CN111635941A - Sdpr基因表达和/或sdpr基因甲基化水平的检测试剂盒及应用 - Google Patents

Sdpr基因表达和/或sdpr基因甲基化水平的检测试剂盒及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了SDPR基因表达水平的检测试剂和/或SDPR基因甲基化水平的检测试剂在制备用于诊断受试者是否患有肺癌或用于预测受试者是否具有患肺癌风险或用于判断肺癌患者对化疗药物是否敏感或用于判断肺癌患者预后是否良好的试剂盒中的应用，属于分子诊断领域。本发明为肺癌早期诊断和治疗提供了新的临床标志物，具有巨大的临床价值。

Description

SDPR基因表达和/或SDPR基因甲基化水平的检测试剂盒及 应用
技术领域
本发明属于分子诊断领域，具体地，涉及SDPR基因表达和/或SDPR基因甲基化水平的检测试剂盒及应用。
背景技术
肺癌是全世界发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。其肿瘤恶性程度非常高，预后是所有肿瘤类型中最差的，其5年生存率仅为10％–20％。尽管在过去的几年中非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗取得了进展，但其总生存率仍然很低。主要的问题之一是化疗耐药性。非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗包括手术、放疗、化疗及分子靶向治疗等。目前，对于可切除的肺癌，手术仍是最重要的治疗手段，放化疗是辅助治疗手段。而对于晚期肺癌，分子靶向治疗虽然已越来越重要，但是化疗仍然拥有不可取代的地位。紫衫醇(PTX)与铂类联用的给药方案被广泛应用于NSCLC的一、二线及辅助化疗中。PTX可引起骨髓抑制、神经毒性、胃肠道毒副作用及脱发。因此，有效的选择合适的患者，避免副作用，指导用药具有重要意义。目前尚无有效指标指导化疗药物的使用。
细胞膜穴样内陷是质膜上直径为60-80nm的小“烧瓶状”内陷，参与多种细胞过程，包括内吞，脂质稳态，信号转导和肿瘤发生。Caveolins和Cavins是细胞膜穴样内陷的主要成分。其中Cavins由四种类型组成，Cavin1、Cavin2、Cavin3和Cavin4，它们与Cavin1共同调控细胞膜穴样内陷形成。除此之外，Cavin1、Cavin2和Cavin3也参与多种癌症的进展。Cavin2，也称为血清剥夺蛋白反应(Serum deprivation protein response，SDPR)，定位于2q32-33，在多种癌症中作为抑癌因子被报道。研究显示，SDPR在多种癌症中因启动子CpG岛高甲基化而在表观遗传学上失活。
SDPR最初被发现是由血清饥饿引起的，并被进一步鉴定为蛋白激酶C的底物，该蛋白激酶C可在不存在Ca2+的情况下特异性结合磷脂酰丝氨酸。它还有助于细胞膜穴样内陷的形成。最近的研究报道，已发现SDPR在多种癌症中被下调，例如乳腺癌、肝癌、胃癌、子宫内膜癌、乳头状甲状腺癌、肾细胞癌、口腔癌等。其中，在乳腺癌和甲状腺癌中SDPR表达沉默被提及与启动子高甲基化相关。基因启动子区CpG岛的异常甲基化致使许多抑癌基因的沉默失活，导致细胞的增殖失控，从而促进肿瘤的发生和发展。
然而，对于SDPR在非小细胞肺癌中的甲基化状态、生物学功能及临床意义仍未阐明。
发明内容
为了解决上述技术问题中的至少一个，发明人研究了SDPR的甲基化状态和生物学功能，并确定了其在化疗药物中的作用。
本发明的第一方面提供SDPR基因表达水平的检测试剂和/或SDPR基因甲基化水平的检测试剂在制备用于诊断受试者是否患有肺癌或用于预测受试者是否具有患肺癌风险或用于判断肺癌患者对化疗药物是否敏感或用于判断肺癌患者预后是否良好的试剂盒中的应用。
在本发明的一些实施方案中，所述SDPR基因表达水平的检测试剂为用于检测SDPR基因转录产物水平的试剂。
在本发明的一些具体实施方案中，所述用于检测SDPR基因转录产物水平的试剂包括用于检测SDPR基因转录产物水平的特异性引物对。
在本发明的一些优选实施方案中，所述用于检测SDPR基因转录产物水平的特异性引物对包括具有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的下游引物。
在本发明的另一些实施方案中，所述SDPR基因表达水平的检测试剂为用于检测SDPR蛋白水平的试剂。
在本发明的一些实施方案中，所述SDPR基因或甲基化水平的检测试剂包括用于检测SDPR基因启动子甲基化状态的特异性引物对和用于检测SDPR基因启动子非甲基化状态的特异性引物对。
在本发明的一些优选的实施方案中，所述用于检测SDPR基因启动子甲基化状态的特异性引物对包括具有SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的下游引物；所述用于检测SDPR基因启动子非甲基化状态的特异性引物对包括具有SEQ ID NO.7所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO.8所示核苷酸序列的下游引物。
