CN117999362A - 犬癌症的诊断方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种犬癌症的诊断方法，使计算机根据使用犬microRNA的基因表达分析结果做出诊断。所述犬癌症的诊断方法包括诊断工序，所述诊断工序中，获得从诊断对象、即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，利用该结果求出对特定microRNA的基因表达水平，将该基因表达水平作为诊断标准，诊断该诊断对象即犬罹患特定癌症疾病的风险程度，其特征在于，上述特定microRNA为基于从犬体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，在罹患上述特定癌症疾病的犬与健康犬之间的基因表达水平上观察到显著差异的microRNA。

Description

犬癌症的诊断方法
技术领域
本发明涉及一种基于microRNA的基因表达分析结果诊断犬癌症的方法。
背景技术
早期发现、早期治疗对癌症治疗是重要的。但是，以往的检查是一种侵入性的方法，如切取肿瘤组织进行病理检查等，给患者带来的负担大，而且存在重复检查困难的问题。因此，近年来备受瞩目的是通过分析来自血液、唾液、尿等体液的特定生物标志物来检测癌症的技术，即液体活检。这种技术具有给患者带来的负担小、能够重复采样、进而能够筛查(screen)全身而不局限于单一器官的优点，认为不仅对癌症的早期诊断有用，而且对治疗后的复发监测也有用。
MicroRNA是血液、唾液、尿等体液中含有的22个碱基左右的小RNA，调控特定基因的表达，已知在患者的血液中其种类、数量随着癌症等疾病而发生变动。在人类中，使用microRNA作为癌症特异性生物标志物，正在进行基于其表达分析结果的癌症诊断试剂盒的开发(例如专利文献1)。
但是，对于用于以犬为对象检测癌症的有效技术尚未确立。
(现有技术文献)
(专利文献)
专利文献1：日本再表2015/194615号
发明内容
发明要解决的课题
本发明提供一种基于使用犬microRNA的基因表达分析结果，准确且迅速地诊断犬癌症的方法。
用于解决课题的手段
本发明的各实施方式如下所述。
[1]一种犬癌症的诊断方法，其包括诊断工序，在该诊断工序中，获得从诊断对象、即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，利用该结果求出对特定microRNA的基因表达水平，将该基因表达水平作为诊断标准，诊断该诊断对象即犬罹患特定癌症疾病的风险程度，所述诊断方法的特征在于，所述特定microRNA是基于从犬体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，在罹患所述特定癌症疾病的犬与健康犬之间的基因表达水平上观察到显著差异的microRNA。
[2]根据[1]所述的方法，其中，在所述诊断工序之前，进一步包括下述提取工序：根据使用统计分析处理创建的判别式，提取如下microRNA作为特定microRNA：基于从犬体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，所述microRNA在罹患特定癌症疾病的犬与健康犬之间的基因表达水平上观察到显著差异。
[3]根据[1]或[2]所述的方法，其中，所述特定癌症疾病选自由口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤组成的组。
[4]根据[1]至[3]中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为包括口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤在内的5种癌症疾病，所述特定microRNA为选自由cfa-let-7c、cfa-miR-103、cfa-miR-10a、cfa-miR-122、cfa-miR-125a、cfa-miR-125b、cfa-miR-126、cfa-miR-130a、cfa-miR-144、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-186、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-19b、cfa-miR-22、cfa-miR-222、cfa-miR-223、cfa-miR-24、cfa-miR-26a、cfa-miR-27b、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-378、cfa-miR-383、cfa-miR-483、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-489、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-718、cfa-miR-874、cfa-miR-8794、cfa-miR-8798、cfa-miR-8843、cfa-miR-8859a、cfa-miR-8860、cfa-miR-8903、cfa-miR-8906、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种。
[5]根据[1]至[3]中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为口腔内黑色素瘤，所述特定microRNA为选自由cfa-miR-10a、cfa-miR-1185、cfa-miR-125a、cfa-miR-126、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-184、cfa-miR-186、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-19b、cfa-miR-24、cfa-miR-30c、cfa-miR-483、cfa-miR-489、cfa-miR-8798、cfa-miR-8816、cfa-miR-8875和cfa-miR-8908a-3p组成的组中的至少一种。
[6]根据[1]至[3]中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为尿道上皮癌，所述特定microRNA为选自由cfa-let-7f、cfa-miR-10a、cfa-miR-1249、cfa-miR-125a、cfa-miR-126、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-133b、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-1844、cfa-miR-186、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-19b、cfa-miR-2114、cfa-miR-24、cfa-miR-29b、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-361、cfa-miR-370、cfa-miR-425、cfa-miR-483、cfa-miR-494、cfa-miR-502、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-665、cfa-miR-718、cfa-miR-8798、cfa-miR-8824、cfa-miR-8832、cfa-miR-8834a、cfa-miR-8843、cfa-miR-8904b和cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p组成的组中的至少一种。
[7]根据[1]至[3]中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为恶性淋巴瘤，所述特定microRNA为选自由cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-1249、cfa-miR-126、cfa-miR-1306、cfa-miR-144、cfa-miR-150、cfa-miR-184、cfa-miR-188、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-24、cfa-miR-342、cfa-miR-345、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-574、cfa-miR-8794、cfa-miR-8797、cfa-miR-8798、cfa-miR-8900、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8907和cfa-miR-8908d组成的组中的至少一种。
[8]根据[1]至[3]中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为肝细胞癌，所述特定microRNA为选自由cfa-let-7g、cfa-miR-10a、cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-125b、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-206、cfa-miR-22、cfa-miR-378、cfa-miR-383、cfa-miR-483、cfa-miR-665、cfa-miR-7、cfa-miR-718、cfa-miR-874、cfa-miR-8794、cfa-miR-8798、cfa-miR-8875、cfa-miR-8900、cfa-miR-8902、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b和cfa-miR-99a组成的组中的至少一种。
[9]根据[1]至[3]中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为肥大细胞瘤，所述特定microRNA为选自由cfa-miR-10b、cfa-miR-1185、cfa-miR-125b、cfa-miR-126、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-222、cfa-miR-24、cfa-miR-26b、cfa-miR-8803、cfa-miR-8872、cfa-miR-8903、cfa-miR-8907和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种。
[10]一种犬癌症的诊断方法，其包括诊断工序，在所述诊断工序中，获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，利用该结果求出对特定microRNA的基因表达水平，将该基因表达水平作为诊断标准，诊断该诊断对象即犬罹患特定癌症疾病的风险程度，所述诊断方法的特征在于，所述特定microRNA为基于从犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，在罹患所述特定癌症疾病的犬与罹患其他癌症疾病的犬和健康犬之间的基因表达水平上观察到显著差异的microRNA。
[11]根据[10]所述的方法，其中，在所述诊断工序之前，进一步包括下述提取工序：根据使用统计分析处理所创建的判别式，提取如下microRNA作为特定microRNA：基于从犬体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，所述microRNA在罹患特定癌症疾病的犬与罹患其他癌症疾病的犬和健康犬之间的基因表达水平上观察到显著差异。
[12]根据[10]所述的方法，其中，在所述诊断工序中，包括所述诊断对象、即犬罹患所述特定癌症疾病的风险程度高于或低于罹患其他癌症疾病的风险。
[13]根据[10]至[12]中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病选自由口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤组成的组。
[14]根据[10]至[13]中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为口腔内黑色素瘤，所述诊断中使用的特定microRNA为选自由cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-126、cfa-miR-1271、cfa-miR-1306、cfa-miR-130b、cfa-miR-140、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-192、cfa-miR-197、cfa-miR-222、cfa-miR-29a、cfa-miR-29b、cfa-miR-30b、cfa-miR-370、cfa-miR-378、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-489、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-8803、cfa-miR-8816、cfa-miR-8824、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8859a、cfa-miR-8875、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908d和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种。
[15]根据[10]至[13]中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为尿道上皮癌，所述诊断中使用的特定microRNA为选自由cfa-let-7b、cfa-miR-107、cfa-miR-10b、cfa-miR-122、cfa-miR-125b、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-133b、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-181a、cfa-miR-185、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-19b、cfa-miR-23a、cfa-miR-29c、cfa-miR-345、cfa-miR-361、cfa-miR-370、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-8794、cfa-miR-8803、cfa-miR-8816、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8860、cfa-miR-8873a、cfa-miR-8891、cfa-miR-8903、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b、cfa-miR-93和cfa-miR-99a组成的组中的至少一种。
[16]根据[10]至[13]中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为恶性淋巴瘤，所述诊断中使用的特定microRNA为选自由cfa-let-7f、cfa-miR-122、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-140、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-151、cfa-miR-15a、cfa-miR-181a、cfa-miR-1844、cfa-miR-188、cfa-miR-192、cfa-miR-193a、cfa-miR-21、cfa-miR-22、cfa-miR-23b、cfa-miR-24、cfa-miR-26a、cfa-miR-26b、cfa-miR-27b、cfa-miR-301a、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-345、cfa-miR-378、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-551b、cfa-miR-574、cfa-miR-631、cfa-miR-8794、cfa-miR-8803、cfa-miR-8809、cfa-miR-8836、cfa-miR-8843、cfa-miR-8863、cfa-miR-8872、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8906、cfa-miR-8907和cfa-miR-8908d组成的组中的至少一种。
[17]根据[10]至[13]中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为肝细胞癌，所述诊断中使用的特定microRNA为选自由cfa-let-7b、cfa-let-7c、cfa-let-7f、cfa-let-7g、cfa-miR-10b、cfa-miR-122、cfa-miR-1249、cfa-miR-132、cfa-miR-134、cfa-miR-146a、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-16、cfa-miR-206、cfa-miR-22、cfa-miR-223、cfa-miR-29a、cfa-miR-30d、cfa-miR-331、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-483、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-574、cfa-miR-8794、cfa-miR-8815、cfa-miR-8824、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8836、cfa-miR-8843、cfa-miR-8860、cfa-miR-8892、cfa-miR-8900、cfa-miR-8903、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b和cfa-miR-99a组成的组中的至少一种。
[18]根据[10]至[13]中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为肥大细胞瘤，所述诊断中使用的特定microRNA为选自由cfa-let-7c、cfa-let-7f、cfa-miR-10a、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-144、cfa-miR-149、cfa-miR-186、cfa-miR-188、cfa-miR-18a、cfa-miR-191、cfa-miR-221、cfa-miR-223、cfa-miR-301a、cfa-miR-30c、cfa-miR-342、cfa-miR-370、cfa-miR-451、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-551b、cfa-miR-574、cfa-miR-631、cfa-miR-8809、cfa-miR-8815、cfa-miR-8816、cfa-miR-8834a、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8903和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种。
