CN117964755A - 抗tslp抗体及其用途 - Google Patents

Abstract

本公开提供了一种抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合TSLP。本发明抗体可以有效抑制TSLP对H_TSLP Reporter Cell Line细胞STATs and JAK2信号通路的激活作用，本发明抗体及Tezepelumab均可以有效抑制TSLP对BaF3‑TSLPR/IL7Rα细胞的增殖促进作用，本发明的抗体不与Tezepelumab结合表位交叉，不会阻断C末端具有抗菌活性的MKK34抗菌肽，有望保留TSLP对抗外界细菌感染的能力。

Description

抗TSLP抗体及其用途

对序列表的引用

本申请包含计算机可读形式的序列表，其并入本文以作参考。

技术领域

本公开涉及基因工程和抗体领域，更具体而言涉及一种特异性结合TSLP的抗体或其抗原结合片段及其用途。本申请开发了新的抗TSLP抗体，并提供了该抗体在TSLP相关的疾病的预防、诊断、治疗、追踪和/或预后检查中的用途。

背景技术

胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)最初在小鼠胸腺基质细胞培养上清中发现，是B淋巴细胞生长因子，主要由上皮细胞表达。TSLP属于IL-2家族细胞因子，与IL-7最为类似。IL-2家族细胞因子包括IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15、IL-21，它们都是球状蛋白，含有4个短链α螺旋，都在促进和维持T淋巴细胞群中发挥重要作用(Expert Rev ClinImmunol.2014,10(11):1463–1474.Nature Communications,2017,8.)。最新的研究结果表明TSLP是人体免疫屏障的“警报蛋白”，在皮肤角质细胞、肺部和肠道上皮细胞等表面屏障中调控免疫功能。TSLP响应病原菌刺激，激活未成熟树突细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞，使它们呈现2型极化表型。TSLP信号异常会导致人体多种严重的健康问题，目前已经证明TSLP与哮喘、特应性皮炎、特应性鼻炎、牛皮藓、慢性阻塞性肺病(COPD)、嗜酸细胞性食管炎等疾病有关(Nat Immunol.2010,11(4):289–293.Expert RevClin Immunol.2014,10(11):1463–1474.Drugs(2020),80,449–458.Adv Immunol.2009；101:1–25.)。

IL-2家族细胞因子结合各自特异性的受体亚基，以及共享γC这个共同受体亚基。但是TSLP结合TSLPR(CRLF2)、IL-7Ralpha两个受体，不与γC受体结合(Expert Rev ClinImmunol.2014,10(11):1463-1474.Adv Immunol.2009,101:1-25.)。TSLP与TSLPR和IL-7Ralpha的结合具有协同性。TSLP与TSLPR结合，亲和力约32nM。而TSLP与IL-7Ralpha不直接结合(>100nM)。当TSLP与TSLPR结合形成TSLP-TSLPR复合物后才与IL-7Ralpha结合，亲和力约29nM(Nature Communications,2017,8.)。

TSLP基因区域存在可变启动子，可表达出long form TSLP(lfTSLP)和short formTSLP(sfTSLP)两种蛋白(包含信号肽)。sfTSLP相比lfTSLP，N端被截短，仅保留“一个半”α螺旋结构。研究表明lfTSLP和sfTSLP的C末端均存在具有抗菌活性的MKK34抗菌肽，并且sfTSLP具有更加强大的抗菌活性。sfTSLP是TSLP在人体正常组织中表达的主要形式，它只在正常口腔粘膜、皮肤表皮、唾液腺、肠道上皮细胞组成型表达，发挥抗菌活性；在炎症条件下，sfTSLP的表达量下降(在特应性皮炎和节段性回肠炎病理组织中检测到)。而lfTSLP在正常组织中不表达，仅在特应性皮炎、哮喘、溃疡性结肠炎、吸烟的口腔粘膜中表达(Pharmaceuticals 2016,9,41)。当过敏原刺激上皮细胞后，细胞中TSLP表达上调，从而产生Th2生成倾向的微环境，分泌Th2型细胞因子，生成炎症反应性Th2细胞，进而触发过敏性炎症反应。研究表明，当TSLP分子与TSLPR和IL-7R-α组成的异二聚体结合后，激活JAK1和JAK2，从而可激活信号转导子以及转录活化子5和3(STAT5，3)，并启动下游基因的表达。TSLP广泛出现在多种变态反应性疾病中，如过敏性鼻炎、过敏性哮喘、湿疹等。此外，在特应性皮炎、哮喘、嗜酸性食管炎患者中检测到多个TSLP的SNP突变，这些突变导致lfTSLP的高表达。并且这些突变具有家族遗传性(Expert Rev Clin Immunol.2014,10(11):1463–1474.)。因此开发针对lfTSLP的抗体，阻断lfTSLP异常表达导致的特应性皮炎、哮喘、嗜酸性食管炎、溃疡性结肠炎等疾病具有重要的意义。同时筛选获得不阻断C末端具有抗菌活性的MKK34抗菌肽有望保留TSLP对抗外界细菌感染的能力。

目前已经上市的抗体Tezepelumab结合在TSLP的C末端，可能影响TSLP的抗菌肽活性从而导致副作用。另外，研究表明同时阻断TSLP与TSLPR和IL-7Ralpha的TSLP-trap分子在抑制TSLP诱导的STAT5方面比Tezepelumab强20-30倍(Nature Communications,2017,8.)。因此，开发不同表位、生物学活性更强的TSLP抗体有望增强药效，获得更好的临床治疗效果。

在本申请中对任何文献的引用或标识，并非承认这样的文献可用作本公开的现有技术。

发明内容

针对上述诸问题，本公开提供了抗体、其制备方法、组合物等。本公开提供的益处广泛地适用于抗体治疗和诊断领域，并且能够与各种靶标反应的抗体联合使用。本发明提供了能够特异性结合TSLP的抗体或其抗原结合片段，优选嵌合单克隆抗体或人源化单克隆抗体。

一方面，本公开提供了一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合TSLP，且包含重链可变区和轻链可变区，

所述重链可变区包含：

CDRL1，包含与SEQ ID NO：16和22之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列，或由SEQ ID NO：16和22之一组成；和/或，

CDRL2，包含与SEQ ID NO：17和23之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列，或由SEQ ID NO：17和23之一组成；和/或，

所述CDRL3包含与SEQ ID NO：18和24之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列，或由SEQ ID NO：18和24之一组成。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述抗体或片段，其中，

所述CDRH1包含与SEQ ID NO：13和19之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列，或由SEQ ID NO：13和19之一组成；和/或，

所述CDRH2包含与SEQ ID NO：14和20之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列，或由SEQ ID NO：14和20之一组成；和/或，

所述CDRH3包含与SEQ ID NO：15和21之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列，或由SEQ ID NO：15和21之一组成。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述的抗体或片段，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：8、10之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：8、10之一组成。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述的抗体或片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO：7、9之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：7、9之一组成。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述的抗体或片段，还包括重链恒定区，其中该重链恒定区包含与SEQ ID NO：11之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：11之一组成。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述的抗体或片段，还包含轻链恒定区，该轻链恒定区包含与SEQ ID NO：12具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：12组成。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述的抗体或片段，其中包含：

(a)轻链，其包含与SEQ ID NO：4、6之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQID NO：4、6之一组成；

(b)重链，其包含与SEQ ID NO：3、5之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：3、5之一组成。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述的抗体或片段，其中包含：

(a)与SEQ ID NO：4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％序列同一性的轻链或者由SEQ IDNO：4组成的轻链；以及与SEQ ID NO：3和5之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的重链或者由SEQ ID NO：3和5之一组成的重链；

(b)与SEQ ID NO：6具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％

序列同一性的轻链或者由SEQ ID NO：6组成的轻链；以及与SEQ ID NO：3和5之一具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的重链或者由SEQ ID NO：3和5之一组成的重链。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述的抗体或片段，其中包含：

(a)轻链，其包含SEQ ID NO：4或者由其组成；以及重链，其包含SEQ ID NO：3或者由其组成；

(b)轻链，其包含SEQ ID NO：6或者由其组成；以及重链，其包含SEQ ID NO：5或者由其组成。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述的抗体或片段，其中所述抗体为全抗体、Fab片段、Fab’片段、F(ab')₂片段、Fv片段、或单链Fv片段(scFv)。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述的抗体或片段，其中所述抗体为全抗体、单克隆抗体。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述的抗体或片段，其中所述抗体为嵌合抗体或人源化抗体或改进的抗体例如改进的嵌合抗体。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述的抗体或片段，其中所述人源化抗体包含：

轻链可变区，包含与SEQ ID NO：26具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：26组成；

重链可变区，包含与SEQ ID NO：25具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：25之一组成。

进一步，在本发明的一些实施方案中，所述的抗体或片段，其中所述人源化抗体包含：

轻链，其包含与SEQ ID NO：28之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ IDNO：28之一组成；

重链，其包含与SEQ ID NO：27之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ IDNO：27之一组成。

一方面，本公开提供了一种分离的核酸分子，其中包含编码如所述的抗体或片段的核酸序列

一方面，本公开提供了一种载体，其中包含所述的核酸分子。

一方面，本公开提供了一种宿主细胞，其中包含如所述的核酸分子或者所述的载体。

一方面，本公开提供了一种缀合物，其中包含与至少一个可检测的标记物偶联的所述的抗体或片段。

一方面，本公开提供了一种包含抗体的抗体药物缀合物(Antibody DrugConjugates,ADCs)，其包括一个或多个药物部分，所述药物部分直接或经由接头共价连接至所述的抗体或片段。

一方面，本公开提供了一种多特异性分子，其中包含所述的抗体或抗原结合部分；优选地，所述多特异性分子特异性结合TSLP；进一步优选地，所述多特异性分子还包含至少一种具有针对第二靶标的第二结合特异性的分子。

一方面，本公开提供了一种药物组合物或试剂盒，其中包含所述的抗体或片段、或所述的核酸分子、或所述的载体、或所述的宿主细胞、或所述的缀合物、或所述的抗体药物缀合物、或所述的多特异性分子；以及药学上可接受的载体。

一方面，本公开提供了一种制备所述的抗体或片段的方法，其中包括以下步骤：

(i)在所述的宿主细胞中表达所述的抗体或片段；和可选地

(ii)从所述宿主细胞分离抗体或其抗原结合片段。

再一方面，本公开提供了所述的抗体或片段、所述的核酸分子、或所述的载体、或所述的宿主细胞、或所述的缀合物、或所述的抗体药物缀合物、或所述的多特异性分子、或所述的药物组合物或试剂盒在制备用于诊断、检测或监测与TSLP表达相关疾病的试剂盒中的用途。

再一方面，本公开提供了所述的抗体或片段、所述的核酸分子、或所述的载体、或所述的宿主细胞、或所述的缀合物、或所述的抗体药物缀合物、或所述的多特异性分子、或所述的药物组合物或试剂盒在制备用于治疗与TSLP表达相关疾病或确定其预后的药物中的用途。

再一方面，本公开所述的用途，其中所述与TSLP表达相关疾病是癌症，所述癌症选自：霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、宫颈癌、皮肤T细胞淋巴瘤、胃癌、肺癌、B细胞淋巴瘤，包括NHL、前B细胞淋巴细胞性白血病/淋巴瘤和成熟B细胞瘤，例如B细胞慢性淋巴细胞性白血病(CLL)/小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)，包括低级、中级和高级FL，皮肤滤泡中心淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤(MALT型、结内和脾型)、毛细胞白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、浆细胞瘤、浆细胞骨髓瘤、移植后淋巴增生性病症、华氏巨球蛋白血症和间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)。