本发明的第二方面提供SDPR基因表达水平的检测试剂和/或SDPR基因甲基化水平的检测试剂在制备适用于以下方法的试剂盒中的应用，所述方法包括：
S1，提取受试者样本核酸样本，
S2，利用所述检测试剂检测SDPR基因的表达水平和/或SDPR基因启动子甲基化状态，
S3，根据S2检测得到的SDPR基因的表达水平和/或启动子甲基化状态，诊断受试者是否患有肺癌，或预测受试者是否具有患肺癌风险，或判断肺癌患者对化疗药物是否敏感，或判断肺癌患者预后是否良好。
在本发明的一些实施方案中，若S2检测得到的SDPR基因的表达水平高于平均水平，和/或SDPR基因启动子甲基化水平高于平均水平，表明受试者患有肺癌，或预测受试者具有患肺癌风险，或判断肺癌患者对化疗药物敏感，或判断肺癌患者预后不好。
本发明的第三方面提供一种用于诊断受试者是否患有肺癌或用于预测受试者是否具有患肺癌风险或用于判断肺癌患者对化疗药物是否敏感或用于判断肺癌患者预后是否良好的试剂盒，包括SDPR基因表达水平的检测试剂和/或SDPR基因甲基化水平的检测试剂。
在本发明的一些实施方案中，所述SDPR基因表达水平的检测试剂为用于检测SDPR基因转录产物水平的试剂。
在本发明的一些具体实施方案中，所述用于检测SDPR基因转录产物水平的试剂包括用于检测SDPR基因转录产物水平的特异性引物对。
在本发明的一些优选实施方案中，所述用于检测SDPR基因转录产物水平的特异性引物对包括具有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的下游引物。
在本发明的另一些实施方案中，所述SDPR基因表达水平的检测试剂为用于检测SDPR蛋白水平的试剂。
在本发明的一些具体实施方案中，所述于检测SDPR蛋白水平的试剂包括特异性结合SDPR蛋白的抗体。
在本发明的一些优选实施方案中，所述特异性结合SDPR蛋白的抗体为SDPR多克隆抗体。
在本发明的一些实施方案中，所述SDPR基因或甲基化水平的检测试剂包括用于检测SDPR基因启动子甲基化状态的特异性引物对和用于检测SDPR基因启动子非甲基化状态的特异性引物对。
在本发明的一些优选的实施方案中，所述用于检测SDPR基因启动子甲基化状态的特异性引物对包括具有SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的下游引物；所述用于检测SDPR基因启动子非甲基化状态的特异性引物对包括具有SEQ ID NO.7所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO.8所示核苷酸序列的下游引物。
在本发明的一些实施方案中，所述肺癌为非小细胞肺癌。
在本发明的一些实施方案中，所述化疗药物包括紫衫醇和5-氟尿嘧啶。
本发明的有益效果
本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：
本发明为肺癌早期诊断和治疗提供了新的临床标志物，具有巨大的临床价值。
利用本发明，可以通过检测胸水、痰液或支气管灌洗液中的SDPR甲基化状态及表达，指导化疗药物用药。
附图说明
图1示出了SDPR在非小细胞肺癌的表达及与预后的关系。A.SDPR在1035例肺癌组织及108例肺正常组织的表达情况；B.SDPR在57对配对肺癌组织及癌旁组织的表达情况；C.SDPR在70对配对肺癌组织及癌旁组织的甲基化状态；D.高表达SDPR的肺癌患者预后好。
图2示出了SDPR在非小细胞肺癌细胞的表达及在肺癌组织中的甲基化状态。
图3示出了SDPR在支气管灌洗液、痰液及胸水中的甲基化检测。
图4示出了SDPR对肺癌细胞增殖的影响。
图5示出了SDPR对肺癌细胞迁移和侵袭的影响。
图6示出了SDPR对肺癌细胞周期和凋亡的影响。
图7示出了动物模型显示SDPR对肺癌生长的影响。
图8示出了SDPR增敏紫衫醇和5-氟尿嘧啶。
具体实施方式
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。
实施例
以下例子在此用于示范本发明的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表发明人发现的可以用于实施本发明的技术，因此可以视为实施本发明的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本发明的精神或范围。
除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本发明所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。
那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的发明的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的仪器设备，如无特殊说明，均为实验室常规仪器设备；下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
实施例1 SDPR在非小细胞肺癌中的表达
1.细胞RNA的提取
肺癌细胞H1299、H2122、H358、H446、H460和A549细胞用含10％胎牛血清的1640完全培养基，置于37℃、5％CO2的孵箱中培养，待细胞融合率达到70％～80％时，用0.25％胰酶消化并传代。
将培养瓶中的细胞用PBS冲洗2-3次，沥干残余水份，向瓶中加入1mL Trizol，于摇床上5min，收集瓶中细胞及裂解液于干净的EP管中。加入200μL氯仿，剧烈震荡15s，充分混匀并室温静置3min后于4℃离心机离心(12000rpm/min×15min)。吸取上清于新的EP管中，加入0.5mL异丙醇，上下颠倒混匀后放置10min，4℃离心机离心(12000rpm/min×15min)，可见管底有白色沉淀。弃上清液，加入75％乙醇1ml洗涤沉淀2次，4℃离心(7500rpm/min×5min)。弃上清液，冰上干燥5min，加入20μL DEPC水溶解沉淀，酶标仪测定RNA浓度。
2.逆转录
在体积为0.2mL EP管中加入RNA 1μg，Oligo 1μL，补充适量DEPC水使总体积达5μL。离心混匀后，置于70℃加热5min，冰上3min。然后加入下列试剂的混合物：
Figure BDA0002528579220000061
混匀，离心，上机：40℃1h；70℃15min；4℃10min。
3.PCR扩增
PCR扩增引物如下：
Figure BDA0002528579220000062
PCR反应体系配制(10μL)
Figure BDA0002528579220000063
Figure BDA0002528579220000071
PCR反应条件：95℃2min；95℃30s，55℃30s，72℃30s，目的基因组重复以上过程32个循环，内参组重复以上过程23个循环；72℃3min。
以β-actin基因为内参照。反应结束后用2％琼脂糖凝胶电泳(120V，25min)，并对电泳结果进行曝光和保存。
4.qRT-PCR
qRT-PCR引物如下：
Figure BDA0002528579220000072
1)稀释cDNA：用DEPC水按9:1稀释cDNA
2)避光配制PCR反应混合液(10μL)：
Figure BDA0002528579220000073
3)混合离心后上机：50℃2min；95℃10min；95℃15s，60℃1min，重复40次；95℃15s；60℃1min；95℃15s。
4)根据2-ΔΔCt公式处理分析数据。
5.Western blot
1)细胞总蛋白的提取：培养瓶中的细胞用PBS洗2-3次，沥干多余水分后加入100μL裂解液，冰上裂解25min。用细胞刮刮下瓶中细胞，并将其悬液收集于EP管中，每隔10min震荡一次。4℃离心机离心(12000rpm/min×15min)，取上清于新的EP管中，BCA法测定蛋白浓度。加入等体积的2×loading buffer，煮沸10min后，-20℃保存备用。
2)Western blot：以40mg上样量在10％SDS-PAGE上进行电泳分离蛋白，随后以进行电转，将分离蛋白转移至PVDF膜上；脱脂牛奶封闭1h，PBST洗膜后，用兔抗人SDPR多克隆抗体(1:1000稀释)和小鼠抗人β-actin单克隆抗体(1:1000稀释)(内参照)在4℃孵育过夜。PBST洗膜后，分别用山羊抗兔IgG(1:3000稀释)和兔抗小鼠IgG(1:3000稀释)在摇床上室温孵育1h。PBST洗膜后，用曝光液显影条带。
6.SDPR表达的预后分析
根据TCGA数据库，我们发现SDPR在肺癌中的表达显著低于癌旁(如图1A)。根据MethHC数据库，我们观察到与配对的癌旁组织相比，在这57例肺癌组织中SDPR mRNA水平明显降低(如图1B)，肿瘤级别(p<0.05)和TMN分期(p<0.05)与肺癌中SDPR的表达显著相关。Kaplan-Meier生存分析结果显示，SDPR低表达人群的中位生存时间为49个月，而高表达人群的中位生存时间高达87.7个月。即是说，表达水平较高的肺癌患者的生存时间更长(如图1D)。
实施例2 SDPR的甲基化检测
1.DNA重亚硫酸盐修饰
配制CT Conversion Reagent混合液：M-Dilution Buffer 300μL，M-DissolvingBuffer 50μL，DEPC H2O 900μL。在M-Wash Buffer中加入100％乙醇24mL备用。
