CN117903225A

CN117903225A - 肝组织靶向递送化合物及其制备方法和其应用

Info

Publication number: CN117903225A
Application number: CN202310940800.0A
Authority: CN
Inventors: 王海盛; 王晓磊; 王宇航
Original assignee: Sihegene Beijing Biotechnology Co ltd
Current assignee: Sihegene Beijing Biotechnology Co ltd
Priority date: 2022-07-29
Filing date: 2023-07-28
Publication date: 2024-04-19

Abstract

本发明涉及一种肝组织靶向的化合物，该类化合物具有如式(1)、式(2)或式(3)所示的结构，该化合物可与功能剂通过磷酸酯连接形成缀合物，能够高特异性靶向肝组织，从而降低功能剂用量，降低功能剂组织靶向性不足带来的一系列潜在的副作用。

Description

肝组织靶向递送化合物及其制备方法和其应用

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种肝组织靶向递送化合物及其制备方法和其应用。

背景技术

反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotides，ASOs)是化学合成的寡核苷酸单链，通过Watson-crick碱基互补配对原则与靶标RNA结合，调控相应基因的表达(上调或下调)，从而实现对特定疾病的治疗(Nat Rev Drug Discovery，2021，20:427-453)。核酸药物的药理学性质更多地由核酸序列决定，针对目标基因适当地重新排列核酸的碱基序列即可确定；而其药动学性质更多地由化学修饰的骨架和配体决定。这使得可以在不改变核苷酸序列的前提下，对核酸药物进行化学改造，从而对其药动学性质单独进行优化，使其获得更好的靶向性。配体开发一般具有平台化的特点，不同的核酸序列使用相同的靶向性配体，可以获得类似的靶向性作用。

去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)是一个主动靶向的理想受体，人类ASGPR主要表达在肝实质细胞表面，每个人肝实质细胞表达的ASGPR数量大概为50～100万个。N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)-核酸共价复合物与ASGPR结合后，通过细胞内吞作用，进入到细胞内，ASGPR与复合物解离返回至细胞表面，继而GalNAc与核酸断开，核酸药物释放发挥药效，从而实现核酸药物的肝靶向递送。Alnylam公司使用相同的GalNAc配体，结合不同的siRNA，开发上市了givosiran、vutrisiran、inclisiran等多个产品。

但是，现有技术靶向配体靶向性差，需要使用的共价偶联GalNAc的核酸药物的药用剂量仍较高，大剂量用药会引起潜在的毒副作用。因此，有必要开发靶向性更好的肝组织核酸药物偶联物。

发明内容

本发明的目的在于提供具有如式(1)、式(2)或式(3)所示的靶向化合物，

A选自-OH、-N₃、苯基、萘基、R₁取代的杂环基、R₁取代的苯基的任一种，所述杂环基优选三氮唑基；

其中，R₁选自单取代或双取代的苯基、萘基、三氮唑基、四氮唑基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪、哌啶螺吖丁啶基、中的任一种，其取代基为F、Cl、Br、羟基、甲基、甲氧基、硝基、氰基中的一种或两种；

优选的，A选自-OH、-N₃、及如下结构：

X选自-O-、-S-、-CH₂-的任一种；

Y选自-O-、-S-、-C(O)-的任一种；

Z选自碳原子或氮原子，

优选地，选自苯环、取代苯环、哌啶、取代哌啶；

R₂在Z的邻位或间位，R₂选自H、C1-C15烷基、烯基、炔基、苯基、取代苯基、酰基的任一种或其组合；

优选地，选自/>

Link1结构为：

结构中X仅用于指代连接方向，并不实际存在于Link1结构片段中，其中，

n1＝1-3，

n2＝0-1，

n3＝0-1，

n4＝0-1，

n5＝0-2，

n6＝0-1，

n7＝0-1，

n8＝0-3，

n9＝2-15，

且n2，n3，n4，n5，n6，n7，n8不同时为0，

0≤n2+n3+n4+n6+n7+n8≤5，优选地，1≤n2+n3+n4+n6+n7+n8≤4，

亚杂环基(Heterocyclylene)选自亚三氮唑基、亚四氮唑基、亚吡咯烷基、亚哌啶基、亚哌嗪基、亚哌啶螺吖丁啶基的任一种；优选如下结构：

优选的，

link1结构选自下述结构片段任一种：

-(CH₂)_n1-亚杂环基-(CH₂)_n9-，其中，n1＝1-3，n9＝7-10，

-(CH₂)_n1-亚杂环基-(CH₂CH₂O)_n8-(CH₂)_n9-，其中，n1＝1-3，n8＝1-3，n9＝2-4，

-(CH₂)_n1-亚杂环基-(CH₂)_n5-CONH-(CH₂)_n9-，其中，n1＝1-3，n5＝1-2，n9＝7-10，

-(CH₂)_n1-亚杂环基-(CH₂)_n5-CONH-(CH₂CH₂O)_n8-(CH₂)_n9-，其中，n1＝1-3，n5＝1-2，n8＝1-3，n9＝2-4，

-(CH₂)_n1-CO-亚杂环基-CO-(CH₂)_n9-，其中，n1＝1-3，n9＝4-5，

-(CH₂)_n1-CONH-(CH₂CH₂O)_n8-(CH₂)_n9-，其中，n1＝1-3，n8＝1-3，n9＝2-4，

-(CH₂)_n1-CONH-(CH₂)_n9-，其中，n1＝1-3，n9＝6-10，

-(CH₂)_n1-NHCO-(CH₂)_n9-，其中，n1＝1-3，n9＝6-10；

Link2结构选自下述结构片段任一种：

-(CH₂)_n10-OBn，其中，n10＝5-15，优选的，n10＝8-10，

-(CH₂)_n11-苯基-O-(CH₂)_n12-OBn，其中，n11＝1-10，n12＝1-10，优选的，n11＝3-5，n12＝3-5，

-(CH2)_n13-CONH-(CH2)_n14-OBn，其中，n13＝2-6，n14＝5-10，优选的，n13＝3-5，n14＝6-8,

-(CH₂)_n15-COOR₃，其中，R₃选自甲基、乙基、丙基、异丙基的任一种，n15＝5-15，优选的，n15＝8-11。

当Z选N时，Y-link2选自-Cbz、-Fmoc、-Boc、中的任一种。

本发明的另一目的在于提供下述配体化合物的任一种：

/>

优选地，所述化合物为化合物12，16，29，39，71，109，113，145，158，180，182，184，204，206，208，210，212，221，223，225，230，232，235中的任一种。

本发明的另一目的在于提供下述中间体或其游离基团的任一种：

本发明的目的在于提供一种化合物XII的合成方法，具体包括如下步骤：化合物VII与化合物X通过click反应生成化合物XI，然后在发生酯水解反应生成化合物XII，

本发明的优选技术方案中，所述化合物XII的合成方法包括下述步骤：化合物I经过烷基化得到化合物III；化合物III经过羟甲基化后进而还原生成三醇V，然后通过两步烷基化生成化合物VII；化合物VII与化合物X通过click反应生成化合物XI，然后在发生酯水解反应生成化合物XII，

本发明的优选技术方案中，所述化合物XII的合成方法包括下述步骤：

本发明的目的在于提供一种化合物XVII的合成方法，具体包括下述步骤：化合物XV与化合物VII通过click反应生成化合物XVI，然后发生酯水解反应生成化合物XVII，

本发明的优选技术方案中，所述化合物XVII的合成方法包括下述步骤：化合物X通过氢化还原得到化合物XIII；化合物XIII与溴乙酰溴缩合生成化合物XIV，然后叠氮基取代生成化合物XV；化合物XV与化合物VII通过click反应生成化合物XVI，然后发生酯水解反应生成化合物XVII，

本发明的优选技术方案中，所述化合物XVII的合成方法包括下述步骤：

本发明的目的在于提供一种化合物XXIV的合成方法，具体包括下述步骤：化合物XX与化合物VII通过click反应生成化合物XXI，然后叠氮基取代TosO基团生成化合物XXII；化合物XXII与单取代或双取代的苯乙炔化合物通过click反应生成化合物XXIII，然后发生酯水解反应生成化合物XXIV，

本发明的优选技术方案中，所述化合物XXIV的合成方法包括下述步骤：化合物X发生酯水解反应生成化合物XVIII，糖环6位引入Tos基团得到化合物XIX，乙酰化3，4位羟基得到化合物XX；化合物XX与化合物VII通过click反应生成化合物XXI，然后叠氮基取代TosO基团生成化合物XXII；化合物XXII与单取代或双取代的苯乙炔化合物通过click反应生成化合物XXIII，然后发生酯水解反应生成化合物XXIV，

本发明的优选技术方案中，所述化合物XXIV的合成方法包括下述步骤：

/>

本发明的目的在于提供一种化合物XXX的合成方法，具体包括如下步骤：化合物XXVIII与化合物XIII缩合得到化合物XXIX，然后发生酯水解反应生成化合物XXX，

本发明的优选技术方案中，所述化合物XXX的合成方法包括下述步骤：化合物V与溴乙酸乙酯反应生成化合物XXV，继续与重氮乙酸乙酯反应得到化合物XXVI，水解生成对应的酸XXVII，然后形成活化酯XXVIII；化合物XXVIII与化合物XIII缩合得到化合物XXIX，然后发生酯水解反应生成化合物XXX，

本发明的优选技术方案中，所述化合物XXX的合成方法包括下述步骤：

本发明的目的在于提供一种的化合物XL的合成方法，具体包括如下步骤：化合物XXXVII与活化酯XXXVIII缩合后得到化合物XXXIX，然后发生酯水解反应生成化合物XL，

本发明的优选技术方案中，所述化合物XL的合成方法包括下述步骤：由环己胺和乙烯基乙腈、乙醛反应制得化合物XXXI，继而在酸性条件下反应制得化合物XXXII，氰基还原并进行氨基保护得到化合物XXXIII；氧化羟基得到化合物XXXIV；化合物XXXIV与化合物XXXV缩合得到化合物XXXVI，脱保护得到化合物XXXVII；化合物XXXVII与活化酯XXXVIII缩合后得到化合物XXXIX，然后发生酯水解反应生成化合物XL，

本发明的优选技术方案中，所述化合物XL的合成方法包括下述步骤：

本发明的目的在于提供一种化合物L的合成方法，具体包括下述步骤：XLVIII与化合物XIII缩合后得到化合物XLIX，然后发生酯水解反应生成化合物L，

本发明的优选技术方案中，所述化合物L的合成方法包括下述步骤：2-羟基甲基-2-(4-吡啶)-1,3-丙二醇先经还原，再进行氨基保护得到化合物XLII；化合物XLII同丙烯腈反应得到加和物XLIII，氢解脱保护生成化合物XLIV，酸催化醇解接着保护得到化合物XLVI；化合物XLVI水解后继续生成活化酯XLVIII，与化合物XIII缩合后得到化合物XLIX，然后发生酯水解反应生成化合物L，

/>

本发明的优选技术方案中，所述化合物L的合成方法包括下述步骤：

/>

本发明的目的在于提供一种化合物LV的合成方法，具体包括如下步骤：化合物LII与化合物LIII缩合后得到化合物LIV，然后发生酯水解反应生成化合物LV，

/>

本发明的优选技术方案中，所述化合物LV的合成方法包括下述步骤：化合物XLIV经还原得到化合物LII，与化合物LIII缩合后得到化合物LIV，然后发生酯水解反应生成化合物LV，

本发明的优选技术方案中，所述化合物LV的合成方法包括下述步骤：

本发明的目的在于提供一种化合物LXIV的合成方法，具体包括下述步骤：化合物LXII与化合物X通过click反应生成化合物LXIII，然后发生酯水解反应生成化合物LXIV，

本发明的优选技术方案中，所述化合物LXIV的合成方法包括下述步骤：4-溴肉桂酸甲酯经还原，保护，催化偶联步骤得到化合物LVIII，氢解后生成化合物LIX；化合物LIX通过Mitsunobu反应得到化合物LX，水解后与炔丙胺缩合得到化合物LXII；化合物LXII与化合物X通过click反应生成化合物LXIII，然后发生酯水解反应生成化合物LXIV，

本发明的优选技术方案中，所述化合物LXIV的合成方法包括下述步骤：

本发明的目的在于提供一种化合物LXIX的合成方法，具体包括下述步骤：活化酯LXVII与化合物XIII缩合得到化合物LXVIII，然后发生酯水解反应生成化合物LXIX，

本发明的优选技术方案中，所述化合物LXIX的合成方法包括下述步骤：化合物LXI与3-氨基丙酸叔丁酯缩合得到化合物LXV，脱酯保护基后制得活化酯LXVII；活化酯LXVII与化合物XIII缩合得到化合物LXVIII，然后发生酯水解反应生成化合物LXIX，

本发明的优选技术方案中，所述化合物LXIX的合成方法包括下述步骤：

本发明的目的在于提供一种化合物LXXVII的合成方法，具体包括下述步骤：LXXVI与化合物XIII缩合得到化合物LXXVII，

本发明的目的在于提供一种化合物LXXIX的合成方法，具体包括下述步骤：LXXVI与化合物XIII缩合得到化合物LXXVII；化合物LXXVII脱掉苄基得到化合物LXXVIII，然后通过亚磷酰化反应得到化合物LXXIX，

本发明的优选技术方案中，所述化合物LXXIX的合成方法包括下述步骤：6-叠氮基-1-己醇经过羟基保护，叠氮还原，缩合步骤后得到化合物LXXII；化合物LXXII活化后与化合物XLV缩合后水解，所得化合物LXXV的活化酯LXXVI与化合物XIII缩合得到化合物LXXVII；化合物LXXVII脱掉苄基得到化合物LXXVIII，然后通过亚磷酰化反应得到化合物LXXIX，

/>

本发明的优选技术方案中，所述化合物LXXIX的合成方法包括下述步骤：

/>

本发明的另一目的在于提供本发明的靶向配体与功能剂通过磷酸酯连接形成的缀合物。

“靶向配体”指靶向化合物中断裂掉尾端保护基后的结构片段，例如，靶向化合物LXXVII、其相应的靶向配体部分及相应的寡核苷酸缀合物如下：

本发明中保护基还可以为苄基(Bn)、苄氧基羰基(Cbz)、酯保护基。

本发明的优选技术方案中，所述功能剂选自药物分子，优选地，所述药物分子选自反义寡核苷酸(ASO)、小干扰RNA(siRNA)、生物活性多肽、抗体、小分子药物的任一种或其组合。

本发明的另一目的在于提供化合物243靶向配体部分与功能剂通过磷酸酯连接形成的缀合物，

其中，OLIGO为反义寡核苷酸，其5′末端通过磷酸酯与靶向配体部分连接。

本发明的优选技术方案中，所述反义寡核苷酸的序列选自SEQ ID NO:1-12；

更优选地，所述反义寡核苷酸结构如下：

^mC(MOE)G(MOE)^mC(MOE)T(MOE)G(MOE)GTG^mCTG^mC^mCTGT(MOE)A(MOE)G(MOE)T(MOE)G(MOE)；

G(MOE)^mC(MOE)A(MOE)A(MOE)T(MOE)GT^mCA^mC^mCTTT^mCA(MOE)T(MOE)A(MOE)^mC(MOE)^mC(MOE)；

^mC(MOE)A(MOE)T(MOE)T(MOE)T(MOE)TGATTGTG^mCAG(MOE)T(MOE)A(MOE)A(MOE)G(MOE)；

T(MOE)T(MOE)^mC(MOE)T(MOE)T(MOE)^mGATGTT^mCT^mCGT(MOE)G(MOE)^mC(MOE)T(MOE)G(MOE)；

T(MOE)^mC(MOE)T(MOE)T(MOE)G(MOE)ATGTT^mCT^mCGTG(MOE)^mC(MOE)T(MOE)G(MOE)^mC(MOE)；

G(MOE)A(MOE)G(MOE)^mC(MOE)A(MOE)G^mCT^mCAG^mCAG^mC T(MOE)^mC(MOE)^mC(MOE)T(MOE)^mC(MOE)；

T(MOE)^mC(MOE)G(MOE)^mC(MOE)T(MOE)GGTGCTG^mC^mCTG(MOE)T(MOE)A(MOE)G(MOE)T(MOE)；

^mC(cEt)^mC(cEt)A(cEt)^mCGGA^mCAT^mCGG^mC(cEt)A(cEt)^mC(cEt)；

^mC(cEt)^mC(cEt)T(cEt)^mCGGAA^mCG^mCAAG(cEt)G(cEt)^mC(cEt)；

G(cEt)T(cEt)^mC(cEt)TAGAAAAGTTG(cEt)G(cEt)^mC(cEt)；

G(cEt)A(cEt)T(cEt)^mCTTGATGG^mC^mCA(cEt)^mC(cEt)^mC(cEt)；

G(MOE)^mC(MOE)A(MOE)G(MOE)A(MOE)GGTGAAG^mCGAA(MOE)G(MOE)T(MOE)G(MOE)^mC(MOE)。

其中，相邻核苷间键联均是硫代磷酸酯；(MOE)表示此核苷为β-D-2’-(甲氧基乙基)核糖核苷；(cEt)表示此核苷含4'-CH(CH3)-O-2’桥的双环糖部分；“^mC”表示此核苷包含5-甲基胞嘧啶核碱基。

本发明的另一目的在于提供所述配体化合物在制备肝脏靶向缀合物中的应用。

本发明的另一目的在于提供所述缀合物在制备肝脏靶向药物中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种药物组合物，其含有所述缀合物。

本发明的另一目的在于提供一种用于制备治疗乙型肝炎病毒感染疾病的药物的化合物246，其结构如下：

GalNAc_3o-G(MOE)^mC(MOE)A(MOE)G(MOE)A(MOE)GGTGAAG^mCGAA(MOE)G(MOE)T(MOE)G(MOE)^mC(MOE)；下标“o”表示磷酸二酯键联，相邻核苷间键联均是硫代磷酸酯；每个(MOE)表示此核苷为β-D-2’-(甲氧基乙基)核糖核苷；每个“^mC”表示此核苷包含5-甲基胞嘧啶核碱基；GalNAc_3o-表示具有下式的基团，其与寡核苷酸5’端的氧原子连接：

本发明的另一目的在于提供化合物246在用于制备治疗乙型肝炎病毒感染疾病的药物中的用途。

除非另有说明，本发明涉及液体与液体之间的百分比时，所述的百分比为体积/体积百分比；本发明涉及液体与固体之间的百分比时，所述百分比为体积/重量百分比；本发明涉及固体与液体之间的百分比时，所述百分比为重量/体积百分比；其余为重量/重量百分比。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1、本发明的肝组织靶向的化合物与功能剂通过共价键连接形成的缀合物，能够特异性靶向肝组织，从而有效解决功能剂在生物体内肝组织不能富集等相关问题，降低功能剂组织靶向性不足带来的一系列潜在的副作用，降低功能剂用量，同时不影响功能剂本身的稳定性及其特定的生物功能。

2、本发明方法收率高、产品纯度高，反应速度快，具有明显经济效益，适合进行工业化生产。

附图说明

图1化合物16、iGalNAc与ASGPR竞争结合强度对比图；

图2化合物246与247基因敲降效果对比图。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

化合物7的制备

向化合物1(20.0g，0.111mol)的DMF(80mL)溶液中加入化合物2(36.5g，0.122mol)和碳酸钾(30.6g，0.222mol)。在室温下将混合物搅拌18小时。反应完成后，向混合物中加水(80mL)，用乙酸乙酯(3×80mL)萃取。用盐水(60mL)洗涤有机物，无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发得到残留物，硅胶柱层析(EA:PE＝1/10)纯化，得到化合物3(33.0g，75％)。LCMS：m/z＝399.2[M+H]+；tR＝2.347min。

向化合物3(20.0g，0.111mol)和(HCHO)n(28.5g)在DMF(80mL)的溶液中加入甲醇钠(30.6g，0.222mol)。在室温下将混合物搅拌18小时。反应完成后，向混合物中加入冷水(80mL)，用1.0M盐酸将pH调节至4-5。过滤混合物，将白色固体用水和乙酸乙酯洗涤，干燥得到7.0g产物。滤液用乙酸乙酯(3×80mL)萃取，用盐水(60mL)洗涤合并的有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发得到残留物，硅胶柱层析(MeOH：DCM＝1/8)纯化，得到8.2g产物。合并两部分产物得化合物4(15.0g，46％)。LCMS：m/z＝429.3[M-H]-；tR＝1.857min。

将BH3/THF(100.8mL，100.8mmol，1M)在0℃下慢慢加到化合物4(6.2g，14.418mmol)的THF(20mL)溶液中。加热到70℃，反应混合物搅拌18h。反应完成后，在0℃下用甲醇将反应淬灭，浓缩得到粗产品，硅胶柱层析(MeOH:DCM＝1/6)纯化，得到化合物5(4.2g，67％)。LCMS：m/z＝439.2[M+Na]+；tR＝1.66min。

向化合物5(1.6g，3.63mmol)的NMP(5mL)溶液中加入3-溴丙-1-炔(6.5g，54.6mmol)，碳酸铯(9.5g，29.04mmol)和TBAI(268mg，0.73mmol)。反应液在120℃下搅拌18小时。反应完成后，向混合物中加入水(60mL)，用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。饱和食盐水(30mL)洗涤合并的有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物，硅胶柱层析(EA:PE＝1/1)纯化，得到化合物6(690mg,36％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.41–7.3，1(m，7H)，6.92(d，J＝8.8Hz，2H)，4.56(s，2H)，4.22(t，J＝3.8Hz，4H)，4.04–3.89(m，8H)，3.52(t，J＝6.6Hz，2H)，1.87–1.76(m，2H)，1.73–1.62(m，2H)，1.39(m，8H)。

在0℃下，向化合物6(690mg，1.38mmol)的DMF(10mL)溶液中加入60％NaH(61mg，1.5mmol),搅拌1小时后，加入3-溴丙-1-炔(181mg，1.5mmol)，室温下继续搅拌18小时。反应完成后，向反应混合物中加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×15mL)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(EA:PE＝1/1)纯化，得到化合物7(470mg,66％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.39–7.36(m，2H)，7.35–7.26(m，5H)，6.87–6.82(m，2H)，4.50(s，2H)，4.13(d，J＝2.4Hz，6H)，3.92(t，J＝6.5Hz，2H)，3.82(s，6H)，3.47(t，J＝6.6Hz，2H)，2.40(t，J＝2.4Hz，3H)，1.80–1.71(m，2H)，1.65–1.59(m，2H)，1.45–1.32(m，8H)。

实施例2

化合物8的制备

在0℃下,将TMSOTf(6.28g,28.25mmol)加入到半乳糖胺五乙酸酯(10.0g,25.68mmol)的二氯乙烷(100mL)溶液中。反应物在55℃下继续搅拌3小时。将反应混合物用水(100mL)稀释并用DCM(3×100mL)萃取。用饱和NaHCO3溶液(100mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到化合物8(6.676g)。

实施例3

化合物12的制备

将7-溴庚-1-醇(5.0g，25.68mmol)和NaN3(3.3g,51.36mmol)溶在DMF(100mL)中。反应液在65℃下加热搅拌18小时。用水(100mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。用盐水(3×100mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩粗产品。粗产品经硅胶柱层析纯化得化合物9(6.5g)。

将化合物8(5.0g，15.18mmol)和化合物9(2.63g,16.7mmol)溶于25mL的二氯乙烷中，在0℃下，缓慢添加TMSOTf(1.69g，7.59mmol)。反应液升到室温继续搅拌16小时。用水(100mL)稀释反应混合物，并用二氯甲烷(3×50mL)萃取。用饱和NaHCO3溶液(100mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，硅胶柱层析(PE:EA＝10:0至0：10)纯化得化合物10(2.904g，40％)。LCMS：m/z＝487.3[M+H]+；tR＝1.073min。

化合物10(0.31g，0.66mmol)溶于叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)中，再加入硫酸铜(20mg)和抗坏血酸钠(20mg)的5mL水溶液，并在0℃下将化合物7(100mg，0.19mmol)的THF(5mL)溶液。反应混合物在室温下搅拌16小时。反应混合物干燥浓缩得到残留物，经硅胶柱层析纯化(甲醇在二氯甲烷中＝2％至4％)，得到化合物11(100mg)。LCMS：m/z＝996.2[M/2+H]+；tR＝2.050min。

在室温下，将化合物11(100mg)溶于氨的甲醇溶液(5.0mL，7N)中，搅拌18小时。将混合物浓缩得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物12(31mg)。

LCMS：m/z＝807.1[M/2+H]+；tR＝9.257min。

1HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.80(s，3H)，7.32(d，J＝4.3Hz，4H)，7.25(dd，J＝12.6，6.4Hz，3H)，6.78(d，J＝8.7Hz，2H)，4.51(s，6H)，4.48(s，2H)，4.39–4.31(m，9H)，3.90(dt，J＝15.1，6.4Hz，6H)，3.84(dd，J＝9.2，2.8Hz，5H)，3.79–3.70(m，12H)，3.59(dd，J＝10.7，3.1Hz，3H)，3.51–3.41(m，8H)，1.94(s，9H)，1.91–1.83(m，6H)，1.79–1.70(m，2H)，1.60(dt，J＝13.5，6.7Hz，2H)，1.55–1.42(m，8H)，1.41–1.24(m，24H)。

实施例4

化合物16的制备

将8-溴-1-辛醇(10.0g，47.82mmol)和叠氮化钠(4.66g，71.73mmol)溶于100mL的N,N-二甲基甲酰胺中，反应液在70℃下搅拌16小时。向反应物中加入水(50mL)，用乙酸乙酯萃取(3×50mL),用饱和NaCl溶液(60mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到化合物13(9.34g)。

1HNMR(400MHz，CDCl3)δ3.60(t，J＝6.7Hz，2H)，3.25(t，J＝7.0Hz，2H)，1.64–1.51(m，4H)，1.35(d，J＝11.5Hz，8H)。

将化合物8(2.5g，7.6mmol)和化合物13(1.43g,8.4mmol)溶于25mL的二氯乙烷中，在0℃下，缓慢添加TMSOTf(0.845g，3.8mmol)。反应液升到室温继续搅拌16小时。向反应液中加入水(50mL)和二氯甲烷(3×50mL)。用饱和NaHCO3溶液(100mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，硅胶柱层析(PE:EA＝10:0至0：10)纯化，得到化合物14(1g，26.4％)。将抗坏血酸钠(150.0mg,0.84mmol)和硫酸铜(133.0mg,0.84mmol)溶于水(3mL)中，加入到化合物14((420mg,0.84mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物7(150mg,0.28mmol))的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×30mL)萃取混合物。用NaHCO3水溶液(30mL)清洗合并的有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物15粗品(210mg)。

在室温下，将化合物15(210mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7N)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物16(60mg)。

LCMS：m/z＝828.1[M/2+H]+；tR＝9.596min。

1HNMR(400MHz，Methanol-d4)δ7.80(s，3H)，7.32-7.22(m，7H)，6.77(d，J＝8.8Hz，2H)，4.51(s，6H)，4.48(s，2H)，4.37-4.34(m，9H)，3.93–3.82(m，11H)，3.76–3.72(m，12H)，3.60-3.41(m，11H)，1.90(s，9H)，1.88-1.32(m，48H)。

实施例5

化合物20的制备

将9-溴壬烷-1-醇(5.0g，22.42mmol)和NaN3(3.33g，51.36mmol)溶在DMF(100mL)中。反应液在65℃下加热搅拌18小时。用水(100mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。用盐水(3×100mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得粗产品。粗产品经硅胶柱层析纯化得到化合物17(6.68g)。

将化合物8(5.0g，15.18mmol)和化合物17(3.094g,16.70mmol)溶于25mL的二氯乙烷中，在0℃下，缓慢添加TMSOTf(1.687g，7.59mmol)。反应液升到室温继续搅拌16小时。向反应物中加入水(100mL)和二氯甲烷(3×50mL)。用饱和NaHCO3溶液(100mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，硅胶柱层析(PE：EA＝10：0至0：10)纯化得到化合物18(4.74g，60.7％)。LCMS：m/z＝515.6[M+H]+；tR＝1.797min。

将抗坏血酸钠(20mg)和硫酸铜(20mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物18(330mg，0.66mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物7(100mg，0.19mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO3水溶液(30mL)洗涤有机物，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，经硅胶柱层析(甲醇在二氯甲烷中＝5％至8％)纯化得到化合物19(100mg)。

在室温下，将化合物19(100mg)溶于氨的甲醇溶液(5mL，7N)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化得到化合物20(22mg)。

LCMS：m/z＝849.0[M/2+H]+；tR＝10.002min。

1HNMR(400MHz，Methanol-d4)δ7.78(s，3H)，7.30(dd，J＝12.8，4.5Hz，4H)，7.28–7.18(m，3H)，6.77(d，J＝8.7Hz，2H)，4.51(s，6H)，4.48(s，2H)，4.35(t，J＝7.9Hz，9H)，3.88(ddd，J＝15.2，13.1，4.7Hz，11H)，3.80–3.67(m，12H)，3.59(dd，J＝10.7，3.0Hz，3H)，3.53–3.41(m，8H)，2.13–1.93(m，9H)，1.91–1.79(m，6H)，1.73(dd，J＝14.2，6.8Hz，2H)，1.65–1.57(m，2H)，1.55–1.23(m，44H)。

实施例6

化合物24的制备

将10-溴-1-癸醇(10.0g，42.16mmol)和叠氮化钠(4.11g,63.24mmol)溶于100mL的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，反应液在70℃下搅拌16小时。向反应物中加入水(100mL)，用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，用饱和NaCl溶液(60mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到化合物21(13.9g)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ3.63(t，J＝6.6Hz，2H)，3.25(t，J＝6.9Hz，2H)，1.57(dd，J＝14.0，7.0Hz，4H)，1.28(d，J＝16.9Hz，10H)，0.87(d，J＝6.7Hz，2H)。

将化合物8(5.0g，15.18mmol)和化合物21(3.328g,16.70mmol)溶于50mL的二氯乙烷中，在0℃下，缓慢添加TMSOTf(1.687g，7.59mmol)。反应液升到室温继续搅拌16小时。向反应物中加入水(100mL)和二氯甲烷(3×50mL)。用饱和NaHCO₃溶液(100mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，硅胶柱层析(PE:EA＝10:0至0：10)纯化得到化合物22(5.878g，73.4％)。LCMS：m/z＝529.6[M+H]⁺；t_R＝1.919min。

向化合物7(150mg，0.28mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)混合溶液中加入抗坏血酸钠(166mg，0.84mmol)和硫酸铜(133mg，0.84mmol)的水(3mL)溶液，在0℃下，滴加化合物22(443mg，0.84mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液。反应液在室温下搅拌18小时。反应完成后，向反应液中加水(30mL)，用乙酸乙酯萃取(3×30mL),用NaHCO₃溶液(30mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化，得到化合物23(185mg，31.2％)。

LCMS：m/z＝1059.1[M/2+H]⁺；t_R＝2.03min。

将化合物23(100mg，0.05mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中。反应液在室温下搅拌18小时后，减压浓缩，残留物用反相制备HPLC纯化，得到化合物24(28mg，31.3％)。

LCMS：m/z＝870.2[M/2+H]⁺；t_R＝10.46min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.78(s，3H)，7.32(d，J＝4.4Hz，4H)，7.27–7.19(m，3H)，6.77(d，J＝8.8Hz，2H)，4.51(s，6H)，4.48(s，2H)，4.35(dd，J＝7.7，5.8Hz，9H)，3.93–3.81(m，11H)，3.76–3.72(m，11H)，3.59(dd，J＝10.7，3.2Hz，3H)，3.51–3.41(m，9H)，1.96(s，9H)，1.92–1.84(m，6H)，1.79–1.70(m，2H)，1.60(d，J＝7.8Hz，2H)，1.49(dd，J＝14.8，7.5Hz，8H)，1.32(d，J＝35.9Hz，42H)。

实施例7

化合物29的制备

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将三乙二醇(100.0g，666.6mmol)和TEA(333.3mmol)溶于二氯甲烷(200mL)中，在0℃下，向反应液中加入TosCl(31.66g，166.65mmol)。反应液在室温下搅拌18小时。向反应中加入水(100mL)，用二氯甲烷(3×100mL)萃取。用盐水(3×100mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，在减压下过滤和浓缩，得到化合物25粗品(41g)。

在70℃下，将溶于DMF(100mL)的化合物25(40.6g,140.9mmol)和NaN₃(44.0g,676.9mmol)的反应液搅拌18小时。向反应液加入水(100mL)，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。用盐水(3×100mL)清洗合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物26粗品(15g)。

将化合物8(5.2g，15.79mmol)和化合物26(3.039g,17.369mmol)溶于50mL二氯乙烷中，在0℃下，缓慢添加TMSOTf(1.755g，7.895mmol)。反应液升到室温继续搅拌16小时。向反应物中加入水(100mL)，并用二氯甲烷(3×50mL)萃取。用饱和NaHCO₃溶液(100mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，硅胶柱层析(PE:EA＝10:0至0：10)纯化得到化合物27(4.269g，54％)。

LCMS：m/z＝505.5[M+H]⁺；t_R＝1.362min。

将抗坏血酸钠(20mg)和硫酸铜(20mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物27(360mg，0.66mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物7(100mg，0.19mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，经硅胶柱层析(甲醇在二氯甲烷中＝5％至8％)，纯化得到化合物28(120mg)。

LCMS：m/z＝1022.8[M/2+H]⁺；t_R＝1.999min。

在室温下，将化合物28(100mg)溶于氨的甲醇溶液(5mL)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化得到化合物29(20.5mg)。

LCMS：m/z＝834.0[M/2+H]⁺；t_R＝8.427min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.90(s，3H)，7.32(d，J＝4.0Hz，4H)，7.29–7.18(m，3H)，6.79(d，J＝8.0Hz，2H)，4.55(dd，J＝8.0，4.0Hz，12H)，4.48(s，2H)，4.41(d，J＝8.0Hz，3H)，3.97–3.85(m，14H)，3.83(d，J＝2.0Hz，3H)，3.80–3.69(m，12H)，3.65–3.46(m，29H)，2.12–1.91(m，9H)，1.79–1.70(m，2H)，1.60(dd，J＝12.0，4.0Hz，2H)，1.52–1.32(m，8H)。

实施例8

化合物34的制备

在0℃下，向溶于二氯甲烷(200mL)的四乙二醇(129.4g,666.6mmol)和TEA(333.3mmol)的溶液中加入TosCl(31.66g，166.65mmol)。反应液在室温下搅拌18小时。向反应中加入水(100mL)，用二氯甲烷(3×100mL)萃取。用盐水(3×100mL)清洗合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，在减压下过滤和浓缩，得到化合物30粗品(47g)。

在70℃下，将溶于DMF(100mL)的化合物30(46.7g,140.9mmol)和NaN₃(44.0g,676.9mmol)的反应液搅拌18小时。向反应液加入水(100mL)，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。用盐水(3×100mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，在减压下过滤和浓缩，得到化合物31(15g)。

将化合物8(5.0g，15.2mmol)和化合物31(3.662g,16.72mmol)溶于50mL的二氯乙烷中，在0℃下，缓慢添加TMSOTf(1.689g，7.6mmol)。反应液升到室温继续搅拌16小时。向反应物中加入水(100mL)，并用二氯甲烷(3×50mL)萃取。用饱和NaHCO₃溶液(100mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，硅胶柱层析(PE:EA＝10:0至0：10)纯化得到化合物32(1.495g，18％)。

LCMS：m/z＝549.3[M+H]⁺；t_R＝0.845min。

向化合物7(150mg，0.28mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)混合溶液中加入抗坏血酸钠(166mg，0.84mmol)和硫酸铜(133mg，0.84mmol)的水(3mL)溶液，在0℃下，滴加化合物32(460mg，0.84mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液。反应液在室温下搅拌18小时。反应完成后，向反应液中加水(30mL)，用乙酸乙酯萃取(3×30mL),用NaHCO₃溶液(30mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化，得到化合物33(160mg，26.3％)。

LCMS：m/z＝1089.1[M/2+1]⁺；t_R＝1.70min。

将化合物33(100mg，0.046mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中。反应液在室温下搅拌18小时后，减压浓缩，残留物用反相制备HPLC纯化，得到化合物34(31mg，34.1％)。

LCMS：m/z＝870.2[M/2+H]⁺；t_R＝10.46min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.90(s，3H)，7.31(t，J＝6.4Hz，4H)，7.26(d，J＝10.0，6.4Hz，3H)，6.79(d，J＝8.8Hz，2H)，4.56(t，J＝5.0Hz，6H)，4.53(s，6H)，4.48(s，2H)，4.43(d，J＝8.4Hz，3H)，3.96–3.91(m，6H)，3.90–3.86(m，7H)，3.82(d，J＝3.2Hz，3H)，3.79–3.70(m，12H)，3.70–3.63(m，4H)，3.56(ddd，J＝10.4，6.0，4.1Hz，28H)，3.53–3.51(m，5H)，3.49(dd，J＝9.0，4.2Hz，5H)，1.96(s，9H)，1.73(dd，J＝14.0，6.7Hz，2H)，1.60(dd，J＝14.0，6.8Hz，2H)，1.44–1.34(m，6H)。

实施例9

化合物39的制备

向化合物10(500mg，0.973mmol)的甲醇(20mL)溶液中，加入钯/碳(100mg)和醋酸(3滴)。反应完成后，过滤反应溶液，取滤液并将其浓缩，得化合物35粗品(450mg)。

LCMS：m/z＝461.3[M+H]⁺；t_R＝0.98min。

将化合物35(424mg,0.922mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，加入TEA(352mg,3.48mmol)，0℃下加入2-溴乙酰溴(258mg,1.28mmol)，室温下搅拌反应0.5小时。反应完成后，加入水(30mL)和1.0M盐酸(5mL)，用二氯甲烷(3×20mL)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。硅胶柱层析(MeOH:DCM＝0至12％)纯化，得到化合物36(320mg,57％)。LCMS：m/z＝581.2[M+H]⁺；t_R＝1.06min。

化合物36(304mg,0.526mmol)溶于DMF(10mL)，加入NaN₃(131mg，2.02mmol)，65℃下搅拌反应18小时。反应完成后，向混合物中加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。用NaHCO₃(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH:DCM＝0至12％)纯化，得化合物37(250mg)。

LCMS：m/z＝544.4[M+H]⁺；t_R＝1.29min。

将抗坏血酸钠(150mg)和CuSO₄(150mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物37(250mg,0.46mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物7(45.9mg,0.087mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH:DCM＝0至12％)纯化，得到化合物38(170mg,17％).

室温下，化合物38(100mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7N)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物39(4.5mg)。

LCMS：m/z＝892.6[M/2+H]⁺；t_R＝8.890min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.88(s，3H)，7.33-7.25(m，7H)，6.79(d，J＝8.8Hz，2H)，5.11(s，6H)，4.53-4.48(m，8H)，4.35(d，J＝8.4Hz，3H),3.94-3.73(m，22H)，3.60-3.31(m，12H)，3.21(t，J＝6.8Hz，6H)，1.96(s，9H)，1.60–1.48(m，12H)，1.33(m，32H)。

实施例10

化合物44的制备

将化合物14(500mg，1.0mmol)溶于甲醇(20mL)，并向其中添加10％钯碳(100mg)和醋酸(3滴)。在室温下，反应混合物在氢气氛围下搅拌18小时。通过硅藻土过滤混合物，将滤液浓缩，得到化合物40的粗品(551mg)。

LCMS：m/z＝475.3[M+H]⁺；t_R＝0.717min。

将化合物40(550mg，1.16mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，再加入TEA(352mg，3.48mmol)，然后在0℃下加入2-溴乙酰溴(258mg，1.28mmol)，然后在室温下搅拌0.5小时。反应完成后，加入水(30mL)和1.0M盐酸(5mL)，用二氯甲烷(3×20mL)萃取，合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化粗品，得到化合物41(301mg，44％)。LCMS：m/z＝585.2[M+H]⁺；t_R＝0.985min。

将化合物41(301mg，0.51mmol)溶于DMF(10mL)，加入NaN₃(131.3mg，2.02mmol)，在65℃下搅拌反应18小时。反应完成后，向混合物中加水(30mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，用NaHCO₃(30mL)洗涤合并的有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化粗品，得到化合物42(145mg,52％)。

LCMS：m/z＝558.4[M+H]⁺；t_R＝0.991min。

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于H₂O(3mL)中，加入到化合物42(145mg，0.26mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物7(45.9mg，0.087mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗合并的有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化粗品，得到化合物43(67mg,35％)。

LCMS：m/z＝1109.7[M/2+H]⁺；t_R＝0.600min。

在室温下，将化合物43(67mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。反相制备HPLC纯化得到化合物44(27mg,48％)。

LCMS：m/z＝913.6[M/2+H]⁺；t_R＝9.141min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.87(s，3H)，7.32(d，J＝4.4Hz，4H)，7.26(d，J＝8.9Hz，3H)，6.79(d，J＝8.9Hz，2H)，5.10(s，6H)，4.53(s，6H)，4.48(s，2H)，4.35(d，J＝8.4Hz，3H)，3.95–3.81(m，12H)，3.78–3.72(m，13H)，3.58(dd，J＝10.7，3.3Hz，3H)，3.51–3.42(m，9H)，3.21(dd，J＝7.1，4.8Hz，6H)，1.96(s，9H)，1.60–1.48(m，14H)，1.33(d，J＝16.6Hz，31H)。

实施例11

化合物49的制备

向化合物18(500mg，0.973mmol)的甲醇(20mL)溶液中加入10％钯碳(100mg)和醋酸(3滴)。在室温下，反应混合物在氢气氛围下搅拌18小时。通过硅藻土过滤混合物，将滤液浓缩，得到化合物45粗品(450mg)。

将化合物45(450mg，0.922mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，再加入TEA(352mg，3.48mmol)，然后在0℃下加入2-溴乙酰溴(258mg，1.28mmol)，并在室温下搅拌反应0.5小时。反应完成后，向混合物中加水(30mL)和1.0M盐酸(5mL)，二氯甲烷(3×20mL)萃取，合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并旋干得残留物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化粗品，得到化合物46(320mg，57％)。将化合物46(320mg，0.526mmol)和NaN₃(131.32mg，2.02mmol)溶于DMF(10mL)中，在65℃下搅拌18小时。反应完成后，加水(30mL)，用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。合并的有机层用饱和NaHCO₃(30mL)洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤并旋干得残留物，得到化合物47粗产品(250mg)，直接用于下一步反应。

LCMS：m/z＝572.2[M+H]⁺；t_R＝1.41min。

向化合物47(250mg，0.437mmol)在叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)的溶液中加入抗坏血酸钠(150mg)，CuSO₄(150mg)和H₂O(3mL)的混合物，然后在0℃下将化合物7(77mg，0.146mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液加入到上述反应液中，在室温下搅拌反应18小时。反应完成后，加水(30mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。用NaHCO₃溶液(30mL)洗涤合并的有机层，并用无水硫酸钠干燥，过滤并旋干得到粗品。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化粗品，得到化合物48(170mg，17％)。

LCMS：m/z＝1123.2[M/2+H]⁺；t_R＝1.80min。

在室温下，化合物48(100mg，0.044mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物49(4.5mg,5.4％).

LCMS：m/z＝934.7[M/2+H]⁺；t_R＝9.423min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.86(s，3H)，7.33-7.24(m，7H)，6.79(d，J＝8.8Hz，3H)，5.01(s，6H)，4.53-4.48(m，7H)，4.35(d，J＝8.4Hz，3H)，3.94-3.73(m，24H)，3.60-3.31(m，12H)，3.21(t，J＝6.8Hz，6H)，1.96(s，9H)，1.60–1.48(m，14H)，1.33(m，38H)。

实施例12

化合物54的制备

向化合物22(0.50g，0.95mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入10％Pd/C(0.05g)，并在氢气氛围下反应16小时。将反应混合物过滤并浓缩得到化合物50(0.44g)。

LCMS：m/z＝503.4[M+H]⁺；t_R＝1.585min。

在0℃下，向化合物50(0.44g，0.87mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中，加入DIPEA(110mg，0.87mmol)和2-溴乙酰溴(530.11mg，2.63mmol)。混合物溶液在0℃下反应1小时。将反应混合物减压浓缩得到残余物，经硅胶柱层析纯化(EA:PE＝1：1)，得到化合物51(0.34g)。

LCMS：m/z＝623.2[M+H]⁺；t_R＝1.580min。

化合物51(0.34g，0.54mmol)，NaN₃(106mg，1.64mmol)和DMF(10mL)的混合物溶液在25℃下反应18小时。将反应混合物减压浓缩得到残余物,经硅胶柱层析纯化(PE/EA＝1：1)得到化合物52(0.24g)。

LCMS：m/z＝586.3[M+H]⁺；t_R＝1.568min。

将抗坏血酸钠(20mg)和CuSO₄(20mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物52(240mg，0.41mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物7(70mg，0.136mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，经硅胶柱层析(甲醇在二氯甲烷中＝5％至8％)纯化，得到化合物53(100mg)。

在室温下，将化合物53(100mg)溶于氨的甲醇溶液(5mL，7N)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化得到化合物54(23mg)。

LCMS：m/z＝955.7[M/2+H]⁺；t_R＝9.771min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.86(s，3H)，7.32(d，J＝4.4Hz，4H)，7.25(d，J＝8.9Hz，3H)，6.79(d，J＝8.9Hz，2H)，5.10(s，6H)，4.53(s，6H)，4.48(s，2H)，4.36(d，J＝8.4Hz，3H)，3.95–3.82(m，11H)，3.74(dd，J＝6.2，2.8Hz，11H)，3.58(dd，J＝10.7，3.2Hz，3H)，3.53–3.39(m，9H)，3.21(t，J＝7.1Hz，6H)，2.13–1.94(m，9H)，1.73(dd，J＝14.6，6.7Hz，2H)，1.64–1.58(m，2H)，1.50(dd，J＝17.2，10.6Hz，14H)，1.33(d，J＝25.6Hz，42H)。

实施例13

化合物61的制备

将2-氯乙氧基乙醇(4.8g，17.65mmol)和叠氮化钠(2.87g,44.125mmol)溶于50mL的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，反应液在70℃下搅拌16h。向反应物中加入水(50mL)，用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，用饱和食盐水(60mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到化合物55(3.7g)。

¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ4.60(t，J＝5.3Hz，1H)，3.64–3.56(m，2H)，3.48(m，4H)，3.42–3.35(m，2H)。

将化合物8(5.0g，15.2mmol)和化合物55(2.19g,16.70mmol)溶于50mL的二氯乙烷中，在0℃下，缓慢加入TMSOTf(1.69g，7.595mmol)。反应液升到室温继续搅拌16h。向反应物中加入水(100mL)，用二氯甲烷萃取(3×50mL)。用饱和NaHCO₃溶液(100mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，硅胶柱层析(PE:EA＝10:0至0：10)纯化得到化合物56(4.145g)。LCMS：m/z＝461.2[M+H]⁺；t_R＝0.752min。

将化合物56(500mg，1.0mmol)溶于甲醇(20mL)，并向其中添加10％钯碳(100mg)和醋酸(3滴)。在室温下，反应混合物在氢气氛围下搅拌18小时。通过硅藻土过滤混合物，将滤液浓缩，得到化合物57的粗品(504mg)。

LCMS：m/z＝435.3[M+H]⁺；t_R＝0.518min。

将化合物57(504mg，1.16mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，向其中加入TEA(352mg，3.48mmol)，然后在0℃下加入2-溴乙酰溴(258mg，1.28mmol)，并在室温下搅拌反应0.5小时。反应完成后，加入水(30mL)和1.0M盐酸(5mL)，用二氯甲烷(3×20mL)萃取，合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化，得到化合物58(413mg，64％)。

LCMS：m/z＝555.2[M+H]⁺；t_R＝0.682min。

将化合物58(413mg，0.76mmol)溶于DMF(10mL)，加入NaN₃(196.7mg，3.03mmol)，在65℃下搅拌反应18小时。反应完成后，向混合物中加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。用NaHCO₃(30mL)清洗合并的有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化粗品，得到化合物59(82mg,52％)。

LCMS：m/z＝518.3[M+H]⁺；t_R＝0.682min。

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物59(82mg，0.16mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物7(27.9mg，0.053mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化粗品，得到化合物60(39mg,36％)。

LCMS：m/z＝1042.6[M/2+H]⁺；t_R＝1.219min。

在室温下，将化合物60(39mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物61(10.7mg,34％)。

LCMS：m/z＝853.4[M/2+H]⁺；t_R＝8.283min。

¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.38(t，J＝5.3Hz，3H)，7.96(s，3H)，7.62(d，J＝9.1Hz，3H)，7.34–7.21(m，7H)，6.78(d，J＝8.6Hz，2H)，5.09(s，5H)，4.57(t，J＝5.8Hz，5H)，4.46(t，J＝8.2Hz，9H)，4.29(d，J＝8.4Hz，2H)，3.89(t，J＝6.4Hz，2H)，3.82–3.69(m，10H)，3.53–3.50(m，9H)，3.43(dd，J＝11.2，6.1Hz，13H)，3.26(d，J＝3.2Hz，2H)，1.81(s，9H)，1.66(d，J＝7.6Hz，2H)，1.52(d，J＝7.0Hz，2H)，1.30(s，8H)。

实施例14

化合物66的制备

将化合物27(500mg，0.99mmol)溶于甲醇(5mL)，并向其中加入10％钯碳(21mg)和醋酸(3滴)。在室温下，反应混合物在氢气氛围下搅拌18小时。通过硅藻土过滤混合物，将滤液浓缩，得到化合物62粗品(570mg)。

LCMS：m/z＝479.2[M+H]⁺；t_R＝0.902min。

将化合物62(570mg，1.19mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，向其中加入TEA(361mg，3.57mmol)，然后在0℃下加入2-溴乙酰溴(264mg，1.31mmol)，并在室温下搅拌反应0.5小时。反应完成后，加入水(30mL)和1.0M盐酸(5mL)，用二氯甲烷(3×10mL)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化粗品，得到化合物63(230mg，32％)。

LCMS：m/z＝599.2[M+H]⁺；t_R＝1.129min。

将化合物63(230mg，0.40mmol)溶于DMF(10mL)，加入NaN₃(54mg，0.83mmol)，在65℃下搅拌反应18小时。反应完成后，向混合物中加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。用NaHCO₃(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化粗品，得到化合物64(100mg,47％)。

LCMS：m/z＝562.3[M+H]⁺；t_R＝1.122min。

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物64(100mg，0.18mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物7(19mg，0.035mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化粗品，得到化合物65(55mg,47％)。

LCMS：m/z＝1108.2[M/2+H]⁺；t_R＝1.636min。

在室温下，将化合物65(55mg，0.025mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。反相制备HPLC纯化，得到化合物66(1.82mg,4％)。

LCMS：m/z＝919.6[M/2+H]⁺,t_R＝8.279min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.91(s，3H)，7.30(dd，J＝19.7，6.0Hz，7H)，6.80(d，J＝8.5Hz，2H)，5.18(s，6H)，4.51(d，J＝22.0Hz，8H)，4.43(d，J＝8.4Hz，3H)，3.96(dd，J＝16.7，7.1Hz，8H)，3.83(s，3H)，3.80–3.69(m，15H)，3.66–3.55(m，27H)，3.51–3.38(m，12H)，1.98(s，9H)，1.78–1.70(m，2H)，1.60(d，J＝6.7Hz，2H)，1.36(s，8H)。

实施例15

化合物71的制备

向化合物32(1g，1.82mmol)的甲醇(15mL)溶液中添加10％钯碳(100mg)和醋酸(3滴)。在室温下，反应混合物在氢气氛围下搅拌18小时。通过硅藻土过滤混合物，将滤液浓缩，得到化合物67粗品(870mg)。

LCMS：m/z＝523[M+H]⁺。

将化合物67(870mg，1.66mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，加入TEA(504mg，4.99mmol)，在0℃下加入2-溴乙酰溴(369mg，1.83mmol)，在室温下搅拌反应0.5小时。反应完成后，加入水(30mL)和1.0M盐酸(5mL)，用二氯甲烷(3×10mL)萃取混合物。合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化粗品，得到化合物68(452mg,42％)。LCMS：m/z＝643.2[M+H]⁺；t_R＝7.614min。

将化合物68(452mg，0.70mmol)溶于DMF(10mL)，加入NaN₃(183mg，2.81mmol)，并在65℃下搅拌反应18小时。反应完成后，向混合物中加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化粗品，得到化合物69(200mg，47％)。

LCMS：m/z＝606.4[M+H]⁺；t_R＝7.589min。

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物69(200mg，0.33mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下添加化合物7(58mg，0.11mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化粗品，得到化合物70(108mg,17％)。

LCMS：m/z＝1174.5[M/2+H]⁺；t_R＝1.690min。

在室温下，将化合物70(55mg，0.055mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到粗产物。反相制备HPLC纯化，得到化合物71(9.82mg,20％)。

LCMS：m/z＝985.6[M/2+H]⁺；t_R＝8.301min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.91(s，3H)，7.30(dd，J＝20.8，6.4Hz，7H)，6.80(d，J＝8.5Hz，2H)，5.17(s，6H)，4.51(d，J＝22.3Hz，11H)，4.44(d，J＝8.4Hz，3H)，3.94(dd，J＝12.7，6.6Hz，8H)，3.83(d，J＝2.6Hz，3H)，3.74(dd，J＝12.8，6.7Hz，14H)，3.63(s，26H)，3.60–3.55(m，11H)，3.45(dt，J＝10.3，5.7Hz，12H)，1.98(s，9H)，1.78–1.69(m，2H)，1.60(d，J＝6.7Hz，2H)，1.41(d，J＝39.4Hz，8H)。

实施例16

化合物77的制备

在室温下，将化合物14(1.2g，2.4mmol)溶于氨的甲醇溶液(10mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到粗产物。硅胶柱层析(MeOH:DCM＝0至50％)纯化，得到呈白色固体的化合物72(800mg,89％)。

LCMS：m/z＝375.6[M+H]⁺；t_R＝7.963min。

向化合物72(800mg,2.14mmol)的DMF(15mL)溶液中，在0℃下加入TEA(432mg,4.28mmol)和TosCl(447mg,2.35mmol)。常温下搅拌反应18小时。反应完成后，反应液减压浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至30％)纯化粗品，得到呈白色固体的化合物73(450mg,40％)。

LCMS：m/z＝529.5[M+H]⁺；t_R＝10.774min。

向化合物73(450mg,0.852mmol)的吡啶(5mL)溶液中，在0℃下加入乙酸酐(261mg,2.56mmol)和DMAP(20mg)。常温下搅拌反应4小时。反应完成后，加入水(100mL)，用二氯甲烷(3×50mL)萃取混合物。依次用饱和氯化铵水溶液(50mL)和氯化钠水溶液(50mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到呈棕色固体的化合物74粗品(500mg)。

LCMS：m/z＝613.1[M+H]⁺；t_R＝1.872min。

将抗坏血酸钠(100mg)和CuSO₄(100mg)溶于水(5mL)中，加入到化合物74(500mg，0.816mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(5mL)溶液中，然后在0℃下添加化合物7(144mg，0.272mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(50mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至10％)纯化粗品，得到呈棕色油状的化合物75(500mg,77％)。

LCMS：m/z＝1185.5[M/2+H]⁺；t_R＝13.528min。

将化合物75(500mg，0.211mmol)溶于DMF(10mL)，加入NaN₃(50mg，0.769mmol)，并在100℃下搅拌反应18小时。反应完成后，向混合物中加入水(100mL)，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。用NaHCO₃水溶液(50mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至10％)纯化粗品，得到呈棕色油状的化合物76(450mg，93％)。

LCMS：m/z＝991.7[M/2+H]⁺；t_R＝12.973min。

在室温下，将化合物76(40mg，0.020mmol)溶于氨的甲醇溶液(5mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到粗产物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物77(7.16mg，20％)。

LCMS：m/z＝865[M/2+H]⁺；t_R＝11.436min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.78(s，3H)，7.37–7.14(m，7H)，6.77(m，2H)，4.50(m，8H)，4.41–4.27(m，9H)，4.00–3.79(m，8H)，3.73(s，8H)，3.68–3.54(m，9H)，3.52–3.36(m，6H)，3.24–3.13(m，3H)，1.96(s，9H)，1.92–1.80(m，6H)，1.79–1.66(m，2H)，1.62–1.06(m，40H)。

实施例17

化合物79的制备

将抗坏血酸钠(20mg)和CuSO₄(20mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物76(50mg，0.0253mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入3-乙炔基苯甲醚(13.1mg，0.101mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到化合物78粗品(83mg)。

在室温下，将化合物78(83mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7N)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物，经反相制备HPLC纯化，得到化合物79(7.2mg)。

LCMS：m/z＝1063.7[M/2+1]⁺；t_R＝11.632min。

¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.54(s，3H)，7.93(s，3H)，7.62(m，3H)，7.29(m，16H)，6.89(m，3H)，6.74(m，2H)，4.99(m，3H)，4.74(m，3H)，4.67–4.51(m，6H)，4.44(m，8H)，4.30–4.07(m，8H)，3.95–3.57(m，25H)，3.53–3.36(m，8H)，3.19(m，3H)，1.88–1.58(m，16H)，1.51(s，2H)，1.27(s，14H)，1.08(m，22H)。

实施例18

化合物81的制备

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物76(40mg，0.0202mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入1-乙炔基-2-氟苯(9.7mg，0.081mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到残留物。硅胶柱层析(MeOH：DCM＝0至12％)纯化，得到化合物80(118mg)。

LCMS：m/z＝1171.8[M/2+H]⁺；t_R＝13.183min。

在室温下，将化合物80(118mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。反相制备HPLC纯化，得到化合物81(6.3mg,15％)。

LCMS：m/z＝1045.7[M/2+H]⁺；t_R＝11.836min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ8.25(d，J＝3.6Hz，3H)，8.08(t，J＝6.9Hz，3H)，7.77(s，2H)，7.31(dd，J＝6.4，4.3Hz，8H)，7.22(t，J＝7.7Hz，5H)，7.18–7.12(m，3H)，6.80(dd，J＝52.2，8.9Hz，3H)，4.74(d，J＝6.4Hz，6H)，4.52–4.45(m，8H)，4.29(dd，J＝16.1，7.8Hz，9H)，3.91(ddd，J＝20.5，12.4，5.6Hz，14H)，3.73(s，5H)，3.66(dd，J＝10.7，3.2Hz，3H)，3.59–3.52(m，3H)，3.48–3.43(m，3H)，1.78(s，6H)，1.76–1.46(m，9H)，1.41–1.29(m，18H)，1.14(d，J＝10.4Hz，24H)。

实施例19

化合物83的制备

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物76(50mg，0.0253mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入1-乙炔基萘(15.4mg，0.101mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液。常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物82粗品(62mg)。

LCMS：m/z＝1219.9[M/2+H]⁺；t_R＝13.609min。

在室温下，将化合物82(62mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物83(2.5mg,4.8％)。

LCMS：m/z＝1093.9[M/2+H]⁺；t_R＝12.553min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ8.28–8.20(m，6H)，7.86(d，J＝8.6Hz，6H)，7.70(s，3H)，7.64(d，J＝7.3Hz，3H)，7.46(dd，J＝11.4，5.7Hz，9H)，7.30(d，J＝4.4Hz，4H)，7.21(d，J＝8.8Hz，2H)，6.72(d，J＝8.8Hz，2H)，4.80(d，J＝6.0Hz，5H)，4.47(d，J＝15.3Hz，8H)，4.29(d，J＝8.5Hz，3H)，4.18(t，J＝7.1Hz，6H)，4.06–3.92(m，10H)，3.81(d，J＝6.5Hz，2H)，3.73(s，6H)，3.69(dd，J＝10.6，3.2Hz，3H)，3.47(dt，J＝12.8，8.1Hz，8H)，1.94(s，9H)，1.64(s，8H)，1.29(s，28H)，0.98(s，12H)。

实施例20

化合物85的制备

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物76(50mg，0.0253mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入3-硝基苯乙炔(14.9mg，0.101mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物84粗品(64mg)。

LCMS：m/z＝1212.3[M/2+H]⁺；t_R＝13.003min。

在室温下，化合物84(64mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物85(5.27mg,11.3％)。

LCMS：m/z＝1086.1[M/2+H]⁺；t_R＝11.883min。

¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.81(s，3H)，8.63(s，3H)，8.27(d，J＝7.9Hz，3H)，8.15(d，J＝5.9Hz，3H)，7.92(s，3H)，7.71(t，J＝7.9Hz，3H)，7.63(d，J＝8.9Hz，3H)，7.29(dt，J＝18.2，9.0Hz，5H)，7.18(d，J＝9.0Hz，2H)，6.73(d，J＝8.5Hz，2H)，5.01(d，J＝4.1Hz，3H)，4.75(d，J＝6.2Hz，3H)，4.67–4.55(m，6H)，4.44(t，J＝9.0Hz，9H)，4.23(dd，J＝18.0，7.6Hz，9H)，3.91–3.79(m，5H)，3.67(d，J＝25.2Hz，11H)，3.52(s，3H)，3.39(t，J＝6.3Hz，6H)，1.77(s，9H)，1.68(s，8H)，1.50(s，2H)，1.26(s，14H)，1.04(d，J＝17.3Hz，24H)。

实施例21

化合物87的制备

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物76(50mg，0.0253mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入1-乙炔基-3-氟苯(12.13mg，0.101mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到化合物86粗品(93mg)。

LCMS：m/z＝1171.8[M/2+H]⁺；t_R＝13.125min。

在室温下，将化合物86(93mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7N)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物，经反相制备HPLC纯化，得到化合物87(5.45mg,10.5％)。

LCMS：m/z＝1045.6[M/2+H]⁺；t_R＝11.993min。

¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.62(s，3H)，7.93(s，3H)，7.67(d，J＝7.8Hz，3H)，7.62(d，J＝9.0Hz，5H)，7.45(dd，J＝14.2，8.0Hz，3H)，7.34–7.29(m，3H)，7.18(d，J＝8.8Hz，2H)，7.12(t，J＝7.3Hz，3H)，6.74(d，J＝8.9Hz，2H)，4.99(d，J＝4.1Hz，3H)，4.74(d，J＝6.2Hz，3H)，4.60(dd，J＝14.2，9.4Hz，6H)，4.43(d，J＝7.1Hz，8H)，4.26(t，J＝7.1Hz，6H)，4.19(d，J＝8.4Hz，3H)，3.85(d，J＝6.6Hz，5H)，3.76–3.61(m，12H)，3.51(s，4H)，3.40(dd，J＝12.5，6.1Hz，8H)，3.23–3.16(m，3H)，1.77(s，9H)，1.67(d，J＝26.5Hz，8H)，1.51(s，2H)，1.27(s，13H)，1.07(d，J＝21.3Hz，26H)。

实施例22

化合物89的制备

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物76(50mg,0.025mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入3-甲基苯乙炔(12mg,0.10mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物88粗品(66mg)。

LCMS：m/z＝1165.7[M/2+H]⁺；t_R＝1.511min。

在室温下，将化合物88(66mg,0.028mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物89(10.07mg,19％)。

LCMS：m/z＝1039.6[M/2+H]⁺；t_R＝12.297min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ8.27(s，3H)，7.76(s，3H)，7.64–7.54(m，6H)，7.32–7.20(m，10H)，7.11(d，J＝7.9Hz，3H)，6.74(d，J＝8.8Hz，2H)，4.78–4.66(m，6H)，4.48(d，J＝14.9Hz，8H)，4.33–4.23(m，9H)，3.92(ddd，J＝18.0，11.6，5.3Hz，11H)，3.73(s，6H)，3.66(dd，J＝10.7，3.2Hz，3H)，3.56–3.42(m，6H)，3.25(d，J＝6.7Hz，2H)，2.33(s，9H)，1.95(s，9H)，1.77(s，6H)，1.72–1.64(m，2H)，1.56(d，J＝7.6Hz，2H)，1.41–1.29(m，14H)，1.12(d，J＝13.7Hz，24H)。

实施例23

化合物91的制备

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，再加入到化合物76(50mg,0.025mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入3,5-二甲氧基苯乙炔(16.4mg,0.10mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物90粗品(86mg)。

LCMS：m/z＝1235.6[M/2+H]⁺；t_R＝1.457min。

在室温下，化合物90(86mg,0.035mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，继续搅拌18小时。将反应混合物浓缩得残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物91(6.13mg,8％)。

LCMS：m/z＝1108.7[M/2+H]⁺；t_R＝11.621min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ8.29(d，J＝2.4Hz，3H)，7.77(d，J＝8.4Hz，3H)，7.33–7.29(m，4H)，7.28–7.19(m，3H)，6.97(t，J＝2.6Hz，6H)，6.75(dd，J＝16.0，8.9Hz，2H)，6.42(t，J＝2.2Hz，3H)，4.73–4.69(m，5H)，4.49(dd，J＝23.7，9.6Hz，8H)，4.27(dd，J＝16.2，7.8Hz，8H)，3.96(t，J＝9.6Hz，6H)，3.90–3.79(m，7H)，3.76(d，J＝6.2Hz，18H)，3.66(dd，J＝10.7，3.3Hz，3H)，3.48(dq，J＝9.9，6.6Hz，6H)，3.26(d，J＝3.1Hz，2H)，1.95(s，9H)，1.77(s，6H)，1.72–1.64(m，2H)，1.56(d，J＝7.8Hz，2H)，1.37–1.27(m，14H)，1.12(d，J＝16.7Hz，24H)。

实施例24

化合物93的制备

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，再加入到化合物76(50mg,0.025mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入4-乙炔基苯甲醚(13.3mg,0.10mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物，用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得化合物92粗品(100mg)。

LCMS：m/z＝1189.6[M/2+H]⁺；t_R＝1.437min。

在室温下，化合物92(100mg,0.042mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，继续搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物93(1.38mg,3％)。

LCMS：m/z＝1063.8[M/2+H]⁺；t_R＝11.387min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ8.18(s，3H)，7.78(s，3H)，7.70(d，J＝8.8Hz，6H)，7.31(d，J＝4.3Hz，4H)，7.23(s，3H)，6.93(d，J＝8.9Hz，6H)，6.75(s，2H)，4.69(s，5H)，4.49(d，J＝15.3Hz，7H)，4.32–4.23(m，8H)，3.96(s，6H)，3.87(s，5H)，3.76(s，9H)，3.73(s，4H)，3.66(d，J＝10.8Hz，3H)，3.47(d，J＝7.5Hz，8H)，3.26–3.22(m，3H)，3.13(s，2H)，1.95(s，9H)，1.77(s，5H)，1.59(s，5H)，1.33(s，7H)，1.29(s，7H)，1.14(s，24H)。

实施例25

化合物95的制备

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物76(40mg，0.0202mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入5-乙炔基苯并[d][1,3]二噁唑(11.8mg，0.0808mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物94粗品(89mg)。

LCMS：m/z＝1211.0[M/2+H]⁺；t_R＝12.571min。

在室温下，将化合物95(89mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得化合物95(0.95mg,2.2％)。

LCMS：m/z＝1084.8[M/2+H]⁺；t_R＝11.253min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ8.20(s，3H)，7.77(s，3H)，7.29(d，J＝9.9Hz，15H)，6.85–6.81(m，3H)，5.91(s，6H)，4.69(s，3H)，4.51(s，7H)，4.35–4.26(m，6H)，3.97–3.93(m，6H)，3.89–3.81(m，7H)，3.73(s，10H)，3.58–3.50(m，12H)，1.95(s，9H)，1.33–1.32(m，10H)，1.29(s，14H)，1.15(s，16H)，0.90(s，8H)。

实施例26

化合物97的制备

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物76(50mg，0.0253mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入1-乙炔基-3,5-二氟苯(13.9mg，0.101mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物96粗品(79mg)。

LCMS：m/z＝1198.9[M/2+H]⁺；t_R＝13.469min。

在室温下，化合物96(79mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物97(7.89mg,16.1％)。

LCMS：m/z＝1072.7[M/2+H]⁺；t_R＝12.536min。

¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.70(s，3H)，7.93(s，3H)，7.63(d，J＝9.0Hz，3H)，7.54(d，J＝6.4Hz，6H)，7.34–7.26(m，5H)，7.18(d，J＝8.8Hz，5H)，6.73(d，J＝8.8Hz，2H)，4.60(dd，J＝12.9，6.4Hz，6H)，4.43(d，J＝6.9Hz，9H)，4.26(t，J＝7.2Hz，6H)，4.19(d，J＝8.5Hz，3H)，3.85(d，J＝6.4Hz，5H)，3.70(s，6H)，3.64(s，5H)，3.52(d，J＝11.2Hz，3H)，3.40(d，J＝6.6Hz，12H)，3.18(d，J＝9.8Hz，3H)，1.77(s，9H)，1.71(s，10H)，1.51(s，2H)，1.26(s，12H)，1.07(d，J＝25.6Hz，24H)。

实施例27

化合物99的制备

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物76(50mg，0.0253mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入4-氟苯乙炔(12.1mg，0.101mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物98粗品(83mg)。

LCMS：m/z＝1171.8[M/2+H]⁺；t_R＝13.084min。

在室温下，化合物98(83mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物99(8.76mg,20.1％)。

LCMS：m/z＝1045.7[M/2+H]⁺；t_R＝11.939min。

¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ8.53(s，3H)，7.93(s，3H)，7.86(dd，J＝8.7，5.5Hz，6H)，7.63(d，J＝8.6Hz，3H)，7.25(t，J＝8.8Hz，10H)，6.74(d，J＝8.9Hz，2H)，4.57(d，J＝7.7Hz，6H)，4.43(d，J＝6.1Hz，9H)，4.25(d，J＝6.8Hz，8H)，4.19(d，J＝8.3Hz，3H)，3.86(s，6H)，3.69(dd，J＝23.7，14.2Hz，16H)，3.50(d，J＝10.7Hz，6H)，3.20(s，6H)，1.77(s，9H)，1.71(s，8H)，1.66–1.61(m，2H)，1.51(s，2H)，1.27(s，12H)，1.07(d，J＝21.9Hz，24H)。

实施例28

化合物101的制备

将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物76(50mg，0.0253mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入3-羟基苯基乙炔(10.7mg，0.101mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物100粗品(87mg)。

LCMS：m/z＝1168.8[M/2+H]⁺；t_R＝11.678min。

在室温下，化合物100(87mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物101(2.35mg,4.5％)。

LCMS：m/z＝1045.7[M/2+H]⁺；t_R＝11.939min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ8.23(s，3H)，7.76(s，3H)，7.31(d，J＝4.3Hz，3H)，7.28–7.17(m，13H)，6.74(d，J＝8.2Hz，5H)，4.72(d，J＝8.1Hz，5H)，4.50(s，5H)，4.47(s，2H)，4.28(dd，J＝16.7，7.9Hz，10H)，3.96(t，J＝9.7Hz，6H)，3.90–3.85(m，6H)，3.73(s，6H)，3.66(d，J＝10.7Hz，3H)，3.54–3.44(m，6H)，3.26(s，3H)，1.95(s，9H)，1.77(s，6H)，1.69(s，2H)，1.58(s，2H)，1.33(d，J＝5.0Hz，14H)，1.12(d，J＝17.8Hz，24H)。

实施例29

化合物103的制备

在0℃下，将抗坏血酸钠(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，再加入到化合物76(45mg，0.023mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后加入4-乙炔基苯甲腈(11.6mg,0.091mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物，用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物102粗品(60mg)。

LCMS：m/z＝1182.3[M/2+H]⁺；t_R＝1.546min。

在室温下，化合物103(60mg,0.025mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，继续搅拌18小时。将混合物浓缩得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物103(2.23mg,4％)。

LCMS：m/z＝1056.2[M/2+H]⁺；t_R＝11.317min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ8.49(s，3H)，7.99(d，J＝8.3Hz，6H)，7.77(d，J＝8.7Hz，9H)，7.31(s，4H)，7.23(s，3H)，6.79–6.71(m，2H)，4.74(s，5H)，4.51(t，J＝16.3Hz，9H)，4.35–4.24(m，9H)，3.96(s，5H)，3.88(s，5H)，3.78(s，3H)，3.74(s，4H)，3.65(s，3H)，3.48(s，6H)，3.12(s，2H)，1.95(s，9H)，1.79(s，6H)，1.72–1.65(m，2H)，1.61–1.57(m，2H)，1.33(s，14H)，1.11(d，J＝23.1Hz，24H)。

实施例30

化合物107的制备

将化合物5(2.2g,5.29mmol)和2-溴乙酸乙酯(7.067g,42.32mmol)溶于NMP(30mL)，加入碳酸铯(13.754g,42.32mmol)。反应液在氮气氛围下，加热至120℃搅拌过夜。反应完成后，加入水(100mL)，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取混合物，合并有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，硅胶柱层析(EA：PE＝0至100％)纯化粗品，得到呈棕色油状的化合物104(1.7g)。

LCMS：m/z＝611.4[M+Na]⁺；t_R＝1.351min。

向化合物104(2.2g，3.74mmol)的二氯甲烷(15mL)溶液中，加入二聚醋酸铑(82.7mg，0.187mmol)，氮气保护下，反应液升温至40℃，缓慢滴加重氮乙酸乙酯(8.53g，74.8mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液，反应混合物继续搅拌12小时。加醋酸(1mL)淬灭反应，反应液减压浓缩，硅胶柱层析(EA：PE＝0至80％)纯化粗品，得到呈浅棕色油状的化合物105(1.5g)。

LCMS：m/z＝697.4[M+Na]⁺；t_R＝1.420min。

向化合物105(800mg，1.18mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液中，加入氢氧化钠水溶液(5mL，1M)。反应液室温下搅拌4小时后，减压移除部分四氢呋喃，加2M盐酸调节pH至5，用乙酸乙酯(3×50mL)萃取混合物，饱和食盐水(50mL)洗涤有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到呈无色油状的化合物106(650mg，92.8％)。

LCMS：m/z＝589.3[M-H]-；t_R＝1.278min。

在0℃下，向化合物106(800mg，1.356mmol)的DMF(10mL)溶液中,依次加入DIPEA(874.mg，6.780mmol),三氟乙酸五氟苯酯(1.518g，5.4mmol)。反应液在室温下搅拌过夜。反应液减压浓缩，硅胶柱层析(EA：PE＝0至50％)纯化粗品，得到呈浅棕色油状的化合物107(1g)。

LCMS：m/z＝1111.3[M+Na]⁺；t_R＝10.614min。

实施例31

化合物109的制备

将化合物35(51mg，0.11mmol)和DIEA(19mg，0.15mmol)加入到化合物107(40mg，0.038mmol)的DMF(5mL)溶液中，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物，有机层用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物108粗品(60mg)。

LCMS：m/z＝960.1[M/2+H]⁺；t_R＝11.778min。

在室温下，将化合物108(60mg，0.032mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物109(1.0mg，2％)。

LCMS：m/z＝770.9[M/2+H]⁺；t_R＝8.832min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.35(dd，J＝21.9，6.7Hz，7H)，6.93(d，J＝8.9Hz，2H)，4.49(s，2H)，4.36(d，J＝8.4Hz，3H)，3.96–3.84(m，21H)，3.77–3.72(m，6H)，3.59(dd，J＝10.7，3.2Hz，3H)，3.48(dd，J＝8.4，4.8Hz，9H)，3.14(t，J＝7.0Hz，6H)，1.96(s，9H)，1.79–1.74(m，2H)，1.60–1.51(m，10H)，1.38(dd，J＝27.7，12.5Hz，32H)。

实施例32

化合物111的制备

将化合物50(57mg，0.11mmol)和DIEA(18mg，0.137mmol)加入到化合物107(30mg，0.0276mmol)的DMF(2mL)溶液中，常温下搅拌过夜。反应完成后，加入水(20mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物，有机层用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物110粗品(150mg)。

LCMS：m/z＝981[M/2+Na]⁺；t_R＝1.418min。

在室温下，将化合物110(150mg)溶于氨的甲醇溶液(5mL，7M)中，搅拌过夜。混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物111(8.7mg)。

LCMS：m/z＝834.1[M/2+H]⁺；t_R＝9.946min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.35(m，7H)，6.93(m，2H)，4.49(s，2H)，4.36(m，3H)，3.89(m，23H)，3.78–3.67(m，6H)，3.59(m，3H)，3.52–3.39(m,8H)，3.14(t，J＝7.0Hz，6H)，1.97(s，9H)，1.86–1.68(m，2H)，1.68–1.10(m，58H)。

实施例33

化合物113的制备

将化合物62(138mg,0.30mmol)和DIEA(38mg,0.30mmol)加入到化合物107(80mg,0.074mmol)的DMF(5mL)溶液中，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，硅胶柱层析纯化粗产物，得到化合物112(64mg)。

LCMS：m/z＝987.3[M/2+H]⁺；t_R＝0.088min。

在室温下，将化合物112(64mg,0.033mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7N)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物，经反相制备HPLC纯化，得到化合物113(5.58mg,11％)。

LCMS：m/z＝797.8[M/2+H]⁺；t_R＝8.173min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.39(d，J＝8.8Hz，2H)，7.35–7.24(m，5H)，6.93(d，J＝8.8Hz，2H)，4.49(s，2H)，4.42(d，J＝8.4Hz，2H)，4.04(d，J＝5.7Hz，4H)，3.96(t，J＝5.2Hz，12H)，3.84(d，J＝2.7Hz，3H)，3.76(t，J＝6.0Hz，5H)，3.67(dd，J＝11.2，4.5Hz，3H)，3.60(dd，J＝11.1，2.9Hz，20H)，3.51(dt，J＝13.0，5.9Hz，12H)，3.40(t，J＝5.2Hz，6H)，3.31(dt，J＝3.1，1.5Hz，12H)，1.98(s，9H),1.75(dd，J＝14.3，6.5Hz，2H)，1.60(dd，J＝13.6，6.7Hz，2H)，1.42(d，J＝43.2Hz，8H)。

实施例34

化合物117的制备

在冰浴下，将乙醛(16.8mL)缓慢滴加到环己胺(34.4g，0.347mol)的干燥甲苯溶液中(15mL)。搅拌15分钟后，将K₂CO₃(2.5g)加入到上述反应液中，继续搅拌10分钟，然后使其升温至室温。将有机层置于高压釜中，并加入丙烯腈(68.5mL)，在170℃下搅拌反应4小时。将黑色反应混合物冷却至0℃，用乙醚洗涤结晶产物，得到呈黄色固体的化合物114(40g)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ7.45(s，1H)，3.01(m，1H)，2.37(t，J＝7.6Hz，6H)，1.92(t，J＝7.6Hz，6H)，2.00-1.00(m，16H)。

将化合物114(20.0g，70.42mmol)溶解在浓盐酸(10mL)和水(260mL)的溶液中，搅拌回流30分钟。趁热过滤，滤液冷却至0℃，收集黄色沉淀物，用水冲洗，干燥，得到呈黄色固体的化合物115(11.5g)。

¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.44(s，1H)，2.42(t，J＝8.0Hz，6H)，1.86(t，J＝8.0Hz，6H)。

在0℃下，将化合物115(5.0g，24.63mmol)和CoCl₂.6H₂O(11.7g,49.2mmol)溶于甲醇(180mL)中，再缓慢添加NaBH₄(19.54g，516.5mmol)。反应液升到室温继续搅拌2h。向反应液中加入Boc₂O(26.81g，123mmol)和三乙胺(14.94g，147.6mmol)。反应混合物在室温下搅拌18小时。反应用适量冰水淬灭，将混合物浓缩，硅胶柱层析(PE:EA＝10:0至1:3)纯化得到化合物116(2.6g，20.5％)。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ4.71(brs，3H)，3.34(s，2H)，3.11-3.02(m，6H)，1.44(s，27H)，1.44-1.38(m，6H)，1.24-1.18(m，6H)。

在冰浴下，将化合物116(800mg，1.547mmol)和NaIO₄(1.52g，6.0mmol)溶于CH₃CN(21mL)、CCl₄(8mL)和水(15mL)中，然后将RuCl₃.3H₂O(285mg)慢慢加入到上述溶液中。在0℃下继续搅拌半小时。反应完成后，用1.0M盐酸将pH调节至2-3。用乙酸乙酯(60mL)萃取三次，合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸得粗产物117(380mg，45.7％)。

LCMS：m/z＝530.4[M-H]^-；t_R＝1.66min。

实施例35

化合物125的制备

向10-羟基癸酸(10g，53.19mmol)、NaHCO₃(13.40g，159.57mmol)、BnBr(10.1g，58.51mmol)和DMF(40mL)的混合物中加入TBAI(2g)。将反应混合物在50℃下搅拌18小时。用水(50mL)稀释反应混合物，并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到残留物。经硅胶柱层析(乙酸乙酯在石油醚中＝40％)纯化，得到化合物118(8.8g)。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.35-7.31(m，5H)，5.11(s，2H)，3.61(t，J＝6.8Hz，2H),2.35(t，J＝6.8Hz，2H)，1.65–1.53(m，4H)，1.29–1.23(m，10H)。

向化合物118(1.86g，6.68mmol)和化合物8(2.20g，6.68mmol)的二氯乙烷(20mL)溶液中加入TMSOTf(742.41mg，3.34mmol)。混合液在25℃下反应16小时。用TEA(2mL)和水(20mL)稀释反应混合物，并用二氯甲烷(3×20mL)萃取。用饱和NaHCO₃溶液(3×20mL)洗涤合并的有机层，并用无水硫酸钠干燥，过滤和浓缩，通过硅胶柱层析(乙酸乙酯在石油醚中＝40％)纯化，得到化合物119(1.10g)。

LCMS：m/z＝608.6[M+H]⁺；t_R＝1.751min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.57–7.16(m，5H)，5.33(d，J＝2.0Hz，1H)，5.17–5.02(m，3H)，4.55(d，J＝8.0Hz，1H)，4.12–3.97(m，4H)，3.84(m，1H)，3.57–3.41(m，1H)，2.35(t，J＝8.0Hz，2H)，2.13(s，3H)，2.01(s，3H)，1.94(s，3H)，1.91(s，3H)，1.69–1.49(m，4H)，1.37–1.25(m，10H)。

向化合物119(0.50g，0.82mmol)的甲醇(5mL)溶液中加入10％钯/碳(0.05g)，在H₂氛围下反应18小时。过滤反应混合物并浓缩，得到化合物120(0.35g)。

LCMS：m/z＝518.5[M+H]⁺；t_R＝0.989min。

在0℃下，向化合物120(0.35g，0.67mmol)的DMF(4mL)溶液中依次加入DIEA(87.40mg，0.67mmol)和三氟乙酸五氟苯酯(189.40mg，0.67mmol)。反应在室温下持续5小时。在减压下浓缩反应混合物以得到残留物，通过硅胶柱层析(乙酸乙酯在石油醚中＝90％)纯化，得到化合物121(0.29g)。

LCMS：m/z＝684.3[M+H]⁺；t_R＝1.984min。

将化合物117(160mg，0.301mmol)，HATU(137mg，0.362mmol)和DIEA(77mg，0.602mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，加入8-(苄氧基)辛烷-1-胺(85mg，0.362mmol)。在室温下继续搅拌18小时。将混合物浓缩，硅胶柱层析(PE:EA＝10:0至1:3)纯化得到化合物122(38mg,16.8％)。

LCMS：m/z＝771.6[M+Na]⁺；t_R＝2.474min。

将化合物122(38mg，0.051mmol)溶于15％TFA/DCM(6mL)中。反应液在室温下搅拌18小时。将反应物浓缩得化合物123粗品(37mg)，直接用于下一步反应。

LCMS：m/z＝449.1[M+H]⁺；t_R＝1.50min。

化合物123(37mg，0.051mmol)、化合物121(139mg，0.204mmol)和DIEA(0.1mL)溶于DMF(3mL)中。反应溶液在室温下搅拌18小时。反应物中加入水(10mL)和1.0M盐酸(1mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得化合物124粗品(130mg)，直接用于下一步反应。

LCMS：m/z＝974.3[M/2+H]⁺；t_R＝2.14min。

将化合物124(130mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中。反应溶液在室温下搅拌过夜。将反应液浓缩得粗产品。经制备液相HPLC纯化得到化合物125(11.3mg,14.1％)。

LCMS：m/z＝1592.5[M+Na]⁺；t_R＝8.406min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.35-7.25(m，5H)，4.48(s，2H)，4.36(d，J＝8.4Hz，3H)，3.92-3.82(m，10H)，3.76-3.73(m，6H)，3.61-3.57(m，3H)，3.50-3.42(m，9H)，3.18-3.10(m，6H)，2.16(t，J＝7.6Hz，6H)，1.97(s，9H)，1.60-1.48(m，24H)，1.40-1.25(m，42H)。

实施例36

化合物130的制备

将11-氨基十一酸(2g，9.93mmol)、苯甲醇(5.36g，49.65mmol)和对甲苯磺酸(2.07g，10.92mmol)的甲苯(20mL)溶液在氮气氛围中回流5小时。反应混合物冷却后，加入50mL甲基叔丁基醚，过滤得固体，并用乙酸乙酯：正己烷(1:1)溶液洗涤，干燥，得到呈白色粉末的化合物126(4.5g)。

¹HNMR(400MHz，DMSO-D₆)δ7.64(br s，3H)，7.49(d，J＝7.9Hz，2H)，7.35(m，5H)，7.12(d，J＝7.7Hz，2H)，5.09(s，2H)，2.76(t，J＝7.6Hz，2H)，2.35(t，J＝7.6Hz，2H)，1.51(m，4H)，1.24(m，12H)。

向化合物117(140mg，0.263mmol)，HATU(137mg，0.362mmol)的DMF(5mL)溶液中加入化合物126(167.6mg，0.362mmol)和DIEA(77mg，0.602mmol)。反应混合物在50℃下搅拌18小时。向混合物中添加水(10mL)和1.0M盐酸(1mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到化合物127粗品(80mg)，直接用于下一步。

LCMS：m/z＝749.6[M-tBu+H]⁺；t_R＝2.12min。

化合物127(80mg，0.099mmol)溶于15％TFA/DCM(6mL)的溶液中，在室温下搅拌18h。将混合物浓缩，得到化合物128粗品(80mg)，直接用于下一步。

室温下将化合物128(37mg，0.051mmol)和化合物121(139mg，0.204mmol)、DIEA(0.1mL)溶于DMF(3mL)中。反应液搅拌18小时。向混合物中添加水(10mL)和1.0M盐酸(1mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到化合物129粗品(130mg)，直接用于下一步。

LCMS：m/z＝1002.6[M/2+H]⁺；t_R＝11.77min。

在室温下，将化合物129(31mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL)中，反应液搅拌过夜。浓缩混合物得到残留物，经反相制备HPLC纯化得到化合物130(5.2mg)。

LCMS：m/z＝1549.4[M+H]⁺；t_R＝8.086min。

实施例37

化合物137的制备

将6-己内酯(13.8g，121.05mmol)和四丁基氢氧化铵(98g，20％水溶液)的混合物在65℃下搅拌3小时。浓缩反应物以除去多余的水，得到白色固体。将白色固体溶在DMF(50mL)中。向溶液中加入BnBr(24.84g，145.26mmol)。此混合物在室温下搅拌18小时。用60mL水稀释反应混合物，再用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。用盐水(3×100mL)洗涤合并的有机层，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩以得到残留物。残留物用硅胶柱层析(乙酸乙酯在石油醚中＝10％至80％)纯化，得到化合物131(18.4g)。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.35-7.29(m，5H)，5.11(s，2H)，3.52(t，J＝6.4Hz，2H)，2.38(t，J＝6.4Hz，2H)，1.69-1.61(m，2H)，1.56-1.49(m，2H)，1.41-1.35(m，2H)。

在0℃下，向化合物8(1.4g，4.24mmol)和化合物131(0.94g，4.24mmol)的二氯乙烷(30mL)溶液中加入TMSOTf(0.47g，2.12mmol)。在室温下将反应混合物搅拌16小时。向反应混合物中加入水(30mL)，并用二氯甲烷(3×30mL)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并旋蒸得残留物。残留物经硅胶柱层析(PE:EA＝10:0至0:10)纯化得到化合物132(308mg,42％)。

LCMS：m/z＝552.8[M+H]⁺；t_R＝2.714min。

化合物132(308mg，0.558mmol)和10％钯/碳(30mg)的甲醇(20mL)溶液在氮气下换两次气。在氢气氛围中，反应混合物在室温下搅拌16小时。通过硅藻土垫过滤反应混合物。将滤液浓缩，得到化合物133(261mg)，直接用于下一步。

在0℃下，向化合物133(261mg，0.566mmol)和HATU(258mg，0.679mmol)的DMF(5mL)溶液中加苄基-1-哌嗪碳酸酯(257mg，0.362mmol)和TEA(0.3mL)。在室温下将混合物搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。通过硅胶柱层析(DCM:MeOH＝10:0至9:1)纯化，得到化合物134(210mg)。

LCMS：m/z＝664.4[M+H]⁺；t_R＝1.88min。

化合物134(210mg，0.316mmol)和10％钯/碳(30mg)的乙酸乙酯(20mL)溶液在氮气下换两次气。在氢气氛围中，反应混合物在室温下搅拌16小时。通过硅藻土垫过滤反应混合物。将滤液浓缩得化合物135(161mg)，可直接用于下一步。

LCMS：m/z＝530.2[M+H]⁺；t_R＝1.38min。

将化合物135(125mg,0.23mmol)和DIEA(40mg,0.31mmol)加入到化合物107(83mg,0.076mmol)的DMF(5mL)溶液中，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO3水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，硅胶柱层析纯化粗产物，得到化合物136(30mg,19％)。

LCMS：m/z＝1063.7[M/2+H]+；tR＝1.289min。

在室温下，化合物136(30mg,0.014mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7M)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物137(10.19mg,40％)。

LCMS：m/z＝874.4[M/2+H]⁺；t_R＝8.155min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.35(dd，J＝16.0，5.8Hz，7H)，6.88(s，2H)，4.49(s，2H)，4.35(d，J＝8.4Hz，3H)，4.20(s，6H)，3.87(ddd，J＝18.2，13.5，5.7Hz，18H)，3.74(dd，J＝6.0，2.8Hz，6H)，3.54(ddd，J＝18.3，11.0，4.1Hz，26H)，3.35(s，6H)，2.39(d，J＝7.0Hz，6H)，1.97(s，9H)，1.77–1.71(m，2H)，1.63–1.56(m，14H)，1.40(dd，J＝15.8，8.6Hz，14H)。

实施例38

化合物145的制备

在0℃下，将BH₃/THF(40mL，1.0M)缓慢滴加至5-(苄氧基)-5-氧代戊二酸(4.44g，20.0mmol)的THF(20mL)溶液中。反应混合物在室温下搅拌18小时。该反应在0℃下用甲醇淬灭。将混合物浓缩得到残留物。残留物经硅胶柱层析(乙酸乙酯在石油醚中＝10％至80％)纯化，得到化合物138(4.0g)。

¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ7.37-7.33(m，5H)，5.12(s，2H)，3.63(t，J＝6.4Hz，2H)，2.40(t，J＝6.4Hz，2H)，1.76-1.57(m，4H)。

在0℃下，向化合物8(2.0g，6.08mmol)和化合物138(1.39g，7.28mmol)的二氯乙烷(30mL)溶液中加入TMSOTf(0.675g，3.04mmol)。在室温下将反应混合物搅拌16小时。向反应混合物中加水(30mL)，并用二氯甲烷(3×30mL)萃取。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并旋蒸得残留物。残留物经硅胶柱层析(PE:EA＝10:0至0:10)纯化得到化合物139(570mg,18％)。

LCMS：m/z＝538.3[M+H]⁺；t_R＝1.067min。

化合物139(570mg，1.059mmol)和10％Pd/C(60mg)在乙酸乙酯(20mL)中的混合物用氮气换气两次。在室温下，反应混合物在氢气氛围下搅拌16小时。通过硅藻土垫过滤反应混合物。将滤液减压浓缩得到化合物140(438mg)，直接用于下一步。

在0℃下，向化合物140(200mg，0.447mmol)和三氟乙酸五氟苯酯(179mg，0.537mmol)的DMF(5mL)溶液中加入DIEA(0.11mL)。在室温下将混合物搅拌18小时。将混合物减压浓缩以得到残留物。经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝10:0至9:1)纯化，得到化合物141(87mg)。LCMS：m/z＝636.1[M+Na]⁺；t_R＝1.767min。

向化合物107(300mg，0.276mmol)和2,7-二氮螺环[3.5]壬烷-2-羧酸叔丁酯(205mg，0.907mmol)的DMF(10mL)溶液中加入DIEA(0.3mL)。在室温下将反应混合物搅拌18小时。反应完成后，向混合物中加水(30mL)和1.0M盐酸(5mL)，用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，无水硫酸钠干燥，过滤并旋蒸得到残留物。通过硅胶柱层析(二氯甲烷在甲醇中＝0至10％)纯化，得到化合物142(112mg)。

LCMS：m/z＝1215.8[M/2+H]⁺；t_R＝14.88min。

将化合物142(87mg，0.072mmol)溶于15％TFA/DCM(5mL)中，反应溶液在室温下搅拌3小时。将混合物浓缩得到化合物143(80mg)，直接用于下一步。

将化合物141(87mg,0.16mmol)和DIEA(19.2mg,0.15mmol)加入到化合物143(45mg,0.05mmol)的DMF(5mL)溶液中，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，硅胶柱层析纯化，得到化合物144(26mg,24％)。

LCMS：m/z＝1102.3[M/2+H]⁺；t_R＝1.670min。

在室温下，将化合物144(26mg,0.01mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7N)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物145(1.4mg,6.5％)。

LCMS：m/z＝913.4[M/2+H]⁺；t_R＝7.992min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.32(t，J＝5.8Hz，7H)，6.94(d，J＝9.0Hz，2H)，4.59(s，7H)，4.48(s，3H)，4.34(d，J＝8.4Hz，3H)，4.23(s，6H)，4.02–3.90(m，16H)，3.83(d，J＝3.0Hz，4H)，3.78–3.71(m，14H)，3.56(dd，J＝10.7，3.0Hz，4H)，3.49(dd，J＝11.0，4.7Hz，9H)，3.36(s，6H)，2.19(t，J＝7.1Hz，6H)，1.98(s，9H)，1.82(d，J＝12.6Hz，11H)，1.61(dd，J＝12.3，6.8Hz，12H)，1.36(s，14H)。

实施例39

化合物148的制备

/>

在0℃下，向化合物133(200mg，0.433mmol)和三氟乙酸五氟苯酯(180mg，0.537mmol)的DMF(5mL)溶液中加入DIEA(0.1mL)。在室温下将混合物搅拌18小时。将混合物减压浓缩以得到残留物。经硅胶柱层析(DCM:MeOH＝10:0至9:1)纯化，得到化合物146(80mg)。将化合物143(44mg，0.036mmol)和DIEA(19mg，0.15mmol)加入到化合物146(78mg，0.12mmol)的DMF(5mL)溶液中，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，硅胶柱层析纯化，得到化合物147(20mg，18.5％)。LCMS：m/z＝1123.8[M/2+H]⁺；t_R＝1.558min。

在室温下，将化合物147(20mg，0.01mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL，7N)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物148(3.44mg，21％)。

LCMS：m/z＝934.5[M/2+H]⁺；t_R＝8.091min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.34(t，J＝4.8Hz，7H)，6.96(d，J＝8.9Hz，2H)，4.57(s，11H)，4.51(s，3H)，4.37(d，J＝8.3Hz，3H)，4.22(s，6H)，4.02–3.85(m，18H)，3.82–3.73(m，12H)，3.67(s，6H)，3.60(dd，J＝10.7，2.9Hz，4H)，3.51(dd，J＝12.3，6.0Hz，9H)，3.37(s，6H)，2.17(t，J＝7.2Hz，6H)，2.00(s，9H)，1.84(s，10H)，1.61(dt，J＝13.3，6.5Hz，12H)，1.41(dd，J＝14.6，7.4Hz，14H)。

实施例40

化合物151的制备

在0℃下,将HBr(48％的醋酸溶液，12mL)加入到半乳糖胺五乙酸酯(2.0g，5.14mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中。反应在25℃下继续搅拌3小时。LCMS显示原料被完全消耗。将反应混合物用水(20mL)稀释并用二氯甲烷(3×30mL)萃取。用饱和NaHCO₃溶液(3×20mL)洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到化合物149(0.8g)。

LCMS：m/z＝348.3[M-Br+H₂O+H]⁺；t_R＝1.009min。

在室温下，将硫脲(297mg，3.9mmol)加入到化合物149(0.8g，1.95mmol)的丙酮(5mL)溶液中。反应混合物在80℃下反应1小时。过滤反应混合物，用丙酮洗涤白色固体，得到化合物150(0.48g)。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ9.08(d，J＝66.1Hz，4H)，8.29(d，J＝9.0Hz，1H)，5.47(d，J＝10.4Hz，1H)，5.35(d，J＝3.0Hz，1H)，5.01(dd，J＝10.9，3.1Hz，1H)，4.34(t，J＝6.1Hz，1H)，4.13(dd，J＝19.8，10.2Hz，1H)，4.09–4.00(m，2H)，2.12(s，3H)，2.00(s，3H)，1.92(s，3H)，1.82(s，3H)。

将化合物150(0.48g，0.98mmol)溶于丙酮/水＝4：3(5mL)的溶液中，在室温下搅拌2小时。用水(20mL)稀释反应混合物并用二氯甲烷(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3×30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并在减压下浓缩，得到化合物151(0.3g)。LCMS：m/z＝376.2[M-SH+C₂H₅O+H]⁺；t_R＝1.251min。

实施例41

化合物154的制备

室温下，向化合物151(0.1g，0.27mmol)的丙酮/水(2mL)溶液中加入K₂CO₃(40mg，0.29mmol)，1-叠氮基-9-溴辛烷(64mg，0.27mmol)。常温下搅拌16小时。浓缩反应液，硅胶柱层析(EA：PE＝70-80％)纯化，得到化合物152(60mg)。

LCMS：m/z＝553.2[M+Na]⁺；t_R＝1.752min。

在0℃下，向化合物152(60mg，0.11mmol)的t-BuOH/THF/H₂O(5：5：2，2mL)溶液中加入化合物7(20mg，0.04mmol)，CuSO₄(20mg)和抗坏血酸钠(20mg)。常温下搅拌16小时。乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，浓缩后得到化合物153粗品，直接用于下一步反应。

室温下，化合物153粗品溶于氨的甲醇溶液(5mL，7N)中，搅拌8小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物154(6.5mg)。

LCMS：m/z＝873.1[M/2+H]+；t_R＝10.426min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.80(s，3H)，7.34(d，J＝4.0Hz，4H)，7.26(dd,J＝12.0，8.0Hz，3H)，6.80(d，J＝8.0Hz，2H)，4.54(s，6H)，4.51(s，2H)，4.47(s，1H)，4.44(s，1H)，4.38(t，J＝8.0Hz，6H)，4.04(t，J＝12.0Hz，3H)，3.95(t，J＝8.0Hz，2H)，3.90(d，J＝2.0Hz，3H)，3.80–3.69(m，11H),3.60(d，J＝12.0Hz，3H)，3.51(t，J＝8.0Hz，6H)，2.82–2.59(m，6H)，1.99(s，9H)，1.95–1.85(m，6H)，1.81–1.73(m，2H)，1.67–1.54(m，8H)，1.35(m，38H)。

实施例42

化合物158的制备

在0℃下，向化合物31(1.0g，4.56mmol)的DMF(10mL)溶液中加入TosCl(869mg，4.56mmol)和DIPEA(885mg，6.84mmol)。反应混合物在25℃下搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩，得到残余物，经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝30-40％)，得到所需产物化合物155(500mg)。

LCMS：m/z＝347.1[M-N₂]⁺；t_R＝1.632min。

在室温下，将化合物151(0.1g，0.27mmol)溶于丙酮/水(2mL)中，加入K₂CO₃(40mg，0.29mmol)，化合物155(73mg，0.27mmol)。反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩，得到残余物，用硅胶柱层析(PE：EA＝90％)纯化，得到化合物156(60mg)。LCMS：m/z＝582.8[M+H₂O+H]⁺；t_R＝1.410min。

将化合物156(60mg，0.11mmol)溶于t-BuOH/THF/H₂O＝5：5：2(2mL)中，加入化合物7(20mg，0.04mmol)，CuSO₄(20mg)和抗坏血酸钠(20mg)。将混合物的溶液在室温下搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩，得到残余物，硅胶柱层析(甲醇在二氯甲烷中＝8％)纯化，得到化合物157(30mg)。

LCMS：m/z＝1112.6[M/2+H]⁺；t_R＝2.027min。

将化合物157(30mg，0.013mmol)溶于氨的甲醇溶液(5mL)中。反应混合物在室温下反应8小时。反应混合物减压浓缩得到残余物，经反相制备HPLC纯化得到化合物158(11.1mg)。

LCMS：m/z＝924.2[M/2+H]⁺；t_R＝8.657min。

¹HNMR(400MHz，Methanol-d₄)δ7.89(s，3H)，7.32(d，J＝4.4Hz，4H)，7.26(dd，J＝9.4，6.4Hz，3H)，6.79(d，J＝8.9Hz，2H)，4.56(t，J＝5.0Hz，6H)，4.53(s，6H)，4.51(s，1H)，4.48(s，3H)，4.03(t，J＝10.3Hz，3H)，3.93(t，J＝6.4Hz，2H)，3.90–3.85(m，9H)，3.78–3.44(m，51H)，2.84(ddt，J＝71.3，13.3，6.6Hz，6H)，1.96(s，9H)，1.80–1.69(m，2H)，1.64–1.55(m，2H)，1.51–1.33(m，8H)。

实施例43

化合物160的制备

将DIEA(38mg,0.30mmol)和化合物107(80mg,0.074mmol)加入到化合物67(172mg,0.30mmol)的DMF(5mL)溶液中，常温下搅拌18小时。反应完成后，用水(30mL)和乙酸乙酯(3×20mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机相，硫酸钠干燥，过滤并浓缩，经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝0-25％)，得化合物159(58mg,38％)为黄色油状物。

LCMS:m/z＝1052.9[M/2+H]⁺；t_R＝10.605min。

在室温下，将化合物159(58mg,0.028mmol)溶于氨的甲醇溶液(3.0mL)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物，经反相制备HPLC纯化，得到化合物160(0.89mg,1.9％)，为白色固体。LCMS:m/z＝863.8[M/2+H]⁺；t_R＝8.202min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.36(m,7H),6.93(m,2H),4.49(s,2H),4.43(d,J＝8.4Hz,4H),4.03(s,5H),3.95(m,14H),3.83(s,4H),3.78–3.73(m,10H),3.60(s,28H),3.53–3.48(m,14H),3.39(s,10H),1.98(s,9H),1.76(s,2H),1.61(s,2H),1.37(s,8H),1.31–1.27(m,2H)。

实施例44

化合物163的制备

室温下，向化合物151(0.1g，0.27mmol)的丙酮/水(2mL)溶液中加入K₂CO₃(40mg，0.29mmol)，1-叠氮基-8-溴辛烷(64mg，0.27mmol)。常温下搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩得到残余物，经硅胶柱层析纯化(EA：PE＝70-80％)，得到化合物162(80mg)。

0℃下，向化合物161(60mg，0.11mmol)的叔丁醇/四氢呋喃/水＝5：5：2(2mL)溶液中加入化合物7(20mg，0.04mmol)，CuSO₄(20mg)和Vc-Na(20mg)。常温下搅拌16小时。将反应液用乙酸乙酯萃取，硫酸钠干燥，得化合物162粗产品。

室温下，将162粗产品溶于氨的甲醇溶液(5mL)。反应在室温下搅拌8小时。将反应混合物减压浓缩，得到残余物，经反相制备HPLC纯化得到化合物162(6.7mg)。

LCMS:m/z＝852.0[M/2+H]⁺；t_R＝9.992min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.79(s,3H),7.37–7.29(m,4H),7.29–7.16(m,3H),6.78(d,J＝8.9Hz,2H),4.52(s,6H),4.48(s,2H),4.43(d,J＝10.3Hz,3H),4.36(t,J＝7.1Hz,6H),4.02(t,J＝10.3Hz,3H),3.93(t,J＝6.4Hz,2H),3.87(d,J＝3.0Hz,3H),3.80–3.65(m,12H),3.57(dd,J＝10.2,3.2Hz,3H),3.49(td,J＝6.4,3.6Hz,5H),2.68(m,6H),2.13–1.93(m,9H),1.88(dd,J＝14.1,7.1Hz,6H),1.78–1.70(m,2H),1.63–1.24(m,40H)。

