CN118006668A - 柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用 - Google Patents

柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN118006668A
CN118006668A CN202410231257.1A CN202410231257A CN118006668A CN 118006668 A CN118006668 A CN 118006668A CN 202410231257 A CN202410231257 A CN 202410231257A CN 118006668 A CN118006668 A CN 118006668A
Authority
CN
China
Prior art keywords
diaphorina citri
dcs
gene
dsrna
dcs44
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202410231257.1A
Other languages
English (en)
Inventor
喻修道
王初阳
邝印辉
上官超智
杜一民
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Gannan Normal University
Original Assignee
Gannan Normal University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Gannan Normal University filed Critical Gannan Normal University
Priority to CN202410231257.1A priority Critical patent/CN118006668A/zh
Publication of CN118006668A publication Critical patent/CN118006668A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提供一种柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用，所述柑橘木虱DcS44基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明设计特异性引物合成dsRNA，借助RNA干扰沉默DcS44基因，检测其基因沉默效率，发现DcS44dsRNA可使柑橘木虱DcS44基因相对表达量减少，提高柑橘木虱死亡率提高，从而达到控制柑橘木虱虫口数量防止黄龙病扩散成灾的目的。

Description

柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用
技术领域
本发明属于生物基因工程技术领域，具体涉及一种柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用。
背景技术
黄龙病(Huanglongbing,HLB)是当前全球柑橘产业最具有毁灭性的病害，又称柑橘“癌症”。目前，尚未发现抗HLB柑橘品种，且对感病树体缺乏有效的治疗方法，只砍掉病株减少传播菌源(Grafton-Cardwell et al.,2013；Alquézar et al.,2022)。我国HLB常年发生面积超过200万亩，其中江西、广东、广西、福建等柑橘产区面临着HLB的严重威胁(Fu etal.,2020；Zhou,2020)。柑橘木虱(Diaphorina citri Kuwayama)是传播黄龙病菌的最主要虫媒，而控制木虱虫口数量是防止黄龙病扩散成灾的关键措施之一。当前，柑橘木虱防控主要通过喷洒农药，而大规模和高频率使用农药造成了抗药性木虱、水土污染和药物残留等问题。因此，面对日益严重的柑橘黄龙病和环境问题，降低化学农药使用量，开发绿色无公害的柑橘木虱防控方法显得十分重要和迫切。
发明内容
鉴于此，本发明提供一种柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘黄龙病中的应用。测定了DcS44基因沉默对木虱存活的影响，实验结果表明：DcS44基因沉默后，柑橘木虱的死亡率显著增加，对于柑橘木虱防治以及抗木虱植物的培育具有重大价值。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明目的之一是提供一种柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用，所述柑橘木虱DcS44基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，SEQ ID NO.1具体如下：