再一方面，本公开所述的用途，其中所述与TSLP表达相关疾病是自身免疫性疾病，所述自身免疫性疾病选自下组：系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、中轴型脊椎关节炎、重症肌无力、多发性肌炎、银屑病、天疱疮、白癫风、多发性硬化症、嗜睡症、视神经脊髓炎、一型糖尿病、甲亢、甲减、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻、自身免疫性胃炎、原发性胆道胆管炎、自身免疫性肝炎和狼疮性肾炎。

再一方面，本公开所述所述的用途，其中所述与TSLP表达相关疾病是炎性疾病，所述炎性疾病选自下组：哮喘、特应性皮炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、嗜酸性食管炎(EoE)、鼻息肉、慢性自发性荨麻疹、Ig驱动疾病、IgA肾病、狼疮肾炎、嗜酸性胃炎,没有鼻息肉的慢性鼻窦炎和特发性肺纤维化(IFF)。

本发明抗体可以有效抑制TSLP对H_TSLP Reporter Cell Line细胞STATs andJAK2信号通路的激活作用，本发明抗体及Tezepelumab均可以有效抑制TSLP对BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞的增殖促进作用，本发明的抗体不与Tezepelumab结合表位交叉，不会阻断C末端具有抗菌活性的MKK34抗菌肽，有望保留TSLP对抗外界细菌感染的能力。

本发明的4G7、4C4抗体可以有效抑制TSLP对H_TSLP Reporter Cell Line细胞STATs and JAK2信号通路的激活作用，其中4C4抑制信号通路激活活性是Tezepelumab的59倍，4G7抑制信号通路激活活性是Tezepelumab的26倍。

本发明的4G7、4C4抗体及Tezepelumab均可以有效抑制TSLP对BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞的增殖促进作用，且4C4抑制作用活性是Tezepelumab的11.3倍，4G7抑制作用活性是Tezepelumab的6.5倍。

本发明的4G7 V60为人源化抗体，4G7 V60及Tezepelumab均可以有效抑制TSLP对H_TSLP Reporter Cell Line细胞STATs and JAK2信号通路的激活作用，4G7 V60抑制信号通路活性与Tezepelumab相比，提升了4743倍。

本发明的抗体4G7不与Tezepelumab结合表位交叉，不会阻断C末端具有抗菌活性的MKK34抗菌肽，有望保留TSLP对抗外界细菌感染的能力。

附图说明

附图用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本公开的实施例一起用于解释本公开，并不构成对本公开的限制。

图1A-图1B示出了本发明的抗体与TSLP的结合活性检测结果；

图2A-图2B示出了本发明的抗体在蛋白水平对TSLP与TSLPR的阻断活性检测结果；

图3A-图3B示出了本发明的抗体阻断TSLP与BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞结合活性检测结果；

图4A-图4B示出了本发明的抗体抑制TSLP对H_TSLP Reporter Cell Line细胞STATs and JAK2信号通路的激活活性检测结果；

图5A-图5B示出了本发明的抗体抑制TSLP对BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞的增殖促进作用活性检测结果；

图6示出了本发明的人源化抗体抑制TSLP对H_TSLP Reporter Cell Line细胞STATs and JAK2信号通路的激活活性检测结果。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的举例说明性实施方案，而不是全部的实施例。因此，本发明不限于所举例说明的具体实施方案。此外，本文使用的任何章节标题并不被解释为限制所描述的主题。

除非在此另外定义，否则与本发明结合使用的科学和技术术语将具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另有要求，单数形式的术语应包括复数形式，复数形式的术语应包括单数形式。更具体地，如在本说明书和所附权利要求中所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一”，“一个”和“该”包括复数指示物。在本申请中，除非另有说明，否则使用“或”意指“和/或”。此外，术语“包含”以及其他形式(诸如“包括”和“含有”)的使用不是限制性的。此外，说明书和所附权利要求中提供的范围包括端点和端点之间的所有值。

定义

为了更好地理解本发明，相关术语的定义和解释提供如下。

术语“抗体”或“Ab”通常是指包含通过共价二硫键和非共价相互作用保持在一起的两条重链(H)和两条轻链(L)多肽链的Y形四聚体蛋白。抗体的轻链可以分为κ或λ轻链。重链可分为μ、δ、γ、α或ε，它们分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA或IgE。在轻链和重链中，可变区通过约12个或更多个氨基酸的“J”区与恒定区连接，并且重链还包含约3个或更多个氨基酸的“D”区。每条重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由3个结构域(CH1，CH2和CH3)组成。每条轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。VH和VL区可以进一步分为由相对保守的区域(称为框架区，简称FR)间隔开的高变区(称为互补决定区，简称CDR)。每个VH和VL由以下顺序的3个CDR和4个FR组成：从N端到C端的FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。每个重链/轻链对的可变区(VH和VL)分别形成抗原结合位点/部分。氨基酸在各种区域或结构域中的分布遵循Kabat、IMGT或Chothia等常见系统中的编号定义，在本公开的具体实施例中，CDR序列的确定使用的是Kabat系统中的编号定义。VH上的CDR为CDRH1、CDRH2和CDRH3，VL上的CDR为CDRL1、CDRL2和CDRL3。

本公开中抗体也包括抗原结合部分(与术语“抗原结合片段”可互换使用)。抗原结合部分是指包含完整抗体的片段的多肽，其保留了与全长或者完整抗体特异性结合的抗原特异性结合的能力，和/或其与全长抗体竞争结合相同的抗原。在一些条件下，抗原结合部分包括Fab、Fab'、F(ab')₂、Fd、Fv、dAb和互补决定区(CDR)片段，单链抗体(例如scFv)，嵌合抗体，双抗体和包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的至少一部分抗体。抗体的抗原结合部分可通过本领域技术人员已知的常规技术(例如，重组DNA技术或酶促或化学切割方法)从给定抗体获得，并且可以与完整抗体相同的方式筛选特异性。

术语“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如，IgM或IgG1)。

术语“单克隆抗体”或“mAb”是指单分子组成的抗体分子/制剂。单克隆抗体显示对特定表位的单一结合特异性和亲和力。本发明的抗体可源自不同的物种，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、豚鼠和人。

术语“表位”是指分子中的抗原决定簇，是指分子中被免疫系统识别(例如被抗体识别)的部分，例如被免疫系统识别的抗原上不连续的三维位点。在本发明中，所示表位例如为TSLP蛋白。

如本文所用的术语“嵌合抗体”是指其可变区序列来自一个物种并且恒定区序列来自另一物种的抗体，例如其中可变区序列源自小鼠抗体和恒定区序列来源于人抗体的抗体。

术语“人源化抗体”旨在指其中来源于另一种哺乳动物物种如小鼠的种系的CDR序列/抗原结合部分或位点已被移植到人框架序列上的抗体。此外，还可以在人框架序列内进行额外的框架区修饰。

术语“KD值”是抗体与其抗原之间的平衡解离常数，即koff/kon或kd/ka(通过SPR技术测定)比值。因此KD值越低(浓度越低)，抗体的亲和力越高。因此“KD值”可以用于衡量抗体与其抗原之间的结合亲和力。

术语“TSLP”和“TSLP抗原”在本文中可互换使用，包括由细胞天然表达的或者在用TSLP基因转染的细胞上表达的人TSLP的任何变体、同等型和物种同系物。一些实施方式中，本公开的抗体对TSLP抗原的结合通过灭活TSLP而介导对表达TSLP的细胞(例如，肿瘤细胞)的杀伤。可通过下列一项或多项机制而发生对表达TSLP的细胞的杀伤：细胞死亡/凋亡诱导、ADCC和CDC。

术语“抗TSLP抗体”或“TSLP抗体”是指如本文所定义的能够与TSLP抗原结合或与表达TSLP的细胞结合的抗体。

术语“特异性结合”是指，两分子间的非随机的结合反应，如抗体和其所针对的抗原之间的反应。在某些实施方式中，特异性结合某抗原的抗体(或对某抗原具有特异性的抗体)是指，抗体以小于大约10^-5M，例如小于大约10^-6M、10^-7M、10^-8M、10^-9M或10^-10M或更小的KD值结合该抗原。在本发明的一些实施方案中，术语“靶向”是指特异性结合。

术语“分离的”是指通过人工方式从天然状态获得的状态。如果某种“分离的”物质或组分天然存在，则可能是因为其天然环境发生变化，或者物质与天然环境分离，或者两者兼而有之。例如，某种未分离的多核苷酸或多肽天然存在于某个活动物体内，从该天然状态分离的高纯度的相同多核苷酸或多肽被称为分离的多核苷酸或多肽。术语“分离的”既不排除混合的人造或合成物质，也不排除不影响分离的物质的活性的其他不纯物质。例如，分离的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化学物质。

术语“载体”是指可以在其中插入多核苷酸的核酸媒介物。当载体允许插入其中的多核苷酸编码的蛋白质的表达时，该载体称为表达载体。该载体可以通过转化、转导或转染入宿主细胞而使携带的遗传物质元件在宿主细胞中表达。载体是本领域技术人员所熟知的，包括但不限于质粒，噬菌体，粘粒，人工染色体如酵母人工染色体(YAC)，细菌人工染色体(BAC)或P1衍生人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体和动物病毒。可用作载体的动物病毒包括但不限于逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺伴随病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳多空病毒(如SV40)。载体可以包含用于控制表达的多个元件，包括但不限于启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件和报道基因。另外，载体可以包含复制起点。对于表达抗体的载体，可以使用其中抗体重链和轻链存在于不同的载体中的载体类型或者其中重链和轻链存在于同一载体中的载体类型。

术语“宿主细胞”是指可被工程化以产生目标蛋白质、蛋白质片段或肽的细胞系统。宿主细胞包括但不限于培养细胞，例如来源于啮齿类动物(大鼠、小鼠、豚鼠或仓鼠)的哺乳动物培养细胞，如CHO、BHK、NSO、SP2/0、YB2/0；或人体组织或杂交瘤细胞、酵母细胞和昆虫细胞，以及包含在转基因动物或培养组织内的细胞。该术语不仅涵盖特定的受试细胞，而且还涵盖这种细胞的后代。因为某些修饰可由于突变或环境影响而在后续世代中发生，这样的后代可能与亲本细胞不同，但仍包括在术语“宿主细胞”的范围内。

术语“同一性”是指通过比对和比较序列确定的两个或更多个多肽分子(或蛋白质分子)或两个或更多个核酸分子的序列之间的关系。“百分比同一性”是指比较分子中氨基酸或核苷酸之间相同残基的百分比，并基于被比较的最小分子的大小计算。对于这些计算，比对中的间隙(如果有的话)优选通过特定的数学模型或计算机程序(即“算法”)来寻址。可以用于计算比对的核酸或多肽的同一性的方法包括在Computational MolecularBiology,(Lesk,A.M.,ed.),1988,New York:Oxford University Press；BiocomputingInformatics and Genome Projects,(Smith,D.W.,ed.),1993,New York:AcademicPress；Computer Analysis of Sequence Data,Part I,(Griffin,A.M.,and Griffin,H.G.,eds.),1994,New Jersey:Humana Press；von Heinje,G.,1987,SequenceAnalysisin Molecular Biology,New York:Academic Press；Sequence AnalysisPrimer,(Gribskov,M.and Devereux,J.,eds.),1991,New York:M.Stockton Press；和Carillo etal,1988,SIAMJ.Applied Math.48:1073中描述的那些。

