CN116183746A - 一种基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法及其应用 - Google Patents

一种基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法及其应用。该方法采用包括液质联用等方式对尿液样品的代谢物酒精非氧化代谢产物乙基葡萄糖醛酸苷EtG和硫酸二乙酯EtS的含量进行检测分析，EtG和EtS的含量与体内UDP‑葡萄糖醛酸转移酶UGTs和硫酸基转移酶SULTs的活性有关，而UGTs和SULTs酶的活性受年龄和早衰的影响，因此尿液中EtG和EtS的含量与机体衰老程度存在一定关联，进而用于评估机体衰老程度。应用范围包括人和动物，不仅能反映机体健康情况，还能对机体生理状况进行动态监测，对尿液样品中代谢物进行分析，对于预测疾病发病风险和评价预后具有重要意义。

Description

一种基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法及 其应用
技术领域
本发明涉及老年医学技术领域，具体涉及一种基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法及其应用。
背景技术
机体衰老与慢性病发生发展密切相关，但目前对于机体衰老程度尚缺乏有效评价方法，对该问题的探究可望成为慢性病早期预防的关键。目前评价衰老的指标有外周血白细胞端粒长度、β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性以及衰老相关分泌表型(senescence-associated secretory phenotype，SASP)的检测等。这些指标对于评价机体衰老虽具有一定的价值，但特异性不强、易受应激因素的影响且组织取材具有侵入性。
对尿液样品中代谢物进行分析对于疾病的诊断和评价预后具有重要意义。相对于血检和病理组织活检，尿液样品可以大量获得且对机体无损伤。通过对尿液样品的代谢物进行分析，不仅能反映机体健康情况，还能对机体生理状况进行动态监测。研究显示，酒精在体内可在多组织中通过特异的II相代谢酶(UGTs和SULTs)进行非氧化代谢生成EtG和EtS，其在尿液中具有很好的特异性、敏感性和稳定性。有鉴于此，本发明提供一种基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法及其应用。
发明内容
本发明的目的是提供一种基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法。
本发明的另一目的是提供一种检测机体衰老程度的方法在评估机体衰老程度方面中的应用。
本发明是通过以下技术方案实现：
一种基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法。
本发明所述方法为检测尿液中酒精非氧化代谢产物的含量，再根据含量评估机体衰老程度。
本发明所述酒精非氧化代谢产物为乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸二乙酯。
本发明所述检测尿液中酒精非氧化代谢产物之前需口服摄入含酒精浓度为2-10％的酒精饮品10-50ml。
本发明所述酒精饮品为啤酒、果酒、鸡尾酒中的任一种或几种。
上述所述酒精饮品除了啤酒、果酒、鸡尾酒，还可以为其它类似含酒精的饮料或者保健品。
本发明所述检测含量的方法为液质联用检测法、酶联免疫法、指示剂法以及试纸法中的任一种或几种。
本发明所述液质联用检测法包括如下步骤：
(1)收集尿液前禁食10-14h；
(2)将尿液以2500-3500转/分钟的速度离心15-20min后取上清液；
(3)采用0.22μm滤膜对上清液进行过滤，分装，得样品，-90--70℃保存备用；
(4)将步骤(3)备用样品上样到液相色谱柱上，通过液质联用检测法同步对EtG和EtS进行定性定量检测。
本发明步骤(4)中所述液质联用检测的液相色谱条件为：色谱柱为C18或C8键合相色谱柱，规格为50-150mm×1-4.6mm,粒径为1.7-5μm；流动相A为0.1％甲酸乙腈溶液，流动相B为0.1％甲酸水溶液；采用梯度洗脱程序，流动相的流速为0.1-2.0mL/min；柱温为：40℃；进样量：5μl。