[19]一种生物标志物，其包含用于诊断包括口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤在内的5种犬癌症疾病、且选自由cfa-let-7c、cfa-miR-103、cfa-miR-10a、cfa-miR-122、cfa-miR-125a、cfa-miR-125b、cfa-miR-126、cfa-miR-130a、cfa-miR-144、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-186、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-19b、cfa-miR-22、cfa-miR-222、cfa-miR-223、cfa-miR-24、cfa-miR-26a、cfa-miR-27b、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-378、cfa-miR-383、cfa-miR-483、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-489、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-718、cfa-miR-874、cfa-miR-8794、cfa-miR-8798、cfa-miR-8843、cfa-miR-8859a、cfa-miR-8860、cfa-miR-8903、cfa-miR-8906、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种microRNA。
[20]一种生物标志物，其包含用于诊断犬口腔内黑色素瘤、且选自由cfa-miR-10a、cfa-miR-1185、cfa-miR-125a、cfa-miR-126、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-184、cfa-miR-186、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-19b、cfa-miR-24、cfa-miR-30c、cfa-miR-483、cfa-miR-489、cfa-miR-8798、cfa-miR-8816、cfa-miR-8875和cfa-miR-8908a-3p组成的组中的至少一种microRNA。
[21]一种生物标志物，其包含用于诊断犬尿道上皮癌、且选自由cfa-let-7f、cfa-miR-10a、cfa-miR-1249、cfa-miR-125a、cfa-miR-126、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-133b、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-1844、cfa-miR-186、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-19b、cfa-miR-2114、cfa-miR-24、cfa-miR-29b、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-361、cfa-miR-370、cfa-miR-425、cfa-miR-483、cfa-miR-494、cfa-miR-502、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-665、cfa-miR-718、cfa-miR-8798、cfa-miR-8824、cfa-miR-8832、cfa-miR-8834a、cfa-miR-8843、cfa-miR-8904b和cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p组成的组中的至少一种microRNA。
[22]一种生物标志物，其包含用于诊断犬恶性淋巴瘤、且选自由cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-1249、cfa-miR-126、cfa-miR-1306、cfa-miR-144、cfa-miR-150、cfa-miR-184、cfa-miR-188、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-24、cfa-miR-342、cfa-miR-345、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-574、cfa-miR-8794、cfa-miR-8797、cfa-miR-8798、cfa-miR-8900、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8907和cfa-miR-8908d组成的组中的至少一种microRNA。
[23]一种生物标志物，其包含用于诊断犬肝细胞癌、且选自由cfa-let-7g、cfa-miR-10a、cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-125b、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-206、cfa-miR-22、cfa-miR-378、cfa-miR-383、cfa-miR-483、cfa-miR-665、cfa-miR-7、cfa-miR-718、cfa-miR-874、cfa-miR-8794、cfa-miR-8798、cfa-miR-8875、cfa-miR-8900、cfa-miR-8902、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b和cfa-miR-99a组成的组中的至少一种microRNA。
[24]一种生物标志物，其包含用于诊断犬肥大细胞瘤、且选自由cfa-miR-10b、cfa-miR-1185、cfa-miR-125b、cfa-miR-126、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-222、cfa-miR-24、cfa-miR-26b、cfa-miR-8803、cfa-miR-8872、cfa-miR-8903、cfa-miR-8907和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种microRNA。
[25]一种生物标志物，其包含用于诊断犬口腔内黑色素瘤、且选自由cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-126、cfa-miR-1271、cfa-miR-1306、cfa-miR-130b、cfa-miR-140、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-192、cfa-miR-197、cfa-miR-222、cfa-miR-29a、cfa-miR-29b、cfa-miR-30b、cfa-miR-370、cfa-miR-378、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-489、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-8803、cfa-miR-8816、cfa-miR-8824、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8859a、cfa-miR-8875、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908d和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种microRNA。
[26]一种生物标志物，其包含用于诊断犬尿道上皮癌、且选自由cfa-let-7b、cfa-miR-107、cfa-miR-10b、cfa-miR-122、cfa-miR-125b、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-133b、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-181a、cfa-miR-185、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-19b、cfa-miR-23a、cfa-miR-29c、cfa-miR-345、cfa-miR-361、cfa-miR-370、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-8794、cfa-miR-8803、cfa-miR-8816、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8860、cfa-miR-8873a、cfa-miR-8891、cfa-miR-8903、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b、cfa-miR-93和cfa-miR-99a组成的组中的至少一种microRNA。
[27]一种生物标志物，其包含用于诊断犬恶性淋巴瘤、且选自由cfa-let-7f、cfa-miR-122、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-140、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-151、cfa-miR-15a、cfa-miR-181a、cfa-miR-1844、cfa-miR-188、cfa-miR-192、cfa-miR-193a、cfa-miR-21、cfa-miR-22、cfa-miR-23b、cfa-miR-24、cfa-miR-26a、cfa-miR-26b、cfa-miR-27b、cfa-miR-301a、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-345、cfa-miR-378、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-551b、cfa-miR-574、cfa-miR-631、cfa-miR-8794、cfa-miR-8803、cfa-miR-8809、cfa-miR-8836、cfa-miR-8843、cfa-miR-8863、cfa-miR-8872、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8906、cfa-miR-8907和cfa-miR-8908d组成的组中的至少一种microRNA。
[28]一种生物标志物，其包含用于诊断犬肝细胞癌、且选自由cfa-let-7b、cfa-let-7c、cfa-let-7f、cfa-let-7g、cfa-miR-10b、cfa-miR-122、cfa-miR-1249、cfa-miR-132、cfa-miR-134、cfa-miR-146a、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-16、cfa-miR-206、cfa-miR-22、cfa-miR-223、cfa-miR-29a、cfa-miR-30d、cfa-miR-331、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-483、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-574、cfa-miR-8794、cfa-miR-8815、cfa-miR-8824、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8836、cfa-miR-8843、cfa-miR-8860、cfa-miR-8892、cfa-miR-8900、cfa-miR-8903、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b和cfa-miR-99a组成的组中的至少一种microRNA。
[29]一种生物标志物，其包含用于诊断犬肥大细胞瘤、且选自由cfa-let-7c、cfa-let-7f、cfa-miR-10a、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-144、cfa-miR-149、cfa-miR-186、cfa-miR-188、cfa-miR-18a、cfa-miR-191、cfa-miR-221、cfa-miR-223、cfa-miR-301a、cfa-miR-30c、cfa-miR-342、cfa-miR-370、cfa-miR-451、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-551b、cfa-miR-574、cfa-miR-631、cfa-miR-8809、cfa-miR-8815、cfa-miR-8816、cfa-miR-8834a、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8903和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种microRNA。
发明效果
根据本发明，能够提供一种准确且迅速地诊断犬癌症的方法。
附图说明
图1-1是表示microRNA的基因表达分析结果的图。
图1-2是表示microRNA的基因表达分析结果的图。
图2是表示模型判别式的ROC曲线和AUC的图。
图3是表示模型判别式的ROC曲线和AUC的图。
图4-1是表示在本发明的实施中提取出的各判别式及其AUC的图。
图4-2是表示在本发明的实施中提取出的各判别式及其AUC的图。
图4-3是表示在本发明的实施中提取出的各判别式及其AUC的图。
图4-4是表示在本发明的实施中提取出的各判别式及其AUC的图。
图4-5是表示在本发明的实施中提取出的各判别式及其AUC的图。
图4-6是表示在本发明的实施中提取出的各判别式及其AUC的图。
图4-7是表示在本发明的实施中提取出的各判别式及其AUC的图。
图4-8是表示在本发明的实施中提取出的各判别式及其AUC的图。
图4-9是表示在本发明的实施中提取出的各判别式及其AUC的图。
图4-10是表示在本发明的实施中提取出的各判别式及其AUC的图。
图4-11是表示在本发明的实施中提取出的各判别式及其AUC的图。
具体实施方式
[关于犬癌症的诊断方法所包括的各工序]
在此，将本发明的犬癌症的诊断方法分为几个工序进行具体说明，但该方法所包括的各工序的顺序、分离和整合等的变更只要不脱离本发明的目的即可。
<步骤1：microRNA的表达分析>
采集犬体液作为样品(被测物)，从采集的体液中提取microRNA，对提取的microRNA进行基因表达分析，并检测microRNA的表达量。
作为上述样品，准备健康犬的体液以及罹患包括“特定癌症疾病”在内的癌症的犬的体液。在本申请公开的范围内，所谓“特定癌症疾病”可以指要诊断的癌症疾病。
作为上述体液的例子，可以举出血清、唾液或尿等。优选使用犬血清。
作为上述“特定癌症疾病”，能够选自由作为犬癌症发生频率较高的口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤组成的组，但并不限于此。
作为上述基因表达分析的方法，例如能够使用微阵列分析或高通量测序技术(NGS，Next-generation sequencing)等，只要可以检测从犬体液中提取的microRNA的基因表达，也可以采用该技术领域熟知的其他方法。然而，由于此处进行的基因表达分析需要对各癌症疾病与基因表达量之间的相互关系进行广泛分析，所以优选采用可以对从犬体液中提取的microRNA进行尽可能全面分析的方法。因此，最好能够采用微阵列分析。需要说明的是，由于包括微阵列分析在内的上述基因表达分析方法是已知的，所以，在此省略详细说明。另外，因为还包括整理microRNA的基因表达量的工作，导致其分析结果包括海量数据，所以，优选由计算机来执行上述基因表达分析。
<步骤2：特定microRNA的提取>
基于上述microRNA的表达分析的结果，提取在罹患“特定癌症疾病”的犬与健康犬之间的基因表达水平上、或者在特定的实施方式中罹患特定癌症疾病的犬与罹患其他癌症疾病的犬和健康犬之间的基因表达水平上观察到显著差异的microRNA。此处，提取的microRNA的数量取决于提取的技术及其对象，并不局限于此，但一般为1～80种左右，优选为4～50种左右。
在本申请公开的范围内，将这样的microRNA称为“特定microRNA”。
另外，作为上述“特定癌症疾病”，能够选自由作为犬癌症发生频率较高的口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤组成的组，但并不限于此。
作为上述“特定microRNA”的提取方法，能够采用这样的方法：根据上述microRNA的基因表达分析结果进行统计分析处理，构建用于预测犬癌症的模型判别式，由这样的判别式提取“特定microRNA”。
作为上述统计分析处理的具体方法，例如能够举出LASSO(at least absoluteshrinkage and selection operator，最小绝对值收敛和选择算子)回归分析，但只要能够达到本发明的目的，并不限于此。
在特定的实施方式中，作为上述“特定microRNA”的提取方法，能够采用这样的方法：基于上述microRNA的基因表达分析结果进行LASSO回归分析，构建用于预测犬癌症的模型判别式，由这样的判别式提取“特定microRNA”。
众所周知，LASSO回归分析是一种回归分析方法，可提高生成的统计模型的预测准确性和可解释性，应用了上述LASSO回归分析的方法特别适用于提取在“特定癌症疾病”中更具特征和/或频繁出现的microRNA作为“特定microRNA”，其可在后期的诊断工序中用作生物标志物。
另外，作为提取上述“特定microRNA”的其他方法，能够举出下述方法：根据上述基因表达分析结果生成热图图像，通过基于计算机进行的图像分析处理，机械地选定在罹患“特定癌症疾病”的犬与健康犬(有时包括罹患其他癌症疾病的犬)之间的基因表达水平上观察到显著差异、例如2倍以上的差异的microRNA，从这样的microRNA中提取“特定microRNA”。所谓热图图像是将基因的表达量可视化得到的图像，根据所使用的颜色的种类和深浅显示基因的表达量的高低。
因此，作为提取上述“特定microRNA”的其他方法，可以在生成可直观地识别这样的microRNA的表达分析的结果的热图图像、进而实施聚类处理等之后，与应用上述LASSO回归分析的方法组合，或者采用以上述LASSO回归分析的预处理方式生成热图图像的方法。
进而，作为提取上述“特定microRNA”的方法，还设想了一种基于AI的机器学习等进行图像分析处理来提取“特定microRNA”的方法，本发明中不排除这种方法。通过这样的基于AI的图像分析处理，能够期待可提取难以通过简单的阈值设置来提取的microRNA，如只有通过组合多个microRNA才能观察到显著差异的情况、或者即使差异微小也能观察到显著差异的情况等。
另外，优选由计算机执行上述“特定microRNA”的提取，包括生成需要精确映射基因表达量的热图图像的情况。这样的计算机可以是安装了为实施本发明而单独开发的软件的计算机，也可以是安装了为上述基因表达分析、例如微阵列分析而开发的市售软件的计算机。
<步骤3：利用了特定microRNA的诊断>
新获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，利用该结果，对上述提取的“特定microRNA”确定其基因表达水平，以该基因表达水平作为诊断标准诊断上述诊断对象、即犬罹患上述“特定癌症疾病”的风险程度。
用于对从作为诊断对象的犬的体液中提取的microRNA进行表达分析的技术可以与上述步骤1的基因表达分析的技术相同，也可以不同，例如能够采用微阵列分析，但并不限于此。
另外，作为上述体液的例子，能够举出血清、唾液或尿等，但优选使用犬血清。
所谓上述风险程度既可以是由“罹患/未罹患该癌症”中的任一个来选择性地表示诊断的模式，也可以是如“罹患该癌症的可能性XX％”那样多阶段地表示诊断的模式。在特定的实施方式中，上述风险程度可以包括如“罹患特定癌症的风险高于/低于罹患其他癌症疾病的风险”那样表示诊断的模式。
另外，根据本发明，由于预先提取了与特定癌症疾病关联性特别高的“特定microRNA”，所以对于诊断对象，一般对1～80种左右、优选4～50种左右的数量的“特定microRNA”进行表达分析即可，不需要广泛的网罗性的表达分析。总之，可以有效地进行作为诊断对象的犬的microRNA的基因表达分析，其结果，该诊断的处理负担减小，使快速且精确地诊断犬癌症成为可能。
因此，虽然上述诊断优选由计算机来执行，但由于其处理负担相对较小，也可以由一般家庭中使用的个人计算机、智能手机等来执行。
[关于用于诊断犬癌症的生物标志物]
以下，对预期将其用作生物标志物的各诊断目的/用途，具体列出了在本发明的实施中提取的“特定microRNA”。
<用于5种癌症疾病的诊断的microRNA>
作为用于区分罹患包括口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤在内的5种癌症疾病中任一种疾病的犬与健康犬的有效microRNA，提取出以下的44个microRNA：
cfa-let-7c、cfa-miR-103、cfa-miR-10a、cfa-miR-122、cfa-miR-125a、cfa-miR-125b、cfa-miR-126、cfa-miR-130a、cfa-miR-144、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-186、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-19b、cfa-miR-22、cfa-miR-222、cfa-miR-223、cfa-miR-24、cfa-miR-26a、cfa-miR-27b、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-378、cfa-miR-383、cfa-miR-483、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-489、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-718、cfa-miR-874、cfa-miR-8794、cfa-miR-8798、cfa-miR-8843、cfa-miR-8859a、cfa-miR-8860、cfa-miR-8903、cfa-miR-8906、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d和cfa-miR-92b。各microRNA的频率和碱基序列如下所示。
[表1]
miRNA 频率 登录号 序列
cfa-let-7c 1 MIMAT0006669 ugagguaguagguuguaugguu
cfa-miR-103 2 MIMAT0006687 agcagcauuguacagggcuauga
cfa-miR-10a 3 MIMAT0006737 uacccuguagauccgaauuugu
cfa-miR-122 18 MIMAT0006619 uggagugugacaaugguguuug
cfa-miR-125a 20 MIMAT0006609 ucccugagacccuuuaaccugu
cfa-miR-125b 1 MIMAT0006670 ucccugagacccuaacuuguga
cfa-miR-126 20 MIMAT0006730 cauuauuacuuuugguacgcg
cfa-miR-130a 1 MIMAT0006631 cagugcaauguuaaaagggcau
cfa-miR-144 20 MIMAT0006734 uacaguauagaugauguacuag
cfa-miR-150 20 MIMAT0006602 ucucccaacccuuguaccagug
cfa-miR-155 15 MIMAT0006671 uuaaugcuaaucgugauaggggu
cfa-miR-186 18 MIMAT0006694 caaagaauucuccuuuugggcu
cfa-miR-193a 12 MIMAT0006735 ugggucuuugcgggcgagauga
cfa-miR-197 20 MIMAT0006698 uucaccaccuucuccacccagc
cfa-miR-199 15 MIMAT0006642 acaguagucugcacauugguu
cfa-miR-19b 6 MIMAT0006652 ugugcaaauccaugcaaaacug
cfa-miR-22 2 MIMAT0006733 aagcugccaguugaagaacugu
cfa-miR-222 1 MIMAT0009851 agcuacaucuggcuacugggu
cfa-miR-223 1 MIMAT0009852 ugucaguuugucaaauacccc
cfa-miR-24 20 MIMAT0006614 uggcucaguucagcaggaacagg
cfa-miR-26a 2 MIMAT0006595 uucaaguaauccaggauaggcu
cfa-miR-27b 1 MIMAT0006613 uucacaguggcuaaguucugc
cfa-miR-339 3 MIMAT0011134 ucccuguccuccaggagcu
cfa-miR-342 1 MIMAT0006709 ucucacacagaaaucgcacccgu
cfa-miR-378 10 MIMAT0006683 acuggacuuggagucagaaggc
cfa-miR-383 9 MIMAT0006629 agaucagaaggugauuguggcu
cfa-miR-483 20 MIMAT0009901 ucacuccuccccucccgucuu
cfa-miR-486-3p 2 MIMAT0032036 ucggggcagcucaguacaggau
cfa-miR-489 3 MIMAT0009860 gugacaucacauauacggcggc
cfa-miR-551b 1 MIMAT0009913 gcgacccauacuugguuucag
cfa-miR-660 3 MIMAT0006760 uacccauugcauaucggaguug
cfa-miR-718 3 MIMAT0009939 cuuccgccccgccgggcgccg
cfa-miR-874 2 MIMAT0009930 cugcccuggcccgagggaccga
cfa-miR-8794 1 MIMAT0034284 ugccccaucaucagccuccccagu
cfa-miR-8798 19 MIMAT0034288 ugcggucgaugcgaggccccgg
cfa-miR-8843 12 MIMAT0034336 uuguuuuuuucucucgccccgccug
cfa-miR-8859a 3 MIMAT0034354 uggaucggagccgggguccgga
cfa-miR-8860 2 MIMAT0034355 uacacuagguuuggaggaaaguggg
cfa-miR-8903 3 MIMAT0034414 ucuugggccccacccccggagacu
cfa-miR-8906 18 MIMAT0034434 uccucugcauuuggcugggacggca
cfa-miR-8907 20 MIMAT0034435 ugccgauucugaagugggaaga
cfa-miR-8908a-3p 16 MIMAT0034429 uaauuaggaccucccugagcggagu
cfa-miR-8908d 3 MIMAT0034420 auuagcgccugacugagugggguc
cfa-miR-92b 20 MIMAT0006703 uauugcacucgucccggccucc
上述microRNA为如下选出的前20个判别式中所包含的microRNA：分别从罹患包括口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤在内的5种癌症疾病中的任一种癌症疾病的犬和健康犬提取microRNA，根据microRNA的基因表达分析结果，利用LASSO回归分析进行统计分析处理，构建用于预测上述特定癌症疾病的模型判别式，作为包含上述5种癌症疾病特征性的和/或发生频率高的microRNA的判别式，选出前20个判别式。将上述判别式和表示它们的判别能力的AUC示于图4([健康VS全癌(5种)])。
因此，在本发明的实施中，新获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，对上述microRNA的至少1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种、18种、19种、20种、21种、22种、23种、24种、25种、26种、27种、28种、29种、30种、31种、32种、33种、34种、35种、36种、37种、38种、39种、40种、41种、42种、43种或全部44种求出其基因表达水平，将该基因表达水平作为标准，能够诊断作为上述诊断对象的犬罹患口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤中任一种疾病的风险程度。
上述“特定microRNA”在包括口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤在内的5种癌症疾病中，可包含与健康犬相比，基因表达水平特别高的microRNA和基因表达水平特别低的microRNA这两者。
因此，在诊断时，优选将对于选自由cfa-miR-483、cfa-miR-718、cfa-miR-8794、cfa-miR-8798、cfa-miR-8859a、cfa-miR-8908a-3p和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种microRNA具有高基因表达水平的犬诊断为罹患口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤的任一种疾病的风险高，和/或将对于选自由cfa-let-7c、cfa-miR-103、cfa-miR-10a、cfa-miR-125a、cfa-miR-125b、cfa-miR-126、cfa-miR-144、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-186、cfa-miR-199、cfa-miR-19b、cfa-miR-24、cfa-miR-26a、cfa-miR-383、cfa-miR-489、cfa-miR-8907和cfa-miR-8908d组成的组中的至少一种microRNA具有高基因表达水平的犬诊断为罹患口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤的任一种疾病的风险低。
需要说明的是，利用上述“特定microRNA”作为生物标志物来诊断犬癌症在癌症检查等中有助于全面调查是否罹患发生频率较高的特定癌症疾病，认为需求最高。
<用于诊断口腔内黑色素瘤的microRNA>
作为用于区分罹患口腔内黑色素瘤的犬和健康犬的有效生物标志物，能够举出以下所示的22个microRNA：cfa-miR-10a、cfa-miR-1185、cfa-miR-125a、cfa-miR-126、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-184、cfa-miR-186、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-19b、cfa-miR-24、cfa-miR-30c、cfa-miR-483、cfa-miR-489、cfa-miR-8798、cfa-miR-8816、cfa-miR-8875和cfa-miR-8908a-3p。
各microRNA的频率和碱基序列如下所示。
[表2]
miRNA 频率 登录号 序列
cfa-miR-10a 4 MIMAT0006737 uacccuguagauccgaauuugu
cfa-miR-1185 2 MIMAT0034383 auauacagggggagacucuuau
cfa-miR-125a 20 MIMAT0006609 ucccugagacccuuuaaccugu
cfa-miR-126 20 MIMAT0006730 cauuauuacuuuugguacgcg
cfa-miR-144 20 MIMAT0006734 uacaguauagaugauguacuag
cfa-miR-146a 2 MIMAT0006684 ugagaacugaauuccauggguu
cfa-miR-149 1 MIMAT0009884 ucuggcuccgugucuucacuccc
cfa-miR-150 2 MIMAT0006602 ucucccaacccuuguaccagug
cfa-miR-155 4 MIMAT0006671 uuaaugcuaaucgugauaggggu
cfa-miR-184 18 MIMAT0009842 uggacggagaacugauaagggu
cfa-miR-186 2 MIMAT0006694 caaagaauucuccuuuugggcu
cfa-miR-197 20 MIMAT0006698 uucaccaccuucuccacccagc
cfa-miR-199 16 MIMAT0006642 acaguagucugcacauugguu
cfa-miR-19b 1 MIMAT0006652 ugugcaaauccaugcaaaacug
cfa-miR-24 14 MIMAT0006614 uggcucaguucagcaggaacagg
cfa-miR-30c 1 MIMAT0006605 uguaaacauccuacacucucagcu
cfa-miR-483 1 MIMAT0009901 ucacuccuccccucccgucuu
cfa-miR-489 1 MIMAT0009860 gugacaucacauauacggcggc
cfa-miR-8798 18 MIMAT0034288 ugcggucgaugcgaggccccgg
cfa-miR-8816 4 MIMAT0034306 uagaauccaggucaugugacuccc
cfa-miR-8875 1 MIMAT0034375 ugcuguagcggaacccggggcgggc
cfa-miR-8908a-3p 1 MIMAT0034429 uaauuaggaccucccugagcggagu
上述microRNA为如下选出的前20个判别式中所包含的microRNA：基于分别从罹患口腔内黑色素瘤的犬和健康犬提取的microRNA的基因表达分析结果，利用LASSO回归分析进行统计分析处理，构建用于预测口腔内黑色素瘤的模型判别式，作为包含口腔内黑色素瘤特征性的和/或发生频率高的microRNA的判别式，选出前20个判别式。将上述判别式和表示它们的判别能力的AUC示于图4(“健康VS口腔内黑色素瘤”)。
因此，根据本发明，新获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，对上述microRNA的至少1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种、18种、19种、20种、21种或全部22种求出其基因表达水平，将该基因表达水平作为标准，能够诊断上述犬罹患口腔内黑色素瘤的风险程度。
上述“特定microRNA”在口腔内黑色素瘤中，可包含与健康犬相比，基因表达水平特别高的microRNA和基因表达水平特别低的microRNA这两者。
因此，在诊断时，优选将对于选自由cfa-miR-197、cfa-miR-483、cfa-miR-8798、cfa-miR-8875和cfa-miR-8908a-3p组成的组中的至少一种microRNA具有高基因表达水平的犬诊断为罹患口腔内黑色素瘤的风险高，和/或将对于选自由cfa-miR-10a、cfa-miR-125a、cfa-miR-126、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-155、cfa-miR-184、cfa-miR-186、cfa-miR-199、cfa-miR-19b、cfa-miR-24、cfa-miR-30c和cfa-miR-489组成的组中的至少一种microRNA具有高基因表达水平的犬诊断为罹患口腔内黑色素瘤的风险低。
需要说明的是，利用上述“特定microRNA”作为生物标志物来诊断犬癌症认为是有需求的，如除癌症检查等以外，监测口腔内黑色素瘤治疗后的复发等。
<用于诊断尿道上皮癌的microRNA>
作为用于区分罹患尿道上皮癌的犬和健康犬的有效生物标志物，能够举出以下所示的41个microRNA：
cfa-let-7f、cfa-miR-10a、cfa-miR-1249、cfa-miR-125a、cfa-miR-126、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-133b、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-1844、cfa-miR-186、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-19b、cfa-miR-2114、cfa-miR-24、cfa-miR-29b、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-361、cfa-miR-370、cfa-miR-425、cfa-miR-483、cfa-miR-494、cfa-miR-502、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-665、cfa-miR-718、cfa-miR-8798、cfa-miR-8824、cfa-miR-8832、cfa-miR-8834a、cfa-miR-8843、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8907和cfa-miR-8908a-3p。各microRNA的频率和碱基序列如下所示。
[表3]
miRNA 频率 登录号 序列
cfa-let-7f 1 MIMAT0006610 ugagguaguagauuguauaguu
cfa-miR-10a 1 MIMAT0006737 uacccuguagauccgaauuugu
cfa-miR-1249 1 MIMAT0034321 acgcccuucccccccuucuuca