术语“免疫原性”是指刺激生物体中特异性抗体或致敏淋巴细胞形成的能力。它不仅指抗原刺激特定免疫细胞活化、增殖和分化以最终产生免疫效应物质如抗体和致敏淋巴细胞的性质，还指抗体或致敏T淋巴细胞的特异性免疫应答可以在用抗原刺激生物体后在生物体的免疫系统中形成。免疫原性是抗原最重要的特性。抗原是否能够成功诱导宿主中免疫应答的产生取决于三个因素：抗原的性质、宿主的反应性和免疫手段。

术语“转染”是指将核酸引入真核细胞特别是哺乳动物细胞的过程。用于转染的方案和技术包括但不限于脂质转染和化学和物理方法如电穿孔。许多转染技术在本领域是公知的并且在本文中公开。参见例如Graham等人，1973,Virology 52:456；Sambrook等人，2001,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,同上；Davis等人，1986,Basic Methodsin Molecular Biology,Elsevier；Chu et al,1981,Gene 13:197。

术语“杂交瘤”和术语“杂交瘤细胞系”可以互换使用。当提及术语“杂交瘤”和术语“杂交瘤细胞系”时，它们也包括杂交瘤的亚克隆和后代细胞。

术语“免疫效应功能”包括免疫系统的组分所介导的任何功能，其导致抑制肿瘤生长和/或抑制肿瘤发生，也包括抑制肿瘤的播散和转移。优选地，免疫效应功能导致杀伤肿瘤细胞。优选地，本发明中的免疫效应功能是抗体介导的效应功能。这样的功能包括补体依赖性细胞毒作用(CDC)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)、在带有肿瘤相关抗原的细胞中诱导凋亡(例如，通过抗体与表面抗原的结合)和/或抑制带有肿瘤相关抗原的细胞的增殖，优选ADCC和/或CDC。抗体还可简单地通过与肿瘤细胞表面上的肿瘤相关抗原结合而发挥作用。例如，抗体可仅通过与肿瘤细胞表面上的肿瘤相关抗原结合而阻断肿瘤相关抗原的功能或诱导凋亡。

术语“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指其中与某些细胞毒性细胞(例如天然杀伤(NK)细胞，嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)结合的分泌的Ig使这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合携带抗原的靶细胞并随后用细胞毒素杀死靶细胞的细胞毒性形式。抗体“武装”细胞毒性细胞，并且对于这种杀伤是绝对需要的。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI，FcγRII和FcγRIII。为了评估感兴趣分子的ADCC活性，可以进行体外ADCC测定，例如美国专利号US5,500,362或US5,821,337中所述的测定。可用于此类测定的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。可选或另外地，感兴趣分子的ADCC活性可以在体内评估，例如在如Clynes等人PNAS(USA)95:652-656(1998)公开的动物模型中评估。

术语“补体依赖性细胞毒性”或“CDC”是指在补体存在下靶细胞的裂解。经典补体途径的激活由补体系统的第一组分(C1q)与结合其同源抗原的抗体(适当的亚类)结合而启动。为了评估补体活化，可以执行CDC测定，例如Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods202:163(1996)中所述的。

术语“受试者”包括任何哺乳动物，例如人或非人动物，优选人。

本文在治疗病情的情况中使用的术语“治疗”和“医治”一般涉及人或动物的治疗和疗法，其中实现了一些期望的治疗效果，例如，抑制病情进展，包括进展速度下降、进展速度停滞、病情消退、病情改善和病情治愈。还包括了作为预防措施(即预防)的治疗。对于癌症，“治疗”可能是指抑制或减缓肿瘤或恶性细胞生长、增殖或转移或其某种组合。对于肿瘤，“治疗”包括去除全部或部分肿瘤、抑制或减缓肿瘤生长和转移、预防或延迟肿瘤的发展或其某种组合。

术语“治疗有效量”涉及活性化合物或包含活性化合物的材料、组合物或剂型的量，其在按照所需的治疗方案施用时有效用于产生与合理的益处/风险比相称的某些所需的治疗效果。例如，当与治疗或检测相关疾病或病症联合使用时，“有效量”或“有效剂量”是指抗体或其抗原结合片段有效治疗或检测所述疾病或病症的量或浓度。

术语“药学上可接受的”是指载体、稀释剂、赋形剂和/或其盐在化学和/或物理上与制剂中的其他成分相容，并且与接受者在生理学上相容。

术语“药学上可接受的载体和/或赋形剂”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性剂相容的载体和/或赋形剂，其在本领域中是公知的(参见，例如，Remington'sPharmaceutical Sciences.Edited by Gennaro AR,19^th ed.Pennsylvania:MackPublishing Company,1995)，并且包括但不限于pH调节剂、表面活性剂、佐剂和离子强度增强剂。例如，pH调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液；表面活性剂包括但不限于阳离子、阴离子或非离子表面活性剂，例如Tween-80；离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。

术语“佐剂”是指非特异性免疫增强剂，其在与抗原一起递送至生物体或被提前递送至生物体时可以增强生物体中的对抗原的免疫应答或改变免疫应答的类型。存在多种佐剂，包括但不限于铝佐剂(例如氢氧化铝)、弗氏佐剂(例如弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂)、短小棒状杆菌、脂多糖、细胞因子等。弗氏佐剂是目前动物实验中最常用的佐剂。氢氧化铝佐剂更常用于临床试验。

术语“自身免疫性疾病”是指自机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病，包括但不限于系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、中轴型脊椎关节炎、重症肌无力、多发性肌炎、银屑病、天疱疮、白癫风、多发性硬化症、嗜睡症、视神经脊髓炎、一型糖尿病、甲亢、甲减、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻、自身免疫性胃炎、原发性胆道胆管炎、自身免疫性肝炎和狼疮性肾炎等。

术语“炎性疾病”是指炎症作为其主要破坏因子的疾病的统称。炎症为组织对有害刺激的生物反应，其是一种病变，并且伴随有组织退化、循环紊乱和液体渗出三种事件，以及肥大。炎性疾病的实例包括急性和慢性疾病，包括但不限于哮喘、硬皮病、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、C h u rg-S t ra us s综合征、韦格纳肉芽肿(W eg e n e r'sgranulomatosis)、肺出血-肾炎综合征、过敏性肺炎、特应性皮炎、鼻炎、强直性脊柱炎、风湿热、纤维肌痛、银屑病关节炎、慢性肾炎、斯耶格伦氏综合征以及多发性硬化、过敏性皮炎、过敏性结膜炎、特应性皮炎纤维变性和炎性肠病等。

术语“癌症”是指引发医学病症的任何肿瘤或恶性细胞生长、增殖或转移介导的实体瘤和非实体瘤如白血病，可以是良性的、恶变前的或恶性的，包括但不限于霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、宫颈癌、皮肤T细胞淋巴瘤、胃癌、肺癌、B细胞淋巴瘤，包括NHL、前B细胞淋巴细胞性白血病/淋巴瘤和成熟B细胞瘤，例如B细胞慢性淋巴细胞性白血病(CLL)/小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)，包括低级、中级和高级FL，皮肤滤泡中心淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤(MALT型、结内和脾型)、毛细胞白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、浆细胞瘤、浆细胞骨髓瘤、移植后淋巴增生性病症、华氏巨球蛋白血症和间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)。

本公开中，某一个位置的氨基酸可以允许变化，以例如[K/R]表示该位置的氨基酸可以是K，也可以是R；再例如[S/*]，*号表示缺失，表示该位置的氨基酸可以是S也可以缺失。

抗TSLP抗体

在一些方面，本发明包括分离的抗体或其抗原结合片段。

在本申请的上下文中，“抗体”可以包括多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化和灵长类动物化抗体、CDR移植抗体、人抗体、重组产生的抗体、胞内抗体、双功能抗体、多特异性抗体、双特异性抗体、单价抗体、多价抗体、抗独特型抗体、合成抗体、包括其突变蛋白及变体、改进的抗体；及其衍生物(包括Fc融合蛋白和其他修饰)，以及任何其他免疫反应性分子，只要其表现出与TSLP蛋白的优先缔合或结合。此外，除非上下文另外规定，否则该术语还包括所有类别的抗体(即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)和所有亚类(即IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。在一个优选的实施方案中，抗体是单克隆抗体。在更优选的实施方案中，抗体是嵌合单克隆抗体或人源化单克隆抗体或改进的嵌合单克隆抗体。

抗体序列中的可变区和CDR可以根据本领域已经开发的一般规则(如上所述，例如Kabat编号系统或通过将序列与已知可变区的数据库比对来鉴定)。

在一些实施方案中，分离的抗体或其抗原结合片段可以包含重链和/或轻链的可变区中的氨基酸的保守取代或修饰或置换(例如保守置换)、缺失或添加(例如1个、2个、3个、4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加；或者至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换)，或者与所其所源自的抗体或其抗原片段具有至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、至少100％的序列同一性。在蛋白质的N端和/或C端包含缺失的氨基酸缺失变体还称为N端和/或C端截断变体(truncationvariant)。本领域理解的是，可以进行某些不消除抗原结合的保守序列的修饰。参见例如Brummell等人(1993)Biochem 32:1180-8；de Wildt等人(1997)Prot.Eng.10:835-41；Komissarov等人(1997)J.Biol.Chem.272:26864-26870；Hall等人(1992)J.Immunol.149:1605-12；Kelley and O’Connell(1993)Biochem.32:6862-35；Adib-Conquy等人(1998)Int.Immunol.10:341-6and Beers等人(2000)Clin.Can.Res.6:2835-43。

如上所述，本文使用的术语“保守取代/保守置换”是指氨基酸取代/置换，其不会不利地影响或改变包含氨基酸序列的蛋白质/多肽的基本性质。例如，保守取代/保守置换可以通过本领域已知的标准技术(例如定点诱变和PCR介导的诱变)引入。保守氨基酸取代包括其中氨基酸残基被具有相似侧链的另一氨基酸残基取代的取代，例如物理或功能相似的残基(例如具有相似的大小，形状，电荷，化学性质包括形成共价键或氢键的能力等)至相应的氨基酸残基的取代。本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸，精氨酸和组氨酸)，具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸和谷氨酸)，具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)，具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)，具有β-分支侧链的氨基酸(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳香族侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，相应的氨基酸残基优选被来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基取代。用于鉴定氨基酸保守取代的方法在本领域中是公知的(参见例如Brummell等人,Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi等人,Protein Eng.12(10):879-884(1999)；和Burks等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:412-417(1997)，其通过引用并入本文)。

根据本发明，如果提到包含具体抗体重链和/或具体抗体轻链(例如，包含具体CDR序列的链)，抗体的两个重链和/或两个轻链优选地分别由具体抗体重链和/或具体抗体轻链构成。

无论抗体如何产生，测试抗体与抗原(例如TSLP)结合的能力的方法在本领域中是已知的，并且包括任何抗体-抗原结合测定，例如放射免疫测定(RIA)、ELISA、蛋白质印迹、免疫沉淀、SPR和竞争性抑制测定(参见例如Janeway等人、下文和美国专利申请公开号2002/0197266以及有关竞争测定的以上章节)。