本发明所述梯度洗脱程序为：
Figure BDA0003999446300000021
本发明步骤(4)中所述液质联用检测法的质谱条件包括乙基葡萄糖醛酸苷一级质谱条件和硫酸二乙酯一级质谱条件；
其中乙基葡萄糖醛酸苷一级质谱条件为母离子：221.20m/z，子离子：75/84.9m/z；驻留时间：90-100ms；干燥气体：120；热表面诱导去溶剂质谱接口温度：300-320℃；雾化气：220；电喷雾负离子模式电压：-4500V；辅助加热器温度：450℃；
多元反应监测条件：221.20/75入口电压：-9；碰撞室入口电压：40；碰撞能量：21；221.20/84.9入口电压：-2；碰撞室入口电压：36；碰撞能量：25；
硫酸二乙酯一级质谱条件为母离子：124.9m/z，子离子：80/97m/z；驻留时间：90-100ms；干燥气体：120；热表面诱导去溶剂质谱接口温度：300-320℃；雾化气：220；电喷雾负离子模式电压：-4500V；辅助加热器温度：450℃；
多元反应监测条件：124.9/80入口电压:-17；碰撞室入口电压：52；碰撞能量：46；124.9/97入口电压：-8；碰撞室入口电压：28；碰撞能量：21。
本发明所述方法在评估机体衰老程度方面中的应用。
本发明的有益效果为：
1、本发明评估方法，通过含量测定实验考察结果：与对照组比较，D-半乳糖早衰组及老年组各组织EtG和EtS关键酶UGTs和SULTs表达均有所降低；同时，D-半乳糖早衰组及老年组大鼠尿液中EtG和EtS含量也有所下降，以上结果表明外服一定剂量酒精后，尿液中EtG和EtS含量与机体衰老程度存在一定关联。因此，本发明所采用的评估方法即在服用少剂量酒精的前提下，根据尿液中EtG和EtS含量评估机体衰老程度。
2、与现有衰老评价指标相比，本发明采用检测尿液中酒精特异性非氧化代谢产物EtG和EtS的含量，再根据含量评估机体衰老程度，非氧化代谢产物EtG和EtS作为指标物具有很好的特异性、敏感性和稳定性，解决了现有衰老评价指标特异性不强、易受应激因素的影响及有创性等问题。
3、本发明通过使用超高效液相色谱串联高分辨质谱技术同时优化检测参数和条件，从而提高了检测灵敏度，同时可以实现对代谢物质准确地定性分析，充分保障结果的准确性。
附图说明
图1大鼠不同组织EtG和EtS关键催化酶表达情况图(Control为对照组，D-galactose为D-半乳糖组，Older age为老龄组，*：p＜0.05)
图2不同实验组大鼠尿液中EtG相对含量图。
图3不同实验组大鼠尿液中EtG相对含量的比较分析图。(Control为对照组，D-galactose为D-半乳糖组，Older age为老龄组，Sample AUC：样品曲线下面积，StandardAUC：标品曲线下面积，*：与对照组相比p＜0.05，#：与对照组相比p＜0.05)
图4不同实验组大鼠尿液中EtS相对含量图。
图5不同实验组大鼠尿液中EtS相对含量的比较分析图。(Control为对照组，D-galactose为D-半乳糖组，Older age为老龄组，Sample AUC：样品曲线下面积，StandardAUC：标品曲线下面积，*：与对照组相比p＜0.05，#：与对照组相比p＜0.05)
具体实施方式
下面将通过实施例，对本申请的具体技术效果进行详细地描述，以便本领域技术人员更好地理解本申请的实质。值得说明的是，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，并不是全部的实施例。本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
实施例1
基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法：
(1)口服摄入含酒精浓度为10％的啤酒10ml，禁食12h后收集尿液；
(2)将尿液以3000转/分钟的速度离心15min后取上清液；
(3)采用0.22μm滤膜对上清液进行过滤，分装，得样品，-80℃保存备用；
(4)将步骤(3)备用样品上样到液相色谱柱上，通过液质联用检测法同步对EtG和EtS进行定性定量检测，并根据EtG和EtS含量进一步评估机体衰老情况。
液质联用检测法的液相色谱条件为：色谱柱为C18键合相色谱柱(规格为50-150mm×1-4.6mm,粒径为1.7-5μm)，流动相A为0.1％甲酸乙腈溶液，流动相B为0.1％甲酸水溶液；采用梯度洗脱程序如下表，流动相的流速为1.0mL/min；柱温为：40℃；进样量：5μl。
Figure BDA0003999446300000041
液质联用检测法的质谱条件包括乙基葡萄糖醛酸苷一级质谱条件和硫酸二乙酯一级质谱条件；
其中乙基葡萄糖醛酸苷一级质谱条件为母离子：221.20m/z，子离子：75/84.9m/z；驻留时间：100ms；干燥气体：120；热表面诱导去溶剂质谱接口温度320℃；雾化气：220；电喷雾负离子模式电压：-4500V；辅助加热器温度：450℃；
多元反应监测条件：221.20/75入口电压：-9；碰撞室入口电压：40；碰撞能量：21；221.20/84.9入口电压：-2；碰撞室入口电压：36；碰撞能量：25；
硫酸二乙酯一级质谱条件为母离子：124.9m/z，子离子：80/97m/z；驻留时间：100ms；干燥气体：120；热表面诱导去溶剂质谱接口温度320℃；雾化气：220；电喷雾负离子模式电压：-4500V；辅助加热器温度：450℃；
多元反应监测条件：124.9/80入口电压:-17；碰撞室入口电压：52；碰撞能量：46；124.9/97入口电压：-8；碰撞室入口电压：28；碰撞能量：21。
实施例2
基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法：
(1)口服摄入含酒精浓度为5％的果酒20ml，禁食12h后收集尿液；
(2)将尿液以3000转/分钟的速度离心15min后取上清液；
(3)采用0.22μm滤膜对上清液进行过滤，分装，得样品，-80℃保存备用；
(4)将步骤(3)备用样品上样到可用于检测EtG和EtS含量的酶联免疫试剂盒中，根据酶标仪读取的吸光度值判断EtG和EtS含量并进一步评估机体衰老情况。
实施例3
基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法：
(1)口服摄入含酒精浓度为5％的鸡尾酒20ml，禁食12h后收集尿液；
(2)将尿液以3000转/分钟的速度离心15min后取上清液；
(3)采用0.22μm滤膜对上清液进行过滤，分装，得样品，-80℃保存备用；
(4)将步骤(3)备用样品上样到可用于检测EtG和EtS含量的测试纸中，根据测试纸呈现的颜色判断EtG和EtS含量并进一步评估机体衰老情况。
实施例4
基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法：
(1)口服摄入含酒精浓度为2％的啤酒50ml，禁食14h后收集尿液；
(2)将尿液以3500转/分钟的速度离心20min后取上清液；
(3)采用0.22μm滤膜对上清液进行过滤，分装，得样品，-80℃保存备用；
(4)将步骤(3)备用样品上样到液相色谱柱上，通过液质联用检测法同步对EtG和EtS进行定性定量检测，并根据EtG和EtS含量进一步评估机体衰老情况。
液质联用检测法的液相色谱条件为：色谱柱为C18键合相色谱柱(规格为50-150mm×1-4.6mm,粒径为1.7-5μm)，流动相A为0.1％甲酸乙腈溶液，流动相B为0.1％甲酸水溶液；采用梯度洗脱程序如下表，流动相的流速为2.0mL/min；柱温为：40℃；进样量：5μl。
Figure BDA0003999446300000061
液质联用检测法的质谱条件包括乙基葡萄糖醛酸苷一级质谱条件和硫酸二乙酯一级质谱条件；
其中乙基葡萄糖醛酸苷一级质谱条件为母离子：221.20m/z，子离子：75/84.9m/z；驻留时间：100ms；干燥气体：120；热表面诱导去溶剂质谱接口温度：320℃；雾化气：220；电喷雾负离子模式电压：-4500V；辅助加热器温度：450℃；
多元反应监测条件：221.20/75入口电压：-9；碰撞室入口电压：40；碰撞能量：21；221.20/84.9入口电压：-2；碰撞室入口电压：36；碰撞能量：25；
硫酸二乙酯一级质谱条件为母离子：124.9m/z，子离子：80/97m/z；驻留时间：100ms；干燥气体：120；热表面诱导去溶剂质谱接口温度：320℃；雾化气：220；电喷雾负离子模式电压：-4500V；辅助加热器温度：450℃；
