CN117979996A

CN117979996A - 用抗her2双互补位抗体治疗癌症的方法

Info

Publication number: CN117979996A
Application number: CN202280062760.8A
Authority: CN
Inventors: R·H·戴维斯; N·C·约瑟夫森; J·R·普罗克托
Original assignee: Enzymatic British Columbia Ltd
Current assignee: Enzymatic British Columbia Ltd
Priority date: 2021-09-15
Filing date: 2022-09-15
Publication date: 2024-05-03
Also published as: IL311380A; CA3177053A1; KR20240058127A; AU2022346447A1

Abstract

描述了使用抗HER2双互补位抗体以2级固定给药方案治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法，所述2级固定给药方案基于所治疗的受试者的体重。还描述了使用化疗剂和/或PD‑1抑制剂，例如抗PD‑1抗体的联合疗法。

Description

用抗HER2双互补位抗体治疗癌症的方法

技术领域

本公开涉及癌症治疗剂领域，并且特别涉及用于使用双互补位抗HER2抗体治疗癌症的给药方案。

背景技术

HER2(ErbB2)是一种跨膜表面结合的受体酪氨酸激酶，是受体酪氨酸激酶ErbB家族的成员，并且通常参与导致细胞生长和分化的信号转导途径。HER2是治疗乳腺癌的有希望的靶标，因为发现它在约四分之一的乳腺癌患者中过表达(Bange等人,Nature Medicine7:548(2001))。

(曲妥珠单抗(trastuzumab)，美国专利号5,821,337)是开发用于治疗HER2阳性乳腺癌的首个单克隆抗体，并且增加了患者的存活时间，使得他们现在与HER2阴性乳腺癌患者相同。帕妥珠单抗(pertuzumab)(/>美国专利号7,862,817)是一种人源化单克隆抗体，专门设计用于防止HER2受体与细胞表面上的其他HER受体(EGFR/HER1、HER3和HER4)配对(二聚化)，据信这一过程在肿瘤生长和存活中起作用。认为帕捷特(Perjeta)、赫赛汀(Herceptin)和化疗的组合会提供对HER信号传导途径更全面的阻断。帕妥珠单抗与HER2的结构域II结合，这对于二聚化是必不可少的，而曲妥珠单抗与HER2的细胞外结构域IV结合。

Li等人(Cancer Res.,73:6471-6483(2013))描述了基于天然曲妥珠单抗和帕妥珠单抗序列并且克服了曲妥珠单抗抗性的针对HER2的双特异性二价抗体。已经描述了其他双特异性抗HER2抗体(国际专利申请公布号WO 2015/077891和WO 2016/179707；美国专利申请公布号2014/0170148、2015/0284463、2017/0029529和2017/0291955；美国专利号9,745,382)。

国际专利申请公布号WO 2016/082044描述了抗HER2双互补位抗体的给药方案。

国际专利申请公布号WO 2019/173911描述了包含澳瑞他汀(auristatin)类似物的抗HER2双互补位抗体-药物缀合物。

大多数市售的基于抗体的治疗剂以基于受试者体重或体表面积的剂量施用于受试者。例如，治疗性抗体可以X mg/kg体重或Y mg/m²体表面积的剂量施用。例如，单克隆抗体帕尼单抗(panitumumab)已被批准以每2周(Q2W)6mg/kg的剂量施用，单克隆抗体纳武单抗(nivolumab)已被批准以3mg/kg Q2W的剂量施用。单克隆抗体利妥昔单抗(rituximab)已被批准以375mg/m²体表面积的剂量施用。单克隆抗体西妥昔单抗(cetuximab)已被批准在400mg/m²的负荷剂量之后以每周250mg/m²体表面积的剂量施用。最近，已经建议以固定剂量(独立于体重或体表面积)施用治疗性抗体(Hendrikx,J.等人,Fixed Dosing ofMonoclonal Antibodies in Oncology,The Oncologist 22:1212(2017))。

提供这个背景信息的目的是使申请人相信的已知信息与本公开可能相关。不一定意图承认，也不应该解释为，任何前述信息构成了针对所要求保护的发明的现有技术。

发明内容

本文描述了使用抗HER2双互补位抗体治疗癌症的方法。在一个方面，本公开涉及一种治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法，其包括以固定时间间隔向受试者施用有效量的抗HER2双互补位抗体，所述有效量包括施用的固定剂量的抗体。

在另一个方面，本公开涉及一种治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法，其包括以固定时间间隔向受试者施用有效量的抗HER2双互补位抗体，所述有效量包括两级固定剂量，其中低固定剂量施用于体重低于体重截止点的受试者，并且高固定剂量施用于体重等于或高于体重截止点的受试者。

在另一个方面，本公开涉及一种治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法，其包括以固定时间间隔向受试者施用有效量的抗HER2双互补位抗体，所述有效量包括两级固定剂量，其中低固定剂量施用于体重小于70kg的受试者，并且高固定剂量施用于体重为70kg或更重的受试者。

在另一个方面，本公开涉及一种治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用有效量的抗HER2双互补位抗体，所述有效量包括向体重小于70kg的受试者施用1800mg的固定剂量，或向体重为70kg或更重的受试者施用2400mg的固定剂量，其中所述剂量每3周一次(Q3W)施用。

在另一个方面，本发明涉及一种治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用有效量的抗HER2双互补位抗体，所述有效量包括向体重小于70kg的受试者施用1800mg的固定剂量，或向体重为70kg或更重的受试者施用2400mg的固定剂量，其中所述剂量每3周一次(Q3W)施用，其中所述HER2双互补位抗体包含(a)第一抗原结合结构域，其包含含有如SEQ ID NO:31中所示的序列的可变重链区(VH)和含有如SEQ ID NO:21中所示的序列的可变轻链区(VL)，和(b)第二抗原结合结构域，其包含如SEQ ID NO:52中所示的VH序列和如SEQ ID NO:51中所示的VL序列。

在另一个方面，本公开涉及一种治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用有效量的抗HER2双互补位抗体，所述有效量包括向体重小于70kg的受试者施用1800mg的固定剂量，或向体重为70kg或更重的受试者施用2400mg的固定剂量，其中所述剂量每3周一次(Q3W)施用，其中所述受试者已被诊断患有乳腺癌，胃食管腺癌(GEA)、食管癌、胃癌、子宫内膜癌、卵巢癌、宫颈癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肛门癌、结直肠癌(CRC)或胆道癌。

在另一个方面，本公开涉及一种治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用有效量的抗HER2双互补位抗体，所述有效量包括向体重小于70kg的受试者施用1800mg的固定剂量，或向体重为70kg或更重的受试者施用2400mg的固定剂量，其中所述剂量每3周一次(Q3W)施用，其中所述受试者已被诊断患有胃食管腺癌(GEA)、食管癌、胃食管接合部癌(GEJ)或胃癌。

在另一个方面，本公开涉及一种治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用有效量的抗HER2双互补位抗体，所述有效量包括向体重小于70kg的受试者施用1200mg的固定剂量，或向体重为70kg或更重的受试者施用1600mg的固定剂量，其中所述剂量每2周一次(Q2W)施用。

在另一个方面，本公开涉及一种治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用有效量的抗HER2双互补位抗体，所述有效量包括向体重小于70kg的受试者施用1200mg的固定剂量，或向体重为70kg或更重的受试者施用1600mg的固定剂量，其中所述剂量每2周一次(Q2W)施用，其中所述受试者已被诊断患有胆道癌。

在另一个方面，本发明涉及一种治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用有效量的抗HER2双互补位抗体，所述有效量包括向体重小于70kg的受试者施用1200mg的固定剂量，或向体重为70kg或更重的受试者施用1600mg的固定剂量，其中所述剂量每2周一次(Q2W)施用，其中所述HER2双互补位抗体包含(a)第一抗原结合结构域，其包含含有如SEQ ID NO:31中所示的序列的可变重链区(VH)和含有如SEQ ID NO:21中所示的序列的可变轻链区(VL)，和(b)第二抗原结合结构域，其包含如SEQ ID NO:52中所示的VH序列和如SEQ ID NO:51中所示的VL序列。

在另一个方面，本公开涉及一种药物药盒，其包含：(i)包含抗HER-2双互补位抗体的一个或多个容器和(ii)在所述一个或多个容器中的或与所述一个或多个容器相关联的标签或药品说明书，所述标签或药品说明书指示抗HER2双互补位抗体用于向患有表达HER2的癌症的受试者施用(a)对体重小于70kg的受试者以1800mg的剂量施用，或(b)对体重为70kg或更重的受试者以2400mg的剂量施用，每3周一次(Q3W)施用。

在另一个方面，本公开涉及一种药物药盒，其包含抗HER-2双互补位抗体和(ii)在一个或多个容器中的或与一个或多个容器相关联的标签或药品说明书，所述标签或药品说明书指示抗HER2双互补位抗体用于向患有表达HER2的癌症的受试者施用(a)对体重小于70kg的受试者以1200mg的剂量施用，或(b)对体重为70kg或更重的受试者以1600mg的剂量施用，每2周一次(Q2W)施用。

附图说明

图1显示了抗HER2双互补位抗体v10000的示意图。

图2显示了各种给药方案的中值预测暴露量(实线)、与观察数据(空心圆)相比的95％预测区间(灰带)、中值观察浓度(虚线)和观察到的第2.5/第97.5百分位数(虚线)的视觉预测检查。图2A，每周施用的剂量为5mg/kg(QW)。图2B，每周施用的剂量为10mg/kg(Q2W)。图2C，每2周一次(Q2W)施用的剂量为20mg/kg。图2D，每3周一次(Q3W)施用的剂量为30mg/kg。

图3显示了使用几种给药方案按体重计算的稳态模型预测的AUC。图3A，基于体重(30mg/kg Q3W)的给药。图3B，一级(2100mg Q3W)定量给药(flat dosing)；图3C，两级定量给药(1800/2400mg Q3W)。两级定量剂量(flat dose)(1800/2400mg Q3W)对低于70kg的患者以1800mg施用，并且对高于70kg的患者以2400mg施用。

图4是显示在实施例4中描述的v10000在治疗胃肠癌中的临床研究设计的示意图。5-FU＝5-氟尿嘧啶；DCR＝疾病控制率；DOR＝缓解持续时间；ECOG PS＝美国东部肿瘤协作组体能状态；FISH＝荧光原位杂交；GEA＝胃食管腺癌；IHC＝免疫组织化学；ORR＝客观缓解率；PD＝疾病进展；PFS＝无进展存活期；RECIST v1.1＝实体瘤中的缓解评估标准，版本1.1；SD＝疾病稳定。

图5是显示了用v10000和化疗方案CAPOX、FP或mFOLFOX中的一者治疗的受试者中的靶病变大小变化的瀑布图。5-FU＝5-氟尿嘧啶；CA＝原发肿瘤位置；CAPOX＝卡培他滨(capecitabine)加奥沙利铂(oxaliplatin)；E＝食管癌；F＝定量给药；FISH＝荧光原位杂交；FP＝5-FU加顺铂(cisplatin)；G＝胃癌；IHC＝免疫组织化学；J＝胃食管接合部癌；mFOLFOX6＝5-FU加奥沙利铂和甲酰四氢叶酸(leucovorin)；W＝基于体重的剂量；ZDR＝2级定量给药方案。

具体实施方式

本公开涉及用抗HER2双互补位抗体治疗表达HER2的癌症的方法。大多数基于抗体的治疗剂以基于受试者体重(kg)或体表面积(m²)的剂量施用于受试者。然而，这种给药方法不方便，因为必须为每个患者计算和分配特定的量。这也导致药物浪费，因为一些受试者比其他受试者需要更多的药物，并且药物通常包装在一个或两个统一大小的小瓶中。通常必须丢弃小瓶中未使用的药物。治疗性抗体的制造成本很高，并且药物的浪费成本也很高。为了避免这些问题，一些抗体制造商开发了一种“一刀切(one size fits all)”或固定剂量的治疗性抗体，其可用于所有患者，与体重或体表面积无关。然而，这种方法可能导致受试者体内的药物浓度不均匀，一些受试者的药物暴露量明显高于其他受试者。使用群体药代动力学，我们开发了一种分级固定给药方法，其中低于一定体重的受试者被给予的固定剂量低于向较重受试者给予的固定剂量。

因此，在本文公开的方法的某些方面，根据取决于受试者体重的两级固定给药方案并且以每一周一次(QW)、每2周一次(Q2W)或每3周一次(Q3W)固定的给药间隔向患有表达HER2的癌症的受试者施用抗HER2双互补位抗体。在某些实施方案中，在每个21天周期的第1天以约1800mg(对于<70kg的受试者)或约2400mg(对于≥70kg的受试者)IV Q3W的剂量向受试者施用抗HER2双互补位抗体。在某些实施方案中，在每个28天周期的第1天和第15天以约1200mg(对于<70kg的受试者)或约1600mg(对于≥70kg的受试者)IV Q2W的剂量向受试者施用抗HER2双互补位抗体。

