CN117965736A - Grem1作为预测非小细胞肺癌转移或不良预后的生物标志物及其应用 - Google Patents

Grem1作为预测非小细胞肺癌转移或不良预后的生物标志物及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了GREM1作为预测非小细胞肺癌转移或不良预后的生物标志物及其应用，涉及生物医药技术领域。所述生物标志物为GREM1基因。本发明还提供检测GREM1基因在肺组织中表达量的试剂在制备以下(1)或(2)所述的产品中的应用：(1)预测非小细胞肺癌转移的产品；(2)预测肺腺癌不良预后的产品。本发明研究发现GREM1在非小细胞肺癌组织中高表达，其高表达与非小细胞肺癌转移和不良预后密切相关，因此GREM1可作为预测非小细胞肺癌转移或不良预后的生物标志物。

Description

GREM1作为预测非小细胞肺癌转移或不良预后的生物标志物 及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及GREM1作为预测非小细胞肺癌转移或不良预后的生物标志物及其应用。
背景技术
肺癌可被分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)两大类，约85％是NSCLC。NSCLC是一种高转移性的肿瘤，主要包括肺腺癌(lungadenocarcinoma，LUAD)、肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma，LUSC)和肺大细胞癌，LUAD是NSCLC最常见的临床亚型。由于肺癌的临床表现具有多样性且缺乏有效诊断指标，大部分患者直至中晚期才被确诊，而此时肿瘤细胞已经具有浸润和转移的特征。深入探究肺癌发生转移和不良预后的生物标志物，探寻NSCLC潜在的干预靶点显得尤为迫切。
上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是早期肿瘤转化成为晚期恶性肿瘤的关键事件。肿瘤细胞发生EMT时，上皮细胞失去粘附、基底极性等特征演变成为原位癌，随着进一步的发展，肿瘤细胞进行原位侵袭和扩散，继而获得转移和侵入周围组织的能力。考虑到EMT在肿瘤转移过程中的重要作用，因此有效地阻断或逆转EMT的过程，是临床治疗肿瘤患者的重要方式。
Gremlin是DAN家族BMP拮抗剂的成员，可与BMP家族特异结合，进而抑制BMP配体与受体结合发挥拮抗作用，其编码的蛋白主要有三种形式，即GREM1、GREM2和GREM3。GREM1基因又名Drm基因，最早由Topol从大鼠成纤维细胞中筛选出来，其是BMP拮抗剂家族中的一员，该基因定位于人类染色体15q13.3上，大小为3.3kb。GREM1基因的蛋白质大小为184-aa，分子量为20.7kDa，其是一种分泌性的蛋白质，主要在基质细胞中表达。
目前，GREM1在肺癌尤其是NSCLC中的作用等方面的研究报道相对缺乏，GREM1是否参与NSCLC的EMT和转移进程，以及其在NSCLC中扮演促癌角色还是抑癌角色仍尚属未知。
发明内容
本发明的目的是提供GREM1作为预测非小细胞肺癌转移或不良预后的生物标志物及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，本发明研究发现GREM1在非小细胞肺癌组织中高表达，其高表达与非小细胞肺癌转移和不良预后密切相关，因此GREM1可作为预测非小细胞肺癌转移或不良预后的生物标志物。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种预测非小细胞肺癌转移或不良预后的生物标志物，所述生物标志物为GREM1基因。
本发明还提供检测GREM1基因在肺组织中表达量的试剂在制备以下(1)或(2)所述的产品中的应用：
(1)预测非小细胞肺癌转移的产品；
(2)预测肺腺癌不良预后的产品。
进一步地，所述产品为试剂盒或试剂。
进一步地，所述试剂为PCR扩增引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示。
本发明还提供一种判断肺组织是否为非小细胞肺癌组织、预测非小细胞肺癌转移或预测肺腺癌不良预后的产品，包括检测GREM1基因在肺组织中表达量的试剂。
进一步地，所述产品为试剂盒或试剂。
本发明还提供抑制GREM1基因表达的试剂在制备以下(a)或(b)所述的药物中的应用：
(a)抑制非小细胞肺癌上皮间质转化的药物；
(b)抑制非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭能力的药物。
进一步地，所述试剂为siRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示。
本发明还提供一种抑制非小细胞肺癌上皮间质转化或抑制非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭能力的药物，包括抑制GREM1基因表达的试剂。
进一步地，所述试剂为siRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4或SEQ ID NO.5所示。
本发明公开了以下技术效果：
本发明利用生物信息学方法筛选出与NSCLC关联的差异表达基因GREM1，分析其在不同分期的NSCLC组织中的表达水平，并分析其表达与患者生存期间的关系；进一步收集临床NSCLC组织及其对应癌旁组织，应用qRT-PCR和Western blot方法检测GREM1在组织样本中的表达，验证生物信息学数据，结果显示GREM1在NSCLC组织中高表达，且在转移性NSCLC组织中进一步高表达，且其高表达与NSCLC(LUAD)患者的不良预后相关。
本发明还采用慢病毒感染技术建立稳定过表达GREM1的NSCLC稳转细胞株，利用siRNAs干扰技术实现GREM1基因的瞬时靶向敲降；运用Western blot方法检测EMT分子标志物(E-cadherin、Vimentin和Snail)及GREM1蛋白的表达水平，评估GREM1在NSCLC细胞EMT中的作用；运用划痕-愈合、Transwell迁移和侵袭等实验手段检测NSCLC细胞的迁移和侵袭能力，结果显示，过表达GREM1能够显著促进NSCLC细胞的EMT、迁移和侵袭能力；而敲降GREM1则显著抑制NSCLC细胞的EMT、迁移和侵袭能力；GREM1异常高表达可能通过激活NSCLC细胞EMT进程，进而促进癌细胞的迁移和侵袭能力。本发明证明将GREM1列为靶向治疗NSCLC的潜在靶点具有一定的科学与应用价值。
附图说明
图1为利用生物信息法分析肺癌表达谱芯片数据(GSE109576)，筛选差异表达基因的结果；其中，A为GSE109576数据库分析差异表达基因；B为TCGA数据库分析GREM1在多种人类恶性肿瘤中的表达模式；C为TCGA数据集(非配对临床样本)分析GREM1在肺癌中的表达水平；D为TCGA数据集(配对临床样本)分析GREM1在肺癌中的表达水平；E为TCGA数据集(非配对临床样本)分析GREM1在肺腺癌中的表达水平；F为TCGA数据集(配对临床样本)分析GREM1在肺腺癌中的表达水平；ns，无统计学差异；*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001；
图2为GREM1表达与非小细胞肺癌临床进展和预后的相关性分析结果；其中，A为GREM1在不同分期的肺腺癌组织中的表达水平；B和C为Kaplan-Meier Plotter分析GREM1表达与肺腺癌(B)和肺鳞癌(C)患者生存期的关系；D为qRT-PCR检测GREM1在NSCLC细胞中的表达水平；E和F分别为qRT-PCR检测76例NSCLC组织和其癌旁组织中GREM1mRNA的表达水平；G为将76例NSCLC组织分为非转移(n＝40)和转移(n＝36)两组后，分析GREM1 mRNA表达水平在两组NSCLC组织中的表达差异的结果；**P<0.01；***P<0.001；
图3为Western blot检测A549细胞(A)和H1299细胞(B)中GREM1、E-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达水平的结果；β-actin作为内参；