cfa-miR-125a 15 MIMAT0006609 ucccugagacccuuuaaccugu
cfa-miR-126 12 MIMAT0006730 cauuauuacuuuugguacgcg
cfa-miR-1306 4 MIMAT0006661 ccaccuccccugcaaacgucc
cfa-miR-130a 1 MIMAT0006631 cagugcaauguuaaaagggcau
cfa-miR-133b 1 MIMAT0009835 uuugguccccuucaaccagcua
cfa-miR-144 20 MIMAT0006734 uacaguauagaugauguacuag
cfa-miR-146a 1 MIMAT0006684 ugagaacugaauuccauggguu
cfa-miR-149 1 MIMAT0009884 ucuggcuccgugucuucacuccc
cfa-miR-150 3 MIMAT0006602 ucucccaacccuuguaccagug
cfa-miR-155 4 MIMAT0006671 uuaaugcuaaucgugauaggggu
cfa-miR-1844 9 MIMAT0006740 aggacuacggacgggcugag
cfa-miR-186 19 MIMAT0006694 caaagaauucuccuuuugggcu
cfa-miR-193a 6 MIMAT0006735 ugggucuuugcgggcgagauga
cfa-miR-197 20 MIMAT0006698 uucaccaccuucuccacccagc
cfa-miR-19b 2 MIMAT0006652 ugugcaaauccaugcaaaacug
cfa-miR-2114 2 MIMAT0034427 uagucccuuccuugaaggaucggc
cfa-miR-24 20 MIMAT0006614 uggcucaguucagcaggaacagg
cfa-miR-29b 4 MIMAT0006625 uagcaccauuugaaaucaguguu
cfa-miR-339 2 MIMAT0011134 ucccuguccuccaggagcu
cfa-miR-342 1 MIMAT0006709 ucucacacagaaaucgcacccgu
cfa-miR-361 3 MIMAT0006751 uuaucagaaucuccagggguac
cfa-miR-370 17 MIMAT0009889 gccugcugggguggaaccuggu
cfa-miR-425 16 MIMAT0006639 aaugacacgaucacucccguuga
cfa-miR-483 8 MIMAT0009901 ucacuccuccccucccgucuu
cfa-miR-494 5 MIMAT0009905 ugaaacauacacgggaaaccuc
cfa-miR-502 1 MIMAT0006761 aaugcaccugggcaaggauuca
cfa-miR-551b 2 MIMAT0009913 gcgacccauacuugguuucag
cfa-miR-660 3 MIMAT0006760 uacccauugcauaucggaguug
cfa-miR-665 15 MIMAT0009934 accaggaggcuaaggccccu
cfa-miR-718 2 MIMAT0009939 cuuccgccccgccgggcgccg
cfa-miR-8798 1 MIMAT0034288 ugcggucgaugcgaggccccgg
cfa-miR-8824 1 MIMAT0034314 guuuccaucuccacccccggca
cfa-miR-8832 1 MIMAT0034325 uccagggguaggauugauuguggga
cfa-miR-8834a 1 MIMAT0034327 ugccgggccuggaggcuccgggg
cfa-miR-8843 4 MIMAT0034336 uuguuuuuuucucucgccccgccug
cfa-miR-8904b 1 MIMAT0034424 uaacagcaccugcgccccggggaga
cfa-miR-8907 20 MIMAT0034435 ugccgauucugaagugggaaga
cfa-miR-8908a-3p 3 MIMAT0034429 uaauuaggaccucccugagcggagu
上述microRNA为如下选出的前20个判别式中所包含的microRNA：基于分别从罹患尿道上皮癌的犬和健康犬提取的microRNA的基因表达分析结果，利用LASSO回归分析进行统计分析处理，由此构建用于预测尿道上皮癌的模型判别式，作为包含尿道上皮癌特征性的和/或发生频率高的microRNA的判别式，选出前20个判别式。将上述判别式和表示它们的判别能力的AUC示于图4(“健康VS尿道上皮癌”)。
因此，根据本发明，新获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因分析的结果，对于上述microRNA的至少1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种、18种、19种、20种、21种、22种、23种、24种、25种、26种、27种、28种、29种、30种、31种、32种、33种、34种、35种、36种、37种、38种、39种、40种或全部41种求出其基因表达水平，以该基因表达水平为标准，能够诊断上述犬患尿道上皮癌的风险程度。
上述“特定microRNA”在尿道上皮癌中，可包含与健康犬相比，基因表达水平特别高的microRNA和基因表达水平特别低的microRNA这两者。
因此，在上述诊断时，优选将对于选自由cfa-miR-483、cfa-miR-718和cfa-miR-8908a-3p组成的组中的至少一种microRNA具有高基因表达水平的犬诊断为患尿道上皮癌的风险高，和/或将对于选自由cfa-miR-125a、cfa-miR-126、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-186、cfa-miR-2114、cfa-miR-24、cfa-miR-29b、cfa-miR-8832和cfa-miR-8907组成的组中的至少一种microRNA具有高基因表达水平的犬诊断为患尿道上皮癌的风险低。
需要说明的是，利用上述“特定microRNA”作为生物标志物来诊断犬癌症认为是有需求的，如除癌症检查等以外，监测尿道上皮癌症治疗后的复发等。
<用于诊断恶性淋巴瘤的microRNA>
作为用于区分罹患恶性淋巴瘤的犬和健康犬的有效生物标志物，能够举出如下所示的24个microRNA：
cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-1249、cfa-miR-126、cfa-miR-1306、cfa-miR-144、cfa-miR-150、cfa-miR-184、cfa-miR-188、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-24、cfa-miR-342、cfa-miR-345、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-574、cfa-miR-8794、cfa-miR-8797、cfa-miR-8798、cfa-miR-8900、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8907和cfa-miR-8908d。各microRNA的频率和碱基序列如下所示。
[表4]
miRNA 频率 登录号 序列
cfa-miR-1185 4 MIMAT0034383 auauacagggggagacucuuau
cfa-miR-122 8 MIMAT0006619 uggagugugacaaugguguuug
cfa-miR-1249 7 MIMAT0034321 acgcccuucccccccuucuuca
cfa-miR-126 15 MIMAT0006730 cauuauuacuuuugguacgcg
cfa-miR-1306 2 MIMAT0006661 ccaccuccccugcaaacgucc
cfa-miR-144 20 MIMAT0006734 uacaguauagaugauguacuag
cfa-miR-150 2 MIMAT0006602 ucucccaacccuuguaccagug
cfa-miR-184 1 MIMAT0009842 uggacggagaacugauaagggu
cfa-miR-188 1 MIMAT0009880 caucccuugcaugguggagggu
cfa-miR-197 6 MIMAT0006698 uucaccaccuucuccacccagc
cfa-miR-199 18 MIMAT0006642 acaguagucugcacauugguu
cfa-miR-24 17 MIMAT0006614 uggcucaguucagcaggaacagg
cfa-miR-342 1 MIMAT0006709 ucucacacagaaaucgcacccgu
cfa-miR-345 2 MIMAT0006710 ccugaacuaggggucuggagg
cfa-miR-378 17 MIMAT0006683 acuggacuuggagucagaaggc
cfa-miR-425 2 MIMAT0006639 aaugacacgaucacucccguuga
cfa-miR-574 2 MIMAT0006673 cacgcucaugcacacacccaca
cfa-miR-8794 3 MIMAT0034284 ugccccaucaucagccuccccagu
cfa-miR-8797 11 MIMAT0034287 uugccaaggacugagagcucggg
cfa-miR-8798 9 MIMAT0034288 ugcggucgaugcgaggccccgg
cfa-miR-8900 5 MIMAT0034410 uaggacuuuaauggcuggagaga
cfa-miR-8904b 5 MIMAT0034424 uaacagcaccugcgccccggggaga
cfa-miR-8907 20 MIMAT0034435 ugccgauucugaagugggaaga
cfa-miR-8908d 8 MIMAT0034420 auuagcgccugacugagugggguc
上述microRNA为如下选出的前20个判别式中所包含的microRNA：基于分别从罹患恶性淋巴瘤的犬和健康犬提取的microRNA的基因表达分析结果，利用LASSO回归分析进行统计分析处理，由此构建用于预测恶性淋巴瘤的模型判别式，作为包含恶性淋巴瘤特征性的和/或发生频率高的microRNA的判别式，选出前20个判别式。将上述判别式和表示它们的判别能力的AUC示于图4(“健康VS恶性淋巴瘤”)。
因此，根据本发明，获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，对上述microRNA的至少1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种、18种、19种、20种、21种、22种、23种或全部24种求出其基因表达水平，以该基因表达水平为标准，能够诊断上述犬患恶性淋巴瘤的风险程度。
上述“特定microRNA”在恶性淋巴瘤中，可包含与健康犬相比，基因表达水平特别高的microRNA和基因表达水平特别低的microRNA这两者。
因此，在诊断时，优选将对于选自由cfa-miR-188、cfa-miR-342、cfa-miR-378、cfa-miR-8797、cfa-miR-8798和cfa-miR-8904b组成的组中的至少一种microRNA具有高基因表达水平的犬诊断为患恶性淋巴瘤的风险高，和/或将对于选自由cfa-miR-126、cfa-miR-1306、cfa-miR-144、cfa-miR-184、cfa-miR-199、cfa-miR-24、cfa-miR-345、cfa-miR-574、cfa-miR-8900、cfa-miR-8907和cfa-miR-8908d组成的组中的至少一种microRNA具有高基因表达水平的犬诊断为患恶性淋巴瘤的风险低。
需要说明的是，利用上述“特定microRNA”作为生物标志物来诊断犬癌症认为是有需求的，如除癌症检查等以外，监测恶性淋巴瘤治疗后的复发等。
<用于诊断肝细胞癌的microRNA>
作为用于区分罹患肝细胞癌的犬和健康犬的有效生物标志物，能够举出以下所示的28个microRNA：
cfa-let-7g、cfa-miR-10a、cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-125b、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-206、cfa-miR-22、cfa-miR-378、cfa-miR-383、cfa-miR-483、cfa-miR-665、cfa-miR-7、cfa-miR-718、cfa-miR-874、cfa-miR-8794、cfa-miR-8798、cfa-miR-8875、cfa-miR-8900、cfa-miR-8902、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b和cfa-miR-99a。各microRNA的频率和碱基序列如下所示。
[表5]
miRNA 频率 登录号 序列
cfa-let-7g 5 MIMAT0006637 ugagguaguaguuuguacaguu
cfa-miR-10a 19 MIMAT0006737 uacccuguagauccgaauuugu
cfa-miR-1185 5 MIMAT0034383 auauacagggggagacucuuau
cfa-miR-122 19 MIMAT0006619 uggagugugacaaugguguuug
cfa-miR-125b 2 MIMAT0006670 ucccugagacccuaacuuguga
cfa-miR-150 19 MIMAT0006602 ucucccaacccuuguaccagug
cfa-miR-155 1 MIMAT0006671 uuaaugcuaaucgugauaggggu
cfa-miR-197 4 MIMAT0006698 uucaccaccuucuccacccagc
cfa-miR-199 8 MIMAT0006642 acaguagucugcacauugguu
cfa-miR-206 17 MIMAT0006606 uggaauguaaggaagugugugg
cfa-miR-22 9 MIMAT0006733 aagcugccaguugaagaacugu
cfa-miR-378 13 MIMAT0006683 acuggacuuggagucagaaggc
cfa-miR-383 7 MIMAT0006629 agaucagaaggugauuguggcu
cfa-miR-483 11 MIMAT0009901 ucacuccuccccucccgucuu
cfa-miR-665 18 MIMAT0009934 accaggaggcuaaggccccu
cfa-miR-7 9 MIMAT0006634 uggaagacuagugauuuuguugu
cfa-miR-718 13 MIMAT0009939 cuuccgccccgccgggcgccg
cfa-miR-874 5 MIMAT0009930 cugcccuggcccgagggaccga
cfa-miR-8794 16 MIMAT0034284 ugccccaucaucagccuccccagu
cfa-miR-8798 5 MIMAT0034288 ugcggucgaugcgaggccccgg
cfa-miR-8875 11 MIMAT0034375 ugcuguagcggaacccggggcgggc
cfa-miR-8900 19 MIMAT0034410 uaggacuuuaauggcuggagaga
cfa-miR-8902 12 MIMAT0034412 cauccauuucuuucaccuggggaaa
cfa-miR-8907 20 MIMAT0034435 ugccgauucugaagugggaaga
cfa-miR-8908a-3p 20 MIMAT0034429 uaauuaggaccucccugagcggagu
cfa-miR-8908d 1 MIMAT0034420 auuagcgccugacugagugggguc
cfa-miR-92b 20 MIMAT0006703 uauugcacucgucccggccucc
cfa-miR-99a 1 MIMAT0006668 aacccguagauccgaucuugu
上述microRNA为如下选出的前20个判别式中所包含的microRNA：基于分别从罹患肝细胞癌的犬和健康犬提取的microRNA的基因表达分析结果，利用LASSO回归分析进行统计分析处理，由此构建用于预测肝细胞癌的模型判别式，作为包含肝细胞癌特征性的和/或发生频率高的microRNA的判别式，选出前20个判别式。将上述判别式和表示它们的判别能力的AUC示于图4(“健康VS肝细胞癌”)。
因此，在本发明的诊断工序中，新获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，对于上述microRNA的至少1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种、18种、19种、20种、21种、22种、23种或全部24种求出其基因表达水平，以该基因表达水平为标准，能够诊断患肝细胞癌的风险程度。
上述“特定microRNA”在肝细胞癌中，可包含与健康犬相比，基因表达水平特别高的microRNA和基因表达水平特别低的microRNA这两者。
因此，在诊断时，例如优选将对于选自由cfa-miR-122、cfa-miR-206、cfa-miR-378、cfa-miR-483、cfa-miR-665、cfa-miR-718、cfa-miR-8794、cfa-miR-8798、cfa-miR-8875、cfa-miR-8908a-3p和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种microRNA具有高基因表达水平的犬诊断为患肝细胞癌的风险高，和/或将对于选自由cfa-let-7g、cfa-miR-10a、cfa-miR-125b、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-199、cfa-miR-383、cfa-miR-7、cfa-miR-8900、cfa-miR-8902、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908d和cfa-miR-99a组成的组中的至少一种microRNA具有高基因表达水平的犬诊断为患肝细胞癌的风险低。
需要说明的是，利用上述“特定microRNA”作为生物标志物来诊断犬癌症认为是有需求的，如除癌症检查等以外，监测肝细胞癌症治疗后的复发等。
<用于诊断肥大细胞瘤的microRNA>
作为用于区分罹患肥大细胞瘤的犬和健康犬的有效生物标志物，能够举出以下所示的17个microRNA：
cfa-miR-10b、cfa-miR-1185、cfa-miR-125b、cfa-miR-126、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-222、cfa-miR-24、cfa-miR-26b、cfa-miR-8803、cfa-miR-8872、cfa-miR-8903、cfa-miR-8907和cfa-miR-92b。