在本文公开的方法的某些方面，抗HER2双互补位抗体与化疗剂联合施用。在本公开的方法的某些方面，抗HER2抗体与PD-1抑制剂(例如抗PD-1抗体)一起施用。

定义

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与由本领域普通技术人员通常理解相同的含义。

如本文所用的术语“受试者”是指作为治疗和/或观察对象的人类患者。

如本文所用，术语“约”是指与给定值相差大约+/-10％的变化。应当理解，无论是否特别提及，此类变化总是包括在本文提供的任何给定值中。

当在本文中结合术语“包含”一起使用时，词语“一个/种(a或an)”可以意指“一个/种”，但在某些实施方案中它也与“一个/种或多个/种”、“至少一个/种”和“一个/种或多于一个/种”的含义一致。

如本文所用，术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”及其语法变型是包括性的或开放式的，并且不排除附加的、未列举的要素和/或方法步骤。当在本文中结合组合物、用途或方法一起使用时，术语“基本上由……组成”表示可以存在附加的要素和/或方法步骤，但是这些附加不会实质性影响所列举的组合物、方法或用途起作用的方式。术语“由......组成”当在本文中与组合物、用途或方法相连使用时，排除了额外要素和/或方法步骤的存在。本文描述为包含某些要素和/或步骤的组合物、用途或方法也可以在某些实施方案中基本上由那些要素和/或步骤组成，而在其他实施方案中由那些要素和/或步骤组成，无论是否特别提及了这些实施方案。

术语“源自”和“基于”在关于重组氨基酸序列使用时，意指重组氨基酸序列与相应的参考氨基酸序列基本上相同。例如，源自(或基于)野生型Ig Fc序列的Ig Fc氨基酸序列与野生型Ig Fc序列基本上相同(例如，具有至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的序列同一性)。

考虑到癌症的类型和阶段，术语“一线疗法”、“一线治疗”或“初级疗法”是通常被接受作为用于患者的初始治疗的治疗方案。术语“二线疗法”或“二线治疗”是在一线疗法没有提供所需功效的情况下通常施用的治疗方案。

术语“新辅助疗法”是指在进行主要治疗(通常是手术)之前作为缩小肿瘤的第一步进行的治疗。新辅助疗法的实例包括但不限于化疗、放疗和激素疗法。新辅助疗法可被视为一线疗法。

术语“辅助疗法”是指在一线治疗后进行的额外癌症治疗，以降低癌症复发的风险。辅助疗法可包括但不限于化疗、放疗、激素疗法、靶向疗法(通常是靶向特定类型癌细胞而非正常细胞的小分子药物或抗体)或生物疗法(诸如疫苗、细胞因子、抗体或基因疗法)。

“晚期癌症”是指已经发展到无法安全切除或治愈或长期缓解可能性极低的癌症。癌症通过在阻止其切除的结构附近生长或通过从其开始处扩散、穿过组织线或扩散到身体的其他部位(诸如淋巴结或其他器官)而发展。晚期癌症可能是局部晚期的，这意味着它们已经扩散到原发部位的器官外，但尚未扩散到远处的部位。晚期癌症也可能是转移性的，这意味着癌细胞已经从癌症开始的部位(原发部位)扩散到身体的其他更远部位(继发部位)。

“可切除”的癌症是可以通过手术治疗的癌症。“不可切除”的癌症是不能通过手术治疗的癌症，通常是因为癌症已经扩散到主要肿瘤周围的组织。某些癌症可由执业医师根据扩散到周围组织的程度评估为“部分可切除”。

术语“固定时间间隔”是指推荐的施用药物的时间表，例如每周一次(QW)、每两周一次(Q2W)、每三周一次(Q3W)等。

预期本文讨论的任何实施方案可以按照本文公开的任何方法、用途或组合物来实施。

结合本文公开的一个实施方案描述的特定特征、结构和/或特性可以与结合本文公开的另一个实施方案描述的特征、结构和/或特性以任何合适的方式组合以提供一个或多个其它实施方案。

还应当理解，一个实施方案中对某个特征的正面叙述用作在替代性实施方案中排除所述特征的基础。例如，在为给定实施方案或权利要求提出选项列表的情况下，应当理解，可以从所述列表中删除一个或多个选项，并且缩短的列表可以形成替代实施方案，而不管此种替代实施方案是否被具体提及。

抗HER2双互补位抗体

本文所述的抗体包含与HER2的两个不同表位结合的抗HER2双互补位抗体。

如本文所用，术语“抗体”通常是指具有免疫球蛋白样功能的蛋白性结合分子。抗体的典型实例是免疫球蛋白以及其仍保持结合特异性的衍生物或功能片段。产生抗体的技术是本领域熟知的。术语“抗体”还可以包括不同类别(即IgA、IgG、IgM、IgD和IgE)和亚类(诸如IgG₁、IgG₂、IgG₃、IgG₄、IgA₁和IgA₂)的免疫球蛋白。抗体的说明性实例是完整抗体及其抗原结合片段，诸如Fab片段、F(ab')₂、Fv片段、单链Fv片段(scFv)、双抗体、结构域抗体及其组合。结构域抗体可以是单结构域抗体、单可变结构域抗体或仅有一个可变结构域的免疫球蛋白单可变结构域，该可变结构域可以是重链可变结构域或轻链可变结构域，所述单结构域抗体、单可变结构域抗体或仅有一个可变结构域的免疫球蛋白单可变结构域独立于其它可变区或结构域特异性结合抗原或表位。术语“抗体”还包括诸如嵌合抗体、单链抗体和人源化抗体的实施方案。

典型的完整抗体包含通过二硫键互连的至少两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链包括重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)。重链恒定区包含三个结构域：CH1、CH2和CH3。对应于免疫球蛋白的不同类别的重链恒定结构域称为α(IgA)、δ(IgD)、ε(IgE)、γ(IgG)和μ(IgM)。每条轻链包括轻链可变区(VL)和轻链恒定区。轻链恒定区仅包含一个结构域：CL。轻链分为κ或λ。VH区和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，其间散布着更为保守的区域，称为框架区(FW)。每个VH和VL由三个CDR和四个FW组成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FW1、CDR1、FW2、CDR2、FW3、CDR3、FW4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域(互补位)。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和补体系统的组分C1q。

在某些实施方案中，本文所述的抗HER2双互补位抗体包含两个as抗原结合结构域，每个抗原结合结构域与HER2的不同表位结合。本文中可互换使用的术语“抗原结合多肽构建体”和“抗原结合结构域”是指基于免疫球蛋白的构建体，例如抗体片段。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的抗原结合多肽构建体是抗体片段。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的抗原结合多肽构建体可以各自独立地是Fab片段、Fab'片段、scFv或sdAb。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的抗原结合多肽构建体可以各自独立地是Fab片段或scFv。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的一个抗原结合多肽构建体可以是Fab片段，而另一个抗原结合多肽构建体可以是scFv。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的至少一个抗原结合多肽构建体可以是Fab片段或Fab'片段。“Fab片段”含有轻链的恒定结构域(CL)和重链的第一恒定结构域(CH1)以及轻链和重链的可变结构域(分别为VL和VH)。Fab′片段与Fab片段的不同之处在于其在重链CH1结构域的羧基端添加了几个氨基酸残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab片段也可以是单链Fab分子，即其中Fab轻链和Fab重链通过肽接头连接形成单一肽链的Fab分子。例如，Fab轻链的C端可以与单链Fab分子中Fab重链的N端连接。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的至少一个抗原结合多肽构建体可以是单链Fv(scFv)。“scFv”在单一多肽链中包括抗体的重链可变结构域(VH)和轻链可变结构域(VL)。scFv可以任选地在VH和VL结构域之间进一步包含多肽接头，从而使scFv能够形成抗原结合所需的结构。例如，scFv可以包括通过多肽接头从C端连接至VH的N端的VL。另选地，scFv可以包含通过多肽链或接头，通过C端连接至VL的N端的VH(参见Pluckthun在ThePharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore编辑,Springer-Verlag,New York,第269-315页(1994)中的综述)。

本文所述的抗HER2双互补位抗体可以具有多种形式。抗HER2双互补位抗体的最小组分是与第一HER2表位结合的第一抗原结合多肽构建体和与第二HER2表位结合的第二抗原结合多肽构建体，其中第一HER2表位和第二HER2表位不同。包含两个结合不同HER2表位的抗原结合多肽构建体的抗体可以被认为是二价、双互补位抗体。包含一个或多个额外的抗原结合多肽构建体的抗体也是双互补位的，但被认为是例如三价或四价的，其中每个构建体与第一HER2表位或第二HER2表位结合。在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体是二价的抗HER2双互补位抗体。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含第一抗原结合多肽构建体和第二抗原结合多肽构建体可操作地连接的支架。如本文所用，术语“可操作地连接”意指所描述的组分处于容许以其预期方式起作用的关系。下面描述了合适的支架。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含两个与支架可操作地连接的抗原结合多肽构建体，并且至少一个抗原结合多肽构建体是scFv。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含两个与支架可操作地连接的抗原结合多肽构建体，并且至少一个抗原结合多肽构建体是Fab。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含与支架可操作地连接的两个抗原结合多肽构建体，其中一个抗原结合多肽构建体是scFv，另一个抗原结合多肽构建体是Fab。

合适的支架的实例包括但不限于免疫球蛋白Fc区、白蛋白、白蛋白类似物和衍生物、异二聚肽(诸如亮氨酸拉链、源自Jun和Fos的形成异二聚体的“拉链”肽、IgG CH1和CL结构域或barnase-barstar毒素)、细胞因子、趋化因子或生长因子。其他实例包括基于由IBCPharmaceuticals,Inc.和Immunomedics,Inc.开发的DOCK-AND-LOCK^TM(DNL^TM)技术的抗体(参见，例如，Chang等人，2007,Clin Cancer Res.,13:5586s-5591s)。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含基于免疫球蛋白Fc区、白蛋白或白蛋白类似物或衍生物的支架(诸如国际专利申请公布号WO 2012/116453或WO 2014/012082中描述的那些)。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含基于免疫球蛋白(Ig)Fc区的蛋白质支架。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含基于IgG Fc区的蛋白质支架。

如本文所用的术语“Fc区”、“Fc”或“Fc结构域”是指含有恒定区的至少一部分的免疫球蛋白重链C端区域。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。除非本文另有说明，否则Fc区或恒定区中的氨基酸残基的编号是根据EU编号系统，也称为EU索引，如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)中所述。

Ig Fc区通常是二聚体，并且由两个Fc多肽组成。二聚体Fc的“Fc多肽”是指形成二聚体Fc结构域的两个多肽中的一者，即包含能够稳定地自我缔合的免疫球蛋白重链的一个或多个C端恒定区的多肽。术语“第一Fc多肽”和“第二Fc多肽”可以互换使用来描述二聚Fc区包含的Fc多肽，前提是Fc区包含一个第一Fc多肽和一个第二Fc多肽。

Fc区包含CH3结构域或CH3结构域和CH2结构域两者。例如，二聚体IgG Fc区的Fc多肽包含IgG CH2和IgG CH3恒定结构域序列。CH3结构域包含两个CH3序列，来自于二聚体Fc区的两个Fc多肽中的每一个各一个。CH2结构域包含两个CH2序列，来自于二聚体Fc区的两个Fc多肽中的每一个各一个。

在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含基于IgG Fc区的支架。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含基于人Fc区的支架。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含基于人IgG Fc区(例如人IgG1 Fc区)的支架。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含基于IgG Fc区的支架，该IgGFc区是异二聚体Fc区，其包含各自包含CH3序列和任选地CH2序列的第一Fc多肽和第二Fc多肽。

在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含基于包含第一和第二Fc多肽的Fc区的支架，并且第一抗原结合多肽构建体与第一Fc多肽可操作地连接并且第二抗原结合多肽构建体与第二Fc多肽可操作地连接。

在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含基于包含第一和第二Fc多肽的Fc区的支架，其中第一抗原结合多肽构建体与第一Fc多肽可操作地连接并且第二抗原结合多肽构建体与第二Fc多肽可操作地连接，并且其中第一和第二抗原结合多肽构建体独立地为Fab片段或scFv。

在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含基于包含两个CH3序列的Fc区的支架，至少一个CH3序列包含一个或多个氨基酸修饰。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含异二聚体Fc区，所述异二聚体Fc区包含经修饰的CH3结构域，其中所述经修饰的CH3结构域是不对称修饰的CH3结构域。通常，异二聚体Fc的第一Fc多肽包含第一CH3序列并且第二Fc多肽包含第二CH3序列。

如本文所用，“不对称氨基酸修饰”是指其中第一CH3序列上特定位置的氨基酸与第二CH3序列上相同位置的氨基酸不同的修饰。对于包含不对称氨基酸修饰的CH3序列，第一和第二CH3序列通常将优先配对形成异二聚体而不是同型二聚体。这些不对称氨基酸修饰可以是每个序列上各相同氨基酸位置的两个氨基酸中仅一个修饰的结果，或者是第一和第二CH3序列中的每一个，每个序列上各相同氨基酸位置的两个氨基酸不同修饰的结果。异二聚体Fc的第一CH3序列和第二CH3序列中的每一者均可包含一个或多于一个不对称氨基酸修饰。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含如国际专利申请公布号WO2012/058768或WO 2013/063702中所述的基于经修饰的Fc区的支架。