在130μL CT Conversion Reagent中加入20μL DNA，混匀后孵育。反应条件：98℃10min，64℃2.5h，4℃20h。随后转移液体至离心柱，加入600μL M-Binding Buffer，混匀后离心(12000rpm/30s)，弃上清。加入200μL M-Wash Buffer，离心(12000rpm/30s)，弃上清。加入M-DesμLphonation Buffer，室温静置20min，离心(12000rpm/30s)，弃上清。加入200μLM-Wash Buffer，离心(12000rpm/30s)，弃上清。将离心柱套入新的无酶Ep管中，加入10μLM-Elution Buffer，离心(12000rpm/30s)，收集滤液，-20℃保存。
2.甲基化特异性PCR(MSP)
甲基化特异性PCR引物如下：
Figure BDA0002528579220000091
0.5μL经重亚硫酸盐修饰的DNA加入下列试剂混合物：
Figure BDA0002528579220000092
混匀后瞬离，上机40个循环。反应条件：95℃10min，95℃30s，(58℃/U；60℃/M)30s，72℃30s，72℃10min。反应结束后用琼脂糖凝胶电泳，结果如(图2，图3)所示，肺癌患者在组织、支气管肺泡灌洗液、痰液和胸水中检测到SDPR甲基化的概率分别为98.9％、100％、81.3％和89.6％。而在正常肺组织或非癌患者中，分别为6.3％、0％、0％、6.3％。SDPR基因甲基化检测的敏感性、特异性及AUC(ROC曲线下面积)(表一)
表1 SDPR基因甲基化检测的敏感性、特异性及AUC
Figure BDA0002528579220000093
Figure BDA0002528579220000101
3.氮杂2’-脱氧胞苷(Aza)和曲古抑菌素A(TSA)处理
用10μmol/L Aza处理细胞，使其在避光条件下生长3天。然后再用100nmol/L TSA避光处理24小时。提取RNA行Q-PCR检测去甲基化处理后SDPR的表达，结果见(图2B)，去甲基化可以明显恢复SDPR的表达。
实施例3 SDPR在肺癌中的作用
1.CCK8检测细胞增殖能力
构建稳定表达和敲除SDPR的细胞株，采用RT-PCR及Western验证(如图4A)所示，SDPR分别在H1299和A549细胞中成功过表达和敲除。收集细胞并用培养基重悬，调整细胞浓度为2×104个/mL，取每孔100μL细胞悬液置于96孔板中(每组设4个复孔)，放入孵箱分别培养24、48、72h后进行CCK8检测。具体步骤：弃所测孔培养基，然后每孔避光加入110μL混合液(1mL培养基+100μL CCK8)，继续培养2h后于酶标仪波长450nm处测各孔的吸光度值，结果(如图4B)所示，过表达SDPR导致H1299细胞生长显著降低，而沉默SDPR使A549细胞生长明显增加。
2.克隆形成实验
将处于对数生长期的细胞以200个/孔、400个/孔、800个/孔的浓度梯度接种于6孔板中，经培养箱孵育2周后用结晶紫染色并计数形成集落的数目，结果(如图4C、D)所示，过表达SDPR导致H1299细胞的集落形成能力降低，敲除SDPR导致A549细胞集落形成能力增加。
3.细胞周期和凋亡
细胞周期的检测：收集细胞，用PBS漂洗后，弃上清。加入75％冰乙醇(4℃预冷处理)，4℃固定细胞过夜。次日弃上清，PBS漂洗两次后，重新用PBS重悬细胞，分3份移至Ep管(每份400μL)。加入RNase-A 2.5μL，37℃消化30min。避光加PI染液5μL，室温避光30min。用流式细胞仪检测并制图，结果如(图5A、B)所示，SDPR能够诱导非小细胞肺癌细胞阻滞在G2/M期。细胞凋亡的检测：细胞转染48小时后，收集上清液。PBS洗涤细胞2次，用胰酶消化细胞，中和后将其转入装有上清液的离心管。1000rmp离心5分钟，弃上清。PBS漂洗1次，离心后弃上清。加入1mL PBS混合均匀，转入EP管中送流式检测，结果如图(5C、D)所示，过表达SDPR能够增加H1299细胞凋亡，而沉默SDPR能减少A549细胞的凋亡。
4.迁移侵袭实验
迁移实验：收集细胞并用无血清培养基重悬计数，将含有2×104个细胞的200μL细胞悬液(无血清)加入Transwell上室，下室中加入800μL含20％FBS的培养基，置于培养箱中培养24h。4％多聚甲醛固定30min，结晶紫染色20min后，用湿棉签擦拭上室侧膜上未穿过基底膜的细胞。随后用低倍光学显微镜随机选取5个视野计数。
侵袭实验：提前6-8h，在小室上室内加入基质胶(以1:6的比例用无血清培养基稀释)。将含有3×104个细胞的200μL细胞悬液(无血清)加入Transwell上室，置于培养箱中培养48h。其余同迁移实验结果(如图6)所示，SDPR能抑制肺癌细胞的迁移和侵袭，沉默SDPR能够促进迁移和侵袭。
5.裸鼠建模