ATGGCGACTTTGTCCGCGAAAATCTTCATGTATATGTTTATCGTATATGTCGCGGTCTCTCAGGTGGAGTGCGAGCCACCAGCTCCAGCACCAACTGACGCCACCAAACGTGCAGAAAGTCCGGCCGAAGAGAAACTCAATCCAGCGGAGGTCGAAAAACAAAACAAAATCCTCGACTGTGTCTTCGAGAATGTTCAAAAGAAGTATCAGGTTAACGGTGTATCAAAGGAACAGTTTGACAAGAATATACGCTTGTCCGACGAGGACAGTATGAAGACTTTGTTCGAATCTGCAGGCTTTAAGGGAAATATTGGGGAATTGTTCGATTATATTGACTTCTCTTTTGAGGTGTGCTGGGCAAAGCCTCAGACTACAAACGGATCAGCTAATGCCCCCTCTTCATAG。
进一步地，所述应用通过DcS44基因沉默使柑橘木虱死亡从而减少传播来防治柑橘黄龙病。
进一步地，所述基因沉默为采用RNA干扰技术进行基因沉默。
进一步地，所述RNA干扰技术包括如下步骤：以柑橘木虱cDNA为模板，通过PCR技术，使用扩增引物获得DcS44基因的部分片段，扩增产物连接入质粒中，以质粒为模板，用含启动子的引物进行扩增，扩增产物胶回收，合成dsRNA；稀释合成的dsRNA，显微注射柑橘木虱。
进一步地，所述扩增引物如下：
DcS44 F:ATGGCGACTTTGTCCGCGA；
DcS44 R:CTATGAAGAGGGGGCATTAGCTG。
进一步地，所述含启动子的引物如下：
DcS44-T7 F:GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGCCAGCTC CAGCACCAAC，
DcS44-T7 R:GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGGTCTGA GGCTTTGCCCA。
进一步地，所述质粒为-Blunt。
本发明目的之二是提供一种生物杀虫制剂，所述生物杀虫制剂包含柑橘木虱DcS44基因的dsRNA。
进一步地，所述dsRNA一条链的核苷酸序列SEQ ID NO.2具体如下所示：
CCAGCTCCAGCACCAACTGACGCCACCAAACGTGCAGAAAGTCCGGCCGAAGAGAAACTCAATCCAGCGGAGGTCGAAAAACAAAACAAAATCCTCGACTGTGTCTTCGAGAATGTTCAAAAGAAGTATCAGGTTAACGGTGTATCAAAGGAACAGTTTGACAAGAATATACGCTTGTCCGACGAGGACAGTATGAAGACTTTGTTCGAATCTGCAGGCTTTAAGGGAAATATTGGGGAATTGTTCGATTATATTGACTTCTCTTTTGAGGTGTGCTGGGCAAAGCCTCAGAC。
本发明目的之三是提供一种柑橘木虱DcS44基因在培育抗柑橘木虱和抗黄龙病品种中的应用。
本发明的有益效果为：
筛选合适的靶标基因是RNAi抗虫的前提，本发明将DcS44 dsRNA导入木虱体内，测定了DcS44基因沉默对木虱存活的影响，实验结果表明DcS44基因沉默后，柑橘木虱的死亡率与对照GFP dsRNA相比显著增加，在注射DcS44 dsRNA 10天后柑橘木虱死亡率高达68％，对于柑橘木虱防治以及抗木虱植物的培育具有重大价值。
附图说明
图1为DcS44基因的ORF扩增产物凝胶电泳图。
图2为DcS44基因在柑橘木虱的各个发育时期表达量。
图3为DcS44基因在柑橘木虱的各个组织部位表达量。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本发明。
关键试验材料来源及理化参数：
本次实验材料中的柑橘木虱，由赣南师范大学国家脐橙工程技术研究中心养虫室提供，饲养寄主是九里香；环境条件为温度(28±2)℃，湿度60％～80％，光周期L∶D＝14∶10h。
本发明中未对具体原料进行说明均为已经存在物质，可以从市面上直接购买得到。
实施例1
柑橘木虱DcS44基因的ORF扩增。
从饲养笼中用收集器收集100只柑橘木虱，在解剖镜下用镊子解剖出木虱的头部，然后利用Trizol提取柑橘木虱的RNA，利用One-Step gDNA Removal andcDNA Synthesis SuperMix反转录试剂盒(北京全式金生物技术股份有限公司)合成cDNA第一链。
根据柑橘木虱唾液蛋白转录组得到的DcS44基因序列，通过软件Premier Primer5.0设计特异性引物，命名为DcS44-F1和DcS44-R1。以cDNA作为模板，DcS44-F1和DcS44-R1为引物，用高保真酶PrimeSTAR Max Premix(Takara)扩增DcS44基因的ORF。
DcS44 F1:ATGGCGACTTTGTCCGCGA
DcS44 R1:CTATGAAGAGGGGGCATTAGCTG
将上述PCR产物进行电泳，结果如图1所示，其中，M：2000bp marker。
PCR的扩增产物Takara凝胶回收试剂盒进行回收纯化，与-Blunt克隆载体连接，转化大肠杆菌DH5α，测序鉴定。得到DcS44基因序列如下所示：
ATGGCGACTTTGTCCGCGAAAATCTTCATGTATATGTTTATCGTATATGTCGCGGTCTCTCAGGTGGAGTGCGAGCCACCAGCTCCAGCACCAACTGACGCCACCAAACGTGCAGAAAGTCCGGCCGAAGAGAAACTCAATCCAGCGGAGGTCGAAAAACAAAACAAAATCCTCGACTGTGTCTTCGAGAATGTTCAAAAGAAGTATCAGGTTAACGGTGTATCAAAGGAACAGTTTGACAAGAATATACGCTTGTCCGACGAGGACAGTATGAAGACTTTGTTCGAATCTGCAGGCTTTAAGGGAAATATTGGGGAATTGTTCGATTATATTGACTTCTCTTTTGAGGTGTGCTGGGCAAAGCCTCAGACTACAAACGGATCAGCTAATGCCCCCTCTTCATAG。
