 | 嘉兴迈维代谢生物科技有限公司 | 一种类花生四烯酸类物质检测方法 |
| CN111351881A (zh) * | 2020-04-01 | 2020-06-30 | 上海中科新生命生物科技有限公司 | 一种人血浆中花生四烯酸及其代谢产物检测方法 |
| CN111830163A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-10-27 | 南京品生医学检验实验室有限公司 | 超高效液相色谱串联质谱检测血清中18种脂肪酸的方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| CHIN-CHOU HUANG 等: "Association of Arachidonic Acid-derived Lipid Mediators with Subsequent onset of Acute Myocardial infarction in patients with coronary Artery Disease", SCIENTIFIC REPORTS, vol. 10, 31 December 2020 (2020-12-31), pages 1 - 15 * |
| SEBASTIANO COLLINO 等: "Metabolic Signatures of Extreme Longevity in Northern Italian Centenarians Reveal a Complex Remodeling of Lipids, Amino Acids, and Gut Microbiota Metabolism", PLOS ONE, vol. 8, no. 3, 31 March 2013 (2013-03-31), pages 1 - 12 * |
| YAN WANG 等: "Comprehensive ultra-performance liquid chromatographic separation and mass spectrometric analysis of eicosanoid metabolites in human samples", JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY A, vol. 1359, 12 July 2014 (2014-07-12), pages 60 - 69, XP029047330, DOI: 10.1016/j.chroma.2014.07.006 * |
| 王康君 等: "急性冠状动脉综合征患者血浆环氧二十碳三烯酸水平与血脂关系及对预后的影响", 中华实用诊断与治疗杂志, vol. 31, no. 8, 31 August 2017 (2017-08-31), pages 766 - 768 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Biancotto et al. | Effect of anticoagulants on multiplexed measurement of cytokine/chemokines in healthy subjects | |
| EP2330423B1 (en) | Method for diagnosing diabetes type II | |
| Cavusoglu et al. | Relation of baseline plasma ADMA levels to cardiovascular morbidity and mortality at two years in men with diabetes mellitus referred for coronary angiography | |
| AU2011209431B2 (en) | Means and methods for diagnosing heart failure in a subject | |
| Böger et al. | Elevated levels of asymmetric dimethylarginine (ADMA) as a marker of cardiovascular disease and mortality | |
| US10502748B2 (en) | Method of differentiating stable angina pectoris from acute coronary syndrome and diagnostic kit thereof | |
| CA2838436A1 (en) | System and method of cytomic vascular health profiling | |
| CN104345149A (zh) | 一种检测糖化血红蛋白免疫层析试纸条及其制备方法 | |
| KR20230136714A (ko) | 공복 혈당 장애와 2형 당뇨병 발병 리스크를 평가하기 위한 통합 바이오 마커 시스템 | |
| Peake et al. | Improved separation and analysis of plasma amino acids by modification of the MassTrak™ AAA Solution Ultraperformance® liquid chromatography method | |
| Cheng et al. | Factors associated with elevated plasma phenylalanine in patients with heart failure | |
| Kanďár et al. | Determination of selected fatty acids in dried sweat spot using gas chromatography with flame ionization detection | |
| CN115112776B (zh) | 联合标志物及在诊断心房颤动中应用及诊断试剂或试剂盒 | |
| Katayama et al. | Simultaneous determination of glucose, 1, 5‐anhydrod‐glucitol and related sugar alcohols in serum by high‐performance liquid chromatography with benzoic acid derivatization | |
| CN118010893A (zh) | 类花生酸在用于评估急性冠脉综合征患者血运重建术后发生不良心血管事件风险中的应用 | |
| Alsayed et al. | Ethyl glucuronide and ethyl sulfate: a review of their roles in forensic toxicology analysis of alcohol postmortem | |
| Wang et al. | Growth differentiation factor-15 is a prognostic marker in patients with intermediate coronary artery disease | |
| CN116183746A (zh) | 一种基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法及其应用 | |
| CN105717205B (zh) | 用于诊断稳定型心绞痛的代谢标志物 | |
| Han et al. | Development and validation of a decision tree classification model for the essential hypertension based on serum protein biomarkers | |
| CN111579690A (zh) | 一种利用霉酚酸-d3作为内标物测定生物样本中霉酚酸含量的质谱检测试剂及其使用方法 | |
| CN114544924A (zh) | 甘油酯在疾病预测中的应用 | |
| CN113702539B (zh) | 儿茶酚胺类物质在制备用于预测高血压高危患者心血管事件风险的试剂盒中的应用 | |
| CN111323521A (zh) | 色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在st段抬高型心肌梗死预后中的应用 | |
| CN112964808A (zh) | 一种生物体液总同型半胱氨酸检测试剂盒和检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |