CN115248272B - 一种检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法 - Google Patents
一种检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115248272B CN115248272B CN202210647984.7A CN202210647984A CN115248272B CN 115248272 B CN115248272 B CN 115248272B CN 202210647984 A CN202210647984 A CN 202210647984A CN 115248272 B CN115248272 B CN 115248272B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tandem mass
- sample
- detection
- solution containing
- liquid chromatography
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- HWXBTNAVRSUOJR-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxyglutaric acid Natural products OC(=O)C(O)CCC(O)=O HWXBTNAVRSUOJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 36
- 229940009533 alpha-ketoglutaric acid Drugs 0.000 title claims abstract description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 54
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- HWXBTNAVRSUOJR-GSVOUGTGSA-N (R)-2-hydroxyglutaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)CCC(O)=O HWXBTNAVRSUOJR-GSVOUGTGSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 claims abstract description 14
- CGRCVIZBNRUWLY-HNNXBMFYSA-N (2s)-2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 CGRCVIZBNRUWLY-HNNXBMFYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 12
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims abstract description 10
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 8
- HWXBTNAVRSUOJR-VKHMYHEASA-N (S)-2-hydroxyglutaric acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CCC(O)=O HWXBTNAVRSUOJR-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 7
- 150000001263 acyl chlorides Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical group OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 72
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 33
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 27
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 24
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 17
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 16
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 16
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 16
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 16
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 claims description 10
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 5
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 claims description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 claims description 2
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 claims 3