各microRNA的频率和碱基序列如下所示。
[表6]
miRNA 频率 登录号 序列
cfa-miR-10b 1 MIMAT0009837 cccuguagaaccgaauuugugu
cfa-miR-1185 8 MIMAT0034383 auauacagggggagacucuuau
cfa-miR-125b 2 MIMAT0006670 ucccugagacccuaacuuguga
cfa-miR-126 1 MIMAT0006730 cauuauuacuuuugguacgcg
cfa-miR-149 20 MIMAT0009884 ucuggcuccgugucuucacuccc
cfa-miR-150 20 MIMAT0006602 ucucccaacccuuguaccagug
cfa-miR-155 11 MIMAT0006671 uuaaugcuaaucgugauaggggu
cfa-miR-197 3 MIMAT0006698 uucaccaccuucuccacccagc
cfa-miR-199 1 MIMAT0006642 acaguagucugcacauugguu
cfa-miR-222 8 MIMAT0009851 agcuacaucuggcuacugggu
cfa-miR-24 8 MIMAT0006614 uggcucaguucagcaggaacagg
cfa-miR-26b 1 MIMAT0006678 uucaaguaauucaggauagguu
cfa-miR-8803 5 MIMAT0034293 cucagccccugauucucuagc
cfa-miR-8872 6 MIMAT0034369 uucuggguuguggcguccgaggagc
cfa-miR-8903 2 MIMAT0034414 ucuugggccccacccccggagacu
cfa-miR-8907 17 MIMAT0034435 ugccgauucugaagugggaaga
cfa-miR-92b 20 MIMAT0006703 uauugcacucgucccggccucc
上述microRNA为如下选出的前20个判别式中所包含的microRNA：基于分别从罹患肥大细胞瘤的犬和健康犬提取的microRNA的基因表达分析结果，利用LASSO回归分析进行统计分析处理，由此构建用于预测肥大细胞瘤的模型判别式，作为包含肥大细胞瘤特征性的和/或发生频率高的microRNA的判别式，选出前20个判别式。将上述判别式和表示它们的判别能力的AUC示于图4(“健康VS肥大细胞瘤”)。
因此，根据本发明，新获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，对于上述microRNA的至少1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种或全部17种求出其基因表达水平，以该基因表达水平为标准，能够诊断患肥大细胞瘤的风险程度。
上述“特定microRNA”在肥大细胞瘤中，可包含与健康犬相比，基因表达水平特别高的microRNA和基因表达水平特别低的microRNA这两者。
因此，在诊断时，优选将对于选自由cfa-miR-8803、cfa-miR-8903和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种microRNA具有高基因表达水平的犬诊断为患肥大细胞瘤的风险高，和/或将对于选自由cfa-miR-126、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-199、cfa-miR-8872和cfa-miR-8907组成的组中的至少一种microRNA具有高基因表达水平的犬诊断为患肥大细胞瘤的风险低。
需要说明的是，利用上述“特定microRNA”来诊断犬癌症的方法认为是有需求的，如除癌症检查等以外，监测肥大细胞瘤治疗后的复发等。
<用于诊断口腔内黑色素瘤的microRNA(也包括与其他癌症疾病的区分)>
作为用于区分罹患口腔内黑色素瘤的犬与罹患其他癌症疾病的犬和健康犬的有效生物标志物，能够举出如下所示的35个microRNA：cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-126、cfa-miR-1271、cfa-miR-1306、cfa-miR-130b、cfa-miR-140、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-192、cfa-miR-197、cfa-miR-222、cfa-miR-29a、cfa-miR-29b、cfa-miR-30b、cfa-miR-370、cfa-miR-378、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-489、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-8803、cfa-miR-8816、cfa-miR-8824、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8859a、cfa-miR-8875、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908d和cfa-miR-92b。
各microRNA的频率和碱基序列如下所示。
[表7]
miRNA 频率 登录号 序列
cfa-miR-1185 2 MIMAT0034383 auauacagggggagacucuuau
cfa-miR-122 14 MIMAT0006619 uggagugugacaaugguguuug
cfa-miR-126 20 MIMAT0006730 cauuauuacuuuugguacgcg
cfa-miR-1271 1 MIMAT0006685 cuuggcaccuaguaagcacu
cfa-miR-1306 1 MIMAT0006661 ccaccuccccugcaaacgucc
cfa-miR-130b 12 MIMAT0006659 cagugcaaugaugaaagggcau
cfa-miR-140 6 MIMAT0006689 accacaggguagaaccacgga
cfa-miR-144 1 MIMAT0006734 uacaguauagaugauguacuag
cfa-miR-146a 13 MIMAT0006684 ugagaacugaauuccauggguu
cfa-miR-150 1 MIMAT0006602 ucucccaacccuuguaccagug
cfa-miR-155 1 MIMAT0006671 uuaaugcuaaucgugauaggggu
cfa-miR-192 1 MIMAT0006632 cugaccuaugaauugacagcc
cfa-miR-197 8 MIMAT0006698 uucaccaccuucuccacccagc
cfa-miR-222 17 MIMAT0009851 agcuacaucuggcuacugggu
cfa-miR-29a 3 MIMAT0006626 uagcaccaucugaaaucgguua
cfa-miR-29b 20 MIMAT0006625 uagcaccauuugaaaucaguguu
cfa-miR-30b 1 MIMAT0006617 uguaaacauccuacacucagcu
cfa-miR-370 5 MIMAT0009889 gccugcugggguggaaccuggu
cfa-miR-378 1 MIMAT0006683 acuggacuuggagucagaaggc
cfa-miR-486 3 MIMAT0011132 uccuguacugagcugccccga
cfa-miR-486-3p 3 MIMAT0032036 ucggggcagcucaguacaggau
cfa-miR-489 1 MIMAT0009860 gugacaucacauauacggcggc
cfa-miR-494 9 MIMAT0009905 ugaaacauacacgggaaaccuc
cfa-miR-532 13 MIMAT0006758 caugccuugaguguaggaccgu
cfa-miR-551b 1 MIMAT0009913 gcgacccauacuugguuucag
cfa-miR-660 8 MIMAT0006760 uacccauugcauaucggaguug
cfa-miR-8803 1 MIMAT0034293 cucagccccugauucucuagc
cfa-miR-8816 20 MIMAT0034306 uagaauccaggucaugugacuccc
cfa-miR-8824 1 MIMAT0034314 guuuccaucuccacccccggca
cfa-miR-8834b 3 MIMAT0034431 uggaugcucagucagcgggggugcu
cfa-miR-8859a 1 MIMAT0034354 uggaucggagccgggguccgga
cfa-miR-8875 5 MIMAT0034375 ugcuguagcggaacccggggcgggc
cfa-miR-8907 12 MIMAT0034435 ugccgauucugaagugggaaga
cfa-miR-8908d 19 MIMAT0034420 auuagcgccugacugagugggguc
cfa-miR-92b 5 MIMAT0006703 uauugcacucgucccggccucc
上述microRNA为如下选出的前20个判别式中所包含的microRNA：基于分别从罹患口腔内黑色素瘤的犬与罹患其他癌症疾病的犬和健康犬中提取的microRNA的基因表达分析结果，利用LASSO回归分析进行统计分析处理，由此构建用于预测口腔内黑色素瘤的模型判别式，作为包含口腔内黑色素瘤特征性的和/或发生频率高的microRNA的判别式，选出前20个判别式。将上述判别式和表示它们的判别能力的AUC示于图4(“口腔内黑色素瘤VS其他”)。
因此，根据本发明，新获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，对于上述microRNA的至少1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种、18种、19种、20种、21种、22种、23种、24种、25种、26种、27种、28种、29种、30种、31种、32种、33种、34种或全部35种求出其基因表达水平，以该基因表达水平为标准，能够诊断患口腔内黑色素瘤的风险程度。该诊断中，可以包括辨别患口腔内黑色素瘤的风险比患其他癌症疾病、例如尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤中任一种疾病的风险高还是低。
需要说明的是，利用上述“特定microRNA”作为生物标志物的犬癌症的诊断也可以辨别口腔内黑色素瘤与其他癌症疾病，因此认为虽然难度最高，但存在一定的需求。
<用于诊断尿道上皮癌的microRNA(也包括与其他癌症疾病的区分)>
作为用于区分罹患尿道上皮癌的犬与罹患其他癌症疾病的犬和健康犬的有效生物标志物，能够举出如下所示的43个microRNA：
cfa-let-7b、cfa-miR-107、cfa-miR-10b、cfa-miR-122、cfa-miR-125b、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-133b、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-181a、cfa-miR-185、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-19b、cfa-miR-23a、cfa-miR-29c、cfa-miR-345、cfa-miR-361、cfa-miR-370、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-8794、cfa-miR-8803、cfa-miR-8816、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8860、cfa-miR-8873a、cfa-miR-8891、cfa-miR-8903、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b、cfa-miR-93和cfa-miR-99a。各microRNA的频率和碱基序列如下所示。
[表8]
miRNA 频率 登录号 序列
cfa-let-7b 3 MIMAT0009836 ugagguaguagguugugugguu
cfa-miR-107 6 MIMAT0006666 agcagcauuguacagggcuau
cfa-miR-10b 2 MIMAT0009837 cccuguagaaccgaauuugugu
cfa-miR-122 17 MIMAT0006619 uggagugugacaaugguguuug
cfa-miR-125b 10 MIMAT0006670 ucccugagacccuaacuuguga
cfa-miR-1306 1 MIMAT0006661 ccaccuccccugcaaacgucc
cfa-miR-130a 3 MIMAT0006631 cagugcaauguuaaaagggcau
cfa-miR-133b 12 MIMAT0009835 uuugguccccuucaaccagcua
cfa-miR-144 1 MIMAT0006734 uacaguauagaugauguacuag
cfa-miR-146a 1 MIMAT0006684 ugagaacugaauuccauggguu
cfa-miR-149 19 MIMAT0009884 ucuggcuccgugucuucacuccc
cfa-miR-181a 1 MIMAT0006707 aacauucaacgcugucggugag
cfa-miR-185 2 MIMAT0006660 uggagagaaaggcaguuccuga
cfa-miR-193a 2 MIMAT0006735 ugggucuuugcgggcgagauga
cfa-miR-197 19 MIMAT0006698 uucaccaccuucuccacccagc
cfa-miR-19b 9 MIMAT0006652 ugugcaaauccaugcaaaacug
cfa-miR-23a 16 MIMAT0006640 aucacauugccagggauuu
cfa-miR-29c 2 MIMAT0006705 uagcaccauuugaaaucgguua
cfa-miR-345 2 MIMAT0006710 ccugaacuaggggucuggagg
cfa-miR-361 7 MIMAT0006751 uuaucagaaucuccagggguac
cfa-miR-370 20 MIMAT0009889 gccugcugggguggaaccuggu
cfa-miR-378 20 MIMAT0006683 acuggacuuggagucagaaggc
cfa-miR-425 11 MIMAT0006639 aaugacacgaucacucccguuga
cfa-miR-486 9 MIMAT0011132 uccuguacugagcugccccga
cfa-miR-486-3p 13 MIMAT0032036 ucggggcagcucaguacaggau
cfa-miR-494 3 MIMAT0009905 ugaaacauacacgggaaaccuc
cfa-miR-532 12 MIMAT0006758 caugccuugaguguaggaccgu
cfa-miR-551b 2 MIMAT0009913 gcgacccauacuugguuucag
cfa-miR-660 1 MIMAT0006760 uacccauugcauaucggaguug
cfa-miR-8794 1 MIMAT0034284 ugccccaucaucagccuccccagu
cfa-miR-8803 1 MIMAT0034293 cucagccccugauucucuagc
cfa-miR-8816 3 MIMAT0034306 uagaauccaggucaugugacuccc
cfa-miR-8834b 20 MIMAT0034431 uggaugcucagucagcgggggugcu
cfa-miR-8860 1 MIMAT0034355 uacacuagguuuggaggaaaguggg
cfa-miR-8873a 1 MIMAT0034373 uccugaaggcagugggguguagc
cfa-miR-8891 2 MIMAT0034398 uacccaguuucggggucgccuggu
cfa-miR-8903 12 MIMAT0034414 ucuugggccccacccccggagacu
cfa-miR-8904b 12 MIMAT0034424 uaacagcaccugcgccccggggaga
cfa-miR-8907 20 MIMAT0034435 ugccgauucugaagugggaaga
cfa-miR-8908d 3 MIMAT0034420 auuagcgccugacugagugggguc
cfa-miR-92b 1 MIMAT0006703 uauugcacucgucccggccucc
cfa-miR-93 1 MIMAT0006696 caaagugcuguucgugcagguag
cfa-miR-99a 5 MIMAT0006668 aacccguagauccgaucuugu
上述microRNA为如下选出的前20个判别式中所包含的microRNA：基于分别从罹患尿道上皮癌的犬、罹患其他癌症疾病的犬和健康犬中提取的microRNA的基因表达分析结果，利用LASSO回归分析进行统计分析处理，由此构建用于预测尿道上皮癌的模型判别式，作为包含尿道上皮癌特征性的和/或发生频率高的microRNA的判别式，选出前20个判别式。将上述判别式和表示它们的判别能力的AUC示于图4(“尿道上皮癌VS其他”)。
因此，根据本发明，新获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，对于上述microRNA的至少1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种、18种、19种、20种、21种、22种、23种、24种、25种、26种、27种、28种、29种、30种、31种、32种、33种、34种、35种、36种、37种、38种、39种、40种、41种、42种或全部43种求出其基因表达水平，以该基因表达水平为标准，能够诊断患尿道上皮癌的风险程度。该诊断中，可以包括辨别患尿道上皮癌的风险比患其他癌症疾病、例如口腔内黑色素瘤、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤中任一种疾病的风险高还是低。
利用上述“特定microRNA”作为生物标志物的犬癌症的诊断也可以辨别尿道上皮癌与其他癌症疾病，因此认为虽然难度最大，但存在一定的需求。
<用于诊断恶性淋巴瘤的microRNA(也包括与其他癌症疾病的区分)>
作为用于区分罹患恶性淋巴瘤的犬与罹患其他癌症疾病的犬和健康犬的有效生物标志物，能够举出如下所示的42个microRNA：
