CN117899269A - 一种生物假体组织的抗钙化方法及生物假体组织 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种生物假体组织的抗钙化方法及生物假体组织，方法包括：将至少被部分交联固定的生物假体组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，所述脱脂溶液包括含表面活性剂的醇溶液；将脱脂处理后的生物假体组织放入含有还原剂的溶液中进行还原处理。本发明提供的生物假体组织的抗钙化方法可以解决现有技术中存在的抗钙化方法抗钙化效果不理想、抗钙化处理后导致组织性能下降的问题。

Description

一种生物假体组织的抗钙化方法及生物假体组织
技术领域
本发明涉及医疗设备技术领域，特别涉及一种生物假体组织的抗钙化方法及生物假体组织。
背景技术
目前，临床上常用的生物瓣膜，以及生物补片，如牛心包、小肠粘膜下层等所用动物源性胶原纤维组织材料通常使用化学试剂如戊二醛和/或甲醛贮存或用所述化学试剂进行交联固定处理。该类固定方法通常会导致生物假体组织存在残余醛基，大量研究显示经甲醛/戊二醛固定处理的生物假体组织在植入后会引起体内钙化。
现有技术中已报道过的生物假体组织抗钙化的处理方法有：脱细胞处理、醇处理、表面活性剂处理、金属离子竞争等方法。虽然上述方法具有一定的抗钙化效果，但在实际应用中并不理想，脱细胞处理的方法可以去除生物组织大多数的抗原和DNA，但会使生物组织变得疏松，导致生物假体组织的机械性能因此而下降。醇类处理的方法在短期抗钙化效果上良好，但无法清除生物假体组织上的残余醛基，因残留醛基存在，生物假体组织的远期钙化风险仍然很高。表面活性剂处理的方法可以去除生物假体组织中的磷脂，起到一定的抗钙化效果，但醛基作为钙化诱导因素仍然存在，导致生物假体组织的抗钙化效果不佳。金属离子竞争的方法可以结合生物假体组织现有的结合位点，起到一定的抗钙化效果，但同样并不能完全解决醛基长期钙化的诱导作用。
现有技术中公开了一种2-氨基油酸处理生物假体组织预防生物假体组织钙化的方法。该方案中，将经戊二醛固定的牛心包放进含有2-氨基油酸钠的硼酸钠缓冲溶液(pH11)中，标准温度下孵育过夜。体内植入显示，处理过的组织与未经处理的组织相比，其改善钙化效果明显。但Gott JP等采用幼羊模型进行换瓣研究发现，该方法改善瓣膜钙化的同时，容易导致组织疏松，心包毛面血肿等情况。
现有技术中还公开了一种对生物假体组织进行加帽处理减少钙化的方法。将经戊二醛固定的生物假体组织用20％乙醇漂洗，室温下暴露于含有乙醇胺和硼氢化钠的加帽溶液中4h，漂洗掉过量加帽溶液。小动物模型植入结果显示，与热固定生物假体组织相比，加帽处理可以减少生物假体组织的体内钙化；但该方法采用的加帽试剂具有强碱性，在强碱条件下，还原剂硼氢化钠极易产生气体，气体会充盈于生物假体组织内，破坏组织内部纤维结构，降低组织性能。
现有技术中另外还公开了一种双交联工艺，可以改善生物假体组织的抗钙化效果。其技术方案中将生物假体组织进行戊二醛热固定，对固定后的生物假体组织进行Jeffamine交联和硼氢化钠还原，然后对生物假体组织进行表面活性剂处理，可对组织进行保存和灭菌。小动物模型植入结果显示，与热固定生物假体组织相比，双交联工艺处理可以减少生物假体组织的体内钙化；但该工艺处理的生物假体组织同样具有强碱性，在强碱条件下，还原剂硼氢化钠极易产生气体，气体会充盈于生物假体组织内，破坏组织内部纤维结构，降低组织性能。
现有的生物假体组织抗钙化方法存在抗钙化效果不理想，以及处理后降低假体组织性能的风险，在抗钙化处理工艺上有很大的改善提高空间，以进一步满足生物假体组织性能与相容性的需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生物假体组织的抗钙化方法及生物假体组织，以解决现有技术中存在的抗钙化方法抗钙化效果不理想、抗钙化处理后导致组织性能下降的问题。
为解决上述技术问题，本发明提供一种生物假体组织的抗钙化方法，包括：
将至少被部分交联固定的生物假体组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，所述脱脂溶液包括含表面活性剂的醇溶液；
将脱脂处理后的生物假体组织放入含有还原剂的溶液中进行还原处理。
进一步，本发明提供的生物假体组织的抗钙化方法包括：
S1：选取至少被部分交联固定的生物假体组织进行清洗；
S2：将所述步骤S1中清洗后的生物假体组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理；
S3：将所述步骤S2中脱脂处理后的生物假体组织放入含有还原剂的溶液中进行还原处理；
S4：对所述步骤S3中经过还原处理后的生物假体组织进行清洗。
进一步的，生物假体组织的组织来源选自牛心包、猪心包、猪组织瓣膜、血管、皮肤、小肠粘膜下层、脑脊膜、膀胱内膜、韧带或肌腱。
进一步的，所述S1中对所述生物假体组织进行清洗采用的清洗液为无菌生理盐水或磷酸盐缓冲溶液。其中，磷酸盐缓冲溶液中磷酸盐的浓度可以为0.05-0.2mol/L，pH值为6.8-8.6。
进一步的，所述脱脂溶液中，表面活性剂的质量浓度为0.1％-10％。
进一步的，所述脱脂溶液中，醇的质量浓度为10％-90％。
进一步的，所述脱脂溶液为包含表面活性剂和醇的磷酸盐缓冲溶液，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05-0.2mol/L，溶液的pH值为6-8。
