CN117969722A - 一种血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法 - Google Patents
一种血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于生物医药技术领域，公开了一种血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法。本发明是通过酶解后液‑液提取血浆中的香叶木素和橙皮素，并以香叶木素‑d3和橙皮素‑13C‑d3为内标，采用ACQUITY UPLC®BEH C18色谱柱，梯度洗脱，电喷雾负离子多重反应监测，获取血浆中香叶木素和橙皮素的浓度；本发明所述的生物分析方法分析速度快、检测灵敏度高，有利于评价柑橘黄酮片在人体内的生物等效性。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法。
背景技术
柑橘黄酮片（Citrus Bioflavonoids Tablets）为一种复方制剂，其活性成分为地奥司明（又称香叶木素苷）和橙皮苷，在体内代谢为香叶木素与橙皮素，并以香叶木素的形式被人体吸收并降解。用于治疗静脉淋巴功能不全相关的各种疾病（腿部沉重，疼痛，晨起酸胀不适感）、治疗急性痔发作有关的各种疾病。为了支持该仿制药物临床药代动力学研究，通过受试制剂与参比制剂人体药代动力学对比研究，确认两种制剂的体内吸收速度和程度是否一致，需要建立生物分析方法监测香叶木素与橙皮素的血药浓度水平。为了加速其临床应用，需要一种简便、准确、快速、灵敏度高的生物分析方法。
目前，液相色谱-串联质谱技术为分析人血浆中香叶木素及橙皮素的主要方法。但大多数现有技术不能同时分析香叶木素和橙皮素，且分析灵敏度较低。如文献1（朱婷婷,杜明荦,苏浩明,等.地奥司明片在健康人体内的药动学[J].中国新药杂志,2014,23(14):1674-1678.）于2014年公开了仅测定香叶木素的方法，该方法中血浆用量较大为0.40mL，增加临床研究中受试者的依从性与安全性的风险，香叶木素的定量下限为0.1ng/mL；文献2（Shen C, Chen R, Qian Z, et al. A HPLC–MS/MS method for the quantitation offree, conjugated, and total HDND-7, a novel hesperetin derivative, in ratplasma and tissues: application to the pharmacokinetic and tissuedistribution study[J]. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2016, 118: 149-160.）于2015年公开了测定橙皮素衍生物的方法，该方法中橙皮素衍生物的定量下限仅为20ng/mL。尽管现有专利文献CN117330677A公开了一种用于柑橘黄酮片生物等效性研究的香叶木素和橙皮素定量检测的方法，通过加入β-葡萄糖醛酸酶进行孵育，将血浆中的葡萄糖醛酸苷结合型香叶木素和橙皮素转化为游离型香叶木素和橙皮素，构建了LC-MS/MS方法对两种成份进行同时定量检测，但是香叶木素和橙皮素的定量下限分别为0.1ng/mL和0.05ng/mL，且需孵育18h以及色谱分离为5min/针，分析速度慢。
综上所述，现有技术无法兼顾灵敏度、分析速度，且部分技术血浆用量较大、前处理操作复杂、线性范围选择不合理等缺点，均不利于临床研究大批量样本的准确分析。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的是提供一种血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法。
本发明采用如下技术方案：
一种血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法，包括以下步骤：
预处理，向离心管中加入血浆样品与pH=4.0的乙酸-乙酸铵溶液，混匀，加入β-葡萄糖醛酸酶，混匀，孵育，加入内标工作溶液，混匀，加入乙酸乙酯，混匀，离心后转移上清液至一干净96孔板中，氮气吹干，加入乙腈水溶液复溶，混匀，进行液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析；
色谱，将待测样品液相色谱分离，采用ACQUITY UPLC®BEH C18色谱柱，梯度洗脱，自动进样器温度为0～10℃，柱温为40～55℃，流动相A为含0～0.02％甲酸的水溶液，流动相B为乙腈，色谱运行时间3.00min；
质谱，采用电喷雾离子源（ESI），负离子多重反应监测（MRM）,喷射电压-4500V，气体1（Gas1）50psi，气体2（Gas2）55psi，气帘气体（Curtain Gas）35psi，离子源温度600℃，碰撞活化解离8psi，驻留时间150ms；香叶木素定量分析离子对m/z为299.1/284.0，碰撞能量（CE）-32eV，去簇电压（DP）-85V；橙皮素定量分析离子对m/z为301.2/164.0，碰撞能量（CE）-32eV，去簇电压（DP）-90V；香叶木素-d3定量分析离子对m/z为302.0/284.0，碰撞能量（CE）-33eV，去簇电压（DP）-103V；橙皮素-13C-d3定量分析离子对m/z为305.0/164.2，碰撞能量（CE）-34eV，去簇电压（DP）-100V。
优选地，所述预处理步骤中血浆样品的加入量100µL。
在一些实施方式中，所述预处理步骤中β-葡萄糖醛酸酶的加入量为20µL 10 KU/mLβ-葡萄糖醛酸酶。
在一些实施方式中，所述预处理步骤为：向2mL离心管中加入100µL血浆样品与100µL pH=4.0的乙酸-乙酸铵溶液，混匀，加入20µL 10 KU/mLβ-葡萄糖醛酸酶，混匀，37℃水浴孵育4h，混匀后加入内标工作溶液，混匀，加入1000µL乙酸乙酯，混匀，5℃和4000g条件下离心后转移800µL上清液至另一干净96孔板中，氮气吹干，加入150µL 20%乙腈水溶液复溶，混匀。
优选地，所述内标工作溶液为浓度为10.00ng/mL的香叶木素-d3与5.000ng/mL的橙皮素-13C-d3的混合溶液。
可以理解，本发明采用与待测物色谱质谱行为接近的稳定同位素作为内标使用，并进行质谱响应校正，可以降低基质效应对于质谱检测的影响。
优选地，所述色谱步骤，ACQUITY UPLC® BEH C18色谱柱的规格参数为2.1mm×50mm，2.5µm。
在一些实施方式中，所述色谱步骤，自动进样器的温度为5℃，柱温为50℃。
在一些实施方式中，所述色谱步骤使用的进样量为2µL，梯度洗脱条件为：
。
借由上述方案，本发明至少具有以下优点：
1、本发明所述的生物分析方法操作简便，通过酶解后液-液提取法、浓缩复溶后LC-MS/MS进样分析，可高效准确地检测出血浆中香叶木素与橙皮素的浓度，极大地缩短孵育时间为4h，最大程度地降低基质效应，增强方法的耐用性，分析速度用时仅为3min，以满足临床大批量样品的常规测定。
2、本发明所述的生物分析方法灵敏度较高，在血浆用量为100µL的情况下，香叶木素和橙皮素的定量下限均为0.02000ng/mL，按照信噪比为3计算灵敏度分别为6.000pg/mL和3.529pg/mL能准确测定血浆中香叶木素和橙皮素的浓度，降低受试者的服药量与全血采集量，增加临床研究的安全性与受试者的依从性。
3、本发明所述的生物分析方法中香叶木素与橙皮素的浓度线性范围选择合理，均为0.02000~10.00ng/mL，能够更准确地分析、检测人体血药浓度。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。
附图说明
图1是香叶木素子离子扫描质谱图；
图2是橙皮素子离子扫描质谱图；
图3是空白血浆样品中香叶木素和香叶木素-d3的MRM色谱图，其中，a为香叶木素的MRM色谱图，b为香叶木素-d3的MRM色谱图；
图4是空白血浆样品中橙皮素和橙皮素-13C-d3的MRM色谱图，其中，a为橙皮素的MRM色谱图，b为橙皮素-13C-d3的MRM色谱图；
图5是定量下限样品中香叶木素和香叶木素-d3的MRM色谱图，其中，a为香叶木素的MRM色谱图，b为香叶木素-d3的MRM色谱图；
图6是定量下限样品中橙皮素和橙皮素-13C-d3的MRM色谱图，其中，a为橙皮素的MRM色谱图，b为橙皮素-13C-d3的MRM色谱图；
图7是1名健康受试者单次口服1000mg柑橘黄酮片后香叶木素与橙皮素的血药浓度-时间曲线图。
具体实施方式