cfa-let-7f、cfa-miR-122、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-140、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-151、cfa-miR-15a、cfa-miR-181a、cfa-miR-1844、cfa-miR-188、cfa-miR-192、cfa-miR-193a、cfa-miR-21、cfa-miR-22、cfa-miR-23b、cfa-miR-24、cfa-miR-26a、cfa-miR-26b、cfa-miR-27b、cfa-miR-301a、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-345、cfa-miR-378、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-551b、cfa-miR-574、cfa-miR-631、cfa-miR-8794、cfa-miR-8803、cfa-miR-8809、cfa-miR-8836、cfa-miR-8843、cfa-miR-8863、cfa-miR-8872、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8906、cfa-miR-8907和cfa-miR-8908d。各microRNA的频率和碱基序列如下所示。
[表9]
miRNA 频率 登录号 序列
cfa-let-7f 1 MIMAT0006610 ugagguaguagauuguauaguu
cfa-miR-122 4 MIMAT0006619 uggagugugacaaugguguuug
cfa-miR-1306 7 MIMAT0006661 ccaccuccccugcaaacgucc
cfa-miR-130a 11 MIMAT0006631 cagugcaauguuaaaagggcau
cfa-miR-140 2 MIMAT0006689 accacaggguagaaccacgga
cfa-miR-144 15 MIMAT0006734 uacaguauagaugauguacuag
cfa-miR-146a 4 MIMAT0006684 ugagaacugaauuccauggguu
cfa-miR-151 17 MIMAT0006615 ucgaggagcucacagucuagu
cfa-miR-15a 2 MIMAT0006647 uagcagcacauaaugguuugu
cfa-miR-181a 1 MIMAT0006707 aacauucaacgcugucggugag
cfa-miR-1844 11 MIMAT0006740 aggacuacggacgggcugag
cfa-miR-188 1 MIMAT0009880 caucccuugcaugguggagggu
cfa-miR-192 1 MIMAT0006632 cugaccuaugaauugacagcc
cfa-miR-193a 20 MIMAT0006735 ugggucuuugcgggcgagauga
cfa-miR-21 3 MIMAT0006741 uagcuuaucagacugauguuga
cfa-miR-22 1 MIMAT0006733 aagcugccaguugaagaacugu
cfa-miR-23b 10 MIMAT0006612 aucacauugccagggauua
cfa-miR-24 6 MIMAT0006614 uggcucaguucagcaggaacagg
cfa-miR-26a 1 MIMAT0006595 uucaaguaauccaggauaggcu
cfa-miR-26b 1 MIMAT0006678 uucaaguaauucaggauagguu
cfa-miR-27b 1 MIMAT0006613 uucacaguggcuaaguucugc
cfa-miR-301a 1 MIMAT0009853 cagugcaauaguauugucaaagc
cfa-miR-339 4 MIMAT0011134 ucccuguccuccaggagcu
cfa-miR-342 13 MIMAT0006709 ucucacacagaaaucgcacccgu
cfa-miR-345 2 MIMAT0006710 ccugaacuaggggucuggagg
cfa-miR-378 20 MIMAT0006683 acuggacuuggagucagaaggc
cfa-miR-486 6 MIMAT0011132 uccuguacugagcugccccga
cfa-miR-486-3p 8 MIMAT0032036 ucggggcagcucaguacaggau
cfa-miR-551b 3 MIMAT0009913 gcgacccauacuugguuucag
cfa-miR-574 10 MIMAT0006673 cacgcucaugcacacacccaca
cfa-miR-631 11 MIMAT0009922 gaccuggcccagaccucagc
cfa-miR-8794 19 MIMAT0034284 ugccccaucaucagccuccccagu
cfa-miR-8803 1 MIMAT0034293 cucagccccugauucucuagc
cfa-miR-8809 6 MIMAT0034299 ucauuggcugagcccggaaccgggg
cfa-miR-8836 3 MIMAT0034329 aggaaaggagaagggccaca
cfa-miR-8843 13 MIMAT0034336 uuguuuuuuucucucgccccgccug
cfa-miR-8863 7 MIMAT0034360 uccagaccaccugggaguuggagc
cfa-miR-8872 1 MIMAT0034369 uucuggguuguggcguccgaggagc
cfa-miR-8904b 14 MIMAT0034424 uaacagcaccugcgccccggggaga
cfa-miR-8906 3 MIMAT0034434 uccucugcauuuggcugggacggca
cfa-miR-8907 4 MIMAT0034435 ugccgauucugaagugggaaga
cfa-miR-8908d 11 MIMAT0034420 auuagcgccugacugagugggguc
上述microRNA为如下选出的前20个判别式中所包含的microRNA：基于分别从罹患恶性淋巴瘤的犬、罹患其他癌症疾病的犬和健康犬提取的microRNA的基因表达分析结果，利用LASSO回归分析进行统计分析处理，由此构建用于预测恶性淋巴瘤的模型判别式，作为包含恶性淋巴瘤特征性的和/或发生频率高的microRNA的判别式，选出前20个判别式。将上述判别式和表示它们的判别能力的AUC示于图4(“恶性淋巴瘤VS其他”)。
因此，根据本发明，新获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，对于上述microRNA的至少1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种、18种、19种、20种、21种、22种、23种、24种、25种、26种、27种、28种、29种、30种、31种、32种、33种、34种、35种、36种、37种、38种、39种、40种、41种或全部42种求出其基因表达水平，以该基因表达水平为标准，能够诊断患恶性淋巴瘤的风险程度。该诊断中，可以包括辨别患恶性淋巴瘤的风险比患其他癌症疾病、例如口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、肝细胞癌和肥大细胞瘤任一种疾病的风险高还是低。
需要说明的是，利用上述“特定microRNA”作为生物标志物的犬癌症的诊断也可以辨别恶性淋巴瘤与其他癌症疾病，因此认为虽然难度最高，但存在一定的需求。
<用于诊断肝细胞癌的microRNA(也包括与其他癌症疾病的区分)>
作为用于区分罹患肝细胞癌的犬与罹患其他癌症疾病的犬和健康犬的有效生物标志物，能够举出以下所示的40个microRNA：
cfa-let-7b、cfa-let-7c、cfa-let-7f、cfa-let-7g、cfa-miR-10b、cfa-miR-122、cfa-miR-1249、cfa-miR-132、cfa-miR-134、cfa-miR-146a、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-16、cfa-miR-206、cfa-miR-22、cfa-miR-223、cfa-miR-29a、cfa-miR-30d、cfa-miR-331、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-483、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-574、cfa-miR-8794、cfa-miR-8815、cfa-miR-8824、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8836、cfa-miR-8843、cfa-miR-8860、cfa-miR-8892、cfa-miR-8900、cfa-miR-8903、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b和cfa-miR-99a。各microRNA的频率和碱基序列如下所示。
[表10]
miRNA 频率 登录号 序列
cfa-let-7b 1 MIMAT0009836 ugagguaguagguugugugguu
cfa-let-7c 2 MIMAT0006669 ugagguaguagguuguaugguu
cfa-let-7f 10 MIMAT0006610 ugagguaguagauuguauaguu
cfa-let-7g 1 MIMAT0006637 ugagguaguaguuuguacaguu
cfa-miR-10b 2 MIMAT0009837 cccuguagaaccgaauuugugu
cfa-miR-122 20 MIMAT0006619 uggagugugacaaugguguuug
cfa-miR-1249 2 MIMAT0034321 acgcccuucccccccuucuuca
cfa-miR-132 6 MIMAT0006732 uaacagucuacagccauggucgc
cfa-miR-134 3 MIMAT0009883 ugugacugguugaccagagggg
cfa-miR-146a 4 MIMAT0006684 ugagaacugaauuccauggguu
cfa-miR-150 20 MIMAT0006602 ucucccaacccuuguaccagug
cfa-miR-155 1 MIMAT0006671 uuaaugcuaaucgugauaggggu
cfa-miR-16 1 MIMAT0006648 uagcagcacguaaauauuggcg
cfa-miR-206 20 MIMAT0006606 uggaauguaaggaagugugugg
cfa-miR-22 19 MIMAT0006733 aagcugccaguugaagaacugu
cfa-miR-223 1 MIMAT0009852 ugucaguuugucaaauacccc
cfa-miR-29a 2 MIMAT0006626 uagcaccaucugaaaucgguua
cfa-miR-30d 3 MIMAT0006616 uguaaacauccccgacuggaagcu
cfa-miR-331 1 MIMAT0009895 gccccugggccuauccuagaa
cfa-miR-378 3 MIMAT0006683 acuggacuuggagucagaaggc
cfa-miR-425 1 MIMAT0006639 aaugacacgaucacucccguuga
cfa-miR-483 20 MIMAT0009901 ucacuccuccccucccgucuu
cfa-miR-486-3p 1 MIMAT0032036 ucggggcagcucaguacaggau
cfa-miR-494 3 MIMAT0009905 ugaaacauacacgggaaaccuc
cfa-miR-532 9 MIMAT0006758 caugccuugaguguaggaccgu
cfa-miR-574 4 MIMAT0006673 cacgcucaugcacacacccaca
cfa-miR-8794 10 MIMAT0034284 ugccccaucaucagccuccccagu
cfa-miR-8815 2 MIMAT0034305 ugccaguggccugcgggggacgg
cfa-miR-8824 5 MIMAT0034314 guuuccaucuccacccccggca
cfa-miR-8834b 9 MIMAT0034431 uggaugcucagucagcgggggugcu
cfa-miR-8836 1 MIMAT0034329 aggaaaggagaagggccaca
cfa-miR-8843 1 MIMAT0034336 uuguuuuuuucucucgccccgccug
cfa-miR-8860 1 MIMAT0034355 uacacuagguuuggaggaaaguggg
cfa-miR-8892 1 MIMAT0034399 uagucuguagccccggcccccgaau
cfa-miR-8900 5 MIMAT0034410 uaggacuuuaauggcuggagaga
cfa-miR-8903 1 MIMAT0034414 ucuugggccccacccccggagacu
cfa-miR-8908a-3p 17 MIMAT0034429 uaauuaggaccucccugagcggagu
cfa-miR-8908d 6 MIMAT0034420 auuagcgccugacugagugggguc
cfa-miR-92b 18 MIMAT0006703 uauugcacucgucccggccucc
cfa-miR-99a 1 MIMAT0006668 aacccguagauccgaucuugu
上述microRNA为如下选出的前20个判别式中所包含的microRNA：基于分别从罹患肝细胞癌的犬、罹患其他癌症疾病的犬和健康犬提取的microRNA的基因表达分析结果，利用LASSO回归分析进行统计分析处理，由此构建用于预测肝细胞癌的模型判别式，作为包含肝细胞癌特征性的和/或发生频率高的microRNA的判别式，选出前20个判别式。将上述判别式和表示它们的判别能力的AUC示于图4(“肝细胞癌VS其他”)。
因此，根据本发明，新获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，对于上述microRNA的至少1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种、18种、19种、20种、21种、22种、23种、24种、25种、26种、27种、28种、29种、30种、31种、32种、33种、34种、35种、36种、37种、38种、39种或全部40种求出其基因表达水平，以该基因表达水平为标准，能够诊断患肝细胞癌的风险程度。在该诊断中也包括辨别患肝细胞癌的风险比患其他癌症疾病、例如口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤和肥大细胞瘤中任一种疾病的风险高还是低。
需要说明的是，利用上述“特定microRNA”作为生物标志物的犬癌症的诊断也可以辨别肝细胞癌与其他癌症疾病，因此认为虽然难度最高，但存在一定的需求。
<用于诊断肥大细胞瘤的microRNA(也包括与其他癌症疾病的区分)>
作为用于区分罹患肥大细胞瘤的犬与罹患其他癌症疾病的犬和健康犬的有效生物标志物，能够举出以下所示的29个microRNA：
cfa-let-7c、cfa-let-7f、cfa-miR-10a、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-144、cfa-miR-149、cfa-miR-186、cfa-miR-188、cfa-miR-18a、cfa-miR-191、cfa-miR-221、cfa-miR-223、cfa-miR-301a、cfa-miR-30c、cfa-miR-342、cfa-miR-370、cfa-miR-451、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-551b、cfa-miR-574、cfa-miR-631、cfa-miR-8809、cfa-miR-8815、cfa-miR-8816、cfa-miR-8834a、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8903和cfa-miR-92b。各microRNA的频率和碱基序列如下所示。
[表11]
miRNA 频率 登录号 序列
cfa-let-7c 1 MIMAT0006669 ugagguaguagguuguaugguu
cfa-let-7f 9 MIMAT0006610 ugagguaguagauuguauaguu
cfa-miR-10a 1 MIMAT0006737 uacccuguagauccgaauuugu
cfa-miR-1306 9 MIMAT0006661 ccaccuccccugcaaacgucc
cfa-miR-130a 2 MIMAT0006631 cagugcaauguuaaaagggcau
cfa-miR-144 13 MIMAT0006734 uacaguauagaugauguacuag
cfa-miR-149 1 MIMAT0009884 ucuggcuccgugucuucacuccc
cfa-miR-186 1 MIMAT0006694 caaagaauucuccuuuugggcu
cfa-miR-188 9 MIMAT0009880 caucccuugcaugguggagggu
cfa-miR-18a 1 MIMAT0009832 uaaggugcaucuagugcagaua
cfa-miR-191 1 MIMAT0006638 caacggaaucccaaaagcagcu
cfa-miR-221 4 MIMAT0006757 agcuacauugucugcuggguuu
cfa-miR-223 1 MIMAT0009852 ugucaguuugucaaauacccc
cfa-miR-301a 9 MIMAT0009853 cagugcaauaguauugucaaagc
cfa-miR-30c 1 MIMAT0006605 uguaaacauccuacacucucagcu
cfa-miR-342 7 MIMAT0006709 ucucacacagaaaucgcacccgu
cfa-miR-370 1 MIMAT0009889 gccugcugggguggaaccuggu
cfa-miR-451 1 MIMAT0009870 aaaccguuaccauuacugaguu
cfa-miR-486-3p 2 MIMAT0032036 ucggggcagcucaguacaggau
cfa-miR-551b 1 MIMAT0009913 gcgacccauacuugguuucag
cfa-miR-574 5 MIMAT0006673 cacgcucaugcacacacccaca
cfa-miR-631 1 MIMAT0009922 gaccuggcccagaccucagc
cfa-miR-8809 18 MIMAT0034299 ucauuggcugagcccggaaccgggg
cfa-miR-8815 14 MIMAT0034305 ugccaguggccugcgggggacgg
cfa-miR-8816 12 MIMAT0034306 uagaauccaggucaugugacuccc
cfa-miR-8834a 18 MIMAT0034327 ugccgggccuggaggcuccgggg