进一步的，所述S2中，对生物假体组织进行脱脂处理后，采用pH值为6.8-8.6浓度为0.05-0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液或无菌生理盐水对脱脂后的生物假体组织进行清洗。
进一步的，所述脱脂溶液中，醇选自甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇和山梨醇中的一种或几种组合。
进一步的，所述脱脂溶液中，表面活性剂选自非离子型表面活性剂、离子型表面活性剂和两性离子表面活性剂中的一种或几种组合。
进一步的，所述非离子型表面活性剂选自TritonX-100、吐温、葡糖苷类、甲基葡糖胺、N-十二烷基葡萄糖胺、糖基石胆酸酯两亲分子、糖酵素、洋地黄皂苷、烷基葡萄糖酰胺和椰油酰单乙醇酰胺中的一种或几种组合；
所述离子型表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠，脱氧胆酸钠、胆酸钠、肌氨酸、十二烷基聚氧乙烯醚硫酸酯钠和葡萄糖脂季铵盐中的一种或几种组合；
所述两性离子表面活性剂选自3-(3-(胆酰胺丙基)二甲氨基)丙磺酸内盐、磺基甜菜碱类、羧酸基甜菜碱、油酸基硫酸酯盐型咪唑啉、十二烷基氨基丙酸和氨基酸类表面活性剂中的一种或几种组合。
进一步的，所述含有还原剂的溶液中还原剂的质量浓度为0.01％-10％。
进一步的，所述含有还原剂的溶液中还原剂的质量浓度为0.02％-5％。
进一步的，所述含有还原剂的溶液中还原剂的质量浓度为0.02％-2％。
进一步的，所述含有还原剂的溶液为包含还原剂的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的浓度大于等于0.05mol/L，pH值为3.8-10.0。
进一步的，所述含有还原剂的溶液为包含还原剂的磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.05-0.5mol/L，pH值为6.8-8.6。
进一步的，所述S3中对所述生物假体组织进行还原处理时，进行一次或多次还原处理。
进一步的，所述S3中对所述生物假体组织进行还原处理时，进行2-6次还原处理。
进一步的，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自硼氢化物和/或硼烷类。
进一步的，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、硼氢化锌、三乙酰基硼氢化钠、硼氢化锂、乙硼烷、二甲胺基硼烷和硼烷叔丁胺中的一种或几种组合。
进一步的，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自还原性金属和/或其氢化物。
进一步的，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自氢化铝钠、二甲氧基乙氧基氢化铝、二异丁基氢化铝、锌粉和镁粉中的一种或几种组合。
进一步的，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自含硫还原剂或三乙基硅烷。
进一步的，所述含有还原剂的溶液中，所述含硫还原剂选自连二亚硫酸钠和/或亚硫酸氢钠。
进一步的，所述S4中，使用磷酸盐缓冲溶液或醇类溶液对还原处理后的生物假体组织进行清洗。其中，磷酸盐缓冲溶液的pH值为6.8-8.6，磷酸盐的浓度可以为0.05-0.2mol/L；醇类溶液中醇的体积分数可以为10％-50％。
本发明还提供了一种生物假体组织，采用如上所述的生物假体组织的抗钙化方法处理后制备得到。
综上所述，与现有技术相比，本发明提供的生物假体组织的抗钙化方法具有以下优点：
本发明创新性的采用了脱脂工艺结合还原剂还原的方法对生物假体组织进行抗钙化处理，其中脱脂工艺中使用的表面活性剂具有亲油亲水的性能，醇能够溶解材料内磷脂等小分子脂质，最终更好的去除生物材料中含有的脂质，还原工艺可以还原固定过程产生的席夫碱和残余的醛基，起稳定化学键的作用，不易水解，植入体内更加安全，两步法结合使得最终材料磷脂含量和残余醛基显著降低，具有更良好的抗钙化效果，且两步反应相互独立，工艺上易实现。
本发明采用的脱脂工艺中，选用的脱脂试剂水溶性良好，易渗透，可有效溶解组织中的磷脂，具有抗钙化效果好，对组织损伤小等优点。
进一步的，本发明中还原处理采用低浓度还原剂，可对生物假体组织进行多次还原处理，一方面降低还原剂浓度(还原剂比较活泼，易产生气体)，有利于减少气体产生速率，从而保护生物假体组织的结构免被气体损伤，对生物假体组织结构影响和破坏小，使还原处理过程更加温和；另一方面进行多次还原处理也保证了还原处理的效果可靠性。
本发明的抗钙化的处理方法工艺适应性强，对生物假体组织的性能影响较小，经处理的生物假体组织适用范围更广，既可以进行脱水干燥，EO灭菌，也可以进行液体存储和液体灭菌，组织可用于制造干态膜。
附图说明
图1为本发明实施例提供的一种生物假体组织的抗钙化方法的流程示意图；
图2为本发明实施例中各实施例组和对照组的钙化性能评估实验结果对比。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施方式对本发明提出的一种生物假体组织的抗钙化方法及生物假体组织作进一步详细说明。根据下面说明，本发明的优点和特征将更清楚。
在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
现有技术将生物材料加入到抗钙化液中处理，反应条件复杂，影响所得生物材料的性能。本发明的目的在于提供一种生物假体组织的抗钙化方法，以解决现有技术中存在的抗钙化方法抗钙化效果不理想、抗钙化处理后导致组织性能下降的问题。本发明采用的抗钙化处理方法，能够对生物材料残留醛基起到保护效果，工艺上易实现。
为实现上述思想，本发明提供一种生物假体组织的抗钙化方法，其步骤主要包括：将至少被部分交联固定的生物假体组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，所述脱脂溶液包括含表面活性剂的醇溶液；再将脱脂处理后的生物假体组织放入含有还原剂的溶液中进行还原处理。
本发明的技术方案中，采用两步处理法，其中脱脂工艺中使用的表面活性剂具有亲油亲水的性能，醇能够溶解材料内磷脂等小分子脂质，最终更好的去除生物材料中含有的脂质，还原工艺可以还原固定过程产生的席夫碱和残余的醛基，起稳定化学键的作用，最终材料磷脂含量和残余醛基的降低，具有更良好的抗钙化效果，工艺上易实现。
如图1所示，具体来说，在本发明的实施例中，生物假体组织的抗钙化方法可以进一步包括如下步骤：
S1：选取至少被部分交联固定的生物假体组织进行清洗；
S2：将所述步骤S1中清洗后的生物假体组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理；
S3：将所述步骤S2中脱脂处理后的生物假体组织放入含有还原剂的溶液中进行还原处理；
S4：对所述步骤S3中经过还原处理后的生物假体组织进行清洗。
步骤S1中，生物假体组织的组织来源可以是牛心包、猪心包、猪组织瓣膜、血管、皮肤、小肠粘膜下层、脑脊膜、膀胱内膜、韧带和肌腱等。交联固定生物假体组织可以采用业界常用的戊二醛来进行固定。固定后的生物假体组织采用清洗液进行清洗，以充分清洗掉生物假体组织内游离的戊二醛。清洗时，可以使用无菌生理盐水或pH值为6.8-8.6浓度为0.05-0.2mol/L的PBS缓冲液(磷酸盐缓冲溶液)进行清洗，清洗时可以在室温下反复清洗3-5遍，每遍清洗3-5min，以充分清洗掉生物假体组织内游离的戊二醛或甲醛，保证清洗效果。
本发明实施例的步骤S2中，对清洗后的生物假体组织浸入到脱脂溶液中进行脱脂处理是为了溶解生物假体组织中的油脂与磷脂，从而降低磷脂含量，从而起到生物假体组织的抗钙化效果。本发明的脱脂溶液可以是含表面活性剂的醇溶液，可以采用磷酸盐缓冲液配置，其中，表面活性剂的质量浓度可以为0.1％-10％(W/V)，醇的质量浓度为10％-90％(W/V)，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05-0.2mol/L，溶液的pH值为6-8。在将生物假体组织浸入到脱脂溶液中进行脱脂处理时，可以将反应容器放置到恒温振荡摇床中，设置温度15-50℃、转速50-200rpm，恒温振荡2-96h。在完成脱脂处理从脱脂溶液中取出生物假体组织后，进行后续步骤之前，还可以对脱脂处理后的生物假体组织进行清洗，可以使用pH值为6.8-8.6浓度为0.05-0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液或无菌生理盐水清洗3-5次，每次3-5min，清洗掉残留在组织上的脱脂溶液。
进一步的，本发明的实施方案中，上述脱脂溶液中的醇可以选自一元醇和/或多元醇，具体可以选自甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇和山梨醇中的一种或几种组合。
脱脂溶液中的表面活性剂则可以选自非离子型表面活性剂、离子型表面活性剂和两性离子表面活性剂中的一种或几种组合。其中，非离子型表面活性剂选自TritonX-100、吐温、葡糖苷类、甲基葡糖胺、N-十二烷基葡萄糖胺、糖基石胆酸酯两亲分子(GLC-1，GLC-2和GLC-3)、糖酵素(GDN)、洋地黄皂苷、烷基葡萄糖酰胺和椰油酰单乙醇酰胺中的一种或几种组合；离子型表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠，脱氧胆酸钠、胆酸钠、肌氨酸、十二烷基聚氧乙烯醚硫酸酯钠和葡萄糖脂季铵盐中的一种或几种组合；两性离子表面活性剂选自3-(3-(胆酰胺丙基)二甲氨基)丙磺酸内盐(CHAPS)、磺基甜菜碱类、羧酸基甜菜碱、油酸基硫酸酯盐型咪唑啉、十二烷基氨基丙酸和氨基酸类表面活性剂中的一种或几种组合。
在完成S2步骤的脱脂处理后，下一步就是利用还原剂对生物假体组织进行还原，利用还原剂将交联固定中生成的希夫碱和残余醛基、羧基等进行还原，从而起到稳定化学键的作用。适用于本发明S3步骤的还原剂有多种，例如，还原剂可以选自硼氢化物和/或硼烷类，具体可选自硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、硼氢化锌、三乙酰基硼氢化钠、硼氢化锂、乙硼烷(硼烷)、二甲胺基硼烷和硼烷叔丁胺中的一种或几种组合。
此外，还原剂还可以选自还原性金属和/或其氢化物，具体可选自氢化铝钠、二甲氧基乙氧基氢化铝、二异丁基氢化铝、锌粉和镁粉中的一种或几种组合。
本发明S3步骤中的还原剂还可以选自含硫还原剂或三乙基硅烷。其中，所述含硫还原剂可选自连二亚硫酸钠和/或亚硫酸氢钠。
进一步的，本发明S3步骤中的含有还原剂的溶液中，还原剂的质量浓度为0.01％-10％(W/V)，优选为0.02％-5％，更优选为0.02％-2％。本发明优选采用低浓度的还原剂对生物假体进行还原处理，可以避免高浓度的还原剂极易产生气体，防止气体充盈于生物假体组织内，破坏组织内部纤维结构，降低组织性能。
由于强碱环境会更易导致还原剂产生气体，影响生物假体组织的性能。进一步的，本发明含有还原剂的溶液采用磷酸盐缓冲液进行配置，可以进一步减少还原剂气体的产生，所述磷酸盐缓冲液的浓度大于等于0.05mol/L，pH值为3.8-10.0。优选的，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.05-0.5mol/L，pH值优选为6.8-8.6。在将生物假体组织放入到还原剂溶液中进行还原处理时，可以将反应容器放置到恒温振荡摇床中，设置温度15-50℃、转速50-200rpm，恒温振荡2-96h。
进一步的，由于本发明采用了较低浓度的还原剂对生物假体组织进行还原，减少了还原剂气体的产生，为了达到对生物假体组织内的希夫碱和残余醛基、羧基等进行充分还原的效果，本发明在采用还原剂溶液对生物假体组织进行还原处理时，进行一次或多次还原处理。即在利用还原剂溶液完成对生物假体组织的一次还原处理后，更换新的还原剂溶液，重复对生物假体组织再进行一次还原处理，如此反复多次，进行多次还原处理，以达到对生物假体组织的充分还原。优选的，本发明在采用还原剂溶液对生物假体组织进行还原处理时，进行2-6次还原处理，即在上述恒温振荡实验中，更换新的还原剂溶剂在相同条件下重复振荡2-6次。
完成对生物假体组织的还原处理后，执行S4步骤对生物假体组织进行清洗，可以使用pH值为6.8-8.6浓度为0.05-0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液或体积分数为10％-50％醇类溶液清洗3-5次，每次3-5min，清洗掉残留在组织上的还原剂。
可选的，在对生物假体组织完成清洗后，可对生物假体组织进行存储或后续处理，如干燥，灭菌等，处理后的生物假体组织组织还可用于制造干态膜。
本发明还提供了一种生物假体组织，采用如上所述的生物假体组织的抗钙化方法处理后制备得到。
为了进一步理解本发明，下面将结合更加详细具体的实施方式对本发明的优选方案进行描述，以凸显本发明提供的一种生物假体组织的抗钙化方法的特点和特征。这些描述只是举例说明本发明方法的特征和优点，而非限制本发明的保护范围。
实施例1
本实施例1提供的生物假体组织的抗钙化方法包括如下步骤：
生物假体组织清洗：将使用0.625％的戊二醛固定的牛心包组织从固定溶液中取出，放在生理盐水中清洗3次，每次清洗5min。
脱脂处理：将清洗完成的牛心包组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，脱脂溶液为：含20％(W/V)异丙醇和0.5％(W/V)十二烷基硫酸钠的0.1mol/L的PBS缓冲溶液，其pH值为7.40±0.1，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，25℃恒温震荡24h，完成后使用0.1mol/L的无菌PBS缓冲溶液清洗5次，每次清洗5min；
还原处理：将脱脂处理后的牛心包组织放入还原剂溶液中，还原剂溶剂为：含有0.1％(W/V)硼烷叔丁胺的0.1mol/L的PBS缓冲溶液，pH值为7.2，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，室温震荡4h。
重复还原处理：重复上述还原处理步骤2次。
完成对生物假体组织的还原处理后，对还原处理后的牛心包组织进行清洗，使用20％的乙醇溶液清洗5次，每次5min，得到抗钙化处理后的牛心包组织。
实施例2
本实施例2提供的生物假体组织的抗钙化方法包括如下步骤：
生物假体组织清洗：将使用0.625％的戊二醛固定的牛心包组织从固定溶液中取出，放在pH值为7.4的浓度为0.05mol/L的PBS缓冲溶液中清洗3次，每次清洗5min。
脱脂处理：将清洗完成的牛心包组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，脱脂溶液为：含60％(V/V)乙二醇和2.0％(W/V)吐温的0.2mol/L的PBS缓冲溶液，其pH值为7.2±0.1，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，25℃恒温震荡24h，完成后使用0.05mol/L的无菌PBS缓冲溶液清洗5次，每次清洗5min；
还原处理：将脱脂处理后的牛心包组织放入还原剂溶液中，还原剂溶剂为：含有0.05％(W/V)连二亚硫酸钠的0.05mol/L的PBS缓冲溶液，pH值为4.6，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，室温震荡4h。
重复还原处理：重复上述还原处理步骤4次。
完成对生物假体组织的还原处理后，对还原处理后的牛心包组织进行清洗，使用无菌生理盐水清洗5次，每次5min，得到抗钙化处理后的牛心包组织。
实施例3
本实施例3提供的生物假体组织的抗钙化方法包括如下步骤：
生物假体组织清洗：将使用0.625％的戊二醛固定的牛心包组织从固定溶液中取出，放在pH值为7.4的浓度为0.1mol/L的PBS缓冲溶液中清洗3次，每次清洗5min。
脱脂处理：将清洗完成的牛心包组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，脱脂溶液为：含30％(V/V)乙醇以及20％(V/V)丙三醇和5.0％(W/V)十二烷基硫酸钠的0.1mol/L的PBS缓冲溶液，其pH值为8.0±0.1，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，25℃恒温震荡24h，完成后使用0.2mol/L的无菌PBS缓冲溶液清洗5次，每次清洗5min；
还原处理：将脱脂处理后的牛心包组织放入还原剂溶液中，还原剂溶剂为：含有0.05％(W/V)三乙基硅烷的0.3mol/L的PBS缓冲溶液，pH值为7.8，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，室温震荡4h。
重复还原处理：重复上述还原处理步骤6次。
完成对生物假体组织的还原处理后，对还原处理后的牛心包组织进行清洗，使用20％乙醇溶液清洗5次，每次5min，得到抗钙化处理后的牛心包组织。
实施例4
本实施例4提供的生物假体组织的抗钙化方法包括如下步骤：
生物假体组织清洗：将使用0.625％的戊二醛固定的牛心包组织从固定溶液中取出，放在pH值为7.4的浓度为0.1mol/L的PBS缓冲溶液中清洗3次，每次清洗5min。
脱脂处理：将清洗完成的牛心包组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，脱脂溶液为：含50％(V/V)乙醇和10.0％(W/V)脱氧胆酸钠的0.1mol/L的PBS缓冲溶液，其pH值为7.6±0.1，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，25℃恒温震荡24h，完成后使用0.1mol/L的无菌PBS缓冲溶液清洗5次，每次清洗5min；
还原处理：将脱脂处理后的牛心包组织放入还原剂溶液中，还原剂溶剂为：含有0.05％(W/V)三乙酰基硼氢化钠的0.5mol/L的PBS缓冲溶液，pH值为8.6，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，室温震荡4h。
重复还原处理：重复上述还原处理步骤6次。
完成对生物假体组织的还原处理后，对还原处理后的牛心包组织进行清洗，使用20％乙醇溶液清洗5次，每次5min，得到抗钙化处理后的牛心包组织。
实施例5
本实施例5提供的生物假体组织的抗钙化方法包括如下步骤：
生物假体组织清洗：将使用0.625％的戊二醛固定的牛心包组织从固定溶液中取出，放在pH值为7.4的浓度为0.2mol/L的PBS缓冲溶液中清洗3次，每次清洗5min。
脱脂处理：将清洗完成的牛心包组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，脱脂溶液为：含60％(V/V)乙醇和4.0％(W/V)羧酸基甜菜碱的0.1mol/L的PBS缓冲溶液，其pH值为7.40±0.1，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，25℃恒温震荡24h，完成后使用0.1mol/L的无菌PBS缓冲溶液清洗5次，每次清洗5min；
还原处理：将脱脂处理后的牛心包组织放入还原剂溶液中，还原剂溶剂为：含有0.05％(W/V)二异丁基氢化铝的0.1mol/L的PBS缓冲溶液，pH值为7.4，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，室温震荡4h。
重复还原处理：重复上述还原处理步骤4次。
完成对生物假体组织的还原处理后，对还原处理后的牛心包组织进行清洗，使用无菌生理盐水清洗5次，每次5min，得到抗钙化处理后的牛心包组织。
实施例6
本实施例6提供的生物假体组织的抗钙化方法包括如下步骤：
生物假体组织清洗：将使用0.625％的戊二醛固定的牛心包组织从固定溶液中取出，放在pH值为7.4的浓度为0.2mol/L的PBS缓冲溶液中清洗3次，每次清洗5min。
脱脂处理：将清洗完成的牛心包组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，脱脂溶液为：含70％(V/V)山梨醇和3.0％(W/V)羧酸基甜菜碱的0.1mol/L的PBS缓冲溶液，其pH值为8.5±0.1，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，25℃恒温震荡24h，完成后使用0.2mol/L的无菌PBS缓冲溶液清洗5次，每次清洗5min；
还原处理：将脱脂处理后的牛心包组织放入还原剂溶液中，还原剂溶剂为：含有0.05％(W/V)氰基硼氢化钠的0.5mol/L的PBS缓冲溶液，pH值为9.6，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，室温震荡4h。
重复还原处理：重复上述还原处理步骤4次。
完成对生物假体组织的还原处理后，对还原处理后的牛心包组织进行清洗，使用无菌生理盐水清洗5次，每次5min，得到抗钙化处理后的牛心包组织。
实施例7
本实施例7提供的生物假体组织的抗钙化方法包括如下步骤：
生物假体组织清洗：将使用0.625％的戊二醛固定的牛心包组织从固定溶液中取出，放在pH值为7.4的浓度为0.2mol/L的PBS缓冲溶液中清洗3次，每次清洗5min。
脱脂处理：将清洗完成的牛心包组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，脱脂溶液为：含50％(V/V)乙醇和1.0％(W/V)吐温以及1％(W/V)十二烷基硫酸钠的0.1mol/L的PBS缓冲溶液，其pH值为7.40±0.1，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，25℃恒温震荡24h，完成后使用0.1mol/L的无菌PBS缓冲溶液清洗5次，每次清洗5min；
还原处理：将脱脂处理后的牛心包组织放入还原剂溶液中，还原剂溶剂为：含有5％(W/V)硼烷叔丁胺的0.1mol/L的PBS缓冲溶液，pH值为7.4，反应容器放于恒温摇床上，设置转速80rpm，室温震荡10h。
重复还原处理：重复上述还原处理步骤4次。
完成对生物假体组织的还原处理后，对还原处理后的牛心包组织进行清洗，使用无菌生理盐水清洗5次，每次5min，得到抗钙化处理后的牛心包组织。
实施例8
本实施例8提供的生物假体组织的抗钙化方法包括如下步骤：
生物假体组织清洗：将使用0.625％的戊二醛固定的牛心包组织从固定溶液中取出，放在pH值为7.4的浓度为0.2mol/L的PBS缓冲溶液中清洗3次，每次清洗5min。
脱脂处理：将清洗完成的牛心包组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，脱脂溶液为：含50％(V/V)乙醇和2.0％(W/V)吐温、1％(W/V)十二烷基聚氧乙烯醚硫酸酯钠以及1.5％十二烷基氨基丙酸的0.1mol/L的PBS缓冲溶液，其pH值为7.40±0.1，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，25℃恒温震荡24h，完成后使用0.1mol/L的无菌PBS缓冲溶液清洗5次，每次清洗5min；
还原处理：将脱脂处理后的牛心包组织放入还原剂溶液中，还原剂溶剂为：含有8％(W/V)二异丁基氢化铝的0.3mol/L的PBS缓冲溶液，pH值为8.1，反应容器放于恒温摇床上，设置转速100rpm，室温震荡28h。
重复还原处理：重复上述还原处理步骤4次。
完成对生物假体组织的还原处理后，对还原处理后的牛心包组织进行清洗，使用无菌生理盐水清洗5次，每次5min，得到抗钙化处理后的牛心包组织。
为了对本发明实施例1-8制备得到的生物假体组织的性能进行测试评价，本发明还设置了3个对照组试验，将对照组与本发明的实施例的方案得到的生物假体组织一起进行性能指标测试。3个对照组的具体技术方案如下。
对照组1
对照组1的生物假体组织在经过交联后，只进行清洗，不做其他任何处理，具体步骤为：
生物假体组织清洗：将使用0.625％戊二醛固定的牛心包组织从固定溶液中取出，放在生理盐水中清洗3次，每次清洗5min；
液体存储：将牛心包放入戊二醛存储溶液中进行保存，可进行液体灭菌。
对照组2
对照组2对生物假体组织的处理方案如下：
生物假体组织清洗：将使用0.625％的戊二醛固定的牛心包组织从固定溶液中取出，放在pH值为7.4的浓度为0.1mol/L的PBS缓冲溶液中清洗3次，每次清洗5min。
脱脂处理：将清洗完成的牛心包组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，脱脂溶液为：含60％(V/V)乙二醇和2.0％(W/V)吐温的0.1mol/L的PBS缓冲溶液，其pH值为7.40±0.1，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，25℃恒温震荡24h，完成后使用0.1mol/L的无菌PBS缓冲溶液清洗5次，每次清洗5min。
对照组3
对照组3对生物假体组织的处理方案如下：
生物假体组织清洗：将使用0.625％的戊二醛固定的牛心包组织从固定溶液中取出，放在pH值为7.4的浓度为0.1mol/L的PBS缓冲溶液中清洗3次，每次清洗5min。
还原处理：准备1L含有0.44％(W/V)硼氢化钠的0.1mol/L的PBS缓冲溶液，将清洗后的经交联固定的牛心包组织放入上述准备好的还原剂溶液中，反应容器放于恒温摇床上，设置转速60rpm，室温震荡4h。对还原处理后的牛心包组织进行清洗，使用0.1mol/L的无菌PBS缓冲溶液清洗5次，每次5min，得到处理后的牛心包组织。
对本发明的实施例1-8以及对照组1-3得到的生物假体组织进行性能指标测试，从机械拉伸和钙化性能评估对比两个方面进行对比测试。
机械拉伸对比实验
取各实施例组和对照组处理得到的牛心包组织，制备心包试样，每片试样的长度为50mm，宽度为5mm，在万能材料试验机上，设定测试隔距长度为25mm，拉伸速率为100mm/min，进行拉伸试验，直至试样断裂，记录试验结果。得到的机械拉伸对比如下表1所示。
表1机械拉伸对比实验数据
由表1中的数据可知，本发明各实施例的处理方法对心包机械性能没有显著性影响，所得的心包材料可用于液体存储或脱水干燥。
从对照组3的试验结果可知，单纯采用高浓度还原剂处理所得的心包材料的机械性能差，强度明显降低，限制了其进一步的应用。本发明实施例1-8的技术方案采用两步处理的方法，有脱脂步骤与还原步骤，可分别控制两步骤反应条件，所得的心包材料机械性能良好，与传统工艺处理方法所得的心包材料的机械性能相当。而且两步反应相互独立，工艺上更易实现。
钙化性能评估实验
钙化性能评估实验选用大鼠皮下植入动物模型，利用常规手术方法将对照组和实施例组处理得到的组织样品植入刚断乳3周龄的wistar大鼠，组织样品植入8周后取出，经恒温烘箱80℃干燥48小时至恒重。干燥后样品用火焰-原子吸收分光光度计进行钙含量测定，测试结果如图2所示。