表1提供了人IgG1 Fc序列的氨基酸序列(SEQ ID NO:1)，对应于全长人IgG1重链的氨基酸231至447。CH3序列包含全长人IgG1重链的氨基酸341-447。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含异二聚体Fc支架，其包含经修饰的CH3结构域，经修饰的CH3结构域包含促进异二聚体Fc而不是同型二聚体Fc形成的不对称氨基酸修饰。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含异二聚体Fc支架，其包括如下所述在以下一个或多个位置的修饰：L351、F405、Y407、T366、K392、T394、T350、S400和/或N390，使用EU编号。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含异二聚体Fc，其包含具有第一多肽序列和第二多肽序列的经修饰的CH3结构域，第一多肽序列包含在位置F405和Y407处的氨基酸修饰，并且任选地还包含在位置L351处的氨基酸修饰，并且第二多肽序列包含在位置T366和T394处的氨基酸修饰，并且任选地还包含在位置K392处的氨基酸修饰。在一些实施方案中，经修饰的CH3结构域的第一多肽序列可以包含在位置F405和Y407处的氨基酸修饰，并且任选地还包含在位置L351处的氨基酸修饰，并且经修饰的CH3结构域的第二多肽序列包含在位置T366和T394处的氨基酸修饰，并且任选地还包含在位置K392处的氨基酸修饰，在位置F405处的氨基酸修饰为F405A、F405I、F405M、F405S、F405T或F405V；在位置Y407处的氨基酸修饰为Y407I或Y407V；在位置T366处的氨基酸修饰为T366I、T366L或T366M；在位置T394处的氨基酸修饰为T394W；在位置L351处的氨基酸修饰为L351Y；并且在位置K392处的氨基酸修饰为K392F、K392L或K392M。在一些实施方案中，在位置F405处的氨基酸修饰是F405A、F405S、F405T或F405V。

在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含异二聚体Fc，其包含具有第一Fc多肽序列和第二Fc多肽序列的经修饰的CH3结构域，第一Fc多肽序列可以包含在位置F405和Y407处的氨基酸修饰，并且任选地还包含在位置L351处的氨基酸修饰，并且第二Fc多肽序列包含在位置T366和T394处的氨基酸修饰，并且任选地还包含在位置K392处的氨基酸修饰，并且在位置F405处的氨基酸修饰为F405A、F405I、F405M、F405S、F405T或F405V；在位置Y407处的氨基酸修饰为Y407I或Y407V；在位置T366处的氨基酸修饰为T366I、T366L或T366M；在位置T394处的氨基酸修饰为T394W；在位置L351处的氨基酸修饰为L351Y，并且在位置K392处的氨基酸修饰为K392F、K392L或K392M，并且第一和第二Fc多肽序列中的一者或两者还包含氨基酸修饰T350V。在一些实施方案中，在位置F405处的氨基酸修饰是F405A、F405S、F405T或F405V。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含异二聚体Fc，其包含如上所述的经修饰的CH3结构域，其中第一Fc多肽序列包含在位置F405和Y407处的氨基酸修饰，并且任选地还包含在位置L351处的氨基酸修饰，并且第二Fc多肽序列包含在位置T366和T394处的氨基酸修饰，并且任选地还包含在位置K392处的氨基酸修饰，并且其中第一Fc多肽序列还包含在位置S400或Q347中的一处或两处的氨基酸修饰和/或第二Fc多肽序列还包含在位置K360或N390中的一处或两处的氨基酸修饰，其中在位置S400处的氨基酸修饰为S400E、S400D、S400R或S400K；在位置Q347处的氨基酸修饰为Q347R、Q347E或Q347K；在位置K360处的氨基酸修饰为K360D或K360E，并且在位置N390处的氨基酸修饰为N390R、N390K或N390D。在一些实施方案中，在位置F405处的氨基酸修饰是F405A、F405S、F405T或F405V。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含具有经修饰的CH3结构域的异二聚体Fc支架，所述经修饰的CH3结构域包含变体1、变体2、变体3、变体4或变体5中任一个的修饰，如表1所示。

表1：IgG1 Fc序列

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体可以包含具有经修饰的CH3结构域的异二聚体Fc支架，所述经修饰的CH3结构域具有包含选自L351Y、F405A和Y407V的一个或多个氨基酸修饰的第一CH3序列，和包含氨基酸修饰T366L或T366I；K392L或K392M和T394W的第二CH3序列，并且第一CH3序列和第二CH3序列中的一者或两者可以任选地还包含氨基酸修饰T350V。

抗HER2双互补位抗体所包含的两个抗原结合多肽构建体各自与HER2的不同表位结合，即，第一抗原结合多肽构建体与第一HER2表位结合，并且第二抗原结合多肽构建体与第二HER2表位结合。在本公开的上下文中，每个抗原结合多肽构建体与其靶表位特异性地结合。

“特异性地结合”或“特异性结合”意指结合对抗原是有选择性的，并且可以与不需要的或非特异性的相互作用区分开。抗原结合多肽构建体与特定表位结合的能力可以通过例如酶联免疫吸附测定(ELISA)、表面等离子体共振(SPR)技术(在BIAcore仪器上进行分析)(Liljeblad等人,Glyco J 17,323-329(2000))或传统结合测定法(Heeley,Endocr Res28,217-229(2002))进行测量。在一些实施方案中，当例如通过SPR测量，抗原结合多肽构建体与无关蛋白的结合程度小于抗原结合多肽构建体与其靶表位结合的约10％时，认为抗原结合多肽构建体与其靶表位特异性结合。

“HER2”(也称为ErbB2)是指例如在Semba等人PNAS(USA),82:6497-6501(1985)和Yamamoto等人,Nature,319:230-234(1986)中描述的人HER2蛋白(GenBank登录号X03363)。术语“erbB2”和“neu”是指编码人HER2蛋白的基因。术语p185或p185neu也可以用于指neu基因的蛋白产物。

HER2包含通常结合HER配体的细胞外结构域、亲脂性跨膜结构域、保守性细胞内酪氨酸激酶结构域和带有几个可被磷酸化的酪氨酸残基的羧基端信号传导结构域。HER2的细胞外(外)结构域包含四个结构域，结构域I-IV。表2中提供了HER2的序列(SEQ ID NO:2)。细胞外结构域(ECD)的边界是：结构域I-大约为氨基酸1-165；结构域II-大约为氨基酸166-322；结构域III-大约为氨基酸323-488，及结构域IV-大约为氨基酸489-607。

表2：人HER2的氨基酸序列(SEQ ID NO:2)

“表位2C4”是HER2的细胞外结构域中与抗体2C4结合的区域，并且包含来自HER2的细胞外结构域中的结构域II(也称为ECD2)的残基。2C4和帕妥珠单抗与HER2的细胞外结构域在结构域I、II和III的交界处结合(Franklin等人Cancer Cell 5:317-328(2004))。

“表位4D5”是HER2的细胞外结构域中与抗体4D5(ATCC CRL 10463)和曲妥珠单抗结合的区域。该表位靠近HER2的跨膜结构域，并且处于HER2的结构域IV(也称为ECD4)内。

一般而言，本公开的抗HER2双互补位抗体将与HER2的细胞外结构域内的表位结合。在一些实施方案中，由抗HER2双互补位抗体的第一和第二抗原结合多肽构建体结合的第一和第二HER2表位是非重叠的表位。在一些实施方案中，由抗HER2双互补位抗体的第一和第二抗原结合多肽构建体结合的第一和第二HER2表位处于HER2的不同细胞外结构域上。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体的第一抗原结合多肽构建体与HER2的第一结构域上的第一HER2表位结合，并且第二抗原结合多肽构建体与HER2的第二结构域上的第二HER2表位结合。在一些实施方案中，HER2的第一结构域是ECD2，HER2的第二结构域是ECD4。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的抗原结合多肽构建体中的一者与曲妥珠单抗竞争结合HER2。在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的抗原结合多肽构建体中的一者与帕妥珠单抗竞争结合HER2。在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的抗原结合多肽构建体中的一者与曲妥珠单抗竞争结合HER2，并且另一个抗原结合多肽构建体与帕妥珠单抗竞争结合HER2。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的抗原结合多肽构建体中的一者是Fab或scFv形式并且与曲妥珠单抗竞争结合HER2，并且另一个抗原结合多肽构建体是Fab或scFv形式并且与帕妥珠单抗竞争结合HER2。在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的抗原结合多肽构建体中的一者是Fab形式并且与曲妥珠单抗竞争结合至HER2，并且另一个抗原结合多肽构建体是scFv形式并且与帕妥珠单抗竞争结合至HER2。

在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的抗原结合多肽构建体中的一者与曲妥珠单抗结合至HER2上的相同表位。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的抗原结合多肽构建体中的一者与帕妥珠单抗结合至HER2上的相同表位。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的抗原结合多肽构建体中的一者与曲妥珠单抗结合至HER2上的相同表位，并且另一个抗原结合多肽构建体与帕妥珠单抗结合至HER2上的相同表位。

在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体所包含的抗原结合多肽构建体中的一者包含曲妥珠单抗的CDR序列或其变体，所述CDR序列或其变体包含一种或多种已知会增加HER2结合的突变，并且另一个抗原结合多肽构建体包含帕妥珠单抗的CDR或其变体，所述CDR或其变体包含一种或多种已知会增加HER2结合的突变。已知会增强曲妥珠单抗或帕妥珠单抗对HER2的结合的文献突变包括下面表3和表4中列出的那些突变(HC＝重链；LC＝轻链)。还考虑了这些突变的组合。

表3：增加与HER2的结合的曲妥珠单抗突变

表4：增加与HER2的结合的帕妥珠单抗突变

突变	报告的改善
		LC：I31A	1.9X
LC：Y96A	2.1X
		LC：Y96F	2.5X
HC：T30A	2.1X
		HC：G56A	8.3X
HC：F63V	1.9X

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体是美国专利申请公布号2016/0289335中描述的双互补位抗体中的一者。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体是v5019、v5020、v7091、v10000、v6902、v6903或v6717中的一者(参见表5、表6和表7以及序列表)。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体的抗原结合多肽构建体中的一者包含来自v5019、v5020、v7091、v10000、v6902、v6903或v6717中的一者的ECD2结合臂的VH序列和VL序列。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体的抗原结合多肽构建体中的一者包含来自v5019、v5020、v7091、v10000、v6902、v6903或v6717中的一者的ECD2结合臂的VH序列和VL序列，并且另一个抗原结合多肽构建体包含来自v5019、v5020、v7091、v10000、v6902、v6903或v6717中的一者的ECD4结合臂的VH序列和VL序列。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体的抗原结合多肽构建体中的一者包含来自v10000的ECD2结合臂的VH序列和VL序列，并且另一个抗原结合多肽构建体包含来自v10000的ECD4结合臂的VH序列和VL序列。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体的抗原结合多肽构建体中的一者包含来自v5019、v5020、v7091、v10000、v6902、v6903或v6717中的一者的ECD2结合臂的CDR序列。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体的抗原结合多肽构建体中的一者包含来自v5019、v5020、v7091、v10000、v6902、v6903或v6717中的一者的ECD2结合臂的CDR序列，并且另一个抗原结合多肽构建体包含来自v5019、v5020、v7091、v10000、v6902、v6903或v6717中的一者的ECD4结合臂的CDR序列。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体的抗原结合多肽构建体中的一者包含来自v10000的ECD2结合臂的CDR序列，并且另一个抗原结合多肽构建体包含来自v10000的ECD4结合臂的CDR序列。

表5：示例性抗HER2双互补位抗体

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*Fab或可变结构域编号根据Kabat(Kabat等人,Sequences of proteins ofimmunological interest，第5版,USDepartment of Health and Human Services,NIH公布号91-3242,第647页,1991)

^§CH3编号如同Kabat一样根据EU索引(Edelman等人，1969,PNAS USA,63:78-85)