根据本发明，在标准测定(例如本发明中描述的测定)中，如果抗体与预先确定靶标(例如TSLP蛋白或表达TSLP的细胞)有显著的亲和力，则所述抗体能够与所述预先确定的靶标结合，为了测试单克隆抗体与表达TSLP的活细胞的结合，可使用流式细胞术。优选地，在流式细胞术分析(FACS)分析中，测定所述抗体与在细胞表面表达的靶标结合，如果抗体可检测地与所述靶标(TSLP蛋白或表达TSLP的细胞)结合，则所述抗体能够与所述靶标结合，具有“亲和力”。优选地，如果本发明中的抗体以10μg/mL或更低、5μg/mL或更低、3μg/mL或更低、2μg/mL或更低的浓度、1μg/mL或更低的浓度、0.5μg/mL或更低的浓度存在，所述抗体可检测地与所述靶标结合。

在一些实施方案中，所述的抗体或片段具有的EC50结合特性可以为：以5μg/mL或更小的EC50结合人TSLP或猴TSLP；以3μg/mL或更小的EC50结合人TSLP或猴TSLP；或以2μg/mL或更小的EC50结合人TSLP或猴TSLP；或以1μg/mL或更小的EC50结合人TSLP或猴TSLP；或以0.5μg/mL或更小的EC50结合人TSLP或猴TSLP；以0.3μg/mL或更小的EC50结合人TSLP或猴TSLP；或以0.1μg/mL或更小的EC50结合人TSLP或猴TSLP。

在一些实施方案中，所述的抗体为单克隆抗体。

在一些实施方案中，所述抗体为嵌合抗体或人源化抗体或改进的抗体例如改进的嵌合抗体。

在一些实施方案中，所述的分离的抗体或其抗原结合片段包含IgG的恒定区。所述IgG的恒定区优选选自IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4恒定区。所述IgG的恒定区更优选选自IgG1的恒定区。

在本领域中，采用各种手段进行不改变抗体所期望的性质改造是多样化的，例如本公开中采用的将抗体的轻链和重链重新组合的方式、进行氨基酸的替换等。例如，可以将本发明中的序列，包括嵌合抗体序列或人源化抗体序列，进行保守氨基酸替换。

抗体主要通过位于重链和轻链的互补决定区(CDR)的氨基酸残基与靶抗原相互作用。由于这个原因，在各抗体之间，CDR的氨基酸序列比其他的序列更多样。由于CDR序列负责大多数抗体-抗原相互作用，因此有可能通过构建表达载体来表达模拟特定天然存在的抗体的特性的重组抗体，所述表达载体包含来自所述特定天然存在抗体的CDR序列，其移植到来自具有不同特性之不同抗体的框架序列上(参见，例如，Riechmann，L.等(1998)Nature332：323-327；Jones，P.等(1986)Nature321:522-525；和Queen，C.等(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:10029-10033)。这样的框架序列可获自包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库。这些种系是序列不同于成熟的抗体基因序列，因为它们不包含完整组装的可变基因。种系基因序列还将在均匀穿过可变区的个别处具有不同于高亲和力第二抗体库(secondary repertoire antibody)的序列。

小鼠抗体在人中具有高免疫原性，当重复应用时导致治疗效力降低，通过重链恒定区介导主要的免疫原性。如果对各个抗体进行嵌合或人源化，则小鼠抗体在人中的免疫原性可被降低或完全避免。

嵌合抗体是指不同部分来自不同动物物种的抗体，例如，具有来自小鼠抗体的可变区和人免疫球蛋白恒定区的抗体。将小鼠抗体重链和轻链的可变区与人重链和轻链的恒定区连接在一起从而获得抗体的嵌合(例如，如Kraus等，in Methods inMolecularBiology series，Recombinant antibodies for cancer therapy ISBN-0-89603-918-8所述)。在一个优选实施方案中，通过连接人κ轻链恒定区至小鼠轻链可变区产生嵌合抗体。在另一优选实施方案中，可通过连接人λ轻链恒定区至小鼠轻链可变区产生嵌合抗体。

而人源化抗体是指将其中来源于另一种哺乳动物物种如小鼠的种系的CDR序列/抗原结合部分或位点移植到人框架序列上的抗体。

为了降低抗体对人的免疫原性，使用本公开的TSLP抗体的序列生产人源化抗TSLP抗体，利用其他来源的抗TSLP抗体的CDR区与人源的框架区(例如，人免疫球蛋白)组合，形成本公开的人源化抗TSLP抗体，人源化抗体被期望保留与人TSLP结合的功能以及与猴TSLP结合的功能。

抗体的制备或产生

可通过多种技术产生本发明的抗体，所述技术包括常规的单克隆抗体法，例如KohlerandMilstein，Nature256：495(1975)的标准体细胞杂交技术。尽管优选杂交瘤技术，原则上可采用用于产生单克隆抗体的其他技术，例如病毒或癌基因转化B淋巴细胞或使用抗体基因文库的噬菌体展示技术、体细胞杂交法，又例如通过基因工程重组技术来获得。如，通过化学合成或PCR扩增获得编码本发明抗体的重链和轻链基因的DNA分子，将所得DNA分子插入表达载体内，然后转染宿主细胞，然后，在特定条件下培养转染宿主细胞，并表达本发明的抗体。

用于制备分泌单克隆抗体的杂交瘤的其他优选动物系统是大鼠和兔系统(例如描述于Spieker-Poletetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.92：9348(1995)，还参见Rossietal..Am.J.Clin.Pathol.124：295(2005))。小鼠中的杂交瘤生产是非常完善的方法。分离用于融合的经免疫脾细胞的免疫方案和技术是现有技术中已知的。融合伴侣(例如，鼠骨髓瘤细胞)和融合方法也是已知的。

单克隆抗体可以使用本领域已知的多种技术来制备，包括杂交瘤技术，重组技术，噬菌体展示技术，转基因动物或其一些组合。例如，可以使用杂交瘤和本领域公认的生物化学和遗传工程技术来生产单克隆抗体，如详细描述于An,Zhiqiang(ed.)TherapeuticMonoclonal Antibodies:From Bench to Clinic,JohnWiley and Sons,1st ed.2009；Shire et.al.(eds.)Current Trends in Monoclonal Antibody Development andManufacturing,Springer Science+Business Media LLC,1sted.2010；Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nded.1988；Hammerling,等人,in:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981)中，每篇文献在此全部引入作为参考。

应该理解，可以进一步改变选定的结合序列，例如以提高对靶的亲和力、使靶结合序列人源化、改善其在细胞培养物中的产生、降低其体内免疫原性、产生多特异性抗体等，并且包含改变的靶结合序列的抗体也是本发明的抗体。

在一些实施方案中，生产本公开所述的抗体或片段的方法包括以下步骤：

(i)在宿主细胞中表达所述的抗体或片段；和可选地

(ii)从所述宿主细胞分离抗体或其抗原结合片段。

在一个优选的实施方案中，通过使用杂交瘤来制备抗TSLP单克隆抗体。

为了获得产生本发明抗体例如本发明的人单克隆抗体的杂交瘤，可以分离来自免疫小鼠的脾细胞和/或淋巴结细胞并将其融合至合适的永生化细胞系，例如小鼠骨髓瘤细胞系。就抗原特异性抗体的产生筛选产生的杂交瘤。杂交瘤的产生在本领域中是众所周知的。参见例如Harlow and Lane(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,ColdSpringHarbor Publications,New York。

本发明的抗体还可以在宿主细胞转染瘤中使用例如本领域众所周知的重组DNA技术和基因转染方法的组合(例如Morrison,S.(1985)Science 229:1202)来产生。在一些实施方案中，将通过标准分子生物学技术获得的编码部分或全长轻链和重链的DNA插入一个或多个表达载体中，使得所述基因可操作地连接于转录和翻译调节序列。在此上下文下，术语“可操作地连接”意在表示将抗体基因连接到载体中，使得载体内的转录和翻译控制序列发挥它们调节抗体基因转录和翻译的预期功能。

可以将抗体轻链基因和抗体重链基因插入相同或不同的表达载体中。在一些实施方案中，可变区用于通过将其插入到已经编码所需同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中来产生任何抗体同种型的全长抗体基因，使得VH区段可操作地连接至载体内的CH区段和VL区段可操作地连接至载体内的CL区段。另外或可选地，重组表达载体可以编码促进抗体链从宿主细胞分泌的信号肽。可以将抗体链基因克隆到载体中，使得信号肽连接到抗体链基因的氨基末端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即来自非免疫球蛋白蛋白质的信号肽)。

为了表达轻链和重链，通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染到宿主细胞中。术语“转染”的各种形式旨在涵盖通常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞中的各种技术，例如电穿孔，磷酸钙沉淀，DEAE-葡聚糖转染等。可以在原核或真核宿主细胞例如哺乳动物宿主细胞(其可以装配和分泌适当折叠和免疫活性的抗体)中表达本发明的抗体。

用于表达本发明重组抗体的哺乳动物宿主细胞包括与DHFR选择标记(例如，如R.J.Kaufman and P.A.Sharp(1982)J.MoI.Biol.159:601-621中所述的)一起使用的中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)(包括在Urlaub和Chasin，(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216-4220中描述的dhfr CHO细胞)，NSO骨髓瘤细胞，COS细胞和SP2细胞。特别地，为了与NSO骨髓瘤一起使用，另一种表达系统是WO 87/04462、WO 89/01036和EP 338,841中公开的GS基因表达系统。当将编码抗体基因的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞时，通过培养宿主细胞足以允许抗体在宿主细胞中表达的时间段或将抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中来产生抗体。使用标准蛋白质纯化方法可从培养基中回收抗体。

在另一个优选的实施方案中，可使用带有部分人免疫系统(而非小鼠系统)的转基因或转染色体小鼠来生成抗TSLP的人单克隆抗体。

用于生成单克隆抗体的另一个策略是从所定义策略的产生抗体的淋巴细胞中直接分离编码抗体的基因，例如参见Babcocketal.，1996；Anovel strategy for generatingmonoclonal antibodies from single,isolated lymphocytes producing antibodiesof defined strategy。对于重组抗体工程的细节还参见Welschof and Krau,Recombinantantibodes for cancer therapy ISBN-0-89603-918-8and Benny K.C.Lo AntibodyEngineering ISBN 1-58829-092-1。

为了制备嵌合抗体，可使用本领域已知的方法将鼠免疫球蛋白可变区连接至人免疫球蛋白恒定区(参见例如Cabilly等人的美国专利US4,816,567)。通过将编码VH的核酸可操作地连接至编码重链恒定区(CH1，CH2和CH3)的另一DNA分子，可将编码VH区的分离的核酸转化为全长重链基因。人重链恒定区基因的序列在本领域中是已知的(参见例如Kabat等(1991),Sequences Of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242)。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，但更优选是IgG1或IgG4恒定区。通过将编码VL的DNA可操作地连接至编码轻链恒定区CL的另一DNA分子，可将编码VL区的分离的核酸转化为全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如Kabat等，同上)，并且可以通过标准PCR扩增获得包含这些区域的DNA片段。在优选的实施方案中，轻链恒定区可以是κ或λ恒定区，但通常优选为κ恒定区。一旦获得编码VH和VL区段的DNA片段，可以通过标准重组DNA技术进一步操作这些DNA片段，例如将可变区基因转化为全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，编码VL或VH的DNA片段与编码另一种蛋白质的另一DNA片段例如抗体恒定区或柔性接头可操作地连接。在本文中使用的术语“可操作地连接”旨在表示两个DNA片段连接成使得两个DNA片段编码的氨基酸序列保持在框内。