图4为过表达GREM1对NSCLC细胞迁移能力的影响；其中，A和B分别为GREM1过表达及其对照组的A549(A)和H1299(B)细胞经饥饿处理24h后，划痕-愈合实验检测细胞穿进划痕区的相对迁移能力的结果；C为B的统计分析结果；**P<0.01；***P<0.001；
图5为过表达GREM1对NSCLC细胞迁移、侵袭能力的影响；其中，A和B分别为GREM1过表达及其对照组的A549(A)和H1299(B)细胞迁移、侵袭穿过Transwell小室的细胞数目；C和D分别为A和B的统计分析结果；**P<0.01；***P<0.001；
图6为敲降GREM1对NSCLC细胞EMT的影响；其中A和B分别为Western blot检测A549(A)和H1299(B)细胞中GREM1、E-cadherin、Vimentin、Snail蛋白表达水平的结果；β-actin作为内参；
图7为敲降GREM1对NSCLC细胞迁移能力的影响；其中，A和B分别为敲降GREM1及其对照组的A549(A)和H1299(B)细胞经饥饿处理24h后，划痕-愈合实验检测细胞穿进划痕区的相对迁移能力检测结果；C和D分别为A和B的统计分析结果；**P<0.01；***P<0.001；
图8为Transwell迁移和侵袭实验结果；其中，A和C分别为敲降GREM1及其对照的A549(A)和H1299(C)细胞迁移、侵袭穿过Transwell小室的细胞染色图；B和D分别为A和C的迁移、侵袭穿过Transwell小室的细胞数目统计结果。
具体实施方式
实施例1
1.材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验细胞株与菌株
本发明中所使用的NSCLC细胞系(A549和H1299)均购于上海中国科学院细胞所，细胞保存于液氮罐中，均具有STR鉴定证书。
大肠杆菌DH5α购于南京诺唯赞生物公司，冻存于-80℃冰箱内。
1.1.2临床组织样本
本发明涉及的76例NSCLC临床组织样本取自苏州大学附属医院手术切除患者，依据《2017国际抗癌联盟(UICC)肺癌TNM分期(第8版)》指南对NSCLC组织进行分期评估。
1.2实验方法
1.2.1细胞培养
(1)细胞复苏
1)确认水浴锅中水清洁，提取打开预热至37℃。
2)做好防护，液氮罐中取出冻存管，最短时间投入水浴锅，用力摇晃细胞至黄豆般大小。酒精消毒管外壁，并将管内物质轻柔滴加到放有细胞培养基的EP管，1200rpm离心4min。
3)弃上清后重悬细胞，转至培养容器并放入生物培养箱进行贴壁培养。根据细胞生长状况适时更换培养基。
(2)细胞传代
1)细胞生长密度达85％时，抽除旧培养基。
2)消化细胞，之后终止消化并移至EP管，1200rpm离心4min。
3)弃上清后重悬细胞，转至合适容器继续培养。
(3)细胞冻存
1)冻存液现配现用，DMSO：胎牛血清＝1：9。
2)离心前同“细胞传代”。
3)弃上清后冻存液重悬细胞并移入冻存管密封，记录基本信息。
4)冻存步骤：4℃(30min)→-20℃(2h)→-80℃(24h)→液氮罐(长期冻存)，为了维持细胞活力和状态，长期冻存于液氮中的细胞需定期进行复苏培养。
(4)细胞转染
将细胞接种至六孔板中，待板内细胞密度超过70％时，按说明书使用Lipo 3000试剂进行细胞转染。利用qRT-PCR技术评估转染效果。
1.2.2RNA提取、反转录及Real-time PCR
(1)总RNA的提取、反转录
使用裂解法提取组织样本的RNA。使用NanoDrop 2000仪器检测RNA浓度并做好标记，-80℃冻存。利用反转录试剂盒进行反转录处理。
(2)实时荧光定量PCR(qRT-PCR)
1)qRT-PCR检测GREM1表达量，引物序列见表1。
表1qRT-PCR引物列表
注：“F”表示上游引物；“R”表示下游引物。
1.2.3载体构建
(1)GREM1过表达载体构建
1)从吉凯公司购买含GREM1表达质粒，PCR扩增GREM1 cDNA，扩增反应体系见表11；扩增反应体系见表2；反应程序如下：98℃10min；98℃10s，58℃45s，35个循环；72℃10min。
表2扩增反应体系
2)琼脂糖凝胶电泳：提前配制好凝胶，待凝固将其放入电泳仪。将PCR引物加入凝胶孔，设置电泳仪工作电压200V并选择合适的电泳时间。