cfa-miR-8834b 2 MIMAT0034431 uggaugcucagucagcgggggugcu
cfa-miR-8903 12 MIMAT0034414 ucuugggccccacccccggagacu
cfa-miR-92b 20 MIMAT0006703 uauugcacucgucccggccucc
上述microRNA为如下选出的前20个判别式中所包含的microRNA：基于分别从罹患肥大细胞瘤的犬、罹患其他癌症疾病的犬和健康犬提取的microRNA的基因表达分析结果，利用LASSO回归分析进行统计分析处理，由此构建用于预测肥大细胞瘤的模型判别式，作为包含肥大细胞瘤特征性的和/或发生频率高的microRNA的判别式，选出前20个判别式。将上述判别式和表示它们的判别能力的AUC示于图4(“肥大细胞瘤VS其他”)。
因此，根据本发明，新获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，对于上述microRNA的至少1种、2种、3种、4种、5种、6种、7种、8种、9种、10种、11种、12种、13种、14种、15种、16种、17种、18种、19种、20种、21种、22种、23种、24种、25种、26种、27种、28种或全部29种求出其基因表达水平，以该基因表达水平为标准，能够诊断患肥大细胞瘤的风险程度。该诊断中，可以包括辨别患肥大细胞瘤的风险比患其他癌症疾病、例如口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤和肝细胞癌任一种疾病的风险高还是低。
需要说明的是，利用上述“特定microRNA”作为生物标志物的犬癌症的诊断可以辨别肥大细胞瘤与其他癌症疾病，因此认为虽然难度最高，但存在一定需求。
实施例
以下，通过实施例等，更具体地说明本发明，但并不限于此。
1.血清样品的制备
将从(A)40只健康犬、(B)40只罹患口腔内黑色素瘤的犬、(C)40只罹患尿道上皮癌的犬、(D)40只罹患恶性淋巴瘤的犬、(E)31只罹患肝细胞癌的犬和(F)33只罹患肥大细胞瘤的犬共224只个体中采集的血液置于采血管中，在室温静置30分钟，使血液凝固。确认凝固后，用刮刀等工具将血块从管壁上剥离，在离心条件：1,500×g/30分钟、旋转半径12cm、3,500rpm下，通过离心进行血清分离。将上清血清分别注入冷冻管(Eppendorf社：DNA LoBindTubes#0030 108.051)各0.5mL，迅速在-80℃下冷冻保存。
2.从血清中提取microRNA
按照以下顺序，从上述血清中提取microRNA：
(1)在2.0mL管(Eppendorf社：DNA LoBind Tubes#0030 120.094)中注入200μl的血清。
(2)加入1mL(血清量的5倍)的QIAzol裂解试剂(Lysis Reagent)(QIAGEN社：RNaseMini Kit#5546994)，涡旋后，静置5分钟。
(3)加入200μl的氯仿，涡旋15秒。
(4)静置2分钟后，在冷却至4℃的离心机中进行12,000×g/15分钟的离心分离。
(5)将600μl上清液转移到新的2.0mL管中，向其中加入900μL的100％乙醇并混悬。
(6)将(5)中混合的500μL溶液放入设置在收集管中的RNase Mini离心柱(QIAGEN社：RNase Mini Kit#5546994)中，用回到室温的离心机，以8,000×g/15秒进一步进行离心分离。
(7)去除柱洗脱液。
(8)将(5)中混合的溶液与(6)同样地进行离心，将剩余的溶液全部加入离心柱中。
(9)向柱中添加700μl的RWT溶液，以8,000×g/15秒进行离心分离。
(10)向柱中添加500μl的RPE溶液，以8,000×g/15秒进行离心分离。
(11)再重复一次(10)。
(12)将离心柱置于新的收集管中，以12,000×g离心分离2分钟。
(13)将离心柱置于新的1.5mL管中，加入30～50μL的RNase H2O，静置1分钟。
(14)将离心柱以8,000×g离心分离15秒，洗脱含RNA的溶液。
(15)回收含RNA的溶液(柱洗脱液)，加入同一柱中静置1分钟。
(16)将离心柱以8,000×g离心分离1分钟，回收RNA。
3.回收的RNA的测定
使用Agilent RNA 6000试剂盒(pico kit)(Aligent Tech#5067-1513)，所附的凝胶用旋转过滤器过滤。对于所附的梯状标志物(ladder marker)，预先在70℃进行10分钟的热变性处理。对于测定对象的RNA，同样也在70℃进行2分钟的热变性处理。在65μL上述过滤的凝胶中加入1μL RNA Dye，激烈振荡后，以13,000×g/10分钟在室温进行离心分离。将样片(chip)放置在专用的样品架上，注入凝胶后，按照产品说明书依次注入条件溶液、荧光标志物、梯状标志物。最后，加入样片的样品用孔中，用涡旋混合器混合，用Agilent2100生物分析仪对测定对象的RNA进行测定。
4.微阵列分析
接下来，为了检测所得到的microRNA的表达量，按以下顺序进行微阵列分析。
(1)聚类处理
以注册为犬microRNA的453个已知的microRNA为基础，对整个样品进行分层聚类处理，比较各样品的相似度，将表达值相近的样品配置为相近。热图图像显示了microRNA的基因表达量的高低，色调越浅表示基因表达量越低，色调越深表示基因表达量越高。需要说明的是，上述聚类处理采用了曼哈顿距离，其强调表达基因的多少和表达量的差异。
(2)主成分分析
进而，为了排除表达趋势显著不同的样品。对所有224个样品进行了主成分分析(PCA)。整个样品的PCA结果中，第1主成分为30.5％，第2主成分为9.48％，第3主成分为5.88％。剔除与其他样品距离过远的15个样品，其余209个样本用于后续分析。
(3)组间的表达量比较
在209个样品中检测到有表达的是453个已知microRNA之中的121个。因此，在罹患特定癌症疾病的犬与健康犬的组之间，进而在罹患特定癌症疾病的犬与罹患其他癌症疾病的犬和健康犬的组之间，通过微阵列分析，比较了上述121个microRNA的表达量。得到在罹患特定癌症疾病的犬中其表达上调的microRNA和相反其表达下降的microRNA等各个microRNA的基因表达分析结果。将该结果示于图1。
5.模型判别式的创建
根据上述microRNA的基因表达分析结果，在各个待辨别组间进行基于LASSO回归分析的解析，导出模型判别式。根据诊断目的，上述判别式基于以下三种模式创建。
(1)模式A
选定可辨别健康与特定癌症疾病的特定microRNA。利用这样的microRNA进行的诊断认为是有需求的，如监测特定癌症治疗后的复发等。
(2)模式B
选定可辨别健康与发生频率较高的5种癌症疾病的特定microRNA。利用这样的microRNA进行的诊断在癌症检查等中有助于全面调查是否罹患发生频率较高的5种癌症疾病，认为需求最高。
(3)模式C
选定可辨别特定癌症疾病与其他癌症疾病和健康个体的特定microRNA。利用这样的microRNA进行的诊断不仅可将特定癌症疾病与健康个体区分开，还可以将特定癌症与难以辨别的其他癌症区分开，认为虽然难度最高，但存在一定需求。
LASSO回归分析具体按照以下顺序进行。
(1)以学习组:验证组＝8:2作为数据集，建立表示组间特征性microRNA表达的计算式。
(2)利用学习组的数据进行10次交叉验证，创建模型。
(3)使用验证组的数据计算出模型的AUC、灵敏度、特异性、临界值等评估值。
(4)将基于模型的计算重复20次，制作绘制了灵敏度和特异性的ROC曲线，计算出该ROC曲线下的面积“AUC”。
(5)按照"AUC"从大到小的顺序进行分类，选出前20个判别式。
将表示在上述LASSO回归分析中创建的判别式的ROC曲线和AUC的图示于图2和图3。图2和图3分别将纵轴设为灵敏度，将横轴设为特异性，对其各诊断目的/用途分别选出一个判别式，并作为典型例示出。与ROC曲线下的面积相对应的“AUC”越接近“1”，表示判别能力越高，一般在“0.7”以上时评价为有判别能力。在图2所示的与上述模式A和模式B对应的组的判别式中，可知在任何组间，其多数“AUC”达到1.00，表示判别能力极高。
另一方面，被认为是难以判别的图3的与模式C对应的判别式中，“AUC”的值随着提取的microRNA的数量增加而稍有下降，但其大部分依然显示超过0.9的高“AUC”，表明在用作生物标志物时显示出充分的判别能力。
这些结果表明，通过本发明的实施而提取的特定microRNA对“特定癌症疾病”显示出高的判别能力，因此可用作犬癌症的诊断中的生物标志物。
产业上的可利用性
本发明的犬癌症的诊断方法可用于犬癌症的早期诊断和早期治疗。

Claims (29)

1.一种犬癌症的诊断方法，其包括诊断工序，在该诊断工序中，获得从诊断对象、即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，利用该结果求出对特定microRNA的基因表达水平，将该基因表达水平作为诊断标准，诊断该诊断对象、即犬罹患特定癌症疾病的风险程度，所述诊断方法的特征在于，所述特定microRNA为基于从犬体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，在罹患所述特定癌症疾病的犬与健康犬之间的基因表达水平上观察到显著差异的microRNA。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，在所述诊断工序之前，进一步包括下述提取工序：根据使用统计分析处理创建的判别式，提取如下microRNA作为特定microRNA，该microRNA基于从犬体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，在罹患特定癌症疾病的犬与健康犬之间的基因表达水平上观察到显著差异。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述特定癌症疾病选自由口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤组成的组。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为包括口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤在内的5种癌症疾病，
所述特定microRNA为选自由cfa-let-7c、cfa-miR-103、cfa-miR-10a、cfa-miR-122、cfa-miR-125a、cfa-miR-125b、cfa-miR-126、cfa-miR-130a、cfa-miR-144、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-186、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-19b、cfa-miR-22、cfa-miR-222、cfa-miR-223、cfa-miR-24、cfa-miR-26a、cfa-miR-27b、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-378、cfa-miR-383、cfa-miR-483、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-489、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-718、cfa-miR-874、cfa-miR-8794、cfa-miR-8798、cfa-miR-8843、cfa-miR-8859a、cfa-miR-8860、cfa-miR-8903、cfa-miR-8906、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为口腔内黑色素瘤，
所述特定microRNA为选自由cfa-miR-10a、cfa-miR-1185、cfa-miR-125a、cfa-miR-126、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-184、cfa-miR-186、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-19b、cfa-miR-24、cfa-miR-30c、cfa-miR-483、cfa-miR-489、cfa-miR-8798、cfa-miR-8816、cfa-miR-8875和cfa-miR-8908a-3p组成的组中的至少一种。
6.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为尿道上皮癌，
所述特定microRNA为选自由cfa-let-7f、cfa-miR-10a、cfa-miR-1249、cfa-miR-125a、cfa-miR-126、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-133b、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-1844、cfa-miR-186、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-19b、cfa-miR-2114、cfa-miR-24、cfa-miR-29b、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-361、cfa-miR-370、cfa-miR-425、cfa-miR-483、cfa-miR-494、cfa-miR-502、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-665、cfa-miR-718、cfa-miR-8798、cfa-miR-8824、cfa-miR-8832、cfa-miR-8834a、cfa-miR-8843、cfa-miR-8904b和cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p组成的组中的至少一种。
7.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为恶性淋巴瘤，
所述特定microRNA为选自由cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-1249、cfa-miR-126、cfa-miR-1306、cfa-miR-144、cfa-miR-150、cfa-miR-184、cfa-miR-188、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-24、cfa-miR-342、cfa-miR-345、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-574、cfa-miR-8794、cfa-miR-8797、cfa-miR-8798、cfa-miR-8900、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8907和cfa-miR-8908d组成的组中的至少一种。
8.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为肝细胞癌，
所述特定microRNA为选自由cfa-let-7g、cfa-miR-10a、cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-125b、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-206、cfa-miR-22、cfa-miR-378、cfa-miR-383、cfa-miR-483、cfa-miR-665、cfa-miR-7、cfa-miR-718、cfa-miR-874、cfa-miR-8794、cfa-miR-8798、cfa-miR-8875、cfa-miR-8900、cfa-miR-8902、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b和cfa-miR-99a组成的组中的至少一种。
9.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为肥大细胞瘤，
所述特定microRNA为选自由cfa-miR-10b、cfa-miR-1185、cfa-miR-125b、cfa-miR-126、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-222、cfa-miR-24、cfa-miR-26b、cfa-miR-8803、cfa-miR-8872、cfa-miR-8903、cfa-miR-8907和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种。
10.一种犬癌症的诊断方法，其包括诊断工序，在所述诊断工序中，获得从诊断对象即犬的体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，利用该结果求出对特定microRNA的基因表达水平，将该基因表达水平作为诊断标准，诊断该诊断对象即犬罹患特定癌症疾病的风险程度，所述诊断方法的特征在于，所述特定microRNA为基于从犬体液中提取的microRNA的基因表达分析结果，在罹患所述特定癌症疾病的犬与罹患其他癌症疾病的犬和健康犬之间的基因表达水平上观察到显著差异的microRNA。
11.根据权利要求10所述的方法，其中，在所述诊断工序之前，进一步包括下述提取工序：根据使用统计分析处理所创建的判别式，提取基于从犬体液中提取的microRNA的基因表达分析结果在罹患特定癌症疾病的犬与罹患其他癌症疾病的犬和健康犬之间的基因表达水平上观察到显著差异的microRNA作为特定microRNA。
12.根据权利要求10所述的方法，其中，在所述诊断工序中，包括所述诊断对象即犬罹患所述特定癌症疾病的风险程度高于或低于罹患其他癌症疾病的风险。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病选自由口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤组成的组。
14.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为口腔内黑色素瘤，
所述诊断中使用的特定microRNA为选自由cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-126、cfa-miR-1271、cfa-miR-1306、cfa-miR-130b、cfa-miR-140、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-192、cfa-miR-197、cfa-miR-222、cfa-miR-29a、cfa-miR-29b、cfa-miR-30b、cfa-miR-370、cfa-miR-378、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-489、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-8803、cfa-miR-8816、cfa-miR-8824、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8859a、cfa-miR-8875、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908d和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种。