- -1 N-p-toluenesulfonyl-L-phenylalanine acyl chloride Chemical class 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 14
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 abstract description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 10
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N anhydrous glutaric acid Natural products OC(=O)CCCC(O)=O JFCQEDHGNNZCLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 238000002552 multiple reaction monitoring Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 3
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 3
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 3
- TYJUAQADRJMNNB-RXMQYKEDSA-N (2R)-2,5-diamino-2-hydroxy-5-oxopentanoic acid Chemical compound NC(=O)CC[C@@](N)(O)C(O)=O TYJUAQADRJMNNB-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 2
- RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 1-methylsulfonylpiperidin-4-one Chemical compound CS(=O)(=O)N1CCC(=O)CC1 RTBFRGCFXZNCOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001005951 Acidaminococcus fermentans (strain ATCC 25085 / DSM 20731 / CCUG 9996 / CIP 106432 / VR4) (R)-2-hydroxyglutarate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034671 L-lactate dehydrogenase A chain Human genes 0.000 description 2
- 108010088350 Lactate Dehydrogenase 5 Proteins 0.000 description 2
- OQKFGIANPCRSSK-UHFFFAOYSA-N azanium;methanol;acetate Chemical group [NH4+].OC.CC([O-])=O OQKFGIANPCRSSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 208000019932 Aciduria Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100025481 D-2-hydroxyglutarate dehydrogenase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 108030005026 D-2-hydroxyglutarate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100020920 L-2-hydroxyglutarate dehydrogenase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 108030004014 L-2-hydroxyglutarate dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- VBUZIXJFGCVTJL-UHFFFAOYSA-N azanium;methanol;formate Chemical compound [NH4+].OC.[O-]C=O VBUZIXJFGCVTJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000009615 deamination Effects 0.000 description 1
- 238000006481 deamination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 208000029824 high grade glioma Diseases 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 150000004715 keto acids Chemical class 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 201000011614 malignant glioma Diseases 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000004102 tricarboxylic acid cycle Effects 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N2030/067—Preparation by reaction, e.g. derivatising the sample
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
一种检测α‑酮戊二酸和手性2‑羟基戊二酸的方法，包括：样品预处理步骤，包括将待测样品与溶剂混合，提取处理，然后浓缩至干，然后加入含有N‑对甲苯磺酰基‑L‑苯丙氨酰氯的溶液以及吡啶，衍生反应后，固液分离，取第一上清液，加入水，再次混匀，固液分离，获得第二上清液；液相色谱‑串联质谱检测步骤，包括采用液相色谱‑串联质谱检测第二上清液，获得检测结果；计算步骤，根据检测结果，计算得到待测样品中α‑酮戊二酸、D‑2‑羟基戊二酸、L‑2‑羟基戊二酸的含量。本发明通过对样品进行手性衍生处理后，在HPLC‑MS/MS平台上，运用MRM检测方法，实现了对该三种物质的快速和精确的测定。
Description
技术领域
本发明涉及检测技术领域，具体涉及一种检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法。
背景技术
α-酮戊二酸(α-KG，α-Ketoglutaric acid，2-Oxoglutaric acid)，CAS号328-50-7，是戊二酸的一种氧化物，即戊二酸α位的酮基化衍生物。它也是一种存在于生物体内的代谢物——是三羧酸(TCA)循环中的中间产物，是谷氨酸脱氨基的酮酸产物，也是最重要的氮素运载体之一，因此，α-KG在脂质合成、氧化应激、蛋白质修饰和细胞死亡等生理过程中具有十分重要的调控作用。
2-羟基戊二酸(2HG，2-Hydroxyglutaric acid，α-Hydroxyglutaric acid)，CAS号2889-31-8，由戊二酸在α位羟基化而来，也是α-KG的还原产物。由于2-羟基戊二酸的α位的碳上连有四个不同的基团，这使得它是一个手性(即旋光性)分子，从而具有两种手性异构体(即光学异构体)——L-2HG(或S-2HG或[-]-2HG，CAS号13095-48-2)和D-2HG(或R-2HG或[+]-2HG，CAS号13095-47-1)。由于生物体内的蛋白质(包括酶)大部分都是具有手性特征的，即拥有不同的三维空间构型，所以L-2HG和D-2HG在生物体内的代谢途径和作用是十分不同的。例如L-2HG被认为是由L-苹果酸脱氢酶(MDH)或在缺氧条件下被乳酸脱氢酶A(LDH-A)由α-KG转化形成，并可被L-2-羟基戊二酸脱氢酶(L2HGDH)转化为α-KG；而D-2HG是由醇酸-酮酸转氢酶(Hydroxyacid oxoacid transhydrogenase，HOT)由α-KG转化而成，并可由D-2-羟基戊二酸脱氢酶(D2HGDH)转化为α-KG。可见它们具有不一样的代谢通路和生物学意义。
常规的检测手段很难区分手性异构体，因为手性异构体在绝大多数的物理和化学性质上都极度相似。但L-2HG和D-2HG的具体含量和比例对一些疾病的诊断具有重要影响，如胶质瘤(在L-2-羟基戊二酸尿症中连续出现明显的高级胶质瘤)和急性髓系白血病(R-2-羟基戊二酸足以促进白血病发生，其作用是可逆的)。因此，一种有效的、可以分别鉴定L-2HG、D-2HG和α-KG的检测方法是十分必需的。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是如何同时检测α-酮戊二酸、D-2-羟基戊二酸和L-2-羟基戊二酸的含量。
一种实施例中提供一种检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法，包括：
样品预处理步骤，包括将待测样品与溶剂混合，提取处理，然后浓缩至干，然后加入含有N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的溶液以及吡啶，衍生反应后，固液分离，取第一上清液，加入水，再次混匀，固液分离，获得第二上清液；
液相色谱-串联质谱检测步骤，包括采用液相色谱-串联质谱检测所述第二上清液，获得检测结果；
计算步骤，根据所述检测结果，计算得到待测样品中α-酮戊二酸、D-2-羟基戊二酸、L-2-羟基戊二酸的含量；
所述液相色谱-串联质谱检测步骤中，液相色谱的检测条件中，流动相有流动相A和流动相B组成，其中流动相A为乙酸铵水溶液，流动相B为乙酸铵甲醇溶液。
依据上述实施例的一种检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法，本发明通过对样品进行手性衍生处理后，在HPLC-MS/MS(超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪)平台上，运用MRM检测方法，实现了对该三种物质的快速和精确的测定。
附图说明
图1为使用实施例1的表1、表2的参数获得的α-KG和2HG衍生物的LC-MS图；
图2为α-KG的标准曲线图；
图3为D-2HG衍生物的标准曲线图；
图4为L-2HG衍生物的标准曲线图；
图5为实施例1中D-2HG、L-2HG的衍生化反应原理图；
图6为对比例1中，其中一个样品(sample15)中L-2HG和D-2HG的LC-MS图；
图7为使用表3所示流动相比例得到的其中一个样品(sample5)的α-KG和2HG衍生物的LC-MS图；
图8为使用表4所示流动相比例得到的其中一个样品(sample22)的α-KG和2HG衍生物的LC-MS图；
图9为实施例2中，其中一个样品(sample74)的α-KG和2HG衍生物的LC-MS图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本申请能被更好的理解。然而，本领域技术人员可以毫不费力的认识到，其中部分特征在不同情况下是可以省略的，或者可以由其他材料、方法所替代。在某些情况下，本申请相关的一些操作并没有在说明书中显示或者描述，这是为了避免本申请的核心部分被过多的描述所淹没，而对于本领域技术人员而言，详细描述这些相关操作并不是必要的，他们根据说明书中的描述以及本领域的一般技术知识即可完整了解相关操作。
另外，说明书中所描述的特点、操作或者特征可以以任意适当的方式结合形成各种实施方式。同时，方法描述中的各步骤或者动作也可以按照本领域技术人员所能显而易见的方式进行顺序调换或调整。因此，说明书和附图中的各种顺序只是为了清楚描述某一个实施例，并不意味着是必须的顺序，除非另有说明其中某个顺序是必须遵循的。