3)PCR产物凝胶回收：电泳结束后，按紫外灯指示切下正确位置目的条带，移入离心管中。按说明书回收切取的胶条并检测其浓度及纯度，-20℃保存。
4)根据表3配制反应体系并加入离心管吹打混匀，按以下步骤进行酶切反应：37℃水浴55min、60℃水浴20min，终止反应。按说明书纯化产物。
表3酶切反应体系
5)酶切产物与载体的重组：参考重组克隆试剂盒的说明书进行酶切产物的重组反应，根据表4将各组分在冰上配制重组反应体系，并转移至离心管中吹打混匀，PCR仪37℃反应30min，4℃保持。最后于冰上冷却产物，待后续大肠杆菌转化实验时使用。
表4重组反应体系
6)转化质粒：冰上解冻DH5α感受态细胞，轻弹管壁促其混匀。管中加入重组质粒并混匀后冰浴30min，42℃水浴45s后再次冰浴3min。最后吸取适量液态培养基，37℃摇床150rpm培养50min。转化菌液均匀涂布于抗性板，待菌液基本吸收后倒扣，细胞培养箱过夜培养。挑选单克隆菌落进一步摇菌扩培。
7)提取质粒：按说明书抽提质粒并检测其浓度及纯度。取部分质粒送往测序公司进行测序分析，剩余质粒-80℃条件下冻存。
(2)敲降GREM1的慢病毒载体构建
通过BLOCK-iTTMRNAi Designer在线工具设计靶向GREM1的siRNAs，交由诺唯赞公司合成。序列信息见表5。
表5 si-GREM1序列
1.2.4建立稳转细胞株
(1)慢病毒包装
1)包装、制备慢病毒时选用HEK-293T细胞，在10cm培养皿中培养该细胞。细胞生长密度超过80％时，进行慢病毒表达载体及病毒包装载体共转染实验。
2)参照“1.2.1中细胞转染”步骤，分别将过表达或敲降GREM1的慢病毒载体和包装载体共转染至293T细胞。
3)转染6h后，PBS缓冲液轻洗细胞，加入新鲜培养基继续培养48h。
4)吸取培养基至15mL EP管，4℃、3500g离心12min。吸取上清并借助0.45μm过滤膜得到病毒粗提液，转移至新的离心管中并进行分装。记录好病毒名称、时间等基本信息，-80℃冰箱保存备用。
(2)慢病毒感染
1)选取NSCLC细胞株(A549和H1299)进行病毒感染，构建敲降/过表达GREM1的NSCLC稳转细胞株。
2)将细胞传代至六孔板之中，生长密度达到30％时吸弃原有培养基，并加入完全培养基(1mL)、病毒粗提液(1mL)以及Polybrene(2μL)。
3)病毒感染24h后，PBS缓冲液轻洗细胞，更换新鲜的完全培养基。48h后镜下观察到绿色荧光时可以得出此次病毒转染试验已经成功完成。
(3)稳转细胞株的筛选
病毒感染48h后，利用嘌呤霉素筛选NSCLC稳转细胞株，初始浓度为2μg/mg。逐步降低嘌呤霉素浓度直至细胞几乎不发生死亡，以此为终浓度维持细胞培养。通过qRT-PCR和Westernblot技术来检测目的基因的表达水平，判断NSCLC稳转细胞株是否构建成功。
1.2.5细胞迁移与侵袭(Transwell)实验
(1)Transwell小室基质胶(Matrigel)铺制
仅侵袭实验需铺制。-20℃冰箱提前取出Matrigel，并于4℃冰箱内解冻。同时将铺胶所用的实验用品放于-20℃冰箱预冷。无血清培养基按比例(1：4)稀释Matrigel胶。向小室中缓慢加入适量混合液，液体需要平铺在底部且不能产生气泡，最后转入细胞培养箱中孵育1h左右。
(2)细胞接种
消化细胞后用RPMI-1640重悬并计数，低浓度FBS培养基重悬细胞至合适密度。抽除小室旧培养基，24孔板加高浓度FBS培养基(0.7mL)并将小室置于其中，上室接种细胞悬液(0.15mL)后转入生物培养箱继续培养24h。
(3)细胞染色及计数
弃去旧培养基并润洗，甲醇固定细胞30min。结晶紫过夜染色后清洗小室并晾干，镜下不同视野拍照并计数。
1.2.6划痕-愈合实验
于六孔板中接种各组细胞，细胞生长密度达到80％-90％时，加入1％FBS培养基(2mL)继续培养细胞12h。比着直尺使用移液枪枪头，力度均匀地沿六孔板中线划痕后，PBS缓冲液轻洗细胞。加入无血清培养基(2mL)，显微镜下随机挑选多个视野拍照，作为0h对照组。细胞饥饿处理24h，弃去旧培养基并润洗，多聚甲醛固定30min，镜下观察并拍照。
1.2.7临床表达和生存期分析
