CN117903999A - 一种藤黄色单胞菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明的目的是提供一种藤黄色单胞菌及其应用。提供的菌株名称为3ca2，由以亚硝酸钠为氮源、碳酸钠为碳源的自养培养基分离获得，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏号为CGMCC No.29813。该菌能够产表面活性剂和β‑葡萄糖苷酶，是一株功能性的藤黄色单胞菌新物种。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种藤黄色单胞菌及其应用。
背景技术
生物表面活性剂主要是指由微生物产生的具有表面活性的次生代谢物,常见的生物表面活性剂包括脂肽、糖脂等。随着各领域对绿色环保可持续发展理念的增强，生物表面活性剂受到了越来越多的关注。纤维素酶是一类能将纤维素水解为低聚葡萄糖及葡萄糖的酶，很多自然界微生物均含有纤维素酶。由于纤维素酶可以广泛应用于纺织、造纸、食品及生物燃料等工业。然而，在纤维素酶水解的过程中，产生的大量纤维二糖及寡糖会强烈抑制纤维素酶的活性，导致纤维素水解效率的急剧下降。β-葡萄糖苷酶可以高效催化纤维二糖及寡糖转化为葡萄糖，会解除产物抑制，从而保证整个水解过程连续而稳定。
发明内容
本发明的一个目的是提供藤黄色单胞菌属(Luteimonas sp.)3ca2。
本发明提供的藤黄色单胞菌属(Luteimonas sp.)3ca2，其保藏号是CGMCCNo.29813。
上述藤黄色单胞菌或其菌悬液或其培养液或其发酵产物在如下至少一种中的应用也是本发明保护的范围：
1)在生产生物表面活性剂或生物乳化剂中的应用或在制备生产生物表面活性剂或生物乳化剂的产品中的应用；
2)在生产β-葡萄糖苷酶中的应用或在制备生产β-葡萄糖苷酶的产品中的应用。
本发明另一个目的是提供一种产品。
本发明提供的产品，其包括上述藤黄色单胞菌或其菌悬液或其培养液或其发酵产物。
上述产品具有如下1)-2)中至少一种功能：
1)所述产品在生产生物表面活性剂或生物乳化剂中的应用；
2)所述产品在生产β-葡萄糖苷酶中的应用。
上述藤黄色单胞菌3ca2的培养物也属于本发明的保护范围。藤黄色单胞菌3ca2的培养物是将藤黄色单胞菌3ca2在微生物培养基中培养得到的物质(如含有藤黄色单胞菌3ca2和分泌到液体培养基内的物质即发酵液，或如含有藤黄色单胞菌3ca2和分泌到固体培养基内的物质)。
上述藤黄色单胞菌3ca2的培养物具有如下1)-2)中至少一种功能：
1)生产生物表面活性剂或生物乳化剂；
2)生产β-葡萄糖苷酶。
本发明的实验证明，本发明提供的菌株名称为3ca2，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏号为CGMCC No.29813。该菌能够在产表面活性剂和β-葡萄糖苷酶，是一株功能性的藤黄色单胞菌新物种。
保藏说明
菌种名称：藤黄色单胞菌
拉丁名：Luteimonas sp.
菌株编号：3ca2
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所
保藏日期：2024年1月30日
保藏中心登记入册编号：CGMCC No.29813
附图说明
图1为3ca2与Luteimonas同属有效种系统发育树。
图2为3ca2与Luteimonas同属及专利菌株系统发育树。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、Luteimonas sp.3ca2的分离鉴定
一、Luteimonas sp.3ca2的分离
2023年10月从鱼缸水样中，使用以亚硝酸钠为氮源、碳酸钠为碳源的自养培养基(配方：氯化钠0.3g/L，硫酸亚铁0.03g/L，硫酸镁0.03g/L，磷酸二氢钾2.18g/L，亚硝酸钠0.5g/L，碳酸钠1g/L，pH值7.5-8.0)，分离获得纯菌株3ca2。
二、鉴定
1、形态及生理生化鉴定
上述分离的3ca2菌株能够在LB固体培养基(配方：蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、氯化钠10g/L，pH 7-8，琼脂粉1.5％)上生长，形成圆形规则、青黄色菌落。将活化的3ca2接种在LB液体培养基(配方：蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、氯化钠10g/L，pH 7-8)中，30℃、150rpm振荡培养24h作为后续新鲜种子菌液。将蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、液体培养基的pH值调整为7-8，分别加入终浓度为0、1、2、3、4、5、6％的氯化钠，分别按1％(v/v)接入3ca2新鲜菌液，30℃、150rpm振荡培养，3ca2在1-2％氯化钠中生长，在3％氯化钠中弱生长，在0、4、5、6％氯化钠中不生长。根据文献《常见细菌系统鉴定手册》，测定3ca2在30℃、150rpm振荡培养条件下不能利用葡萄糖、阿拉伯糖、麦芽糖作为碳源生长。
2、16S rDNA基因鉴定
将活化的3ca2接种在LB液体培养基(配方：蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、氯化钠10g/L，pH 7-8)中，30℃、150rpm振荡培养24h。取1ml新鲜培养菌液4℃、8000rpm离心5min，收集菌体于2ml离心管中，采用DNA提取试剂盒提取DNA。电泳检测后，采用通用引物8F/1492R进行PCR扩增。PCR产物电泳检测后，测定16S rDNA基因序列，具体序列见序列表1。