表6：变体v5019、v5020、v7091、v10000、v6902、v6903和v6717的ECD2结合臂的CDR序列

表7：变体v5019、v5020、v7091、v10000、v6902、v6903和v6717的ECD4结合臂的CDR序列

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含(a)第一抗原结合结构域，其包含如SEQ ID NO:32、34和33以及SEQ ID NO:22、24和23中所示的CDR序列，和(b)第二抗原结合结构域，其包含如SEQ ID NO:53、54和55以及SEQ ID NO:56、57和58中所示的CDR序列。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含(a)第一抗原结合结构域，其为Fab并包含如SEQ ID NO:32、34和33以及SEQ ID NO:22、24和23中所示的CDR序列，和(b)第二抗原结合结构域，其为scFv并包含如SEQ ID NO:53、54和55以及SEQ ID NO:56、57和58中所示的CDR序列。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含(a)第一抗原结合结构域，其包含第一组CDR，其包含如SEQ ID NO:32中所示的CDR1序列、如SEQ ID NO:34中所示的CDR2序列和如SEQ ID NO:33中所示的CDR3序列，以及第二组CDR序列，其包含如SEQ ID NO:22中所示的CDR1序列、如SEQ ID NO:24中所示的CDR2序列和如SEQ ID NO:23中所示的CDR3序列，和(b)第二抗原结合结构域，其包含第三组CDR序列，其包含如SEQ ID NO:53中所示的CDR1序列、如SEQ ID NO:54中所示的CDR2序列和如SEQ ID NO:55中所示的CDR3序列，以及第四组CDR序列，其包含如SEQ ID NO:56中所示的CDR1序列、如SEQ ID NO:57中所示的CDR2序列和如SEQ ID NO:58中所示的CDR3序列。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含(a)第一重链(H1)，其包含如SEQ IDNO:32、34和33中所示的CDR序列，(b)第二重链(H2)scFv，其包含如SEQ ID NO:53、54、55、56、57和58中所示的CDR序列，和(c)轻链(L1)，其包含如SEQ ID NO:22、24和23中所示的CDR序列。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含(a)第一重链(H1)，其包含第一组CDR序列，其包含如SEQ ID NO:32中所示的CDR1序列、如SEQ ID NO:34中所示的CDR2序列和如SEQ ID NO:33中所示的CDR3序列，(b)第二重链(H2)，其包含第二组CDR序列，其包含如SEQ ID NO:53中所示的CDR1序列、如SEQ ID NO:54中所示的CDR2序列和如SEQ ID NO:55中所示的CDR3序列，以及第三组CDR序列，其包含如SEQ ID NO:56中所示的CDR1序列、如SEQID NO:57中所示的CDR2序列和如SEQ ID NO:58中所示的CDR3序列，和轻链(L1)，其包含第四组CDR序列，其包含如SEQ ID NO:22中所示的CDR1序列、如SEQ ID NO:24中所示的CDR2序列和如SEQ ID NO:23中所示的CDR3序列。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含(a)第一抗原结合结构域，其包含如SEQ ID NO:31中所示的VH序列和如SEQ ID NO:21中所示的VL序列，和(b)第二抗原结合结构域，其包含如SEQ ID NO:52中所示的VH序列和如SEQ ID NO:51中所示的VL序列。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含(a)第一抗原结合结构域，其为Fab并包含如SEQ ID NO:31中所示的VH序列和如SEQ ID NO:21中所示的VL序列，和(b)第二抗原结合结构域，其为scFv并包含如SEQ ID NO:52中所示的VH序列和如SEQ ID NO:51中所示的VL序列。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含第一重链(H1)，其包含如SEQ IDNO:31中所示的VH序列；第二重链(H2)，其包含如SEQ ID NO:52中所示的VH序列和如SEQ IDNO:51中所示的VL序列；和轻链(L1)，其包含如SEQ ID NO:21中所示的VL序列。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含(a)第一重链(H1)，其包含如SEQ IDNO:30中所示的序列，第二重链(H2)，其包含如SEQ ID NO:50中所示的序列，和轻链(L1)，其包含如SEQ ID NO:20中所示的序列。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体包含(a)第一重链(H1)，其由如SEQ IDNO:30中所示的序列组成，第二重链(H2)，其由如SEQ ID NO:50中所示的序列组成，和轻链(L1)，其由如SEQ ID NO:20中所示的序列组成。

双特异性抗HER2抗原结合构建体的制备

本文所述的抗HER2双互补位抗体可使用重组方法和组合物产生，例如，如美国专利号4,816,567号或国际专利公布号WO2015/077891中所述。

在一个实施方案中，提供了编码本文所述的双特异性抗HER2双互补位抗体的分离的核酸。此类核酸可以编码包含VL的氨基酸序列和/或包含抗HER2双互补位抗体的VH的氨基酸序列(例如，抗HER2双互补位抗体的轻链和/或重链)。在另一实施方案中，提供包含此类核酸的一种或多种载体(例如，表达载体)。如本领域所知，因为许多氨基酸由多于一个密码子编码，所以多个核酸可以编码单个多肽序列。

在一个实施方案中，核酸提供于多顺反子载体中。在另一实施方案中，提供包含此类核酸的宿主细胞。在一个此类实施方案中，宿主细胞包含以下(例如，已经用以下转化)：(1)包含编码包含抗HER2双互补位抗体的VL的氨基酸序列和包含抗原结合多肽构建体的VH的氨基酸序列的核酸的载体，或(2)包含编码包含抗HER2双互补位抗体的VL的氨基酸序列的核酸的第一载体和包含编码包含抗HER2双互补位抗体的VH的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一个实施方案中，所述宿主细胞是真核的，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或人胚肾(HEK)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施方案中，提供了制备抗HER2双互补位抗体的方法，其中所述方法包括在适合于表达抗HER2双互补位抗体的条件下培养包含编码如上文所提供的抗HER2双互补位抗体的核酸的宿主细胞，并且任选地，从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗HER2双互补位抗体。

对于抗HER2双互补位抗体的重组生产，将编码例如如上所述的抗HER2双互补位抗体的核酸分离，并插入一种或多种载体中，以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可使用常规程序将此类核酸容易地分离并进行测序(例如，通过使用寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针能够与编码抗HER2双互补位抗体的重链和轻链的基因特异性地结合)。

术语“基本上纯化的”是指本文所述的构建体或其变体，其可以基本上或实质上不含通常伴随蛋白质或与其相互作用的组分，如在其天然存在的环境中发现的，即天然细胞，或在重组产生的抗HER2双互补位抗体情况下的宿主细胞，在某些实施方案中，其基本上不含细胞材料，包括具有小于约30％、小于约25％、小于约20％、小于约15％、小于约10％、小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约2％或小于约1％(以干重计)的污染蛋白质。当抗HER2双互补位抗体由宿主细胞重组产生时，在某些实施方案中，蛋白质占细胞干重的约30％、约25％、约20％、约15％、约10％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％或更少。当双特异性抗HER2抗原结合构建体由宿主细胞重组产生时，在某些实施方案中，蛋白质以细胞干重的约5g/L、约4g/L、约3g/L、约2g/L、约1g/L、约750mg/L、约500mg/L、约250mg/L、约100mg/L、约50mg/L、约10mg/L或约1mg/L或更少存在于培养基中。在某些实施方案中，通过本文所述的方法产生的“基本上纯化的”双特异性抗HER2抗原结合构建体具有至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％的纯度水平，具体而言，至少约75％、80％、85％的纯度水平，更具体而言，至少约90％的纯度水平为、至少约95％的纯度水平、至少约99％的纯度水平或更高的纯度水平，如通过合适的方法(诸如SDS/PAGE分析、RP-HPLC、SEC和毛细管电泳)所测定。

适合于克隆或表达编码抗HER2双互补位抗体的载体的宿主细胞包括本文所述的原核或真核细胞。

“重组宿主细胞”或“宿主细胞”是指包括外源多核苷酸的细胞，与用于插入的方法(例如直接摄取、转导、f-交配或本领域已知用于产生重组宿主细胞的其他方法)无关。外源多核苷酸可以被保持为非整合载体，例如质粒，或者可替代地，可以被整合到宿主基因组中。

如本文所用，术语“真核生物”是指属于系统发育域真核生物的生物体，诸如动物(包括但不限于哺乳动物、昆虫、爬行动物、禽类等)、纤毛虫、植物(包括但不限于单子叶植物、双子叶植物、藻类等)、真菌、酵母、鞭毛虫、微孢子虫、原生生物等。

如本文所用，术语“原核生物”是指原核生物体。例如，非真核生物体可以属于真细菌(包括但不限于大肠杆菌(Escherichia coli)、嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)、嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、恶臭假单胞菌(Pseudomonasputida)等)系统发育域，或古细菌(包括但不限于詹氏甲烷球菌(Methanococcusjannaschii)、嗜热自养甲烷杆菌(Methanobacterium thermoautotrophicum)、盐杆菌属(Halobacterium)(诸如沃氏盐杆菌(Haloferax volcanii)和盐杆菌属物种(Halobacterium species)NRC-1)、闪烁古球菌(Archaeoglobus fulgidus)、激烈火球菌(Pyrococcus furiosus)、霍氏火球菌(Pyrococcus horikoshii)、嗜热泉生古细菌(Aeuropyrum pernix)等)系统发育域。

例如，特别是当不需要糖基化和Fc效应子功能时，可以在细菌中产生抗HER2双互补位抗体。关于抗HER2双互补位抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见例如美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。(还参见Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,N.J.,2003),第245-254页，描述了抗体片段在大肠杆菌中的表达。)在表达后，双特异性抗HER2抗原结合构建体可在可溶性部分中从细菌细胞糊中分离并可进一步纯化。

除了原核生物之外，真核微生物(诸如丝状真菌或酵母)也是编码双特异性抗HER2抗原结合构建体的载体的合适克隆或表达宿主，包括糖基化途径已经“人源化”的真菌和酵母菌株，导致产生具有部分或完全人类糖基化模式的双特异性抗HER2抗原结合构建体。参见Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)和Li等人,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。

用于表达糖基化抗HER2双互补位抗体的合适宿主细胞也源自多细胞生物(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了许多杆状病毒株，它们可以与昆虫细胞结合使用，特别是用于草地贪夜蛾细胞(Spodoptera frugiperda)的转染。

也可以利用植物细胞培养物作为宿主。参见例如美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(描述了用于在转基因植物中产生抗原结合构建体的PLANTIBODIES^TM技术)。

也可以使用脊椎动物细胞作为宿主。例如，适合于悬浮生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例是由SV40(COS-7)转化的猴肾CV1细胞系；人胚胎肾细胞系(293或293细胞，例如Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977))；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠支持细胞(mouse sertoli cell)(TM4细胞，例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980))；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(HepG2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如例如Mather等人,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述；MRC 5细胞；和FS4细胞。其他有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR^-CHO细胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；以及骨髓瘤细胞系，诸如Y0、NS0和Sp2/0。关于适于抗原结合构建体生产的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,N.J.),第255-268页(2003)。

在一个实施方案中，通过包括以下的方法在稳定的哺乳动物细胞中产生本文所述的-HER2双互补位抗体：以预定比率用编码抗HER2双互补位抗体的核酸转染至少一种稳定的哺乳动物细胞；以及在至少一种哺乳动物细胞中表达核酸。在一些实施方案中，在瞬时转染实验中测定核酸的预定比率，以测定导致表达产物中抗HER2双互补位抗体百分比最高的输入核酸的相对比率。

在一些实施方案中，在稳定的哺乳动物细胞中产生抗HER2双互补位抗体，其中与单体重链或轻链多肽或其他抗体相比，至少一种稳定的哺乳动物细胞的表达产物包含更大百分比的所需糖基化抗HER2双互补位抗体。在一些实施方案中，通过液相色谱和质谱中的一者或两者来鉴定糖基化抗HER2双互补位抗体。

如果需要，抗HER2双互补位抗体可以在表达后纯化或分离。蛋白质可以以本领域技术人员已知的多种方式分离或纯化。标准纯化方法包括在大气压或在高压下使用诸如FPLC和HPLC的系统进行的色谱技术，包括离子交换、疏水相互作用、亲和、分子排阻或凝胶过滤以及反相色谱法。纯化方法还包括电泳、免疫学、沉淀、透析和层析聚焦技术。超滤和渗滤技术，连同蛋白质浓缩，也是有用的。如本领域众所熟知的，多种天然蛋白质结合Fc和抗体，并且这些蛋白质可用于纯化本文所述的抗HER2双互补位抗体。例如，细菌蛋白质A和G结合至Fc区。同样，该细菌蛋白质L结合至一些抗体的Fab区。纯化通常可以由特定的融合伴侣来实现。例如，如果采用GST融合物，可使用谷胱甘肽树脂纯化抗体，如果采用His标签，则可以使用Ni⁺²亲和色谱纯化抗体，或者如果使用Flag标签，则可以使用固定化抗Flag抗体纯化抗体。关于合适的纯化技术的一般指导，参见例如通过引用Protein Purification:Principles and Practice,第3版,Scopes,Springer-Verlag,NY,1994全部并入，其通过引用全部并入。必要的纯化程度将根据双特异性抗HER2抗原结合构建体的用途而变化。在一些情况下，不需要进行纯化。

在某些实施方案中，使用阴离子交换色谱纯化抗HER2双互补位抗体，所述阴离子交换色谱包括但不限于Q-琼脂糖凝胶、DEAE琼脂糖凝胶、poros HQ、poros DEAF、ToyopearlQ、Toyopearl QAE、Toyopearl DEAE、Resource/Source Q和DEAE、Fractogel Q和DEAE柱上的色谱。

在特定实施方案中，使用阳离子交换色谱纯化本文所述的抗HER2双互补位抗体，所述阳离子交换色谱包括但不限于SP-琼脂糖凝胶、CM琼脂糖凝胶、poros HS、poros CM、Toyopearl SP、ToyopearlCM、Resource/Source S和CM、Fractogel S和CM柱及它们的等同物和可比物。