为制备人源化抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠CDR区插入人源框架序列(参见Winter的美国专利US5,225,539；Queen等人的美国专利US5,530,101；US5,585,089；US5,693,762；以及Lo,Benny,K.C.,editor,in Antibody Engineering:Methods andProtocols,volume 248,Humana Press,New Jersey,2004)。或者，还可以利用转基因动物，其能够在免疫后不产生内源性免疫球蛋白、并且能够产生完整人抗体库。例如，已有报道在嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合缺失可以完全抑制了内源性抗体产生，然后将人种系免疫球蛋白基因阵列转移到所述种系突变小鼠中将导致该小鼠在遇到抗原刺激时产生人抗体(参见例如，Jakobovits等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：2551；Jakobovits等，1993，Nature362：255-258；Bruggermann等，1993，Year inImmunology7：33；和Duchosal等，1992，Nature 355：258)。上述转基因动物的非限制性实例包括，HuMAb小鼠(Medarex,Inc.)，其含有编码未重排的人重链(μ和γ)和κ轻链免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因微型基因座(miniloci)，加之使内源μ和κ链基因座失活的靶向突变(参见例如Lonberg等人(1994)Nature 368(6474):856-859)；或携带人重链转基因和人轻链转染色体的“KM小鼠TM”(参见专利申请WO02/43478)。其他抗体人源化改造的方法还包括噬菌体展示技术(Hoogenboom等，1991，J.Mol.Biol.227：381；Marks等，J.Mol.Biol.1991，222：581-597；Vaughan等，1996，Nature Biotech 14：309)。

编码本发明抗体的核酸分子

在一些方面，本发明涉及分离的核酸分子，其包含编码如本公开的上述分离的抗体或其片段的核酸序列。

本发明的核酸可以使用标准分子生物学技术获得。对于杂交瘤表达的抗体(例如，如下文进一步描述的由携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤)，可以通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术获得编码通过杂交瘤制备的抗体的轻链和重链的cDNA。对于从免疫球蛋白基因文库获得的抗体(例如，使用噬菌体展示技术)，编码这种抗体的核酸可以从基因文库中回收。

为了制备嵌合抗体，可使用本领域已知的方法将鼠免疫球蛋白可变区连接至人免疫球蛋白恒定区(参见例如Cabilly等人的美国专利No.4,816,567)。通过将编码VH的核酸可操作地连接至编码重链恒定区(CH1，CH2和CH3)的另一DNA分子，可将编码VH区的分离的核酸转化为全长重链基因，并且通过标准PCR扩增可以获得包含这些区域的DNA片段。通过将编码VL的DNA可操作地连接至编码轻链恒定区CL的另一DNA分子，可将编码VL区的分离的核酸转化为全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。一旦获得编码VH和VL区段的DNA片段，可以通过标准重组DNA技术进一步操作这些DNA片段，例如将可变区基因转化为全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，编码VL或VH的DNA片段与编码另一种蛋白质的另一DNA片段例如抗体恒定区或柔性接头可操作地连接。

在一些实施方案中，本发明涉及分离的核酸分子，其包含编码如本公开的分离的抗体的重链可变区的核酸序列。

在一些实施方案中，本发明涉及分离的核酸分子，其包含编码如本公开的分离的抗体的轻链可变区的核酸序列。

一方面，本公开提供了一种载体，其包含如前所述的核酸分子。

一方面，本公开提供了一种宿主细胞，其包含如前所述的核酸分子或者如前所述的载体。

缀合物

一方面，本公开提供了一种缀合物，其包含与至少一个可检测的标记物偶联的如前所述的抗体或其片段。可检测的标记物包括但不限于：(i)提供可检测信号；(ii)与第二标记物相互作用以修饰所述第一或第二标记物所提供的可检测信号，例如FRET(荧光共振能力转移，Fluorescence Resonance EnergyTransfer)；(iii)通过电荷、疏水性、形状或其他物理参数影响迁移率(例如，电泳迁移率)，或者(iv)提供捕获部分，例如亲和力、抗体/抗原或离子络合。

适合作为标记物的结构例如荧光标记物、发光标记物、发色团标记物、放射性同位素标记物、同位素标记物，优选稳定的同位素标记物、同量异位素标记物(isobariclabel)、酶标记物(例如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、脲酶、葡萄糖氧化酶等)、颗粒标记物(尤其是金属颗粒标记物、磁性颗粒标记物、聚合物颗粒标记物)、有机小分子(例如，生物素、受体的配体或结合分子(例如，细胞黏附蛋白或卵磷脂)、可通过使用结合剂检测包含核酸和/或氨基酸残基的标记物序列等。标记物非限制性地包括硫酸钡、碘西他酸、碘番酸、胺碘苯丙酸钙、泛影酸钠、泛影葡胺、甲泛葡胺、酪泮酸钠和放射诊断剂(包括正电子发射体，(例如氟-18和碳-11)、γ发射体(例如，碘-123、碘125、锝-99m、碘-131和铟-111)、核磁共振核素(例如，氟和钆))、发光物质(例如异鲁米诺和吖啶酯)、荧光物质(例如荧光素和罗丹明)、有色物质(例如乳胶颗粒和胶体金)。

如上所述的可检测的标记可通过本领域已知的方法检测。例如，荧光标记物可使用光检测器检测，以检测发射的光。酶标记物一般通过给酶提供底物及检测通过酶对底物的作用产生的反应产物来检测。在某些实施方案中，此类标记能够适用于免疫学检测(例如，酶联免疫测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法、化学发光免疫测定法等)。在某些实施方案中，可通过不同长度的接头(linker)将如上所述的可检测的标记连接至本发明的抗体或其抗原结合片段，以降低潜在的位阻。

抗体药物缀合物/免疫缀合物

一方面，本公开提供了一种包含抗体的抗体药物缀合物，其包括一个或多个药物部分/治疗剂，所述药物部分直接或经由接头连接(例如共价连接)至如前所述的抗体或其片段。在本申请的抗体-药物缀合物中，将抗TSLP抗体与药物缀合的接头结构没有特别限制，只要可以使用所得抗体-药物缀合物即可。

由于抗体-药物缀合物具有选择性递送一种或多种药物至靶组织(例如与肿瘤相关的抗原，如受TSLP影响的肿瘤)的能力，因此，抗体-药物缀合物可以提高本发明的抗体或其抗原结合片段在治疗疾病(例如癌症)中的治疗效力。

多特异性分子

本发明的抗体或其抗原结合片段可用于形成多特异性分子(例如双特异性分子)。本发明的抗体或其抗原结合片段可以是多特异性分子(例如双特异性分子)的一部分，所述双特异性或多特异性分子包含具有不同于本发明的抗体或其抗原结合片段的结合特异性的第二功能模块(例如第二抗体)或第三功能模块(例如第三抗体)，从而能够结合至少两个不同的结合位点和/或靶分子。例如，本发明的抗体或其抗原结合片段可连接至能够特异性结合可用作联合治疗的潜在靶标的任何蛋白质的第二抗体或其抗原结合片段。为产生所述双特异性或多特异性分子，可以将本发明的抗体或其抗原结合片段连接(例如通过化学偶联、基因融合、非共价缔合或其他方式)至一个或多个其他结合分子(例如另外的抗体、抗体片段、肽或结合模拟物)。

因此，在一些方面，本发明提供了一种多特异性分子，其包含本发明的抗体或其抗原结合片段。

在某些优选的实施方案中，所述多特异性分子特异性结合TSLP(例如人TSLP或猴TSLP)，并且特异性结合一个或多个其他靶标。

在某些优选的实施方案中，所述多特异性分子还包含至少一种具有针对第二靶标的第二结合特异性的分子(例如第二抗体)。

在某些优选的实施方案中，所述多特异性分子为双特异性抗体。

药物组合物

在一些方面，本发明涉及药物组合物，本公开提供了一种药物组合物或试剂盒，其包含如前所述的抗体或片段、如前所述的核酸分子、如前所述的载体、如前所述的宿主细胞、如前所述的缀合物、如前所述的抗体药物缀合物、如前所述的多特异性分子；以及药学上可接受的载体。

药物组合物可以任选地含有一种或多种另外的药物活性成分，例如另一种抗体或药物。本发明的药物组合物还可以与例如另一种免疫刺激剂、抗癌剂、抗病毒剂或疫苗组合施用，使得抗TSLP抗体增强对疫苗的免疫反应。药学上可接受的载体可以包括例如药学上可接受的液体，凝胶或固体载体，水性介质，非水性介质，抗微生物剂，等渗剂，缓冲剂，抗氧化剂，麻醉剂，悬浮/分散剂，螯合剂，稀释剂，佐剂，赋形剂或无毒的辅助物质，本领域已知的各种组分的组合或更多。

合适的组分可以包括例如抗氧化剂，填充剂，粘合剂，崩解剂，缓冲剂，防腐剂，润滑剂，调味剂，增稠剂，着色剂，乳化剂或稳定剂如糖和环糊精。合适的抗氧化剂可包括例如甲硫氨酸，抗坏血酸，EDTA，硫代硫酸钠，铂，过氧化氢酶，柠檬酸，半胱氨酸，巯基甘油，巯基乙酸，巯基山梨糖醇，丁基甲基苯甲醚，丁基化羟基甲苯和/或丙基砷酸盐。如本发明所公开的，在包含还原抗体或其抗原结合片段的一种或多种抗氧化剂如甲硫氨酸的含有本发明公开的组合物的抗体或其抗原结合片段的溶剂中，其可被氧化。氧化还原可防止或减少结合亲和力的降低，从而增强抗体稳定性并延长保质期。因此，在一些实施方案中，本发明提供了包含一种或多种抗体或其抗原结合片段和一种或多种抗氧化剂如甲硫氨酸的组合物。本发明进一步提供了多种方法，其中将抗体或其抗原结合片段与一种或多种抗氧化剂如甲硫氨酸混合，从而抗体或其抗原结合片段可以被防止氧化，以延长其保质期和/或增加活性。

为了进一步说明，药学上可接受的载体可以包括例如含水媒介物，例如氯化钠注射液、林格氏注射液、等渗右旋糖注射液、无菌水注射液，或右旋糖和乳酸林格注射液、非含水媒介物例如植物来源的不挥发性油、棉籽油、玉米油、芝麻油或花生油、抑菌或抑真菌浓度的抗微生物剂、等渗剂例如氯化钠或葡萄糖、缓冲剂例如磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂、抗氧化剂例如硫酸氢钠、局部麻醉剂例如盐酸普鲁卡因、悬浮剂和分散剂例如羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮、乳化剂例如聚山梨酯80(TWEEN-80)、隔离试剂或螯合剂如EDTA(乙二胺四乙酸)或EGTA(乙二醇四乙酸)、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。可将用作载体的抗微生物剂添加到包含酚类或甲酚类、汞制剂、苯甲醇、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵和苄索氯铵的多剂量容器中的药物组合物中。合适的赋形剂可以包括例如水、盐水、右旋糖、甘油或乙醇。合适的无毒辅助物质可以包括例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、稳定剂、溶解度增强剂或诸如乙酸钠、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯或环糊精的试剂。

施用、制剂和剂量

本发明的药物组合物可以通过各种途径体内施用至有需要的受试者，所述途径包括但不限于口服，静脉内，动脉内，皮下，肠胃外，鼻内，肌内，颅内，心内，心室内，气管内，口腔，直肠，腹膜内，皮内，局部，经皮和鞘内，或者通过植入或吸入。本发明组合物可以配制成固体、半固体、液体或气体形式的制剂；包括但不限于片剂，胶囊剂，粉剂，颗粒剂，软膏剂，溶液剂，栓剂，灌肠剂，注射剂，吸入剂和气雾剂。根据预期的应用和治疗方案可以选择合适的制剂和施用途径。

用于肠内施用的合适制剂包括硬或软的明胶胶囊，丸剂，片剂(包括包衣片剂)，酏剂，混悬剂，糖浆剂或吸入剂及其控释剂型。

适用于肠胃外施用(例如通过注射)的制剂包括活性成分溶解、悬浮于其中或以其他方式提供的(例如，在脂质体或其他微粒中)的水性或非水性、等渗、无热原、无菌液体(例如溶液，混悬液)。这些液体可以另外含有其它药学上可接受的成分，例如抗氧化剂，缓冲剂，防腐剂，稳定剂，抑菌剂，悬浮剂，增稠剂和使制剂与预期接受者的血液(或其他相关体液)等渗的溶质。赋形剂的实例包括例如水，醇，多元醇，甘油，植物油等。适用于此类制剂的等渗载体的实例包括氯化钠注射液，林格溶液或乳酸林格氏注射液。类似地，特定剂量方案(包括剂量，时间和重复)将取决于具体个体和个体的病史以及诸如药代动力学(例如半衰期，清除率等)的经验考虑。

对于注射制剂/组合物的有效药物载剂的要求是本领域普通技术人员众所周知的(参见例如，Pharmaceutics and Pharmacy Practice，J.B.Lippincott Company，Philadelphia，PA，Banker和Chalmers编辑，第238-250页(1982)，以及ASHP Handbook onInjectable Drugs，Toissel，第4版，第622-630页(1986))。

施用频率可以在治疗过程中确定和调整，并且基于减少增殖或致瘤细胞的数量，维持这种肿瘤细胞的减少，减少肿瘤细胞的增殖或延迟转移的发展。在一些实施方案中，施用的剂量可以被调节或减少以控制潜在的副作用和/或毒性。或者，本发明治疗组合物的持续连续释放制剂可能是合适的。

本领域技术人员将会理解，合适的剂量可因患者而异。确定最佳剂量通常涉及治疗益处水平与任何风险或有害副作用的平衡。所选择的剂量水平将取决于多种因素，包括但不限于特定化合物的活性，施用，施用时间，化合物清除速率，治疗持续时间，其他联合使用的药物、化合物和/或材料，病症的严重程度，以及物种，患者的性别、年龄、体重、病情、一般健康状况和以前的病史。但通常选择剂量以达到实现所需效果的作用部位处的局部浓度，而不会导致实质性的有害或不利副作用。

通常，本发明的抗体或其抗原结合片段可以以各种范围施用。这些包括每剂量约4μg/kg体重至约100mg/kg体重；每剂量约20μg/kg体重至约50mg/kg体重；每剂量约50μg/kg体重至约10mg/kg体重。其他范围包括每剂量约100μg/kg体重至约20mg/kg体重和每剂量约0.5mg/kg体重至约15mg/kg体重。在某些实施方案中，剂量为至少约100μg/kg体重，至少约250μg/kg体重，至少约750μg/kg体重，至少约3mg/kg体重，至少约5mg/kg体重，至少约10mg/kg体重。

在某些优选的实施方案中，涉及本发明的抗体或其抗原结合片段的治疗过程将包含在数周或数月的时间内施用的多剂量的所选药物产品。更具体地说，本发明的抗体或其抗原结合片段可以每天，每两天，每四天，每周，每十天，每两周，每三周，每月，每六周，每两个月，每十周或每三个月施用。就此而言，可以理解的是，可以基于患者响应和临床实践来改变剂量或者调整间隔。

用于肠胃外施用(例如静脉内注射)的相容制剂将包含浓度为约5μg/mL至约100mg/mL的如本文所公开的抗体或其抗原结合片段。在某些选定的实施方案中，抗体或其抗原结合片段的浓度将包括10μg/mL，20μg/mL，50μg/mL，60μg/mL，80μg/mL，100μg/mL，200μg/μg/mL，300μg/mL，400μg/mL，500μg/mL，600μg/mL，800μg/mL，900μg/mL或1mg/mL。在其他优选的实施方案中，抗体偶联药物将包括2mg/mL，3mg/mL，4mg/mL，5mg/mL，6mg/mL，8mg/mL，10mg/mL，12mg/mL，14mg ml，16mg/mL，18mg/mL，20mg/mL，25mg/mL，30mg/mL，35mg/mL，40mg/mL，45mg/mL，50mg/mL，60mg/mL，70mg/mL，80mg/mL，90mg/mL或100mg/mL。

本发明的抗体可与一种或其他更多种的治疗剂(例如，细胞毒剂、放射毒剂、抗肿瘤剂、抗血管发生剂或和免疫抑制剂)共施用本发明的抗TSLP抗体以降低对抗本发明抗体的免疫应答的诱导。所述抗体可与所述治疗剂(作为免疫复合物)相连接或者可与所述治疗剂分别施用。

在施用治疗的上下文中，如本文所用的术语“组合”或“共施用”指使用一种以上的治疗或治疗剂。术语“组合”的使用并不限制向对象施用的治疗或治疗剂的顺序。可以在向患者施用第二治疗或治疗剂之前、同时或之后施用治疗或治疗剂。优选地，以一定的顺序、量和/或在一定的时间间隔内向对象施用治疗或治疗剂以使得所述治疗或治疗剂可以一起发挥作用。在一个具体的实施方案中，以一定的顺序、量和/或在一定的时间间隔内向对象施用治疗或治疗剂以使得它们比如果以其他方式(特别是彼此独立地)施用提供增加的益处。优选的是，增加的益处是协同效应。

医药用途

本发明的抗体、抗体组合物和方法具有许多体外和体内用途，包括例如TSLP的检测或免疫应答的增强。例如，可以将这些分子体外或离体施用于培养细胞，或例如体内施用于人受试者。

优选的受试者包括哺乳动物，例如人/患者。本发明上下文中的哺乳动物是人类、非人类灵长类动物、驯养动物如狗、猫、绵羊、牛、山羊、猪、马等，实验室动物如小鼠、大鼠、兔、几内亚猪等以及圈养的动物，如动物园的动物。

治疗与TSLP表达相关的病症

在一些方面，本发明提供了治疗哺乳动物中的病症的方法，其包括向需要治疗的受试者(例如人)施用治疗有效量的本文所公开的抗体或其抗原结合片段。

根据本发明，“与TSLP表达相关的疾病”意为与健康组织或器官中的状态相比，病态的组织或器官的细胞中的TSLP的表达升高或降低。升高或降低是指升高或降低或者至少10％，特别是至少20％、至少50％、至少100％、至少200％、至少500％、至少1000％、至少10000％或者甚至更高。例如，所述病症是癌症或者自身免疫性疾病或者炎性疾病。

在一些方面，本公开提供了一种用于在受试者中治疗与TSLP表达相关的疾病或确定其预后的方法，包括向所需要的受试者中施用有效剂量的所述抗体或其抗原结合片段、所述核酸分子、所述载体、所述宿主细胞、所述缀合物、所述抗体药物缀合物、所述多特异性分子、或所述药物组合物或试剂盒。

在一些方面，本公开提供了一种用于在受试者中治疗与TSLP表达相关的疾病或确定其预后的方法中的所述抗体或其抗原结合片段、所述核酸分子、所述载体、所述宿主细胞、所述缀合物、所述抗体药物缀合物、所述多特异性分子、或所述药物组合物或试剂盒。

在一些方面，本公开提供了所述抗体或其抗原结合片段、所述核酸分子、所述载体、所述宿主细胞、所述缀合物、所述抗体药物缀合物、所述多特异性分子、或所述药物组合物或试剂盒在制备用于治疗与TSLP表达相关疾病或确定其预后的试剂(或药物)中的用途。

在一个实施方案中，与TSLP表达相关的疾病包括肿瘤疾病，例如癌症。

在一些实施方案中，所述与TSLP表达相关疾病是癌症，所述癌症优选选自下组：霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、宫颈癌、皮肤T细胞淋巴瘤、胃癌、肺癌、B细胞淋巴瘤，包括NHL、前B细胞淋巴细胞性白血病/淋巴瘤和成熟B细胞瘤，例如B细胞慢性淋巴细胞性白血病(CLL)/小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)，包括低级、中级和高级FL，皮肤滤泡中心淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤(MALT型、结内和脾型)、毛细胞白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、浆细胞瘤、浆细胞骨髓瘤、移植后淋巴增生性病症、华氏巨球蛋白血症和间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)。

抗体或其抗原结合片段可以作为单一疗法单独使用，或者可以与化学疗法或放射疗法组合使用。

抗体或其抗原结合片段可以与抗癌剂、细胞毒性剂或化学治疗剂组合使用。

术语“抗癌剂”或“抗增殖剂”意指可用于治疗细胞增殖性病症例如癌症的任何药剂，并且包括但不限于细胞毒性剂，细胞抑制剂，抗血管生成剂，放射疗法和放射治疗剂，靶向抗癌剂，BRM，治疗性抗体，癌症疫苗，细胞因子，激素疗法，放射疗法，抗转移剂和免疫治疗剂。应该理解的是，在如上所述的选定实施方案中，此类抗癌剂可以包含缀合物并且可以在施用之前与公开的位点特异性抗体结合。更具体而言，在某些实施方案中，将选择的抗癌剂连接至工程化抗体的不配对半胱氨酸以提供如本文所述的工程化偶联物。因此，这样的工程化缀合物被明确地考虑在本发明的范围内。在其他实施方案中，所公开的抗癌剂将与包含如上所述的不同治疗剂的位点特异性缀合物组合施用。

在一些实施方案中，所述与TSLP表达相关疾病是自身免疫性疾病，优选为选自下组的自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、中轴型脊椎关节炎、重症肌无力、多发性肌炎、银屑病、天疱疮、白癫风、多发性硬化症、嗜睡症、视神经脊髓炎、一型糖尿病、甲亢、甲减、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻、自身免疫性胃炎、原发性胆道胆管炎、自身免疫性肝炎和狼疮性肾炎。

在一些实施方案中，其中所述与TSLP表达相关疾病是炎性疾病，所述炎性疾病选自下组：哮喘、特应性皮炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、嗜酸性食管炎(EoE)、鼻息肉、慢性自发性荨麻疹、Ig驱动疾病、IgA肾病、狼疮肾炎、嗜酸性胃炎,没有鼻息肉的慢性鼻窦炎和特发性肺纤维化(IFF)。

诊断

本发明提供了用于检测、诊断或监测增殖性病症的体外和体内方法以及筛选来自患者的细胞以鉴定肿瘤细胞包括致瘤细胞的方法。这样的方法包括鉴定用于治疗的患有癌症的个体或监测癌症的进展，包括将患者或从患者获得的样品(体内或体外)与本文所述的抗体接触，并检测样品中与结合的或游离的靶分子的结合的抗体的存在或不存在或结合水平。在一些实施方案中，抗体将包含如本文所述的可检测标记或已报道分子。

在一些方面，本公开提供了一种诊断、检测或监测与TSLP表达相关疾病的方法，包括向所需要的受试者中施用有效剂量的所述抗体或其抗原结合片段、所述核酸分子、所述载体、所述宿主细胞、所述缀合物、所述抗体药物缀合物、所述多特异性分子、或所述药物组合物或试剂盒。

在一些方面，本公开提供了一种用于在受试者中诊断、检测或监测与TSLP表达相关疾病的方法中的所述抗体或其抗原结合片段、所述核酸分子、所述载体、所述宿主细胞、所述缀合物、所述抗体药物缀合物、所述多特异性分子、或所述药物组合物或试剂盒。

再一方面，本公开提供了所述抗体或其抗原结合片段、所述核酸分子、所述载体、所述宿主细胞、所述缀合物、所述抗体药物缀合物、所述多特异性分子、或所述药物组合物或试剂盒在制备用于诊断、检测或监测与TSLP表达相关的疾病的试剂(或者药物)中的用途。

可以通过多种测定法分析样品，例如放射免疫测定法，酶免疫测定法(例如ELISA)，竞争结合测定法，荧光免疫测定法，免疫印迹测定法，Western blot印迹分析和流式细胞术测定法。兼容的体内诊断或诊断测定可以包括本领域公知的成像或监测技术，例如本领域技术人员已知的磁共振成像，计算机化断层摄影(例如CAT扫描)，正电子断层扫描(例如PET扫描)，放射线照相术，超声波等。

本发明中所述的用于体外检测或监测TSLP表达或表达TSLP细胞水平的方法，同样可以用于非诊断目的。

优选的受试者包括哺乳动物，例如需要的人/患者。

受试者的样品为来自受试者的血液、排泄物(尿液或粪便)、口腔或鼻腔分泌物、或肺泡灌洗液、组织液、汗液或它们的提取物。

药物包装和试剂盒

还提供了包含一个或多个剂量的抗体或其抗原结合片段的一个或多个容器的药物包装和试剂盒。在某些实施方案中，提供单位剂量，其中单位剂量含有预定量的组合物，所述组合物包含例如抗体或其抗原结合片段，具有或不具有一种或多种其他试剂。对于其他实施方案，这种单位剂量以一次性使用的预充式注射用注射器供应。在其他实施方案中，单位剂量中包含的组合物可以包含盐水、蔗糖或类似物；缓冲液，如磷酸盐等；和/或配制在稳定和有效的pH范围内。或者，在某些实施方案中，缀合物组合物可以作为冻干粉末提供，其可以在加入合适的液体(例如无菌水或盐溶液)后重建。在某些优选的实施方案中，组合物包含一种或多种抑制蛋白质聚集的物质，包括但不限于蔗糖和精氨酸。容器上或与容器相关联的任何标签指示封装的缀合物组合物用于治疗选择的肿瘤疾病状况。

这样的试剂盒通常在合适的容器中包含工程化偶联物的药学上可接受的制剂，并且任选地在相同或不同的容器中包含一种或多种抗癌剂或者其他药剂。试剂盒还可以含有其他药学上可接受的制剂，用于诊断或组合治疗。

更具体地说，试剂盒可以具有含有本公开的抗体或其抗原结合片段的单个容器，其含有或不含另外的组分，或者它们可以具有用于每种所需试剂的不同容器。在提供用于缀合的组合治疗剂的情况下，可以按摩尔当量组合或一种组分多于另一种的方式预混合单一溶液。或者，试剂盒的缀合物和任何任选的抗癌剂可以在施用于患者之前分开保存在不同的容器中。试剂盒还可以包含用于容纳无菌药学上可接受的缓冲液或其他稀释剂例如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水(PBS)、林格氏溶液和葡萄糖溶液的第二/第三容器装置。

当试剂盒的组分以一种或多种液体溶液提供时，液体溶液优选为水溶液，特别优选无菌水溶液或盐水溶液。然而，试剂盒的组分可以作为干粉提供。当试剂或组分以干粉形式提供时，可以通过添加合适的溶剂来重构粉末。可以设想溶剂也可以提供于另一个容器中。

实施例

通过引用并入

本文中提到的每个专利文献和科学文献的全部内容为所有目的通过引用并入本文。

等同性

本发明可以以其他特定方式体现，而不背离其精神或本质特征。因此，上述实施方式在所有情况下应该被当作是说明性的，而不是对本文描述的发明的限制。因此，本发明的范围由随附的权利要求书而不是由上述描述指明，并打算将在权利要求书的等同性意义和范围之内的所有变化涵盖在其中。

实施例1动物免疫和TSLP抗体筛选

选择10-12周新西兰兔，使用人TSLP全长蛋白(Acro Biosystems,TSP-H52Ha)与弗氏佐剂乳化后对动物进行皮下多点注射，每两周一次，共免疫4-5次。根据血清效价情况，于收集外周血3天前对选取的高效价动物采用腹腔注射抗原溶液或进行冲击免疫。收集的兔外周血分离PBMC，再通过单B细胞筛选技术平台获得抗体轻链和重链可变区序列。将采用PCR方法构建的表达载体共转染293T细胞，收集细胞培养上清，通过ELISA及FACS方法筛选获得多个识别人TSLP的阳性克隆。

通过优选部分阳性克隆，将轻、重链基因分别克隆到含人轻链恒定区或人IgG1重链恒定区的表达载体，构建真核表达载体并测序一系列抗体序列。

实施例2候选嵌合抗体的表达纯化

将候选抗体序列轻链和重链可变区序列N末端分别接上合适的信号肽，C末端分别与轻、重链恒定区连接，密码子优化后分别克隆至表达载体pCDNA3.4，按照厂家提供的操作方法共转染ExpiCHO-S细胞(赛默飞)进行表达，收取上清，经Protein A纯化后获得候选抗体蛋白4C4和4G7。

实施例3 ELISA分析嵌合抗体蛋白水平结合活性

将以上纯化的候选抗体进行ELISA检测蛋白水平结合活性。人TSLP抗原蛋白(AcroBiosystems,TSP-H5255)以1μg/mL的浓度分装至96孔酶标板中，100μl/孔，4℃过夜孵育；用PBST洗涤3次后，加入100μl 3％BSA封闭液，37℃孵育1小时；用PBST洗涤3次后，加入50μl梯度稀释好的抗体样品、参比品(Tezepelumab)和阴性对照IgG(2μg/ml起始浓度，3倍梯度稀释，总计10个浓度点)，37℃孵育1小时；用PBST洗涤3次后，加入Anti-Human IgG HRP(1:10000稀释)100μl，37℃孵育0.5小时；用PBST洗涤4次后，加入TMB显色液50μl，37℃显色8min，加入ELISA终止液50μl/孔终止反应，酶标仪450nm波长下测定吸收值。

结果如图1A和图1B显示，本发明的抗TSLP抗体能够以高结合力特异性结合人TSLP，并且4C4、4G7与人TSLP蛋白的结合活性优于参照品Tezepelumab。

实施例4 ELISA分析候选抗体蛋白水平阻断活性

通过竞争ELISA测定本发明的候选抗体阻断参照品人TSLP与受体TSLP-R结合的能力。人TSLP-R抗原蛋白(Acro Biosystems,TSP-H52Ha)以1μg/mL的浓度分装至96孔酶标板中，100μl/孔，4℃过夜孵育；用PBST洗涤3次后，加入100μl 3％BSA封闭液，37℃孵育1小时；用PBST洗涤3次后，稀释本发明的抗TSLP抗体、参比品或阴性对照IgG(6μg/ml起始浓度，3倍梯度稀释，总计8个浓度点)。洗涤板之后，将100μL/孔的抗体/IL4Rαhis混合物加到包被有参照品的板中。于37℃孵育40分钟，加入50μl梯度稀释好的候选抗体样品、参比品(Tezepelumab)和阴性对照IgG(6μg/ml起始浓度，4倍梯度稀释，总计7个浓度点)，37℃孵育1小时；用PBST洗涤3次后，加入Anti-Human IgG HRP(1:10000稀释)100μl，37℃孵育0.5小时；用PBST洗涤4次后，加入TMB显色液50μl，37℃显色8min，加入ELISA终止液50μl/孔终止反应，酶标仪450nm波长下测定吸收值。

结果如图2A和图2B显示，本发明的4C4抗体能够很好地阻断TSLP与TSLPR的结合，并且阻断能力比参照品Tezepelumab更好。本发明的4G7抗体阻断TSLP与TSLPR的结合能力较弱。

实施例5：候选抗体阻断TSLP与BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞的结合

BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞是一株TSLP受体高表达的稳转细胞株，使用流式的方法检测兔抗人TSLP抗体阻断TSLP与BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞的结合。具体操作：将候选抗体(4*1250ng/ml，2倍梯度稀释，8个浓度点)加至96孔板，50μl/孔；加入TSLP(Acro Biosystems,货号：TSP-H52Ha)溶液(4*40ng/ml)，50μl/孔；37℃孵育15分钟；继续加入BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞，1E6个/ml，100μl/孔；2-8℃孵育1小时；洗涤3次；加入按照1:300比例稀释的羊抗鼠IgG Fc特异性-FITC抗体(sigma-Aldrich，货号：F4143)，在2-8℃避光孵育0.5小时，洗涤3次后，加入染色缓冲液重悬细胞，使用流式仪(BD FACS Lyric)检测细胞荧光强度(MFI)。用公式：阻断百分比(％)＝(MFI_TSLP对照-MFI_样品)/(MFI_TSLP对照-MFI_{cell control})*100％计算样品阻断效率。其中：MFI_样品表示加有TSLP、抗TSLP抗体、细胞的孔；MFI_{cell control}表示仅加有细胞的孔；MFI_TSLP对照表示加有TSLP和细胞的孔。以抗体终浓度作为横坐标，以对应浓度抗体阻断百分比(％)作为纵坐标进行非线性拟合，计算IC50值。结果如图3A和图3B显示：4G7、4C4抗体在BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞水平阻断活性IC50优于Tezepelumab。其中4C4的细胞水平阻断活性是Tezepelumab的1.5倍，4G7的细胞水平阻断活性是Tezepelumab的约2.4倍，但是最大阻断百分比达不到100％。

实施例6：候选抗体抑制TSLP激活H_TSLP Reporter Cell Line细胞STATs andJAK2信号通路的作用

H_TSLP Reporter Cell Line报告基因细胞系，是基于Jak2-Stat信号通路构建的一种Luciferase报告基因细胞系，TSLP与TSLPR结合后，二聚体增强IL-7Rα的募集，形成细胞外三元复合物，Jak2被激活。Jak2进一步介导Stats的磷酸化，使Stats转运到细胞核内，从而激活荧光素酶(Luciferase)的表达。使用该方法可以有效检测抗TSLP抗体抑制TSLP对H_TSLP Reporter Cell Line细胞的激活作用。具体操作：将对数生长期的H_TSLPReporter Cell Line细胞(吉满生物，货号：GM-C15572)用1640+1％FBS+1％PS洗涤一次并调整细胞密度至2E6个/ml，接种至白色96孔细胞培养板(Corning，货号：3917)，50μl/孔；在37℃、5％CO2条件下孵育过夜。次日，将适量TSLP(Acro Biosystems,货号：TSP-H52Ha)与不同浓度候选抗TSLP抗体(起始浓度4*25nM，10倍梯度稀释，8个浓度点)等体积混匀，在37℃避光孵育15分钟。将TSLP与抗体混合液加至接种H_TSLP Reporter Cell Line细胞的96孔板中，在37℃、5％CO₂条件下孵育6小时。加入Bright-Lumi^TMII萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(碧云天，货号：RG052M)，100μl/孔；在室温避光孵育5-10分钟。使用多功能酶标仪(MD，SpectraMax i3X)检测LUM值。用公式：抑制率(％)＝(RLU_TSLP对照-RLU_样品)/(RLU_TSLP对照-RLU_{cell control})*100％计算样品抑制效率。其中：RLU_样品表示加有TSLP、抗TSLP抗体、细胞的孔；RLU_{cell control}表示仅加有细胞的孔；RLU_TSLP对照表示加有TSLP和细胞的孔。以抗体终浓度作为横坐标，以对应浓度抗体抑制率(％)作为纵坐标进行非线性拟合，计算IC50值。结果如图4A和图4B显示：4G7、4C4抗体可以有效抑制TSLP对H_TSLP Reporter Cell Line细胞STATs and JAK2信号通路的激活作用，其中4C4抑制信号通路激活活性是Tezepelumab的59倍，4G7抑制信号通路激活活性是Tezepelumab的26倍。

实施例7：候选抗体抑制TSLP对BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞的增殖促进作用

BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞是一株TSLP受体高表达的稳转细胞株，且依赖mIL3增殖，不添加mIL3时，TSLP可以有效促进BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞的增殖。使用该方法可以有效评估抗TSLP抗体抑制TSLP对BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞的增殖促进作用。具体操作：用1640+10％FBS+1％PS分析缓冲液配置4*0.625ng/ml TSLP(Acro Biosystems，货号：TSP-H52Ha)溶液，加至96孔U底板，50μl/孔；用1640+10％FBS+1％PS分析缓冲液将候选抗体稀释成不同浓度(起始浓度4*166.67ng/ml，6倍梯度稀释，8个浓度点)并加至加有TSLP的96孔U底板中，50μl/孔，37℃孵育15分钟；用1640+10％FBS+1％PS分析缓冲液重悬BaF3-TSLPR/IL7Rα并调整密度至5E4/ml，加至上述96孔U底板，100μl/孔；37℃孵育72小时；将孵育结束的细胞转移至新的白色96孔板，100μl/孔；用CellCounting-Lite2.0Luminescent Cell ViabilityAssay检测(诺唯赞，货号：DD1101-02)，100μl/孔，室温避光孵育5-10分钟，于多功能酶标仪读取LUM值。用公式：抑制率(％)＝(RLU_TSLP对照-RLU_样品)/(RLU_TSLP对照-RLU_{cell control})*100％计算样品抑制效率。其中：RLU_样品表示加有TSLP、抗TSLP抗体、细胞的孔；RLU_{cell control}表示仅加有细胞的孔；RLU_TSLP对照表示加有TSLP和细胞的孔。以抗体终浓度作为横坐标，以对应浓度抗体抑制率(％)作为纵坐标进行非线性拟合，计算IC50值。结果如图5A和图5B显示：4G7、4C4抗体及Tezepelumab均可以有效抑制TSLP对BaF3-TSLPR/IL7Rα细胞的增殖促进作用，且4C4抑制活性是Tezepelumab的11.3倍，4G7抑制活性是Tezepelumab的6.5倍。

实施例8：候选抗体与Tezepelumab的表位竞争实验

实验原理：通过BLI技术，使用SA探针捕获生物素化的第一抗体，结合抗原，再结合第二抗体进行表位分组。

实验步骤：(1)SA探针结合生物素化的第一抗体Tezepelumab；(2)结合抗原人TSLP；(3)再分别结合溶剂(空白对照)或者未生物素化的第二抗体4C4或者4G7。

实验结果：4C4与Tezepelumab结合人TSLP表位存在交叉，4G7与Tezepelumab结合人TSLP不同表位(如表1所示)。根据公开的文献资料(Nat Commun.2017；8:14937.)表明，Tezepelumab结合在C末端区域，本发明筛选的抗体4G7不与Tezepelumab结合表位交叉，不会阻断C末端具有抗菌活性的MKK34抗菌肽，有望保留TSLP对抗外界细菌感染的能力。

表1第二抗体结合信号值

实施例9：候选抗体人源化

抗体人源化改造：将4G7的轻链和重链可变区基因与人IgG胚系序列进行同源性比对，选择IGHV3-66*01/IGHJ5*01作为重链CDR移植模板，将4G7重链的CDR区(即HCDR1、HCDR2和HCDR3)移植入IGHV3-66*01/IGHJ5*01的骨架区；选择IGKV1-6*01/IGKJ4*01作为轻链CDR移植模板，将4G7轻链的CDR区(即LCDR1、LCDR2和LCDR3)移植入IGKV1-6*01/IGKJ4*01的骨架区；对骨架区特定位点进行回复突变，获得4G7 V60人源化抗体可变区。人源化后的重链可变区序列如SEQ ID NO：25所示；人源化后的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：26所示。合成4G7 V60人源化抗体的重链与轻链基因，并且克隆至pCDNA3.4的表达载体中。将人源化抗体重链表达质粒和轻链表达质粒共转染CHO-S细胞。转染后第4-8天后，收获培养上清，用Protein A进行一步纯化，获得人源化抗体。

实施例9：抗人TSLP人源化抗体4G7 V60抑制TSLP激活H_TSLP Reporter CellLine细胞STATs and JAK2信号通路的作用

H_TSLP Reporter Cell Line报告基因细胞系，是基于Jak2-Stat信号通路构建的一种Luciferase报告基因细胞系，TSLP与TSLPR结合后，二聚体增强IL-7Rα的募集，形成细胞外三元复合物，Jak2被激活。Jak2进一步介导Stats的磷酸化，使Stats转运到细胞核内，从而激活荧光素酶(Luciferase)的表达。使用该方法可以有效检测抗TSLP抗体抑制TSLP对H_TSLP Reporter Cell Line细胞的激活作用。具体操作：将对数生长期的H_TSLPReporter Cell Line细胞(吉满生物，货号：GM-C15572)用1640+1％FBS+1％PS洗涤一次并调整细胞密度至2E6个/ml，接种至白色96孔细胞培养板(Corning，货号：3917)，50μl/孔；在37℃、5％CO2条件下孵育过夜。次日，将适量TSLP(Acro Biosystems,货号：TSP-H52Ha)与不同浓度抗人TSLP人源化抗体4G7 V60(起始浓度4*25nM，10倍梯度稀释，8个浓度点)等体积混匀，在37℃避光孵育15分钟。将TSLP与抗体混合液加至接种H_TSLP Reporter Cell Line细胞的96孔板中，在37℃、5％CO2条件下孵育6小时。加入Bright-Lumi^TMII萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(碧云天，货号：RG052M)，100μl/孔；在室温避光孵育5-10分钟。使用多功能酶标仪(MD，SpectraMax i3X)检测LUM值。用公式：抑制率(％)＝(RLUTSLP对照-RLU样品)/(RLUTSLP对照-RLUcell control)*100％计算样品抑制效率。其中：RLU样品表示加有TSLP、抗人TSLP人源化抗体4G7 V60、细胞的孔；RLUcell control表示仅加有细胞的孔；RLUTSLP对照表示加有TSLP和细胞的孔。以抗体终浓度作为横坐标，以对应浓度抗体抑制率(％)作为纵坐标进行非线性拟合，计算IC50值。结果如图6显示：4G7 V60抗体可以有效抑制TSLP对H_TSLP Reporter Cell Line细胞STATs and JAK2信号通路的激活作用，4G7 V60抑制信号通路活性显著优于Tezepelumab，两者相比，4G7 V60的活性比Tezepelumab提升4743倍。

通过引用并入

本文中提到的每个专利文献和科学文献的全部内容为所有目的通过引用并入本文。

等同性

本发明可以以其他特定方式体现，而不背离其精神或本质特征。因此，上述实施方式在所有情况下应该被当作是说明性的，而不是对本文描述的发明的限制。因此，本发明的范围由随附的权利要求书而不是由上述描述指明，并打算将在权利要求书的等同性意义和范围之内的所有变化涵盖在其中。

Claims (10)

1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性结合TSLP，且包含重链可变区和轻链可变区，

所述重链可变区包含：

CDRH1，其包含与SEQ ID NO：13和19之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列，或由SEQ ID NO：13和19之一组成；

CDRH2，其包含与SEQ ID NO：14和20之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列，或由SEQ ID NO：14和20之一组成；和

CDRH3，其包含与SEQ ID NO：15和21之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列，或由SEQ ID NO：15和21之一组成；

所述轻链可变区包含：

CDRL1，其包含与SEQ ID NO：16和22之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列，或由SEQ ID NO：16和22之一组成；

CDRL2，其包含与SEQ ID NO：17和23之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列，或由SEQ ID NO：17和23之一组成；和

CDRL3，其包含与SEQ ID NO：18和24之一具有至少80％、至少85％、至少95％、或100％序列同一性的序列，或由SEQ ID NO：18和24之一组成。

2.如权利要求1所述的抗体或片段，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO：8、10之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：8、10之一组成；

其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO：7、9之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：7、9之一组成。

3.如前述权利要求中任一项所述的抗体或片段，还包含重链恒定区，其中该重链恒定区包含与SEQ ID NO：11具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：11组成；

还包含轻链恒定区，该轻链恒定区包含与SEQ ID NO：12具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：12组成。

4.如前述权利要求中任一项所述的抗体或片段，其中包含：

(a)轻链，其包含与SEQ ID NO：4、6之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ IDNO：4、6之一组成；

(b)重链，其包含与SEQ ID NO：3、5之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：3、5之一组成。

5.如前述权利要求中任一项所述的抗体或片段，其中包含：

(a)轻链，其包含SEQ ID NO：4或者由其组成；以及重链，其包含SEQ ID NO：3或者由其组成；

(b)轻链，其包含SEQ ID NO：6或者由其组成；以及重链，其包含SEQ ID NO：5或者由其组成。

6.如前述权利要求中任一项所述的抗体或片段，其中所述片段为Fab片段、Fab’片段、F(ab')₂片段、Fv片段、或单链Fv片段(scFv)；

所述抗体为全抗体、单克隆抗体、嵌合抗体或人源化抗体或改进的抗体例如改进的嵌合抗体。

7.如权利要求6所述的抗体或片段，其中所述人源化抗体包含：

轻链可变区，包含与SEQ ID NO：26具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：26组成；

重链可变区，包含与SEQ ID NO：25具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：25之一组成。

8.如权利要求7所述的抗体或片段，其中所述人源化抗体包含：

轻链，其包含与SEQ ID NO：28之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：28之一组成；

重链，其包含与SEQ ID NO：27之一具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的序列或者由SEQ ID NO：27之一组成。

9.一种分离的核酸分子，其中包含编码如权利要求1-8中的任一项中所述的抗体或片段的核酸序列。

10.如权利要求1-8中任一项所述的抗体或片段、如权利要求9所述的核酸分子、在TSLP表达相关疾病中的用途，TSLP表达相关疾病是自身免疫性疾病，所述自身免疫性疾病选自下组：系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、中轴型脊椎关节炎、重症肌无力、多发性肌炎、银屑病、天疱疮、白癫风、多发性硬化症、嗜睡症、视神经脊髓炎、一型糖尿病、甲亢、甲减、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乳糜泻、自身免疫性胃炎、原发性胆道胆管炎、自身免疫性肝炎和狼疮性肾炎。