实施例45

化合物166的制备

室温下，化合物151(0.1g，0.27mmol)的丙酮/水(2mL)溶液中加入K₂CO₃(40mg，0.29mmol)，1-叠氮基-8-溴辛烷(64mg，0.27mmol)。常温下搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩得到残余物，经硅胶柱层析纯化(EA：PE＝70-80％)，得到化合物164(90mg)。LCMS:m/z＝545.6[M+H]⁺；t_R＝1.810min。

0℃下，向化合物164(0.06g，0.11mmol)的叔丁醇/四氢呋喃/水＝5：5：2(2mL)溶液中加入化合物7(0.02g，0.04mmol)，CuSO₄(20mg)和Vc-Na(20mg)。常温下搅拌16小时。将反应液用乙酸乙酯萃取，硫酸钠干燥，浓缩得到化合物165粗产品。

室温下，将165粗产品溶于氨的甲醇溶液(5mL)。常温下搅拌8小时。将反应混合物减压浓缩，得到粗产物，经反相制备HPLC纯化得到化合物166(4.5mg)。

LCMS:m/z＝894.1[M/2+H]⁺；t_R＝10.936min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.78(s,3H),7.32(d,J＝4.0Hz,4H),7.28–7.19(m,3H),6.77(d,J＝8.0Hz,2H),4.52(s,6H),4.49(s,2H),4.44(s,1H),4.42(s,1H),4.36(t,J＝8.0Hz,6H),4.02(t,J＝12.0Hz,3H),3.93(t,J＝8.0Hz,2H),3.88(d,J＝4.0Hz,3H),3.73(td,J＝8.0,4.0Hz,11H),3.57(dd,J＝12.0,2.0Hz,3H),3.49(td,J＝8.0,2.0Hz,6H),2.76–2.60(m,6H),1.96(s,9H),1.91–1.83(m,6H),1.77–1.71(m,2H),1.63–1.52(m,8H),1.41–1.25(m,44H)。

实施例46

化合物169的制备

常温下，向化合物151(0.1g，0.27mmol)的丙酮/水(2mL)溶液中加入K₂CO₃(40mg，0.29mmol)，2-(2-(2-叠氮乙氧基)乙氧基)乙基4-甲基苯磺酸酯(73mg，0.27mmol)。常温下搅拌16小时。将反应混合物减压浓缩，得到残余物，经硅胶柱层析纯化(PE：EA＝90％)，得到化合物167(85mg)。

LCMS:m/z＝521.4[M+H]⁺；t_R＝1.346min。

向化合物167(0.06g，0.11mmol)的叔丁醇/四氢呋喃/水＝5：5：2(2mL)的溶液中加入化合物7(20mg，0.04mmol)，CuSO₄(20mg)和Vc-Na(20mg)。常温下搅拌16小时。反应混合物减压浓缩，得到残余物，经硅胶柱层析纯化(DCM：MeOH＝8％)，得到化合物168(15mg)。

室温下，将化合物168(15mg)溶于氨的甲醇溶液(5mL)。常温下搅拌8小时。将反应混合物减压浓缩，得到残余物，经反相制备HPLC纯化，得到化合物169(4.6mg)。

LCMS:m/z＝858.0[M/2+H]⁺；t_R＝8.644min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.89(s,3H),7.32(d,J＝4.4Hz,4H),7.25(t,J＝7.2Hz,3H),6.79(d,J＝8.0Hz,2H),4.55(dd,J＝8.0,4.0Hz,12H),4.47(d,J＝8.0Hz,5H),4.04(t,J＝12.0Hz,3H),3.93(t,J＝8.0Hz,2H),3.88(t,J＝4.0Hz,8H),3.80–3.47(m,39H),2.81(m,6H),1.95(s,9H),1.80–1.69(m,2H),1.65–1.56(m,2H),1.50–1.33(m,8H)。

实施例47

化合物180的制备

向2-羟基甲基-2-(4-吡啶)-1,3-丙二醇(10g，54.58mmol)的三氟乙酸(150mL)溶液中加入二氧化铂(5g，22.02mmol)。然后将混合液在氢气氛围下常温搅拌72小时。LCMS显示反应完成后，过滤回收二氧化铂，减压浓缩，得到化合物170粗品(10g)。

LCMS:m/z＝190.2[M+H]⁺；t_R＝0.32min。

将化合物170(10.0g)溶解于THF中，冰浴下使用饱和NaHC O₃溶液将pH调节至9，并滴加氯甲酸苄酯(9.92g,55.12mmol)。LCMS显示反应完成后，用氨水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取三次，每次300mL，有机相使用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝10:1)，得到化合物171(9g，52％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝324.2[M+H]⁺；t_R＝1.68min。

在0℃下向化合物171(4.8g，14.84mmol)的丙烯腈(30mL)溶液中加入四丁基氢氧化铵(2mL)。然后将混合物在0℃下搅拌30分钟。当反应液的颜色由无色变成橙色时，表示反应完成。粗品用乙酸乙酯萃取三次,每次200mL，减压浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝99:1)，得到化合物172(7g,97％)，为淡黄色油状物。

LCMS:m/z＝483.2[M+H]⁺；t_R＝2.06min。

向化合物172(19g，39.37mmol)的MeOH(120mL)溶液中加入10％Pd/C(4g)。然后将混合物在氢气氛围下常温搅拌16小时。反应完成后，将反应液减压过滤浓缩，得到无色透明的化合物173粗产物(18.5g)。

LCMS:m/z＝349.2[M+H]⁺；t_R＝1.41min。

在0℃下，向化合物173(5g，10.36mmol)的MeOH(50mL)中加入H₂SO₄(10mL)。然后在70℃下搅拌回流72小时。反应完成后，加压浓缩，冰浴下缓慢滴加到碳酸氢钠溶液中，保持pH＝10,用乙酸乙酯萃取(100mLX3)，有机相使用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到粗品。粗品经硅胶柱层析纯化，得到化合物174(5.4g,84％)，为无色透明液体。

LCMS:m/z＝448.2[M+H]⁺；t_R＝1.54min。

在0℃下，将化合物174(5.4g，12.07mmol)溶解于THF(50mL)中，使用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至9，冰浴下加入氯甲酸苄酯(2.1g，12.07mmol)，然后将混合物在室温下搅拌30分钟。反应完成后，用氨水淬灭反应，减压浓缩除去THF，反应液用100mL乙酸乙酯萃取3次，无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩得到粗产品。粗品经硅胶柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝15:1)，得到化合物175(6.6g，94％)，为淡黄色油状产物。

LCMS:m/z＝582.4[M+H]⁺；t_R＝2.25min。

向化合物175(6.6g，11.36mmol)的THF(50mL)溶液中加入1N NaOH溶液(100mL)，将混合液在氮气保护下常温搅拌16小时。减压浓缩除去THF，在冰浴中加入1N盐酸调节pH至3，用200mL乙酸乙酯萃取3次，使用饱和食盐水洗有机相，无水硫酸钠干燥有机相，减压浓缩得到化合物176(5.8g，94％)，为白色固体。LCMS:m/z＝540.2[M+H]⁺；t_R＝1.83min。

向化合物176(1.5g,2.78mmol)的DMF(2mL)溶液中加入DIEA(2.2g,16.68mmol),混合液冰浴下搅拌10分钟，向混合液中加入三氟乙酸五氟苯酯(3.8g,113.9mmol)，然后混合液在氮气保护下室温搅拌过夜。LCMS表明反应已经完成。用氮气吹干DMF，经硅胶柱层析纯化(EA/PE＝0-100％)，得到化合物177(2.0g,69％)，为黄色油状产物。LCMS:m/z＝1038.7[M+H]⁺；t_R＝8.931min。

将化合物178(1.2g,2.8mmol，制备方法同化合物35)和DIEA(606mg,4.69mmol)加入到DMF(2mL)中，混合液冰浴下搅拌10分钟，将化合物177(700mg,0.67mmol)加入到混合液中，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机相，无水硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩，柱层析纯化粗产物，得到化合物179(362mg)，为黄色油状液体。

LCMS:m/z＝913.4[M/2+H]⁺；t_R＝9.584min。

在冰浴下，将化合物179(40mg,0.02mmol)溶于氨的甲醇溶液(2mL)中，搅拌2小时。LCMS显示反应已经完成。将混合物浓缩以得到残留物。经反向制备HPLC纯化得到化合物180(5.7mg，17％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝724.4[M/2+H]⁺；t_R＝6.784min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.39–7.28(m,5H),5.10(s,2H),4.36(d,J＝8.4Hz,3H),4.14(d,J＝12.3Hz,2H),3.87(m,9H),3.75(dd,J＝6.0,2.2Hz,6H),3.60(m,9H),3.47(m,6H),3.34(s,6H),3.15(t,J＝6.8Hz,6H),2.67(s,2H),2.38(t,J＝5.9Hz,6H),1.97(s,9H),1.59–1.44(m,14H),1.43–1.28(m,15H)。

实施例48

化合物182的制备

将化合物40(400mg,0.31mmol)和DIEA(80mg,0.36mmol)加入DMF(5mL)溶液中，冰浴下搅拌10分钟，将化合物177(54mg，0.052mmol)加入反应液中，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合液。用NaHCO ₃水溶液(30mL)清洗有机相，无水硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩，粗产品经柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝0-25％)，得到化合物181(75mg)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝955.4[M/2+H]⁺；t_R＝10.424min。

在室温下，将化合物181(75mg)溶于氨的甲醇溶液(2mL)中，搅拌2小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物182(10mg,17％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝766.2[M/2+H]⁺；t_R＝7.432min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.37–7.30(m,5H),5.10(s,2H),4.36(d,J＝8.4Hz,3H),4.17–4.11(m,2H),3.92–3.82(m,10H),3.75(m,6H),3.61–3.57(m,9H),3.47(m,7H),3.33(s,6H),3.14(d,J＝7.3Hz,6H),2.37(t,J＝6.0Hz,6H),1.97(s,9H),1.59–1.46(m,14H),1.31(s,27H)。

实施例49

化合物184的制备

在冰浴下，将化合物45(62mg,0.127mmol)和DIEA(118mg,0.91mmol)溶于DMF(2mL)，混合液搅拌10分钟，将化合物177(40mg,0.04mmol)加入混合液中，常温搅拌16小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机相，无水硫酸钠干燥有机相，过滤并浓缩，经硅胶柱层析纯化，得到化合物183(85mg)，为黄色油状液体。

LCMS:m/z＝976.6[M/2+H]⁺；t_R＝10.873min。

在冰浴下，将化合物183(85mg)溶于氨的甲醇溶液(2mL)中，搅拌2小时。LCMS显示反应已经完成。将混合物浓缩以得到残留物。经反向制备HPLC纯化，得到化合物184(12mg，17％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝1572.8[M+H]⁺；t_R＝7.668min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.34(m,5H),5.10(s,2H),4.36(m,3H),4.13(s,2H),3.92–3.82(m,9H),3.75(m,6H),3.61–3.58(m,6H),3.52–3.42(m,8H),3.34(m,9H),3.15(m,6H),2.37(m,6H),1.97(s,9H),1.63(s,2H),1.51(m,14H),1.30(s,31H)。

实施例50

化合物191的制备

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向化合物151(1.7g，4.4mmol)的丙酮:水＝4∶3(28mL)溶液中加入8-溴辛酸苄酯(1.52g，4.84mmol)和K₂CO₃(0.74g，7.3mmol)，然后混合物在室温下搅拌过夜。LCMS表明反应已经完成。低温减压浓缩除去丙酮，用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，经硅胶柱层析纯化(PE∶EA＝4∶1)，得到化合物185(1.4g，50％)，为白色固体产物。

LCMS:m/z＝596.03[M+H]⁺；t_R＝2.03min。

向化合物185(1.4g，2.35mmol)在MeOH(20mL)中的溶液中加入Pd(OH)₂(1.0g)，然后混合物室温下在氢气氛中下搅拌过夜。LCMS表明反应已经完成。用硅藻土过滤反应液除去催化剂，真空减压浓缩得到化合物186(675mg，56％)。

LCMS:m/z＝506.2[M+H]⁺；t_R＝1.78min。

向化合物186(674mg,0.94mmol)的DMF(2mL)溶液中加入DIEA(517mg,2.82mmol),混合液在冰浴下搅拌10分钟，向混合液中加入三氟乙酸五氟苯酯(821mg,2.93mmol)，然后混合液在氮气保护下室温搅拌过夜。LCMS表明反应已经完成。用氮气吹干DMF，粗品经硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝0-20％)，得到化合物187(530mg，59％)，为白色固体产物。

LCMS:m/z＝672.2[M+H]⁺；t_R＝1.41min。

在0℃下，向化合物172(500mg，1.04mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入CoCl₂·6H₂O(509mg,2.08mmol)和NaBH₄(850mg，22.47mm ol)，然后将混合物在室温下搅拌2小时。LCMS表明反应溶液中没有原料后，在0℃下加入(Boc)₂O(1.17g，5.2mmol)和TEA(650mg，6.24mmol)。然后混合物在室温下搅拌16小时。LCMS表明反应已经完成，用硅藻土过滤反应溶液，用乙酸乙酯萃取滤液三次，每次10mL。减压浓缩得到粗品。经硅胶柱层析纯化(DCM/MeOH＝90：10)，得到化合物188(352mg,39％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝695.4[M-100]⁺；t_R＝2.209min。

在0℃下，向化合物188(100mg，0.13mmol)的甲醇(3mL)溶液中加入HCl/MeOH(1mL)，然后混合物在室温下搅拌2小时。LCMS显示反应完成后直接过滤，减压浓缩得到化合物189(60mg，96％)，为白色固体，粗品可直接用于下一步反应。。

LCMS:m/z＝495.4[M+H]⁺；t_R＝1.42min。

冰浴下，将化合物187(271mg,0.40mmol)加入到化合物189(50mg,0.10mmol)和DIEA(138mg,0.70mmol)的DMF(5mL)溶液中，常温下搅拌18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机物，硫酸钠干燥，过滤并浓缩，粗产物经硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝0-25％),得到化合物190(65mg)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝979.2[M/2+H]⁺；t_R＝10.704min。

在冰浴下，将化合物190(65mg,0.03mmol)溶于氨的甲醇溶液(2mL)中，搅拌2小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物191(15mg,30％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝1579.4[M+H]⁺；t_R＝7.633min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.36–7.28(m,5H),5.10(s,2H),4.43(m,3H),4.17(d,J＝11.7Hz,2H),4.02(m,3H),3.88(m,3H),3.72(m,6H),3.57(m,3H),3.49(m,3H),3.39(m,12H),3.23(t,J＝7.0Hz,6H),2.70(m,8H),2.16(m,6H),1.97(s,9H),1.72(m,9H),1.63–1.55(m,12H),1.46–1.27(m,20H)。

实施例51

化合物201的制备

在0℃下，将4-溴肉桂酸甲酯(2.68g，10mmol)溶在THF(40mL)中，缓慢滴加DABAL-H(1M in THF，25mL，25mmol)，在0℃下搅拌30分钟后，升到室温搅拌1小时，LCMS监测反应结束后，用HCl(1M水溶液)淬灭反应，浓缩除去有机溶剂，加入水(20mL)，在室温下搅拌10分钟后过滤，滤饼用水(50mL)洗涤，干燥后得到化合物192(2.2g,91％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝223[M-H₂O+H]⁺；t_R＝1.45min。

在0℃下，将化合物192(2.4g，10mmol)溶在DCM(30mL)中，加入DIPEA(2.58g，20mmol)，Boc₂O(2.38g，11mmol)和DMAP(122mg，1mmol)，室温搅拌过夜，浓缩，经硅胶柱层析纯化(EA/PE＝10-30％)，得到化合物193(1.2g，35％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝363[M+Na]⁺；t_R＝2.434min。

将化合物193(100mg，0.294mmol)和柠檬酸三甲酯(138mg，0.588mmol)溶于THF(4mL)中，加入Pd₂(dba)₃(26.5mg，0.029mm ol)，dppb(12.3mg，0.029mmol)，在氮气氛围保护下回流过夜，浓缩，经硅胶柱层析纯化(EA/PE＝0-75％)，得到化合物194(50mg，37％)，为无色油状物。

LCMS:m/z＝479[M+Na]⁺；t_R＝1.45min。

将化合物194(1g，2.19mmol)溶在甲醇(10mL)中，加入Pd/C(10％，100mg)，置换氢气后室温下搅拌过夜。将反应液过滤并浓缩，得到化合物195(850mg)，为无色油状物。

LCMS:m/z＝369[M+H]⁺；t_R＝1.923min。

在氮气氛围下，向化合物195(5g，13.58mmol)的THF(100mL)溶液中加入Ph₃P(5.34g，20.37mmol)，在0℃下加入DIAD(3.57g，17.65mmol)，室温下搅拌30分钟，然后冷却至0℃加入3-苄氧基-1-丙醇(4.51g，27.16mmol)，室温搅拌过夜。反应液浓缩，经硅胶柱层析纯化(EA/PE＝0-100％)，得到化合物196(3.5g，49％)，为无色油状物。

LCMS:m/z＝539[M+Na]⁺；t_R＝2.353min。

向化合物196(3g，5.81mmol)在THF(50mL)的溶液中加入NaOH(1M，58mL)，将混合物在50℃下搅拌4小时。浓缩除去THF后，在0℃下用HCl(1M)调节至pH＝5，用乙酸乙酯(3X100mL)萃取，经硅胶柱层析纯化(MeOH/DCM＝0-20％)，得到化合物197(1.5g，46％)，为无色油状物。

LCMS:m/z＝497[M+Na]⁺；t_R＝1.993min。

在0℃下，将化合物197(1g，2.1mmol)、炔丙胺(462mg，8.4mmol)，EDCI(2.02g，10.5mmol)，HOBt(1.43g，10.5mmol)和DMAP(769mg，6.3mmol)溶在DMF(10mL)中，加入DIPEA(1.62g，12.6mmol)，在室温下搅拌过夜。用水(100mL)稀释混合物，用乙酸乙酯(3X50mL)萃取，合并有机相并浓缩，经硅胶柱层析纯化(MeOH/DCM＝0-10％)，得到化合物198(1.0g，81％)，为棕色油状物。

LCMS:m/z＝586[M+H]⁺；t_R＝1.333min。

向化合物8(11.5g,34.9mmol)在DCE(50mL)的溶液中加入5-叠氮戊醇(5g，38.7mmol)，在0℃下加入TMSOTf(3.9g,17.6mmol)，在室温下搅拌过夜。反应完成后，将反应物倒入水(100mL)中，用DCM(3X30 mL)萃取，NaHCO₃水溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩后经硅胶柱层析纯化(EA/PE＝70％)，得到化合物199(3.9g，44％)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝459.2[M+H]⁺；t_R＝0.952min。

将VcNa(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物199(188mg,0.40mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，在0℃下加入化合物198(60mg，0.10mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌18小时。反应完成后，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物200粗品(60mg)。LCMS:m/z＝981.5[M/2+H]⁺；t_R＝1.114min。

将化合物200(60mg,0.01mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL)中，常温搅拌18小时。将反应物浓缩，经反相制备HPLC纯化，得到化合物201(2mg,1.2％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝792.4[M/2+H]⁺；t_R＝7.210min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.03(s,1H),7.82(d,J＝6.9Hz,2H),7.36–7.19(m,5H),7.04(m,2H),6.79(m,2H),4.52(s,2H),4.46(s,2H),4.41–4.37(m,4H),4.28(m,6H),4.03(m,2H),3.83(s,6H),3.72(m,8H),3.66(m,3H),3.62–3.50(m,6H),3.50–3.36(m,10H),2.89–2.82(m,3H),2.52–2.42(m,2H),2.03(t,J＝6.2Hz,3H),1.94(m,9H),1.89–1.79(m,6H),1.65–1.42(m,12H)。

实施例52

化合物204的制备

将VcNa(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物202(322mg，0.68mmol，制备方法同化合物10)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物198(100mg,0.17mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机物，硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到化合物203粗品(287mg)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝1002.2[M/2+H]⁺；t_R＝10.010min。

在室温下，将化合物203(287mg,0.14mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL)中，搅拌2小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物204(20mg，7.6％)，为白色粉末。

LCMS:m/z＝813.2[M/2+H]⁺；t_R＝7.368min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.01(m,1H),7.81(m,2H),7.35–7.21(m,5H),7.03(m,2H),6.78(m,2H),4.51(m,2H),4.45(d,J＝4.1Hz,2H),4.42–4.36(m,3H),4.30(m,9H),4.02(m,2H),3.94–3.86(m,3H),3.82(d,J＝3.4Hz,6H),3.78–3.70(m,6H),3.65(m,2H),3.62–3.51(m,5H),3.45(m,6H),2.92–2.78(m,4H),2.48(d,J＝7.3Hz,2H),2.07–1.99(m,3H),1.95(m,8H),1.89–1.69(m,8H),1.56–1.42(m,6H),1.28(dd,J＝20.3,14.1Hz,13H)。

实施例53

化合物206的制备

将VcNa(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物10(360mg,0.68mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物198(100mg,0.17mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应1小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机相，硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物205粗品(480mg)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝1023.3[M/2+H]⁺；t_R＝10.372min。

在室温下，将化合物205(400mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物206(57mg,17％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝743.3[M/2+H]⁺；t_R＝7.338min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.04(s,1H),7.82(s,2H),7.38–7.19(m,5H),7.03(d,2H),6.78(d,2H),4.51(s,2H),4.47(s,1H),4.40(s,3H),4.37–4.21(m,10H),4.02(m,2H),3.92(m,3H),3.86–3.81(m,5H),3.77–3.72(m,4H),3.66(m,2H),3.62–3.53(m,5H),3.45(m,6H),2.86(m,4H),2.53–2.39(m,2H),2.04(m,3H),1.95(m,9H),1.89–1.66(m,9H),1.48(m,6H),1.29(s,20H)。

实施例54

化合物208的制备

将VcNa(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物14(260mg,0.52mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物198(100mg,0.17mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应1小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机相，用无水硫酸钠干燥,过滤并减压浓缩，经硅胶层析柱纯化(MeOH：DCM＝0-12％)，得到化合物化合物207(90mg,25％)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝1044.5[M/2+H]⁺；t_R＝10.733min。

在室温下，将化合物207(90mg,0.043mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL)中，搅拌18小时。将混合物浓缩得到粗产物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物208(3.8mg,5％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝855.4[M/2+H]⁺；t_R＝7.904min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.02(s,1H),7.80(s,2H),7.33–7.25(m,5H),7.03(d,J＝8.4Hz,2H),6.78(d,J＝8.4Hz,2H),4.52(s,2H),4.46(s,2H),4.37(m,8H),4.26(t,J＝7.1Hz,4H),4.03(t,J＝6.2Hz,2H),3.93–3.87(m,4H),3.83(m,4H),3.77–3.72(m,6H),3.66(t,J＝6.2Hz,3H),3.59(dd,J＝10.9,2.9Hz,5H),3.50–3.42(m,7H),2.88–2.80(m,4H),2.46(t,J＝7.6Hz,2H),2.04(m,2H),1.95(m,9H),1.81(s,6H),1.74–1.69(m,2H),1.50(s,6H),1.26(s,24H)。

实施例55

化合物210的制备

将VcNa(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物18(211mg,0.40mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物198(60mg,0.10mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机相，硫酸钠干燥，过滤并浓缩，经硅胶柱层析纯化得到化合物209(96mg,44％)，为无色油状物。

LCMS:m/z＝1065.6[M/2+H]⁺；t_R＝1.260min。

在室温下，化合物209(96mg,0.045mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物210(14.5mg,17％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝876.5[M/2+H]⁺；t_R＝8.208min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.02(s,1H),7.79(s,2H),7.29(m,5H),7.02(m,2H),6.78(d,J＝8.7Hz,2H),4.52(s,2H),4.45(m,2H),4.41–4.20(m,14H),4.03(t,J＝6.3Hz,2H),3.86(m,10H),3.74(m,5H),3.66(t,J＝6.1Hz,2H),3.61–3.54(m,5H),3.47(t,J＝6.3Hz,5H),2.85(m,4H),2.49–2.43(m,2H),2.04(m,2H),1.96(s,9H),1.81(d,J＝7.1Hz,6H),1.71(s,2H),1.51(s,6H),1.26(s,30H)。

实施例56

化合物212的制备

将VcNa(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物22(360mg,0.68mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物198(100mg,0.17mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机相，硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到化合物211粗品(230mg)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝1086.5[M/2+H]⁺；t_R＝11.498min。

在室温下，将化合物211(230mg,0.10mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL)中，搅拌2小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物212(13mg,7.3％)，为白色粉末。

LCMS:m/z＝897.2[M/2+H]⁺；t_R＝8.622min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.02(s,1H),7.79(s,2H),7.33–7.18(m,5H),7.02(m,2H),6.79(s,2H),4.58(s,2H),4.51(s,2H),4.45(s,2H),4.39(s,2H),4.36(s,3H),4.34(s,4H),4.25(s,4H),4.02(s,2H),3.82(m,9H),3.74(m,6H),3.65(s,2H),3.59(m,5H),3.46(m,5H),3.42(m,2H),3.12(s,1H),2.83(s,4H),2.45(s,2H),2.04(m,3H),1.75(m,8H),1.51(s,7H),1.25(s,39H)。

实施例57

化合物214的制备

冰浴下，将VcNa(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(2mL)中，加入到化合物27(344mg,0.68mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物198(100mg,0.17mmol)的四氢呋喃(4mL)的溶液，常温下搅拌反应1小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机相，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物213粗品(320mg)，为黄色油状物，直接用于下一步反应。

LCMS:m/z＝1050.3[M/2+H]⁺；t_R＝9.392min。

在室温下，将化合物213(320mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL)中，搅拌1小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物214(5.5mg,2.1％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝861.4[M/2+H]⁺；t_R＝7.111min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.07(s,1H),7.90(s,2H),7.33–7.23(m,5H),7.05(d,J＝8.6Hz,2H),6.79(d,J＝8.6Hz,2H),4.55–4.45(m,10H),4.43–4.38(m,6H),4.02(t,J＝6.3Hz,2H),3.97–3.70(m,22H),3.66–3.46(m,30H),2.94–2.80(m,4H),2.52–2.43(m,2H),2.05(s,3H),1.94(d,J＝1.4Hz,9H),1.81–1.70(m,2H)。

实施例58

化合物216的制备

将VcNa(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(2mL)中，加入到化合物32(90mg,0.16mmol)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物198(24mg,0.04mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应1小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机相，硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到化合物215粗品(112mg)，为黄色油状物，直接用于下一步反应。

LCMS:m/z＝1116.4[M/2+H]⁺；t_R＝9.368min。

在室温下，将化合物215(112mg)溶于氨的甲醇溶液(3mL)中，搅拌1小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物216(7.2mg,7.8％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝927.3[M/2+H]⁺；t_R＝7.175min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.06(s,1H),7.89(s,2H),7.33–7.25(m,5H),7.05(d,J＝8.5Hz,2H),6.80(d,J＝8.6Hz,2H),4.51–4.40(m,11H),4.03(m,2H),3.95–3.65(m,30H),3.61–3.54(m,39H),2.87(m,4H),2.52–2.45(m,2H),2.04(m,3H),1.96(s,9H),1.78–1.72(m,2H)。

实施例59

化合物221的制备

在0℃下，将化合物197(1g，2.1mmol)和3-氨基丙酸叔丁酯(1.52g，8.4mmol)溶在DMF(10mL)中，依次加入EDCI(2.02g，10.5mmol)，HOBt(1.43g，10.5mmol)，DMAP(769mg，6.3mmol)和DIPEA(1.62g，12.6mmol)，室温搅拌过夜。用水(100mL)稀释混合物，乙酸乙酯(3X50mL)萃取，合并有机相并浓缩，经硅胶柱层析纯化(MeOH/DCM＝0-10％)，得到化合物217(1.3g，72％)，为棕色油状物。

LCMS:m/z＝856[M+Na]⁺；t_R＝1.592min。

向化合物217(500mg，0.584mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(5mL)，室温搅拌过夜，将混合物浓缩，得到化合物218粗品(400mg)，直接用于下一步。

LCMS:m/z＝688[M+H]⁺；t_R＝1.816min。

在0℃下，将化合物218(1g，1.46mmol)和DIPEA(1.5g，11.68mmol)溶在DMF(10mL)中，加入三氟乙酸五氟苯酯(2.45g，8.76mmol)，室温搅拌过夜。浓缩除去DMF，经硅胶柱层析纯化(EA/PE＝0-100％)，得到化合物219(1.2g)，为棕色油状物。

LCMS:m/z＝1186.4[M+H]⁺；t_R＝7.695min。

在0℃下，将化合物35(124mg,0.27mmol)溶于DMF(2mL)，加入DIEA(44mg,0.34mmol)和化合物219(80mg,0.068mmol)。反应在室温搅拌1小时。反应液倒入水(30mL)中，加入乙酸乙酯(3×10mL)萃取，用无水硫酸钠干燥,过滤并减压浓缩，经硅胶柱层析纯化(MeOH：DCM＝0-12％)，得到化合物220(100mg,19％)，为黄色油状物。LCMS:m/z＝1008.2[M/2+H]⁺；t_R＝10.173min。

在0℃下，将化合物220(95mg,0.047mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL)，室温下搅拌1小时。经反向制备HPLC纯化，得到化合物221(2mg,10％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝819.3[M/2+H]⁺；t_R＝7.503min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.38–7.20(m,5H),7.11(m,2H),6.81(d,J＝8.4Hz,2H),4.52(s,2H),4.36(m,3H),4.04(m,2H),3.96–3.82(m,9H),3.79–3.70(m,5H),3.66(m,2H),3.59(m,5H),3.52–3.34(m,13H),3.32–3.28(m,4H),3.20–3.06(m,5H),2.85–2.68(m,4H),2.66–2.56(m,2H),2.39(m,6H),2.04(dt,J＝12.5,6.4Hz,2H),1.97(s,9H),1.91–1.80(m,2H),1.57–1.43(m,12H),1.29(m,18H)。

实施例60

化合物223的制备

/>

在0℃下，将DIPEA(313mg,2.43mmol)和化合物219(300mg,0.27mmol)依次加入到化合物40(900mg,1.89mmol)的DMF(5mL)溶液中，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×10mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机相，硫酸钠干燥，过滤并浓缩，经硅胶柱层析纯化，得到化合物222(450mg)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝1029.3[M/2+H]⁺；t_R＝10.506min。

在室温下，将化合物222(450mg,0.21mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL)中，搅拌2小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物223(53.3mg，11.8％)，为白色粉末。LCMS:m/z＝840.5[M/2+H]⁺；t_R＝7.782min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.33–7.23(m,5H),7.11(d,J＝8.6Hz,2H),6.81(d,J＝8.8Hz,2H),4.57(s,2H),4.52(s,2H),4.36(d,J＝8.4Hz,3H),4.05(t,J＝6.2Hz,2H),3.93–3.80(m,10H),3.75(m,6H),3.66(t,J＝6.1Hz,2H),3.61–3.55(m,5H),3.50–3.38(m,13H),3.14(s,7H),2.75(d,J＝7.7Hz,3H),2.60(d,J＝7.9Hz,2H),2.37(m,6H),2.05(m,3H),1.90–1.79(m,2H),1.49(d,J＝18.6Hz,13H),1.28(d,J＝13.6Hz,27H)。

实施例61

化合物225的制备

在冰浴下，将化合物45(76mg,0.155mmol)溶于DMF(5mL)，加入DIPEA(21mg,0.16mmol)和化合物219(46mg,0.039mmol)。常温搅拌1小时。反应液倒入水中并加入乙酸乙酯(3X10mL)萃取，用无水硫酸钠干燥,过滤并减压浓缩，经硅胶柱层析纯化(MeOH：DCM＝0-12％)，得到化合物224(65mg,79％)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝1050.3[M/2+H]⁺；t_R＝9.392min。

在0℃下，将化合物224(65mg,0.03mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL)，室温下搅拌1小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物225(2.1mg,3.9％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝861.5[M/2+H]⁺；t_R＝8.108min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.34–7.23(m,5H),7.11(d,J＝8.6Hz,2H),6.81(d,J＝8.6Hz,2H),4.52(s,2H),4.37(s,1H),4.35(s,1H),4.05(t,J＝6.2Hz,2H),3.87(m,9H),3.79–3.71(m,6H),3.66(t,J＝6.2Hz,2H),3.58(d,J＝3.0Hz,3H),3.53–3.41(m,10H),3.37(m,4H),3.17–3.10(m,6H),2.75(m,4H),2.64–2.58(m,2H),2.45–2.40(m,2H),2.36(t,J＝6.7Hz,4H),2.05(m,3H),1.99(d,J＝14.9Hz,9H),1.88(m,2H),1.56–1.43(m,12H),1.28(m,30H)。

实施例62

化合物227的制备

在0℃下，将化合物50(153mg,0.304mmol)溶于DMF(2mL)，加入DIPEA(44mg,0.34mmol)和化合物219(90mg,0.076mmol)。常温搅拌1小时。反应液倒入水(30mL)中并加入乙酸乙酯(3X10mL)萃取，用硫酸钠干燥,过滤并减压浓缩，经硅胶柱层析纯化(MeOH：DCM＝0-12％)，得到化合物226(60mg)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝1071.3[M/2+H]⁺；t_R＝11.369min。

在0℃下，将化合物226(60mg,0.026mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL)，室温下搅拌1小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物227(5.9mg,40％)。

LCMS:m/z＝882.4[M/2+H]⁺；t_R＝8.451min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.31(d,J＝4.9Hz,5H),7.11(d,J＝8.5Hz,2H),6.81(d,J＝8.4Hz,2H),4.52(s,2H),4.36(d,J＝8.3Hz,3H),4.04(t,J＝6.2Hz,2H),3.96–3.81(m,9H),3.80–3.70(m,6H),3.66(t,J＝6.2Hz,2H),3.61–3.54(m,5H),3.51–3.34(m,12H),3.13(d,J＝6.5Hz,6H),2.75(d,J＝9.6Hz,4H),2.61(s,2H),2.37(m,6H),2.05(m,3H),1.97(s,8H),1.86(s,2H),1.50(d,J＝25.0Hz,12H),1.27(d,J＝14.7Hz,39H)。

实施例63

化合物230的制备

将VcNa(50mg)和CuSO₄(50mg)溶于水(3mL)中，加入到化合物228(400mg，0.8mmol，制备方法同化合物152)的叔丁醇(5mL)和四氢呋喃(1mL)溶液中，然后在0℃下加入化合物198(100mg,0.17mmol)的四氢呋喃(4mL)溶液，常温下搅拌反应18小时。反应完成后，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取混合物。用NaHCO₃水溶液(30mL)清洗有机相，硫酸钠干燥，过滤并浓缩，经硅胶柱层析纯化，得到化合物229(700mg,95％)，为无色油状物。

LCMS:m/z＝1026.2[M/2+H]⁺；t_R＝1.982min。

在室温下，将化合物229(600mg，0.3mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL)中，搅拌18小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物230(54mg,11％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝1670.4[M/2+H]⁺；t_R＝7.636min。

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ8.01(s,1H),7.80(s,2H),7.36–7.21(m,5H),7.03(d,J＝8.5Hz,2H),6.79(d,J＝8.6Hz,2H),4.52(s,2H),4.47–4.36(m,9H),4.35–4.30(m,2H),4.27(t,J＝7.1Hz,4H),4.06–3.98(m,5H),3.88(m,3H),3.78–3.70(m,5H),3.66(t,J＝6.3Hz,3H),3.57(m,5H),3.49(t,J＝6.0Hz,3H),2.85(m,4H),2.75–2.66(m,3H),2.64–2.57(m,3H),2.51–2.38(m,2H),2.03(m,2H),1.96(s,9H),1.88–1.77(m,6H),1.76–1.69(m,2H),1.59–1.49(m,6H),1.36(m,6H),1.26(m,6H)。

实施例64

化合物232的制备

在0℃下，向叔丁醇(4mL)和四氢呋喃(2mL)的混合溶液中加入化合物161(144mg,0.28mmol)。随后加入溶于水(3mL)的VcNa(20mg,0.14mmol)和CuSO₄(20mg,0.12mmol)，最后加入溶于四氢呋喃(4mL)的化合物198(50mg,0.09mmol)。反应在室温下搅拌16小时。反应液倒入水中并加入乙酸乙酯(3X10mL)萃取，用硫酸钠干燥,过滤并减压浓缩后得到化合物231(310mg,61％)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝1068.6[M/2+H]⁺；t_R＝1.33min。

在0℃下，将化合物231(100mg,0.05mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL)中，室温下搅拌3小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物232(14mg,18.4％)。

LCMS:m/z＝879.2[M/2+Na]⁺；t_R＝8.224min。

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ8.32(t,J＝5.3Hz,2H),8.09(t,J＝5.6Hz,1H),8.01(s,1H),7.82(s,2H),7.62(m,2H),7.34–7.24(m,5H),7.02(m,2H),6.79(m,1H),4.48(s,2H),4.36–4.17(m,16H),3.99(m 3H),3.83(m 5H),3.74(s,1H),3.70(m,4H),3.63–3.55(m,9H),3.35–3.26(m,9H),2.81–2.71(m,3H),2.58(m,5H),2.44–2.37(m,2H),2.33(s,1H),1.97(m,2H),1.80(m,8H),1.72(m,5H),1.66–1.58(m,2H),1.46(m,6H),1.20(s,24H)。

实施例65

化合物235的制备

将化合物161(500mg,0.97mmol)溶于甲醇(50mL)中，加入钯碳(50mg,0.97mmol)，氢气置换后，室温搅拌过夜。反应液过滤并减压浓缩后得到化合物233粗品(150mg)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝491.2[M+H]⁺；t_R＝1.48min。

在0℃下，将化合物233(150mg,0.31mmol)和DIEA(98mg,0.76mmol)溶于DMF(2mL)中，加入化合物219(90mg,0.076mmol)，反应室温搅拌过夜。反应液倒入水中并加入乙酸乙酯(3X10mL)萃取，有机相用硫酸钠干燥,过滤并减压浓缩。经硅胶柱层析纯化(MeOH/DCM＝25％)，得到化合物234(250mg,38.8％)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝1053.6[M/2+H]⁺；t_R＝2.05min。

在0℃下，将化合物234(100mg,0.05mmol)溶于氨的甲醇溶液(3mL)，室温下搅拌3小时。将混合物浓缩以得到残留物。经反相制备HPLC纯化，得到化合物235(17mg,35.8％)。

LCMS:m/z＝864.3[M/2+Na]⁺；t_R＝8.064min。

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ7.86(s,3H),7.80(m,2H),7.62(d,J＝9.4Hz,3H),7.36–7.22(m,5H),7.10(m,2H),6.81(m,2H),4.61(m,6H),4.50(s,2H),4.48(s,2H),4.28(m,2H),4.00(m,2H),3.83(m,3H),3.70(s,3H),3.58(t,J＝6.2Hz,3H),3.49(m,9H),3.32(m,7H),3.27(m,4H),3.20(d,J＝6.3Hz,5H),3.00(m,6H),2.63–2.53(m,10H),2.26(m,2H),2.20(m,4H),2.01–1.94(m,2H),1.81(m,8H),1.72(s,2H),1.47(s,6H),1.36(s,6H),1.21(m,24H)。

实施例66

化合物245的制备

/>

将6-叠氮基-1-己醇(11g，76.82mmol)溶解于100mL无水四氢呋喃中，冷却至0℃，向混合溶液中加入氢化钠(60％矿物油，4.6g，115.23mmol),将反应混合物在0℃下搅拌10分钟，加入溴化苄(15.7g，93.19mmol),将反应混合物在室温下搅拌16小时后，加入200mL乙酸乙酯和200mL水，分离有机层，用乙酸乙酯(2×100mL)萃取水层。合并的有机层用100mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。粗产物经硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝10％)，得到化合物236(13.5g，75％)，为无色油状物。

LCMS:m/z＝206.2[M-N₂+H]⁺；t_R＝2.38min。

将化合物236(13.5g，57.86mmol)溶解在60mL的THF:H₂O(6:1)溶液中，0℃下加入PPh₃(22.7g,86.79mmol)。然后将混合液在室温下搅拌16小时。LCMS显示反应完成。使用200mL二氯甲烷萃取反应液3次，200mL饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏得到粗品。粗品经硅胶柱层析纯化(DCM：MeOH＝10：1)，得到化合物237(8.0g，66％)，为淡黄色油状液体。

LCMS:m/z＝208.2[M+H]⁺；t_R＝1.559min。

¹HNMR(400MHz,Methanol-d₄)δ7.42–7.17(m,5H),4.48(s,2H),3.49(t,J＝6.5Hz,2H),2.66–2.59(m,2H),1.65–1.56(m,2H),1.52–1.31(m,6H)。

将化合物237(5.4g，26.05mmol)溶解在50mL二氯甲烷中，加入三乙胺(7.9g，78.15mmol)。将混合液在冰浴中搅拌反应15分钟，在0℃下加入戊二酸酐(3.3g，26.05mmol)。然后将混合液在室温下搅拌16小时。LCMS显示反应完成，粗品用200mL二氯甲烷稀释，然后柠檬酸(5％，2X200mL)洗涤两次，减压浓缩得到化合物238粗品(6.7g，75％)，为淡黄色油状物，直接用于下一步反应。LCMS:m/z＝322.7[M+H]⁺；t_R＝9.426min。

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ11.99(s,1H),7.74(m,1H),7.38–7.24(m,5H),4.44(s,2H),3.41(t,J＝6.5Hz,2H),3.00(m,2H),2.18(t,J＝7.4Hz,2H),2.06(t,J＝7.4Hz,2H),1.69(m,2H),1.57–1.48(m,2H),1.41–1.21(m,6H)。

在0℃下,将化合物238(3.0g，9.33mmol)溶解于20mL DMF溶液中,加入DIPEA(12mL，74.64mmol)，搅拌15分钟，在冰浴下加入三氟乙酸五氟苯酯(3.1g，11.20mmol)。然后混合液在室温下搅拌16小时。LCMS表明反应已经完成。用100mL乙酸乙酯萃取反应液三次，用100mL饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空减压浓缩得到粗产物。通过硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯∶石油醚＝4∶5)，得到化合物239(3.1g，68％)，为白色固体产物。

LCMS:m/z＝488.2[M+H]⁺；t_R＝2.318min。

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ7.81(m,1H),7.38–7.23(m,5H),4.43(s,2H),3.41(t,J＝6.5Hz,2H),3.03(m,2H),2.78(m,2H),2.18(t,J＝7.3Hz,2H),1.87(m,2H),1.58–1.46(m,2H),1.41–1.23(m,6H)。

化合物174(8.0g,17.88mmol)溶解于40mL乙腈中，0℃加入N-乙基二异丙胺(18.5g,143.04mmol)，搅拌十分钟，冰浴下加入化合物239(8.7g,17.88mmol)。混合液室温搅拌2小时。液质显示得到产物分子量。真空浓缩得到粗产物，通过硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝10:1)，得到化合物240(12g,89％)，为淡黄色产物。

LCMS:m/z＝752.0[M+H]⁺；t_R＝11.363min。

将化合物240(11.0g,14.65mmol)溶解于50mL四氢呋喃中，加入LiOH(146mL,1N)，混合液在氮气保护下室温搅拌3小时，液质显示获得目标MS，减压浓缩除去四氢呋喃，冰浴下滴加3N盐酸调节pH到3，水相使用200mL乙酸乙酯萃取三次，有机相使用20

0mL饱和食盐水洗涤三次,无水硫酸钠干燥。有机相减压浓缩得到化合物241(9.2g,88％)，为淡黄色油状物。

LCMS:m/z＝709.4[M+H]⁺；t_R＝1.871min。

化合物241(9.2g,12.98mmol)溶解于50mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入N-乙基二异丙胺(13.4g,103.8mmol)，混合液冰浴下搅拌10分钟，加入三氟乙酸无氟苯酯(14.5g,51.92mmol)，然后混合液氩气保护下室温搅拌过夜。液质显示反应已经完成。有机相使用500mL乙酸乙酯稀释，100mL饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥。减压浓缩得到粗产品。通过硅胶柱层析纯化(PE/EA＝5:4)，得到化合物242(13g,82％)，为黄色油状物。

LCMS:m/z＝1207.3[M+H]⁺；t_R＝8.224min。

将化合物178(1.2g,2.8mmol)溶解于20mL乙腈中，加入N-乙基二异丙胺(606mg,4.69mmol)，冰浴下搅拌10分钟，加入化合物242(700mg,0.67mmol)并在室温下搅拌2小时。反应完成之后加入30mL水，30mL乙酸乙酯萃取三次，有机相使用30mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到粗产品，通过硅胶柱层析纯化(DCM:MeOH＝0-25％)，得到化合物243(1.5g,75％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝998.2[M/2+H]⁺；t_R＝9.876min。

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ7.86–7.73(m,7H),7.38–7.24(m,5H),5.21(m,3H),4.97(m,3H),4.48(m,3H),4.42(m,3H),4.05–3.99(m,9H),3.87(m,4H),3.69(m,3H),3.49(m,6H),3.40(m,6H),3.21(s,6H),3.01(m,J＝12.8,6.5Hz,8H),2.25(m,9H),2.11–2.05(m,11H),1.99(s,9H),1.89(s,9H),1.77(s,9H),1.61–1.19(m,39H)。

将化合物243(480mg,0.24mmol)溶解于50mL乙酸乙酯:甲醇＝1:1的混合溶液中，加入10％Pd/C(300mg)，然后混合液室温搅拌30分钟。液质显示反应已经完成。过滤，滤液减压浓缩得到粗产物。通过硅胶柱层析纯化(DCM/MeOH＝20:1-10:1)，得到化合物244(400mg,87％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝953.2[M/2+H]⁺；t_R＝8.453min。

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ7.86–7.71(m,7H),5.21(d,J＝3.4Hz,3H),4.96(m,3H),4.48(d,J＝8.5Hz,3H),4.41(d,J＝9.0Hz,1H),4.33(s,1H),4.06–3.98(m,9H),3.85(m,4H),3.70(m,3H),3.49(t,J＝6.2Hz,6H),3.45–3.34(m,6H),3.22(s,6H),3.01(m,8H),2.25(m,9H),2.13–2.05(m,11H),1.99(s,9H),1.89(s,9H),1.77(s,9H),1.38(m,39H)。

化合物244(0.3g,0.17mmol)和二异丙基铵盐四氮唑(29mg,0.17mmol)溶解于3mL超干二氯甲烷中，加入500mg 4A分子筛，在氩气保护下室温搅拌1小时。冰浴下将双(二异丙基氨基)(2-氰基乙氧基)膦(0.1g,0.34mmol)加入混合液中，混合液室温搅拌2小时。使用25mL二氯甲烷稀释反应液，过滤除去分子筛，使用10mL饱和碳酸氢钠洗涤两次，10mL饱和食盐水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，有机相浓缩得到粗产品，粗产品使用10mL甲基叔丁基醚打浆多次，使用油泵拉除溶剂30～60分钟，氢谱，磷谱检查结构正确。最终得到化合物245(100mg,56％)，为白色固体。

LCMS:m/z＝1011.5[(M-iPr₂NH+H₂O)/2+H]⁺；t_R＝8.574min。

¹HNMR(400MHz,DMSO)δ7.83–7.71(m,7H),5.21(m,3H),4.97(m,3H),4.49(m,3H),4.41(d,J＝10.0Hz,1H),4.01(m,9H),3.87(m,4H),3.75–3.66(m,5H),3.65–3.33(m,14H),3.22(s,6H),3.01(m,J＝12.7,6.4Hz,8H),2.75(m,2H),2.26(m,9H),2.10(s,11H),1.99(s,9H),1.89(s,9H),1.77(s,9H),1.61–1.20(m,39H),1.13(m,12H)。

³¹PNMR(162MHz,DMSO)δ146.36(s)。

实施例67

用于通过固相技术制备5’末端包含GalNAc₃的ASO缀合物的一般方法(化合物246的制备)

除非另外说明，否则用于合成低聚化合物的所有试剂和溶液均购自商业来源。使用标准亚磷酰胺结构单元和固体载体来掺入核苷残基，所述核苷残基包括例如T、A、G以及^mC残基。使用亚磷酰胺化合物245(0.1M)来合成5’末端处的磷酸二酯连接的GalNAc缀合物。使用的所有单体(β-D-2’-脱氧核糖核苷和β-D-2’-(甲氧基乙基)核糖核苷)的亚磷酰胺溶液均为0.06M在无水乙腈中的溶液。

在LK-48E(1-2μmol规模)上装填Universal CPG固体载体做成的2umol合成柱，并使用亚磷酰胺偶联方法来进行指定序列合成。对于偶联步骤，以超过固体载体上的负载量4倍的量递送亚磷酰胺单体并且持续10min进行亚磷酰胺缩合。所有其它步骤均按照制造商供应的标准方案。使用3％三氯乙酸在二氯甲烷中的溶液来从核苷酸的5’-羟基上去除二甲氧基三苯甲基(DMT)。无水乙腈中的BTT(0.35M，含0.5％NMI)用作偶联步骤过程中的活化剂。通过用二硫化二苯乙酰(PADS)在1:1吡啶/乙腈中的0.2M溶液硫化3分钟的接触时间来引入硫代磷酸酯键联。通过用I₂在THF/Pyridine中的0.05M溶液氧化2分钟的接触时间来引入亚磷酸酯键。

在合成完指定的序列之后。将固体载体结合的指定序列悬浮在氨水(25wt％-30wt％)中并且在55℃下加热2h。然后过滤掉固相载体并且将氨减压去除。残余物通过高压液相色谱法纯化。

制备的寡核苷酸246序列(5’至3’)：GalNAc_3o-G(MOE)^mC(MOE)A(MOE)G(MOE)A(MOE)GGTGAAG^mCGAA(MOE)G(MOE)T(MOE)G(MOE)^mC(MOE)。下标“o”表示磷酸二酯键联，相邻核苷间键联均是硫代磷酸酯。硫代寡核苷酸的序列长度为20个碱基，采用gapmer模式，中间10个单体为β-D-2’-脱氧核糖核苷，两端各5个单体为β-D-2’-(甲氧基乙基)核糖核苷。每个“^mC”表示此核苷包含5-甲基胞嘧啶核碱基。GalNAc_3o-表示具有下式的基团：

通过使用MS分析表征5’末端包含GalNAc3的寡核苷酸缀合物246：计算分子量，8931.4；观察分子量，8932.9。

制备缀合物方法为本领域常规合成方法，本发明其它靶向化合物亦可按实施例66所述方法制备得到亚磷酰胺化合物后，通过本实施例方法与寡核苷酸偶联得到相应缀合物。

实施例68

通过固相技术制备5’末端包含GalNAc3的缀合物的ASO

使用实施例67中说明的一般工序制备包含GalNAc3的寡核苷酸缀合物248-258，序列如下表所示：

/>

其中，下标“o”表示磷酸二酯键联，相邻核苷间键联均是硫代磷酸酯；“(MOE)”表示此核苷为β-D-2’-(甲氧基乙基)核糖核苷；“(cEt)”表示此核苷含4'-CH(CH3)-O-2’桥的双环糖部分；“^mC”表示此核苷包含5-甲基胞嘧啶核碱基。相邻核苷间键联均是硫代磷酸酯。

GalNAc_3o-表示具有下式的基团：

实施例69ASGPR竞争结合实验

(1)小鼠原代肝细胞的制备：

清洗灌流泵，75％酒精，清洗5分钟。检查所有仪器和按如下配方配置各种缓冲液。

10X HBSS：pH7.2-7.4

	1L
		NaCl	80g
Na₂HPO₄	0.477g
		KCl	4g
KH₂PO₄	0.6g
		D-Glucose	10g
HEPES(1M)	100mL

加超纯水定容至1L,4℃保存.

灌流液：pH7.3-7.4(25mL/只)

	1L
		10X HBSS	100mL
HEPES(1M)	10mL
		EGTA(0.5M)	2mL

加超纯水定容至1L,4℃保存，使用前放37℃预热

消化液:pH7.3-7.4(50mL/只)

加超纯水定容至1L,现用现配，使用前放37℃预热

1X HBSS

	1L
		10X HBSS	100mL
HEPES(1M)	1mL

加超纯水定容至1L,现用现配，使用前放37℃预热

将1只雄性C57BL/6小鼠利用CO₂安乐死之后立即进行后续操作。用75％乙醇擦拭小鼠皮肤。开腹，移开内脏，露出肝门静脉。将导管插入肝门静脉，切断下腔静脉，连接导管，开始灌注，25mL(3mL/分)。开始肝脏消化液灌注，50mL(3mL/分)。取出肝脏，放入10cm培养皿中配制好的20mL 1X HBSS中。剥去肝表面包膜，轻轻摇一摇肝脏，使肝细胞散开。70um细胞过滤网过滤细胞,离心5分钟(50g或500rpm)。去上清，加20ml PBS重悬细胞，离心5分钟(50g或500rpm)。去上清，加20ml DMEM培养基重悬细胞。

(2)竞争对比实验：

运用对照GalNAc(本实验中称为iGalNAc，结构为Ionis公司的THAGN3)与本发明设计的GalNAc(本发明化合物)竞争结合肝脏细胞，通过检测Cy5的荧光强度来确定GalNAc的结合能力。对照iGalNAc有两种形式：一种为不带荧光染料的iGalNAc,另外一种为在iGalNAc接上荧光染料Cy5(iGalNAc-Cy5)，结构如下：

将灌流之后取好的原代肝细胞用DMEM培养基重悬，均分在1.5mL EP管中(250uL)。向所有实验组和对照组管子中加入相同量的iGalNAc-Cy5(终浓度1uM)，在对照管组管子中加入iGalNAc(终浓度1uM)，实验组管子中分别加入本发明的GalNAc(终浓度1uM)，如果本发明设计的GalNAc比iGalNAc与原代肝细胞的ASGPR的结合能力强，则iGalNAc-Cy5结合在细胞上的量会受到竞争减少，荧光强度对比对照组会有所下降。37℃避光孵育45分钟。4℃，1000rpm离心3分钟，去上清。加入250uL PBS清洗细胞，4℃，1000rpm离心3min，加入300uLPBS重悬细胞。用流式细胞仪检测20000个细胞中Cy5的荧光强度。统计各样品中细胞的平均荧光强度，计算与对照组之间的强度比，结果见表1，表中平均值代表了荧光的平均强度，对照组为iGalNAc。通过对比荧光强度可以发现本发明多个GalNAc比iGalNAc与原代肝细胞的结合能力更强。

表1

(3)梯度竞争对比实验：

将灌流之后取好的原代肝细胞用DMEM培养基重悬，均分在1.5mL EP管(250uL)。在上一步的管子中加入相同量的iGalNAc-Cy5(终浓度1uM)，对照组设置6个浓度，分别加入0uM,0.02uM,0.1uM,0.5uM,2.5uM,12.5uM的iGalNAc，实验组设置同样的浓度，加入相同浓度梯度的化合物16进行竞争实验。37℃避光孵育45分钟。4℃，1000rpm离心3分钟，去上清。加入250uL PBS清洗细胞，4℃，1000rpm离心3分钟，加入300uL PBS重悬细胞。用流式细胞仪检测20000个细胞中Cy5的荧光强度。统计各样品中细胞的平均荧光强度，计算与对照组之间的强度比。化合物16、iGalNAc与ASGPR竞争结合强度对比图见图1及表2。

表2

结果显示，在不同浓度下，化合物16均比iGalNAc具有更好的ASGPR结合能力，显示了更高的肝靶向性。

实施例70HepG2细胞自由摄取试验

本实验目的是通过细胞自由摄取试验评价本发明应用的GalNAc3递送系统的递送效率。本实验使用寡核苷酸246与247进行对比实验，两者寡核苷酸的序列和修饰相同，5’-O-缀合物基团不同。寡核苷酸247序列(5’至3’)：THAGN_3o-G(MOE)^mC(MOE)A(MOE)G(MOE)A(MOE)GGTGAAG^mCGAA(MOE)G(MOE)T(MOE)G(MOE)^mC(MOE)。其中，下标“o”表示磷酸二酯键联，相邻核苷间键联均是硫代磷酸酯；“(MOE)”表示此核苷为β-D-2’-(甲氧基乙基)核糖核苷；“(cEt)”表示此核苷含4'-CH(CH3)-O-2’桥的双环糖部分；“^mC”表示此核苷包含5-甲基胞嘧啶核碱基。THAGN_3o-表示具有下式的基团：

本实验所用HepG2细胞为HBV高表达的稳转细胞系。本实验所用的ASO可以在细胞水平显著敲降稳转细胞系内表达的HBV基因mRNA，通过检测HBV mRNAe水平可定量评价ASO在细胞水平上的活性。将表达HBV基因的HepG2细胞接种于24孔板中，每孔1.5x10⁵个细胞，放置37℃培养箱培养。第二天，所有细胞更换新鲜的培养基，将寡核苷酸246和247分别加到培养的HepG2细胞中,寡核苷酸终浓度分别为5uM，10uM，20uM，37℃培养箱培养24小时后用Trizol处理细胞提取RNA以获得的RNA为模板利用mmlv逆转录酶进行反转录获得cDNA。之后以cDNA为模板，以ACTB为内参基因利用实时荧光定量PCR检测HBV基因的表达，并采用2^^-ΔΔCT方法进行数据分析。与未加寡核苷酸的细胞组对比，计算寡核苷酸的敲降效率。基因的敲降效果图见图2和表3。结果显示，本发明的GalNAc_3o-配体较已商业化产品中使用的THAGN_3o-配体能更高效地将ASO载荷递送至肝细胞发挥药理作用。

表3

	0nM	5uM	10uM	20uM
					246	100.0037	72.5413	32.95819	13.22812
247	100.0306	83.51727	44.25163	29.95724

以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明权利要求保护的范围。

Claims

1.具有如式(1)、式(2)或式(3)所示的靶向化合物，

优选的，A选自-OH、-N₃、及如下结构：

X选自-O-、-S-、-CH₂-的任一种；

Y选自-O-、-S-、-C(O)-的任一种；

Z选自碳原子或氮原子，

优选地，选自苯环、取代苯环、哌啶、取代哌啶；

优选地，选自/>

Link1结构为：

其中，

n1＝1-3，

n2＝0-1，

n3＝0-1，

n4＝0-1，

n5＝0-2，

n6＝0-1，

n7＝0-1，

n8＝0-3，

n9＝2-15，

且n2，n3，n4，n5，n6，n7，n8不同时为0，

0≤n2+n3+n4+n6+n7+n8≤5，优选地，1≤n2+n3+n4+n6+n7+n8≤4，

亚杂环基选自亚三氮唑基、亚四氮唑基、亚吡咯烷基、亚哌啶基、亚哌嗪基、亚哌啶螺吖丁啶基的任一种；优选如下结构：

优选的，

link1结构选自下述结构片段任一种：

-(CH₂)_n1-亚杂环基-(CH₂)_n9-，其中，n1＝1-3，n9＝7-10，

-(CH₂)_n1-CO-亚杂环基-CO-(CH₂)_n9-，其中，n1＝1-3，n9＝4-5，

-(CH₂)_n1-CONH-(CH₂)_n9-，其中，n1＝1-3，n9＝6-10，

-(CH₂)_n1-NHCO-(CH₂)_n9-，其中，n1＝1-3，n9＝6-10；

Link2结构选自下述结构片段任一种：

-(CH₂)_n10-OBn，其中，n10＝5-15，优选的，n10＝8-10，

当Z选N时，Y-link2选自-Cbz、-Fmoc、-Boc、中的任一种。

2.下述配体化合物的任一种：

/>

3.下述中间体或其游离基团的任一种：

4.权利要求1-2任一项的靶向配体部分与功能剂通过磷酸酯连接形成的缀合物，优选地，所述功能剂选自药物分子，更优选地，所述药物分子选自反义寡核苷酸(ASO)、小干扰RNA(siRNA)、生物活性多肽、抗体、小分子药物的任一种或其组合。

5.化合物243靶向配体部分与功能剂通过磷酸酯连接形成的缀合物，

其中，OLIGO为反义寡核苷酸，其通过5′末端通过磷酸酯与靶向配体部分连接；

优选地，所述反义寡核苷酸的序列选自SEQ ID NO:1-12；

更优选地，所述反义寡核苷酸结构如下：

^mC(MOE)G(MOE)^mC(MOE)T(MOE)G(MOE)GTG^mCTG^mC^mCTGT(MOE)A(MO E)G(MOE)T(MOE)G(MOE)；

G(MOE)^mC(MOE)A(MOE)A(MOE)T(MOE)GT^mCA^mC^mCTTT^mCA(MOE)T(MO E)A(MOE)^mC(MOE)^mC(MOE)；

^mC(MOE)A(MOE)T(MOE)T(MOE)T(MOE)TGATTGTG^mCAG(MOE)T(MOE)A(MOE)A(MOE)G(MOE)；

G(MOE)A(MOE)G(MOE)^mC(MOE)A(MOE)G^mCT^mCAG^mCAG^mCT(MOE)^mC(M OE)^mC(MOE)T(MOE)^mC(MOE)；

^mC(cEt)^mC(cEt)A(cEt)^mCGGA^mCAT^mCGG^mC(cEt)A(cEt)^mC(cEt)；

^mC(cEt)^mC(cEt)T(cEt)^mCGGAA^mCG^mCAAG(cEt)G(cEt)^mC(cEt)；

G(cEt)T(cEt)^mC(cEt)TAGAAAAGTTG(cEt)G(cEt)^mC(cEt)；

G(cEt)A(cEt)T(cEt)^mCTTGATGG^mC^mCA(cEt)^mC(cEt)^mC(cEt)；

G(MOE)^mC(MOE)A(MOE)G(MOE)A(MOE)GGTGAAG^mCGAA(MOE)G(MOE)T(MOE)G(MOE)^mC(MOE)。

其中，相邻核苷间键联均是硫代磷酸酯；(MOE)表示此核苷为核糖核苷；(cEt)表示此核苷含4'-CH(CH3)-O-2’桥的双环糖部分；“^mC”表示此核苷包含5-甲基胞嘧啶核碱基。

6.权利要求1-2任一项所述的配体化合物在制备肝脏靶向缀合物中的应用。

7.权利要求4-5任一项所述的缀合物在制备肝脏靶向药物中的应用。

8.一种药物组合物，其含有权利要求4-5任一项所述的缀合物。

9.一种化合物，结构如下：GalNAc_3o-G(MOE)^mC(MOE)A(MOE)G(MOE)A(MOE)GGTGAAG^mCGAA(MOE)G(MOE)T(MOE)G(MOE)^mC(MOE)；下标“o”表示磷酸二酯键联，相邻核苷间键联均是硫代磷酸酯；每个(MOE)表示此核苷为β-D-2’-(甲氧基乙基)核糖核苷；每个“^mC”表示此核苷包含5-甲基胞嘧啶核碱基；GalNAc_3o-表示具有下式的基团，其与寡核苷酸5’端的氧原子连接：

10.权利要求9所述化合物在制备用于治疗乙型肝炎病毒感染疾病的药物中的用途。