此外，可以使用本领域已知的技术化学合成本文所述的抗HER2双互补位抗体构建体(例如，参见Creighton,1983,Proteins:Structures and Molecular Principles,W.H.Freeman&Co.,N.Y和Hunkapiller等人,Nature,310:105-111(1984))。例如，对应于多肽片段的多肽可以使用肽合成仪来合成。此外，如果需要，可以将非经典氨基酸或化学氨基酸类似物作为取代或添加引入多肽序列中。非经典氨基酸包括但不限于普通氨基酸的D-异构体、2,4二氨基丁酸、α-氨基异丁酸、4氨基丁酸、Abu、2-氨基丁酸、γ-Abu、ε-Ahx、6氨基己酸、Aib、2-氨基异丁酸、3-氨基丙酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、半胱氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、环己基丙氨酸、β-丙氨酸、氟代氨基酸、设计者氨基酸(designer amino acid)(诸如β-甲基氨基酸、Cα-甲基氨基酸、Nα-甲基氨基酸和一般氨基酸类似物)。此外，氨基酸可以是D(右旋)或L(左旋)。

翻译后修饰：

在某些实施方案中，本文所述的抗HER2双互补位抗体在翻译期间或之后被差异修饰。

如本文所用的术语“修饰”是指对给定多肽的任何改变，诸如对多肽长度、氨基酸序列、化学结构、共翻译修饰或多肽翻译后修饰的改变。形式“(修饰的)”术语是指所讨论的多肽被任选地修饰，即双特异性抗HER2抗原结合构建体的多肽可以被修饰或未被修饰。

术语“翻译后修饰”是指天然或非天然氨基酸在掺入多肽链后发生的任何修饰。仅举例来说，所述术语涵盖共翻译体内修饰、共翻译体外修饰(诸如在无细胞翻译系统中)、翻译后体内修饰和翻译后体外修饰。

在一些实施方案中，修饰是下列中的至少一种：糖基化、乙酰化、磷酸化、酰胺化、通过已知保护/阻断基团的衍生化、蛋白水解切割以及与抗体分子或抗HER2双互补位抗体或其他细胞配体的连接。在一些实施方案中，抗HER2双互补位抗体通过已知技术进行化学修饰，所述技术包括但不限于通过溴化氰、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶、V8蛋白酶、NaBH₄的特定化学切割；乙酰化、甲酰化、氧化、还原；和在衣霉素(tunicamycin)存在下的代谢合成。

抗HER2双互补位抗体的其他翻译后修饰包括例如N-连接或O-连接的碳水化合物链、N-末端或C-末端的加工、化学部分与氨基酸主链的附接、N-连接或O-连接的碳水化合物链的化学修饰以及由于原核宿主细胞表达而导致的N-末端甲硫氨酸残基的添加或缺失。本文所述的双特异性抗HER2抗原结合构建体用可检测标记修饰，诸如酶标记、荧光标记、同位素标记或亲和标记，以允许检测和分离蛋白质。在某些实施方案中，合适的酶标记的实例包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基复合物的实例包括链霉亲和素生物素和亲和素/生物素；合适的荧光材料的实例包括伞形酮(umbelliferone)、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明(rhodamine)、二氯三嗪胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白(phycoerythrin)；发光材料的实例包括鲁米诺(luminol)；生物发光材料的实例包括荧光素酶、荧光素和水母发光蛋白(aequorin)；合适的放射性材料的实例包括碘、碳、硫、氚、铟、锝、铊、镓、钯、钼、氙、氟。

在特定实施方案中，本文所述的抗HER2双互补位抗体附接至与放射性金属离子缔合的大环螯合剂。

在一些实施方案中，本文所述的抗HER2双互补位抗体通过天然过程(诸如翻译后加工)或通过本领域熟知的化学修饰技术进行修饰。在某些实施方案中，相同类型的修饰可在给定多肽的几个位点以相同或不同程度存在。在某些实施方案中，本文所述的来自抗HER2双互补位抗体的多肽是分支的，例如由于泛素化，并且在一些实施方案中是环状的，有或没有分支。环状、分支和分支环状多肽是翻译后自然过程的结果或通过合成方法制备的。修饰包括乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价附接、血红素部分的共价附接、核苷酸或核苷酸衍生物的共价附接、脂质或脂质衍生物的共价附接、磷脂酰肌醇的共价附接、交联、环化、二硫键形成、去甲基化、共价交联体的形成、半胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、甲酰化、γ-羧基化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘化、甲基化、十四烷基化、氧化、聚乙二醇化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊烯化、外消旋化、硒酰化(selenoylation)、硫酸化、转移-RNA介导的向蛋白质添加氨基酸诸如精氨酸化和泛素化。(参见，例如PROTEINS--STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES,第2版,T.E.Creighton,W.H.Freeman andCompany,New York(1993)；POST-TRANSLATIONAL COVALENT MODIFICATION OF PROTEINS,B.C.Johnson编,Academic Press,New York,第1-12页(1983)；Seifter等人,Meth.Enzymol.182:626-646(1990)；Rattan等人,Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48-62(1992))

药物组合物

对于治疗用途，抗HER2双互补位抗体可以以包含抗体和药学上可接受的载剂或稀释剂的组合物的形式提供。所述组合物可以使用熟知且容易获得的成分通过已知程序制备。

可将药物组合物配制成用于通过例如口服(包括例如经颊或舌下)、局部、肠胃外、直肠或阴道途径，或通过吸入或喷雾施用于受试者。如本文所用的术语“肠胃外”包括皮下注射，以及皮内、关节内、静脉内、肌肉内、血管内、胸骨内、鞘内注射或输注。药物组合物通常将配制成适于通过选择的途径施用于受试者的形式，例如呈糖浆剂、酏剂、片剂、糖锭剂、锭剂、硬胶囊或软胶囊、丸剂、栓剂、油性或水性混悬剂、可分散性粉剂或颗粒剂、乳液、注射剂或溶液剂的形式。药物组合物可以作为单位剂量制剂提供。

在某些实施方案中，将包含抗HER2双互补位抗体的药物组合物配制成用于以可注射形式，例如作为冻干制剂或水溶液进行肠胃外施用。

药学上可接受的载剂在所采用的剂量和浓度下通常对接受者无毒。此类载剂的实例包括但不限于：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，如抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂，如氯化十八烷基二甲基苯甲基铵、氯化六烃季铵、苯扎氯铵、苄索氯铵、苯酚、丁醇、苯甲醇、对羟基苯甲酸烷基酯(如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯)、儿茶酚、间苯二酚、环己醇、3-戊醇和间甲酚；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白或明胶；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖及其他碳水化合物，如葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物，如Zn-蛋白质络合物；和非离子型表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)。

在某些实施方案中，包含抗HER2双互补位抗体的组合物可以是无菌可注射水性或油性溶液剂或混悬剂的形式。此类混悬剂可以使用本领域已知的合适的分散剂或润湿剂和/或悬浮剂配制。无菌注射溶液剂或混悬剂可以包含在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或载剂中的抗HER2双互补位抗体。可采用的可接受的稀释剂和载剂包括例如1,3-丁二醇、水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液或葡萄糖。另外，可以将无菌的不挥发性油用作载剂。为此，可以采用各种温和的不挥发性油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。另外，诸如油酸的脂肪酸可用于制备注射剂。佐剂，诸如局部麻醉剂、防腐剂和/或缓冲剂也可以包含在可注射溶液或混悬液中。

在某些实施方案中，包含抗HER2双互补位抗体的组合物可以配制用于静脉内施用于人。通常，静脉内施用的组合物是无菌等渗水溶液中的溶液，例如含有氯化钠或葡萄糖的溶液。必要时，组合物还可以包含增溶剂和/或局部麻醉剂，诸如利多卡因(lignocaine)，以减轻注射部位的疼痛。通常，将成分分开提供或以单位剂型混合在一起，例如，作为干燥的冻干粉或无水浓缩物在指示活性剂的量的密闭容器(诸如安瓿或小药囊)中提供。当组合物需通过输注施用时，可以用含有无菌药物级水、盐水或葡萄糖的输液瓶分配。当通过注射施用组合物时，可以提供一安瓿的无菌注射用水或盐水，以便可以在施用之前将成分混合。

其它药物组合物和制备药物组合物的方法是本领域已知的，并且例如在“Remington:The Science and Practice of Pharmacy”(原名“RemingtonsPharmaceutical Sciences”)；Gennaro,A.,Lippincott,Williams&Wilkins,Philadelphia,PA(2000)中有描述。

使用方法

本公开的某些方面涉及通过施用有效量的如本文所述的抗HER2双互补位抗体来治疗受试者中表达HER2的癌症的方法。

表达HER2的癌症通常是实体瘤。表达HER2的实体瘤的实例包括但不限于乳腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、胃癌、食管癌、结直肠癌、肛门癌、尿路上皮癌、胰腺癌、唾液腺癌和脑癌。表达HER2的乳腺癌包括雌激素受体阴性(ER-)和/或孕激素受体阴性(PR-)乳腺癌和三阴性(ER-、PR-、低HER2)乳腺癌。表达HER2的肺癌包括非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌。

在某些实施方案中，本文所述的方法用于治疗表达HER2的实体瘤。在一些实施方案中，本文所述的方法用于治疗表达HER2的乳腺癌、胃食管腺癌(GEA)、食管癌、子宫内膜癌、卵巢癌、宫颈癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肛门癌或结直肠癌(CRC)。

在某些实施方案中，本文所述的方法用于治疗转移性或局部晚期的表达HER2的癌症。在一些实施方案中，本文所述的方法用于治疗已转移至脑的表达HER2的癌症。在某些实施方案中，本文所述的方法用于表达HER2的癌症的一线治疗。在某些实施方案中，本文所述的方法用于表达HER2的癌症的二线治疗。

如本领域中已知的，表达HER2的癌症可以通过它们所表达的HER2的水平(即，通过“HER2状态”)来表征。HER2状态可以通过例如免疫组织化学(IHC)、荧光原位杂交(FISH)和显色原位杂交(CISH)或DNA原位杂交(ISH，例如DNAscope^TM)来评估。许多商业试剂盒可用于评估患者的HER2状态。FDA批准的可用于使用IHC进行HER2检测的商业试剂盒的实例包括HercepTest^TM(Dako Denmark A/S)；PATHWAY(Ventana Medical Systems,Inc.)；InSite^TMHER2/NEU试剂盒(Biogenex Laboratories,Inc.)和Bond Oracle HER2 IHC系统(Leica Biosystems.

IHC鉴定细胞膜上的HER2蛋白表达。例如，来自肿瘤活检的石蜡包埋的组织切片可以进行IHC测定，并且符合HER2染色强度标准，如下所示：

评分0：未观察到染色或在少于10％的肿瘤细胞中观察到膜染色；通常<20,000个受体/细胞。

评分1+：在超过10％的肿瘤细胞中检测到微弱的/几乎不可感知的膜染色。细胞仅在其部分膜上染色。通常约100,000个受体/细胞。

评分2+：在超过10％的肿瘤细胞中观察到弱到中度的完整膜染色；通常约500,000个受体/细胞。

评分3+：在超过10％的肿瘤细胞中观察到中度至强烈的完整膜染色；通常约2,000,000个受体/细胞。

本文所述的抗HER2双互补位抗体可用于治疗以不同水平表达HER2的癌症的方法中。在某些实施方案中，根据本公开的治疗表达HER2的癌症的方法包括向患有表达高水平HER2(HER2-高)的定义为IHC 3+的癌症的受试者施用本文所述的抗HER2双互补位抗体。在一些实施方案中，根据本公开的治疗表达HER2的癌症的方法包括向患有表达高水平HER2(高-HER2)的定义为IHC 2+、IHC 2+/3+或IHC 3+的癌症的受试者施用本文所述的抗HER2双互补位抗体。在一些实施方案中，根据本公开的治疗表达HER2的癌症的方法包括向患有表达低水平HER2(低-HER2)的定义为IHC 1+或IHC 1+/2+的癌症的受试者施用本文所述的抗HER2双互补位抗体。在某些实施方案中，癌症具有扩增的可使用FISH分析或ISH分析检测到的HER2基因。在某些实施方案中，癌症根据IHC所测定是HER2 3+，根据FISH测定或ISH测定所检测不具有HER2基因扩增。在某些实施方案中，癌症根据IHC所测定是HER2 2+，并且根据FISH测定所测定具有HER2基因扩增。在某些实施方案中，癌症根据IHC所测定是HER2 2/3+，并且根据FISH测定或ISH测定所测定具有HER2基因扩增。