实施例2
柑橘木虱DcS44基因的表达分析。
为了研究DcS44基因在柑橘木虱不同组织部位和发育时期的表达情况，于是对柑橘木虱进行了解剖镜下的样本采集。解剖了雌雄柑橘木虱的头部、腿部、翅膀、表皮和中肠等柑橘木虱的不同组织部位，为了研究柑橘木虱DcS44基因在木虱不同发育阶段的表达水平，在解剖镜下采集了不同阶段的木虱样本，包括卵、一龄若虫、二龄若虫、三龄若虫、四龄若虫、五龄若虫和雌雄柑橘木虱成虫。同样采用Trizol RNA提取试剂盒上的操作提取柑橘木虱不同组织部位，以及不同发育时期的RNA。按照上述反转录试剂盒的说明进行操作，进行反转录合成cDNA。最后利用qRT-PCR的方法来检测柑橘木虱DcS44基因在不同组织部位和发育时期的的表达水平。所用引物为DcS44-F2和DcS44-R2，柑橘木虱的Actin基因(DcActinF和DcActin R)及GAPDH基因(DcGAPDH F和DcGAPDH R)作为qPCR内参，实时荧光定量所采用的试剂为Green qPCR SuperMix(北京全式金生物技术股份有限公司)。运用2-ΔΔCT(Ct表示循环数)法处理数据。检测结果见图2、3。
其中，qRT-PCR检测引物如下：
DcS44 F2:TCTGCAGGCTTTAAGGGAAATA，
DcS44 R2:CTGATCCGTTTGTAGTCTGAGG；
DcActin F:AGAAAGTACTCCGTGTGGATTG，
DcActin R:CGGACTCGTCGTATTCTTGTT；
DcGAPDH F:TGAGATCAAGGCCAAGGTAAAG，DcGAPDH R:GTCAAAGATGGAGGAGTGAGTG。
由图2、3可知：DcS44基因在柑橘木虱的各个发育时期均有表达,一龄和二龄若虫中表达量稍高，五龄的含量相对较低。DcS44基因在柑橘木虱不同部位的表达量存在很大的差异，其中表皮中的表达量最低，头部的表达量最高，如在雌虫头部的表达量是表皮的548倍，但两性木虱中同一组织部位的表达量差异不大，以上结果预示该基因可能在头部的唾液腺中高量表达。
实施例3
柑橘木虱DcS44基因的dsRNA合成。
1.引物设计与基因片段扩增
利用Primer Primer5.0软件设计引物DcS44 F3、DcS44 R3、DcS44-T7 F、DcS44-T7R，GFP-F、GFP-R、GDP-T7F、GFP-T7R，由上海生工公司合成。
其中，DcS44 dsRNA合成引物具体如下：
DcS44 F3:CCAGCTCCAGCACCAAC，
DcS44 R3:GTCTGAGGCTTTGCCCA；
DcS44-T7F:GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGCCAGCTCCAGCACCAAC，
DcS44-T7R:GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGGTCTGAGGCTTTGCCCA。
其中，GFP dsRNA合成引物具体如下：
GFP F:ACAAGTTCAGCGTGTCCG，
GFP R:TCACCTTGATGCCGTTCT；
GFP-T7 F:GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGACAAGTTCAGCGTGTCCG，
GFP-T7 R:GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGTCACCTTGATGCCGTTCT。
上述各引物序列中下划线处为T7 RNA聚合酶启动子序列。
PCR反应体系为：高保真酶PrimeSTAR Max Premix(2X)25μL、正向引物(10μmol·L-1)2μL、反向引物(10μmol·L-1)2μL、质粒2μL(稀释50倍)，ddH2O 19μL。
DcS44基因PCR的反应程序为：98℃10s，52℃15s，72℃30s；35个循环，4℃保存。
GFP基因PCR的反应程序为：98℃10s，56℃15s，72℃30s；35个循环，4℃保存。
以DcS44 ORF质粒为模板，用DcS44 F3和DcS44-T7 R、DcS44-T7F和DcS44 R3引物分别扩增，得到合成DcS44 dsRNA的DNA片段。
以16318hGFP质粒为模板，用GFP F和GFP-T7 R、GFP-T7 F和GFP R作为引物进行扩增，得到合成GFP dsRNA的DNA片段。
2.柑橘木虱DcS44基因和GFP的dsRNA的制备
将DcS44-F3和DcS44-T7 R、DcS44-T7 F和DcS44-R3扩增的2种DNA产物按照TaKaRaDNA产物纯化试剂盒说明书纯化。
将上述得到的2种纯化产物，测定浓度，作为体外转录dsRNA的模板。参考Promega公司的T7 RiboMAXTMExpress RNAi System试剂盒说明书进行以下步骤。dsRNA的体外转录体系为：
37℃孵育两小时后，将2个体系的产物混合。
dsRNA退火：70℃水浴10min，冷却至室温。
dsRNA纯化：加1μL(1:200无酶水稀释)RNAse、1μL RQ1，30℃孵育30min；加60μL无酶水、10μL醋酸钠、100μL异丙醇，冰上5min，12000rpm 10min；1mL 75％酒精清洗沉淀，7500rpm 5min；室温通风橱20min，加50μL无酶水溶解dsRNA。按此步骤得到柑橘木虱DcS44dsRNA，用相同步骤得到GFP dsRNA。
取1μL上述dsRNA，稀释10倍，剩余dsRNA置于-20℃冰箱保存；取2μL稀释后dsRNA用Nano Drop OneC超微量核酸仪测定浓度。
实施例4
dsRNA显微注射及生物检测。
柑橘木虱DcS44 dsRNA注射组：取10头羽化3天的柑橘木虱进行注射，每头注射500ng的DcS44 dsRNA，饲养在九里香植株。
柑橘木虱GFP dsRNA注射组：取10头羽化3天的柑橘木虱进行注射，每头注射500ng的GFP dsRNA，饲养在九里香植株。
上述各组设置10个重复，置于人工气候箱(温度(28±2)℃，湿度60％～80％，光周期L∶D＝14∶10)。每天统计各九里香中柑橘木虱的存活数，结果见表1。
表1 DcS44 dsRNA、GFP dsRNA注射组死亡率
组别 GFP dsRNA注射组 DcS44 dsRNA注射组
Day1 0±0 0±0
Day2 0±0 2±4.47
Day3 4±8.94 14±11.40
Day4 4±8.94 28±13.04＊
Day5 8±10.95 36±15.17＊
Day6 8±10.95 48±13.04＊
Day7 8±10.95 50±12.25＊
Day8 8±10.95 58±16.43＊
Day9 8±10.95 58±16.43＊
Day10 10±10 68±23.87＊
注：＊表示与对照组(GFP dsRNA)相比，试验组结果差异显著(t-test,n＝5，P<0.05)。
由表1可知：DcS44 dsRNA注射组死柑橘木虱的死亡率与对照GFP dsRNA相比显著增加，随着时间的推移死亡率呈上升趋势，在第十天时达到了68％的死亡率。
实施例5
DcS44 dsRNA抑制柑橘木虱DcS44基因的表达。
利用Primer Primer5.0软件设计扩增DcS44基因的引物DcS44-F2和DcS44-R2，内参基因Actin基因(DcActin F和DcActin R)及GAPDH基因(DcGAPDH F和DcGAPDH R)。
按实施例4收集各组dsRNA显微注射后存活48h及96h柑橘木虱样品，DcS44及GFPdsRNA各5组，每组5只柑橘木虱。用宝生物Trizol试剂盒提取柑橘木虱的RNA；用全式金反转录试剂盒反转录成cDNA；稀释20倍后作为实时荧光定量PCR的模板，DcS44-F2和DcS44-R2作为引物，Actin基因(DcActin F和DcActin R)及GAPDH基因(DcGAPDH F和DcGAPDH R)为内参基因。
实时荧光定量PCR体系为：正向引物(10μmol·L-1)0.4μL、反向引物(10μmol·L-1)0.4μL、2×Green qPCR SuperMix 10μL、模板cDNA 4μL，ddH2O 5.2μL。
PCR循环程序为95℃孵育10min；2步法95℃5s，60℃30s，40个循环；融解曲线95℃10s，65℃1min，97℃1s。每个样本3个重复，最终结果的计算采用2-△△Ct法(Ct表示循环数)进行计算，结果见表2。
表2不同注射组柑橘木虱DcS44基因相对表达量
组别 GFP dsRNA注射组 DcS44 dsRNA注射组
Day2 1±0.16 0.14±0.11＊
Day4 1±0.30 0.12±0.10＊
注：＊表示与对照组(GFP dsRNA)相比，试验组结果差异显著(t-test,n＝5，P<0.05)。
由表2可知：DcS44 dsRNA注射组柑橘木虱DcS44基因相对表达量与对照GFP dsRNA相比显著减少，随着时间的推移柑橘木虱DcS44基因相对表达量呈下降趋势。
由以上可知，DcS44 dsRNA可使柑橘木虱DcS44基因相对表达量减少，提高柑橘木虱死亡率提高，从而达到控制柑橘木虱虫口数量防止黄龙病扩散成灾的目的。
以上仅为本发明的较佳实施方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用，其特征在于，所述柑橘木虱DcS44基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用通过DcS44基因沉默使柑橘木虱死亡从而减少传播来防治柑橘黄龙病。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述基因沉默为采用RNA干扰技术进行基因沉默。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述RNA干扰技术包括如下步骤：以柑橘木虱cDNA为模板，通过PCR技术，使用扩增引物获得DcS44基因的部分片段，扩增产物连接入质粒中，以质粒为模板，用含启动子的引物进行扩增，扩增产物胶回收，合成dsRNA；稀释合成的dsRNA，显微注射柑橘木虱。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述扩增引物如下：
DcS44 F:ATGGCGACTTTGTCCGCGA；
DcS44 R:CTATGAAGAGGGGGCATTAGCTG。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述含启动子的引物如下：
DcS44-T7 F:GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGCCAGCTC CAGCACCAAC，
DcS44-T7 R:GGATCCTAATACGACTCACTATAGGGGTCTGA GGCTTTGCCCA。
7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述质粒为-Blunt。
8.一种生物杀虫制剂，其特征在于，所述生物杀虫制剂包含柑橘木虱DcS44基因的dsRNA。
9.根据权利要求8所述的生物杀虫剂，其特征在于，所述dsRNA核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。
10.柑橘木虱DcS44基因在培育抗柑橘木虱和抗黄龙病柑橘品种中的应用。
CN202410231257.1A 2024-02-29 2024-02-29 柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用 Pending CN118006668A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202410231257.1A CN118006668A (zh) 2024-02-29 2024-02-29 柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202410231257.1A CN118006668A (zh) 2024-02-29 2024-02-29 柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN118006668A true CN118006668A (zh) 2024-05-10

Family

ID=90942855

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202410231257.1A Pending CN118006668A (zh) 2024-02-29 2024-02-29 柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN118006668A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103088024B (zh) 两种dsRNA及其组合在控制蚜虫危害中的应用
CN110468137B (zh) 一种茄二十八星瓢虫高致死基因及其在防治瓢虫的应用
CN114957426B (zh) Sp6rars及其在防治蜚蠊目昆虫中的应用
CN108610427A (zh) 飞蝗滞育激素基因及其在调控昆虫滞育中的应用
CN114921467A (zh) 基于桃蚜效应因子MpC002基因的dsRNA及其在防治桃蚜中的应用
CN110616223B (zh) 一种防治茄二十八星瓢虫的靶基因及其应用
CN110551730B (zh) 茄二十八星瓢虫rps18基因及其在防虫害中的应用
CN114478735A (zh) 一种蚜虫高致死基因及其在蚜虫防治中的应用
CN102851297B (zh) 一种烟蚜hunchback基因cDNA及其应用
CN104109672B (zh) 一种蜕皮激素受体基因EcR dsRNA及其在控制蚜虫危害中的应用
CN118006668A (zh) 柑橘木虱DcS44基因在防治柑橘木虱及黄龙病中的应用
CN110511936B (zh) 茄二十八星瓢虫生长发育相关基因chs1及其应用
CN110106179B (zh) 一种飞蝗脂肪酸合成酶基因LmFAS3的dsRNA及其制备方法和应用
CN110106177B (zh) 一种飞蝗脂肪酸延伸酶基因LmElo的dsRNA及其制备方法和应用
CN115029357B (zh) 昆虫m6A甲基化阅读蛋白elF3-S6基因的dsRNA及其应用
CN113481202B (zh) 美国白蛾Rop基因dsRNA及其细菌表达液和应用
CN114507669B (zh) 点蜂缘蝽突触融合蛋白结合蛋白RpSDP及其应用
CN116491520B (zh) 二斑叶螨效应因子Tu28基因在调控二斑叶螨中的应用
CN113755530B (zh) 敲除或沉默蜂巢小甲虫气味结合蛋白基因1在防治蜂巢小甲虫中的应用
CN115011577B (zh) 昆虫m6A甲基化转移酶METTL3基因片段及其dsRNA和应用
CN110628774B (zh) 基因deltaCOPI及其在防治酸浆瓢虫中的应用
CN110628773B (zh) 一种用于防治酸浆瓢虫的靶基因和方法
CN117660464A (zh) 柑橘木虱唾液腺基因DcS21、其编码蛋白及其应用
CN109161602B (zh) 检测莲草直胸跳甲jhe基因转录水平的引物及方法
CN112391390A (zh) 飞蝗网格蛋白重链基因及其靶向dsRNA的合成与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination