CN118005734A - 一种抗耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的多肽及其用途 - Google Patents

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CN118005734A CN202410230793.XA CN202410230793A CN118005734A CN 118005734 A CN118005734 A CN 118005734A CN 202410230793 A CN202410230793 A CN 202410230793A CN 118005734 A CN118005734 A CN 118005734A
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Abstract

本公开涉及抗菌肽相关技术领域，具体涉及一种抗耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的多肽及其用途。所述多肽具有从氮端到碳端方向的氨基酸序列：GRVPIIYX1NRX2X3X4VCX5RF。所述多肽在制备抗革兰氏阴性菌药物中的用途。所述多肽在制备抗耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌药物中的用途。所述药物组合物包括所述多肽。本公开的多肽不仅对革兰氏阴性菌具有良好的抗菌性，而且对耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的具有良好的抗菌性，尤其是多粘菌素耐药的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的具有良好的抗菌性。

Description

一种抗耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的多肽及其用途
技术领域
本公开涉及抗菌肽相关技术领域，具体涉及一种抗耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的多肽及其用途。
背景技术
碳青霉烯类抗生素通常被认为是治疗多重耐药菌感染最有效的抗菌药物。然而，随着碳青霉烯类抗生素的广泛使用，碳青霉烯耐药肠杆菌科菌(Carbapenem-ResistantEnterobacteriaceae，CRE)患病率迅速增加。CRE通常表现为泛耐药，感染死亡率高且易传播。美国疾控中心(CentersforDiseaseControl，CDC)于2013年将其列为具有紧急威胁的微生物；同样地，世界卫生组织(WorldHealthOrganization，WHO)于2017年将其列为耐药菌优先1级(危急)微生物。根据全国监测网数据研究表明，我国CRE感染的总体死亡率为33.5％，且CRE的检出率和和感染率呈逐年上升趋势，对国民健康造成严重威胁。
在CRE治疗方面，几乎所有β-内酰胺类抗生素对CRE感染治疗效果有限，因此常采用抗生素联合疗法或新型β-内酰胺酶抑制剂进行治疗。当上述治疗方法不能有效控制感染时，某些限制使用级药物，如多黏菌素、替加环素和磷霉素等可能具有活性。但这些药物存在许多局限性，如多黏菌素易发生异质性耐药，且有明显的肾脏和神经系统毒性，肺组织渗透性低；替加环素血液浓度较低且为抑菌剂；磷霉素治疗效果有限，可快速出现耐药，这一耐药与磷霉素诱导的基因密切相关。此外，随着临床广泛应用，CRE对多黏菌素、替加环素等药物的耐药率也呈上升趋势，进一步加大临床治疗难度。因此，寻找对于CRE有效的新型抗菌物质意义重大。
发明内容
鉴于此，本公开提供一种抗耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的多肽及其用途。本公开的多肽不仅对革兰氏阴性菌具有良好的抗菌性，而且对耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的具有良好的抗菌性。
在本公开的第一方面，本公开提供一种多肽，所述多肽具有从氮端到碳端方向的氨基酸序列：GRVPIIYX1NRX2X3X4VCX5RF；
X1具有式(I)所示结构、或其立体异构体：其中，a选自从1至3的整数，R11和R12各自独立地选自H或C1～C3烷基；
X2具有式(II)所示结构、或其立体异构体：其中，b选自0或1；c选自从2至4的整数；
X3具有式(III)所示结构、或其立体异构体：其中，d选自从1至3的整数，R31和R32各自独立地选自H或C1～C3烷基；
X4具有式(IV)所示结构、或其立体异构体：其中，e选自从1至3的整数；
X5具有式(V)所示结构、或其立体异构体：其中，f选自从2至4的整数。
在一些可选实施方案中，a选自1。
在一些可选实施方案中，R11和R12各自独立地选自H或甲基。
在一些可选实施方案中，X1选自半胱氨酸或青霉胺。
在一些可选实施方案中，b和c之和为偶数。
在一些可选实施方案中，X2选自精氨酸、赖氨酸或2,4-二氨基丁酸。
在一些可选实施方案中，d选自1。
在一些可选实施方案中，R31和R32各自独立地选自H或甲基。
在一些可选实施方案中，X3选自苏氨酸或丝氨酸。
在一些可选实施方案中，e选自1或2。
在一些可选实施方案中，X4选自甘氨酸或2,4-二氨基丁酸。
在一些可选实施方案中，X4选自甘氨酸或D-2,4-二氨基丁酸。
在一些可选实施方案中，f选自2或4。
在一些可选实施方案中，X5选自赖氨酸或2,4-二氨基丁酸。
在一些可选实施方案中，所述多肽具有SEQ ID No.1～4任一条氨基酸序列。
在一些可选实施方案中，在所述多肽中，X1侧链上的巯基和半胱氨酸C侧链上的巯基形成二硫键。
在本公开的第二方面，本公开提供一种本公开的第一方面所述的多肽在制备抗革兰氏阴性菌药物中的用途。
在一些可选实施方案中，所述抗革兰氏阴性菌选自抗耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌药物中的用途。
在本公开的第三方面，本公开提供一种组合物，所述组合物包括本公开的第一方面所述的多肽。
在本公开的第四方面，本公开提供一种药物组合物，所述药物组合物包括本公开的第一方面所述的多肽。
本公开具有以下有益效果：
第一、本公开的多肽对革兰氏阴性菌具有良好的抗菌性。
第二、本公开的多肽对耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的具有良好的抗菌性，尤其是多粘菌素耐药的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的具有良好的抗菌性。
附图说明
图1是实施例1中具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的多肽的MS质谱图；
图2是实施例1中具有如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的多肽的高效液相色谱图；
图3是实施例2中具有如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的多肽的MS质谱图；
图4是实施例2中具有如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的多肽的高效液相色谱图；
图5是实施例2中具有如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的多肽的MS质谱图；
图6是实施例2中具有如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的多肽的高效液相色谱图；
图7是实施例4中具有如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的多肽的MS质谱图；
图8是实施例4中具有如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的多肽的高效液相色谱图；
图9实施例1～4和对比例1多肽对代表性革兰氏阴性菌的MIC值；
图10实施例1～4和对比例1多肽对CRE临床分离株的MIC值。
具体实施方式
本公开公开了一种抗耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的多肽及其用途，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本公开。本公开的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本公开内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本公开技术。
术语解释
本公开所用，术语“包含”或“包括”为开放式表达，即包括本公开所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
本公开所用，术语“任选地”、“任选的”或“任选”通常是指随后所述的事件或状况可以但未必发生，并且该描述包括其中发生该事件或状况的情况，以及其中未发生该事件或状况的情况。
本公开所用，术语“抗菌肽”，还可被称作“抗菌多肽”，与“抗菌蛋白”、“抗菌蛋白质”同义，在本公开使用来指具有抗菌、抑菌或杀菌功能的氨基酸残基的聚合物。该术语适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的人工化学模拟物，以及适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。除非另外说明，否则特定的多肽序列还隐含地涵盖其保守性修饰的变体。
