CN111323521A - 色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在st段抬高型心肌梗死预后中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于医学生物学技术领域，尤其涉及色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在ST段抬高型心肌梗死（STEMI）预后中的应用。所述的色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值可以作为ST段抬高型心肌梗死预后的生物标志物；所述的色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值可以用于制备ST段抬高型心肌梗死预后的试剂盒。本发明研究结果提示血清中犬尿氨酸/色氨酸比值的变化对STEMI患者1年MACCE发生具有较好的预测价值，犬尿氨酸/色氨酸代谢途径参与了STEMI患者1年MACCE的病理生理形成机制，为STEMI患者个体化治疗提供了循证医学的证据。

Description

色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在ST段抬 高型心肌梗死预后中的应用

技术领域

本发明属于医学生物学技术领域，尤其涉及色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在ST段抬高型心肌梗死(ST segment elevation myocardial infarction，STEMI)预后中的应用。

背景技术

急性心肌梗死是冠心病中最常见的代谢紊乱性疾病之一，炎症因素、环境因素和遗传因素的多重作用可以调节患者体内各种代谢途径的改变。研究证实，代谢紊乱机制在冠状动脉不稳定斑块的发生、发展及破裂的过程中起关键作用。冠状动脉粥样硬化血清中代谢产物的紊乱引起粥样硬化不稳定斑块内部巨噬细胞、炎性细胞的氧化应激、凋亡、自噬反应的异常，引起斑块内非免疫炎性反应的发生介导的炎性级联放大效应。它可能导致动脉粥样硬化不稳定斑块破裂并引起冠状动脉形成血栓，这可能是ST段抬高型心肌梗死患者发生的原因之一，因而分析STEMI患者血清中代谢产物的变化情况显得尤为重要。

STEMI不仅发病早期死亡率高，并且晚期预后差，临床上STEMI患者经治疗后，仍旧会出现预后不良的主要不良心脑血管事件(Major adverse cardiac and cerebralevents，MACCE)，导致患者的生活质量严重下降，为此我们亟需能评估STEMI预后不良的临床预测指标，以便及早筛选出心梗后MACCE事件高风险的患者，降低急性心肌梗死患者的病死率及致残率，对心梗后MACCE事件的发生进行有效的二级预防。

代谢组学作为系统生物学的组成部分，是生命科学研究领域中继基因组学、转录组学及蛋白组学之后的研究热点，越来越多的被应用在急性心肌梗死患者的诊断和预后工作中。代谢组学的主要研究内容是：对机体在病理生理刺激状态下分子量在1000以内的所有小分子量代谢物，同时进行定性和定量分析的动态、多参数代谢应答，具有高通量、分辨率及快速高效的特点。

色氨酸作为重要的必需氨基酸，不仅可以合成蛋白质，也可通过5-羟色胺途径或犬尿氨酸途径分解产生的多种生物活性分子。色氨酸在肝细胞中由组成型色氨酸2,3-双加氧酶氧化；在其他类型的细胞中，它是由诱导型吲哚胺2,3-双加氧酶在一定的病理生理条件下催化的，从而增加了犬尿氨酸类代谢物的形成。研究表明犬尿氨酸途径对免疫和炎症反应的调节至关重要。在炎症反应中，犬尿氨酸途径中的第一个限速酶IDO，可被炎症因子白介素-6、干扰素-γ等诱导激活，IDO的表达上调，进一步引起更多的色氨酸被降解为犬尿氨酸。因此，作为IDO活性的指标，犬尿氨酸/色氨酸比值(Kynurenine/Tryptophan，KTR)的增加可作为炎症反应的指标，并且与心血管事件的风险相关。研究发现冠心病患者血清、尿液犬尿氨酸/色氨酸比值升高与冠状动脉血栓形成和心血管不良事件的发生密切相关。犬尿氨酸/色氨酸代谢途径通过调节炎症反应、氧化应激和免疫激活反应在心血管疾病的发生中发挥重要的作用。

AMI相关的研究在各个方面取得了快速的进展，如果能够从代谢组学层面分析STEMI患者血清代谢谱的变化，阐述STEMI患者血清中代谢产物的改变，将对STEMI患者的临床预防和诊疗提供新的治疗靶点。本研究利用非靶向代谢组学的研究方法分析了STEMI患者血清代谢图谱的特征性改变，并结合靶向代谢组学的手段，目前临床上还尚未解决STEMI预后差，死亡率高这一难题，亟需一个在发病早期便能准确识别出预后不良患者的指标，探讨色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值在STEMI患者血清中的改变，以期寻找与STEMI发病密切相关的血清代谢标志物，对STEMI患者预后不良高风险患者进行早期干预并及时采取巩固治疗延长服药时间等相应医疗措施，这是提高急性心肌梗死远期生存率改善患者预后的关键。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在ST段抬高型心肌梗死预后中的应用。

为了实现上述问题，本发明采用以下技术方案。

色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在ST段抬高型心肌梗死预后中的应用。

色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在ST段抬高型心肌梗死预后中的应用，色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变作为ST段抬高型心肌梗死预后的生物标志物。

进一步地，所述的色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变用于预先判断ST段抬高型心肌梗死预后的指标。

所述的氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变用于制备ST段抬高型心肌梗死预后的试剂盒。

一种检测STEMI患者血清中色氨酸分解代谢通路中代谢产物的表达的方法，具体步骤如下。

步骤1、血浆的采集：研究对象入选后即刻抽取其静脉血，用含EDTA真空抗凝管收集血标本5ml。

步骤2、样本的处理：抽取静脉血10分钟内，抗凝管3000r/min离心处理10min，分离血浆，将处理好的血浆储藏于-80℃冰箱保存，采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用技术检测STEMI患者血清中色氨酸分解代谢通路中代谢产物的表达，本研究用于检测色氨酸分解代谢通路中6种代谢产物直接购于美国SIGMA公司。

步骤3、利用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用技术分析STEMI患者血清中色氨酸分解代谢通路中6种待测定的代谢产物的表达。

步骤4、对入选的患者进行为期一年的电话随访，终点事件定义为主要不良心脑血管事件包括：心衰、再发心梗、全因死亡、心源性死亡、脑梗塞；将发病后1年内发生MACCE事件与未发生MACCE事件的与色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变的相关关系。

与现有技术比，本发明的有益效果如下。

靶向代谢组学的主要任务是利用标准品等对已知的代谢产物进行定量分析验证，本研究应用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用技术定量检测犬尿氨酸/色氨酸代谢途径中关键代谢产物在STEMI血清中表达情况。STEMI患者血清色氨酸表达浓度明显降低；而犬尿氨酸/色氨酸比值及血清中犬尿氨酸类代谢产物的浓度在STEMI患者血清中显著高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。利用免疫组化染色分析发现，IDO在动脉粥样硬化不稳定斑块的巨噬细胞中大量表达。IDO是色氨酸转化为犬尿氨酸的限速酶，故冠状动脉粥样硬化斑块破裂后，斑块内的巨噬细胞释放大量的IDO入血，故STEMI组患者血清中IDO的浓度明显高于对照人群。STEMI发生是由于机体的氧化应激、免疫系统的激活而引起的自身炎症反应，炎性反应在动脉粥样硬化不稳定斑块破裂的发生过程中发挥重要的作用，而机体的自身免疫炎性反应可以通过激活犬尿氨酸/色氨酸代谢途径通路导致该通路上相应的代谢产物发生改变。而这些代谢产物又会产生炎性级联放大效应，加重体内的炎性反应。目前研究发现在炎症反应状态下，炎性因子如TNF-α、IFN-γ、IL-1、IL-6等，通过激活体内的血管内皮细胞、巨噬细胞等炎性细胞，激活IDO的活性引起丝裂酶原激活的蛋白激酶和/或核转录因子信号通路活化，进而引发炎性级联反应放大。同时IDO活化后更多的色氨酸降解为下游代谢产物犬尿氨酸类，导致色氨酸水平在STEMI患者血清中表达明显下调，犬尿氨酸/色氨酸比值的增加，因而犬尿氨酸/色氨酸比值可以作为判断IDO活性的具体指标，是炎性因子引起体内的犬尿氨酸/色氨酸代谢通路激活的重要衡量指标。本研究中血清中犬尿氨酸与色氨酸比值也明显升高，说明犬尿氨酸/色氨酸途径可能是通过参与动脉粥样硬化病变部位的炎症反应、引发不稳定斑块破裂及急性冠状动脉血栓的形成。

进一步的分析结果表明血清中犬尿氨酸/色氨酸比值对STEMI患者1年MACCE的发生具有重要的预测价值。结果发现，STEMI患者血清中犬尿氨酸/色氨酸比值越高，1年MACCE发生的风险越高；血清中犬尿氨酸/色氨酸比值水平是1年MACCE发生的独立预测因子。根据犬尿氨酸/色氨酸比值水平进行的四分位分组中，Quartile1组的STEMI患者血清中犬尿氨酸/色氨酸比值小于18.81，随访1年MACCE的发生风险较低(0％)，无MACCE出现，预后较好；Quartile2组和Quartile3组的血清中犬尿氨酸/色氨酸比值分别在18.81-25.21和25.21-31.63之间，这两组STEMI患者发生1年MACCE的风险较高，事件的发生率分别为4.5％和7.5％，为此，我们应该加强对该组STEMI患者的随访及预后治疗；Quartile3组STEMI患者血清中犬尿氨酸/色氨酸比值大于31.63，发生1年MACCE的风险最高，有9例患者发生1年MACCE，发生率高达13.6％，因此，对STEMI患者的随访观察，采用个体化治疗的方式积极防控STEMI患者心血管不良事件预后的发生。上述研究结果提示血清中犬尿氨酸/色氨酸比值的变化对STEMI患者1年MACCE发生具有较好的预测价值，犬尿氨酸/色氨酸代谢途径参与了STEMI患者1年MACCE的病理生理形成机制，为STEMI患者个体化治疗提供了循证医学的证据。

附图说明

图1是色氨酸代谢通路的产物图。

图2是正常组、STEMI患者组两组研究对象血清犬尿氨酸/色氨酸比值的改变，其中：*代表STEMI组与对照组相比，P值均<0.01。

图3是Control组、STEMI发病1年内出现MACCE事件患者及未出现MACCE事件患者的犬尿氨酸/色氨酸比值变化；其中：*代表MACCE组与Control组比较P<0.05；#代表MACCE组与非MACCE比较，P<0.05。

图4是非MACCE组与发生不同MACCE事件患者(包括心衰、再发心梗、全因死亡、心源性死亡、脑梗塞)犬尿氨酸/色氨酸比值变化；*代表再发心梗、全因死亡、心源性死亡、脑梗塞四组与非MACCE组比较，P<0.05。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例利用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用技术检测色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在ST段抬高型心肌梗死预后中应用。

1.研究对象。

连续入选2016年6月-2017年12月因胸痛就诊于北部战区总医院并符合入排标准的研究对象共504例，包括对照组224例和STEMI组280例。本研究经过北部战区总医院医学伦理委员会的批准，入选对象均对入选实验签署了知情同意书。

2.入选标准。

年龄在40-80岁；发病到医院就诊的时间<24h；对照组：同期因胸痛住院而冠脉造影结果显示为阴性排除冠心病的患者，(左主干、左回旋支、左前降支、右冠状动脉中任何一支冠状动脉狭窄者<50％，视为冠状造影结果阴性)；STEMI组：持续30min以上的典型胸痛症状；心肌损伤标志物异常升高，大于正常参考值上限的99％；心电图出现动态变化，至少相邻两个肢体导联ST段抬高≥0.1mv，或胸导联≥0.2mv，或新发的左束支传导阻滞或右束支阻滞。

3.排除标准。

患者患有以下疾病：活动性炎性疾病；自身免疫病；严重的心衰；血流动力学不稳定；可疑心肌炎或心包炎；造血系统疾病；进展期肾脏或肝脏疾病；恶性肿瘤疾病；服用免疫抑制药物；既往曾冠状动脉搭桥手术。

4.研究终点。

评价指标：通过门诊、电话等方式对入选的280例STEMI患者1年发生MACCE事件进行随访，这些事件主要包括心肌梗死、脑卒中、心衰及全因死亡。平均随访时间为353±51天，共随访266人，随访率为95％(266/288)。

5.MACCE事件定义。

5.1心肌梗死：有持续半小时以上的典型缺血性胸痛症状；心肌坏死的标记物异常及心电图呈现明显的心肌缺血动态演变过程；金标准冠脉造影结果表明冠脉左前降支、左回旋支及右冠状动脉中一处或多处血管狭窄>50％。

5.2脑卒中：指因多种诱因导致的脑内动脉发生缩窄、堵塞或破裂，而造成急性脑部血液循环系统障碍，临床上常见到突发的或永久的脑功能障碍的症状和体征。

5.3心衰：根据纽约心脏病学会功能分级的标准把心功能II-IV级者定义为心衰。

5.4全因死亡：任何原因的死亡。

6.实验流程。

6.1按照入选标准、排除标准及冠状动脉造影结果于胸痛中心入选研究对象。

6.2采集研究对象入院即刻外周静脉血，将待检的血样离心取上清检测患者血浆中色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在ST段抬高型心肌梗死预后中的应用，本研究经北部战区总医院医学伦理委员会同意，研究中所有符合入选标准的研究对象均知情并签署知情同意书。

6.3询问入选研究对象病史，对其进行常规体格检查及血常规、血液生化、血脂分析、肝肾功能等常规的临床检查。

6.4对入选的STEMI患者进行出院后为期1年的电话随访，统计出院1年内发生的主要不良心脑血管事件的患者例数及出现终点事件的时间，进行预后分析。

7.标本的采集及样本的处理。

7.1标本的采集：入选后即刻抽取其静脉血，用含EDTA真空抗凝管收集血标本5ml。

7.2样本的处理：抽取静脉血10分钟内，抗凝管3000转/min离心处理10min，分离血浆，将处理好的血浆储藏于-80℃冰箱保存，采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用技术检测色氨酸分解代谢中代谢产物的表达变化。

7.3冠状动脉造影检查：入选的研究对象入院1周内在北部战区总医院心内科导管室接受冠状动脉造影检查，采用Judkins法，选择多体位行左右冠状动脉造影。根据冠心病诊断标准；心外膜下冠状动脉LM、LAD、LCX、RCA中任一支均无任何狭窄者视为完全正常，如直径狭窄<50％为无意义病理病变，如直径狭窄>50％为有病理意义的病变。

7.4急诊经皮冠状动脉介入治疗(Percutaneous coronary interventions，PCI)及PCI前后用药：急诊PCI时原则上只干预梗死相关血管，对相关病变植入药物洗脱支架或金属裸支架。所有拟行急诊PCI的患者术前嚼服阿司匹林300mg、氯吡格雷300-600mg，如经桡动脉路径首先给予5000U的肝素/如经股动脉路径首先给予2000U肝素，而后按照患者的体重补充8000U肝素的用量，后均转入冠心病监护室进行监护治疗，给予皮下注射低分子肝素，每12h皮下给予1次(5-7d)；服用氯吡格雷75mg(1次/d)，并长期服用阿司匹林100mg(1次/d)。所有入选的研究对象均严格按照指南要求进行冠心病的二级预防。

8.利用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用技术的靶向代谢组学分析。

8.1高效液相色谱条件：UPLC HSS C18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)，柱温：35℃。流动相A为0.1％的甲酸水，B为纯乙腈；流速为0.3mL/min；样品室温度为4℃，进样量为2μL；洗脱梯度程序为0-1.5min，90％A-10％B；1.5-4.0min，10％A-90％B。

8.2质谱条件：电喷雾离子源下采用正离子电离模式和多反应监测模式；参数设置：毛细管电压1.0kV，锥孔气流速150L/h，脱溶剂气流速600L/h，离子源温度100℃，脱溶剂气温度350℃。碰撞电压8-30kV，四极杆扫描范围50-250m/z，扫描时间为0.1s。六种待测物质及其内标物质定量离子的多反应监测离子参数见表1。

表1.多反应监测离子参数质谱条件

注：Trp，色氨酸；Kyn，犬尿氨酸；KA，犬尿喹啉酸；3-HK，3-羟基犬尿氨酸；3-HAA，3-羟基邻氨苯甲酸；XA，黄尿烯酸。

8.3标准溶液的配制：Trp和Kyn、KA、3-HK、3-HAA、XA这六个待测化合物的标准品均用超纯水配成2mg/mL的标准品储备液，于-20℃冰箱保存。分别单独配制六个待测化合物标准曲线的七个梯度，用超纯水逐级稀释配制成S7→S1的七个标准品工作液，实验当天现配现用。每个标准溶液的七个梯度设置见表2。Q1(低浓度)：定量下限的3倍浓度；Q2(中浓度)：在标曲范围中部附近的中浓度质控样品；Q3(高浓度)：标曲范围上限约为75％左右的高浓度质控样品。

表2.犬尿氨酸/色氨酸途径关键代谢物标准溶液浓度梯度(ng/mL)

8.4方法学考察。

本研究中待测物质均为内源性物质，因此在分析方法的确证中，采用替代基质的方法进行，本研究中采用的替代空白基质为生理盐水；因六种待测物的实验条件基本一致，本研究以色氨酸为代表进行精密度等的验证分析。

(1)方法专属性：取空白基质，除不加内标外；将一定浓度的混合对照品溶液和内标溶液加入空白基质中制成模拟血浆样品；将100份血清样品各取10μL混合，取混合后的血浆样品，均同法处理，得色谱图，记录各待测成分及内标物质的保留时间。

(2)标准曲线与定量下限：取空白基质90μL 7份，加入标准溶液10μL，加入内标溶液10μL，制得模拟血浆样品。采用内标法定量分析。

(3)精密度和准确度：取空白基质90μL，按照“8(2)”项下的方法处理，制备定量下限，低、中、高三个浓度的质控(quality control，QC)样品，每个浓度6样本分析，与标准曲线同批测定，连续三天，以当日标曲计算QC样品浓度，求精密度和准确度。

(4)提取回收率和基质效应：取空白基质90μL，按照“8(2)”项下的方法处理，制备低、中、高三个浓度的QC样品，取上清液进样分析，得相应的峰面积值A；取空白基质90μL，除不加内标溶液和相应浓度的标准溶液外，均按样品的前处理项下操作，向得到的上清液中加入内标溶液和相应浓度的标准溶液各10μL，得相应的峰面积值B；取水90μL，按照“8(2)”项下的方法处理，制备低、中、高三个浓度的QC样品，取上清液进样分析，得相应的峰面积值C；每个浓度的进行6样本分析，以A/B计算提取回收率，以B/C计算基质效应。(5)样品稳定性：考察定量下限、低、中、高三个浓度的质控样品，分别在室温24h、反复冻融三次、-80℃存30天和4℃自动进样器24h条件下的稳定性。

9.统计分析方法。

采用SPSS 20.0软件包进行统计分析，统计检验均采用双侧检验(two-sidetest)，检验水准为0.05，P<0.05认为统计学有意义，所有可信区间的可信度采用95％。多因素Logistic回归分析血浆S100A12浓度在STEMI患者发生MACCE事件中的危险比，对各组的人口学信息和临床变量进行统计，定量指标采用均数、标准差表示，采用成组t检验或单变量ANOVA进行组间比较；定性指标采用例数和百分数表示，采用卡方检验或确切概率检验进行组间比较。变量发生时间定义为：如发生终点事件，时间为STEMI发病时间至终点事件发生的时间。

10.实验结果。

10.1方法学评价。

(1)专属性、标准曲线与定量下线。

如图1结果显示，空白基质不干扰分析，血清中的内源性物质之间无干扰，待测物之间无交叉干扰。如表3所示，六种待测物Trp、犬尿氨酸、KA、3-HK、3-HAA及XA分别在50-5000、2.5-250、0.5-50、0.5-50、0.25-25、2.5-250ng/mL范围内线性关系良好(r>0.99)。标准曲线方程分别为Y＝0.28X+1.00、Y＝2.19X+0.67、Y＝1.05X+0.06、Y＝0.53X+0.33、Y＝0.87X+0.04、Y＝0.67X+0.90。定量下限分别为50、2.5、0.5、0.5、0.25、2.5ng/mL(S/N>10)，RSD≤15％。结果证实该方法灵敏度高，符合对后续样品的检测要求。

表3.犬尿氨酸/色氨酸途径关键代谢物的标准曲线

(2)精密度、回收率与样品稳定性。

以色氨酸为例进行分析，附表1结果显示色氨酸的日内、日间精密度的相对标准偏差小于15％，准确度的相对误差均位于-12.3～8.7％之间。质控样品的提取回收率结果大于85％，基质效应在96.1％～102.7％之间，即不存在明显的基质效应。附表2结果表明不同浓度的色氨酸样品在各条件下的相对标准偏差、相对误差≤15％，稳定性良好，均符合生物样品测定的要求。

10.2两组研究对象临床基线资料及血清中犬尿氨酸/色氨酸代谢途径中代谢物的定量分析结果。

本研究共入选504例研究对象，包括对照人群224例和STEMI患者组280例。如表2.4所示，与对照组相比，STEMI组患者的HDL-C水平降低，而糖尿病病史及高血压病史的患病率更高，血糖及炎症指标Hs-CRP、白细胞计数的水平增加，且心肌损伤的标志物hscTnT、CK-MB的表达也明显上调，这些指标在两组间的差异具有统计学意义(P<0.05)。而其他生化检测指标在两组之间比较均无显著的统计学差异(P>0.05)。

犬尿氨酸/色氨酸途径关键代谢物的定量分析结果显示，与对照组相比，色氨酸在STEMI组患者血清中的浓度显著降低(P＝0.001)；下游犬尿氨酸类代谢物的水平在STEMI组中明显升高，其中犬尿氨酸、犬尿喹啉酸及3-羟基犬尿氨酸的表达在两组间的差异具有统计学差异(P<0.001)，而3-羟基邻氨苯甲酸和黄尿烯酸在两组间的差异无统计学差异(P＝0.064；P＝0.059)。

如图2所示，本研究中入选的对照组及STEMI组研究对象血清中犬尿氨酸/色氨酸比值比值分别为12.8±5.4和27.0±12.1，STEMI组患者血清中犬尿氨酸/色氨酸比值比值明显高于对照组(P<0.001)，犬尿氨酸/色氨酸比值水平与STEMI的发生存在相关关系。对IDO的ELISA检测结果表明，与对照组(23.4±8.6ng/mL)相比，STEMI组患者血清中IDO的浓度为34.0±14.9ng/mL，两组之间的差异具有统计学意义(P<0.001)，见表4。

表4对照组及STEMI组一般临床基线情况

注：用百分数(％)表示分类变量；用均数±标准差表示连续变量。IDO，吲哚胺-2，3-双加氧酶；其它指标同表1.1和2.1。*组间有统计学差异，P<0.05。

10.3 STEMI患者发生MACCE事件的结果。

随访研究表明，280例STEMI患者在1年内失访14例，共随访266例STEMI患者，随访率为95％。STEMI患者的1年MACCE事件中包括心肌梗死患者2例(0.8％)、脑卒中患者3例(1.1％)、心力衰竭患者5例(1.9％)、全因性死亡患者7例(2.6％)。进一步分析发现，MACCE事件中发生心肌梗死的患者血清中犬尿氨酸/色氨酸比值水平为52.1±31.6、脑卒中的患者血清中犬尿氨酸/色氨酸比值水平为46.2±22.2、心力衰竭的患者血清中犬尿氨酸/色氨酸比值水平为38.7±10.8、全因性死亡的患者血清中犬尿氨酸/色氨酸比值水平为36.3±16.8。除此之外，我们根据STEMI患者是否发生MACCE事件将患者分为MACCE组和非MACCE组，比较两组患者血清中犬尿氨酸/色氨酸比值水平，结果表明与非MACCE组相比，血清犬尿氨酸/色氨酸比值水平在MACCE组中明显增高(25.7±11.1vs 40.6±17.0，P＝0.002)。进一步分析MACCE事件组中发生心肌梗死、脑卒中、心力衰竭及全因性死亡患者血清中犬尿氨酸/色氨酸比值水平变化，我们发现血清犬尿氨酸/色氨酸比值水平在发生心肌梗死的患者中明显高于其它三组，但差异尚没有统计学意义(P>0.05)，如图3所示。