购买BALB/c裸鼠(4周龄)，并按照道德准则由中国重庆医科大学实验动物中心饲养。将阴性对照或过表达SDPR的H1299细胞(在0.1mL PBS中1×107个细胞)皮下注射到裸鼠的背腹中，每2天观察肿瘤的生长，持续23天。此后，对小鼠实施安乐死并取出肿瘤标本。通过以下公式计算肿瘤体积(mm3)：体积＝0.5×长度×宽度2。这项研究得到重庆医科大学实验动物中心动物伦理委员会的批准(2019-326#)。结果如图7所示，SDPR可以在体内抑制肿瘤的生长。
实施例4药敏试验研究SDPR甲基化检测的用药指导意义
SDPR在G2/M细胞周期停滞中的重要作用，5-FU和紫杉醇分别是影响S和G2/M期的细胞周期特异性化疗药物，而顺铂是细胞周期非特异性化疗药物。将5×103H1299(M98-SDPR，M98-vector)和A549(siNC，siSDPR)细胞分别接种在96孔板中，在固定药物浓度(H1299：紫杉醇80nmol/L；顺铂12μg/mL；5-FU 32μmol/L。A549细胞：紫杉醇8nmol/L；顺铂16μmol/L；5-FU 8μg/ml)作用下培养24、48和72小时后进行CCK8检测。基于450nm处的吸光度计算抑制率。结果显示SDPR过表达增加了紫杉醇和5-FU对肺癌细胞的抑制作用，差异具有统计学差异(p<0.05)(如图8)。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 重庆医科大学附属第一医院
<120> SDPR基因表达和∕或SDPR基因甲基化水平的检测试剂盒及应用
<130> JIA-2020-1-W-011
<160> 10
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Claims (10)

1.SDPR基因表达水平的检测试剂和/或SDPR基因甲基化水平的检测试剂在制备用于诊断受试者是否患有肺癌或用于预测受试者是否具有患肺癌风险或用于判断肺癌患者对化疗药物是否敏感或用于判断肺癌患者预后是否良好的试剂盒中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述SDPR基因表达水平的检测试剂为用于检测SDPR基因转录产物水平的试剂。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用于检测SDPR基因转录产物水平的试剂包括用于检测SDPR基因转录产物水平的特异性引物对。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述用于检测SDPR基因转录产物水平的特异性引物对包括具有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的下游引物。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述SDPR基因表达水平的检测试剂为用于检测SDPR蛋白水平的试剂。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述SDPR基因或甲基化水平的检测试剂包括用于检测SDPR基因启动子甲基化状态的特异性引物对和用于检测SDPR基因启动子非甲基化状态的特异性引物对。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述用于检测SDPR基因启动子甲基化状态的特异性引物对包括具有SEQ ID NO.5所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO.6所示核苷酸序列的下游引物；所述用于检测SDPR基因启动子非甲基化状态的特异性引物对包括具有SEQ ID NO.7所示核苷酸序列的上游引物和具有SEQ ID NO.8所示核苷酸序列的下游引物。
8.SDPR基因表达水平的检测试剂和/或SDPR基因甲基化水平的检测试剂在制备适用于以下方法的试剂盒中的应用，所述方法包括：
S1，提取受试者样本核酸样本，
S2，利用所述检测试剂检测SDPR基因的表达水平和/或SDPR基因启动子甲基化状态，
S3，根据S2检测得到的SDPR基因的表达水平和/或启动子甲基化状态，诊断受试者是否患有肺癌，或预测受试者是否具有患肺癌风险，或判断肺癌患者对化疗药物是否敏感，或判断肺癌患者预后是否良好。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，若S2检测得到的SDPR基因的表达水平低于平均水平，和/或SDPR基因启动子甲基化水平高于平均水平，表明受试者患有肺癌，或预测受试者具有患肺癌风险，或判断肺癌患者对化疗药物敏感，或判断肺癌患者预后不好。
10.一种用于诊断受试者是否患有肺癌或用于预测受试者是否具有患肺癌风险或用于判断肺癌患者对化疗药物是否敏感或用于判断肺癌患者预后是否良好的试剂盒，其特征在于，包括SDPR基因表达水平的检测试剂和/或SDPR基因甲基化水平的检测试剂。
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