多元反应监测条件：124.9/80入口电压:-17；碰撞室入口电压：52；碰撞能量：46；124.9/97入口电压：-8；碰撞室入口电压：28；碰撞能量：21。
实施例5
基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法：
(1)口服摄入含酒精浓度为10％的啤酒10ml，禁食10h后收集尿液；
(2)将尿液以2500转/分钟的速度离心15min后取上清液；
(3)采用0.22μm滤膜对上清液进行过滤，分装，得样品，-80℃保存备用；
(4)将步骤(3)备用样品上样到液相色谱柱上，通过液质联用检测法同步对EtG和EtS进行定性定量检测，并根据EtG和EtS含量进一步评估机体衰老情况。
液质联用检测法的液相色谱条件为：色谱柱为C18键合相色谱柱(规格为50-150mm×1-4.6mm,粒径为1.7-5μm)，流动相A为0.1％甲酸乙腈溶液，流动相B为0.1％甲酸水溶液；采用梯度洗脱程序如下表，流动相的流速为0.1mL/min；柱温为：40℃；进样量：5μl。
Figure BDA0003999446300000071
液质联用检测法的质谱条件包括乙基葡萄糖醛酸苷一级质谱条件和硫酸二乙酯一级质谱条件；
其中乙基葡萄糖醛酸苷一级质谱条件为母离子：221.20m/z，子离子：75/84.9m/z；驻留时间：90ms；干燥气体：120；热表面诱导去溶剂质谱接口温度：300℃；雾化气：220；电喷雾负离子模式电压：-4500V；辅助加热器温度：450℃；
多元反应监测条件：221.20/75入口电压：-9；碰撞室入口电压：40；碰撞能量：21；221.20/84.9入口电压：-2；碰撞室入口电压：36；碰撞能量：25；
硫酸二乙酯一级质谱条件为母离子：124.9m/z，子离子：80/97m/z；驻留时间：90ms；干燥气体：120；热表面诱导去溶剂质谱接口温度：300℃；雾化气：220；电喷雾负离子模式电压：-4500V；辅助加热器温度：450℃；
多元反应监测条件：124.9/80入口电压:-17；碰撞室入口电压：52；碰撞能量：46；124.9/97入口电压：-8；碰撞室入口电压：28；碰撞能量：21。
实施例6
基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法：
(1)口服摄入含酒精浓度为2％的果酒50ml，禁食14h后收集尿液；
(2)将尿液以3500转/分钟的速度离心20min后取上清液；
(3)采用0.22μm滤膜对上清液进行过滤，分装，得样品，-80℃保存备用；
(4)将步骤(3)备用样品上样到可用于检测EtG和EtS含量的酶联免疫试剂盒中，根据酶标仪读取的吸光度值判断EtG和EtS含量并进一步评估机体衰老情况。
实施例7
基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法：
(1)口服摄入含酒精浓度为10％的果酒10ml，禁食10h后收集尿液；
(2)将尿液以2500转/分钟的速度离心15min后取上清液；
(3)采用0.22μm滤膜对上清液进行过滤，分装，得样品，-80℃保存备用；
(4)将步骤(3)备用样品上样到可用于检测EtG和EtS含量的酶联免疫试剂盒中，根据酶标仪读取的吸光度值判断EtG和EtS含量并进一步评估机体衰老情况。
实施例8
基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法：
(1)口服摄入含酒精浓度为2％的低度酒精饮料50ml，禁食10h后收集尿液；
(2)将尿液以2500转/分钟的速度离心15min后取上清液；
(3)采用0.22μm滤膜对上清液进行过滤，分装，得样品，-80℃保存备用；
(4)将步骤(3)备用样品上样到可用于检测EtG和EtS含量的测试纸中，根据测试纸呈现的颜色判断EtG和EtS含量并进一步评估机体衰老情况。
实施例9
基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法：
(1)口服摄入含酒精浓度为8％的低度酒精饮料30ml，禁食12h后收集尿液；
(2)将尿液以3500转/分钟的速度离心15min后取上清液；
(3)采用0.22μm滤膜对上清液进行过滤，分装，得样品，-80℃保存备用；