从图2的结果可以看到，相比于对照组1-3，经过本发明实施例1-8的技术方案处理后的生物假体组织，其钙含量显著降低，表明经过本发明实施例处理后的生物假体组织的抗钙化性能得到了明显的改善。特别是采用本发明实施例2的技术方案处理后的生物假体组织，其抗钙化效果明显优于对照组以及其他实施例组。
综上所述，与现有技术相比，本发明提供的生物假体组织的抗钙化方法具有以下优点：
本发明创新性的采用了脱脂工艺结合还原剂还原的方法对生物假体组织进行抗钙化处理，其中脱脂工艺中使用的表面活性剂具有亲油亲水的性能，醇能够溶解材料内磷脂等小分子脂质，最终更好的去除生物材料中含有的脂质，还原工艺可以还原固定过程产生的席夫碱和残余的醛基，起稳定化学键的作用，不易水解，植入体内更加安全，两步法结合使得最终材料磷脂含量和残余醛基显著降低，具有更良好的抗钙化效果，且两步反应相互独立，工艺上易实现。
本发明采用的脱脂工艺中，选用的脱脂试剂水溶性良好，易渗透，可有效溶解组织中的磷脂，具有抗钙化效果好，对组织损伤小等优点。
进一步的，本发明中还原处理采用低浓度还原剂，可对生物假体组织进行多次还原处理，一方面降低还原剂浓度(还原剂比较活泼，易产生气体)，有利于减少气体产生速率，从而保护生物假体组织的结构免被气体损伤，对生物假体组织结构影响和破坏小，使还原处理过程更加温和；另一方面进行多次还原处理也保证了还原处理的效果可靠性。
本发明的抗钙化的处理方法工艺适应性强，对生物假体组织的性能影响较小，经处理的生物假体组织适用范围更广，既可以进行脱水干燥，EO灭菌，也可以进行液体存储和液体灭菌，组织可用于制造干态膜。
上述描述仅是对本发明较佳实施方式的描述，并非对本发明范围的任何限定，本发明领域的普通技术人员根据上述揭示内容做的任何变更、修饰，均属于权利要求书的保护范围。显然，本领域的技术人员可以对发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包括这些改动和变型在内。

Claims (23)

1.一种生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，包括：
将至少被部分交联固定的生物假体组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理，所述脱脂溶液包括含表面活性剂的醇溶液；
将脱脂处理后的生物假体组织放入含有还原剂的溶液中进行还原处理。
2.根据权利要求1所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述脱脂溶液中，表面活性剂的质量浓度为0.1％-10％。
3.根据权利要求1所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述脱脂溶液中，醇的质量浓度为10％-90％。
4.根据权利要求1所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述脱脂溶液为包含表面活性剂和醇的磷酸盐缓冲溶液。
5.根据权利要求4所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述脱脂溶液中，磷酸盐的浓度为0.05-0.2mol/L，溶液的pH值为6-8。
6.根据权利要求1所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述脱脂溶液中，醇选自甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇和山梨醇中的一种或几种组合。
7.根据权利要求1所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述脱脂溶液中，表面活性剂选自非离子型表面活性剂、离子型表面活性剂和两性离子表面活性剂中的一种或几种组合。
8.根据权利要求7所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述非离子型表面活性剂选自TritonX-100、吐温、葡糖苷类、甲基葡糖胺、N-十二烷基葡萄糖胺、糖基石胆酸酯两亲分子、糖酵素、洋地黄皂苷、烷基葡萄糖酰胺和椰油酰单乙醇酰胺中的一种或几种组合；
所述离子型表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠，脱氧胆酸钠、胆酸钠、肌氨酸、十二烷基聚氧乙烯醚硫酸酯钠和葡萄糖脂季铵盐中的一种或几种组合；
所述两性离子表面活性剂选自3-(3-(胆酰胺丙基)二甲氨基)丙磺酸内盐、磺基甜菜碱类、羧酸基甜菜碱、油酸基硫酸酯盐型咪唑啉、十二烷基氨基丙酸和氨基酸类表面活性剂中的一种或几种组合。
9.根据权利要求1所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述含有还原剂的溶液中还原剂的质量浓度为0.01％-10％。
10.根据权利要求1所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述含有还原剂的溶液中还原剂的质量浓度为0.02％-5％。
11.根据权利要求1所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述含有还原剂的溶液为包含还原剂的磷酸盐缓冲液，磷酸盐的浓度大于等于0.05mol/L，pH值为3.8-10.0。