15.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为尿道上皮癌，
所述诊断中使用的特定microRNA为选自由cfa-let-7b、cfa-miR-107、cfa-miR-10b、cfa-miR-122、cfa-miR-125b、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-133b、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-181a、cfa-miR-185、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-19b、cfa-miR-23a、cfa-miR-29c、cfa-miR-345、cfa-miR-361、cfa-miR-370、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-8794、cfa-miR-8803、cfa-miR-8816、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8860、cfa-miR-8873a、cfa-miR-8891、cfa-miR-8903、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b、cfa-miR-93和cfa-miR-99a组成的组中的至少一种。
16.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为恶性淋巴瘤，
所述诊断中使用的特定microRNA为选自由cfa-let-7f、cfa-miR-122、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-140、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-151、cfa-miR-15a、cfa-miR-181a、cfa-miR-1844、cfa-miR-188、cfa-miR-192、cfa-miR-193a、cfa-miR-21、cfa-miR-22、cfa-miR-23b、cfa-miR-24、cfa-miR-26a、cfa-miR-26b、cfa-miR-27b、cfa-miR-301a、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-345、cfa-miR-378、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-551b、cfa-miR-574、cfa-miR-631、cfa-miR-8794、cfa-miR-8803、cfa-miR-8809、cfa-miR-8836、cfa-miR-8843、cfa-miR-8863、cfa-miR-8872、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8906、cfa-miR-8907和cfa-miR-8908d组成的组中的至少一种。
17.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，所述特定癌症疾病为肝细胞癌，
所述诊断中使用的特定microRNA为选自由cfa-let-7b、cfa-let-7c、cfa-let-7f、cfa-let-7g、cfa-miR-10b、cfa-miR-122、cfa-miR-1249、cfa-miR-132、cfa-miR-134、cfa-miR-146a、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-16、cfa-miR-206、cfa-miR-22、cfa-miR-223、cfa-miR-29a、cfa-miR-30d、cfa-miR-331、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-483、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-574、cfa-miR-8794、cfa-miR-8815、cfa-miR-8824、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8836、cfa-miR-8843、cfa-miR-8860、cfa-miR-8892、cfa-miR-8900、cfa-miR-8903、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b和cfa-miR-99a组成的组中的至少一种。
18.根据权利要求10至13中任一项所述的方法，其中，所述特定癌症疾病为肥大细胞瘤，
所述诊断中使用的特定microRNA为选自由cfa-let-7c、cfa-let-7f、cfa-miR-10a、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-144、cfa-miR-149、cfa-miR-186、cfa-miR-188、cfa-miR-18a、cfa-miR-191、cfa-miR-221、cfa-miR-223、cfa-miR-301a、cfa-miR-30c、cfa-miR-342、cfa-miR-370、cfa-miR-451、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-551b、cfa-miR-574、cfa-miR-631、cfa-miR-8809、cfa-miR-8815、cfa-miR-8816、cfa-miR-8834a、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8903和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种。
19.一种生物标志物，其包含用于诊断包括口腔内黑色素瘤、尿道上皮癌、恶性淋巴瘤、肝细胞癌和肥大细胞瘤在内的5种犬癌症疾病的microRNA，所述microRNA选自由cfa-let-7c、cfa-miR-103、cfa-miR-10a、cfa-miR-122、cfa-miR-125a、cfa-miR-125b、cfa-miR-126、cfa-miR-130a、cfa-miR-144、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-186、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-19b、cfa-miR-22、cfa-miR-222、cfa-miR-223、cfa-miR-24、cfa-miR-26a、cfa-miR-27b、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-378、cfa-miR-383、cfa-miR-483、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-489、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-718、cfa-miR-874、cfa-miR-8794、cfa-miR-8798、cfa-miR-8843、cfa-miR-8859a、cfa-miR-8860、cfa-miR-8903、cfa-miR-8906、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种。
20.一种生物标志物，其包含用于诊断犬口腔内黑色素瘤的microRNA，所述microRNA选自由cfa-miR-10a、cfa-miR-1185、cfa-miR-125a、cfa-miR-126、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-184、cfa-miR-186、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-19b、cfa-miR-24、cfa-miR-30c、cfa-miR-483、cfa-miR-489、cfa-miR-8798、cfa-miR-8816、cfa-miR-8875和cfa-miR-8908a-3p组成的组中的至少一种。
21.一种生物标志物，其包含用于诊断犬尿道上皮癌的microRNA，所述microRNA选自由cfa-let-7f、cfa-miR-10a、cfa-miR-1249、cfa-miR-125a、cfa-miR-126、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-133b、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-1844、cfa-miR-186、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-19b、cfa-miR-2114、cfa-miR-24、cfa-miR-29b、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-361、cfa-miR-370、cfa-miR-425、cfa-miR-483、cfa-miR-494、cfa-miR-502、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-665、cfa-miR-718、cfa-miR-8798、cfa-miR-8824、cfa-miR-8832、cfa-miR-8834a、cfa-miR-8843、cfa-miR-8904b和cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p组成的组中的至少一种。
22.一种生物标志物，其包含用于诊断犬恶性淋巴瘤的microRNA，所述microRNA选自由cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-1249、cfa-miR-126、cfa-miR-1306、cfa-miR-144、cfa-miR-150、cfa-miR-184、cfa-miR-188、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-24、cfa-miR-342、cfa-miR-345、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-574、cfa-miR-8794、cfa-miR-8797、cfa-miR-8798、cfa-miR-8900、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8907和cfa-miR-8908d组成的组中的至少一种。
23.一种生物标志物，其包含用于诊断犬肝细胞癌的microRNA，所述microRNA选自由cfa-let-7g、cfa-miR-10a、cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-125b、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-206、cfa-miR-22、cfa-miR-378、cfa-miR-383、cfa-miR-483、cfa-miR-665、cfa-miR-7、cfa-miR-718、cfa-miR-874、cfa-miR-8794、cfa-miR-8798、cfa-miR-8875、cfa-miR-8900、cfa-miR-8902、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b和cfa-miR-99a组成的组中的至少一种。
24.一种生物标志物，其包含用于诊断犬肥大细胞瘤的microRNA，所述microRNA选自由cfa-miR-10b、cfa-miR-1185、cfa-miR-125b、cfa-miR-126、cfa-miR-149、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-197、cfa-miR-199、cfa-miR-222、cfa-miR-24、cfa-miR-26b、cfa-miR-8803、cfa-miR-8872、cfa-miR-8903、cfa-miR-8907和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种。
25.一种生物标志物，其包含用于诊断犬口腔内黑色素瘤的microRNA，所述microRNA选自由cfa-miR-1185、cfa-miR-122、cfa-miR-126、cfa-miR-1271、cfa-miR-1306、cfa-miR-130b、cfa-miR-140、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-192、cfa-miR-197、cfa-miR-222、cfa-miR-29a、cfa-miR-29b、cfa-miR-30b、cfa-miR-370、cfa-miR-378、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-489、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-8803、cfa-miR-8816、cfa-miR-8824、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8859a、cfa-miR-8875、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908d和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种。
26.一种生物标志物，其包含用于诊断犬尿道上皮癌的microRNA，所述microRNA选自由cfa-let-7b、cfa-miR-107、cfa-miR-10b、cfa-miR-122、cfa-miR-125b、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-133b、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-149、cfa-miR-181a、cfa-miR-185、cfa-miR-193a、cfa-miR-197、cfa-miR-19b、cfa-miR-23a、cfa-miR-29c、cfa-miR-345、cfa-miR-361、cfa-miR-370、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-551b、cfa-miR-660、cfa-miR-8794、cfa-miR-8803、cfa-miR-8816、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8860、cfa-miR-8873a、cfa-miR-8891、cfa-miR-8903、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8907、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b、cfa-miR-93和cfa-miR-99a组成的组中的至少一种。
27.一种生物标志物，其包含用于诊断犬恶性淋巴瘤的microRNA，所述microRNA选自由cfa-let-7f、cfa-miR-122、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-140、cfa-miR-144、cfa-miR-146a、cfa-miR-151、cfa-miR-15a、cfa-miR-181a、cfa-miR-1844、cfa-miR-188、cfa-miR-192、cfa-miR-193a、cfa-miR-21、cfa-miR-22、cfa-miR-23b、cfa-miR-24、cfa-miR-26a、cfa-miR-26b、cfa-miR-27b、cfa-miR-301a、cfa-miR-339、cfa-miR-342、cfa-miR-345、cfa-miR-378、cfa-miR-486、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-551b、cfa-miR-574、cfa-miR-631、cfa-miR-8794、cfa-miR-8803、cfa-miR-8809、cfa-miR-8836、cfa-miR-8843、cfa-miR-8863、cfa-miR-8872、cfa-miR-8904b、cfa-miR-8906、cfa-miR-8907和cfa-miR-8908d组成的组中的至少一种。
28.一种生物标志物，其包含用于诊断犬肝细胞癌的microRNA，所述microRNA选自由cfa-let-7b、cfa-let-7c、cfa-let-7f、cfa-let-7g、cfa-miR-10b、cfa-miR-122、cfa-miR-1249、cfa-miR-132、cfa-miR-134、cfa-miR-146a、cfa-miR-150、cfa-miR-155、cfa-miR-16、cfa-miR-206、cfa-miR-22、cfa-miR-223、cfa-miR-29a、cfa-miR-30d、cfa-miR-331、cfa-miR-378、cfa-miR-425、cfa-miR-483、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-494、cfa-miR-532、cfa-miR-574、cfa-miR-8794、cfa-miR-8815、cfa-miR-8824、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8836、cfa-miR-8843、cfa-miR-8860、cfa-miR-8892、cfa-miR-8900、cfa-miR-8903、cfa-miR-8908a-3p、cfa-miR-8908d、cfa-miR-92b和cfa-miR-99a组成的组中的至少一种。
29.一种生物标志物，其包含用于诊断犬肥大细胞瘤的microRNA，所述microRNA选自由cfa-let-7c、cfa-let-7f、cfa-miR-10a、cfa-miR-1306、cfa-miR-130a、cfa-miR-144、cfa-miR-149、cfa-miR-186、cfa-miR-188、cfa-miR-18a、cfa-miR-191、cfa-miR-221、cfa-miR-223、cfa-miR-301a、cfa-miR-30c、cfa-miR-342、cfa-miR-370、cfa-miR-451、cfa-miR-486-3p、cfa-miR-551b、cfa-miR-574、cfa-miR-631、cfa-miR-8809、cfa-miR-8815、cfa-miR-8816、cfa-miR-8834a、cfa-miR-8834b、cfa-miR-8903和cfa-miR-92b组成的组中的至少一种。
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