结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的保护内容不局限于以下实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。
液相色谱串联质谱检测血浆中药物浓度的方法开发通常可分为三个部分，即预处理方法、液相色谱方法和质谱方法。本发明针对现有技术缺点，从以上这三个方面着手建立分析方法。
预处理
本发明中使用的血浆用量仅为100µL，适合临床研究的生物分析工作。本发明考察了不同来源（大肠杆菌、罗曼蜗牛等） 葡萄糖醛酸酶，最终选用β-葡萄糖醛酸酶，采用酶解后液-液提取法，在4h内便可以酶解完全使血浆中的葡萄糖醛酸苷结合型香叶木素和橙皮素转化为游离型香叶木素和橙皮素，极大地提高了前处理（即预处理）效率。此外，在浓缩样本时，可以有效去除水溶性较强的内源性基质，这有利于提升方法的耐用性、重现性和准确性。
具体预处理方法步骤如下：
步骤1：向2mL离心管中加入100µL血浆样品与100µL乙酸-乙酸铵溶液（pH=4.0），涡旋混匀2min；
步骤2：加入20µL 10 KU/mLβ-葡萄糖醛酸酶，涡旋混匀2min，37℃水浴孵育4h，涡旋混匀1min；
步骤3：加入20µL内标工作溶液（浓度为10.00ng/mL的香叶木素-d3与5.000ng/mL的橙皮素-13C-d3的混合溶液），涡旋混匀3min；
步骤4：加入1000µL乙酸乙酯，涡旋混匀5min，离心10min（5℃，4000g）；
步骤5：转移800µL上清液至一干净96孔板中，氮气吹干，加入150µL20%乙腈水溶液复溶，涡旋混匀5min，进行LC-MS/MS分析。
色谱
将待测样品进行液相色谱分离，采用ACQUITY UPLC®BEH C18色谱柱（2.1 mm×50mm，2.5 µm），梯度洗脱，待测物在该色谱柱上具有尖锐的色谱峰，整体色谱运行较快，为3min。
质谱
如图1至图2，质谱检测采用了电喷雾电离源，待测物香叶木素和橙皮素都有较好的信噪比。内标物香叶木素-d3与橙皮素-13C-d3以及相应的待测物均具有稳定的质谱响应，不易受到基质效应的影响，具体质谱条件如下：
采用电喷雾离子源（ESI），负离子多重反应监测（MRM）,喷射电压-4500V，气体1（Gas1）50psi，气体2（Gas2）55psi，气帘气体（Curtain Gas）35psi，离子源温度600℃，碰撞活化解离8psi，驻留时间150ms；香叶木素定量分析离子对m/z为299.1/284.0，碰撞能量（CE）-32eV，去簇电压（DP）-85V，入口电压（EP）为-10V，碰撞室出口电压（CXP）为-23V；橙皮素定量分析离子对m/z为301.2/164.0，碰撞能量（CE）-32eV，去簇电压（DP）-90V，入口电压（EP）为-10V，碰撞室出口电压（CXP）为-11V；香叶木素-d3定量分析离子对m/z为302.0/284.0，碰撞能量（CE）-33eV，去簇电压（DP）103V，入口电压（EP）为-10V，碰撞室出口电压（CXP）为-13V；橙皮素-13C-d3定量分析离子对m/z为305.0/164.2，碰撞能量（CE）-34eV，去簇电压（DP）-100V，入口电压（EP）为-10V，碰撞室出口电压（CXP）为-11V。
实施例1
1 材料
1.1 仪器
色谱仪：LC-30AD快速液相色谱系统，日本岛津公司。
质谱仪：6500+型三重四极杆串联质谱仪，加拿大Sciex公司。
1.2 对照品和试剂
香叶木素（96.4%）、橙皮素（98.68%）、香叶木素-d3（90.1%）、橙皮素-13C-d3（96.6%）。甲醇（HPLC级）、乙腈（HPLC级）、β-葡萄糖醛酸酶购自美国Sigma公司。甲酸 （HPLC级）、异丙醇（HPLC级）购自ACS公司。超纯水（18.2mΩ，TOC≤50ppb）由 MilliQ超纯水系统制备。乙酸-乙酸铵溶液（pH=4.0）：精密称取1.500g乙酸铵置50mL离心管中，加20mL超纯水、1300µL乙酸，摇匀，室温保存，备用。
2 方法
2.1 溶液及样品的配制
标准系列样品：精密称取各对照品适量，以甲醇:二甲基亚砜（1:1，v/v）分别溶解并定容，配制成香叶木素和橙皮素浓度均约为5.000mg/mL的贮备液。精密吸取各自贮备液适量，用甲醇:水（1:1，v/v）逐级稀释得到混合标准系列溶液，以人空白血浆稀释标准系列溶液配制标准系列样品，香叶木素和橙皮素浓度范围均0.02000～10.00ng/mL。
质控样品：采用与标准系列样品相似方法配制了香叶木素和橙皮素的3个浓度水平混合质控样品。定量下限浓度均为0.02000 ng/mL，低质控（Low quality control，LQC）浓度为0.06000 ng/mL，中质控（Medium quality control，MQC）浓度为0.4000 ng/mL，高质控 （High quality control，HQC）浓度为7.500ng/mL。
内标工作溶液：精密称取香叶木素-d3和橙皮素-13C-d3对照品，以甲醇溶解并定容，配制成浓度约为 1.000mg/mL的内标贮备液。精密吸取上述各内标贮备液适量，用甲醇:水（20:80，v/v）稀释，获得香叶木素-d3与橙皮素-13C-d3浓度分别为10.00ng/mL与5.000ng/mL的混合内标工作溶液。
2.2 血浆样品预处理
血浆样品预处理步骤，具体见表1。
表1 血浆样品预处理步骤
2.3色谱及质谱条件
色谱，采用的进样量为2µL，具体色谱分离条件如表2所示。
表2 色谱分离条件
质谱，具体质谱检测条件如表3所示。
表3 质谱检测条件
2.4方法学验证
按照中国药典9012指导原则对本方法进行了方法学验证，内容包括稳定性、选择性、线性、准确度、精密度、回收率、基质效应等。
选择性
取六个不同来源的空白血浆及各自配制的定量下限样品处理后进样分析。色谱共流出干扰物的峰面积须小于定量下限待测物峰面积的20％，小于内标峰面积的5％。
标准曲线
以待测物理论浓度为横坐标（x），待测物与内标物的峰面积比为纵坐标（y），进行回归分析计算的直线回归方程（权重因子W＝1/x2 ）。方法验证每一分析批对标准曲线样品双样本分析。
精密度和准确度
方法验证每一分析批测定四个浓度质控样本各六样本。定量下限批内、批间精密度以相对标准差（RSD）计算小于20％方可接受，准确度以相对偏差（RE）计算在-20％～20％之间方可接受。其余各浓度水平的质控样品各成分批内、批间精密度需小于15％方可接受，准确度RE在-15％～15％之间方可接受。
稳定性
考察各待测物在血浆样品中的稳定性时，将LQC和HQC置于不同温度及环境中，放置结束后进行六样本分析。共考察四种放置条件，分别为：室温置18h、制备后样品4℃放置104h、经历5次冷冻-解冻循环（从-80℃到室温）、-80℃放置30天。
回收率
取空白血浆100μL，提取后（不加内标物）加入待测物溶液和内标溶液，使最终浓度与LQC、MQC和HQC相同，进样测定。另提取LQC、MQC和 HQC各6份，进样测定。以两种处理方法的峰面积比值计算提取回收率。
基质效应
取6个不同来源空白血浆，提取后（不加内标物）加入与LQC和HQC相同浓度的待测物溶液和内标溶液，涡旋混匀后测定。另取水代替血浆，按上述方法处理。以两种方法获得的峰面积比值计算基质因子，通过内标归一化的基质因子的RSD评估基质效应，小于15％方可接受。
3结果与讨论
3.1方法学验证
方法的选择性
如图3至图6所示，香叶木素、橙皮素、香叶木素-d3与橙皮素-13C-d3的保留时间分别约为2.01、2.11、2.01与2.11min，内源性化合物对待测物和内标的保留时间以及响应没有明显干扰。
标准曲线
测定的研究血浆样本中香叶木素和橙皮素的线性范围均为0.02000~10.00ng/mL。待测物标准曲线典型直线回归方程分别为：
香叶木素：y＝2.13x-0.000379；
橙皮素：y＝8.02x+0.00592。
检测限
定量下限样品中香叶木素和橙皮素浓度均为0.02000ng/mL，信噪比分别为10和17。按照信噪比为3计算检测限（灵敏度）分别为6.000pg/mL和3.529pg/mL。
方法的精密度和准确度
精密度与准确度结果均符合接受标准，结果见表4，表4是血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的精密度和准确度。
表4 精密度和准确度数据。
。
处理回收率
LQC、MQC和HQC浓度水平：香叶木素的提取回收率分别为82.3％、87.3％和91.0％；橙皮素的提取回收率分别为86.4％、87.1％和90.9％；香叶木素-d3的平均回收率为96.9%，橙皮素-13C-d3的平均回收率为 92.6％。
基质效应
LQC、HQC浓度水平下：香叶木素内标归一化的质因子分别为0.988和1.018，RSD分别为1.96％和2.94％；橙皮素的内标归一化的基质因子分别为0.981和0.976，RSD分别为1.02％和3.07％。以上结果表明，基质效应不干扰待测物分析的准确性。
血浆稳定性考察
血浆稳定性试验（n＝6）结果见表5，香叶木素、橙皮素的每个浓度的平均值偏差均在-15％～15％，表明在所述考察条件下香叶木素和橙皮素稳定。
表5 稳定性考察数据。
。
实施例2 人体药动学研究。
将验证后的方法用于检测血浆中的香叶木素与橙皮素，以评价柑橘黄酮片药动学特征。1名健康受试者单次口服1000mg柑橘黄酮片，血药浓度-时间曲线如图7所示，检测方法灵敏度可完整描绘香叶木素及橙皮素的药动学特性。
综上所述，本发明所述的生物分析方法经过完整的方法学验证，其灵敏度高、分析速度快，满足柑橘黄酮片的临床研究样品分析需求，可用于支持柑橘黄酮片在人体内的药代动力学研究。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，并不用于限制本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
预处理，向离心管中加入血浆样品与pH=4.0的乙酸-乙酸铵溶液，混匀，加入β-葡萄糖醛酸酶，混匀，孵育，加入内标工作溶液，混匀，加入乙酸乙酯，混匀，离心后转移上清液至一干净96孔板中，氮气吹干，加入乙腈水溶液复溶，混匀，进行液相色谱-串联质谱分析；
色谱，将待测样品液相色谱分离，采用ACQUITY UPLC®BEH C18色谱柱，梯度洗脱，自动进样器温度为0～10℃，柱温为40～55℃，流动相A为含0～0.02%甲酸的水溶液，流动相B为乙腈，色谱运行时间3.00min；
质谱，采用电喷雾离子源，负离子多重反应监测，喷射电压-4500V，气体1为50psi，气体2为55psi，气帘气体为35psi，离子源温度为600℃，碰撞活化解离为8psi，驻留时间150ms；香叶木素定量分析离子对m/z为299.1/284.0，碰撞能量为-32eV，去簇电压为-85V；橙皮素定量分析离子对m/z为301.2/164.0，碰撞能量为-32eV，去簇电压为-90V；香叶木素-d3定量分析离子对m/z为302.0/284.0，碰撞能量为-33eV，去簇电压为-103V；橙皮素-13C-d3定量分析离子对m/z为305.0/164.2，碰撞能量为-34eV，去簇电压为-100V。
2.根据权利要求1所述的血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法，其特征在于，血浆样品的加入量为100µL。
3.根据权利要求1所述的血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法，其特征在于，所述预处理步骤中β-葡萄糖醛酸酶的加入量为20µL 10 KU/mLβ-葡萄糖醛酸酶。
4.根据权利要求1所述的血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法，其特征在于，所述预处理步骤为：向2mL离心管中加入100µL血浆样品与100µL pH=4.0的乙酸-乙酸铵溶液，混匀，加入20µL 10 KU/mLβ-葡萄糖醛酸酶，混匀，37℃水浴孵育4h，混匀后加入内标工作溶液，混匀，加入1000µL乙酸乙酯，混匀，5℃和4000g条件下离心后转移800μL上清液至一干净96孔板中，氮气吹干，加入150µL 20%乙腈水溶液复溶，混匀。
5.根据权利要求1所述的血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法，其特征在于，所述内标工作溶液为浓度为10.00ng/mL的香叶木素-d3与5.000ng/mL的橙皮素-13C-d3的混合溶液。
6.根据权利要求1所述的血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法，其特征在于，所述色谱步骤使用的流动相A为含0.02%甲酸的水溶液。
7.根据权利要求1所述的血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法，其特征在于，所述色谱步骤使用的ACQUITY UPLC®BEH C18色谱柱的规格参数为2.1mm×50mm，2.5µm。
8.根据权利要求1所述的血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法，其特征在于，所述色谱步骤使用的自动进样器的温度为5℃，柱温为50℃。
9.根据权利要求1所述的血浆中同时检测香叶木素与橙皮素的生物分析方法，其特征在于，所述色谱步骤使用的进样量为2µL，梯度洗脱条件为：
。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106176638A (zh) * | 2016-08-24 | 2016-12-07 | 浙江大学 | 具有高口服生物利用度及抗氧化活性的橙皮素复合物及其制备方法和应用 |
| US20210355517A1 (en) * | 2019-02-11 | 2021-11-18 | Abolis Biotechnologies | Method for biosynthesising diosmetin and/or hesperetin in a microorganism |
| CN117330677A (zh) * | 2023-11-24 | 2024-01-02 | 成都凡微析医药科技有限公司 | 一种用于柑橘黄酮片生物等效性研究的香叶木素和橙皮素定量检测的方法 |
-
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106176638A (zh) * | 2016-08-24 | 2016-12-07 | 浙江大学 | 具有高口服生物利用度及抗氧化活性的橙皮素复合物及其制备方法和应用 |
| US20210355517A1 (en) * | 2019-02-11 | 2021-11-18 | Abolis Biotechnologies | Method for biosynthesising diosmetin and/or hesperetin in a microorganism |
| CN117330677A (zh) * | 2023-11-24 | 2024-01-02 | 成都凡微析医药科技有限公司 | 一种用于柑橘黄酮片生物等效性研究的香叶木素和橙皮素定量检测的方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| FERNANDO VALLEJO等: "Concentration and Solubility of Flavanones in Orange Beverages Affect Their Bioavailability in Humans", J. AGRIC. FOOD CHEM., vol. 58, no. 10, 31 December 2010 (2010-12-31), pages 6518 * |
| MIGUEL ANGEL CAMPANERO 等: "Simultaneous determination of diosmin and diosmetin in human plasma by ion trap liquid chromatography–atmospheric pressure chemical ionization tandem mass spectrometry: Application to a clinical pharmacokinetic study", JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS, vol. 51, 31 December 2010 (2010-12-31), pages 2 * |
| 万丽丽;张剑萍;孙习鹏;徐志儒;郭澄;: "HPLC法测定大鼠血浆中橙皮素和柚皮素的浓度", 中国药师, no. 11, 5 November 2009 (2009-11-05), pages 2 * |
| 秦娣;李俊;李荣;陈昭琳;黄成;黄艳;: "5, 7, 3\'-三乙酰橙皮素在大鼠体内的药代动力学研究", 安徽医科大学学报, no. 08, 23 August 2012 (2012-08-23), pages 2 - 1 * |
| 马雪琴;李辰;袁林华;王世俊;柳晓泉;: "枳实总黄酮提取物中柚皮苷和新橙皮苷的大鼠药代动力学", 中国药科大学学报, no. 02, 25 April 2013 (2013-04-25), pages 2 * |
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