使用Ezbiocloud数据库和NCBI数据库将上述3ca2菌株的16S rDNA基因比对后发现，该菌株属于Luteimonas属，但跟已有菌株的相似性低。与Ezbiocloud数据库最高相似菌株Luteimonas marina相似性只有99.36％，与NCBI数据库最高相似性序列就是Luteimonasmarina模式株FR1330T序列，相似性只有99.36％。3ca2与最相似的Luteimonas marina氯化钠生长浓度和碳源利用存在差异，如表1，其中+表示生长或利用，-表示不生长或不利用。将Ezbiocloud数据库中的Luteimonas属相关序列，使用软件MEGA构建系统发育树如图1，3ca2在系统发育树上处于独立的一支。
表1菌株3ca2与Luteimonas marina差异
| 项目 | 3ca2 | Luteimonas marina |
| 0％氯化钠 | - | + |
| 2％氯化钠 | + | - |
| 葡萄糖 | - | + |
| 阿拉伯糖 | - | + |
| 麦芽糖 | - | + |
将Ezbiocloud数据库中的Luteimonas属相关序列，以及专利CN117143754A、CN115820462A、CN114574388A、CN111763631A、CN110079479A、CN108893432A、CN105255774A、CN104371941A、CN103865820A菌株序列，使用软件MEGA构建系统发育树如图2，3ca2在系统发育树上仍处于独立的一支，与各专利菌株相差远，最高与CN115820462A菌株相似性只有98.07％。
因此，3ca2菌株为一种新发现的藤黄色单胞菌Luteimonas属的新种。
藤黄色单胞菌(Luteimonas sp.)3ca2已于2024年1月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为CGMCC No.29813。
实施例2、3ca2 CGMCC No.29813菌株的产表面活性剂功能检测
将实施例1获得的3ca2 CGMCC No.29813菌株接种在LB液体培养基中，30℃、150rpm振荡培养72h，得到3ca2菌液。将菌液4℃、8000rpm离心5min，取上清，得到上清培养液。
以不接入3ca2菌液的空白培养基为对照，得到对照培养液。
按照文献“生物表面活性剂鼠李糖脂性质的研究”中的方法测定乳化指数(E24)。
乳化指数(E24)＝乳化液高度/液体总高度×100％
结果显示：3ca2上清培养液的乳化指数(E24)为34.6％，对照培养液的乳化指数(E24)为0，显示菌株3ca2有产表面活性剂功能。
实施例3、3ca2 CGMCC No.29813菌株的β-葡萄糖苷酶活性
固体培养基：在蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、氯化钠10g/L、pH值调到7-8的液体培养基中，再加入0.05％七叶苷、0.25％柠檬酸高铁铵和1.5％琼脂，灭菌后倒固体平板。
将实施例1获得的3ca2 CGMCC No.29813菌株接种在LB液体培养基中，30℃、150rpm振荡培养24h，得到3ca2菌液(CFU含量为109个/ml)。
取5μl上述新鲜3ca2菌液点接在上述固体培养基上，30℃静置培养48h。
结果显示：3ca2菌落周围出现明显的黑色沉淀圈，黑色沉淀圈与菌落的圈径比为12/8＝1.5，说明菌株3ca2具有较好的β-葡萄糖苷酶活性。
Claims (5)
1.藤黄色单胞菌(Luteimonas sp.)3ca2，其保藏号是CGMCC No.29813。
2.权利要求1所述的藤黄色单胞菌的下述任一种应用：
1)藤黄色单胞菌(Luteimonas sp.)3ca2在生产生物表面活性剂或生物乳化剂中的应用或在制备生产生物表面活性剂或生物乳化剂的产品中的应用；
2)藤黄色单胞菌(Luteimonas sp.)3ca2在生产β-葡萄糖苷酶中的应用或在制备生产β-葡萄糖苷酶的产品中的应用。
3.一种产品，其特征在于：含有权利要求1所述的藤黄色单胞菌(Luteimonas sp.)3ca2。
4.权利要求3所述产品的下述任一种应用：
1)所述产品在生产生物表面活性剂或生物乳化剂中的应用；
2)所述产品在生产β-葡萄糖苷酶中的应用。
5.权利要求1所述的藤黄色单胞菌的培养物，其特征在于：所述培养物具有下述1)或2)的功能：
1)生产生物表面活性剂或生物乳化剂；
2)生产β-葡萄糖苷酶。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410235286.5A CN117903999A (zh) | 2024-03-01 | 2024-03-01 | 一种藤黄色单胞菌及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202410235286.5A CN117903999A (zh) | 2024-03-01 | 2024-03-01 | 一种藤黄色单胞菌及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117903999A true CN117903999A (zh) | 2024-04-19 |
Family
ID=90690755
Family Applications (1)
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| CN202410235286.5A Pending CN117903999A (zh) | 2024-03-01 | 2024-03-01 | 一种藤黄色单胞菌及其应用 |
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| CN (1) | CN117903999A (zh) |
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2024
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