从GSE、TCGA数据库获得GREM1在多种人类恶性肿瘤中的表达模式，从Kaplan-Meier Plotter数据库获得肺癌患者生存期的相关数据，并通过log-rank检验分析GREM1的表达在非小细胞肺癌患者预后的作用。
2.结果
2.1GREM1在非小细胞肺癌组织中高表达
本发明利用生物信息法分析肺癌表达谱芯片数据(GSE109576)，筛选出差异表达基因GREM1(图1中A)，进一步利用TCGA数据库分析发现GREM1在包括LUAD在内的多种恶性肿瘤中表达显著上调(P<0.001，图1中B)。为了证实GREM1在肺癌组织中的表达模式，本发明进行了数据扩大分析，结果显示，无论是在非配对临床组织还是配对临床组织中，同癌旁组织对比，GREM1在肺癌组织(图1中C和D)及LUAD组织(图1中E和F)中的表达水平显著上升(P<0.001)，上述结果提示GREM1在肺癌(NSCLC)中可能扮演促癌角色。
2.2GREM1表达与非小细胞肺癌临床进展和预后不良相关
为了充分挖掘GREM1在NSCLC中潜在的临床意义，本发明利用TCGA数据库分析了GREM1表达与LUAD临床进展的关联。结果如图2中A所示，与正常肺组织相比，GREM1在不同分期的LUAD组织中均呈高表达(P<0.01)，且其表达水平随LUAD分期进展整体呈现逐步上调趋势，提示GREM1可能参与LUAD的临床进展。LUAD和LUSC是NSCLC的主要病理分型，为进一步揭示GREM1表达与LUAD和LUSC患者预后的关系，本发明从Kaplan-Meier Plotter数据库获取了1308例LUAD患者和931例LUSC患者生存期数据并进行分析。结果显示：在LUAD中，GREM1高表达患者生存期显著低于GREM1低表达患者(图2中B)；而在LUSC中，GREM1低表达与高表达患者间的生存期无显著差异(图2中C)。以上结果提示GREM1与LUAD的临床进展有关，且GREM1高表达与LUAD患者的不良预后密切相关。
为了进一步明确GREM1在NSCLC细胞中的表达情况及其潜在功能，本发明在正常肺上皮细胞系BEAS-2B和NSCLC细胞系(A549、H358、H1650和H1299)中检测了GREM1的表达水平。结果显示，相较于BEAS-2B细胞，NSCLC细胞系中GREM1表达水平显著上调(P<0.001，图2中D)。与此同时，本发明在自己收集的76例NSCLC临床组织样本中检测了GREM1 mRNA表达水平。结果显示，相比于癌旁组织，NSCLC组织中GREM1 mRNA表达水平显著上调(P<0.001，图2中E和F)，与生信分析肺癌表达谱芯片数据结果相一致。有趣的是，本发明将NSCLC组织分为非转移(n＝40)和转移(n＝36)两组进一步分析发现，转移性NSCLC组织中GREM1 mRNA表达水平显著高于非转移组(P<0.01，图2中G)，表明GREM1高表达与NSCLC转移密切相关，提示GREM1在NSCLC中可能扮演“促转移角色”。
2.3过表达GREM1促进非小细胞肺癌细胞的EMT
上皮间质转化(EMT)是早期肿瘤转化成为晚期恶性肿瘤的关键事件，与肿瘤细胞的侵袭和转移密切相关，为进一步探究GREM1在非小细胞肺癌EMT中的作用。本发明采用慢病毒感染技术建立稳定过表达GREM1的NSCLC稳转细胞株(A549和H1299)，具体步骤参照“1.2.6建立稳转细胞株”。本发明在A549(图3中A)和H1299(图3中B)两株NSCLC细胞系中检测了EMT相关分子标志物的表达水平，结果显示过表达GREM1显著抑制上皮标志物E-cadherin的表达水平，同时显著促进间质标志物Vimentin和Snail的表达水平，以上结果表明过表达GREM1可促进NSCLC细胞的EMT。
2.4过表达GREM1促进非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭
前期实验已证实过表达GREM1能够促进NSCLC细胞的EMT，为例研究GREM1是否影响NSCLC细胞的迁移和侵袭能力，本发明开展划痕-愈合实验，结果显示对照组及GREM1过表达组细胞均能穿进划痕区域，但与对照组相比，GREM1过表达组细胞穿过划痕区的相对面积较大(图4中A-C)，表明过表达GREM1能够显著促进NSCLC细胞的迁移能力。