(4)将步骤(3)备用样品上样到可用于检测EtG和EtS含量的测试纸中，根据测试纸呈现的颜色判断EtG和EtS含量并进一步评估机体衰老情况。
为了进一步验证本发明的可行性，发明人进行了一系列的实验，步骤如下：
一、材料与仪器
1.1实验材料
1.5ml EP管，动物组织研磨棒。
1.2试剂与仪器
1.2.1试剂
甲酸，乙腈，Trizol，三氯甲烷，异丙醇，75％乙醇(需用RNase-Free水配制)，RNase-Free水。
1.2.2仪器
液相质谱仪，实时荧光定量PCR仪。
二、实验方法
2.1实验步骤
(1)该研究采用健康雄性SD大鼠，将其分为三组，每组6只，分别为对照组(3月龄)，自由饮去离子水；D-半乳糖组，自由饮水的同时，已经采用腹腔注射的方式连续给予50mg/kg/d的D半乳糖56天；自然衰老组(24月龄)，自由饮水。
(2)采用灌胃的方式，每只大鼠给予30μl/kg的酒精进行灌胃(灌胃前将酒精稀释10倍)，24小时后收集尿液检测其酒精特异性非氧化代谢产物的含量，并收集大鼠肝脏、心脏、肾脏和海马组织。
(3)收集的尿液采用液质联用法检测其酒精特异性非氧化代谢产物的含量。
(4)收集的组织样本进行RNA提取，并用实时荧光定量PCR(qPCR)法对目标基因表达水平进行检测。
2.2样品前处理
2.2.1尿液样本的处理：
(1)收集尿液前禁食10-14小时；
(2)将尿液以3000转/分钟的速度离心15-20min后取上清液；
(3)采用0.22μm滤膜对上清液进行过滤；
(4)分装，上机检测。
2.2.2组织样本的处理：
(1)称取50mg各组织(肝脏、心脏、肾脏和海马组织)样本放入1.5ml EP管；
(2)向每个EP管中加入0.5ml Trizol，用动物组织研磨棒进行充分研磨，室温静置5min；
(3)加入0.1ml氯仿，剧烈振荡15s，静置10min；
(4)4℃，12000转/min，离心15min；
(5)小心吸取上清至一新的DEPC处理过的1.5ml EP管中；
(6)加入等体积异丙醇，轻轻混匀，室温静置10min；
(7)4℃，12000转/min，离心10min；
(8)弃掉上清，加入1ml于4℃中预冷的75％乙醇，用枪头充分吹打洗涤沉淀；
(9)4℃，12000转/min，离心5min；
(10)加入20μl RNase-Free水溶解RNA；
(11)采用ThermoFisher K1622逆转录试剂盒对RNA样本进行逆转录；
(12)采用实时荧光定量PCR法(qPCR法)对基因表达进行检测。
2.3质谱条件
2.3.1乙基葡萄糖醛酸苷一级质谱条件为母离子：221.20m/z，子离子：75/84.9m/z；驻留时间：90-100ms；干燥气体：120；热表面诱导去溶剂质谱接口温度(℃)300-320；雾化气：220；电喷雾负离子模式电压：-4500V；辅助加热器温度(℃)：450；
多元反应监测条件：221.20/75入口电压：-9；碰撞室入口电压：40；碰撞能量：21；221.20/84.9入口电压：-2；碰撞室入口电压：36；碰撞能量：25；
2.3.2硫酸二乙酯一级质谱条件为母离子：124.9m/z，子离子：80/97m/z；驻留时间：90-100ms；干燥气体：120；热表面诱导去溶剂质谱接口温度(℃)300-320；雾化气：220；电喷雾负离子模式电压：-4500V；辅助加热器温度(℃)：450；
多元反应监测条件：124.9/80入口电压:-17；碰撞室入口电压：52；碰撞能量：46；124.9/97入口电压：-8；碰撞室入口电压：28；碰撞能量：21。
2.4实时荧光定量PCR检测条件
2.4.1 qPCR检测各组织UGTs和SULTs表达的反应体系
qPCR反应体系
Figure BDA0003999446300000111
2.4.2检测反应程序
qPCR反应程序
Figure BDA0003999446300000112
2.5实验结果
实验结果见表1至表2及见图1至图5。
表1不同实验组大鼠尿液中EtG相对含量
Figure BDA0003999446300000113
注：(比值＝样品EtG曲线下面积÷EtG标品曲线下面积)
表2不同实验组大鼠尿液中EtS相对含量
Figure BDA0003999446300000121
注：(比值＝样品EtS曲线下面积÷EtS标品曲线下面积)
根据实验结果表1-表2及图1-图5所示，与对照组比较，D-半乳糖早衰组及老年组各组织EtG和EtS关键酶UGTs和SULTs表达均有所降低；同时，D-半乳糖早衰组及老年组大鼠尿液中EtG和EtS含量也有所下降。以上结果表明外服一定剂量酒精后，尿液中EtG和EtS含量与机体衰老程度存在一定关联。因此，本申请利所采用的评估方法即在服用少剂量酒精的前提下，根据尿液中EtG和EtS含量评估机体衰老程度。非氧化代谢产物EtG和EtS作为指标物具有很好的特异性、敏感性和稳定性，解决了现有衰老评价指标特异性不强、易受应激因素的影响及有创性等问题。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种基于检测尿液中代谢物含量评估机体衰老程度的方法，其特征在于，所述方法为检测尿液中酒精非氧化代谢产物的含量，再根据含量评估机体衰老程度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酒精非氧化代谢产物为乙基葡萄糖醛酸苷和硫酸二乙酯。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测尿液中酒精非氧化代谢产物之前需口服摄入含酒精浓度为2-10％的酒精饮品10-50ml。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述酒精饮品为啤酒、果酒、鸡尾酒中的任一种或几种。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测含量的方法为液质联用检测法、酶联免疫法、指示剂法以及试纸法中的任一种或几种。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述液质联用检测法包括如下步骤：
(1)收集尿液前禁食10-14h；
(2)将尿液以2500-3500转/分钟的速度离心15-20min后取上清液；
(3)采用0.22μm滤膜对上清液进行过滤，分装，得样品，-80℃保存备用；
(4)将步骤(3)备用样品上样到液相色谱柱上，通过液质联用检测法同步对EtG和EtS进行定性定量检测。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(4)中所述液质联用检测法的液相色谱条件为：色谱柱为C18或C8键合相色谱柱，规格为50-150mm×1-4.6mm,粒径为1.7-5μm；流动相A为0.1％甲酸乙腈溶液，流动相B为0.1％甲酸水溶液；采用梯度洗脱程序，流动相的流速为0.1-2.0mL/min；柱温为：40℃；进样量：5μl。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：
Figure FDA0003999446290000011
9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(4)中所述液质联用检测法的质谱条件包括乙基葡萄糖醛酸苷一级质谱条件和硫酸二乙酯一级质谱条件：
其中乙基葡萄糖醛酸苷一级质谱条件为母离子：221.20m/z，子离子：75/84.9m/z；驻留时间：90-100ms；干燥气体：120；热表面诱导去溶剂质谱接口温度：320℃；雾化气：220；电喷雾负离子模式电压：-4500V；辅助加热器温度：450℃；
多元反应监测条件：221.20/75入口电压：-9；碰撞室入口电压：40；碰撞能量：21；221.20/84.9入口电压：-2；碰撞室入口电压：36；碰撞能量：25；
硫酸二乙酯一级质谱条件为母离子：124.9m/z，子离子：80/97m/z；驻留时间：90-100ms；干燥气体：120；热表面诱导去溶剂质谱接口温度：300-320℃；雾化气：220；电喷雾负离子模式电压：-4500V；辅助加热器温度：450℃；
多元反应监测条件：124.9/80入口电压:-17；碰撞室入口电压：52；碰撞能量：46；124.9/97入口电压：-8；碰撞室入口电压：28；碰撞能量：21。
10.根据权利要求1-9任意一项所述的方法在评估机体衰老程度方面中的应用。
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