10.4 STEMI患者的生存分析结果。

以犬尿氨酸/色氨酸比值水平把随访的266例STEMI患者进行四分位分组，分组后患者的临床基本资料见表5。结果发现随着犬尿氨酸/色氨酸比值水平的增加，患者血清中的Hs-CRP浓度增高；同时男性患者、糖尿病患者增多；MACCE事件的例数也明显增加。此外，Kaplan-Meier分析发现，在第一组中没有发生MACCE事件(n＝0)，在第二组中有3例(n＝3)，第三组中有5例(n＝5)，而第四组中MACCE事件高达9例(n＝9)，四组间具有明显的统计学差异(P<0.05)。Log-rank检验的结果也进一步证实四组间MACCE事件的发生率存在显著的统计学差异(P<0.05)，如见图4和表6所示。

多因素Cox生存回归分析STEMI患者血清犬尿氨酸/色氨酸比值比值预测1年MACCE的发生，其结果显示年龄、hscTnT水平及血清犬尿氨酸/色氨酸比值比值均能独立预测STEMI患者1年MACCE事件的发生风险，其预测结果分别为(HR＝1.112；P＝0.004)、(HR＝1.321；P＝0.048)及(HR＝1.091；P＝0.019)，详见表7。

表5.STEMI患者按血清犬尿氨酸/色氨酸比值水平进行四分位分组后的基础临床资料情况

注：用百分数(％)表示分类变量；用均数±标准差表示连续变量；MACCE，主要不良心脑血管事件。

表6.Q1-Q4组1年MACCE发生情况表

注：MACCE，主要不良心脑血管事件；**，组间有统计学差异，P<0.01。

表7.STEM1发病后1年MACCE事件的Cox回归分析结果

注：HR，风险比；95％CI，95％可信区间。

Claims (5)

1.色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在ST段抬高型心肌梗死预后中的应用。

2.如权利要求1所述的色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在ST段抬高型心肌梗死预后中的应用，所述的色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变作为ST段抬高型心肌梗死预后的生物标志物。

3.如权利要求1所述的色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在ST段抬高型心肌梗死预后中的应用，所述的色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变用于预先判断ST段抬高型心肌梗死预后的指标。

4.如权利要求1所述的色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变在ST段抬高型心肌梗死预后中的应用，所述的氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变用于制备ST段抬高型心肌梗死预后的试剂盒。

5.一种检测STEMI患者血清中色氨酸分解代谢通路中代谢产物的表达的方法，其特征在于，具体步骤如下：

步骤1、血浆的采集：研究对象入选后即刻抽取其静脉血，用含EDTA真空抗凝管收集血标本5ml；

步骤2、样本的处理：抽取静脉血10分钟内，抗凝管3000r/min离心处理10min，分离血浆，将处理好的血浆储藏于-80℃冰箱保存，采用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用技术检测STEMI患者血清中色氨酸分解代谢通路中代谢产物的表达；

步骤3、利用超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱联用技术分析STEMI患者血清中色氨酸分解代谢通路中6种待测定的代谢产物的表达；

步骤4、对入选的患者进行为期一年的电话随访，终点事件定义为主要不良心脑血管事件包括：心衰、再发心梗、全因死亡、心源性死亡、脑梗塞；将发病后1年内发生MACCE事件与未发生MACCE事件的与色氨酸分解代谢中的犬尿氨酸/色氨酸比值的改变的相关关系。

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