本文中为部件所编序号本身，例如“第一”、“第二”等，仅用于区分所描述的对象，不具有任何顺序或技术含义。
本文中，“α-酮戊二酸”亦称α-KG、A-KG。
本文中，“L-2-羟基戊二酸”简称L-2HG。
本文中，“D-2-羟基戊二酸”简称D-2HG。
针对现有技术存在的一些不足，本发明的目的是提供一种可以同时检测α-KG、L-2HG和D-2HG的检测手段，以期实现对这三种物质的准确定性和精确定量的检测。
基于上述目的，在一实施例中，本发明通过对样品进行手性衍生处理后，在HPLC-MS/MS(超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱仪)平台上，运用MRM检测方法，实现了对该三种物质的快速和精确的测定。
在一实施例中，从最开始的样品预处理到最后获得检测结果，所需时间大约在3h以内。
在一实施例中，提供一种检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法，包括：
样品预处理步骤，包括将待测样品与溶剂混合，提取处理，然后浓缩至干，然后加入含有N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的溶液以及吡啶，衍生反应后，固液分离，取第一上清液，加入水，再次混匀，固液分离，获得第二上清液；
液相色谱-串联质谱检测步骤，包括采用液相色谱-串联质谱检测第二上清液，获得检测结果；
计算步骤，根据检测结果，计算得到待测样品中α-酮戊二酸、D-2-羟基戊二酸、L-2-羟基戊二酸的含量；
液相色谱-串联质谱检测步骤中，液相色谱的检测条件中，流动相有流动相A和流动相B组成，流动相A、B选自如下组合中的任意一种：
1)流动相A为含有乙酸铵的水溶液(亦称乙酸铵水溶液)，流动相B为含有乙酸铵的甲醇溶液(亦称乙酸铵甲醇溶液)；
2)流动相A为含有甲酸铵的水溶液(亦称甲酸铵水溶液)，流动相B为含有甲酸铵的甲醇溶液(亦称甲酸铵甲醇溶液)。
在一实施例中，含有乙酸铵的水溶液中，乙酸铵的浓度为5～10mmol/L。
在一实施例中，含有乙酸铵的甲醇溶液中，乙酸铵的浓度为5～10mmol/L。
在一实施例中，含有甲酸铵的水溶液中，甲酸铵的浓度为5～10mmol/L。
在一实施例中，含有甲酸铵的甲醇溶液中，甲酸铵的浓度为5～10mmol/L。
在一实施例中，液相色谱的洗脱程序如下：
| 时间(min) | A(％(v/v)) | B(％(v/v)) |
| 0 | 80 | 20 |
| 0.5 | 80 | 20 |
| 6 | 55 | 45 |
| 7 | 30 | 70 |
| 8 | 30 | 70 |
| 8.1 | 80 | 20 |
| 10 | 80 | 20 |
在一实施例中，液相色谱为高效液相色谱。
在一实施例中，液相色谱的检测条件中，色谱柱为C18色谱柱。
在一实施例中，液相色谱的检测条件中，C18色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEHC18色谱柱，规格为100mm*2.1mm,1.7μm粒径。
在一实施例中，液相色谱的检测条件中，色谱柱温度为30～50℃，优选为38～42℃，更优选为40℃。
在一实施例中，液相色谱-串联质谱检测步骤中，还包括如下A)至J)中的至少一项：
A)串联质谱为三重四级杆质谱；
B)串联质谱的检测条件中，离子源为电喷雾离子源；
C)串联质谱的检测条件中，电离模式为负离子模式；
D)串联质谱的检测条件中，扫描方式为多反应监测(MRM)或选择反应监测(SIM)；
E)串联质谱的检测条件中，雾化帘气压为30～40psi；
F)串联质谱的检测条件中，离子化电压为-3500～-4500V；
G)串联质谱的检测条件中，雾化温度为400～600℃；
H)串联质谱的检测条件中，辅助气压为40～60psi；
I)串联质谱的检测条件中，引入电压(EP)为-5～-10V；
J)串联质谱的检测条件中，碰撞池出口电压(CXP)为-5～-10V。
在一实施例中，液相色谱-串联质谱检测步骤中，串联质谱的检测条件中，检测参数如下：
在一实施例中，样品预处理步骤中，溶剂包括但不限于甲醇水溶液。
在一实施例中，样品预处理步骤中，甲醇水溶液中甲醇的体积百分浓度为50～80％，优选为80％。
在一实施例中，提取处理的方法包括超声提取。
在一实施例中，浓缩至干的方法包括冷冻蒸干。
在一实施例中，含有N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的溶液中，N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的浓度≥1mmol/L，优选为1.5mmol/L。
在一实施例中，含有N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的溶液中的溶剂包括但不限于乙腈。
在一实施例中，含有N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的溶液的体积与吡啶的体积之比为(15～50)：1，包括但不限于15：1、16：1、17：1、18：1、19：1、20：1、30：1、40：1、50：1。
在一实施例中，待测样品包括但不限于来源于人或动物体的血液、细胞、组织，优选为人的血液。
在一实施例中，待测样品为来源于人或动物体的血清或血浆，具体是从血液中分离得到。
实施例1
本实施例的具体检测方法如下：
1、样品的制备
取有代表性的样品，本实施例具体为来自人的血液，制成待测样品。对于不同时间下抽取的同一人的血样，则合并处理。
2、样品前处理
D-2HG、L-2HG的衍生化反应原理如图5所示。取待测液体50μL，加入2mL离心管中，再加入500μL 80％甲醇水溶液(甲醇水溶液可以使样品中的蛋白变性，并破坏一些细胞的细胞膜，因此，甲醇水溶液是作为提取液，有效地将样品中的目标检测物提取到提取液中)，涡旋5min混匀，超声提取30min，放入冷冻蒸干仪浓缩至干(冷冻温度为4℃，时间为溶剂完全挥发为止，约10～60min)。加入245μL浓度为1.5mmol/L的N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯(CAS：29739-88-6)-乙腈溶液，再加入5μL吡啶(吡啶的作用是催化衍生化反应)，涡旋混匀，衍生10min后，9500r/min 4℃离心10min，取75μL上清液，加入75μL一级水。涡旋混匀后离心10min，取100μL上清液到内衬管中，装入2mL LC进样瓶，供HPLC-MS/MS测试。加标样品在加入2mL离心管中以后，首先加入适量的待测物质标准溶液(即含有α-KG、L-2HG、D-2HG的溶液)，之后处理方法同普通样品。
3、液相条件
液相柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18，规格为100mm*2.1mm，1.7μm粒径；
柱温：40℃；样品盘温度：10℃；
进样量：5μL。
流动相及洗脱程序如表1所示。
表1
| 时间(min) | 5mM乙酸铵水溶液 | 5mM乙酸铵甲醇溶液 |
| 0 | 80％(v/v) | 20％(v/v) |
| 0.5 | 80％(v/v) | 20％(v/v) |
| 6 | 55％(v/v) | 45％(v/v) |
| 7 | 30％(v/v) | 70％(v/v) |
| 8 | 30％(v/v) | 70％(v/v) |
| 8.1 | 80％(v/v) | 20％(v/v) |
| 10 | 80％(v/v) | 20％(v/v) |
4、质谱条件：
离子源：电喷雾离子源(ESI源)；
电离模式：负离子模式；
监测模式：多反应监测模式(MRM)；
雾化帘气压(CUR)：30psi；
离子化电压(IS)：-4500V；
碰撞室强度(CAD)：9；
雾化温度(TEM)：600℃；
辅助气压1(GS1)：60.0psi；
辅助气压2(GS2)：60.0psi；
同时检测目标离子对以及内标离子对Q1/Q3，MRM监测参数包括：各离子对及其对应的驻留时间(Time)、保留时间(RT)、去簇电压(DP)、引入电压(EP)、碰撞电压(CE)和碰撞池出口电压(CXP)，MRM监测参数如下；
表2MRM监测参数
单位“mesc”即为毫秒。“volts”即为伏特，简写为“V”。
测得样品中三种物质的峰面积以后，带入标准物质曲线，即可换算出样品中α-KG、L-2HG、D-2HG的精确含量。
图1为基于实施例1的表1、表2的参数，获得的检测结果中，其中一个样品(sample9)的α-KG和2HG衍生物的LC-MS图；可见，L-2HG衍生物和D-2HG衍生物的谱图做到了分离，可分别进行精确定量。并且，α-KG的峰形良好，可以精确定量。基于实施例1的表1、表2的参数，共检测了50个样品，结果与图1类似，均能对α-KG、L-2HG、D-2HG分别进行精确定量。
图2为α-KG的标准曲线图，图3为D-2HG衍生物的标准曲线图，图4为L-2HG衍生物的标准曲线图。
我们尝试了一些其他的流动相及洗脱程序(质谱条件不变，MRM监测参数同表2)，如表3和表4所示。
表3
| 时间(min) | 水 | 甲醇 |
| 0 | 50％(v/v) | 50％(v/v) |
| 0.5 | 50％(v/v) | 50％(v/v) |
| 4 | 20％(v/v) | 80％(v/v) |
| 5 | 20％(v/v) | 80％(v/v) |
| 5.1 | 50％(v/v) | 50％(v/v) |
| 6 | 50％(v/v) | 50％(v/v) |
表4
谱图分别如图7和图8所示，
图7为使用表3所示流动相比例得到的其中一个样品(sample5)的α-KG和2HG衍生物的LC-MS图；可见，峰型很差，三个物质均无法进行定量分析。
图8为使用表4所示流动相比例得到的其中一个样品(sample22)的α-KG和2HG衍生物的LC-MS图；可见，α-KG峰型较好，可对α-KG进行定量分析。但L-2HG和D-2HG的谱图没有分离，无法分别进行定量分析。
基于表3、表4的参数，共检测了10个样品，结果与图7、8类似，均无法对L-2HG、D-2HG进行精确定量。
实施例2
本实施例的具体检测方法如下：
1、样品的制备
取有代表性的样品，本实施例具体为细胞，制成待测样品。
2、样品前处理
取待测细胞，称取50mg，加入1.5mL 96孔板中，再加入400μL 60％甲醇水溶液，涡旋10min混匀，超声提取40min，放入冷冻蒸干仪浓缩至干。加入190μL浓度为2mmol/L的N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯(CAS：29739-88-6)-乙腈溶液，再加入10μL吡啶，涡旋混匀，衍生20min后，3000r/min离心20min，取60μL上清液，加入60μL一级水。涡旋混匀后离心10min，取100μL上清液到300μL 96孔板中，供HPLC-MS/MS测试。加标样品在加入1.5mL96孔板中以后，首先加入适量的待测物质标准溶液(即含有α-KG、L-2HG、D-2HG的溶液)，之后处理方法同普通样品。
3、液相条件
液相柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18，规格为100mm*2.1mm,1.7μm粒径；
柱温：30℃；样品盘温度：4℃；
进样量：2μL。
流动相及洗脱程序如表5所示。
表5
| 时间(min) | 10mM甲酸铵水溶液 | 10mM甲酸铵甲醇溶液 |
| 0 | 80％(v/v) | 20％(v/v) |
| 0.5 | 80％(v/v) | 20％(v/v) |
| 6 | 55％(v/v) | 45％(v/v) |
| 7 | 30％(v/v) | 70％(v/v) |
| 8 | 30％(v/v) | 70％(v/v) |
| 8.1 | 80％(v/v) | 20％(v/v) |
| 10 | 80％(v/v) | 20％(v/v) |
4、质谱条件：
离子源：电喷雾离子源(ESI源)；