本公开所用，术语“耐药性(drμgresistance)”，又称抗药性，是指微生物、寄生虫以及肿瘤细胞对于化疗药物作用的耐受性，耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显下降。耐药性根据其发生原因可分为获得耐药性和天然耐药性。自然界中的病原体，如细菌的某一株也可存在天然耐药性。当长期应用抗生素时，占多数的敏感菌株不断被杀灭，耐药菌株就大量繁殖，代替敏感菌株，而使细菌对该种药物的耐药率不断升高。目前认为后一种方式是产生耐药菌的主要原因。为了保持抗生素的有效性，应重视其合理使用。
本公开所用，术语“D型氨基酸”，与L型氨基酸相对，是同一氨基酸具有不同旋光性的两种同分异构体。按费歇尔投影式，氨基在左侧是L型氨基酸，氨基在右侧为D型氨基酸，通常天然氨基酸为L型氨基酸，D型氨基酸需通过人工合成获得。
本公开所用，术语“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何异构体(顺/反)异构体、阻转异构体等等。
本公开所用，术语“互变异构体”是指某些化合物中的一个官能团改变其结构成为另一种官能团异构体，并且能迅速地相互转换，成为两种异构体处在动态平衡。
本公开所用，术语“C1～C3烷基”是指完全饱和(即不含双键或叁键)的直链烷基、支链烷基或环烷基。例如“C1～C3烷基”是指该烷基可以具有1至3个碳原子，数值范围如“1至3”是指给定范围内的每个整数，即“1至3个碳原子”是指烷基具有1个碳原子、2个碳原子或3个碳原子。
多肽
在本公开的第一方面，本公开提供一种多肽，所述多肽衍生自抗菌肽Rip-thanatin，所述抗菌肽Rip-thanatin具有从氮端到碳端方向的氨基酸序列：GRVPIIYCNRKTGVCKRM(如SEQ ID No.5所示)。
其中，抗菌肽Rip-thanatin是一种从半翅目昆虫点蜂缘蝽中发现的抗菌肽，其与死亡素(Thanatin)高度同源，具有溶血毒性小、在血浆中稳定性良好等优势。本公开基于Rip-thanatin改造设计出若干小分子抗菌多肽，若干小分子抗菌多肽对包括CRE在内的多种肠杆菌科菌表现出良好的抗菌活性。
抗菌肽被认为是自然界中生物防御细菌、病毒等外源病原感染的重要效应分子。其一般由12-50个氨基酸组成，当中包含2-9个带正电荷的赖氨酸或精氨酸残基以及高达50％的疏水性氨基酸，来源包括植物、无脊椎动物、原核生物、哺乳动物等多种生物。抗菌肽的典型抗菌机制是促使膜破裂，它可通过与带负电荷的脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)和阴离子脂质结合，阻碍膜呼吸，耗尽细胞内电势，释放周质物质来发挥抗菌作用，细菌对其不易产生耐药性。
在一些可选实施方案中，所述多肽具有从氮端到碳端方向的氨基酸序列：GRVPIIYX1NRX2X3X4VCX5RF；其中，X1、X2、X3、X4和X5各自独立地选自氨基酸(如蛋白质氨基酸或非蛋白质氨基酸)。
在一些可选实施方案中，X1具有式(I)所示结构、或其立体异构体、或其互变异构体：其中，a选自从1至3的整数，R11和R12各自独立地选自H或C1～C3烷基。
在一些具体实施方案中，a选自1。
在一些可选实施方案中，R11和R12各自独立地选自H或甲基。在一些可选实施方案中，R11和R12都选自H，或者R11和R12都选自甲基。在一些具体实施方案中，R11和R12都选自H。在一些具体实施方案中，R11和R12都选自甲基。
在一些可选实施方案中，X1选自半胱氨酸或青霉胺。在一些具体实施方案中，X1选自半胱氨酸。在一些具体实施方案中，X1选自青霉胺。
在一些可选实施方案中，X2具有式(II)所示结构、或其立体异构体、或其互变异构体：其中，b选自0或1；c选自从2至4的整数。
在一些可选实施方案中，b和c之和为偶数；如b选自0且c选自2，或者b选自0且c选自4，或者b选自1且c选自3。
在一些可选实施方案中，X2选自精氨酸、赖氨酸或2,4-二氨基丁酸。在一些具体实施方案中，X2选自精氨酸。在一些具体实施方案中，X2选自赖氨酸。在一些具体实施方案中，X2选自2,4-二氨基丁酸。
在一些可选实施方案中，X3具有式(III)所示结构、或其立体异构体、或其互变异构体：其中，d选自从1至3的整数，R31和R32各自独立地选自H或C1～C3烷基；
在一些可选实施方案中，d选自1或2。在一些具体实施方案中，d选自1。
在一些可选实施方案中，R31和R32各自独立地选自H或甲基。在一些可选实施方案中，R31和R32都选自H，或者R31和R32中的一个取代基团选自H、另一个取代基团选自甲基。在一些具体实施方案中，R31和R32都选自H。在一些具体实施方案中，R31和R32中的一个取代基团选自H、另一个取代基团选自甲基。
在一些可选实施方案中，X3选自苏氨酸或丝氨酸。在一些具体实施方案中，X3选自苏氨酸。在一些具体实施方案中，X3选自丝氨酸。
在一些可选实施方案中，X4具有式(IV)所示结构、或其立体异构体、或其互变异构体：其中，e选自从1至3的整数。
在一些可选实施方案中，e选自1或2。在一些具体实施方案中，e选自1。在一些具体实施方案中，e选自2。
在一些可选实施方案中，X4选自甘氨酸或2,4-二氨基丁酸。在一些具体实施方案中，X4选自甘氨酸。在一些具体实施方案中，X4选自2,4-二氨基丁酸。进一步地，X4选自甘氨酸或D-2,4-二氨基丁酸。更进一步地，X4选自D-2,4-二氨基丁酸。
在一些可选实施方案中，X5具有式(V)所示结构、或其立体异构体、或其互变异构体：其中，f选自从2至4的整数。
在一些可选实施方案中，f选自2或4。在一些具体实施方案中，f选自2。在一些具体实施方案中，f选自4。
在一些可选实施方案中，X5选自赖氨酸或2,4-二氨基丁酸。在一些具体实施方案中，X5选自赖氨酸。在一些具体实施方案中，X5选自2,4-二氨基丁酸。
在一些可选实施方案中，所述多肽具有SEQ ID No.1～4任一条氨基酸序列。在一些具体实施方案中，所述多肽具有SEQ ID No.1所示氨基酸序列。在一些具体实施方案中，所述多肽具有SEQ ID No.2所示氨基酸序列。在一些具体实施方案中，所述多肽具有SEQ IDNo.3所示氨基酸序列。在一些具体实施方案中，所述多肽具有SEQ ID No.4所示氨基酸序列。
SEQ ID No.1所示氨基酸序列：GRVPIIYCNRRTGVCKRF(从氮端到碳端方向)。
SEQ ID No.2所示氨基酸序列：GRVPIIYCNRKTGVCKRF(从氮端到碳端方向)。
SEQ ID No.3所示氨基酸序列：GRVPIIYCNRRSGVCKRF(从氮端到碳端方向)。
SEQ ID No.4所示氨基酸序列：GRVPIIY-Pen-NR-Dab-T-DDab-VC-Dab-RF(从氮端到碳端方向)；其中，Pen代表青霉胺，Dab代表2,4-二氨基丁酸，DDab代表D-2,4-二氨基丁酸。
在一些可选实施方案中，在所述多肽中，X1侧链上的巯基和半胱氨酸C侧链上的巯基形成二硫键。
在一些可选实施方案中，所述多肽采用多肽合成法得到。所述多肽合成法可以为液相多肽合成法，也可以为固相多肽合成法。
可以理解的是，多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程；其中，多肽合成的顺序一般从碳端(羧基端)向氮端(氨基端)合成，能够大大减轻每步产品提纯的难度。为了防止副反应的发生，参加反应的氨基酸的侧链都是保护的，羧基端是游离的，且在反应之前必须活化。固相合成方法有两种，第一种为Fmoc，第二种为tBoc。液相合成主要有逐步合成和片段组合两种策略。
用途
在本公开的第二方面，本公开提供一种本公开的第一方面所述的多肽在制备抗革兰氏阴性菌药物中的用途。
在一些可选实施方案中，所述抗革兰氏阴性菌包括但不限于：弗劳地枸橼酸杆菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希菌、霍氏肠杆菌、沙门氏菌、产气肠杆菌和志贺菌。
示例性地，所述肺炎克雷伯氏菌可以为ATCC13883菌株、NTUH-K2044菌株和ATCC700603菌株等。所述大肠埃希菌可以为ATCC25922菌株、ATCC43888菌株和ATCC8739菌株等。所述霍氏肠杆菌可以为ATCC700323菌株等。所述沙门氏菌包括伤寒沙门菌和鼠伤寒沙门氏菌等。其中，所述伤寒沙门菌可以为CMCC50071菌株等。所述鼠伤寒沙门氏菌可以为ATCC14028菌株等。所述产气肠杆菌可以为ATCC13048菌株等。所述志贺菌包括福氏志贺菌、痢疾志贺菌、鲍氏志贺菌和宋内志贺菌等。其中，所述福氏志贺菌可以为ATCC12022菌株等。所述痢疾志贺菌可以为1311菌株等。所述鲍氏志贺菌可以为1711菌株等。所述宋内志贺菌可以为1712菌株等。
在一些可选实施方案中，所述抗革兰氏阴性菌选自抗耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌。
组合物
在本公开的第三方面，本公开提供一种组合物，所述组合物包括本公开的第一方面所述的多肽。
在一些可选实施方案中，所述组合物可以为药物组合物、化妆品组合物、饲料组合物、防腐剂组合物等。
药物组合物
在本公开的第五方面，本公开提供一种药物组合物，所述药物组合物包括本公开的第一方面所述的多肽、和/或本公开的第二方面所述的组合物。
在一些可选实施方案中，所述药物组合物还进一步包括一种或多种药学上可接受的辅料或助剂。
本公开所用，术语“药物组合物”可指用于疾病的治疗，也可用于细胞的体外培养实验。用于疾病的治疗时，术语“药物组合物”通常是指单位剂量形式，并且可以通过制药领域中熟知的方法的任何一种进行制备。所有的方法包括使活性成分与构成一种或多种附属成分的辅料相结合的步骤。通常，通过均匀并充分地使活性多肽与液体辅料、细碎固体辅料或这两者相结合，制备组合物。
本公开所用，术语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须与包含制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物化学上和/或毒理学上相容。优选地，本公开所述的“药学上可接受的”是指联邦监管机构或国家政府批准的或美国药典或其他一般认可药典上列举的在动物中、特别是人体中使用的。
本公开所用，术语“药学上可接受的辅料”均可包括任何溶剂、固体赋形剂、稀释剂或其他液体赋形剂等等，适合于特有的目标剂型。除了任何常规的辅料与本公开多肽不相容的范围，例如所产生的任何不良的生物效应或与药学上可接受的组合物的任何其他组分以有害的方式产生的相互作用，它们的用途也是本公开所考虑的范围。
除了任何常规的辅料外，与本公开多肽不相容的范围，例如所产生的任何不良的生物效应或与药学上可接受的组合物的任何其他组分以有害的方式产生的相互作用，它们的用途也是本公开所考虑的范围。
本公开的药物组合物包括适于胃肠外施用的制剂。制剂可以方便地以单位剂型形式存在并且可以通过药学领域公知的任何方法来制备。可以与辅料物质组合来制备单剂量形式的活性成分的量一般是产生治疗作用的多肽的量。
在一些可选实施方案中，所述药物组合物还包括其他任意有效成分。
为使本公开的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本公开实施方案作进一步地详细描述。
抗耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的多肽的制备
除另有说明，本公开所用多肽委托江西探真生物技术有限公司合成。其中，合成方法为固相多肽合成法。
实施例1～4和对比例1
其中，实施例1～4和对比例1多肽的序列信息如表1所示。
表1实施例1～4和对比例1多肽的序列信息
除另有说明，本公开所用G、R、V、P、I、Y、C、N、R、T、K、F、S、M、Pen、Dab和DDab的含义如下：G代表甘氨酸Gly；R代表精氨酸Arg；V代表缬氨酸Val；P代表脯氨酸Pro；I代表异亮氨酸Ile；Y代表酪氨酸Tyr；C代表半胱氨酸Cys；N代表天冬酰胺Asn；R代表精氨酸Arg；T代表苏氨酸Thr；K代表赖氨酸Lys；F代表苯丙氨酸Phe；S代表丝氨酸S；M代表蛋氨酸Met；Pen代表青霉胺；Dab代表2,4-二氨基丁酸；DDab代表D-2,4-二氨基丁酸。
对实施例1～4的多肽分别进行MS质谱检测和HPLC纯度检测。
其中，图1是实施例1中多肽的质谱图；图2是实施例1中多肽的高效液相色谱图。从图1可以看出，本公开实施例1得到了如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的多肽。从图2可以看出，本公开实施例1所得到多肽的纯度在98％以上。
图3是实施例2中多肽的质谱图；图4是实施例2中多肽的高效液相色谱图。从图3可以看出，本公开实施例2得到了如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的多肽。从图4可以看出，本公开实施例2所得到多肽的纯度在98％以上。
图5是实施例3中多肽的质谱图；图6是实施例3中多肽的高效液相色谱图。从图5可以看出，本公开实施例3得到了如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的多肽。从图6可以看出，本公开实施例3所得到多肽的纯度在98％以上。
图7是实施例4中多肽的质谱图；图8是实施例4中多肽的高效液相色谱图。从图7可以看出，本公开实施例4得到了如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的多肽。从图8可以看出，本公开实施例4所得到多肽的纯度在98％以上。
对革兰氏阴性菌的抗菌性能检测试验
选择革兰氏阴性菌标准菌株ATCC13883(肺炎克雷伯菌)、NTUH-K2044(肺炎克雷伯菌)、ATCC700603(肺炎克雷伯菌)、ATCC25922(大肠埃希菌)、ATCC43888(大肠埃希菌)、ATCC8739(大肠埃希菌)、ATCC700323(霍氏肠杆菌)、CMCC50071(伤寒沙门菌)、ATCC14028(鼠伤寒沙门氏菌)、ATCC13048(产气肠杆菌)、ATCC12022(福氏志贺菌)，以及我国国家卫生健康委临床检验中心来源的质控菌株1311(痢疾志贺菌)、1711(鲍氏志贺菌)、1712(宋内志贺菌)验证本公开多肽对革兰氏阴性菌的抗菌效果。
采用微量肉汤稀释法检测多肽的最小抑菌浓度(MIC)：用LB液体培养基配制不同终浓度的多肽溶液，终浓度分别为8μM、4μM、2μM、1μM、0.5μM、0.25μM以及0.125μM。制备0.5麦氏浊度的菌液，1:10稀释。分别向不同终浓度的多肽溶液中(100μL)加入经过1:10稀释后的菌液(5μL)，混匀后37℃孵育过夜，观察菌株生长情况(表2，图9)。
表2实施例1～4和对比例1多肽对革兰氏阴性菌的最小抑菌浓度
从表2和图9可以看出，相较于对比例1(抗菌肽Rip-thanatin)，实施例1～4多肽(SEQ ID NO.1～4)对革兰氏阴性菌的MIC值大幅降低，具有良好的抗菌效果。
对抗耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的抗菌性能检测试验
使用临床分离CRE菌株共24株验证本公开多肽对CRE的抗菌效果。
采用微量肉汤稀释法检测各菌株对多肽的最小抑菌浓度(MIC)。LB液体培养基配制小分子多肽溶液，使其终浓度分别为8μM、4μM、2μM、1μM、0.5μM、0.25μM以及0.125μM。制备0.5麦氏浊度菌液，1：10稀释。分别向不同终浓度的多肽溶液中(100μL)加入经过1:10稀释后的菌液(5μL)，混匀后37℃孵育过夜，观察菌株生长情况(表3和图10)。
表3实施例1～4和对比例1多肽对CRE的最小抑菌浓度
从表3和图10可以看出，相较于对比例1(抗菌肽Rip-thanatin)，实施例1～4多肽(SEQ ID NO.1～4)对CRE的MIC值大幅降低，具有良好的抗菌效果。由此可见，本公开多肽可以作为抗CRE的药物活性成分，特别是抗多粘菌素耐药CRE的药物活性成分。
以上对本公开所提供的一种抗耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的多肽及其用途进行了详细介绍。本文应用了具体个例对本公开的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本公开的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域技术人员来说，在不脱离本公开原理的前提下，还可以对本公开进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本公开权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种多肽，其特征在于，所述多肽具有从氮端到碳端方向的氨基酸序列：GRVPIIYX1NRX2X3X4VCX5RF；
X1具有式(I)所示结构、或其立体异构体、或其互变异构体：其中，a选自从1至3的整数，R11和R12各自独立地选自H或C1～C3烷基；
X2具有式(II)所示结构、或其立体异构体、或其互变异构体：其中，b选自0或1；c选自从2至4的整数；
X3具有式(III)所示结构、或其立体异构体、或其互变异构体：其中，d选自从1至3的整数，R31和R32各自独立地选自H或C1～C3烷基；
X4具有式(IV)所示结构、或其立体异构体、或其互变异构体：其中，e选自从1至3的整数；
X5具有式(V)所示结构、或其立体异构体、或其互变异构体：其中，f选自从2至4的整数。
2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，a选自1；
任选地，R11和R12各自独立地选自H或甲基；
任选地，X1选自半胱氨酸或青霉胺。
3.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，b和c之和为偶数；
任选地，X2选自精氨酸、赖氨酸或2,4-二氨基丁酸。
4.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，d选自1；
任选地，R31和R32各自独立地选自H或甲基；
任选地，X3选自苏氨酸或丝氨酸。
5.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，e选自1或2；
任选地，X4选自甘氨酸或2,4-二氨基丁酸；
任选地，X4选自甘氨酸或D-2,4-二氨基丁酸。
6.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，f选自2或4；
任选地，X5选自赖氨酸或2,4-二氨基丁酸。
7.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽具有SEQ ID No.1～4任一条氨基酸序列；
任选地，在所述多肽中，X1侧链上的巯基和半胱氨酸C侧链上的巯基形成二硫键。
8.如权利要求1至7任一项所述的多肽在制备抗革兰氏阴性菌药物中的用途；
任选地，所述抗革兰氏阴性菌选自抗耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌。
9.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括如权利要求1至7任一项所述的多肽。
10.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如权利要求1至7任一项所述的多肽。
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