12.根据权利要求11所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，磷酸盐的浓度为0.05-0.5mol/L，pH值为6.8-8.6。
13.根据权利要求1所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自硼氢化物和/或硼烷类。
14.根据权利要求13所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠、硼氢化锌、三乙酰基硼氢化钠、硼氢化锂、乙硼烷、二甲胺基硼烷和硼烷叔丁胺中的一种或几种组合。
15.根据权利要求1所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自还原性金属和/或其氢化物。
16.根据权利要求15所述生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自氢化铝钠、二甲氧基乙氧基氢化铝、二异丁基氢化铝、锌粉和镁粉中的一种或几种组合。
17.根据权利要求1所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述含有还原剂的溶液中，还原剂选自含硫还原剂或三乙基硅烷。
18.根据权利要求17所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述含有还原剂的溶液中，所述含硫还原剂选自连二亚硫酸钠和/或亚硫酸氢钠。
19.根据权利要求1所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述方法包括：
S1：选取至少被部分交联固定的生物假体组织进行清洗；
S2：将所述步骤S1中清洗后的生物假体组织放入脱脂溶液中进行脱脂处理；
S3：将所述步骤S2中脱脂处理后的生物假体组织放入含有还原剂的溶液中进行还原处理；
S4：对所述步骤S3中经过还原处理后的生物假体组织进行清洗。
20.根据权利要求19所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述S1中，采用无菌生理盐水或磷酸盐缓冲溶液对所述生物假体组织进行清洗。
21.根据权利要求19所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述S3中对所述生物假体组织进行还原处理时，进行一次或多次还原处理。
22.根据权利要求19所述的生物假体组织的抗钙化方法，其特征在于，所述S4中，采用磷酸盐缓冲溶液或醇类溶液对还原处理后的生物假体组织进行清洗。
23.一种生物假体组织，其特征在于，采用如权利要求1-22任一项所述的生物假体组织的抗钙化方法处理后制备得到。
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Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4885005A (en) * 1982-11-12 1989-12-05 Baxter International Inc. Surfactant treatment of implantable biological tissue to inhibit calcification
US5215541A (en) * 1982-11-12 1993-06-01 Baxter International Inc. Surfactant treatment of implantable biological tissue to inhibit calcification
CA2490060A1 (en) * 2002-07-16 2004-01-22 Edwards Lifesciences Corporation Enhanced phospholipid reduction and calcification mitigation of biological materials
US7579381B2 (en) * 2005-03-25 2009-08-25 Edwards Lifesciences Corporation Treatment of bioprosthetic tissues to mitigate post implantation calcification
WO2013102048A2 (en) * 2011-12-30 2013-07-04 University Of Miami Regenerative tissue matrix
CN110917398A (zh) * 2019-12-09 2020-03-27 沛嘉医疗科技(苏州)有限公司 生物材料的抗氧化方法及生物材料
US12083009B2 (en) * 2020-04-15 2024-09-10 Vitae LLC Method of processing collagen-based tissue for bioprosthetic devices
CN114652893A (zh) * 2020-12-23 2022-06-24 上海微创心通医疗科技有限公司 生物假体组织的处理方法和生物假体心脏瓣膜

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