电离模式：负离子模式；
监测模式：多反应监测模式(MRM)；
雾化帘气压(CUR)：30psi；
离子化电压(IS)：-4500V；
碰撞室强度(CAD)：8；
雾化温度(TEM)：600℃；
辅助气压1(GS1)：60.0psi；
辅助气压2(GS2)：60.0psi。
同时检测目标离子对以及内标离子对Q1/Q3，MRM监测参数包括：各离子对及其对应的驻留时间(Time)、保留时间(RT)、去簇电压(DP)、引入电压(EP)、碰撞电压(CE)和碰撞池出口电压(CXP)，MRM监测参数如下。
表6 MRM监测参数
单位“mesc”即为毫秒。“volts”即为伏特，简写为“V”。
测得样品中三种物质的峰面积以后，带入标准物质曲线，即可换算出样品中α-KG、L-2HG、D-2HG的精确含量。
图9为实施例2中，其中一个样品(sample74)的α-KG和2HG衍生物的LC-MS图。可见，L-2HG衍生物和D-2HG衍生物的谱图做到了分离，可分别进行精确定量。α-KG的峰形良好，也可以精确定量。
基于实施例2的表5、表6的参数，共检测了30个样品，结果与图9类似，均能对α-KG、L-2HG、D-2HG分别进行精确定量。
对比例1
本实施例的具体检测方法如下：
1、样品的制备
取有代表性的样品，本对比例具体为血液，制成待测样品。
2、样品前处理
取待测液体50μL，加入2mL离心管中，再加入200μL 80％甲醇水溶液，涡旋5min混匀，超声提取30min，离心10min，取100μL上清液到内衬管中，装入2mL LC进样瓶，供HPLC-MS/MS测试。加标样品在加入2mL离心管中以后，首先加入适量的待测物质标准溶液(即含有α-KG、L-2HG、D-2HG的溶液)，之后处理方法同普通样品。
3、液相条件
液相柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18，规格为100mm*2.1mm，1.7μm粒径；
柱温：40℃；样品盘温度：10℃；
进样量：5μL。
流动相及洗脱程序如表7所示。
表7
| 时间(min) | 水 | 甲醇 |
| 0 | 50％(v/v) | 50％(v/v) |
| 0.5 | 50％(v/v) | 50％(v/v) |
| 4 | 20％(v/v) | 80％(v/v) |
| 5 | 20％(v/v) | 80％(v/v) |
| 5.1 | 50％(v/v) | 50％(v/v) |
| 6 | 50％(v/v) | 50％(v/v) |
4、质谱条件：
离子源：电喷雾离子源(ESI源)；
电离模式：负离子模式；
监测模式：多反应监测模式(MRM)；
雾化帘气压(CUR)：30psi；
离子化电压(IS)：-4500V；
碰撞室强度(CAD)：9；
雾化温度(TEM)：600℃；
辅助气压1(GS1)：60.0psi；
辅助气压2(GS2)：60.0psi。
同时检测目标离子对以及内标离子对Q1/Q3，MRM监测参数包括：各离子对及其对应的驻留时间(Time)、保留时间(RT)、去簇电压(DP)、引入电压(EP)、碰撞电压(CE)和碰撞池出口电压(CXP)，MRM监测参数如下；
表8 MRM监测参数
单位“mesc”即为毫秒。“volts”即为伏特，简写为“V”。
测得样品中物质的峰面积以后，带入标准物质曲线，只能换算出样品中L-2HG、D-2HG的总含量。
图6为对比例1中，其中一个样品(sample15)中L-2HG和D-2HG的LC-MS图；可见，L-2HG和D-2HG在谱图上仅显示为同一个色谱峰，无法进行分离，定量时只能确定总含量，而无法确定每一个手性分子的含量。同时因为没有整合α-KG，无法对α-KG进行定量。
基于对比例例1的表7、表8的参数，共检测了20个样品，结果与图6类似，均无法对α-KG、L-2HG、D-2HG分别进行精确定量。
在一实施例中，本发明成功提供一种精确检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法，可同时检测三种化合物，对α-KG、L-2HG、D-2HG的相关医学疾病的研究有很高的价值和意义。
以上应用了具体个例对本发明进行阐述，只是用于帮助理解本发明，并不用以限制本发明。对于本发明所属技术领域的技术人员，依据本发明的思想，还可以做出若干简单推演、变形或替换。
Claims (13)
1.一种检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法，其特征在于，包括：
样品预处理步骤，包括将待测样品与溶剂混合，提取处理，然后浓缩至干，然后加入含有N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的溶液以及吡啶，衍生反应后，固液分离，取第一上清液，加入水，再次混匀，固液分离，获得第二上清液；
液相色谱-串联质谱检测步骤，包括采用液相色谱-串联质谱检测所述第二上清液，获得检测结果；
计算步骤，根据所述检测结果，计算得到待测样品中α-酮戊二酸、D-2-羟基戊二酸、L-2-羟基戊二酸的含量；
所述液相色谱-串联质谱检测步骤中，液相色谱的检测条件中，色谱柱为C18色谱柱，流动相由流动相A和流动相B组成，流动相A、B选自如下组合中的任意一种：
1）流动相A为含有乙酸铵的水溶液，流动相B为含有乙酸铵的甲醇溶液；
2）流动相A为含有甲酸铵的水溶液，流动相B为含有甲酸铵的甲醇溶液；
所述液相色谱的洗脱程序如下：
。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有乙酸铵的水溶液中，乙酸铵的浓度为5~10mmol/L；
所述含有乙酸铵的甲醇溶液中，乙酸铵的浓度为5~10mmol/L；
所述含有甲酸铵的水溶液中，甲酸铵的浓度为5~10mmol/L；
所述含有甲酸铵的甲醇溶液中，甲酸铵的浓度为5~10mmol/L。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，液相色谱-串联质谱检测步骤中，所述液相色谱为高效液相色谱。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述C18色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEHC18色谱柱，规格为100mm*2.1mm，1.7μm粒径。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的检测条件中，色谱柱温度为30~50℃。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的检测条件中，色谱柱温度为38~42℃。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的检测条件中，色谱柱温度为40℃。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，液相色谱-串联质谱检测步骤中，还包括如下A）至J）中的至少一项：
A）所述串联质谱为三重四级杆质谱；
B）所述串联质谱的检测条件中，离子源为电喷雾离子源；
C）所述串联质谱的检测条件中，电离模式为负离子模式；
D）所述串联质谱的检测条件中，扫描方式为多反应监测或选择反应监测；
E）所述串联质谱的检测条件中，雾化帘气压为30~40psi；
F）所述串联质谱的检测条件中，离子化电压为-3500~-4500V；
G）所述串联质谱的检测条件中，雾化温度为400~600℃；
H）所述串联质谱的检测条件中，辅助气压为40~60psi；
I）所述串联质谱的检测条件中，引入电压为-5~-10V；
J）所述串联质谱的检测条件中，碰撞池出口电压为-5~-10V。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱检测步骤中，所述串联质谱的检测条件中，检测参数如下：
。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，样品预处理步骤中，还包括如下A）至H）中的至少一项：
A）所述溶剂包括甲醇水溶液；
B）样品预处理步骤中，所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分浓度为50~80%；
C）提取处理的方法包括超声提取；
D）浓缩至干的方法包括冷冻蒸干；
E）所述含有N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的溶液中，所述N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的浓度≥1 mmol/L；
F）所述含有N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的溶液中的溶剂包括乙腈；
G）所述含有N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的溶液的体积与所述吡啶的体积之比为（15~50）：1；
H）所述待测样品包括来源于人或动物体的血液、细胞、组织。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，样品预处理步骤中，所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分浓度为80%。
12.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述含有N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的溶液中，所述N-对甲苯磺酰基-L-苯丙氨酰氯的浓度为1.5mmol/L。
13.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述待测样品包括人的血液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210647984.7A CN115248272B (zh) | 2022-06-08 | 2022-06-08 | 一种检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210647984.7A CN115248272B (zh) | 2022-06-08 | 2022-06-08 | 一种检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115248272A CN115248272A (zh) | 2022-10-28 |
| CN115248272B true CN115248272B (zh) | 2023-04-18 |
Family
ID=83698999
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210647984.7A Active CN115248272B (zh) | 2022-06-08 | 2022-06-08 | 一种检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115248272B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115656385B (zh) * | 2022-11-14 | 2023-03-21 | 中轻检验认证有限公司 | 一种检测白酒中l-乳酸和d-乳酸手性异构体含量的方法 |
| CN116497062B (zh) * | 2023-02-01 | 2024-04-05 | 山东大学第二医院 | 一种d-2-羟基戊二酸诱导转基因表达的控制系统及其构建方法和应用 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2634259A1 (en) * | 2012-03-01 | 2013-09-04 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Means and methods for the determination of (D)-2-hydroxyglutarate (D2HG) |