另外，本发明还开展了Transwell迁移和侵袭实验，侵袭实验时需向小室铺制基质胶来模拟体内基底膜环境。结果显示，相较于对照组，GREM1过表达组A549(图5中A和C)和H1299细胞(图5中B和D)能够更为显著地迁移、侵袭穿过Transwell小室，这一结果表明过表达GREM1能够促进NSCLC细胞的迁移和侵袭能力，这与划痕-愈合实验结果相吻合。
2.5敲降GREM1抑制非小细胞肺癌细胞的EMT
为了更好的证明GREM1在NSCLC细胞EMT中的作用，本发明利用siRNAs干扰技术敲降GREM1的表达，检测NSCLC细胞系EMT分子标志物的表达水平。结果如图6所示，敲降GREM1表达显著促进上皮标志物E-cadherin的表达水平，同时显著抑制间质标志物Vimentin和Snail的表达水平，以上结果表明敲降GREM1可抑制NSCLC细胞的EMT。而前文已证实过表达GREM1可促进NSCLC细胞的EMT，相关实验均明确了GREM1在NSCLC细胞EMT中的促进作用。
2.6敲降GREM1抑制非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭
前期实验证实敲降GREM1能够抑制NSCLC细胞的EMT，本发明继续探索敲降GREM1是否抑制NSCLC细胞的迁移和侵袭能力。划痕-愈合实验结果显示，与对照组细胞相比，GREM1敲降组A549(图7中A和C)和H1299(图7中B和D)细胞穿过划痕区的相对面积较小，表明敲降GREM1可显著抑制NSCLC细胞的迁移能力。
此外，Transwell迁移和侵袭实验结果显示，GREM1敲降组A549(图8中A和C)和H1299细胞(图8中B和D)迁移、侵袭穿过Transwell小室的细胞数量明显少于对照组，这一结果表明敲降GREM1显著抑制NSCLC细胞的迁移和侵袭能力，与划痕-愈合实验结果相一致。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一种预测非小细胞肺癌转移或不良预后的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为GREM1基因。
2.检测GREM1基因在肺组织中表达量的试剂在制备以下(1)或(2)所述的产品中的应用：
(1)预测非小细胞肺癌转移的产品；
(2)预测肺腺癌不良预后的产品。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述产品为试剂盒或试剂。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂为PCR扩增引物对，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示。
5.一种预测非小细胞肺癌转移或预测肺腺癌不良预后的产品，其特征在于，包括检测GREM1基因在肺组织中表达量的试剂。
6.根据权利要求5所述的产品，其特征在于，所述产品为试剂盒或试剂。
7.抑制GREM1基因表达的试剂在制备以下(a)或(b)所述的药物中的应用：
(a)抑制非小细胞肺癌上皮间质转化的药物；
(b)抑制非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭能力的药物。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述试剂为siRNA，其核苷酸序列如SEQ IDNO.4或SEQ ID NO.5所示。
9.一种抑制非小细胞肺癌上皮间质转化或抑制非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭能力的药物，其特征在于，包括抑制GREM1基因表达的试剂。
10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于，所述试剂为siRNA，其核苷酸序列如SEQID NO.4或SEQ ID NO.5所示。
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