在某些实施方案中，本文所述的方法用于患有表达HER2的癌症的受试者的一线治疗。在某些实施方案中，本文所述的方法用于患有表达HER2的癌症的受试者的二线治疗。

在某些实施方案中，本文所述的方法用于治疗患有对其他标准护理疗法具有耐药性或正变得对其他标准护理疗法具有耐药性的表达HER2的癌症的受试者。在一些实施方案中，本文所述的方法用于治疗对一种或多种当前疗法无反应的患有表达HER2的癌症的受试者，所述一种或多种当前疗法诸如曲妥珠单抗帕妥珠单抗/>T-DM1(/>或恩美曲妥珠单抗(trastuzumab emtansine))、Enhertu^TM(德曲妥珠单抗(fam-trastuzumab deruxtecan-nxki))或紫杉烷类(诸如紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、卡巴他赛(cabazitaxel)等)。在一些实施方案中，本文所述的方法用于治疗患有对曲妥珠单抗具有耐药性的表达HER2的癌症的受试者。在一些实施方案中，本文所述的方法用于治疗患有在先前的抗HER2疗法中已取得进展的转移性癌症的受试者。在一些实施方案中，本文所述的方法用于治疗先前经历用曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、T-DM1和Enhertu^TM(德曲妥珠单抗)中的一者或多者治疗的受试者。

在某些方面，治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法包括向受试者施用有效量的抗HER2双互补位抗体，其中以固定时间间隔以固定剂量向受试者施用有效量。

在方法的某些实施方案中，固定剂量选自体重小于剂量截止体重的受试者的低固定剂量和体重大于剂量截止体重的受试者的较高固定剂量。

在方法的某些实施方案中，低固定剂量为约600mg，并且高固定剂量为约800mg，剂量截止体重为70kg，并且固定时间间隔为每周一次(QW)。

在方法的某些实施方案中，低固定剂量为约800mg，并且高固定剂量为约1200mg，剂量截止体重为70kg，并且固定时间间隔为每周一次(QW)。

在方法的某些实施方案中，低固定剂量为约800mg，并且高固定剂量为约1000mg，剂量截止体重为70kg，并且固定时间间隔为每周一次(QW)。

在方法的某些实施方案中，低固定剂量为约1800mg，并且高固定剂量为约2200mg，剂量截止体重为70kg，并且固定时间间隔为每2周一次(Q2W)。

在方法的某些实施方案中，低固定剂量为约1200mg，并且高固定剂量为约1600mg，剂量截止体重为70kg，并且固定时间间隔为每2周一次(Q2W)。

在方法的某些实施方案中，低固定剂量为约1200mg，并且高固定剂量为约1800mg，剂量截止体重为70kg，并且固定时间间隔为每3周一次(Q3W)。

在方法的某些实施方案中，低固定剂量为约1800mg，并且高固定剂量为约2400mg，剂量截止体重为70kg，并且固定时间间隔为每3周一次(Q3W)。

在方法的某些实施方案中，施用于受试者的抗HER2双互补位抗体包含(a)第一抗原结合结构域，其包含如SEQ ID NO:32、34和33以及SEQ ID NO:22、24和23中所示的CDR序列，和(b)第二抗原结合结构域，其包含如SEQ ID NO:53、54和55以及SEQ ID NO:56、57和58中所示的CDR序列。

在方法的一些实施方案中，施用于受试者的抗HER2双互补位抗体的第一抗原结合结构域是Fab，并且施用于受试者的抗HER2双互补位抗体的第二抗原结合结构域是scFv。

在方法的某些实施方案中，施用于受试者的抗HER2双互补位抗体包含含有SEQ IDNO.30中所示的序列的重链H1、含有SEQ ID NO:50中所示的序列的重链H2和含有SEQ IDNO.20中所示的序列的轻链L1。

在方法的某些实施方案中，表达HER2的癌症是实体瘤。

在方法的某些实施方案中，表达HER2的癌症表达HER2的癌症是乳腺癌、胆道癌、胃食管腺癌(GEA)、食管癌、胃食管癌(GEJ)、胃癌、子宫内膜癌、卵巢癌、宫颈癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肛门癌或结直肠癌(CRC)。

在方法的某些实施方案中，表达HER2的癌症表达HER2的癌症是胃食管腺癌(GEA)。

在方法的某些实施方案中，受试者已接受用曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、T-DM1或Enhertu^TM(德曲妥珠单抗)中的一者或多者进行的先前治疗。

在方法的某些实施方案中，受试者未接受过用抗HER2靶向疗法进行的先前治疗。

在方法的某些实施方案中，受试者未接受过用针对所治疗的表达HER2的癌症的化疗剂进行的先前全身性治疗。

在方法的某些实施方案中，表达HER2的癌症是转移性的。

在方法的某些实施方案中，表达HER2的癌症是局部晚期的。

在方法的某些实施方案中，表达HER2的癌症根据免疫组织化学(IHC)所测量是HER2 3+、HER2 2+/3+或HER2 2+或HER2 1+，并且根据荧光原位杂交(FISH)所测量是基因扩增的。

在方法的某些实施方案中，表达HER2的癌症根据免疫组织化学(IHC)所测量是HER2 3+、HER2 2+/3+或HER2 2+或HER2 1+，根据荧光原位杂交(FISH)所测量不具有HER2基因扩增。

在方法的某些实施方案中，表达HER2的癌症根据IHC所测量是HER2 3+或根据FISH所测量是HER2 2+和基因扩增的。

本公开的另一个方面是用于治疗表达HER2的癌症的抗HER2双互补位抗体，其中抗体的有效剂量是分级固定剂量，所述分级固定剂量包括用于体重小于剂量截止体重的受试者的低固定剂量和用于体重大于剂量截止体重的受试者的高固定剂量。在某些实施方案中，低固定剂量为约800mg，并且高固定剂量为约1200mg，剂量截止体重为70kg，并且固定时间间隔为每周一次(QW)。在一些实施方案中，低固定剂量为约1200mg，并且高固定剂量为约1600mg，剂量截止体重为70kg，并且固定时间间隔为每2周一次(Q2W)。在一些实施方案中，低固定剂量为约1800mg，并且高固定剂量为约2400mg，剂量截止体重为70kg，并且固定时间间隔为每3周一次(Q3W)。在一些实施方案中，抗体是v10000。

在另一个方面，本公开涉及一种治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法，其包括向受试者施用有效量的抗HER2双互补位抗体，所述有效量包括向体重小于70kg的受试者施用1800mg的固定剂量，或向体重为70kg或更重的受试者施用2400mg的固定剂量，其中所述剂量每3周一次(Q3W)施用，其中所述受试者已被诊断患有乳腺癌，胃食管腺癌(GEA)、食管癌、胃癌、子宫内膜癌、卵巢癌、宫颈癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肛门癌或结直肠癌(CRC)。

应当理解，本文所述的给药方案是施用抗HER2双互补位抗体的推荐剂量，但是如果受试者在治疗中出现不良副作用，可以减少施用剂量。类似地，为了方便起见，可以稍微改变给药之间的固定间隔。

组合疗法

在2级给药方案的情形中，各种化疗方案可与抗HER2双互补位抗体结合使用。在某些实施方案中，根据所用化疗剂的批准剂量和给药时间表来施用化疗方案。在一些实施方案中，出于耐受性的原因，在第一个治疗周期后可以减少化疗剂的剂量。

在某些实施方案中，化疗方案包含紫杉醇、卡培他滨、mFOLFOX6(氟尿嘧啶+甲酰四氢叶酸+奥沙利铂)、氟维司群(fulvestrant)+帕博西利布(palbociclib)、卡培他滨+奥沙利铂(CAPOX；也称为XELOX)、长春瑞滨(vinorelbine)和顺铂+氟尿嘧啶(FP)。

CAPOX(也称为XELOX)是由卡培他滨和奥沙利铂组成的多药剂化疗方案。XELOX已被确立为治疗各种GEA的有效细胞毒性方案，包括结直肠癌和结肠癌以及晚期胆道系统腺癌。CAPOX也用作辅助疗法。

在某些实施方案中，使用以下剂量和时间表将抗HER2双互补位抗体与CAPOX联合施用：

(a)抗HER2双互补位抗体以1800mg(受试者<70kg)或2400mg(受试者≥70kg)IVQ3W的剂量施用；每个21天周期的第1天；

(b)CAPOX如下施用：在每个21天周期的第1-14天，卡培他滨1,000mg/m2 PO bid(每日总剂量为2000mg/m2)，加在每个21天周期的第1天，奥沙利铂130mg/m2 IV Q3W给药。

FP是由5-FU和顺铂组成的多药剂化疗方案。FP已被确立为治疗胃癌的有效细胞毒性方案，并且也用作新辅助/辅助疗法。FP联合曲妥珠单抗HER2阳性晚期胃癌或GEJ癌在一项3期开放标签随机对照试验中进行了评估，并且目前被视为HER2过表达胃食管癌中联合曲妥珠单抗的一线化疗的标准。在某些实施方案中，使用以下剂量和时间表将抗HER2双互补位抗体与FP结合施用：

(b)FP如下施用：每个21天周期的第1-5天，5-FU 800mg/m2/天连续IV输注，加在每个21天周期的第1天，顺铂80mg/m2 IV Q3W。

mFOLFOX6是由奥沙利铂、甲酰四氢叶酸和5-FU组成的多药剂化疗方案。mFOLFOX已被确立为有效的细胞毒性方案，在各种癌症中具有可管理的安全性。在某些实施方案中，使用以下剂量和时间表将抗HER2双互补位抗体与mFOLFOX6结合施用：

(a)抗HER2双互补位抗体以1200mg(受试者<70kg)或16000mg(受试者≥70kg)IVQ2W的剂量施用；每个28天周期的第1天和第15天；

(b)mFOLFOX6如下施用：在每个28天周期的第1天和第15天，400mg/m2 IV推注、甲酰四氢叶酸400mg/m2 IV和奥沙利铂85mg/m2 IV Q2W；在每个28天周期的第1天和第2天以及第15天和第16天，在大约46小时至48小时Q2W内每天5-FU 1200mg/m2 IV持续输注，总计2400mg/m2。

其他联合疗法

帕博西利布是CDK4和CDK6的抑制剂。细胞周期蛋白D1和CDK4/6是导致细胞增殖的信号传导途径的下游。在体外，帕博西利布通过阻断细胞从G1进展为细胞周期的S期来减少雌激素受体(ER)阳性乳腺癌细胞系的细胞增殖。帕博西利布被批准用于与氟维司群联合治疗内分泌疗法后疾病进展的患者的激素受体(HR)阳性、HER2阴性的晚期或转移性乳腺癌。帕博西利布的推荐剂量为每天一次(QD)随食物口服(PO)125mg胶囊，连续服用21天，然后在28天治疗周期期间停止治疗7天

氟维司群是雌激素受体(ER)拮抗剂，其以竞争性方式与ER结合，亲和力与雌二醇相当，并且下调人类乳腺癌细胞中的ER蛋白。氟维司群被批准用于与帕博西利布联合治疗内分泌疗法后疾病进展的患者的HR阳性、HER2阴性晚期或转移性乳腺癌。氟维司群的推荐剂量是500mg，以两次5mL注射缓慢(每次注射1分钟至2分钟)IM施用于半边臀部(臀肌区域)，在第1天、第15天和第29天在半边臀部各一次，并且此后每月一次

在某些实施方案中，根据上述给药方案，将双互补位抗HER2抗体与帕博西利布和氟维司群联合施用。

本公开的某些方面涉及一种通过与检查点抑制剂联合施用有效量的如本文所述的抗HER2双互补位抗体来治疗受试者中表达HER2的癌症的方法。在某些实施方案中，检查点抑制剂是PD-1抑制剂，例如抗PD-1抗体。抗PD-1抗体的实例包括但不限于派姆单抗(pembrolizumab)纳武单抗/>西米普利单抗(cemiplimab)JTX-4014(Jounce Therapeutics)、斯巴达珠单抗(spartalizumab)(PDR001)(Novartis)、卡瑞利珠单抗(camrelizumab)(SHR1210)(Jiangsu HengRui Medicine Co.,Ltd.)、信迪利单抗(sinitilimab)(Innovent,Eli-Lilly)、替雷利珠单抗(tislelizumab)(BGB-A317)(Beigene)、特瑞普利单抗(toripalimab)(JS 001)(Junshi Biosciences)、多塔利单抗(dostarlimab)(GlaxoSmithKline)、INCMGA00012(MGA012)(Incyte,MacroGenics)、AMP-224(AstraZeneca/MedImmune和GlaxoSmithKline)和AMP-514(MEDI0680)(AstraZeneca)。

某些实施方案涉及通过与抗PD-1抗体联合施用有效量的如本文所述的抗HER2双互补位抗体来治疗受试者中表达HER2的癌症的方法。某些实施方案涉及通过与替雷利珠单抗联合施用有效量的如本文所述的抗HER2双互补位抗体来治疗受试者中表达HER2的癌症的方法。在某些实施方案中，替雷利珠单抗以200mg(独立于受试者体重)Q3W的定量剂量施用。在某些实施方案中，通过与派姆单抗联合施用有效量的如本文所述的抗HER2双互补位抗体来治疗受试者中表达HER2的癌症。在某些实施方案中，以200mg Q3W或400mg Q6W的定量剂量施用派姆单抗。

在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体将与抗PD-1抗体联合使用，以1800mg(受试者体重小于70kg)或2400mg(受试者体重大于或等于70kg)的剂量施用并在21天周期的第1天施用，并且替雷利珠单抗以200mg(独立于受试者体重)Q3W的固定剂量施用。

某些实施方案涉及通过与抗CD47抗体或CD47阻断剂联合施用有效量的如本文所述的抗HER2双互补位抗体来治疗受试者中表达HER2的癌症的方法。CD47是用作自身的标志物的广泛表达的细胞表面蛋白。CD47提供区分存活/健康细胞与凋亡/异常细胞的“不要吃我(don’t eat me)”的抗吞噬信号。SIRPα是巨噬细胞上的CD47受体。CD47与这种受体结合抑制健康细胞的吞噬作用，而显示低水平CD47的细胞易受巨噬细胞介导的破坏。肿瘤细胞过度表达CD47以逃避免疫监视的巨噬细胞组分，并且在多种血液肿瘤和实体瘤中观察到大量的CD47表达。在某些实施方案中，抗HER2双受体抗体与evorpacept(ALX148)(一种阻断CD47的骨髓检查点抑制剂)联合施用，其中evorpacept以10mg/kg体重QW或30mg/kg体重Q2W的基于体重的剂量施用。在某些实施方案中，抗HER2双互补位抗体v10000使用2级定量给药方案施用，其中低固定剂量为1800mg并且高固定剂量为2400mg，并且剂量截止体重为70kg(Q3W)。

某些实施方案涉及通过与具有不同作用机制的另一种抗HER2剂联合施用有效量的如本文所述的抗HER2双互补位抗体来治疗受试者中表达HER2的癌症的方法。在某些实施方案中，抗HER2双受体抗体与图卡替尼(Tucatinib)(一种HER2蛋白酪氨酸激酶抑制剂的口服药物)联合施用。在某些实施方案中，以300mg/剂每日两次口服施用图卡替尼。

药物药盒

某些实施方案提供了包含如本文所述的抗HER2双互补位抗体的药物药盒。

药盒通常将包含一个或多个容器和在所述容器上或与所述容器相关联的标签和/或药品说明书。标签或药品说明书含有通常在治疗产品的商业包装中包括的说明，提供了关于使用此类治疗产品的适应症、用法、剂量、施用、禁忌症和/或警告的信息。例如，标签或药品说明书可指出抗HER2双互补位抗体以约1800mg的固定剂量(对于体重小于70kg的受试者)或2400mg的固定剂量(对于体重大于或等于70kg的受试者)进行Q3W施用；或以1200mg的固定剂量(对于体重小于70kg的受试者)或1600mg的固定剂量(对于体重大于等于70kg的受试者)进行Q2W施用。

药盒可包含含有1800mg v10000的容器。药盒可包含含有2400mg v10000的容器。药盒可包含六个容器，每个容器包含300mg v10000，以及一份药品说明书，其指出这六个小瓶将用于治疗体重小于70kg的受试者。药盒可包含八个容器，每个容器包含300mg v10000，以及一份药品说明书，其指出这八个小瓶将用于治疗体重为70kg或更重的受试者。药盒可包含三个容器，每个容器包含600mg v10000，以及一份药品说明书，其指出这三个容器将用于治疗体重小于70kg的受试者。药盒可包含四个容器，每个容器包含600mg v10000，以及一份药品说明书，其指出这六个容器将用于治疗体重为70kg或更重的受试者。

药物药盒的标签或药品说明书可指示抗HER2双互补位抗体用于治疗表达HER2的癌症，其可包括乳腺癌、胆道癌、胃食管腺癌(GEA)、胃食管接合部癌(GEJ)、胃癌、子宫内膜癌、卵巢癌、宫颈癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肛门癌或结直肠癌(CRC)。

药物药盒的标签或药品说明书可指示所治疗的表达HER2的癌症是转移性的或局部晚期的。

药物药盒的标签或药品说明书可指示抗HER2双互补位抗体适用于与抗PD-1抗体联合施用。

药物药盒的标签或药品说明书可指示抗HER2双互补位抗体适用于与mFOLFOX6(5-FU和甲酰四氢叶酸加奥沙利铂)、CAPOX(卡培他滨加奥沙利铂)或FP(氟尿嘧啶[5-FU]加顺铂)联合施用。

药物药盒的标签或药品说明书可指示抗HER2双互补位抗体适用于与另一种抗HER2剂(任选地图卡替尼)联合施用。

标签或药品说明书还可包括管制药品或生物制品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的公告，所述公告反映了制造机构对人或动物施用的使用或销售的批准。标签或药品说明书还指示抗HER2双互补位抗体用于治疗表达HER2的癌症。所述容器装有包含抗HER2双互补位抗体的组合物，并且在一些实施方案中可以具有无菌入口(例如，所述容器可以是具有皮下注射针头可刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶)。

除了装有包含抗HER2双互补位抗体的组合物的容器之外，药盒还可包含一个或多个另外的包含药盒其他组分的容器。例如，药学上可接受的缓冲液，诸如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液(Ringer’s solution)或右旋糖溶液；其他缓冲液或稀释剂。

合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器和静脉内溶液袋等。所述容器可由各种材料诸如玻璃或塑料制成。在适当的情况下，药盒的一种或多种组分可以是冻干的或以干燥形式(诸如粉末或颗粒)提供，并且药盒可以另外含有用于重构冻干或干燥的组分的合适溶剂。

药盒还可以包括在商业和使用者看来所需的其它材料，诸如过滤器、针头和注射器。

提供以下实施例是为了说明的目的而非意图以任何方式限制本发明的范围。

实施例

实施例1：变体10000(V10000)的描述和制备

v10000是一种人源化双特异性抗体，其可识别人类HER2抗原的ECD的2个非重叠表位。v 10000的IgG1样Fc区在每个CH3结构域中含有互补突变，这些突变赋予优先配对以产生异二聚体分子，并且相应地不利于同二聚体的形成。图1描述了v10000的形式，其中重链A和轻链A’形成抗体的ECD2结合部分，并且重链B包含形成抗体的ECD4结合部分的scFv。变体10000包含含有SEQ ID NO:30中所示的序列的重链H1(对应于图1中的重链A)、含有SEQ IDNO:50中所示的序列的重链H2(对应于图1中的重链B)和含有SEQ ID NO:20中所示的序列的轻链L1(对应于轻链A’)。国际专利公布号WO 2015/077891中详细描述了制备v10000的方法。

v10000是根据人体试验的相关监管要求生产的，并且在生物相容性水性缓冲液中以15mg/mL配制，用于在环境温度下IV输注。v10000装在小瓶中，所述小瓶中含有20mL缓冲液中的300mg v10000。将v10000的小瓶冷冻装运并储存在-20℃(/-5℃)下直至备用。小瓶在使用前在环境温度下解冻。小瓶中解冻的溶液在环境温度下可储存长达24小时，在冷藏条件下(2℃至8℃)可储存长达72小时，并且在标注的有效期前使用。

实施例2：v10000的药代动力学建模

使用群体PK建模来模拟根据抗体的几种剂量方案静脉注射的受试者中抗HER2抗体v10000的暴露量(图2)：(A)10mg/kg QW；(B)20mg/kg Q2W和(C)30mg/kg Q3W。

为了提高护理人员的便利性并减少药品的浪费，通过使用群体PK模型进行模拟来评估v10000的定量(或固定)给药。使用体重协变量的幂模型对中央隔室体积和间隙估计体重对暴露量的影响。

通过基于体重的给药和定量给药使用群体PK模型模拟比较v10000的变异性。图3显示了基于v10000的Q3W施用的诊断为GEA的受试者中基于体重的给药(A)、定量给药(B)和两级定量给药(C)的模型预测的稳态谷浓度的比较。

定量给药(CV：43.5％)和基于体重的给药(CV：43.4％)产生了相似的稳态谷浓度变化。基于群体PK模拟，较高的体重在体重比例给药时往往具有更高的暴露量，而较低的体重在定量给药时具有更高的暴露量(图3)。与单级定量给药和/或基于体重的给药相比，基于体重的给药与利用体重截止点为70千克(<70kg，≥70kg)的两级定量剂量的定量给药之间的混合方法可能会导致体重之间更一致的暴露量。

通过从参与四项临床试验的305名受试者的观察协变量中取样，并且从模型拟合的个体间变异性和固定效应不确定性中取样，根据群体PK模型模拟药物暴露量。

实施例3：v10000的体内药代动力学

表8中显示了v10000的药代动力学参数，对于体重小于70kg的临床试验受试者，以30mg/kg Q3W的基于体重的给药方案或1800mg的两级固定(定量)给药方案施用；对于体重为70kg或更重的受试者，以2400mg施用。可以看出，基于体重的给药方案和定量给药方案产生了相似的药代动力学。表8中显示了v10000的药代动力学参数，对于体重小于70kg的受试者，以20mg/kg Q2W的基于体重的给药方案或1200mg的两级固定(定量)给药方案施用；对于体重为70kg或更重的受试者，以1600mg施用。同样，基于体重的给药方案和定量给药方案产生了相似的药代动力学。

表8 v10000^g*的药代动力学参数

C_max＝血清或血浆中药物的最大观察浓度；C_谷＝给药间隔结束时观察到的浓度；t_1/2＝通过将自然对数2除以终末消除速率常数计算的药物在血清或血浆中的终末半衰期的估计值；AUC_0-t＝从时间零至时间t的AUC；AUC_0-∞＝从时间零至无穷大的AUC；CL＝血清清除率；Vz＝终末消除阶段。

a.非GEA(乳腺癌、结直肠癌、胆道癌和所有其他疾病)

b.转移性胃/胃食管接合部腺癌

c.转移性胃/胃食管接合部腺癌

d.转移性乳腺癌

e.转移性胃/胃食管接合部腺癌

f.转移性胃/胃食管接合部腺癌

g.*数值表示为几何平均值(变异系数)

实施例4：使用基于体重的给药方案和2级固定给药方案给予v100000的受试者的抗肿瘤效果

正在进行抗HER2双互补位抗体v10000(见实施例1)作为患有局部晚期(不可切除)和/或转移性表达HER2的胃肠癌的患者的一线治疗的2期临床研究。

这是一项多中心、全球性、2期、开放标签、一线、2部分研究，旨在调查v10000的安全性、耐受性和抗肿瘤活性，v10000是一种抗HER2双互补位抗体(见实施例1)加上医生选择的联合化疗。医生选择的联合化疗包括3种全球公认的多药剂一线治疗：

(1)XELOX，其由卡培他滨加奥沙利铂组成。

正在测试XELOX和v10000组合的三种变体(XELOX-1、XELOX-2和XELOX-3)。这些变体在v10000方案中有所不同。

(2)FP，其由氟尿嘧啶(5-FU)加顺铂组成

正在测试FP和v10000组合的两种变体(FP-1和FP-2)。这些变体在v10000方案中有所不同；以及

(3)mFOLFOX6，其由5-FU和甲酰四氢叶酸加奥沙利铂组成

正在测试mFOLFOX6和v10000组合的两种变体(mFOLFOX6-1和mFOLFOX6-2)。这些变体的不同之处在于每个4周治疗周期的第1天和第15天存在(mFOLFOX6-1)或不存在(mFOLFOX6-2)5-FU推注，以及v10000剂量(基于体重的剂量相比于定量剂量)。

研究设计的示意图如图4中所示。为了符合研究资格，受试者必须患有不可切除的局部晚期或转移性GEA、GEJ或胃癌，并且没有接受先前HER2靶向疗法。根据基于体重的给药方案或两级定量给药方案施用变体10000。研究的第1部分使用了HER2状态的本地或中央评估，并且允许HER2 IHC 3+或IHC 2+而不管HER2 FISH状态如何。第2部分仅包括患有HER2阳性癌症的受试者(IHC 3+或IHC 2+/FISH+)。

截至数据截止日期，共有三十六名受试者参加了研究，其中9名患有食管癌，14名患有胃食管接合部癌，13名患有胃癌。年龄中位数为58岁，范围为27-77岁。

CAPOX+z队列在21周期期间接受：第1-15天，卡培他滨1,000mg/m2 PO BID；第1天，奥沙利铂130mg/m² IV Q3W，以及第1天，v10000，基于体重的剂量为30mg/kg，或2级定量剂量由1800mg(对于低于70kg的受试者)和2400mg(对于70kg或以上的受试者)组成。

FP队列在21天的周期期间接受：第1天，顺铂80mg/m2 IV Q3W；连续第1-5天，5-FU800mg/m2/天IV，以及第11天，v10000，基于体重的剂量为30mg/kg，或2级定量剂量由1800m(对于低于70kg的受试者)和2400mg(对于70kg或以上的受试者)组成。

mFOLFOX6-1队列在28天的周期期间接受：第1天、第15天，甲酰四氢叶酸400mg/m2IV Q2W；第1天、第15天，奥沙利铂85mg/m2 IV Q2W；连续第1-2天和第15-16天，5-FU1200mg/m2/天IV，以及第1天、第15天，400mg/m2 IV Q2W；以及第1天、第15天，v10000，基于体重的剂量为20mg/kg，或2级定量剂量由1200mg(对于低于70kg的受试者)和1600mg(对于70kg或以上的受试者)组成。

mFOLFOX6-2方案与mFOLFOX6-1方案相同，但省略了第1天和第15天的5-FU 400mg/m2 IV Q2W剂量。

研究的第1部分集中在安全性和剂量限制毒性(DLT)上。观察到以下情况：V10000+CAPOX在6名受试者中未导致DLT。V10000+FP在2名受试者中导致一例DLT(急性肾损伤，3级)。V10000+mFOLFOX6-1在13名受试者中导致两例DLT(腹泻，3级)，并且8/13(62％)具有3级腹泻。安全性监测委员会推荐了一种改良方案(mFOLFOX6-2)，即省略第1天、第15天的5-FU 400mg/m²推注。V10000+mFOLFOX6-2在7名受试者中导致一例DLT(腹泻，3级)，并且2/7(29％)具有3级腹泻。

研究的第2部分集中于v10000加联合化疗在患有HER2阳性癌症的受试者中的抗肿瘤活性。疾病控制率(DCR)被定义为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)或疾病稳定(SD)中的最佳缓解。缓解持续时间(DOR)被定义为从首次客观缓解到随后被确认为PD或任何原因导致的死亡≤30天的最后一次研究治疗的时间。无进展存活期(PFS)是指从接受第一剂研究治疗到记录疾病进展、临床进展或任何原因导致的死亡的时间。5-FU＝5-氟尿嘧啶；DCR＝疾病控制率；DOR＝缓解持续时间；ECOGPS＝美国东部肿瘤协作组体能状态；FISH＝荧光原位杂交；GEA＝胃食管腺癌；IHC＝免疫组织化学；ORR＝客观缓解率；PD＝疾病进展；PFS＝无进展存活期；RECIST v1.1＝实体瘤中的缓解评估标准，版本1.1；SD＝疾病稳定。在数据截止日期，第1部分和第2部分共有28名功效可评估受试者。表9中显示了顶线结果。ORR为75％，并且DCR为89％。

表9.客观缓解率和疾病控制率

^aHER2阳性被定义为IHC 3+或IHC 2+/FISH+。^bcORR包括初始客观缓解记录后≥4周获得的基线扫描和确认扫描；将功效可评估群体定义为基线后疾病评估≥1次或因死亡或临床进展而停止研究治疗的所有HER2阳性受试者。

5-FU＝5-氟尿嘧啶；CAPOX＝卡培他滨加奥沙利铂；CR＝完全缓解；DCR＝疾病控制率；FP＝5-FU和顺铂；mFOLFOX6＝5-FU加奥沙利铂和甲酰四氢叶酸；NR＝未达到；ORR＝客观缓解率(CR+PR)；PD＝疾病进展；PR＝部分缓解；SD＝疾病稳定。

图5中的瀑布图显示了单独在三种方案(v10000加CAPOX、FP或mFOLFOX)中治疗的28名功效可评估受试者的靶病变大小的变化。这个图显示了用上述基于体重的方案或2级定量给药方案治疗的个体受试者。数据表明，2级定量给药方案提供了与基于体重的方案相当的功效。用2级定量给药方案治疗的八名受试者中的之八名受试者(100％)的靶病变大小减小了30％以上。使用基于体重的方案治疗的二十名受试者中的十七名受试者(85％)的靶病变大小减小了30％以上。

在本说明书中引用的所有专利、专利申请、出版物和数据库条目的公开内容特此通过引用明确地整体并入，其并入程度如同明确单独地指出每个此类单独的专利、专利申请、出版物和数据库条目通过引用并入一样。

对本领域技术人员来说显而易见的本文描述的特定实施方案的修改意图包括在以下权利要求的范围内。

序列表

表A：变体v5019、v5020、v7091、v10000、v6903、v6902和v6717的克隆编号

变体	H1克隆#	H2克隆#	L1克隆#	L2克隆#
					5019	3057	720	1811	--
5020	719	3041	--	1811
					7091	3057	5244	1811	--
10000	6586	5244	3382	--
					6903	5065	3468	5037	3904
6902	5065	3468	5034	3904
					6717	3317	720	--	--

表B：按克隆编号列出的变体v5019、v5020、v7091、v10000、v6903、v6902和v6717的序列

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Claims

1.一种治疗患有表达HER2的癌症的受试者的方法，其包括向所述受试者施用有效量的抗HER2双互补位抗体，其中根据2级固定给药方案施用所述有效量，所述2级固定给药方案包括以固定时间间隔向体重小于剂量截止体重的受试者施用低固定剂量，并且向体重等于或大于所述剂量截止体重的受试者施用高固定剂量。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述低固定剂量为约600mg，并且所述高固定剂量为约800mg，所述剂量截止体重为70kg，并且所述固定时间间隔为每周一次(QW)。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述低固定剂量为约800mg，并且所述高固定剂量为约1200mg，所述剂量截止体重为70kg，并且所述固定时间间隔为每周一次(QW)。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述低固定剂量为约800mg，并且所述高固定剂量为约1000mg，所述剂量截止体重为70kg，并且所述固定时间间隔为每周一次(QW)。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述低固定剂量为约1800mg，并且所述高固定剂量为约2200mg，所述剂量截止体重为70kg，并且所述固定时间间隔为每2周一次(Q2W)。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述低固定剂量为约1200mg，并且所述高固定剂量为约1600mg，所述剂量截止体重为70kg，并且所述固定时间间隔为每2周一次(Q2W)。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述低固定剂量为约1200mg，并且所述高固定剂量为约1800mg，所述剂量截止体重为70kg，并且所述固定时间间隔为每3周一次(Q3W)。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述低固定剂量为约1800mg，并且所述高固定剂量为约2400mg，所述剂量截止体重为70kg，并且所述固定时间间隔为每3周一次(Q3W)。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述抗HER2双互补位抗体包含(a)第一抗原结合结构域，其包含分别如SEQ ID NO:32、34和33中所示的CDR序列CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别如SEQ ID NO:22、24和23中所示的CDR序列CDRL1、CDRL2和CDRL3，和(b)第二抗原结合结构域，其包含分别如SEQ ID NO:56、57和58中所示的CDR序列CDRH1、CDRH2和CDRH3，以及分别如SEQ ID NO:53、54和55中所示的CDR序列CDRL1、CDRL2CDRL3序列。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述第一抗原结合结构域是Fab，并且所述第二抗原结合结构域是scFv。

11.根据权利要求9或10中任一项所述的方法，其中所述抗HER2双互补位抗体包含(a)第一抗原结合结构域，其包含含有如SEQ ID NO:31中所示的序列的可变重链区(VH)和含有如SEQ ID NO:21中所示的序列的可变轻链区(VL)，和(b)第二抗原结合结构域，其包含如SEQ ID NO:52中所示的VH序列和如SEQ ID NO:51中所示的VL序列。

12.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述抗HER2双互补位抗体包含含有SEQ ID NO:30中所示的序列的重链H1、和含有SEQ ID NO:50中所示的序列的重链H2以及含有SEQ ID NO:20中所示的序列的轻链L1。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述表达HER2的癌症为实体瘤。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述表达HER2的癌症为乳腺癌、胆道癌、胃食管腺癌(GEA)、胃食管接合部癌(GEJ)、胃癌、子宫内膜癌、卵巢癌、宫颈癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肛门癌或结直肠癌(CRC)。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述表达HER2的癌症为胃食管腺癌(GEA)。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述受试者已接受用抗HER2靶向疗法曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、T-DM1或Enhertu^TM(德曲妥珠单抗)中的一者或多者进行的先前治疗。

17.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述受试者未接受过用抗HER2靶向疗法进行的先前治疗。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述受试者未接受过用化疗剂进行的先前全身性治疗。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述癌症是转移性的。

20.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述癌症是局部晚期的。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述癌症根据免疫组织化学(IHC)所测量是HER2 3+、HER2 2+/3+、HER2 2+或HER2 1+，并且根据荧光原位杂交(FISH)或原位杂交(ISH)所测量是基因扩增的。

22.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述癌症根据免疫组织化学(IHC)所测量是HER2 3+、HER2 2+/3+或HER2 2+或HER2 1+，根据荧光原位杂交(FISH)或原位杂交(ISH)所测量具有或不具有HER2基因扩增。

23.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述癌症根据IHC所测量是HER2 3+，具有或不具有HER2基因扩增。

24.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述癌症根据IHC所测量是HER2 2+，根据FISH或ISH所测量具有HER2基因扩增。

25.根据权利要求1至24中任一项所述的方法，其中所述双互补位抗体与一种或多种化疗方案联合施用。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述化疗方案包含mFOLFOX6(5-FU和甲酰四氢叶酸加奥沙利铂)、CAPOX(卡培他滨加奥沙利铂)或FP(氟尿嘧啶[5-FU]加顺铂)。

27.根据权利要求25所述的方法，其中所述化疗方案包含紫杉烷。

28.根据权利要求1至27中任一项所述的方法，其中所述抗HER2双互补位抗体与PD-1抑制剂联合施用。

29.根据权利要求1至28中任一项所述的方法，其中所述抗HER2双互补位抗体与另一种抗HER2剂联合施用。

30.根据权利要求28所述的方法，其中所述PD-1抑制剂是抗PD-1抗体。

31.根据权利要求30所述的方法，其中所述抗PD-1抗体选自替雷利珠单抗、派姆单抗、纳武单抗或西米普利单抗。

32.根据权利要求30所述的方法，其中所述抗PD-1抗体是替雷利珠单抗。

33.一种用于治疗表达HER2的癌症的抗HER2双互补位抗体，其中所述抗体的有效剂量是两级固定剂量方案，所述两级固定剂量方案包括用于体重小于剂量截止体重的受试者的低固定剂量和用于体重大于或等于剂量截止体重的受试者的高固定剂量。

34.根据权利要求33所述的抗体，其中所述低固定剂量为约800mg，并且所述高固定剂量为约1200mg，所述剂量截止体重为70kg，并且所述固定时间间隔为每周一次(QW)。

35.根据权利要求33所述的抗体，其中所述低固定剂量为约1200mg，并且所述高固定剂量为约1600mg，所述剂量截止体重为70kg，并且所述固定时间间隔为每2周一次(Q2W)。

36.根据权利要求33所述的抗体，其中所述低固定剂量为约1800mg，并且所述高固定剂量为约2400mg，所述剂量截止体重为70kg，并且所述固定时间间隔为每3周一次(Q3W)。

37.根据权利要求33至36中任一项所述的抗体，其中所述抗体是v10000。

38.一种药物药盒，其包含：(i)包含抗HER-2双互补位抗体的一个或多个容器和(ii)在所述一个或多个容器中的或与所述一个或多个容器相关联的标签或药品说明书，所述标签或药品说明书指示所述抗HER2双互补位抗体用于向患有表达HER2的癌症的受试者施用(a)对体重小于70kg的受试者以1800mg的剂量施用，或(b)对体重为70kg或更重的受试者以2400mg的剂量施用，每3周一次(Q3W)施用。

39.一种药物药盒，其包含：(i)包含抗HER-2双互补位抗体的一个或多个容器和(ii)在所述一个或多个容器中的或与所述一个或多个容器相关联的标签或药品说明书，所述标签或药品说明书指示所述抗HER2双互补位抗体用于向患有表达HER2的癌症的受试者施用(a)对体重小于70kg的受试者以1200mg的剂量施用，或(b)对体重为70kg或更重的受试者以1600mg的剂量施用，每2周一次(Q2W)施用。

40.根据权利要求38或39中任一项所述的药物药盒，其中所述标签或药品说明书进一步指示所述表达HER2的癌症为乳腺癌、胆道癌、胃食管腺癌(GEA)、胃食管接合部癌(GEJ)、胃癌、子宫内膜癌、卵巢癌、宫颈癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、肛门癌或结直肠癌(CRC)。

41.根据权利要求38至40中任一项所述的药物药盒，其中所述标签或药品说明书进一步指示所述表达HER2的癌症是转移性的或局部晚期的。

42.根据权利要求38至41中任一项所述的药物药盒，其中所述标签或药品说明书进一步指示所述抗HER2双互补位抗体适用于与抗PD-1抗体联合施用。

43.根据权利要求38至42中任一项所述的药物药盒，其中所述标签或药品说明书进一步指示所述抗HER2双互补位抗体适用于与mFOLFOX6(5-FU和甲酰四氢叶酸加奥沙利铂)、CAPOX(卡培他滨加奥沙利铂)或FP(氟尿嘧啶[5-FU]加顺铂)联合施用。

44.根据权利要求38至41中任一项所述的药物药盒，其中所述标签或药品说明书进一步指示所述抗HER2双互补位抗体适用于与另一种抗HER2剂，任选地图卡替尼联合施用。

45.根据权利要求38至44中任一项所述的药物药盒，其中所述容器中的每个容器包含300mg所述抗HER2抗体。

46.根据权利要求38至44中任一项所述的药物药盒，其中所述容器中的每个容器包含600mg所述抗HER2抗体。

47.根据权利要求38至41中任一项所述的药物药盒，其中所述标签或药品说明书进一步指示所述抗HER2双互补位抗体是v10000。