| CN106855551B (zh) * | 2015-12-09 | 2019-07-19 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 血清样本中葡萄糖能量代谢相关的重要代谢物的分析方法 |
| CN107703216A (zh) * | 2016-08-07 | 2018-02-16 | 复旦大学 | 一种快速检测肿瘤组织2‑hg累积的方法 |
| CN113430172B (zh) * | 2021-06-23 | 2022-07-12 | 浙江大学 | 一种通过调控代谢促进体外胚胎发育的方法 |
-
2022
- 2022-06-08 CN CN202210647984.7A patent/CN115248272B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115248272A (zh) | 2022-10-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN115248272B (zh) | 一种检测α-酮戊二酸和手性2-羟基戊二酸的方法 | |
| CN114720704B (zh) | 一种测定血清中游离睾酮的试剂盒及方法 | |
| CN109738539A (zh) | 液相色谱串联质谱测定样品极长链脂肪酸的方法及试剂盒 | |
| CN114778747B (zh) | Uplc-ms/ms法同时检测血液中16种药物及其代谢物的方法 | |
| CN118033007B (zh) | 一种液质联用定量检测血浆和粪便中多种脂肪酸的方法 | |
| CN117630263A (zh) | 基于液相色谱串联质谱检测血浆中多种游离氨基酸的方法 | |
| CN113607854A (zh) | 同时检测多种维生素的方法和检测试剂盒 | |
| Rosseel et al. | Quantitative GLC determination of cis-and trans-isomers of doxepin and desmethyldoxepin | |
| CN113588802A (zh) | 用于非侵入性检测肝毒性吡咯里西啶类生物碱暴露的生物标志物和方法 | |
| CN111912920A (zh) | 一种超高效液相色谱串联质谱技术检测血浆中霉酚酸及其代谢物的方法 | |
| CN112198251B (zh) | 含蟾皮类药材制剂中六种蟾蜍甾烯内酯成分在血浆或组织中浓度的检测方法 | |
| CN112611814B (zh) | 一种干血片中1,5-脱水葡萄糖醇的测定方法 | |
| CN110618221B (zh) | 一种水产品中脱氢胆酸的检测方法 | |
| CN114720580A (zh) | 一种生物样品中西格列汀和二甲双胍的检测方法 | |
| CN110308218B (zh) | 评价缩水甘油及其酯体内暴露的血红蛋白加合物检测方法及应用 | |
| CN111413439A (zh) | 一种快速亲水相互作用色谱-串联质谱法测定血浆中二甲双胍的方法 | |
| CN111679005A (zh) | 血浆中甘草酸苷的检测方法 | |
| CN112362724A (zh) | 一种快速检测人体尿液中3,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺含量的方法 | |
| CN111579703A (zh) | 基于lc-ms/ms对生物样本中胆红素的降解产物的检测分析方法 | |
| CN110988210A (zh) | 一种降低脂溶性维生素96孔板非特异性吸附的方法 | |
| CN115494177B (zh) | 当归四逆汤中六种成分在血浆中的浓度的检测方法 | |
| CN115184480B (zh) | 一种用于鉴定华蟾素制剂或蟾皮的特征多肽及其含量测定方法与应用 | |
| CN114563504B (zh) | 一种测定血浆中游离醛固酮含量的方法及试剂盒 | |
| CN117517541B (zh) | 一种测定血浆中双甘肽浓度的方法 | |
| CN118050442B (zh) | 用于测定全血中他克莫司浓度的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 518000 Room 202, Building 5, Metrology Quality Testing Institute, Minkang Road, Minzhi Community, Longhua District, Shenzhen, Guangdong Applicant after: Medical Laboratory of Shenzhen Shenzhen Inspection Group Applicant after: SHENZHEN ACADEMY OF METROLOGY & QUALITY INSPECTION Address before: 518000 Room 202, Building 5, Metrology Quality Testing Institute, Minkang Road, Minzhi Community, Longhua District, Shenzhen, Guangdong Applicant before: Shenzhen Inspection Group (Shenzhen) Medical Laboratory Applicant before: SHENZHEN ACADEMY OF METROLOGY & QUALITY INSPECTION |
|
| CB02 | Change of applicant information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |