CN117838729A - 组合癌症免疫疗法 - Google Patents
组合癌症免疫疗法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117838729A CN117838729A CN202311122981.2A CN202311122981A CN117838729A CN 117838729 A CN117838729 A CN 117838729A CN 202311122981 A CN202311122981 A CN 202311122981A CN 117838729 A CN117838729 A CN 117838729A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tumor
- cells
- engineered
- produce
- mscs
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000011289 combination cancer immunotherapy Methods 0.000 title description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 303
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims abstract description 194
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 95
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 83
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 claims abstract description 64
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 claims abstract description 62
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 43
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims abstract description 42
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 38
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims description 464
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 95
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 92
- 101000713085 Homo sapiens C-C motif chemokine 21 Proteins 0.000 claims description 58
- 102100036846 C-C motif chemokine 21 Human genes 0.000 claims description 57
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 50
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 claims description 36
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 32
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 32
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 26
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 26
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 25
- -1 antibodies Substances 0.000 claims description 24
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 19
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 19
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 claims description 19
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 claims description 19
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 claims description 18
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 16
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 16
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 9
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 6
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 claims description 5
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 5
- 206010019695 Hepatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 206010029098 Neoplasm skin Diseases 0.000 claims description 5
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims description 5
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 claims description 5
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000025402 neoplasm of esophagus Diseases 0.000 claims description 5
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000013076 thyroid tumor Diseases 0.000 claims description 5
- 208000025421 tumor of uterus Diseases 0.000 claims description 5
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000024719 uterine cervix neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 abstract description 38
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 abstract description 25
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 abstract description 25
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 abstract description 23
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 abstract description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 abstract description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 494
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 94
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 92
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 58
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 53
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 52
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 52
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 52
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 52
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 49
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 48
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 48
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 48
- 102100024598 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 10 Human genes 0.000 description 48
- 101710097160 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 10 Proteins 0.000 description 48
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 48
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 description 45
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 description 45
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 description 43
- 102100036170 C-X-C motif chemokine 9 Human genes 0.000 description 43
- 101000858088 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 description 43
- 101000947172 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 9 Proteins 0.000 description 43
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 42
- 102100025279 C-X-C motif chemokine 11 Human genes 0.000 description 41
- 101000858060 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 11 Proteins 0.000 description 41
- 102000000311 Cytosine Deaminase Human genes 0.000 description 40
- 108010080611 Cytosine Deaminase Proteins 0.000 description 40
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 40
- 108091007973 Interleukin-36 Proteins 0.000 description 35
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 35
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 34
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 34
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 32
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 32
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 29
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 28
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 26
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 24
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 23
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 23
- 102100028748 Transportin-1 Human genes 0.000 description 22
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 22
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 21
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 21
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 21
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 20
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 20
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 20
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 18
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 17
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 17
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 17
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 17
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 17
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 16
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 16
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 16
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 16
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 15
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 15
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 15
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 15
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 15
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 15
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 14
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 230000004044 response Effects 0.000 description 14
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 13
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 13
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 13
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 13
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 13
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 13
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 13
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 12
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 12
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 12
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 12
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 12
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 12
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 12
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 12
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 12
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 12
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 12
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 11
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 11
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 11
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 11
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 11
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 11
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 11
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 10
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 10
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 10
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 10
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 10
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 10
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 10
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- 101000958041 Homo sapiens Musculin Proteins 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 102000046949 human MSC Human genes 0.000 description 9
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 9
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 9
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 9
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 9
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 8
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 8
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 8
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 8
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 8
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 8
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 8
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 8
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 8
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 7
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 7
- 101000889276 Homo sapiens Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Proteins 0.000 description 7
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 7
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 7
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 208000003721 Triple Negative Breast Neoplasms Diseases 0.000 description 7
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 7
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 7
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 7
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 7
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 7
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 7
- 230000000861 pro-apoptotic effect Effects 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 208000022679 triple-negative breast carcinoma Diseases 0.000 description 7
- 102000009410 Chemokine receptor Human genes 0.000 description 6
- 108050000299 Chemokine receptor Proteins 0.000 description 6
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101100025201 Mus musculus Msc gene Proteins 0.000 description 6
- 210000005006 adaptive immune system Anatomy 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 6
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 6
- 238000011220 combination immunotherapy Methods 0.000 description 6
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 6
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 6
- 230000005931 immune cell recruitment Effects 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 6
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 6
- 102100021936 C-C motif chemokine 27 Human genes 0.000 description 5
- 101000897494 Homo sapiens C-C motif chemokine 27 Proteins 0.000 description 5
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 5
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 5
- 241000713880 Spleen focus-forming virus Species 0.000 description 5
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 5
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 5
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 5
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 210000004475 gamma-delta t lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 5
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100022718 Atypical chemokine receptor 2 Human genes 0.000 description 4
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 4
- 102100036166 C-X-C chemokine receptor type 1 Human genes 0.000 description 4
- 102100031650 C-X-C chemokine receptor type 4 Human genes 0.000 description 4
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 4
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 4
- 229940046168 CpG oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 4
- 101000678892 Homo sapiens Atypical chemokine receptor 2 Proteins 0.000 description 4
- 101000947174 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 1 Proteins 0.000 description 4
- 101000922348 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 4
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 4
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 4
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 4
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 4
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 4
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 4
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 4
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 4
- 210000004964 innate lymphoid cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 4
- 210000004985 myeloid-derived suppressor cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- 244000309459 oncolytic virus Species 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- VGEREEWJJVICBM-UHFFFAOYSA-N phloretin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1CCC(=O)C1=C(O)C=C(O)C=C1O VGEREEWJJVICBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 4
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 4
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 4
- 108090000672 Annexin A5 Proteins 0.000 description 3
- 102000004121 Annexin A5 Human genes 0.000 description 3
- 102100031151 C-C chemokine receptor type 2 Human genes 0.000 description 3
- 101710149815 C-C chemokine receptor type 2 Proteins 0.000 description 3
- 101710149863 C-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 3
- 102100028990 C-X-C chemokine receptor type 3 Human genes 0.000 description 3
- 102100032976 CCR4-NOT transcription complex subunit 6 Human genes 0.000 description 3
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 3
- 102100031256 Cyclic GMP-AMP synthase Human genes 0.000 description 3
- 101710118064 Cyclic GMP-AMP synthase Proteins 0.000 description 3
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 208000012766 Growth delay Diseases 0.000 description 3
- 101000716070 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 9 Proteins 0.000 description 3
- 101000916050 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 3 Proteins 0.000 description 3
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 3
- 101000818546 Homo sapiens N-formyl peptide receptor 2 Proteins 0.000 description 3
- 101000692455 Homo sapiens Platelet-derived growth factor receptor beta Proteins 0.000 description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 3
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 3
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 3
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 3
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 3
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 3
- 102100021126 N-formyl peptide receptor 2 Human genes 0.000 description 3
- 102000011755 Phosphoglycerate Kinase Human genes 0.000 description 3
- 102100026547 Platelet-derived growth factor receptor beta Human genes 0.000 description 3
- 102100037935 Polyubiquitin-C Human genes 0.000 description 3
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 description 3
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 101001099217 Thermotoga maritima (strain ATCC 43589 / DSM 3109 / JCM 10099 / NBRC 100826 / MSB8) Triosephosphate isomerase Proteins 0.000 description 3
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 3
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 3
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 3
- 108010056354 Ubiquitin C Proteins 0.000 description 3
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 3
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 3
- 238000001565 modulated differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 3
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 3
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 230000019254 respiratory burst Effects 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 3
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- ZWTDXYUDJYDHJR-UHFFFAOYSA-N (E)-1-(2,4-dihydroxyphenyl)-3-(2,4-dihydroxyphenyl)-2-propen-1-one Natural products OC1=CC(O)=CC=C1C=CC(=O)C1=CC=C(O)C=C1O ZWTDXYUDJYDHJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 108010029445 Agammaglobulinaemia Tyrosine Kinase Proteins 0.000 description 2
- 102100036301 C-C chemokine receptor type 7 Human genes 0.000 description 2
- 102100028989 C-X-C chemokine receptor type 2 Human genes 0.000 description 2
- 108700012434 CCL3 Proteins 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000000013 Chemokine CCL3 Human genes 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- 102100027581 Forkhead box protein P3 Human genes 0.000 description 2
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 2
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 2
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 2
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 2
- 101000716065 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 7 Proteins 0.000 description 2
- 101000861452 Homo sapiens Forkhead box protein P3 Proteins 0.000 description 2
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101000599048 Homo sapiens Interleukin-6 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 2
- 101000669513 Homo sapiens Metalloproteinase inhibitor 1 Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 2
- 102000018682 Interleukin Receptor Common gamma Subunit Human genes 0.000 description 2
- 108010066719 Interleukin Receptor Common gamma Subunit Proteins 0.000 description 2
- 102100037792 Interleukin-6 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010018951 Interleukin-8B Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 2
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 2
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 2
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 2
- 102100039364 Metalloproteinase inhibitor 1 Human genes 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- YQHMWTPYORBCMF-UHFFFAOYSA-N Naringenin chalcone Natural products C1=CC(O)=CC=C1C=CC(=O)C1=C(O)C=C(O)C=C1O YQHMWTPYORBCMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000010292 Peptide Elongation Factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 108010010677 Phosphodiesterase I Proteins 0.000 description 2
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 2
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 2
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 2
- 108700027336 Suppressor of Cytokine Signaling 1 Proteins 0.000 description 2
- 102100024779 Suppressor of cytokine signaling 1 Human genes 0.000 description 2
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 2
- 238000010459 TALEN Methods 0.000 description 2
- 210000000068 Th17 cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010043645 Transcription Activator-Like Effector Nucleases Proteins 0.000 description 2
- 102100029823 Tyrosine-protein kinase BTK Human genes 0.000 description 2
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 2
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 201000005389 breast carcinoma in situ Diseases 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 210000003690 classically activated macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 239000003966 growth inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N hypochlorite Chemical compound Cl[O-] WQYVRQLZKVEZGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008076 immune mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000008629 immune suppression Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 2
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 2
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 2
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- QUPFKBITVLIQNA-KPKJPENVSA-N (5e)-2-sulfanylidene-5-[[5-[3-(trifluoromethyl)phenyl]furan-2-yl]methylidene]-1,3-thiazolidin-4-one Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(C=2OC(\C=C\3C(NC(=S)S/3)=O)=CC=2)=C1 QUPFKBITVLIQNA-KPKJPENVSA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- 206010000060 Abdominal distension Diseases 0.000 description 1
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 102100024167 C-C chemokine receptor type 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710149862 C-C chemokine receptor type 3 Proteins 0.000 description 1
- 102100035875 C-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 description 1
- 101710149870 C-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 description 1
- 102100036305 C-C chemokine receptor type 8 Human genes 0.000 description 1
- 102100025074 C-C chemokine receptor-like 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100031658 C-X-C chemokine receptor type 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100025618 C-X-C chemokine receptor type 6 Human genes 0.000 description 1
- 102100036150 C-X-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 108091008927 CC chemokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005674 CCR Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010017009 CD11b Antigen Proteins 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 1
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 1
- 108090000835 CX3C Chemokine Receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100039196 CX3C chemokine receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108091008925 CX3C chemokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 108091008928 CXC chemokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000054900 CXCR Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010008951 Chemokine CXCL12 Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 101100118093 Drosophila melanogaster eEF1alpha2 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 108091008794 FGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000777558 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 10 Proteins 0.000 description 1
- 101000716068 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 6 Proteins 0.000 description 1
- 101000716063 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 8 Proteins 0.000 description 1
- 101000922405 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000856683 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 6 Proteins 0.000 description 1
- 101000947186 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101001078158 Homo sapiens Integrin alpha-1 Proteins 0.000 description 1
- 101001078133 Homo sapiens Integrin alpha-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000994378 Homo sapiens Integrin alpha-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000994375 Homo sapiens Integrin alpha-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000994369 Homo sapiens Integrin alpha-5 Proteins 0.000 description 1
- 101000994365 Homo sapiens Integrin alpha-6 Proteins 0.000 description 1
- 101000994322 Homo sapiens Integrin alpha-8 Proteins 0.000 description 1
- 101001035232 Homo sapiens Integrin alpha-9 Proteins 0.000 description 1
- 101001035237 Homo sapiens Integrin alpha-D Proteins 0.000 description 1
- 101001046687 Homo sapiens Integrin alpha-E Proteins 0.000 description 1
- 101001078143 Homo sapiens Integrin alpha-IIb Proteins 0.000 description 1
- 101001046683 Homo sapiens Integrin alpha-L Proteins 0.000 description 1
- 101001046677 Homo sapiens Integrin alpha-V Proteins 0.000 description 1
- 101001046668 Homo sapiens Integrin alpha-X Proteins 0.000 description 1
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000935040 Homo sapiens Integrin beta-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001015004 Homo sapiens Integrin beta-3 Proteins 0.000 description 1
- 101001015006 Homo sapiens Integrin beta-4 Proteins 0.000 description 1
- 101001015059 Homo sapiens Integrin beta-5 Proteins 0.000 description 1
- 101001015064 Homo sapiens Integrin beta-6 Proteins 0.000 description 1
- 101001015037 Homo sapiens Integrin beta-7 Proteins 0.000 description 1
- 101000997670 Homo sapiens Integrin beta-8 Proteins 0.000 description 1
- 101000998146 Homo sapiens Interleukin-17A Proteins 0.000 description 1
- 101001055222 Homo sapiens Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000815628 Homo sapiens Regulatory-associated protein of mTOR Proteins 0.000 description 1
- 101000617130 Homo sapiens Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000652747 Homo sapiens Target of rapamycin complex 2 subunit MAPKAP1 Proteins 0.000 description 1
- 101000669447 Homo sapiens Toll-like receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 101000648491 Homo sapiens Transportin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 description 1
- 101000801228 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Proteins 0.000 description 1
- 101000851370 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Proteins 0.000 description 1
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102100025323 Integrin alpha-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100025305 Integrin alpha-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100032819 Integrin alpha-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100032818 Integrin alpha-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100032817 Integrin alpha-5 Human genes 0.000 description 1
- 102100032816 Integrin alpha-6 Human genes 0.000 description 1
- 102100032825 Integrin alpha-8 Human genes 0.000 description 1
- 102100039903 Integrin alpha-9 Human genes 0.000 description 1
- 102100039904 Integrin alpha-D Human genes 0.000 description 1
- 102100022341 Integrin alpha-E Human genes 0.000 description 1
- 102100025306 Integrin alpha-IIb Human genes 0.000 description 1
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 description 1
- 102100022337 Integrin alpha-V Human genes 0.000 description 1
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 1
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100032999 Integrin beta-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100033000 Integrin beta-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100033010 Integrin beta-5 Human genes 0.000 description 1
- 102100033011 Integrin beta-6 Human genes 0.000 description 1
- 102100033016 Integrin beta-7 Human genes 0.000 description 1
- 102100033336 Integrin beta-8 Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100033461 Interleukin-17A Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102100026236 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- 108010092694 L-Selectin Proteins 0.000 description 1
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 210000004322 M2 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000000424 Matrix Metalloproteinase 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010016165 Matrix Metalloproteinase 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 1
- 102000001776 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 1
- 101710151805 Mitochondrial intermediate peptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000713883 Myeloproliferative sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 1
- 108700019961 Neoplasm Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000048850 Neoplasm Genes Human genes 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000038030 PI3Ks Human genes 0.000 description 1
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 1
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 101100202517 Rattus norvegicus Slc25a25 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010052090 Renilla Luciferases Proteins 0.000 description 1
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 description 1
- 101150099493 STAT3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000003800 Selectins Human genes 0.000 description 1
- 108090000184 Selectins Proteins 0.000 description 1
- 102100024040 Signal transducer and activator of transcription 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710088580 Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 230000006043 T cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- 102100039360 Toll-like receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 description 1
- 102100033732 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1A Human genes 0.000 description 1
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 1
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100036856 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 9 Human genes 0.000 description 1
- 108010073923 Vascular Endothelial Growth Factor C Proteins 0.000 description 1
- 108010073919 Vascular Endothelial Growth Factor D Proteins 0.000 description 1
- 102100038232 Vascular endothelial growth factor C Human genes 0.000 description 1
- 102100038234 Vascular endothelial growth factor D Human genes 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 101100311214 Xenopus laevis stat3.1 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 238000011129 allogeneic cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 230000031680 apoptotic process in bone marrow Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000000746 body region Anatomy 0.000 description 1
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004611 cancer cell death Effects 0.000 description 1
- 230000005880 cancer cell killing Effects 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 description 1
- 231100000315 carcinogenic Toxicity 0.000 description 1
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000004656 cell transport Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 238000011198 co-culture assay Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000037011 constitutive activity Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000013481 data capture Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000008317 extracellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 102000052178 fibroblast growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000011354 first-line chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000001280 germinal center Anatomy 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011577 humanized mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 1
- 229940126546 immune checkpoint molecule Drugs 0.000 description 1
- 230000008102 immune modulation Effects 0.000 description 1
- 238000011493 immune profiling Methods 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002602 induced regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000010232 migration assay Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 238000007837 multiplex assay Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000004479 myeloid suppressor cell Anatomy 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000000174 oncolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 210000003720 plasmablast Anatomy 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000023603 positive regulation of transcription initiation, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 210000004990 primary immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- AAEVYOVXGOFMJO-UHFFFAOYSA-N prometryn Chemical compound CSC1=NC(NC(C)C)=NC(NC(C)C)=N1 AAEVYOVXGOFMJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000012342 propidium iodide staining Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 108700015048 receptor decoy activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000010837 receptor-mediated endocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000002707 regulatory b cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 108091006024 signal transducing proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034285 signal transducing proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000011125 single therapy Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000005167 vascular cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0663—Bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/49—Breast
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/50—Colon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/59—Reproductive system, e.g. uterus, ovaries, cervix or testes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/195—Chemokines, e.g. RANTES
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/208—IL-12
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/21—Interferons [IFN]
- A61K38/215—IFN-beta
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/21—Interferons [IFN]
- A61K38/217—IFN-gamma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4635—Cytokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/521—Chemokines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5434—IL-12
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/565—IFN-beta
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/57—IFN-gamma
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0646—Natural killers cells [NK], NKT cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
Abstract
本文提供了用于动态控制和靶向癌症中的多种免疫抑制机制的方法和组合物。一些方面提供了经工程化以产生多种效应分子的细胞,该效应分子各自调节肿瘤的不同免疫抑制机制,以及提供了使用该细胞治疗癌症如卵巢癌、乳腺癌或结肠癌的方法。
Description
本申请是申请日为2018年4月13日和发明名称为“组合癌症免疫疗法”的201880034653.8号中国发明专利申请的分案申请。
相关申请
本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2017年4月13日提交的美国临时申请号62/485,295和2017年11月8日提交的美国临时申请号62/583,343的权益,其各自通过引用将其全文合并于此。
背景技术
在美国,每年有超过22,000例新的卵巢癌病例和超过14,000例死亡(Siegel RL等(2016)CA Cancer J Clin 66(1):7-30),估计每年的医疗保健负担超过6亿美元(Dizon DMJ(2010)Gynecol Oncol 116(3))。常规方法如化疗(例如卡铂/顺铂和/或紫杉醇)通常不能治愈卵巢癌。大约70%的患者未基于一线化疗实现缓解,而40-50%的确实缓解的患者在三年内复发。
其他癌症如乳腺癌和结肠癌的治疗分别与85%和65%的五年生存率相关。治疗通常包括侵入性手术和化疗的组合。
发明内容
在一些实施方案中,本文提供了基于细胞的组合免疫疗法,其用于癌症的靶向治疗,例如卵巢癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌和胰腺癌。这种组合免疫疗法依赖于能够在肿瘤内和/或肿瘤附近(“肿瘤微环境(TME)”)进行多因素调节的工程化细胞回路。尽管组合免疫疗法取得了令人激动的进步,但其抗癌功效有限,这部分地是由于以下挑战。在不引发重大副作用的情况下,难以同时给予多种疗法以达到最大疗效。在临床试验中也难以确定多种全身施用和/或局部注射疗法的合适剂量和时机。然而,本文提供的组合免疫疗法是肿瘤特异性和有效的,且还限制了全身毒性。在某些情况下,这种组合免疫疗法可用于从单一递送媒介将多种免疫调节效应分子递送至肿瘤微环境。有利地,在一些实施方案中,本公开的细胞回路在间充质干细胞(MSC)中工程化,该间充质干细胞能够选择性地归巢至肿瘤(包括转移瘤),能够产生促炎性/免疫刺激性分泌组(secretome)和,在某些条件下,抗炎性分泌组,且是低免疫原性的。这些特征尤其使得其能够用于例如同种异体细胞疗法,而没有严重的安全性问题、副作用或排斥反应。
人们越来越认识到,肿瘤是肿瘤细胞与周围基质之间的复杂相互作用,周围基质包括细胞外基质、癌症相关的基质细胞(MSC和成纤维细胞)、肿瘤脉管系统和免疫系统。TME通过多种针对患者的先天和适应性免疫系统的机制来抑制抗肿瘤免疫反应。例如,肿瘤可以募集并诱导调节T细胞,其通过加工特定的趋化因子(如CCL22)来抑制常规T细胞的抗肿瘤活性。肿瘤还可以表达抑制T细胞和NK细胞活性的分子,例如免疫检查点如PD-L1。因此,靶向单一途径可能不足以实现针对实体肿瘤的稳定功效。
因此,在一些方面,本公开提供了经工程化以产生多种效应分子的间充质干细胞(MSC),其中至少两种效应分子调控不同的肿瘤介导的免疫抑制机制(例如,靶向多种途径)。在一些实施方案中,效应分子(a)刺激T细胞信号传导、活性和/或募集,(b)刺激抗原呈递和/或加工,(c)刺激自然杀伤细胞介导的细胞毒性信号传导、活性和/或募集,(d)刺激树突细胞分化和/或成熟,(e)刺激免疫细胞募集,(f)刺激促炎性巨噬细胞信号传导、活性和/或募集,或抑制抗炎性巨噬细胞信号传导、活性和/或募集,(g)刺激基质降解,(h)刺激免疫刺激性代谢产物的产生,(i)刺激I型干扰素信号传导,(j)抑制负性共刺激信号传导,(k)抑制抗肿瘤免疫细胞(例如,T细胞/NK细胞)的促凋亡信号传导或诱导癌细胞的凋亡,(l)抑制T调节(Treg)细胞信号传导、活性和/或募集,(m)抑制肿瘤检查点分子,(n)刺激干扰素基因刺激因子(STING)信号传导,(o)抑制骨髓来源抑制细胞信号传导、活性和/或募集,(p)降解免疫抑制因子/代谢产物,(q)抑制血管内皮生长因子信号传导,和/或(r)直接杀死肿瘤细胞。例如,由工程化MSC产生的一种效应分子可以刺激TME中的抗肿瘤免疫介导机制或免疫刺激机制,而由相同MSC(或不同MSC)产生的另一种效应分子可以抑制TME中的免疫抑制机制(例如,CD28/B7家族途径(例如,PD-1、CTLA-4、CD28)或IL-10)。作为另一个例子,由工程化MSC产生的一种效应分子可以在肿瘤微环境中刺激炎性途径(例如,TNF受体超家族途径(例如,OX40、CD137、CD40、GITR)、共同γ链家族途径(例如,IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL15、IL-21)或Toll样受体途径(例如TLR4、TLR9)),而由相同的MSC(或不同的MSC)产生的另一种效应分子可以在肿瘤微环境中抑制炎症的负调节因子(例如,Stat3、Bruton酪氨酸激酶、c-kit和/或SOCS-1)。
本公开涵盖的效应分子的非限制性实例包括细胞因子、抗体、趋化因子、核苷酸、肽、酶和溶瘤病毒。例如,可以对MSC进行工程化以表达(并且通常分泌)以下效应分子中的至少一种、两种、三种或更多种:IL-12、IL-16、IFN-β、IFN-γ、IL-2、IL-15、IL-7、IL-36γ、IL-18、IL-1β、IL-21、OX40-配体、CD40L、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体、抗TGFβ抗体、抗TNFR2、MIP1α(CCL3)、MIP1β(CCL5)、CCL21、CpG寡脱氧核苷酸和抗肿瘤肽(例如,具有抗肿瘤活性的抗微生物肽,参见例如Gaspar,D等,Front Microbiol.2013;4:294;Chu,H.等PLoS One.2015;10(5):e0126390,和网站:aps.unmc.edu/AP/main.php)。
本文还提供了包括培养间充质干细胞以产生效应分子的方法。
本文还提供了包括将间充质干细胞递送给受试者以体内产生至少一种由间充质干细胞产生的效应分子的方法。在一些实施方案中,效应分子在肿瘤微环境中产生或递送至肿瘤微环境。
再进一步,本文提供了治疗癌症的方法,其包括将间充质干细胞递送至诊断为患有癌症的受试者。在一些实施方案中,癌症是卵巢癌,尽管可以治疗其他癌症/肿瘤。例如,本文提供的方法可用于治疗膀胱肿瘤、脑肿瘤、乳腺肿瘤、宫颈肿瘤、结肠直肠肿瘤、食道肿瘤、神经胶质瘤、肾肿瘤、肝肿瘤、肺肿瘤、黑素瘤、卵巢肿瘤、胰腺肿瘤、前列腺肿瘤、皮肤肿瘤、甲状腺肿瘤和/或子宫肿瘤。
附图说明
图1显示了使用具有人工5’UTR(copGFP上游的bar)和3’UTR(copGFP下游的bar)的核转染质粒在人MSC中的GFP表达。在该实验方案中,>80%的存活MSC表达高水平的GFP(深灰色直方图)。
图2显示了2A表达载体设计和流式细胞术直方图,其显示了“效应子1”(BFP)和“效应子2”(GFP)的双重表达。左图:第二峰直方图(中等灰色)表示包含BFP-2A-GFP构建体的细胞,第三峰直方图(深灰色)表示仅包含GFP表达构建体的细胞,和第一峰直方图(浅灰色)表示未转染的细胞。右图:第三峰直方图(中等灰色)表示包含BFP-2A-GFP构建体的细胞,第二峰直方图(浅灰色)表示仅包含GFP表达构建体的细胞,和第一峰直方图(中等灰色)表示未转染的细胞。右图中的偏移曲线表明2A设计产生GFP+细胞,其也共表达BFP。
图3显示了表明腹膜内注射的鼠BM源MSC(BM-MSC)在体内归巢至4T1乳腺癌细胞的肿瘤部位的数据。将荧光标记的BM-MSC(治疗细胞)注射到携带4T1乳腺肿瘤细胞的小鼠中。乳腺肿瘤细胞表达荧光素酶报道分子。左侧的顶部前两个图面显示了如所示的注射后第1天和第7天荷瘤小鼠中治疗细胞(BM-MSC)的成像。左侧的顶部第三图面显示了注射后第7天荷瘤小鼠中肿瘤细胞的成像。左侧的底部两个图面显示了如所示的注射后第1天和第7天未携带肿瘤的正常小鼠中治疗细胞的成像。最右侧提供了显示肿瘤对治疗细胞的归巢的影响示意图。
图4显示了表明在乳腺癌的原位小鼠模型中,表达IL-12和CCL21a的工程化MSC诱导显著的肿瘤生长延迟的数据。左侧的图显示了工程化的MSC对小鼠中4T1乳腺肿瘤生长的影响(n=8)。图表中的每条线代表在第0天和第7天接受对照MSC生长培养基或工程化MSC腹膜内注射的小鼠中的肿瘤体积。小鼠接受表达IL-12的工程化MSC和表达CCL21a的工程化MSC腹膜内注射。每隔一天通过卡尺测量来测定肿瘤体积。数据表示平均值±SEM。与对照培养基组相比,*p<0.05,**p<0.005。右侧的示意图显示了治疗的时间表及表达组合基因IL-12和CCL21a的工程化MSC对治疗小鼠的肿瘤负荷的影响。
图5A包括表明表达IFN-β、IFN-γ、IL-12、CCL21a或其组合的工程化MSC抑制乳腺癌(4T1三阴性乳腺癌)的原位小鼠模型中的肿瘤生长的数据。每种效应子由不同的MSC表达,并且MSC组合(以1:1的比率)用于组合治疗。每张图显示了表达指示的免疫疗法的工程化MSC单独或组合对小鼠中4T1乳腺肿瘤生长的影响(n=6-8)。图5A的每条线代表单个小鼠。图5B的左图显示了在第14天每种治疗中的单个小鼠的肿瘤重量。图5B的右图显示了接受每种治疗的小鼠随时间的以平均值±SEM表示的肿瘤体积。
图6A包括表明表达OX40L、TRAIL、IL15、cGAS或其组合的工程化MSC在乳腺癌(4T1三阴性乳腺癌)的原位小鼠模型中不显著抑制肿瘤生长的数据。每种效应子由不同的MSC表达,并且MSC组合(以1:1的比率)用于组合治疗。每张图显示了表达指示的免疫疗法的工程化MSC单独或组合对小鼠中4T1乳腺肿瘤生长的影响(n=6-8)。图6A的每条线表示单个小鼠。图6B的左图显示了每种治疗中的单个小鼠的肿瘤重量。图6B的右图显示了接受每种治疗的小鼠随时间的表示为平均值±SEM的体重。
图7A包括表明表达IL-12和CCL21a的工程化MSC抑制乳腺癌(4T1三阴性乳腺癌)的原位小鼠模型中的肿瘤生长的数据;但是,添加抗CD40抗体不降低肿瘤生长。每种效应子由不同的MSC表达,并且MSC组合(以1:1的比率)用于组合治疗。每张图显示了表达指示的免疫疗法的工程化MSC单独或组合对小鼠中4T1乳腺肿瘤生长的影响(n=6-8)。图7A的每条线代表单个小鼠。图7B显示了每种治疗中单个小鼠的肿瘤重量。
图8A包括表明表达OX40L、TRAIL、IL15、HACvPD-1或其组合的工程化MSC在乳腺癌(4T1三阴性乳腺癌)的原位小鼠模型中不显著抑制肿瘤生长的数据。每种效应子由不同的MSC表达,并且MSC组合(以1:1的比率)用于组合治疗。每张图显示表达指示的免疫疗法的工程化MSC单独或组合对小鼠中4T1乳腺肿瘤生长的影响(n=6-8)。图8A的每条线表示单个小鼠。图8B的左图显示每种治疗中单个小鼠的肿瘤重量。图8B的右图显示接受每种治疗的小鼠随时间的体重,表示为平均值±SEM。
图9A包括表明表达IL-12和CCL21a的工程化MSC抑制乳腺癌(4T1三阴性乳腺癌)的原位小鼠模型中的肿瘤生长的数据;但是,表达CCL21a、IL-36γ和IL-7的MSC的组合不减少肿瘤的生长。然而,测试的一些效应子组合可能引起毒性。每种效应子由不同的MSC表达,并且MSC组合(以1:1的比率)用于组合治疗。每张图显示表达指示的免疫疗法的工程化MSC单独或组合对小鼠中4T1乳腺肿瘤生长的影响(n=6-8)。图9A的每条线表示单个小鼠。图9B显示每种治疗中单个小鼠的肿瘤重量。
图10A-10B包括来自用于毒性和筛选的GFP剂量递增研究的数据。图10A显示表达GFP的工程化的MSC不引起毒性。每种效应子由不同的MSC表达,并且MSC组合(以1:1的比率)用于组合治疗。每张图显示表达指示的免疫疗法的工程化MSC单独或组合对小鼠中4T1乳腺肿瘤生长的影响(n=6-8)。图10A的每条线代表单个小鼠。图10B显示每种治疗中单个小鼠的肿瘤重量。
图11A显示工程化人MSC不归巢至小鼠4T1肿瘤。图11B显示每种治疗中单个小鼠的肿瘤重量。每隔一天通过从卡尺测量的肿瘤体积确定功效。
图12包括显示IL-12和CCL21a可以减少肿瘤扩增的数据。
图13A包括表明表达IL-12和CCL21的工程化MSC足以抑制乳腺癌(4T1三阴性乳腺癌)的原位小鼠模型中的肿瘤生长以及添加检查点抑制剂(抗PD-1抗体或抗CTLA-4抗体)不提高功效的数据。每种效应子由不同的MSC表达,且MSC组合(以1:1的比率)用于组合治疗,并且检查点抑制剂单独注射。每张图显示表达指示的免疫疗法的工程化MSC单独或组合对小鼠中4T1乳腺肿瘤生长的影响(n=6-8)。图13A的每条线代表单个小鼠。图13B显示每种治疗中单个小鼠的肿瘤重量。
图14显示了表明表达IL-12和CCL21a的工程化MSC在结肠直肠癌的小鼠模型中诱导显著的肿瘤生长延迟的数据。左侧的图显示了工程化MSC对小鼠中CT26结肠直肠肿瘤生长的影响(n=8)。图中的每条线代表在第0天和第7天接受腹膜内注射对照MSC生长培养基或工程化MSC的小鼠中的肿瘤体积。小鼠接受表达IL-12的工程化MSC和表达CCL21a的工程化MSC的腹膜内注射。每隔一天通过卡尺测量来确定肿瘤体积。数据表示平均值±SEM。与对照培养基组相比,*p<0.05,**p<0.005。右侧的示意图显示治疗的时间表及表达组合基因IL-12和CCL21a的工程化MSC对治疗小鼠的肿瘤负荷的影响。
图15是显示CT26小鼠模型中确定给予工程化MSC细胞的最佳时间的肿瘤生长动力学的图。
图16A-16B包括表明表达IL-12和CCL21a的工程化MSC与抗CD40或抗CTLA4抗体组合对结肠癌的同基因小鼠模型中平均肿瘤生长的影响的数据。用七种治疗方法之一治疗携带CT26结肠肿瘤的小鼠(每个治疗组n=5-6)。MSC-IL-12+MSC-CCL21a指示用于组合治疗的表达IL-12的工程化细胞和表达CCL21a的工程化细胞(1:1比率)的治疗。图16B的左图显示了每种治疗中单个小鼠的肿瘤重量。图16B的右图显示了接受每种治疗的小鼠随时间的肿瘤体积,表示为平均值±SEM。
图17A-17B包括来自剂量依赖性长期生存研究的数据。图17A显示了单个组的肿瘤体积。图17B显示了体重(顶图)、肿瘤体积(底图)和存活率(右图)。
图18A包括表明表达IL-12、CCL21a以及IL15或HACvPD-1的工程化MSC在小鼠结肠直肠癌模型中显著抑制肿瘤生长的数据。每种效应子由不同的MSC表达,并且MSC组合(以1:1的比率)用于组合治疗。每个图显示了表达所示免疫疗法的工程化MSC单独或组合对小鼠中CT26结肠直肠肿瘤生长的影响(n=6-8)。图18A的每条线表示单个小鼠。图18B显示了每种治疗中单个小鼠的肿瘤重量。图18C是肿瘤微环境内的浸润免疫群体的代表性图表。图18D显示了总CD3群体中调节T细胞(Treg)的百分比。在用工程化的MSC-IL2和CCL21a处理的肿瘤微环境中Treg数量具有显著减少。图18E将免疫浸润的百分比与肿瘤重量相关联。发现具有高淋巴细胞(CD3+)的样品与低肿瘤重量相关,而具有高髓样(CD11b+)浸润的样品与较高的肿瘤负荷相关。
图19包括表明体内腹膜内注射的鼠BM来源的MSC(BM-MSC)在体内归巢至CT26结肠癌肿瘤部位的数据。左上角提供了简明的实验方案。左下图(荧光素酶信号(肿瘤特异性的))显示了在MSC注射之前在体内表达荧光素酶报告体的CT26肿瘤细胞的可视化。将荧光标记的MSC腹膜内注射到携带CT26肿瘤的小鼠(Tumor+)中,并且MSC的位置通过DiR信号分析可视化。MSC在携带CT26肿瘤的小鼠(Tumor+)中的定位在MSC注射后一天和三天显示(DiR信号(MSC-特异性的),Tumor+)。在对照(单独的MSC、单独的肿瘤和阴性对照)上进行的DiR信号分析的结果如所示的显示。
图20A显示工程化的人MSC不归巢至小鼠CT26肿瘤。图20B显示了每种治疗中单个小鼠的肿瘤重量。通过每隔一天从卡尺测量获得的肿瘤体积确定功效。
图21A-21B显示了腹膜内空间中CT26-LUC(荧光素酶)肿瘤生长的动力学。在第0天注射CT26细胞系,并在第7天、第10天、第14天和第18天收获三(3)只小鼠以确定肿瘤生长的动力学。图21A的第一行用IVIS成像仪测量小鼠的体重和ROI以监测肿瘤负荷。第二行监测每组中单个小鼠的肿瘤重量和肿瘤的ROI。第三行将肿瘤重量与全身ROI或肿瘤ROI相关联。图21B显示了在第18天组中三(3)只小鼠的免疫谱以更好地表征肿瘤微环境。
图22A包括表明在结肠直肠癌的皮下小鼠模型中表达IL-12和CCL21a的工程化MSC抑制肿瘤生长的数据;但是,表达CCL21a和IL-36γ或IL-7的MSC的组合不减少肿瘤生长。每种效应子由不同的MSC表达,并且将MSC组合(以1:1的比率)用于组合治疗。每个图显示了表达所示免疫疗法的工程化MSC单独或组合对小鼠中CT26结肠肿瘤生长的影响(n=6-8)。图22A的每条线表示单个小鼠。图22B显示每个治疗组中单个小鼠的肿瘤重量。
图23A-23B包括来自图22A-22B所表示的实验的肿瘤免疫浸润统计。三只小鼠选自PBS、原始MSC和MSC-IL12+MSC-CCL21a(combo)组以对免疫谱肿瘤微环境进行流式细胞术分析。图23A显示了与未给药原始MSC的组相比,combo组中浸润CD3和CD8细胞毒性T群体的显著增加。图23B显示了与用原始MSC处理的组相比,combo组中的粒细胞性骨髓源抑制细胞(gMDSCs)和巨噬细胞群体的显著减少。
图24A-24B包括与免疫百分比和肿瘤重量有关的数据,与由图22A-22B表示的实验有关。图24A和图24B显示具有更多CD3+和CD8+T细胞的样品(左上和中图)与肿瘤重量的降低强烈相关。这些图还显示具有较少CD11b髓样细胞(包括巨噬细胞、树突细胞和MDSC)的样品显示出较低的肿瘤负荷(图24A的中下图和右图以及图24B的上行)。
图25A-25B包括来自腹膜内和皮下结肠直肠癌小鼠模型中的MSC-IL-12+CCL21a疗法的数据。测试了三个不同批次的慢病毒转导系的MSC-IL12和CCL21a(TLOO8-3/4、TL019-01/02和TL022-01/02;每个TL号代表一个批次)。图25A显示了全部三个批次的MSC-IL12+MSC-CCL21a可以在皮下和腹膜内模型中减少肿瘤负荷(前5个图来自SC模型,和后3个图来自IP模型)。在第11天收集来自所有小鼠的肿瘤。图25B显示了各组的平均肿瘤重量。
图26A包括表明工程化组合治疗MSC-IL-12+MSC-CCL21a或MSC-CCL21a+MSC-IFN-β抑制皮下结肠直肠癌小鼠模型中的肿瘤生长的数据;然而,表达CCL21a和s41BBL的MSC的组合不减少肿瘤的生长。每种效应子由不同的MSC表达,并且将MSC组合(以1:1的比率)用于组合治疗。每张图显示了表达所示免疫疗法的工程化MSC单独或组合对小鼠中CT26肿瘤生长的影响(n=6-8)。图26A的每条线表示单个小鼠。图26B显示了每种治疗中单个小鼠的肿瘤重量。与注射原始MSC的小鼠相比,MSC-IL12+MSC-CCL21a显示出最佳功效。在用MSC-IFNb+MSC-CCL21a治疗的组中也观察到治疗功效。
图27A-27B提供了来自图26A-26B表示的实验的附加数据。图27A-27B是显示用指示的工程化MSC处理的每个组的免疫谱的图。在用MSC-IL12+MSC-CCL21a处理后观察到巨噬细胞群体的一致减少(图27A)。当针对原始MSC与用MSC-IL12+MSC-CCL21a处理的组相比时,还观察到了CD3+群体的浸润增加和CD11b+群体的浸润减少的总体趋势(图27A和图27B)。
图28A-28B还提供了来自图26A-26B表示的实验的附加数据。图28A-28B显示了免疫浸润与肿瘤重量的相关性。具有低巨噬细胞和树突细胞的样品具有较低的肿瘤负荷(图28B,中上和右上图)。
图29显示了组合来自以上(图22A和图26A)结肠直肠癌模型的体内数据的图。来自图22A和图26A的组合CT26数据捕获了三个组:仅肿瘤(PBS)、原始MSC处理的及MSC-IL12+MSC-CCL21a处理的。
图30A-30B也显示了来自图22A和图26A的组合数据。这些图显示了来自流式细胞术实验数据的平均免疫浸润数。从图30A在CD8+T中观察到统计学显著性,证明了MSC-IL12+MSC-CCL21a再极化肿瘤微环境并允许更多的细胞毒性T细胞浸润的能力。此外,在通过MSC-IL12+MSC-CCL21a治疗的组中存在CD11b+骨髓群体浸润的减少(图30B)。收集的数据表明,树突细胞和巨噬细胞群体具有统计学显著性。
具体实施方式
间充质干细胞(MSC)(也称为间充质基质细胞)是源自中胚层的非造血成体干细胞的亚群。它们具有自我更新能力和多向分化性(不仅分化为中胚层谱系,如软骨细胞、骨细胞和脂肪细胞,而且分化为外胚层细胞和内胚层细胞)。由于没有伦理问题和畸胎瘤形成,MSC是用于治疗免疫疾病和非免疫疾病的细胞疗法的主要干细胞类型。它们可以很容易地从骨髓、脂肪组织、脐带、胎儿肝脏、肌肉和肺中分离,并且可以在体外成功地扩增。此外,当MSC外源性和系统地递送于人和动物时,它们倾向于归巢至(直接迁移到)具有炎症的受损组织部位,包括肿瘤微环境和转移区域。炎症定向的MSC归巢涉及几种重要的细胞运输相关分子,包括趋化因子、粘附分子和基质金属蛋白酶(MMP)。
本文提供了对免疫细胞如MSC工程化以产生调节不同的肿瘤介导免疫抑制机制的效应分子的方法。这些MSC在本文中称为“工程化MSC”。这些MSC(其通常包含工程化的核酸)在自然界中不存在。在一些实施方案中,MSC被工程化以包括含有与编码效应分子的核苷酸序列可操作地连接的启动子的核酸,例如,刺激免疫反应的效应分子。
“效应分子”是指与另一分子结合并调节与其结合的该分子的生物学活性的分子(例如,诸如DNA或RNA的核酸,或者蛋白质(多肽)或肽)。例如,效应分子可以充当配体以增加或降低酶活性、基因表达或细胞信号传导。因此,在一些实施方案中,效应分子调节(激活或抑制)不同的免疫调节机制。通过与分子直接结合和调节分子,效应分子也可以间接地调节第二个、下游分子。在一些实施方案中,效应分子是分泌的分子,而在其它的实施方案中,效应分子结合于细胞表面或保持为细胞内的。例如,效应分子包括细胞内转录因子、微RNA和shRNA,其改变内部细胞状态以例如增强免疫调节活性、归巢特性或细胞的持久性。效应分子的非限制性实例包括细胞因子、趋化因子、调节代谢物水平的酶、调节细胞因子的抗体或诱饵分子、归巢分子和/或整联蛋白。
术语“调节”包括维持生物活性、抑制(部分或完全)生物活性以及刺激/激活(部分或完全)生物活性。该术语还包括降低或增加(例如,增强)生物活性。当一种效应分子调节的肿瘤介导的免疫抑制机制(例如,刺激T细胞信号传导)与由另一种效应分子调节的肿瘤介导的免疫抑制机制(例如,刺激抗原呈递和/或加工)不同时,认为两种不同的效应分子“调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制”。
效应分子的调节可以是直接的或间接的。当效应分子与另一分子结合并调节该分子的活性时,发生直接调节。当效应分子与另一分子结合,调节该分子的活性,并且作为该调节的结果而调节又一分子(效应分子未与其结合)的活性时,发生间接调节。
在一些实施方案中,至少一种效应分子对肿瘤介导的免疫抑制机制的调节导致免疫刺激性和/或抗肿瘤免疫反应(例如全身的或在肿瘤微环境中)增加至少10%(例如10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%或200%)。例如,肿瘤介导的免疫抑制机制的调节可导致免疫刺激性和/或抗肿瘤免疫反应增加至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少100%。在一些实施方案中,肿瘤介导的免疫抑制机制的调节导致免疫刺激性和/或抗肿瘤免疫反应增加10-20%、10-30%、10-40%、10-50%、10-60%、10-70%、10-80%、10-90%、10-100%、10-200%、20-30%、20-40%、20-50%、20-60%、20-70%、20-80%、20-90%、20-100%、20-200%、50-60%、50-70%、50-80%、50-90%、50-100%或50-200%。应当理解,免疫刺激性和/或抗肿瘤免疫反应的“增加”,例如,全身地或在肿瘤微环境中,是相对于在没有效应分子的情况下另外发生的免疫刺激性和/或抗肿瘤免疫反应。
在一些实施方案中,至少一种效应分子对肿瘤介导的免疫抑制机制的调节导致免疫刺激性和/或抗肿瘤免疫反应(例如全身地或在肿瘤微环境中)增加至少2倍(例如2、3、4、5、10、25、20、25、50或100倍)。例如,肿瘤介导的免疫抑制机制的调节可导致免疫刺激性和/或抗肿瘤免疫反应增加至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍或至少100倍。在一些实施方案中,肿瘤介导的免疫抑制机制的调节导致免疫刺激性和/或抗肿瘤免疫反应增加2-10、2-20、2-30、2-40、2-50、2-60、2-70、2-80、2-90或2-100倍。
免疫刺激性和/或抗肿瘤免疫机制的非限制性实例包括T细胞信号传导、活性和/或募集,抗原呈递和/或加工,自然杀伤细胞介导的细胞毒性信号传导、活性和/或募集,树突细胞分化和/或成熟,免疫细胞募集,促炎性巨噬细胞信号传导、活性和/或募集,基质降解,免疫刺激性代谢产物产生,干扰素基因刺激因子(STING)信号传导(其增加IFN的分泌和Th1极化,从而促进抗-肿瘤免疫反应)和/或I型干扰素信号传导。效应分子可以刺激至少一种(一种或多种)前述的免疫刺激机制,因此导致免疫刺激性反应的增加。可以例如使用针对T细胞增殖或细胞毒性的体外测定、体外抗原呈递测定、表达测定(例如,特定标志物的表达测定)和/或(例如,细胞因子的)细胞分泌测定来评估前述免疫刺激性和/或抗肿瘤免疫机制的变化。
在一些实施方案中,至少一种效应分子对肿瘤介导的免疫抑制机制的调节导致免疫抑制反应(例如全身地或在肿瘤微环境中)降低至少10%(例如10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%或200%)。例如,肿瘤介导的免疫抑制机制的调节可能导致免疫抑制反应降低至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少100%。在一些实施方案中,肿瘤介导的免疫抑制机制的调节导致免疫抑制反应降低10-20%、10-30%、10-40%、10-50%、10-60%、10-70%、10-80%、10-90%、10-100%、10-200%、20-30%、20-40%、20-50%、20-60%、20-70%、20-80%、20-90%、20-100%、20-200%、50-60%、50-70%、50-80%、50-90%、50-100%或50-200%。应当理解,免疫抑制反应(例如,全身地或肿瘤微环境中)的“降低”是相对于在没有效应分子的情况下另外发生的免疫抑制反应。
在一些实施方案中,至少一种效应分子对肿瘤介导的免疫抑制机制的调节导致免疫抑制反应(例如,全身地或在肿瘤微环境中)降低至少2倍(例如2、3、4、5、10、25、20、25、50或100倍)。例如,调节肿瘤介导的免疫抑制机制可导致免疫抑制反应降低至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍或至少100倍。在一些实施方案中,肿瘤介导的免疫抑制机制的调节导致免疫抑制反应降低2-10、2-20、2-30、2-40、2-50、2-60、2-70、2-80、2-90或2-100倍。
免疫抑制机制的非限制性实例包括负性共刺激信号传导,细胞毒性细胞(例如,T细胞和/或NK细胞)的促凋亡信号传导,T调节(Treg)细胞信号传导,肿瘤检查点分子的产生/维持,骨髓源抑制细胞信号传导、活性和/或募集,免疫抑制因子/代谢产物的产生和/或血管内皮生长因子信号传导。效应分子可以抑制至少一种(一种或多种)前述免疫抑制机制,从而导致免疫抑制反应的降低。前述免疫抑制机制的变化可以例如通过测定T细胞增殖的增加和/或IFNγ产生(负性共刺激信号传导、Treg细胞信号传导和/或MDSC)的增加;膜联蛋白V/PI流动染色(促凋亡信号传导);用于表达的流动染色,例如PDL1表达(肿瘤检查点分子的产生/维持);ELISA、通过qPCR的RNA、酶测定,例如IDO色氨酸分解代谢(免疫抑制因子/代谢产物的产生);和PI3K、Akt、p38的磷酸化(VEGF信号传导)来评估。
在一些实施方案中,MSC经工程化以表达膜结合的抗CD3和/或抗CD28激动剂细胞外结构域。
在一些实施方案中,MSC经工程化以产生至少两种(例如,2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种)效应分子,其每一种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。在其它的实施方案中,MSC经工程化以产生至少一种不是由MSC天然产生的效应分子。这种效应分子可以例如,补充由MSC天然产生的效应分子的功能。
在一些实施方案中,效应分子加性地起作用:例如,两种效应分子的作用可以等于该两种效应分子单独起作用的效果的总和。在其它的实施方案中,效应分子协同地起作用:例如,两种效应分子的作用可以大于该两种效应分子的组合功能。本公开还包括效应分子与产生它们的免疫细胞(例如,MSC)之间的加和和协同作用。
调节肿瘤介导的免疫抑制机制的效应分子可以是,例如,分泌的因子(例如,调节免疫系统中涉及的细胞外机制的细胞因子、趋化因子、抗体和/或诱饵受体)、控制细胞状态的细胞内因子(例如,微RNA和/或转录因子,其调节细胞状态以增强促炎性性质)、包装到外来体中的因子(例如,微RNA、细胞溶质因子和/或细胞外因子)、表面展示因子(例如,检查点抑制剂、TRAIL)和/或代谢基因(例如,产生/调节或降解代谢物或氨基酸的酶)。
在一些实施方案中,效应分子可以选自以下非限制性分子类别:细胞因子、抗体、趋化因子、核苷酸、肽和酶。前述效应分子类别的非限制性实例列于:
表1.示例性效应分子
在一些实施方案中,MSC包含工程化的核酸,其包含与编码效应分子的核苷酸序列可操作地连接的启动子。在一些实施方案中,工程化核酸包含与编码至少2种效应分子的核苷酸序列可操作地连接的启动子。例如,工程化核酸可包含与编码至少3种、至少4种、至少5种、至少6种、至少7种、至少8种、至少8种、至少9种或至少10种效应分子的核苷酸序列可操作地连接的启动子。在一些实施方案中,工程化核酸包含与编码1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种效应分子的核苷酸序列可操作地连接的启动子。
在一些实施方案中,在一些实施方案中,MSC被工程化以包含至少两个工程化的核酸,每一个工程化核酸包含与编码至少一种(例如,1、2或3种)效应分子的核苷酸序列可操作地连接的启动子。例如,可以将MSC工程化为包含至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少8个、至少9个或至少10个工程化的核酸,其每一个包含与编码至少一种(例如,1、2或3种)效应分子的核苷酸序列可操作地连接的启动子。在一些实施方案中,MSC被工程化以包含2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个工程化的核酸,其每一个包含与编码至少一种(例如,1、2或3种)效应分子的核苷酸序列可操作地连接的启动子。
“工程化核酸”是非天然存在的核酸。然而,应该理解,虽然工程化的核酸作为整体不是天然存在的,但它可以包含天然存在的核苷酸序列。在一些实施方案中,工程化的核酸包含来自不同生物体(例如,来自不同物种)的核苷酸序列。例如,在一些实施方案中,工程化的核酸包含鼠核苷酸序列、细菌核苷酸序列、人类核苷酸序列和/或病毒核苷酸序列。术语“工程化核酸”包括重组核酸和合成核酸。“重组核酸”是指通过接合核酸分子而构建的,并且在一些实施方案中,可以在活细胞中复制的分子。“合成核酸”是指扩增的或者通过化学方式或通过其它方式合成的分子。合成核酸包含化学修饰的或以其它方式修饰的,但可以与天然存在的核酸分子碱基配对的那些核酸。重组核酸和合成核酸还包括由前述任一种的复制产生的那些分子。本公开的工程化核酸可以由单一分子(例如,包含在相同的质粒或其它载体中)或由多个不同分子(例如,多个不同的独立复制分子)编码。
可以使用标准分子生物学方法来产生本公开的工程化核酸(参见,例如,Green和Sambrook,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,2012,Cold Spring HarborPress)。在一些实施方案中,使用GIBSON克隆产生工程化核酸构建体(参见,例如,Gibson,D.G.等,Nature Methods,343-345,2009;和Gibson,D.G.等,NatureMethods,901-903,2010,其中每一个都通过引用并入本文)。GIBSON通常在单管反应中使用三种酶活性:5'核酸外切酶、DNA聚合酶的′Y延伸活性和DNA连接酶活性。5'核酸外切酶活性消化(chew back)5'末端序列,并暴露用于退火的互补序列。然后聚合酶活性填充退火区域上的空隙。然后,DNA连接酶将切口密封,并将DNA片段共价连接在一起。邻接片段的重叠序列比Golden Gate Assembly中使用的那些片段长得多,因此导致更高的正确组装的百分比。在一些实施方案中,使用克隆(Clontech)产生工程化的核酸构建体。
“启动子”是指核酸序列的控制区域,在此处核酸序列的其余部分的转录起始和速率被控制。启动子还可以含有调节蛋白和分子(例如RNA聚合酶和其它转录因子)可以在其处结合的子区域。启动子可以是组成型的、诱导型的、可阻抑的、组织特异性的或其任何组合。启动子驱动其调节的核酸序列的表达或驱动其转录。本文中,当启动子相对于其调节的核酸序列处于正确的功能位置和定向中以控制(“驱动”)该序列的转录起始和/或表达时,认为该启动子是“可操作地连接的”。
启动子可以是与基因或序列天然相关的启动子,如可以通过分离位于给定基因或序列的编码区段上游的5'非编码序列而获得的。这种启动子可以称为“内源的”。在一些实施方案中,编码核酸序列可以位于重组或异源启动子的控制下,其是指在其自然环境中通常不与编码序列相关的启动子。这些启动子可包括其它基因的启动子;从任何其它细胞分离的启动子;和非“天然存在的”合成启动子或增强子,例如含有不同转录调节区域的不同元件和/或通过本领域已知的基因工程方法改变表达的突变的那些。除了合成地产生启动子和增强子的核酸序列之外,序列可以使用重组克隆和/或核酸扩增技术来产生,包括聚合酶链式反应(PCR)(参见,例如,美国专利号4,683,202和美国专利号5,928,906)。
工程化核酸的启动子可以是“诱导型启动子”,其是指特征在于在信号存在、受信号影响或与信号接触时调节(例如,启动或激活)转录活性的启动子。信号可以是内源的或者通常是外部的条件(例如,光)、化合物(例如,化学或非化学化合物)或蛋白质(例如,细胞因子),其以具有调节诱导型启动子的转录活性方面的活性的方式与诱导型启动子接触。转录的激活可以涉及直接作用于启动子以驱动转录或通过使阻止启动子驱动转录的阻遏物失活而间接作用于启动子。相反,转录的失活可能涉及直接作用于启动子以阻止转录或通过激活随后作用于启动子的阻遏物而间接作用于启动子。
如果在局部肿瘤状态(例如,炎症或缺氧)或信号存在下,启动子的转录被激活、失活、增加或减少,则该启动子对该状态或信号是“响应性”的或“受其调节”的。在一些实施方案中,启动子包含反应元件。“反应元件”是启动子区域内结合调控(调节)该启动子的基因表达的特定分子(例如,转录因子)的短DNA序列。可根据本公开使用的反应元件包括但不限于根皮素调节的控制元件(PEACE)、锌指DNA结合结构域(DBD)、干扰素-γ-激活序列(GAS)(Decker,T.等,JInterferon Cytokine Res.1997Mar;17(3):121-34,通过引用并入本文)、干扰素-刺激的反应元件(ISRE)(Han,K.J.等,J Biol Chem.2004Apr9;279(15):15652-61,通过引用并入本文)、NF-kappaB反应元件(Wang,V.等,Cell Reports.2012;2(4):824-839,通过引用并入本文)和STAT3反应元件(Zhang,D.等,J of Biol Chem.1996;271:9503-9509,通过引用并入本文)。其它反应元件包括在本文中。
表2中列出了响应性启动子(例如,TGF-β响应性启动子)的非限制性实例,其显示了启动子和转录因子的设计,以及显示了诱导剂分子对转录因子(TF)和转基因转录(T)的作用(B,结合;D,解离;nd,未确定)(A,激活;DA,失活;DR,脱抑制)(参见Horner,M.&Weber,W.FEBS Letters 586(2012)20784-2096m,以及其中引用的参考文献)。
表2.响应性启动子的实例
启动子的其它非限制性实例包括巨细胞病毒(CMV)启动子、延伸因子1-α(EF1a)启动子、延伸因子(EFS)启动子、MND启动子(包含骨髓增生性肉瘤病毒增强子修饰的MoMuLVLTR的U3区域的合成启动子)、磷酸甘油酸激酶(PGK)启动子、脾病灶形成病毒(SFFV)启动子、猿猴病毒40(SV40)启动子和泛素C(UbC)启动子(参见表3)。
表3.示例性启动子
在一些实施方案中,本公开的启动子通过肿瘤微环境内的信号来调节。如果在肿瘤微环境的存在下,启动子的活性相对于不存在肿瘤微环境时启动子的活性增加或降低至少10%,则认为肿瘤微环境调节该启动子。在一些实施方案中,启动子的活性相对于不存在肿瘤微环境时启动子的活性增加或降低至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少100%。例如,启动子的活性相对于不存在肿瘤微环境时启动子的活性增加或降低10-20%、10-30%、10-40%、10-50%、10-60%、10-70%、10-80%、10-90%、10-100%、10-200%、20-30%、20-40%、20-50%、20-60%、20-70%、20-80%、20-90%、20-100%、20-200%、50-60%、50-70%、50-80%、50-90%、50-100%或50-200%。
在一些实施方案中,启动子的活性相对于不存在肿瘤微环境时启动子的活性增加或降低至少2倍(例如,2、3、4、5、10、25、20、25、50或100倍)。例如,启动子的活性相对于不存在肿瘤微环境时启动子的活性增加或降低至少3倍、至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍或至少100倍。在一些实施方案中,启动子的活性相对于不存在肿瘤微环境时启动子的活性增加或降低2-10、2-20、2-30、2-40、2-50、2-60、2-70、2-80、2-90或2-100倍。
在一些实施方案中,本公开的启动子在低氧条件下被激活。“低氧条件”是其中身体或身体区域在组织水平被剥夺充分的氧供应的状态。低氧条件可引起炎症(例如,炎性细胞因子的水平在低氧条件下增加)。在一些实施方案中,在低氧条件下活化的启动子与编码降低炎性细胞因子的表达或活性的效应分子的核苷酸可操作地连接,从而减少由低氧条件引起的炎症。在一些实施方案中,在低氧条件下活化的启动子包含缺氧反应元件(HRE)。“缺氧反应元件(HRE)”是对低氧诱导因子(HIF)有反应的反应元件。在一些实施方案中,HRE包含共有基序NCGTG(其中N是A或G)。
在一些实施方案中,工程化MSC产生多种效应分子。例如,MSC可以工程化以产生2-20种不同的效应分子。在一些实施方案中,MSC被工程化以产生2-20、2-19、2-18、2-17、2-16、2-15、2-14、2-13、2-12、2-11、2-10、2-9、2-8、2-7、2-6、2-5、2-4、2-3、3-20、3-19、3-18、3-17、3-16、3-15、3-14、3-13、3-12、3-11、3-10、3-9、3-8、3-7、3-6、3-5、3-4、4-20、4-19、4-18、4-17、4-16、4-15、4-14、4-13、4-12、4-11、4-10、4-9、4-8、4-7、4-6、4-5、5-20、5-19、5-18、5-17、5-16、5-15、5-14、5-13、5-12、5-11、5-10、5-9、5-8、5-7、5-6、6-20、6-19、6-18、6-17、6-16、6-15、6-14、6-13、6-12、6-11、6-10、6-9、6-8、6-7、7-20、7-19、7-18、7-17、7-16、7-15、7-14、7-13、7-12、7-11、7-10、7-9、7-8、8-20、8-19、8-18、8-17、8-16、8-15、8-14、8-13、8-12、8-11、8-10、8-9、9-20、9-19、9-18、9-17、9-16、9-15、9-14、9-13、9-12、9-11、9-10、10-20、10-19、10-18、10-17、10-16、10-15、10-14、10-13、10-12、10-11、11-20、11-19、11-18、11-17、11-16、11-15、11-14、11-13、11-12、12-20、12-19、12-18、12-17、12-16、12-15、12-14、12-13、13-20、13-19、13-18、13-17、13-16、13-15、13-14、14-20、14-19、14-18、14-17、14-16、14-15、15-20、15-19、15-18、15-17、15-16、16-20、16-19、16-18、16-17、17-20、17-19、17-18、18-20、18-19或19-20种效应分子。在一些实施方案中,MSC被工程化以产生1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种效应分子。
本公开的工程化MSC通常产生多种效应分子,其中至少两种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。在一些实施方案中,至少一种效应分子在肿瘤微环境中刺激炎症途径,并且至少一种效应分子在肿瘤微环境中抑制炎症的负性调节剂。
“肿瘤微环境”是其中存在肿瘤的细胞环境,包括周围血管、免疫细胞、成纤维细胞、骨髓源炎性细胞、淋巴细胞、信号传导分子和细胞外基质(ECM)(参见,例如,Pattabiraman,D.R.&Weinberg,R.A.Nature Reviews Drug Discovery 13,497–512(2014);Balkwill,F.R.等JCell Sci 125,5591-5596,2012;和Li,H.等J Cell Biochem101(4),805-15,2007)。
在一些实施方案中,MSC被工程化以产生至少一种归巢分子。“归巢”是指细胞主动导航(迁移)到靶位点(例如,细胞、组织(例如肿瘤)或器官)。“归巢分子”是指将MSC指引向靶位点的分子。在一些实施方案中,归巢分子起到识别和/或启动MSC与靶位点的相互作用的功能。归巢分子的非限制性实例包括CXCR1 CCR9、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CCR2、CCR4、FPR2、VEGFR、IL6R、CXCR1、CSCR7和PDGFR。
在一些实施方案中,归巢分子是趋化因子受体(结合趋化因子的细胞表面分子)。趋化因子是由细胞分泌的小细胞因子或信号传导蛋白,其可诱导细胞中的定向趋化性。趋化因子可分为四个主要亚家族:CXC、CC、CX3C和XC,它们都通过选择性结合位于靶细胞表面上的趋化因子受体发挥生物学作用。在一些实施方案中,MSC被工程化以产生CXCR4,一种允许MSC沿趋化因子梯度朝向表达基质细胞衍生因子1(也称为SDF1、C-X-C基序趋化因子12和CXCL12)的细胞、组织或肿瘤归巢的趋化因子受体。可以由本公开的工程化MSC产生的趋化因子受体的非限制性实例包括:CXC趋化因子受体(例如,CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6和CXCR7)、CC趋化因子受体(CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10和CCR11)、CX3C趋化因子受体(例如,CX3CR1,其结合CX3CL1)和XC趋化因子受体(例如,XCR1)。在一些实施方案中,趋化因子受体是G蛋白连接的跨膜受体或肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的成员(包括但不限于TNFRSF1A、TNFRSF1B)。在一些实施方案中,MSC被工程化以产生CXCL8,CXCL9和/或CXCL10(促进T细胞募集)、CCL3和/或CXCL5、CCL21(Th1募集和极化)。
在一些实施方案中,MSC被工程化以产生G蛋白偶联受体(GPCR),其检测含N-甲酰化的寡肽(包括但不限于FPR2和FPRL1)。
在一些实施方案中,MSC被工程化以产生检测白介素的受体(包括但不限于IL6R)。
在一些实施方案中,MSC被工程化以产生检测从其他细胞、组织或肿瘤分泌的生长因子的受体(包括但不限于FGFR、PDGFR、EGFR和VEGF家族的受体,包括但不限于VEGF-C和VEGF-D)。
在一些实施方案中,归巢分子是整联蛋白。整联蛋白是跨膜受体,其促进细胞-细胞外基质(ECM)粘附。整联蛋白是具有两个亚基的专性异二聚体:α(阿尔法)和β(贝塔)。整联蛋白的α亚基可以是,但不限于:ITGA1、ITGA2、ITGA3、ITGA4、ITGA5、ITGA6、IGTA7、ITGA8、ITGA9、IGTA10、IGTA11、ITGAD、ITGAE、ITGAL、ITGAM、ITGAV、ITGA2B、ITGAX。整联蛋白的β亚基可以是,但不限于:ITGB1、ITGB2、ITGB3、ITGB4、ITGB5、ITGB6、ITGB7和ITGB8。本公开的MSC可以被工程化以产生整联蛋白α和β亚基的任何组合。
在一些实施方案中,归巢分子是基质金属蛋白酶(MMP)。MMP是切割内皮细胞壁下面的基底膜的组分的酶。MMPs的非限制性实例包括MMP-2、MMP-9和MMP。在一些实施方案中,MSC被工程化以产生抑制MMP的分子(例如蛋白质)的抑制剂。例如,MSC可以工程化以表达膜型1MNM(MT1-MMP)或TIMP金属肽酶抑制剂1(TIMP-1)的抑制剂(例如,RNAi分子)。
在一些实施方案中,例如,归巢分子是结合于靶组织的内皮上的选择蛋白的配体(例如,造血细胞E-/L-选择蛋白配体(HCELL),Dykstra等,Stem Cells.2016Oct;34(10):2501-2511)。
术语“归巢分子”还包括调节改善/增强MSC的归巢的分子的产生的转录因子。
在一些实施方案中,MSC归巢通过局部照射受试者中的肿瘤/癌细胞来增加。放射组织损伤有助于MSC归巢,以及对于该受损组织的内源性T细胞归巢。
工程化细胞的实例
如本文提供的细胞(例如,MSC)被工程化以产生多种效应分子,其中至少两种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。在一些实施方案中,至少一种(例如1、2、3、4、5种或更多种)效应分子在肿瘤微环境中刺激至少一种免疫刺激机制,或在肿瘤微环境中抑制至少一种免疫抑制机制。在一些实施方案中,至少一种(例如1、2、3、4、5种或更多种)效应分子在肿瘤微环境中抑制至少一种免疫抑制机制,并且至少一种效应分子(例如1、2、3、4、5种或更多种)在肿瘤微环境中抑制至少一种免疫抑制机制。在再其他的实施方案中,至少两种(例如2、3、4、5种或更多种)效应分子在肿瘤微环境中刺激至少一种免疫刺激机制。在再其他的实施方案中,至少两种(例如1、2、3、4、5种或更多种)效应分子在肿瘤微环境中抑制至少一种免疫抑制机制。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生至少一种刺激T细胞信号传导、活性和/或募集的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生至少一种刺激抗原呈递和/或加工的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生至少一种刺激自然杀伤细胞介导的细胞毒性信号传导、活性和/或募集的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生至少一种刺激树突细胞分化和/或成熟的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如MSC)被工程化以产生至少一种刺激免疫细胞募集的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生至少一种刺激M1巨噬细胞信号传导、活性和/或募集的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如MSC)被工程化以产生至少一种刺激Th1极化的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如MSC)被工程化以产生至少一种刺激基质降解的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如MSC)被工程化以产生至少一种刺激免疫刺激性代谢产物产生的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如MSC)被工程化以产生至少一种刺激I型干扰素信号传导的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如MSC)被工程化以产生至少一种抑制负性共刺激信号传导的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生至少一种抑制抗肿瘤免疫细胞的促凋亡信号传导(例如,通过TRAIL)的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生至少一种抑制T调节(Treg)细胞信号传导、活性和/或募集的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如MSC)被工程化以产生至少一种抑制肿瘤检查点分子的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如MSC)被工程化以产生至少一种激活干扰素基因刺激因子(STING)信号传导的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生至少一种抑制骨髓源抑制细胞信号传导、活性和/或募集的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如MSC)被工程化以产生至少一种降解免疫抑制因子/代谢产物的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如MSC)被工程化以产生至少一种抑制血管内皮生长因子信号传导的抑制分子。在一些实施方案中,细胞(例如MSC)被工程化以产生至少一种直接杀死肿瘤细胞的效应分子(例如,颗粒酶、穿孔素、溶瘤病毒、细胞溶解肽和酶、抗肿瘤抗体,例如,其引发ADCC)。
在一些实施方案中,至少一种效应分子:刺激T细胞信号传导、活性和/或募集,刺激抗原呈递和/或加工,刺激自然杀伤细胞介导的细胞毒性信号传导、活性和/或募集,刺激树突细胞分化和/或成熟,刺激免疫细胞募集,刺激巨噬细胞信号传导,刺激基质降解,刺激免疫刺激性代谢产物产生或刺激I型干扰素信号传导;和至少一种效应分子抑制负性共刺激信号传导,抑制抗肿瘤免疫细胞的促凋亡信号传导,抑制T调节(Treg)细胞信号传导、活性和/或募集,抑制肿瘤检查点分子,激活干扰素基因刺激因子(STING)信号传导,抑制骨髓源抑制细胞信号传导、活性和/或募集,降解免疫抑制因子/代谢产物,抑制血管内皮生长因子信号传导或直接杀死肿瘤细胞。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生选自IL-12、IFN-β、IFN-γ、IL-2、IL-15、IL-7、IL-36γ、IL-18、IL-1β、OX40-配体和CD40L的至少一种效应分子;和/或选自抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体和抗IL-35抗体的至少一种效应分子;和/或选自MIP1α(CCL3)、MIP1β(CCL5)和CCL21的至少一种效应分子;和/或选自CpG寡脱氧核苷酸的至少一种效应分子;和/或选自微生物肽的至少一种效应分子。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β及至少一种选自的细胞因子、抗体、趋化因子、核苷酸、肽、酶和干扰素基因刺激因子(STING)的效应分子。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和至少一种细胞因子或受体/配体(例如,IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-15、IL-7、IL-36γ、IL-18、IL-1β、OX40-配体和/或CD40L)。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和至少一种细胞因子或受体/配体(例如,IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-15、IL-7、IL-36γ、IL-18、IL-1β、OX40-配体和/或CD40L)。
在一些实施方案中,细胞因子作为与自身结合于细胞因子的抗体、抗体片段或受体结合的工程化融合蛋白形式产生以诱导细胞特异性靶向结合,例如IL-2与至抗体片段融合,从而阻止其与Treg细胞结合并优先与CD8和NK细胞结合。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和至少一种抗体(例如,抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、抗CTLA-4抗体、抗VEGF、抗TGF-β、抗IL-10、抗TNF-α和/或抗IL-35抗体)。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和至少一种趋化因子(MIP1α(CCL3)、MIP1β(CCL5)和/或CCL21)。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和至少一种核苷酸(例如,CpG寡脱氧核苷酸)。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和至少一种肽(例如,抗肿瘤肽)。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和至少一种酶。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和至少一种STING激活剂。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和至少一种具有直接抗肿瘤活性的效应子(例如,溶瘤病毒)。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和MIP1-α。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和MIP1-β。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和CXCL9。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和CXCL10。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和CXCL11。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和CCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL36-γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和MIP1-α。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和MIP1-β。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和CXCL9。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和CXCL10。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和CXCL11。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和CCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL36-γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-12和MIP1-α。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-12和MIP1-β。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-12和CXCL9。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-12和CXCL10。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-12和CXCL11。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-12和CCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-β、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL36-γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)和MIP1-α。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和MIP1-β。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和CXCL9。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和CXCL10。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和CXCL11。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和CCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL36-γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生干扰素基因刺激因子(STING)和MIP1-α。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和MIP1-β。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和CXCL9。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和CXCL10。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和CXCL11。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和CCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL36-γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和MIP1-α。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和MIP1-β。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和CXCL9。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和CXCL10。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和CXCL11。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和CCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL36-γ、IL-18和/或41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和MIP1-α。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和MIP1-β。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和CXCL9。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和CXCL10。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和CXCL11。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和CCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL36-γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和IL-12。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和IFN-γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和IL-2。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和IL-7。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和IL-15。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和IL-36γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和IL-18。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和CD40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和IL-12。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和IFN-γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和IL-2。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和IL-7。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和IL-15。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和IL-36γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和IL-18。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和CD40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TNF相关凋亡诱导配体(TRAIL)和IL-12。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和IFN-γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和IL-2。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和IL-7。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和IL-15。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和IL-36γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和IL-18。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和CD40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生干扰素基因刺激因子(STING)和IL-12。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和IFN-γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和IL-2。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和IL-7。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和IL-15。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和IL-36γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和IL-18。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和CD40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和IL-12。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和IFN-γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和IL-2。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和IL-7。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和IL-15。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和IL-36γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和IL-18。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和IL-12。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和IFN-γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和IL-2。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和IL-7。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和IL-15。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和IL-36γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和IL-18。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和CD40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-α和IL-12。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-α和MIP1-γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-α和IL-2。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-α和IL-7。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-α和IL-15。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-α和IL-36γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-α和IL-18。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-α和CD40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-α和41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-β和IL-12。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-β和MIP1-γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-β和IL-2。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-β和IL-7。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-β和IL-15。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-β和IL-36γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-β和IL-18。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-β和CD40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-β和41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL9和IL-12。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL9和IFN-γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL9和IL-2。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL9和IL-7。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL9和IL-15。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL9和IL-36γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL9和IL-18。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL9和CD40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL9和41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL10和IL-12。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL10和IFN-γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL10和IL-2。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL10和IL-7。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL10和IL-15。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL10和IL-36γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL10和IL-18。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL10和CD40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL10和41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL11和IL-12。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL11和IFN-γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL11和IL-2。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL11和IL-7。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL11和IL-15。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL11和IL-36γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL11和IL-18。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL11和41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CCL21和IL-12。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CCL21和IFN-γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CCL21和IL-2。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CCL21和IL-7。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CCL21和IL-15。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CCL21和IL-36γ。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CCL21和IL-18。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CCL21和CD40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CCL21和41BB-L。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生抗CD40抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L1抗体和/或OX40L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-α和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CXCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL-36γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-β和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CXCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL-36γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生TRAIL和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CXCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL-36γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生STING和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CXCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL-36γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CXCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL-36γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生胞嘧啶脱氨酶和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CXCL21。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL-36γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-α和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-α和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-α和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-α和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL-36γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-β和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-β和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-β和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生MIP1-β和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL-36γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL9和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL9和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL9和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL9和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL-36γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL10和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL10和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL10和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL10和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL-36γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL11和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL11和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL11和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CXCL11和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL-36γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CCL21和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CCL21和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CCL21和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CCL21和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IL-12、IFN-γ、IL-2、IL-7、IL-15、IL-36γ、IL-18、CD40L和/或41BB-L。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-12和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-12和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-12和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-12和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-γ和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-γ和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-γ和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IFN-γ和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-2和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-2和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-2和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-2和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-7和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-7和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-7和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-7和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-15和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-15和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-15和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-15和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-36-γ和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-36-γ和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-36-γ和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-36-γ和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-18和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-18和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-18和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生IL-18和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生CD40L和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。
在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生41BB-L和抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生41BB-L和OX40L。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生41BB-L和抗CTLA4抗体。在一些实施方案中,细胞(例如,MSC)被工程化以产生41BB-L和抗CD47抗体。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生IFN-α、IFN-β、TRAIL、STING、CD40L和/或胞嘧啶脱氨酶。在一些实施方案中,细胞被工程化以进一步产生MIP1-α、MIP1-β、CXCL9、CXCL10、CXCL11和/或CCL21。
细胞类型
本公开主要涉及经工程化以产生多种效应分子的间充质干细胞(MSC)(例如,人MSC)。然而,应该理解,本公开不限于MSC,而是旨在涵盖其他细胞类型(例如,免疫系统的细胞类型)。例如,如本文提供的工程化细胞(经工程化以产生效应分子)可以选自自然杀伤(NK)细胞、NKT细胞、先天性淋巴细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和树突细胞、T细胞(例如CD8+T细胞、CD4+T细胞、γ-δT细胞和T调节细胞(CD4+、FOXP3+、CD25+))和B细胞。因此,在任何实施方案中,本公开的MSC可以替代一种或多种前述细胞类型。
在一些实施方案中,工程化间充质干细胞来自(例如,获自或源自)骨髓。在一些实施方案中,工程化间充质干细胞来自(例如,获自或源自)脂肪组织。在一些实施方案中,工程化间充质干细胞来自(例如,获自或源自)脐带。在一些实施方案中,工程化间充质干细胞来自多能干细胞(例如,胚胎干细胞或诱导多能干细胞)。
因此,本公开提供经工程化以产生多种效应分子的T细胞(例如CD8+T细胞、CD4+T细胞、γ-δT细胞和T调节细胞(CD4+、FOXP3+、CD25+)),其中至少两种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。在一些实施方案中,B细胞经工程化以产生多种效应分子,其中至少两种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。在一些实施方案中,NK细胞经工程化以产生多种效应分子,其中至少两种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。在一些实施方案中,NKT细胞经工程化以产生多种效应分子,其中至少两种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。在一些实施方案中,先天免疫细胞经工程化以产生多种效应分子,其中至少两种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。在一些实施方案中,肥大细胞经工程化以产生多种效应分子,其中至少两种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。在一些实施方案中,嗜酸性粒细胞经工程化以产生多种效应分子,其中至少两种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。在一些实施方案中,嗜碱性粒细胞经工程化以产生多种效应分子,其中至少两种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。在一些实施方案中,巨噬细胞经工程化以产生多种效应分子,其中至少两种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。在一些实施方案中,嗜中性粒细胞经工程化以产生多种效应分子,其中至少两种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。在一些实施方案中,树突细胞经工程化以产生多种效应分子,其中至少两种调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制。
在一些实施方案中,至少一种效应分子在肿瘤微环境中刺激免疫刺激机制和/或在肿瘤微环境中抑制免疫抑制机制。
在一些实施方案中,至少一种效应分子(a)刺激T细胞信号传导、活性和/或募集,(b)刺激抗原呈递和/或加工,(c)刺激自然杀伤细胞介导的细胞毒性信号传导、活性和/或募集,(d)刺激树突细胞分化和/或成熟,(e)刺激免疫细胞募集,(f)刺激促炎性巨噬细胞信号传导、活性和/或募集,或者抑制抗炎性巨噬细胞信号传导、活性和/或募集,(g)刺激基质降解,(h)刺激免疫刺激性代谢产物产生,(i)刺激I型干扰素信号传导,(j)抑制负性共刺激信号传导,(k)抑制抗肿瘤免疫细胞的促凋亡信号传导,(l)抑制T调节(Treg)细胞信号传导、活性和/或募集,(m)抑制肿瘤检查点分子,(n)刺激干扰素基因刺激因子(STING)信号传导,(o)抑制骨髓源抑制细胞信号传导、活性和/或募集,(p)降解免疫抑制因子/代谢产物,(q)抑制血管内皮生长因子信号传导和/或(r)直接杀死肿瘤细胞。
免疫系统包括先天免疫系统和适应性系统,各自包含具有特定功能的不同类型的细胞。先天免疫系统包含保卫宿主免受其它生物体感染的细胞和机制。先天免疫系统(提供针对感染的即时防御)以非特异性方式识别病原体和对其作出响应,并且不向宿主提供持久的免疫力。先天免疫系统(例如,在诸如哺乳动物的脊椎动物中)的主要功能包括:通过产生化学因子将免疫细胞募集到感染部位,所述化学因子包括称为细胞因子和趋化因子的专用化学介质;激活补体级联以鉴别细菌、激活细胞和促进抗体复合物或死细胞的清除;通过专门的白细胞识别和去除器官、组织、血液和淋巴中存在的外来物质;通过称为抗原呈递的过程激活适应性免疫系统;和作为传染因子的物理和化学屏障发挥作用。
先天免疫系统的组成部分包括物理屏障(皮肤、胃肠道、呼吸道)、防御机制(分泌物、粘液、胆汁)和一般免疫反应(炎症)。白细胞(也称为白血球)和吞噬细胞是在先天免疫系统和反应中起作用的主要细胞类型,其识别和消除可能引起感染的病原体。
白细胞不与特定器官或组织紧密相关,并且与独立的单细胞生物体类似地发挥功能。白细胞能够自由移动并与细胞碎片、外来颗粒和入侵的微生物相互作用和将其捕获。与身体中的许多其它细胞不同,大多数先天免疫白细胞不能自行分裂或繁殖,而是存在于骨髓中的多能造血干细胞的产物。白细胞的类型包括但不限于:肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、自然杀伤细胞(NK细胞)、先天淋巴细胞(ILC)和γ-δT细胞。
肥大细胞是一种先天免疫细胞类型,其驻留于结缔组织和粘膜中。肥大细胞与伤口愈合和针对病原体的防御相关,但也常常与变应性和过敏性相关。在激活时,肥大细胞迅速释放出富含组胺和肝素的特征性颗粒,以及各种激素介质和趋化因子或趋化性细胞因子进入环境中。组胺扩张血管,从而引起炎症的特有体征,并募集中性粒细胞和巨噬细胞。
嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞是与嗜中性粒细胞有关的细胞。当被病原体接触激活时,释放组胺的嗜碱性粒细胞在针对寄生虫的防御中是重要的,并在变态反应如哮喘中发挥作用。激活后,嗜酸性粒细胞分泌一系列高毒性蛋白质和自由基,其在杀死寄生虫方面非常有效,但在变态反应过程中也可能损伤组织。因此,嗜酸性粒细胞激活和释放毒素受到严格调控以防止任何不适当的组织破坏。
自然杀伤细胞(NK细胞)是先天免疫系统的组成部分,其不直接攻击入侵的微生物。相反,NK细胞破坏受损的宿主细胞(例如肿瘤细胞或病毒感染的细胞),其具有异常低水平的细胞表面标志物,称为MHC I(主要组织相容性复合物)-这种情况可能在宿主细胞的病毒感染中出现。NK细胞之所以如此命名,是因为它们不需要活化以杀死具有低表面MHC I分子的细胞的最初观念。
γ-δT细胞表现出使它们处于先天免疫和适应性免疫之间的边界处的特征。在一些情况下,γ-δT细胞可被认为是适应性免疫的组分,因为它们重排TCR基因以产生连接多样性并形成记忆表型。各种亚群也可以被认为是先天免疫系统的部分,其中限制的TCR或NK受体可以用作模式识别受体。例如,大量Vγ9/Vδ2T细胞对微生物产生的常见分子迅速作出反应,且高度限制的上皮内Vδ1T细胞将对应激的上皮细胞产生反应。
吞噬细胞是吞食或“吞噬”病原体或颗粒的先天免疫细胞。为了吞噬颗粒或病原体,吞噬细胞伸展其质膜的部分,将膜包裹在颗粒周围直至其被包围(颗粒现在在细胞内)。一旦在细胞内部,入侵的病原体就容纳在内体中,内体与溶酶体合并。溶酶体含有杀死和消化颗粒或生物体的酶和酸。通常,吞噬细胞在身体内巡逻而寻找病原体,但也能够对由其它细胞产生的一组高度特化的分子信号(称为细胞因子)起反应。吞噬细胞的类型包括但不限于:巨噬细胞、嗜中性粒细胞和树突细胞。
巨噬细胞是大的吞噬细胞,其能够通过迁移穿过毛细血管壁并进入细胞之间的区域以追踪入侵的病原体而移动到血管系统之外。在组织中,器官特异性的巨噬细胞与血液中存在的称为单核细胞的吞噬细胞区分。巨噬细胞是最有效的吞噬细胞,且可以吞噬大量细菌或者其它细胞或微生物。细菌分子与巨噬细胞表面上的受体的结合触发其通过产生“呼吸爆发”从而导致活性氧物质的释放而吞噬和破坏细菌。病原体还刺激巨噬细胞以产生趋化因子,其将其它细胞募集到感染部位。促进炎症的巨噬细胞被称为M1巨噬细胞,而那些减少炎症和促进组织修复的巨噬细胞被称为M2巨噬细胞。
嗜中性粒细胞以及另外两种细胞类型(嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞)被称为粒细胞,因为它们的细胞质中存在颗粒,或者被称为多形核细胞(PMN),因为其独特的裂片细胞核。嗜中性粒细胞颗粒含有杀死或抑制细菌和真菌的生长的多种毒性物质。与巨噬细胞类似,嗜中性粒细胞通过激活呼吸爆发来攻击病原体。嗜中性粒细胞呼吸爆发的主要产物是强氧化剂,包括过氧化氢、游离氧自由基和次氯酸盐。嗜中性粒细胞是大量的,并且通常是第一种到达感染部位的细胞。
树突细胞(DC)是存在于与外部环境接触的组织,主要是皮肤(在其中它们通常被称为朗格汉斯细胞),以及鼻、肺、胃和肠的内部粘膜衬里中的吞噬细胞。它们因其与神经元树突的相似性而得名,但树突细胞不连接到神经系统。树突细胞在抗原呈递过程中非常重要,并且用作先天免疫系统和适应性免疫系统之间的联系。
先天淋巴细胞(ILC)在保护性免疫以及体内平衡和炎症的调节中起重要作用。ILC基于它们产生的细胞因子以及调节其发育和功能的转录因子进行分类。1类ILC产生1型细胞因子并包括自然杀伤细胞。2类ILC产生2型细胞因子,以及3类ILC产生细胞因子IL-17A和IL-22。自然杀伤细胞破坏受损的宿主细胞,如肿瘤细胞或病毒感染的细胞。他们可以在不存在抗体的情况下识别应激的细胞,从而使它们对受损的宿主细胞快速作出反应。
骨髓细胞是在先天免疫系统中起作用的细胞。骨髓细胞包括但不限于单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞、红细胞、树突细胞和巨核细胞或血小板。淋巴细胞包括T细胞、B细胞和自然杀伤细胞。
适应性免疫系统产生适应性免疫反应。一般形式的适应性免疫反应始于辅助(TH、CD4+)和细胞毒性(CD8+)T细胞亚群通过其与表达与抗原性片段(源自抗原的特定氨基酸序列,其与MHC I和/或MHC II结合以在细胞表面上呈递)相关的主要组织相容性(MHC)-I类或II类分子的抗原呈递细胞(APC)相互作用的敏化。致敏或激发的CD4+T细胞产生参与B细胞以及各种T细胞亚群的活化的淋巴因子。致敏的CD8+T细胞响应于淋巴因子而增加数量,并且能够破坏任何表达与匹配的MHC编码的I类分子结合的特异性抗原片段的细胞。因此,在癌性肿瘤的过程中,CTL根除表达癌症相关或癌症特异性抗原的细胞,从而限制肿瘤扩散和疾病发展的进程。
“B淋巴细胞”或“B细胞”是一种白细胞类型。B细胞通过分泌抗体在适应性免疫系统的体液免疫组分中起作用。B细胞具有两个主要功能:它们将抗原呈递给T细胞,和更重要的是,它们产生中和感染性微生物的抗体。抗体覆盖病原体表面并发挥三种主要作用:中和、调理作用和补体激活。
当病原体由于被覆盖在抗体中而不能结合和感染宿主细胞时,发生中和。在调理作用中,抗体结合的病原体用作红旗(red flag)以提醒如嗜中性粒细胞和巨噬细胞的免疫细胞吞食和消化病原体。补体是直接破坏或裂解细菌的过程。
抗体以两种方式表达。位于B细胞表面上的B细胞受体(BCR)实际上是抗体。B细胞还分泌抗体以扩散和与病原体结合。这种双重表达是重要的,因为初始问题(例如,细菌)被独特的BCR识别并激活B细胞。活化的B细胞通过分泌抗体(主要是BCR,但是为可溶形式)来作出响应。这确保了反应针对起动整个过程的细菌是特异性的。
每一种抗体是独特的,但它们归属于大类:IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。(Ig是免疫球蛋白的缩写,这是抗体的另一个名词。)虽然它们具有重叠的作用,但IgM通常对补体激活是重要的;IgD参与激活嗜碱性粒细胞;IgG对中和、调理作用和补体激活是重要的;IgA对胃肠道中的中和至关重要;和IgE对于在寄生和过敏反应中激活肥大细胞是必需的。
记忆B细胞激活始于其靶抗原(由其亲本B细胞共享的)的检测和结合。一些记忆B细胞可以在没有T细胞帮助的情况下被激活,例如某些病毒特异性记忆B细胞,但是其它记忆B细胞需要T细胞帮助。在抗原结合后,记忆B细胞通过受体介导的内吞作用摄取抗原,使其降解,并将其作为与细胞膜上的MHC-II分子复合的肽段呈递给T细胞。衍生自用相同抗原激活的T细胞的记忆T辅助(TH)细胞,通常是记忆滤泡T辅助(TFH)细胞,通过它们的TCR识别和结合这些MHC-II-肽复合物。在TCR-MHC-II-肽结合和传递来自记忆TFH细胞的其它信号后,记忆B细胞被激活并通过滤泡外反应分化成浆母细胞和浆细胞或者进入生发中心反应,在那里它们产生浆细胞和更多的记忆B细胞。
调节性B细胞(Breg)代表小的B细胞群体,其参与免疫调节和免疫反应的抑制。这些细胞通过不同的机制调节免疫系统。主要机制是产生抗炎性细胞因子白介素10(IL-10)。Breg的调节作用在炎症、自身免疫疾病、移植反应和抗肿瘤免疫的各种模型中有所描述。
T细胞具有多种作用,并按亚群分类。基于细胞表面上存在哪种蛋白质,T细胞分为两大类:CD8+T细胞或CD4+T细胞。T细胞完成多种功能,包括杀死感染的细胞和激活或募集其它免疫细胞。
CD8+T细胞也称为细胞毒性T细胞或细胞毒性淋巴细胞(CTL)。它们对于识别和清除病毒感染的细胞和癌细胞至关重要。CTL具有特化的区室或颗粒,其含有引起细胞凋亡(程序性细胞死亡)的细胞毒素。由于其效能,颗粒的释放受到免疫系统的严格调控。
四个主要的CD4+T细胞亚群是Th1、Th2、Th9、Th17、Tfh(T滤泡辅助)和Treg,其中“Th”指的是“T辅助细胞”。Th1细胞对于协调针对细胞内微生物,特别是细菌的免疫反应是至关重要的。它们产生并分泌警示和激活其它免疫细胞的分子(如摄入细菌的巨噬细胞)。通过警示B细胞、粒细胞和肥大细胞,Th2细胞对于协调针对细胞外病原体(如蠕虫(寄生蠕虫))的免疫反应是重要的。Th17细胞以其产生白介素17(IL-17)的能力而得名,白介素17是激活免疫和非免疫细胞的信号传导分子。Th17细胞对于募集嗜中性粒细胞是重要的。
调节T细胞(Treg)监测并抑制其它T细胞的活性。它们防止不利的免疫激活和维持耐受性,或防止针对身体自身细胞和抗原的免疫反应。1型调节T(Tr1)细胞是在促进和维持耐受中起关键作用的调节性T细胞的诱导型亚群。Tr1细胞控制免疫反应的主要机制是高水平IL-10的分泌,以及通过释放颗粒酶B杀死骨髓细胞。另外,存在Th3(TGF-β分泌)、iTreg(转化为Treg细胞的非胸腺Tconv)和iTR35(转化Tconv为Treg细胞的IL-35)。
记忆T细胞是抗原特异性T细胞的亚群,其在初始T细胞反应后长期持续。它们在重新暴露于其同源抗原时迅速扩增至大量效应T细胞,从而为免疫系统提供针对过去抗原的“记忆”。本文所述的癌症疫苗为免疫系统提供针对肿瘤特异性抗原的“记忆”,从而引发针对新出现的癌细胞或转移的癌细胞的强烈免疫反应。
淋巴细胞或淋巴样细胞是脊椎动物的适应性免疫系统中的白细胞。淋巴细胞包括自然杀伤细胞(NK细胞)(其在细胞介导的细胞毒性先天免疫中起作用)、T细胞(用于细胞介导的、细胞毒性适应性免疫)和B细胞(用于体液、抗体驱动的适应性免疫)。
方法
本文还提供了包括培养本公开的工程化MSC(或其它工程化免疫细胞)的方法。培养MSC的方法是已知的。在一些实施方案中,MSC在生长培养基(例如,MSCGM人间充质干细胞生长BULLETKITTM培养基(含血清)、THERAPEAKTMMSCGM-CDTM间充质干细胞化学限定培养基(无血清)或RoosterBio xeno-free MSC培养基)中培养。
本文进一步提供的方法包括将如本文提供的工程化MSC递送或施用于受试者(例如,人类受试者)以在体内产生至少一种由MSC产生的效应分子。在一些实施方案中,MSC通过静脉内、腹膜内、气管内、皮下、肿瘤内、口服、肛门、鼻内(例如,包装在递送颗粒中)或动脉(例如,颈内动脉)途径施用。因此,MSC可以全身或局部施用(例如,施用于TME)。
一些方法包括选择患有肿瘤(或癌症)的受试者(或患者群体),并用调节肿瘤介导的免疫抑制机制的工程化MSC治疗该受试者。
在某些情况下,本公开的工程化MSC可以用于治疗癌症,如卵巢癌。本文描述了其他癌症。例如,工程化MSC可以用于治疗膀胱肿瘤、脑肿瘤、乳腺肿瘤、宫颈肿瘤、结肠直肠肿瘤、食道肿瘤、神经胶质瘤、肾肿瘤、肝肿瘤、肺肿瘤、黑素瘤、卵巢肿瘤、胰腺肿瘤、前列腺肿瘤、皮肤肿瘤、甲状腺肿瘤和/或子宫肿瘤。
本文提供的方法还包括递送工程化细胞如工程化MSC的制剂。在一些实施方案中,制剂是基本上纯的制剂,其包含例如小于5%(例如,小于4%、3%、2%或1%)的MSC之外的细胞。制剂可包含1x105细胞/kg至1x107细胞/kg,例如MSC。
另外的实施方案
1.一种经工程化以产生多种效应分子的间充质干细胞,其中至少两种效应分子调节不同的肿瘤介导的免疫抑制机制;或包含经工程化以产生调节肿瘤介导的免疫抑制机制的多种效应分子的间充质干细胞的组合物,其任选地以有效量配制以减小受试者中肿瘤的体积。
2.段落1的间充质干细胞或组合物,其中至少一种效应分子在肿瘤微环境中刺激免疫刺激机制和/或在肿瘤微环境中抑制免疫抑制机制。
3.段落1的间充质干细胞或组合物,其中至少一种效应分子(a)刺激T细胞信号传导、活性和/或募集,(b)刺激抗原呈递和/或加工,(c)刺激自然杀伤细胞介导的细胞毒性信号传导、活性和/或募集,(d)刺激树突细胞分化和/或成熟,(e)刺激免疫细胞募集,(f)刺激促炎性巨噬细胞信号传导、活性和/或募集,或者抑制抗炎性巨噬细胞信号传导、活性和/或募集,(g)刺激基质降解,(h)刺激免疫刺激性代谢产物产生,(i)刺激I型干扰素信号传导,(j)抑制负性共刺激信号传导,(k)抑制抗肿瘤免疫细胞的促凋亡信号传导,(l)抑制T调节(Treg)细胞信号传导、活性和/或募集,(m)抑制肿瘤检查点分子,(n)刺激干扰素基因刺激因子(STING)信号传导,(o)抑制骨髓源抑制细胞信号传导、活性和/或募集,(p)降解免疫抑制因子/代谢产物,(q)抑制血管内皮生长因子信号传导和/或(r)直接杀死肿瘤细胞。
4.段落1-3任一的间充质干细胞或组合物,其包含含有与编码效应分子的核苷酸序列可操作地连接的启动子的工程化核酸。
5.段落1-4任一的间充质干细胞或组合物,其包含:(a)含有与编码至少两种效应分子的核苷酸序列可操作地连接的启动子的工程化核酸;或(b)至少两个工程化核酸,其各自包含与编码至少一种效应分子的核苷酸序列可操作地连接的启动子。
6.段落1-5任一的间充质干细胞或组合物,其中肿瘤选自膀胱肿瘤、脑肿瘤、乳腺肿瘤、子宫颈肿瘤、结肠直肠肿瘤、食管肿瘤、神经胶质瘤、肾肿瘤、肝肿瘤、肺肿瘤、黑素瘤、卵巢肿瘤、胰腺肿瘤、前列腺肿瘤、皮肤肿瘤、甲状腺肿瘤和子宫肿瘤。
7.段落1-6任一的间充质干细胞或组合物,其中由间充质干细胞或组合物产生的至少一种效应分子选自细胞因子、受体/配体、抗体、核苷酸、肽和酶。
8.段落7的间充质干细胞或组合物,其中细胞因子选自趋化因子、干扰素、白介素、淋巴因子和肿瘤坏死因子。
9.段落8的间充质干细胞或组合物,其中趋化因子选自MIP1a(CCL3)、MIP1b(CCL5)、CCL21、CXCL9、CXCL10和CXCL11。
10.段落8或9的间充质干细胞或组合物,其中干扰素选自IFN-β和IFN-γ。
11.段落8-10任一的间充质干细胞或组合物,其中白介素选自IL-12、IFN-β、IFN-γ、IL-2、IL-15、IL-7、IL-36γ、IL-18和IL-1β。
12.段落7-11任一的间充质干细胞或组合物,其中受体/配体选自OX40-配体和CD40L。
13.段落7-12任一的间充质干细胞或组合物,其中抗体选自检查点抑制剂和抗IL-35抗体。
14.段落13的间充质干细胞或组合物,其中检查点抑制剂选自抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和抗CTLA-4抗体。
15.段落7-14任一的间充质干细胞或组合物,其中核苷酸选自CpG寡脱氧核苷酸。
16.段落7-15任一的间充质干细胞或组合物,其中肽是抗肿瘤肽。
17.段落7-16任一的间充质干细胞或组合物,其中酶选自降解基质的酶、降解免疫抑制代谢产物的酶和刺激免疫刺激性代谢产物产生的酶。
18.段落1-17任一的间充质干细胞或组合物,其中至少一种效应分子是IFN-β,且其中至少一种效应分子选自细胞因子、抗体、趋化因子、核苷酸、酶和溶瘤病毒。
19.段落1-18任一的间充质干细胞或组合物,其中至少一种效应分子在肿瘤微环境中刺激炎症途径和/或至少一种效应分子在肿瘤微环境中抑制炎症的负调节剂。
20.段落19的间充质干细胞或组合物,其中炎症途径是TNF受体超家族途径、共同γ链家族途径或Toll样受体途径。
21.段落19或20的间充质干细胞或组合物,其中炎症的负调节剂是Stat3、Bruton’s酪氨酸激酶、c-kit或SOCS-1。
22.段落1-21任一的间充质干细胞或组合物,其中间充质干细胞或组合物经工程化以产生归巢分子。
23.段落22的间充质干细胞或组合物,其中归巢分子选自:CCR9、CXCR3、CXCR4、CCR2、CCR4、FPR2、VEGFR、IL6R、CXCR1、CSCR7和PDGFR。
24.段落4-23任一的间充质干细胞或组合物,其中启动子是诱导型启动子。
25.段落4-23任一的间充质干细胞或组合物,其中启动子是CMV启动子、EF1a启动子、EFS启动子、MND启动子、PGK启动子、SFFV启动子、SV40启动子或UbC启动子。
26.段落2-22任一的间充质干细胞或组合物,其中启动子是合成启动子,任选地包含转录因子结合结构域。
27.段落2-26任一的间充质干细胞或组合物,其中启动子受局部肿瘤状态调节。
28.段落27的间充质干细胞或组合物,其中局部肿瘤状态是低氧。
29.段落27的间充质干细胞或组合物,其中局部肿瘤状态是炎症。
30.段落25的间充质干细胞或组合物,其中诱导型启动子包含根皮素调节的控制元件(PEACE)或锌指DNA结合结构域(DBD)。
31.段落1-30任一的间充质干细胞或组合物,其中间充质干细胞或组合物来自骨髓、脂肪组织、脐带或多能干细胞。
32.段落1-31任一的间充质干细胞或组合物,其中间充质干细胞或组合物经工程化以产生IL-12和CCL21。
33.段落32的间充质干细胞或组合物,其中间充质干细胞或组合物经工程化以产生IFN-β和/或IFN-γ。
34.段落32或33的间充质干细胞或组合物,其中间充质干细胞或组合物经工程化以产生抗CD40抗体和/或抗CTLA4抗体。
35.一种方法,包括培养段落1-34任一的间充质干细胞以产生效应分子。
36.一种方法,包括向受试者递送段落1-34任一的间充质干细胞或组合物以在体内产生由间充质干细胞产生的至少一种效应分子。
37.段落36的方法,其中至少一种效应分子在受试者的肿瘤微环境中产生。
38.一种治疗癌症的方法,包括将段落1-34任一的间充质干细胞或组合物递送至诊断患有癌症的受试者。
39.段落38的方法,其中癌症是卵巢癌。
40.段落38的方法,其中癌症是乳腺癌。
41.段落38的方法,其中癌症是结肠癌。
42.段落36-41任一的方法,还包括向受试者施用抗CD40抗体和/或抗CTLA4抗体。
43.一种治疗受试者的乳腺癌的方法,包括向患有乳腺肿瘤的受试者递送治疗有效量的经工程化以产生IL-12和CCL21的间充质干细胞的制剂。
44.段落43的方法,其中制剂还包含抗CD40抗体和/或抗CTLA4抗体。
45.段落43的方法,还包括向受试者施用抗CD40抗体和/或抗CTLA4抗体。
46.段落43-45任一的方法,其中制剂包含药学上可接受的载体和/或药学上可接受的赋形剂。
47.段落43-46任一的方法,其中治疗有效量减小乳腺肿瘤的体积至少20%。
48.段落47的方法,其中乳腺肿瘤的体积在向受试者递送制剂的14天内减小至少20%。
49.段落48的方法,其中乳腺肿瘤的体积在向受试者递送制剂的7天内减小至少20%。
50.段落43-46任一的方法,其中治疗有效量减小乳腺肿瘤的体积至少50%。
51.段落47的方法,其中乳腺肿瘤的体积在向受试者递送制剂的14天内减小至少50%。
52.段落48的方法,其中乳腺肿瘤的体积在向受试者递送制剂的7天内减小至少50%。
53.一种治疗受试者的结肠癌的方法,包括向患有结肠肿瘤的受试者递送治疗有效量的经工程化以产生IL-12和CCL21的间充质干细胞的制剂。
54.段落53的方法,其中制剂还包含抗CD40抗体和/或抗CTLA4抗体。
55.段落53的方法,还包括向受试者施用抗CD40抗体和/或抗CTLA4抗体。
56.段落53-55任一的方法,其中制剂包含药学上可接受的载体和/或药学上可接受的赋形剂。
57.段落53-56任一的方法,其中治疗有效量减小结肠肿瘤的体积至少20%。
58.段落57的方法,其中结肠肿瘤的体积在向受试者递送制剂的14天内减小至少20%。
59.段落58的方法,其中结肠肿瘤的体积在向受试者递送制剂的7天内减小至少20%。
60.段落53-56任一的方法,其中治疗有效量减小结肠肿瘤的体积至少50%。
61.段落57的方法,其中结肠肿瘤的体积在向受试者递送制剂的14天内减小至少50%。
62.段落58的方法,其中结肠肿瘤的体积在向受试者递送制剂的7天内减小至少50%。
实施例
实施例1
本实施例描述了表达人类免疫治疗(hIT)有效载荷的工程化间充质干细胞(MSC)(hMSC-hIT)和表达小鼠免疫治疗(mIT)有效载荷的小鼠MSC(mMSC)(mMSC-mIT)。编码人和鼠免疫调节基因(抗PD1抗体、抗CTLA4抗体、CCL21、IL2、IL12、IL15和组成型活性STING(干扰素基因刺激因子;Woo SR等,(2015)Trends Immunol36(4):250-256)突变体)的DNA被合成、克隆到表达载体中、引入其相应小鼠和人MSC中,并表征其表达。然后与IFN-β结合在MSC中表达编码免疫调节基因的DNA。
方法:合成了编码具有不同作用机制的免疫治疗有效载荷的基因:1)检查点抑制剂,2)趋化因子,3)细胞因子和4)STING(干扰素基因刺激因子)途径调节剂(Woo SR等(2015)Trends Immunol36(4):250-256)。对于检查点抑制剂,表达抗PD1和抗CTLA4抗体。对于趋化因子,表达了已知介导树突细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞的运输的CCL21(DubinettSM等,(2010)Cancer J16(4):325-335)。对于细胞因子,表达IL2、IL12和IL15。对于STING途径调节剂,表达具有组成型活性的细胞内STING突变体(Tang ED&Wang CY(2015)PLoS One10(3):e0120090)。小鼠和人类形式的免疫治疗(分别mIT和hIT)都可以使用。测试的另外的效应分子包括:IL1beta、IFN-γ、IL17以及IL7(Cieri N等(2013)Blood121(4):573-584)。
这些基因在CMV启动子的下游编码以实现高水平的表达。如图1所示,GFP可以使用具有CMV启动子的电穿孔质粒(核转染技术)在MSC中高水平表达。质粒被核转染到MSC中。人骨髓源的MSC(hMSC)购自商业来源。小鼠MSC(mMSC)源自股骨骨髓(Kidd S等(2009)StemCells 27(10):2614-2623)。
分泌的治疗有效载荷的表达使用具有识别该有效载荷的可商购抗体的ELISA或基于珠的多重测定进行确认。或者,将有效载荷与Myc标签融合,并使用抗Myc抗体进行标记。对于组成型STING突变体,使用从IFN-β启动子表达荧光素酶的报告质粒确认激活(Fitzgerald KA等(2003)Nat Immunol 4(5):491-496)。有效载荷的功能测试也在实施例2中进行并更详细地描述。
接下来,这些免疫治疗有效载荷与IFN-β结合表达。目标之一是鉴定针对卵巢癌细胞与IFN-β具有加性或协同活性的效应子。两种策略用于表达来自MSC的组合免疫治疗有效载荷。(1)MSC用两种质粒进行核转染,一种表达上述列表中的有效载荷,和另一种编码IFN-β,从而导致表达这些基因的混合细胞群体。(2)在单一载体内构建共表达上述列表的有效载荷和IFN-β的质粒。三种结构用于这一方法:(i)表达被2A“核糖体跳过”标签分隔的有效载荷和IFN-β的单一启动子(图2);(ii)表达由内部核糖体进入位点(IRES)分隔的有效载荷和IFN-β的单一启动子;和(iii)两个启动子用于独立地驱动有效载荷和IFN-β的表达。使用不同的启动子表达有效载荷和IFN-β(例如,SFFV、CMV和/或MND启动子)。评估这些启动子和终止序列的不同组合以鉴定表达两种有效载荷的构型。
测试了这些策略,并评估了免疫治疗有效载荷和IFN-β的表达水平。还评估了MSC的存活。CMV、SFFV和MND启动子已在MSC中得到验证。
作为质粒转染和电穿孔的替代方案,慢病毒载体可用于将有效载荷表达构建体转导至MSC中。慢病毒载体可用于在MSC中表达GFP(数据未显示)。慢病毒工程化的MSC应具有翻译能力,并准备用于即将进行的临床试验(Deng P等(2016)Neural Regen Res11(5):702-705;Beegle JR等(2016)Mol Ther Methods Clin Dev3:16053)。在一些实施方案中,可以使用转座子将表达构建体引入MSC中,使用PhiC31整合到基因组假位点中,或者使用核酸酶(例如锌指(ZF))、规则间隔的短回文重复序列(CRISPR)或转录激活物样效应核酸酶(TALEN)。
可以用于进行组合免疫疗法表达的另外的策略是每个有效载荷构建一个质粒,将每个质粒独立地核转染到MSC群体中,并混合所得的细胞群体。或者,有效载荷可编码到慢病毒上且多种慢病毒基因组整合到MSC中。
实施例2
该实施例描述了具有单独和联合免疫治疗有效载荷的MSC的体外表征。首先测量表达免疫治疗的MSC对癌细胞的直接抗癌作用。接下来,测量表达免疫治疗的MSC对与原代免疫细胞(集中于T细胞)和癌细胞的共培养的影响。表达免疫治疗的MSC的免疫刺激特性基于小鼠和人类细胞系统中的炎症生物标志物小组排序。鉴定了其自身或与T细胞一起显著增强癌细胞杀伤的表达免疫治疗的MSC,并选择进一步进行体内测试的最佳候选者。
方法:使用与癌症治疗相关的体外模型评价来自实施例1的表达免疫治疗的MSC的功能性作用。人卵巢癌细胞(例如,OVCAR8和SKOV3)和从循环PBMC分离的人免疫细胞用于测试表达hIT的hMSC。小鼠卵巢癌细胞(例如,ID8)和小鼠免疫细胞用于测试表达mIT的mMSC。
检查点抑制剂。细胞结合测定用于验证表达的抗体的活性。抗体的靶标,CTLA4和PD1,均负性调节T细胞,但它们在T细胞活化的不同阶段上调(Boutros C等(2016)Nat RevClin Oncol 13(8):473-486;Valsecchi ME(2015)New Engl J Med 373(13):1270-1270)。CTLA4在激发阶段短暂上调,而PD1在T细胞活化的效应子阶段始终表达(Pardoll DM(2012)Nat Rev Cancer 12(4):252-264;Legat A等(2013)Front Immunol 4:455)。抗CTLA4抗体与T细胞表面上的CTLA4结合,从而阻断CTLA4在早期阶段停止T细胞激活,而人抗PD1抗体与PD1结合,从而防止肿瘤细胞抑制T细胞活性。
使用EASYSEPTM磁珠(STEMCELL Technologies)通过负向选择从PBMC分离T细胞。分离的T细胞通过Human T-Activator CD3/28Dynabeads(Thermo Fisher)激活,并且CTLA-4和PD-1的表达监测5天的时间以选择每种表面标志物的最佳表达时机。在适当的日子,将来自表达CTLA-4或PD-1的抗体的MSC的条件培养基或者来自非表达MSC的对照条件培养基应用于活化的T细胞以验证这些抗体的直接细胞表面受体结合。荧光染料标记的二级检测抗体与流式细胞术一起应确认结合。
趋化因子。CCL21趋化因子的功能性使用细胞迁移测定和分离的幼稚T细胞确认,该细胞表达对CCL21趋化性有响应的趋化因子受体CCR7。具体地,表达CCL21的或对照的MSC添加到trans-well的一个隔室中,和然后通过从另一隔室的分离的幼稚T细胞评估细胞迁移,接着计数迁移的T细胞的数量(Justus CR等(2014)J Vis Exp(88))。
细胞因子。测量IL2、IL12和IL15的活性。对IL2、IL12和IL15特异性的ELISA分析用于检测MSC上清液中这些细胞因子的水平。功能性生物活性测定采用CTLL-2细胞系来评估IL2或IL15介导的增殖,或采用NKG细胞系来评估MSC上清液的IL12介导的IFN-γ产生。使用技术的多重细胞因子谱分析也可用于评估细胞因子表达及对免疫细胞的影响。
STING途径。用组成型STING突变体有效载荷测量STING途径的激活。使用珠,在MSC中分析了具有STING突变体表达的I型干扰素(例如IFN-α2和IFN-β)的分泌。
表达免疫治疗的MSC对卵巢癌细胞的直接作用。在体外测试MSC对卵巢癌细胞生长和存活力的任何直接影响。例如,mMSC或hMSC候选物与小鼠卵巢癌细胞系(ID8)或人卵巢癌细胞系(OVCAR8和SKOV3)共培养,并通过明确的乳酸脱氢酶(LDH)测定来测量癌细胞细胞毒性。共培养24小时后,收集上清液并通过随后通过酶标仪上的比吸收定量的酶反应测量与细胞死亡相关的LDH水平。此外,通过台盼蓝排除法对活细胞与死细胞进行计数,并通过使用膜联蛋白-V和碘化丙啶染色的流式细胞术测量对活细胞与凋亡/死细胞进行计数来评估癌细胞的数量。
表达免疫治疗的MSC对T细胞和卵巢癌细胞共培养系统的作用。测试确定表达免疫治疗的MSC是否可刺激免疫细胞(如T细胞)以在体外针对卵巢癌细胞具有增强的抗癌活性。具体地,mMSC-mIT候选物与小鼠脾细胞和ID8癌细胞系共培养,或hMSC-hIT候选物与人PBMC和OVCAR8或SKOV3细胞系共培养。共培养试验需要使用PBMC/脾细胞与卵巢癌细胞(有或没有MSC),及用抗CD3/28珠的刺激。为了评估癌细胞死亡,使用诸如LDH细胞毒性测量的技术,将染料标记的卵巢癌细胞与未标记的效应PBMC/脾细胞以固定比率组合并通过流式细胞术测定杀伤进行16小时杀灭测定(Jedema I等(2004)Blood 103(7):2677-2682),和使用膜联蛋白-V与碘化丙啶通过流式细胞术检测细胞凋亡读数。通过3-5天的CFSE细胞分裂和1-3天的IFN-γ的细胞因子产生来特异性地测定T细胞活化/增殖。
产生表达CTLA-4和PD1的T细胞的替代策略是用植物血凝素(PHA)激活以表达细胞表面受体PD1和CTLA4。在第3天,约99%的活化T细胞应表达PD1,而约15%的T细胞应表达CTLA4(Pardoll DM(2012)Nat Rev Cancer 12(4):252-264;Legat A等(2013)FrontImmunol 4:455)。在第10天,当CTLA4表达下调但PD1表达维持时,活化的T细胞应处于效应子阶段。评估这些抗体的直接细胞表面受体结合。在诱导后第3天和第10天,将具有相应的检查点抑制剂抗体表达构建体的MSC应用于T细胞培养物。标记的检测抗体与流式细胞术一起使用以确认结合。商业抗体用作对照。
实施例3
该实施例描述了在同系卵巢癌模型中表达免疫治疗有效载荷的MSC的体内表征。使用卵巢癌的同系小鼠模型(具有小鼠免疫系统的mMSC-mIT)来表征表达免疫治疗的MSC的抗肿瘤功效。测量同系卵巢小鼠模型中工程化MSC的肿瘤归巢以及单个和组合免疫治疗的表达。还测量工程化MSC治疗的卵巢肿瘤负荷和小鼠存活率。该实施例应证明工程化MSC选择性地归巢于TME以及免疫治疗因子在卵巢肿瘤中相对于其他身体部位的局部产生。该实施例还应证明用表达免疫治疗的工程化MSC的肿瘤负荷显著降低和小鼠存活的延长。
方法:源自小鼠卵巢上皮表面细胞(MOSE)的自发转化的小鼠ID8细胞系用于建立同系卵巢肿瘤模型(Roby KF等(2000)Carcinogenesis 21(4):585-591)。ID8细胞系感染表达海肾荧光素酶(rLuc)的慢病毒以允许体内生物发光成像,其与表达萤火虫荧光素酶(ffLuc)的MSC正交。在建立小鼠的同系卵巢癌模型之前,在体外ID8中确认成功的rLuc表达。对于同系模型,将5x105 ID8细胞注射到6至8周龄的C57BL/6小鼠的腹腔中(36,54)。用实施例1的有效载荷表达质粒及表达ffLuc的质粒对MSC进行核转染。
mMSC-mIT候选物在第25天(肿瘤细胞注射后)开始以每只动物106MSC的剂量每周一次连续5周引入同系小鼠模型中(Dembinski JL等(2013)Cytotherapy 15(1):20-32)。分别通过rLuc和ffLuc生物发光成像以及最终时间点后的组织学分析,随时间可视化卵巢肿瘤负荷和mMSC-mIT候选物。当小鼠出现危象(如体重减轻、皮毛褶皱、身体姿态不良、腹部胀大和黄疸)时,将其处死。测量小鼠的存活曲线。通过生物发光成像(BLI)和通过处死时的尸检来量化肿瘤细胞的远端转移。在不同时间点测量免疫系统谱型和活性作为对治疗的反应的生物标志物。
为了评估MSC的预期抗肿瘤作用的变异性,改变用于建立模型的ID8细胞的剂量(例如,将细胞数量增加至5x106)、改变所用MSC的剂量以及调节肿瘤建立后递送MSC的时间。
即使在小鼠模型中显示mMSC归巢至卵巢肿瘤,但有可能某些有效载荷破坏这种归巢活性。在这些情况中,可以将这些有效载荷的表达设计为诱导性的。例如,这可以通过根皮素素诱导的系统来实现(Gitzinger M等(2009)Proc Natl Acad Sci U S A 106(26):10638-10643)。或者,Dimerizer系统可以用于使用小分子将合成锌指DNA结合结构域与反式激活结构域连接(Clackson T等(1998)Proc Natl Acad Sci U SA 95(18):10437-10442)。可选地或另外地,可以构建基于信号如低O2在肿瘤微环境中触发的可诱导的有效载荷表达构建体。
慢病毒ffLuc构建体也可用于感染MSC。
实施例4
该实施例描述了在具有人免疫细胞的小鼠的人卵巢癌异种移植模型中表达免疫治疗有效载荷的MSC的功效的体内表征。测试了工程化MSC在通过CD34+细胞移植物移植人免疫细胞的免疫缺陷小鼠(具有人源化免疫系统的hMSC-hIT)的人卵巢癌模型中的活性。测量了在具有人免疫细胞的小鼠的人异种移植卵巢肿瘤中工程化MSC的归巢以及单个和联合免疫疗法的表达。还测试了具有工程化MSC治疗的卵巢肿瘤负荷和小鼠存活率。该实施例应证明与小鼠的其他身体部位相比,在人异种移植卵巢肿瘤中工程化MSC的归巢升高和免疫治疗因子的局部产生。该实施例还应证明与免疫系统组成的变化相关的表达免疫治疗的工程化MSC的肿瘤负荷显著降低和小鼠存的延长。
方法.为了能够将工程化MSC转用于人类临床试验,在人类癌症的人源化小鼠模型中测试hMSC-hIT构建体。通过在移植CD34+造血干细胞(HSC)的免疫缺陷小鼠(NSG)中使用人卵巢癌细胞系的异种移植物,对表达免疫治疗的hMSC在小鼠中的作用进行建模。
对于人卵巢癌细胞,使用OVCAR8和SKOV3细胞系。与实施例3中描述的类似的测定用于研究随时间的肿瘤负荷和小鼠存活。
也可以使用两种替代方法。(1)可以将人T细胞输注入小鼠中。(2)可以将人PBMC输注入小鼠中。
表达载体:pL+MCS
ACGCGTGTAGTCTTATGCAATACTCTTGTAGTCTTGCAACATGG
TAACGATGAGTTAGCAACATGCCTTACAAGGAGAGAAAAAGCA
CCGTGCATGCCGATTGGTGGAAGTAAGGTGGTACGATCGTGCC
TTATTAGGAAGGCAACAGACGGGTCTGACATGGATTGGACGAA
CCACTGAATTGCCGCATTGCAGAGATATTGTATTTAAGTGCCTA
GCTCGATACAATAAACGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAG
CCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCT
CAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCT
GTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGT
CAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACCTG
AAAGCGAAAGGGAAACCAGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGC
TTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGT
GAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGA
GATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGAT
CGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAA
AATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGA
ACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCT
GTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGG
ATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCT
ATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGC
TTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCAC
CGCACAGCAAGCGGCCACTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGA
TATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTA
GTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGA
GAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAG
CTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGC
GCAGCCTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGT
CTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGA
GGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAG
CAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGG
ATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATT
TGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATC
TCTGGAACAGATTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACA
GAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAA
GAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGG
AATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAAC
AAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAG
GCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTG
AATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCA
CCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAA
GAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTA
GTGAACGGATCTCGACGGTATCGGTTAACTTTTAAAAGAAAAG
GGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACA
TAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAAT
TACAAAAATCAAAATTTTATCTCGACATGGTGGCGACCGGTAG
CGCTAGCGGATCGATAAGCTTGATATCGCCTGCAGCCGAATTCC
TTGACTTGGGATCCGCGTCAAGTGGAGCAAGGCAGGTGGACAG
TCCTGCAGGCATGCGTGACTGACTGAGGCCGCGACTCTAGTTTA
AACTGCGTGACTGACTCTAGAAGATCCGGCAGTGCGGCCGCGT
CGACAATCAACCTCTGGATTACAAAATTTGTGAAAGATTGACTG
GTATTCTTAACTATGTTGCTCCTTTTACGCTATGTGGATACGCTG
CTTTAATGCCTTTGTATCATGCTATTGCTTCCCGTATGGCTTTCA
TTTTCTCCTCCTTGTATAAATCCTGGTTGCTGTCTCTTTATGAGG
AGTTGTGGCCCGTTGTCAGGCAACGTGGCGTGGTGTGCACTGTG
TTTGCTGACGCAACCCCCACTGGTTGGGGCATTGCCACCACCTG
TCAGCTCCTTTCCGGGACTTTCGCTTTCCCCCTCCCTATTGCCAC
GGCGGAACTCATCGCCGCCTGCCTTGCCCGCTGCTGGACAGGG
GCTCGGCTGTTGGGCACTGACAATTCCGTGGTGTTGTCGGGGAA
ATCATCGTCCTTTCCTTGGCTGCTCGCCTGTGTTGCCACCTGGAT
TCTGCGCGGGACGTCCTTCTGCTACGTCCCTTCGGCCCTCAATC
CAGCGGACCTTCCTTCCCGCGGCCTGCTGCCGGCTCTGCGGCCT
CTTCCGCGTCTTCGCCTTCGCCCTCAGACGAGTCGGATCTCCCTT
TGGGCCGCCTCCCCGCCTGGTACCTTTAAGACCAATGACTTACA
AGGCAGCTGTAGATCTTAGCCACTTTTTAAAAGAAAAGGGGGG
ACTGGAAGGGCTAATTCACTCCCAACGAAAATAAGATCTGCTTT
TTGCTTGTACTGGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGG
GAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATA
AAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGT
GTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTG
TGGAAAATCTCTAGCAGTAGTAGTTCATGTCATCTTATTATTCA
GTATTTATAACTTGCAAAGAAATGAATATCAGAGAGTGAGAGG
AACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAG
CATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTA
GTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGGC
TCTAGCTATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCC
GCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGG
CCGCCTCGGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTT
TTTGGAGGCCTAGACTTTTGCAGAGACGGCCCAAATTCGTAATC
ATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAA
TTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTG
GGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCT
CACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCAT
TAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTG
GGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTC
GTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAA
TACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACAT
GTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGC
CGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGC
ATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGAC
AGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCG
TGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCC
GCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCATAGCTCACG
CTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGG
GCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTA
TCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTT
ATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCG
AGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTA
ACTACGGCTACACTAGAAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTG
CTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATC
CGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCA
AGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCC
TTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACT
CACGTTAAGGGATTTTGGTCATGAGATTATCAAAAAGGATCTTC
ACCTAGATCCTTTTAAATTAAAAATGAAGTTTTAAATCAATCTA
AAGTATATATGAGTAAACTTGGTCTGACAGTTACCAATGCTTAA
TCAGTGAGGCACCTATCTCAGCGATCTGTCTATTTCGTTCATCC
ATAGTTGCCTGACTCCCCGTCGTGTAGATAACTACGATACGGGA
GGGCTTACCATCTGGCCCCAGTGCTGCAATGATACCGCGAGAC
CCACGCTCACCGGCTCCAGATTTATCAGCAATAAACCAGCCAG
CCGGAAGGGCCGAGCGCAGAAGTGGTCCTGCAACTTTATCCGC
CTCCATCCAGTCTATTAATTGTTGCCGGGAAGCTAGAGTAAGTA
GTTCGCCAGTTAATAGTTTGCGCAACGTTGTTGCCATTGCTACA
GGCATCGTGGTGTCACGCTCGTCGTTTGGTATGGCTTCATTCAG
CTCCGGTTCCCAACGATCAAGGCGAGTTACATGATCCCCCATGT
TGTGCAAAAAAGCGGTTAGCTCCTTCGGTCCTCCGATCGTTGTC
AGAAGTAAGTTGGCCGCAGTGTTATCACTCATGGTTATGGCAGC
ACTGCATAATTCTCTTACTGTCATGCCATCCGTAAGATGCTTTTC
TGTGACTGGTGAGTACTCAACCAAGTCATTCTGAGAATAGTGTA
TGCGGCGACCGAGTTGCTCTTGCCCGGCGTCAATACGGGATAAT
ACCGCGCCACATAGCAGAACTTTAAAAGTGCTCATCATTGGAA
AACGTTCTTCGGGGCGAAAACTCTCAAGGATCTTACCGCTGTTG
AGATCCAGTTCGATGTAACCCACTCGTGCACCCAACTGATCTTC
AGCATCTTTTACTTTCACCAGCGTTTCTGGGTGAGCAAAAACAG
GAAGGCAAAATGCCGCAAAAAAGGGAATAAGGGCGACACGGA
AATGTTGAATACTCATACTCTTCCTTTTTCAATATTATTGAAGCA
TTTATCAGGGTTATTGTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGT
ATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCC
GAAAAGTGCCACCTGACGTCTAAGAAACCATTATTATCATGAC
ATTAACCTATAAAAATAGGCGTATCACGAGGCCCTTTCGTCTCG
CGCGTTTCGGTGATGACGGTGAAAACCTCTGACACATGCAGCTC
CCGGAGACGGTCACAGCTTGTCTGTAAGCGGATGCCGGGAGCA
GACAAGCCCGTCAGGGCGCGTCAGCGGGTGTTGGCGGGTGTCG
GGGCTGGCTTAACTATGCGGCATCAGAGCAGATTGTACTGAGA
GTGCACCATATGCGGTGTGAAATACCGCACAGATGCGTAAGGA
GAAAATACCGCATCAGGCGCCATTCGCCATTCAGGCTGCGCAA
CTGTTGGGAAGGGCGATCGGTGCGGGCCTCTTCGCTATTACGCC
AGCTGGCGAAAGGGGGATGTGCTGCAAGGCGATTAAGTTGGGT
AACGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGACGTTGTAAAACGACGGCCAGTGCCAAGCTG(SEQ ID NO:8)
实施例5.4T1三阴性乳腺癌
在以下实验中,MSC进行工程化以表达以下效应分子之一,然后单独或组合施用于原位乳腺癌小鼠模型:IFNβ、IFNγ、IL12、IL15、IL36γ、IL7、TRAIL、cGAS、CCL21a、OX40L、CD40L或HACv-PD1。在一些实例中,与工程化MSC的施用结合,注射检查点抑制剂(抗CD40、抗PD1或抗CTLA-4抗体)。
MSC归巢
以下实验证明,在原位小鼠乳腺癌模型中,鼠MSC归巢至肿瘤。表达荧光素酶的4T1乳腺肿瘤细胞(5x105)原位移植到雌性BALB/cJ小鼠的背侧脂肪垫中。5天后,小鼠腹膜内注射1百万个荧光标记(用XenoLight DiR(Caliper Life Sciences))的鼠BM源的MSC(BM-MSC,治疗细胞)。在MSC注射后第1天和第7天,利用Ami HT活体动物成像仪(SpectralInstruments)使用荧光分析确定MSC定位。在第7天,使用Ami HT成像仪通过4T1细胞的荧光素酶生物发光报告体确定肿瘤的定位和大小。如图3所示,注射的MSC共定位于肿瘤部位,表明这些细胞实际上在体内特异性地归巢至4T1乳腺肿瘤的部位。注射的MSC在一天内归巢至肿瘤并持续超过7天。相反,在正常小鼠中没有肿瘤的情况下,注射的MSC不归巢至背部。这些结果表明,MSC可以用作抗癌分子、蛋白质或化合物的递送媒介。
为了确定工程化人MSC是否可以向小鼠肿瘤归巢,将表达GFP、IL2或CCL21a的不同工程化人MSC系注射到具有4T1肿瘤的BALB/c小鼠中。每隔一天从卡尺测量中通过肿瘤体积确定功效。图11A-11B显示人MSC不归巢至小鼠4T1肿瘤。
体内功效
以下实验证明了表达免疫治疗效应子(有效载荷)的MSC在原位乳腺癌模型中的体内功效。4T1-Neo-Fluc小鼠乳腺肿瘤细胞(Imanis Life Sciences,5x105细胞)原位植入雌性BALB/cJ小鼠(The Jackson Laboratory)的背侧脂肪垫中。然后将小鼠在肿瘤植入后5天随机分组到治疗组中。小鼠每周一次接受腹膜内注射对照MSC生长培养基或表达不同免疫治疗效应子(有效载荷)的工程化MSC(2x106细胞)共两周。每种免疫治疗由不同的MSC表达,并且MSC组合(1:1比率)用于组合治疗。每隔一天通过卡尺测量监测肿瘤生长,并且每周两次记录小鼠的体重。在第一次MSC治疗后14天处死小鼠,并收集组织进行进一步分析。
图4显示,与用培养基治疗的对照相比,在用表达组合基因IL-12和CCL21a的工程化MSC治疗的小鼠中肿瘤生长被延迟。
图5A-5B显示与培养基治疗的小鼠相比,表达单一免疫治疗效应子(例如,IFN-β、IFN-γ、IL-12或CCL21a)的工程化MSC抑制同系4T1小鼠肿瘤的生长。令人惊讶地,当免疫治疗效应子组合时,特别地IL-12和CCL21a的组合,以及IFN-β、IFN-γ、IL-12和CCL21a的组合,观察到对肿瘤生长的协同作用(图5A-5B)。
图6A-6B显示表达OX40L、TRAIL、IL15、cGAS或其组合的工程化MSC不抑制肿瘤生长。
图7A-7B显示表达IL-12和CCL21a的工程化MSC抑制肿瘤生长;但是,添加抗CD40抗体不降低肿瘤生长。
图8A-8B显示表达OX40L、TRAIL、IL15、HACvPD-1或其组合的工程化MSC不显著抑制肿瘤生长。
图9A-9B显示了表达IL-12和CCL21a的工程化MSC抑制肿瘤生长;然而,表达CCL21a、IL-36γ和IL-7的MSC的组合不降低肿瘤生长。但是,测试的一些效应子组合可能引起毒性。
剂量递增和毒性
在GFP组的以上一些实验中观察到毒性,因此进行了剂量递增研究以确定毒性的基础原因。该实验确定表达GFP的工程化MSC细胞不引起毒性(图10A-10B),而是MSC悬浮培养基可能是毒性的主要原因。
对大肿瘤的作用
该实验测试了表达IL12和CCL21a的工程化小鼠MSC是否可以降低较大肿瘤(>800mm3)的肿瘤负荷。较大的肿瘤比较小的肿瘤更难以治疗,并且该实验证明这种效应子组合可以减少肿瘤扩增(图12)。
检查点抑制剂
图13A显示表达IL-12和CCL21的工程化MSC足以抑制肿瘤生长,并且通过注射添加检查点抑制剂(抗PD-1抗体或抗CTLA-4抗体)不增加功效。
实施例6.CT26结肠直肠癌
在以下实验中,MSC进行工程化以表达以下效应分子之一,然后单独或组合施用于结肠直肠癌小鼠模型:IFNβ、IL12、IL15、IL36γ、IL7、CCL21a、HACv-PD1或41BB。在一些实例中,与工程化MSC的施用结合注射检查点抑制剂(抗CD40或抗CTLA-4抗体)。
图14显示表达IL-12和CCL21a的工程化MSC诱导显著的肿瘤生长延迟。
图15显示了CT26小鼠模型中的肿瘤生长动力学以确定给药工程化MSC细胞的最佳时间。
体内功效
以下实验证明了表达免疫治疗效应子(有效载荷)的MSC在皮下结肠(结肠直肠)癌小鼠模型中的体内功效。CT26-Neo-Fluc小鼠结肠癌细胞(Imanis Life Sciences,5x 105)皮下注射到雌性BALB/cJ小鼠(The Jackson Laboratory)的腹侧中。肿瘤植入后7天,小鼠然后随机分组到以下治疗组中:对照MSC生长培养基、工程化MSC(MSC-12+CCL21a)、抗CD40抗体、抗CTLA4抗体(Bio X细胞)、与抗CD40抗体组合的MSC-12+CCL21a或与抗CTLA4抗体组合的MSC-12+CCL21a。每周一次腹膜内(ip)注射工程化MSC(2x106细胞),持续两周(第0天和第7天)。在第0天和第3天ip注射(100μg)抗CD40抗体。在第0、3和7天ip注射(100μg)抗CTLA4抗体。每隔一天通过卡尺测量监测肿瘤的生长,并每周两次记录小鼠体重。在第一次MSC治疗后11天处死小鼠,并收集肿瘤和称重。测量每个治疗组中单个小鼠的肿瘤重量,且结果显示在图16B(左图)的左下。随时间监测每个治疗组的平均肿瘤体积(图16B,右图)。与GFP处理的小鼠相比,治疗组2(IL-12+CCL21a+抗CTLA4抗体)、治疗组4(IL-12+CCL21a)和治疗组7(IL-12+CCL21a+抗CD40抗体)抑制CT26结肠肿瘤的平均生长(图16B,右图)。当随时间测量每个治疗组中单个小鼠的肿瘤体积时,观察到类似的结果(图16A)。因此,用表达免疫治疗的MSC的组合治疗抑制体内结肠癌细胞的生长。
图18A显示了表达IL-12、CCL21a以及IL15或HACvPD-1的工程化MSC在小鼠结肠直肠癌模型中显著抑制肿瘤生长。图18B显示了每种治疗中单个小鼠的肿瘤重量。图18C是肿瘤微环境内浸润免疫群体的代表性图。图18D显示了总CD3群体中调节T细胞(Treg)的百分比。用工程化MSC-IL2和CCL21a治疗的肿瘤微环境中Treg数量显著减少。图18E将免疫浸润的百分比与肿瘤重量相关联。发现淋巴细胞(CD3+)增加的样品与低肿瘤重量相关,而具有高髓样(CD11b+)浸润的样品与较高的肿瘤负荷相关。
长期存活率
与注射的抗CD40抗体结合给予小鼠两次不同浓度的工程化MSC-IL12和CCL21a治疗。在第二剂量后,每周两次监测肿瘤体积直到肿瘤负荷大于1500mm3并处死小鼠。图17A示出了单个组的肿瘤体积。图17B左图随时间追踪来自单个组的小鼠体重和肿瘤体积。图17B右图显示了不同组的生存图。
MSC归巢
以下的这一实验证明,鼠MSC在结肠癌小鼠模型中归巢至肿瘤。在图19的左上部分中提供了简明的实验方案。将表达荧光素酶的CT26结肠癌肿瘤细胞(5x105)皮下植入雌性BALB/cJ小鼠的右大腿中。4天后,使用Ami HT活体动物成像仪(Spectral Instruments)通过CT26细胞的荧光素酶报告体确定肿瘤定位和大小(图19,左下图,荧光素酶信号(肿瘤特异性的))。在肿瘤植入后5天,通过腹膜内注射将用XenoLight DiR(Caliper LifeSciences)荧光标记的200万鼠BM-MSCs移植到荷瘤小鼠(肿瘤+)中。在MSC注射后第1天和第3天,使用Ami HT成像仪确定XenoLight DiR荧光标记的MSC的定位(图19,右图,DiR信号(MSC-特异性的))。注射的MSC共定位于CT26结肠肿瘤的部位(图19,比较在左下图中MSC注射前小鼠中的肿瘤特异性荧光素酶信号和右侧注射后第1天和第3天肿瘤+小鼠中MSC-特异性DiR信号的定位)。因此,MSC在体内确实特异性地归巢至CT26结肠肿瘤的部位,并且这些结果表明,MSC可以用作抗癌分子、蛋白质或化合物的递送媒介。
图20A显示工程化人MSC不归巢至小鼠CT26肿瘤。图20B显示每种治疗中单个小鼠的肿瘤重量。每隔一天从卡尺测量中通过肿瘤体积确定功效。
肿瘤生长动力学
图21A-21B显示了腹膜内空间中CT26-LUC(荧光素酶)肿瘤生长的动力学。在第0天注射CT26细胞系,并在第7天、第10天、第14天和第18天收获三(3)只小鼠以确定肿瘤生长的动力学。图21A的第一行用IVIS成像仪测量小鼠体重和ROI以监测肿瘤负荷。第二行监测每个组中单个小鼠的肿瘤重量和肿瘤的ROI。第三行将肿瘤重量与全身ROI或肿瘤ROI相关联。图21B显示了第18天组中三(3)只小鼠的免疫谱以更好地理解肿瘤微环境。
肿瘤浸润物统计学/免疫百分比/肿瘤重量
皮下小鼠模型
图22A包括表明在皮下结肠直肠癌小鼠模型中表达IL-12和CCL21a的工程化MSC抑制肿瘤生长的数据;但是,表达CCL21a和IL-36γ或IL-7的MSC的组合不减少肿瘤生长。图23A-23B包括肿瘤免疫浸润物统计。从PBS、幼稚MSC和MSC-IL12+MSC-CCL21a(combo)组选择三只小鼠进行流式细胞术分析以对肿瘤微环境进行免疫谱分析。图23A显示了与给药幼稚MSC的组相比,combo组中浸润CD3和CD8细胞毒性T群体的显著增加。图23B显示了与用幼稚MSC处理的组相比,combo组中粒细胞性骨髓源抑制细胞(gMDSC)和巨噬细胞群体的显著减少。
图24A-24B包括与免疫百分比和肿瘤重量有关的数据,表明具有更多CD3+和CD8+T细胞的样品(左上和中图)与肿瘤重量的减小强烈相关。这些图还显示具有较少CD11b髓样细胞(包括巨噬细胞、树突细胞和MDSC)的样品显示较低的肿瘤负荷(图24A的中下和右图以及图24B的上行)。
原位小鼠模型
图26A显示在原位结肠直肠癌小鼠模型中,表达IL-12和CCL21a或CCL21a和IFN-β的工程化MSC抑制肿瘤生长;然而,表达CCL21a和s41BBL的MSC的组合不减少肿瘤生长。各种效应子由不同的MSC表达,并且MSC组合(以1:1的比率)用于组合治疗。每张图显示了表达指示的免疫治疗的工程化MSC单独或组合对小鼠中4T1乳腺肿瘤生长的影响(n=6-8)。图26A的每条线表示单个小鼠。图26B显示了每种治疗中单个小鼠的肿瘤重量。与注射幼稚MSC的小鼠相比,MSC-IL12+MSC-CCL21a显示出最佳功效。在用MSC-IFNb+MSC-CCL21a治疗的组中也观察到治疗功效。
图27A-27B是显示用指示的工程化MSC治疗的每个组的免疫谱的图。在用MSC-IL12+MSC-CCL21a治疗后观察到巨噬细胞群体的一致减少(图27A)。当与针对幼稚MSC用MSC-IL12+MSC-CCL21a治疗的组相比时,还观察到了CD3+群体浸润增加和CD11b+群体浸润减少的总体趋势(图27A和图27B)。
图28A-28B显示了免疫浸润与肿瘤重量的相关性。具有低巨噬细胞和树突细胞的样品具有较低的肿瘤负荷(图28B,中上和右上)。
图29显示组合来自以上结肠直肠癌模型的体内数据(图22A和图26A)的图。来自图22A和图26A的组合CT26数据捕获三个组:仅肿瘤(PBS)、幼稚MSC治疗的以及MSC-IL12+MSC-CCL21a治疗的。
图30A-30B还显示了来自图22A和图26A的组合数据。这些图显示了来自流式细胞术实验数据的平均免疫浸润数。在图30A的CD8+T中观察到统计学显著性,证明MSC-IL12+MSC-CCL21a重新极化肿瘤微环境并允许更多的细胞毒性T细胞浸润的能力。此外,在用MSC-IL12+MSC-CCL21a治疗的组中,CD11b+骨髓群体浸润减少(图30B)。使用树突细胞和巨噬细胞群体收集的数据具有统计学显著性。
腹膜内和皮下结肠直肠癌小鼠模型中的IL12和CCL21a疗法
图25A-25B包括来自腹膜内和皮下结肠直肠癌小鼠模型中的MSC-IL-12+CCL21a疗法的数据。测试了三个不同批次的慢病毒转导系的MSC-IL12和CCL21a(TLOO8-3/4、TL019-01/02和TL022-01/02;每个TL编号代表一个批次)。图25A显示了全部三个批次的MSC-IL12+MSC-CCL21a都可以减轻皮下和腹膜内模型的肿瘤负荷(前5幅图来自SC模型,和后3幅图来自IP模型)。在第11天收集来自所有小鼠的肿瘤。图25B显示了每个组的平均肿瘤重量。
参考文献:
1.Kidd S等(2009)Stem Cells 27(10):2614-2623.
2.Dembinski JL等(2013)Cytotherapy 15(1):20-32.
3.Siegel RL等(2016)CA Cancer J Clin 66(1):7-30.
4.Dizon D MJ(2010)Gynecol Oncol 116(3).
5.Woo SR等(2015)Trends Immunol 36(4):250-256.
6.Hamanishi J等(2016)Int Immunol 28(7):339-348.
7.Li S等(2012)Oncolytic Virother 1:1-21.
8.Koneru M等(2015)J Transl Med 13:102.
9.Cruz CR等(2010)Cytotherapy 12(6):743-749.
10.Li YQ等(2013)PLoS One 8(10):e76379.
11.Wiedemann GM等(2016)Oncoimmunology 5(9):e1175794.
12.Squillaro T等(2016)Cell Transplant 25(5):829-848.
13.Studeny M等(2004)J Natl Cancer Inst 96(21):1593-1603.
14.Ling X等(2010)Cancer Microenviron 3(1):83-95.
15.Schukur L等(2015)Sci Transl Med 7(318):318ra201.
16.Howlader N NA,Krapcho M,Garshell J,Miller D,Altekruse SF,KosaryCL,Yu M,Ruhl J,Tatalovich Z,Mariotto A,Lewis DR,Chen HS,Feuer EJ and CroninKA.(2015).
17.Lengyel E(2010)Am J Pathol 177(3):1053-1064.
18.McGuire WP等(1996)The New England journal of medicine334(1):1-6.
19.McGuire WP等(1989)Annals of internal medicine 111(4):273-279.20.Adams SF&Benencia F(2015)Future Oncology 11(9):1293-1296.21.Maude SL等(2014)N Engl J Med 371(16):1507-1517.
22.Bargou R等(2008)Science 321(5891):974-977.
23.Kershaw MH等(2014)Clin Trans Immunol 3:e16.
24.Gilham DE等(2012)Trends Mol Med 18(7):377-384.
25.Klinger M等(2012)Blood 119(26):6226-6233.
26.Fu J等(2015)Sci Transl Med 7(283):283ra252.
27.Moynihan KD等(2016)Nat Med 22(12):1402-1410.
28.Mohammadi M等(2016)Cancer Gene Ther 23(9):285-286.
29.Wang D等(2013)Cell Transplant 22(12):2267-2277.
30.Nowakowski A等(2016)Stem Cells Int 2016:4956063.
31.Sun Z等(2014)J Hematol Oncol 7:14.
32.Ando M等(2015)Stem Cell Reports 5(4):597-608.
33.Zhao Q等(2015)Proc Natl Acad Sci U S A 112(2):530-535.
34.Xie C等(2013)Br J Cancer 109(5):1198-1205.
35.Parker BS等(2016)Nat Rev Cancer 16(3):131-144.
36.Roby KF等(2000)Carcinogenesis 21(4):585-591.
37.Sharma AD等(2015)J Vis Exp(95):e52242.
38.Waterman RS等(2012)PLoS One 7(9):e45590.
39.Dubinett SM等(2010)Cancer J 16(4):325-335.
40.Tang ED&Wang CY(2015)PLoS One 10(3):e0120090.
41.Cieri N等(2013)Blood 121(4):573-584.
42.Fitzgerald KA等(2003)Nat Immunol 4(5):491-496.
43.Wong AS等(2016)Proc Natl Acad Sci U S A 113(9):2544-2549.44.WongAS等(2015)Nat Biotechnol 33(9):952-961.
45.Nissim L等(2014)Mol Cell 54(4):698-710.
46.Deng P等(2016)Neural Regen Res 11(5):702-705.
47.Beegle JR等(2016)Mol Ther Methods Clin Dev 3:16053.
48.Boutros C等(2016)Nat Rev Clin Oncol 13(8):473-486.
49.Valsecchi ME(2015)New Engl J Med 373(13):1270-1270.
50.Pardoll DM(2012)Nat Rev Cancer 12(4):252-264.
51.Legat A等(2013)Front Immunol 4:455.
52.Justus CR等(2014)J Vis Exp(88).
53.Jedema I等(2004)Blood 103(7):2677-2682.
54.Peng D等(2015)Nature 527(7577):249-253.
55.Gitzinger M等(2009)Proc Natl Acad Sci U S A 106(26):10638-10643.56.Clackson T等(1998)Proc Natl Acad Sci U S A 95(18):10437-10442.57.Siuti P等(2013)Nature Biotechnology 31(5):448-452.
58.Farzadfard F&Lu TK(2014)Science 346(6211):1256272.
59.Perli SD等(2016)Science 353(6304).
60.Roquet N等(2016)Science 353(6297):aad8559.
61.Wong ASL等(2016)Proceedings of the National Academy of Sciences.
62.Gardner TS等(2000)Nature 403(6767):339-342.
63.Deans TL等(2007)Cell 130(2):363-372.
64.Warren L等(2010)Cell Stem Cell 7(5):618-630.
65.Yang BX等(2015)Cell 163(1):230-245.
66.Kumar RM等(2014)Nature 516(7529):56-61.
67.Zhang J等(2016)Cell Stem Cell 19(1):66-80.
68.Cahan P等(2014)Cell 158(4):903-915.
69.Doulatov S等(2013)Cell Stem Cell 13(4):459-470.
70.Kim K等(2011)Nat Biotechnol 29(12):1117-1119.
71.Chavez A等(2016)Nat Methods 13(7):563-567.
72.Slomovic S&Collins JJ(2015)Nat Methods 12(11):1085-1090.
本文公开的所有参考文献、专利和专利申请均通过引用对于各自引用的主题引入,其在某些情况下可涵盖整个文件。
除非明确相反指出,否则本说明书和权利要求书中使用的不定冠词“一”和“一个”应理解为表示“至少一个”。
还应该理解,除非明确相反地指出,否则在本文要求保护的包括一个以上步骤或动作的任何方法中,该方法的步骤或动作的顺序不一定限于其中所列举的该方法的步骤或动作的顺序。
在权利要求以及上面的说明书中,所有过渡短语,例如“包含”、“包含”、“携带”、“具有”、“含有、“涉及”、“持有”、“组成”,等等应理解为开放式的,即表示包含但不限于。只有过渡短语“由......组成”和“基本上由......组成”应当是封闭或半封闭的过渡短语,如United States Patent Office Manual of Patent Examining Procedures,2111.03节所述。
Claims (39)
1.一种减小受试者中的肿瘤体积的方法,该方法包括以有效量向患有肿瘤的受试者递送包含经工程化以产生多种效应分子的间充质干细胞的组合物以减小所述肿瘤的体积,该效应分子调节肿瘤介导的免疫抑制机制。
2.如权利要求1所述的方法,其中所述多种效应分子选自细胞因子、受体/配体、抗体、核苷酸、肽和酶。
3.如权利要求1或2所述的方法,其中所述肿瘤选自膀胱肿瘤、脑肿瘤、乳腺肿瘤、子宫颈肿瘤、结肠直肠肿瘤、食管肿瘤、神经胶质瘤、肾肿瘤、肝肿瘤、肺肿瘤、黑素瘤、卵巢肿瘤、胰腺肿瘤、前列腺肿瘤、皮肤肿瘤、甲状腺肿瘤和子宫肿瘤。
4.如权利要求1-3任一项所述的方法,其中所述组合物包含(a)经工程化以产生第一效应分子的第一间充质干细胞和(b)经工程化以产生第二效应分子的第二间充质干细胞。
5.如权利要求1-3任一项所述的方法,其中所述组合物包含经工程化以产生第一效应分子和第二效应分子的间充质干细胞。
6.如权利要求4或5所述的方法,其中所述第一效应分子是IL-12和所述第二效应分子是CCL21。
7.如权利要求4或5所述的方法,其中所述第一效应分子是IFN-β和所述第二效应分子是IFN-γ。
8.如权利要求1-7任一项所述的方法,其中所述间充质干细胞经工程化以产生IL-12、CCL21、IFN-β、IFN-γ或前述两者或更多者的任意组合。
9.如权利要求1-8任一项所述的方法,其中所述组合物还包含检查点抑制剂。
10.如权利要求9所述的方法,其中所述检查点抑制剂是抗PD-1抗体、抗PD-1L抗体或抗CTLA-4抗体。
11.如权利要求10所述的方法,其中所述检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体。
12.如权利要求1-11任一项所述的方法,其中所述组合物还包含抗CD40抗体。
13.如权利要求3-11任一项所述的方法,其中所述肿瘤是乳腺肿瘤。
14.如权利要求1-12任一项所述的方法,其中所述肿瘤是结肠直肠肿瘤。
15.如权利要求1-14任一项所述的方法,其中所述肿瘤的体积相对于对照减小至少25%,任选地其中所述对照是未修饰的间充质干细胞。
16.如权利要求15所述的方法,其中所述肿瘤的体积相对于对照减小至少50%,任选地其中所述对照是未修饰的间充质干细胞。
17.如权利要求16所述的方法,其中所述肿瘤的体积相对于对照减小至少75%,任选地其中所述对照是未修饰的间充质干细胞。
18.如权利要求4或5所述的方法,其中所述肿瘤是乳腺肿瘤,所述第一效应分子是IL-12,所述第二效应分子是CCL21,且任选地其中所述组合物还包含抗CTLA-4抗体。
19.如权利要求4或5所述的方法,其中所述肿瘤是结肠直肠肿瘤,所述第一效应分子是IL-12,所述第二效应分子是CCL21,且任选地其中所述组合物还包含抗CD40抗体。
20.一种经工程化以产生调节肿瘤介导的免疫抑制机制的多种效应分子的间充质干细胞,任选地其中所述效应分子中的一种是IL-12和所述效应分子中的另一种是CCL21。
21.一种包含经工程化以产生调节肿瘤介导的免疫抑制机制的多种效应分子的间充质干细胞的组合物,其以有效量配制以减小受试者中的肿瘤体积。
22.如权利要求21所述的组合物,其中所述多种效应分子选自细胞因子、受体/配体、抗体、核苷酸、肽和酶。
23.如权利要求21或22所述的组合物,其中所述肿瘤选自膀胱肿瘤、脑肿瘤、乳腺肿瘤、子宫颈肿瘤、结肠直肠肿瘤、食管肿瘤、神经胶质瘤、肾肿瘤、肝肿瘤、肺肿瘤、黑素瘤、卵巢肿瘤、胰腺肿瘤、前列腺肿瘤、皮肤肿瘤、甲状腺肿瘤和子宫肿瘤。
24.如权利要求21-23任一项所述的组合物,其中所述组合物包含(a)经工程化以产生第一效应分子的第一间充质干细胞和(b)经工程化以产生第二效应分子的第二间充质干细胞。
25.如权利要求21-23任一项所述的组合物,其中所述组合物包含经工程化以产生第一效应分子和第二效应分子的间充质干细胞。
26.如权利要求24或25所述的组合物,其中所述第一效应分子是IL-12和所述第二效应分子是CCL21。
27.如权利要求24或25所述的组合物,其中所述第一效应分子是IFN-β和所述第二效应分子是IFN-γ。
28.如权利要求21-27任一项所述的组合物,其中所述间充质干细胞经工程化以产生IL-12、CCL21、IFN-β、IFN-γ或前述两者或更多者的任意组合。
29.如权利要求21-28任一项所述的组合物,其中所述组合物还包含检查点抑制剂。
30.如权利要求29所述的组合物,其中所述检查点抑制剂是抗PD-1抗体、抗PD-1L抗体或抗CTLA-4抗体。
31.如权利要求30所述的组合物,其中所述检查点抑制剂是抗CTLA-4抗体。
32.如权利要求21-31任一项所述的组合物,其中所述组合物还包含抗CD40抗体。
33.如权利要求23-31任一项所述的组合物,其中所述肿瘤是乳腺肿瘤。
34.如权利要求21-32任一项所述的组合物,其中所述肿瘤是结肠直肠肿瘤。
35.如权利要求21-34任一项所述的组合物,其中所述肿瘤的体积相对于对照减小至少25%,任选地其中所述对照是未修饰的间充质干细胞。
36.如权利要求35所述的组合物,其中所述肿瘤的体积相对于对照减小至少50%,任选地其中所述对照是未修饰的间充质干细胞。
37.如权利要求36所述的组合物,其中所述肿瘤的体积相对于对照减小至少75%,任选地其中所述对照是未修饰的间充质干细胞。
38.如权利要求24或25所述的组合物,其中所述肿瘤是乳腺肿瘤,所述第一效应分子是IL-12,所述第二效应分子是CCL21,且任选地其中所述组合物还包含抗CTLA-4抗体。
39.如权利要求24或25所述的组合物,其中所述肿瘤是结肠直肠肿瘤,所述第一效应分子是IL-12,所述第二效应分子是CCL21,且任选地其中所述组合物的间充质干细胞经工程化以产生抗CD40抗体。
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762485295P | 2017-04-13 | 2017-04-13 | |
US62/485,295 | 2017-04-13 | ||
US201762583343P | 2017-11-08 | 2017-11-08 | |
US62/583,343 | 2017-11-08 | ||
PCT/US2018/027492 WO2018191619A1 (en) | 2017-04-13 | 2018-04-13 | Combinatorial cancer immunotherapy |
CN201880034653.8A CN110996975A (zh) | 2017-04-13 | 2018-04-13 | 组合癌症免疫疗法 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201880034653.8A Division CN110996975A (zh) | 2017-04-13 | 2018-04-13 | 组合癌症免疫疗法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN117838729A true CN117838729A (zh) | 2024-04-09 |
Family
ID=62092349
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201880034653.8A Pending CN110996975A (zh) | 2017-04-13 | 2018-04-13 | 组合癌症免疫疗法 |
CN202311122981.2A Pending CN117838729A (zh) | 2017-04-13 | 2018-04-13 | 组合癌症免疫疗法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201880034653.8A Pending CN110996975A (zh) | 2017-04-13 | 2018-04-13 | 组合癌症免疫疗法 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11446332B2 (zh) |
EP (2) | EP4317422A3 (zh) |
JP (2) | JP2020516654A (zh) |
KR (1) | KR20190141695A (zh) |
CN (2) | CN110996975A (zh) |
AU (1) | AU2018251898A1 (zh) |
CA (1) | CA3059634A1 (zh) |
IL (1) | IL269810A (zh) |
SG (1) | SG10202111394XA (zh) |
WO (1) | WO2018191619A1 (zh) |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11236139B2 (en) * | 2014-11-05 | 2022-02-01 | The Regents Of The University Of California | Combination immunotherapy |
WO2018191619A1 (en) | 2017-04-13 | 2018-10-18 | Senti Biosciences, Inc. | Combinatorial cancer immunotherapy |
EP3806888B1 (en) | 2018-06-12 | 2024-01-31 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy |
JP7340591B2 (ja) | 2018-07-11 | 2023-09-07 | アクティム・セラピューティクス・インコーポレイテッド | 遺伝子操作された免疫刺激性細菌菌株およびその使用 |
US11419898B2 (en) | 2018-10-17 | 2022-08-23 | Senti Biosciences, Inc. | Combinatorial cancer immunotherapy |
AU2019359890A1 (en) | 2018-10-17 | 2021-06-03 | Senti Biosciences, Inc. | Combinatorial cancer immunotherapy |
EP3870600A1 (en) | 2018-10-24 | 2021-09-01 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Er tunable protein regulation |
US12024709B2 (en) | 2019-02-27 | 2024-07-02 | Actym Therapeutics, Inc. | Immunostimulatory bacteria engineered to colonize tumors, tumor-resident immune cells, and the tumor microenvironment |
US11718960B2 (en) | 2019-04-04 | 2023-08-08 | Eco-Products, Pbc | Composition for providing grease and water resistant properties without use of a fluorinated compound, method of making the composition, and pulp molded article made by the method thereof |
JP2022542802A (ja) * | 2019-07-17 | 2022-10-07 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 併用がん療法剤および方法 |
US20220378822A1 (en) * | 2019-08-28 | 2022-12-01 | Senti Bioscience, Inc. | Combinatorial cancer immunotherapy |
WO2021055731A1 (en) * | 2019-09-20 | 2021-03-25 | University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Il-36 cytokine expressing oncolytic viruses for treating cancer |
AU2020382614A1 (en) * | 2019-11-12 | 2022-06-02 | Actym Therapeutics, Inc. | Immunostimulatory bacteria delivery platforms and their use for delivery of therapeutic products |
CN112980886B (zh) * | 2019-12-02 | 2022-02-22 | 河北森朗生物科技有限公司 | 一种能高效制备且应用安全的嵌合抗原受体t细胞及其制备方法与应用 |
JP2023534055A (ja) * | 2020-07-16 | 2023-08-07 | 上海交通大学 | 間葉系幹細胞によるケモカインおよびサイトカイン送達を標的とする免疫療法 |
CN115433734A (zh) * | 2022-06-01 | 2022-12-06 | 北京奇糖科技有限公司 | 核酸片段及其在制备肿瘤疫苗中的应用 |
Family Cites Families (113)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
US5328988A (en) | 1987-10-26 | 1994-07-12 | Immunex Corporation | Interleukin-7 |
US5714585A (en) | 1987-10-26 | 1998-02-03 | Sterling Winthrop, Inc. | Antibodies that are immunoreactive with interleukin-7 |
US4965195A (en) | 1987-10-26 | 1990-10-23 | Immunex Corp. | Interleukin-7 |
US5486359A (en) | 1990-11-16 | 1996-01-23 | Osiris Therapeutics, Inc. | Human mesenchymal stem cells |
US5674486A (en) | 1991-06-25 | 1997-10-07 | San Diego Regional Cancer Center | Cancer immunotherapy with carrier cells |
US5981724A (en) | 1991-10-25 | 1999-11-09 | Immunex Corporation | DNA encoding CD40 ligand, a cytokine that binds CD40 |
AU4543193A (en) | 1992-06-22 | 1994-01-24 | Henry E. Young | Scar inhibitory factor and use thereof |
US7537932B1 (en) | 1993-05-19 | 2009-05-26 | Schering Corporation | Antibodies that bind purified mammalian FLT3 ligands |
US5554512A (en) | 1993-05-24 | 1996-09-10 | Immunex Corporation | Ligands for flt3 receptors |
NZ314644A (en) | 1993-05-24 | 2000-11-24 | Immunex Corp | Use of flt3-ligands as a growth stimulator of stem cells in the transplantation of tissue |
US5536657A (en) | 1993-07-19 | 1996-07-16 | Hoffmann-La Roche Inc. | Recombinant DNA encoding human receptor for interleukin-12 |
US5591625A (en) | 1993-11-24 | 1997-01-07 | Case Western Reserve University | Transduced mesenchymal stem cells |
DK0772624T3 (da) | 1994-04-06 | 2000-11-13 | Immunex Corp | Interleukin-15 |
US5780268A (en) | 1995-12-06 | 1998-07-14 | Incyte Pharmaceuticals | Chemokine expressed in a mixed lymphocyte reaction |
US5928906A (en) | 1996-05-09 | 1999-07-27 | Sequenom, Inc. | Process for direct sequencing during template amplification |
AU729579B2 (en) | 1996-10-23 | 2001-02-01 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | Immunotherapy and improved vaccines |
EP1012240B1 (en) | 1997-01-31 | 2008-03-19 | Edward P. Cohen | Cancer immunotherapy with semi-allogeneic cells |
US8034332B2 (en) * | 1997-04-30 | 2011-10-11 | Conkwest, Inc. | Interleukin-secreting natural killer cell lines and methods of use |
US6153182A (en) | 1997-12-19 | 2000-11-28 | Uab Research Foundation | Lymphotactin as an adjuvant |
US20010023070A1 (en) | 1998-05-29 | 2001-09-20 | Reinhard Ebner | Interleukins-21 and 22 |
WO1999061617A1 (en) | 1998-05-29 | 1999-12-02 | Human Genome Sciences, Inc. | Interleukins-21 and 22 |
DE19833476B4 (de) | 1998-07-24 | 2005-08-25 | Huss, Ralf, Dr. | Genetisch modifizierte CD34-Negative, adhärent wachsende hämatopoetische Stammzellen und deren Verwendung in der Gentherapie |
US6392126B1 (en) | 1999-02-25 | 2002-05-21 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Adenosine deaminase homologues and uses thereof |
US6307024B1 (en) | 1999-03-09 | 2001-10-23 | Zymogenetics, Inc. | Cytokine zalpha11 Ligand |
CA2465156C (en) | 2001-11-05 | 2011-10-18 | Zymogenetics, Inc. | Il-21 antagonists |
WO2003073998A2 (en) * | 2002-03-02 | 2003-09-12 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Local production and/or delivery of anti-cancer agents by stromal cell precursors |
US20050063947A1 (en) | 2002-03-27 | 2005-03-24 | Patrick Hwu | Method for treating cancer in humans |
AU2003273574A1 (en) | 2002-05-31 | 2003-12-19 | Osiris Therapeutics, Inc. | Intraperitoneal delivery of genetically engineered mesenchymal stem cells |
AU2003287429A1 (en) * | 2002-11-01 | 2004-06-07 | Five Prime Therapeutics, Inc. | Stem cell libraries |
EP1641913B1 (en) | 2003-06-27 | 2016-01-06 | DePuy Synthes Products, Inc. | Postpartum cells derived from umbilical cord tissue, and methods of making and using the same |
KR101130220B1 (ko) | 2003-06-27 | 2012-04-13 | 엔씨 메디컬 리서치 가부시키가이샤 | 간엽계 세포를 유효 성분으로 하는 뇌신경 질환 치료용 체내 투여용 약제 |
US7052772B2 (en) | 2003-08-14 | 2006-05-30 | 3M Innovative Properties Company | Material for packaging electronic components |
US20050037306A1 (en) | 2003-08-16 | 2005-02-17 | Tetsuo Nakatsu | Candle system for enhancing burning and improving volatiles performance and a manufacturing method for the same |
JP2007508332A (ja) | 2003-10-17 | 2007-04-05 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 併用療法 |
WO2005037218A2 (en) | 2003-10-17 | 2005-04-28 | Actis Biologics, Inc. | Lentiviral vector delivery of il-21 for treatment of cancer |
GB0400031D0 (en) | 2004-01-03 | 2004-02-04 | Univ Sheffield | Depression treatment |
WO2006073419A2 (en) | 2004-04-01 | 2006-07-13 | Gang Zheng | Lipoprotein nanoplatforms |
CA3052445C (en) * | 2004-07-10 | 2023-08-22 | Kerry S. Campbell | Genetically modified human natural killer cell lines |
EP1978032A3 (en) | 2004-07-22 | 2009-02-18 | Erasmus University Medical Center Rotterdam | Binding molecules |
DE102005057426A1 (de) | 2005-11-30 | 2007-05-31 | Andritz Küsters GmbH & Co. KG | Unterdruck-Bandfördervorrichtung zum Führen einer laufenden Bahn |
US7833754B2 (en) | 2006-01-13 | 2010-11-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | IL-12 for expression in mammalian cell |
AU2007208452B2 (en) | 2006-01-13 | 2012-07-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Vaccines and immunotherapeutics using codon optimized IL-15 and methods for using the same |
EP1984505B1 (en) | 2006-01-13 | 2019-12-25 | The Government of the U.S.A., as repr. by the Secretary, Dept. of Health & Human Services, the Nat. Inst. of Health | Codon optimized il-15 and il-15r-alpha genes for expression in mammalian cells |
KR100788930B1 (ko) | 2006-04-18 | 2007-12-27 | 포항공과대학교 산학협력단 | 항암 조성물 |
WO2007149493A2 (en) | 2006-06-22 | 2007-12-27 | Immugen Inc | Restoration of hearing loss |
US7993918B2 (en) | 2006-08-04 | 2011-08-09 | Anthrogenesis Corporation | Tumor suppression using placental stem cells |
US8304931B2 (en) | 2006-12-18 | 2012-11-06 | Decicon, Inc. | Configurable power supply integrated circuit |
EP2856876B1 (en) * | 2007-03-30 | 2018-01-31 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Constitutive expression of costimulatory ligands on adoptively transferred T lymphocytes |
TWI412591B (zh) | 2007-04-20 | 2013-10-21 | Sigma Tau Rare Diseases S A | 穩定的重組腺苷脫胺酶 |
US8741283B2 (en) | 2007-04-20 | 2014-06-03 | Sigma-Tau Rare Diseases, S.A. | Adenosine deaminase anticancer therapy |
WO2008131445A1 (en) * | 2007-04-23 | 2008-10-30 | The Board Of Regents, The University Of Texas System | Device and method for transfecting cells for therapeutic use |
ES2654303T3 (es) | 2007-05-04 | 2018-02-13 | University Health Network | Inmunoterapia de IL-12 contra el cáncer |
CA2688032C (en) | 2007-05-24 | 2015-11-03 | Apceth Gmbh & Co. Kg | Cd34 stem cell-related methods and compositions |
EP2034025A1 (en) | 2007-09-04 | 2009-03-11 | Freie Universität Berlin | Inflammation-induced anti-inflammatory gene expression |
EP2229411B1 (en) | 2007-12-12 | 2019-02-27 | University Health Network | High-density lipoprotein-like peptide-phospholipid scaffold ("hpps") nanoparticles |
EP2238105B1 (en) | 2008-01-28 | 2014-04-16 | Amorepacific Corporation | Novel compounds as vanilloid receptor antagonists |
WO2010042189A2 (en) | 2008-10-08 | 2010-04-15 | Intrexon Corporation | Engineered cells expressing multiple immunomodulators and uses thereof |
JP5869342B2 (ja) | 2008-11-19 | 2016-02-24 | アンスロジェネシス コーポレーション | 羊膜由来接着細胞 |
KR20120088542A (ko) | 2009-04-13 | 2012-08-08 | 아프세스 게엠베하 & 씨오. 카게 | 종양 치료를 위한 조작된 중간엽 줄기세포 및 이를 사용하는 방법 |
JPWO2010128636A1 (ja) | 2009-05-08 | 2012-11-01 | 日本電気株式会社 | 通信システム、通信装置、通信方法及びプログラム |
WO2011114919A1 (en) | 2010-03-19 | 2011-09-22 | Semiconductor Energy Laboratory Co., Ltd. | Semiconductor device |
EP2614151B1 (en) | 2010-09-08 | 2019-07-24 | Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg-Speyer-Haus | Interleukin 15 as selectable marker for gene transfer in lymphocytes |
US20140017787A1 (en) | 2010-10-11 | 2014-01-16 | Aline M. Betancourt | Mesenchymal stem cells and related therapies |
NZ723731A (en) | 2011-04-08 | 2020-05-29 | Baylor College Medicine | Reversing the effects of the tumor microenvironment using chimeric cytokine receptors |
WO2013040371A2 (en) | 2011-09-16 | 2013-03-21 | Baylor College Of Medicine | Targeting the tumor microenvironment using manipulated nkt cells |
AU2013290146B2 (en) | 2012-07-11 | 2018-01-18 | Imstem Biotechnology, Inc. | Mesenchymal-like stem cells derived from human embryonic stem cells, methods and uses thereof |
CN104471059B (zh) | 2012-07-12 | 2018-04-17 | 珠海横琴爱姆斯坦生物科技有限公司 | 人胚胎干细胞衍生的间充质样干细胞、方法及其应用 |
EP3011055B1 (en) | 2013-06-19 | 2019-08-28 | University Of Miami | Classification system, methods and kit for classifying breast cancer |
WO2015010096A1 (en) * | 2013-07-18 | 2015-01-22 | Baylor College Of Medicine | Method of enhancing potency of immune cells |
JP2015030819A (ja) | 2013-08-05 | 2015-02-16 | 株式会社ジェイテクト | アクリルゴム組成物およびこれを備えたシール装置 |
AR097570A1 (es) | 2013-09-06 | 2016-03-23 | Consejo Nac De Investig Científicas Y Técnicas (Conicet) | Composiciones y métodos para incrementar la migración de células mesenquimales del estroma hacia tumores |
US20160354408A1 (en) | 2014-02-11 | 2016-12-08 | Anthrogenesis Corporation | Micro-organoids, and methods of making and using the same |
JP6468712B2 (ja) | 2014-03-28 | 2019-02-13 | 大和ハウス工業株式会社 | 通信ユニット |
US10155024B2 (en) | 2014-03-28 | 2018-12-18 | The Catholic University Of Korea Industry-Academic Cooperation Foundation | Composition for preventing or treating B-cell lymphoma comprising IL-21 expressing mesenchymal stem cells |
KR20160011916A (ko) | 2014-07-23 | 2016-02-02 | 삼성전자주식회사 | 얼굴 인식을 통한 사용자 식별 방법 및 장치 |
EP4205749A1 (en) | 2014-07-31 | 2023-07-05 | Novartis AG | Subset-optimized chimeric antigen receptor-containing cells |
US9730938B2 (en) | 2014-08-08 | 2017-08-15 | Pharmacyclics Llc | Bruton's tyrosine kinase inhibitor combinations and uses thereof |
US9918718B2 (en) | 2014-08-08 | 2018-03-20 | DePuy Synthes Products, Inc. | Embolic coil delivery system with retractable mechanical release mechanism |
US20170239297A1 (en) | 2014-08-18 | 2017-08-24 | Apceth Gmbh & Co. Kg | Genetically modified mesenchymal stem cells expressing an immune response-stimulating cytokine to attract and/or activate immune cells |
US10869432B2 (en) | 2014-12-23 | 2020-12-22 | Husqvarna Ab | Lawn monitoring and maintenance via a robotic vehicle |
KR20160089688A (ko) | 2015-01-20 | 2016-07-28 | 삼성전자주식회사 | 엑스선 영상 장치, 및 그 제어방법 |
US20160237407A1 (en) | 2015-02-17 | 2016-08-18 | Batu Biologics, Inc. | Universal donor chimeric antigen receptor cells |
WO2016146819A1 (en) | 2015-03-18 | 2016-09-22 | Apceth Gmbh & Co. Kg | Hypoxia-induced expression of therapeutic proteins in mesenchymal stem cells |
US10874724B2 (en) | 2015-05-22 | 2020-12-29 | University Of Houston System | Enzymatic immunomodulation of solid tumors and uses thereof |
WO2016201304A1 (en) * | 2015-06-10 | 2016-12-15 | Nantkwest, Inc. | Modified nk-92 cells for treating cancer |
WO2017222593A1 (en) | 2016-06-24 | 2017-12-28 | Icell Gene Therapeutics Llc | Chimeric antigen receptors (cars), compositions and methods thereof |
EP3316794B1 (en) | 2015-06-30 | 2021-01-20 | Smith & Nephew, Inc | Suture anchor system with threaded plug |
JP7033453B2 (ja) * | 2015-06-30 | 2022-03-10 | セレクティス | 特異的エンドヌクレアーゼを使用した遺伝子不活化によってnk細胞の機能性を改善する方法 |
EP3318026B1 (en) | 2015-06-30 | 2020-04-08 | British Telecommunications public limited company | Model management in a dynamic qos environment |
JP7146632B2 (ja) | 2015-07-21 | 2022-10-04 | ノバルティス アーゲー | 免疫細胞の有効性および増大を改善する方法 |
US10525082B2 (en) * | 2015-09-09 | 2020-01-07 | Seattle Children's Hospital | Genetic engineering of macrophages for immunotherapy |
CN105206757B (zh) | 2015-11-05 | 2016-09-07 | 京东方科技集团股份有限公司 | 有机发光二极管及其制作方法、显示基板和显示装置 |
US10008344B2 (en) | 2015-11-11 | 2018-06-26 | Htc Corporation | Switch assembly and hand-held device |
US10533157B1 (en) * | 2015-12-03 | 2020-01-14 | Nantbio, Inc. | Recombinant NK cells expressing co-stimulatory molecules |
WO2017133175A1 (en) | 2016-02-04 | 2017-08-10 | Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. | Engineered mammalian cells for cancer therapy |
US20210205370A1 (en) | 2016-02-18 | 2021-07-08 | Pluristem Ltd. | Methods and compositions for treating cancers and neoplasms |
KR101833971B1 (ko) | 2016-02-19 | 2018-03-02 | 사회복지법인 삼성생명공익재단 | 중간엽 줄기세포 또는 xcl1을 포함하는 근육질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
CN108884164B (zh) | 2016-02-25 | 2022-12-27 | 细胞医学瑞士公司 | 用于免疫疗法的经修饰细胞 |
AU2017277499B2 (en) | 2016-06-07 | 2022-07-28 | The Pacific Heart, lung & Blood Institute | Compositions and methods for treating cancer |
CA3025812A1 (en) | 2016-08-19 | 2018-02-22 | Curevac Ag | Rna for cancer therapy |
WO2018071295A1 (en) | 2016-10-10 | 2018-04-19 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and compositions for inducible production of anti-inflammatory cytokines |
JP6607179B2 (ja) | 2016-12-15 | 2019-11-20 | トヨタ自動車株式会社 | 車両の制御装置 |
WO2018161038A1 (en) | 2017-03-03 | 2018-09-07 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Il12 compositions and methods for immunotherapy |
WO2018160993A1 (en) | 2017-03-03 | 2018-09-07 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for immunotherapy |
WO2018161026A1 (en) | 2017-03-03 | 2018-09-07 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Il15 compositions and methods for immunotherapy |
JP2020509773A (ja) | 2017-03-17 | 2020-04-02 | センティ バイオサイエンシズ インコーポレイテッド | 免疫調節性細胞回路 |
WO2018191619A1 (en) | 2017-04-13 | 2018-10-18 | Senti Biosciences, Inc. | Combinatorial cancer immunotherapy |
JP7285220B2 (ja) | 2017-05-18 | 2023-06-01 | モデルナティエックス インコーポレイテッド | 連結したインターロイキン-12(il12)ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む脂質ナノ粒子 |
AU2019359890A1 (en) | 2018-10-17 | 2021-06-03 | Senti Biosciences, Inc. | Combinatorial cancer immunotherapy |
US11419898B2 (en) | 2018-10-17 | 2022-08-23 | Senti Biosciences, Inc. | Combinatorial cancer immunotherapy |
CN111849905B (zh) * | 2019-04-18 | 2023-03-24 | 上海交通大学 | 间充质干细胞靶向运输趋化因子和细胞因子的免疫疗法 |
US20220378822A1 (en) * | 2019-08-28 | 2022-12-01 | Senti Bioscience, Inc. | Combinatorial cancer immunotherapy |
-
2018
- 2018-04-13 WO PCT/US2018/027492 patent/WO2018191619A1/en unknown
- 2018-04-13 KR KR1020197033512A patent/KR20190141695A/ko not_active Application Discontinuation
- 2018-04-13 JP JP2019555932A patent/JP2020516654A/ja active Pending
- 2018-04-13 AU AU2018251898A patent/AU2018251898A1/en not_active Withdrawn
- 2018-04-13 EP EP23198786.8A patent/EP4317422A3/en active Pending
- 2018-04-13 CA CA3059634A patent/CA3059634A1/en not_active Withdrawn
- 2018-04-13 US US16/604,973 patent/US11446332B2/en active Active
- 2018-04-13 CN CN201880034653.8A patent/CN110996975A/zh active Pending
- 2018-04-13 SG SG10202111394XA patent/SG10202111394XA/en unknown
- 2018-04-13 EP EP18721648.6A patent/EP3610000A1/en not_active Withdrawn
- 2018-04-13 CN CN202311122981.2A patent/CN117838729A/zh active Pending
-
2019
- 2019-10-03 IL IL26981019A patent/IL269810A/en unknown
-
2022
- 2022-07-25 US US17/872,827 patent/US20230270789A1/en not_active Abandoned
- 2022-09-16 JP JP2022147539A patent/JP2022180471A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20230270789A1 (en) | 2023-08-31 |
US11446332B2 (en) | 2022-09-20 |
CA3059634A1 (en) | 2018-10-18 |
WO2018191619A1 (en) | 2018-10-18 |
AU2018251898A1 (en) | 2019-10-31 |
EP3610000A1 (en) | 2020-02-19 |
EP4317422A2 (en) | 2024-02-07 |
CN110996975A (zh) | 2020-04-10 |
JP2020516654A (ja) | 2020-06-11 |
US20200206271A1 (en) | 2020-07-02 |
IL269810A (en) | 2019-11-28 |
JP2022180471A (ja) | 2022-12-06 |
SG10202111394XA (en) | 2021-12-30 |
EP4317422A3 (en) | 2024-05-01 |
KR20190141695A (ko) | 2019-12-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230270789A1 (en) | Combinatorial cancer immunotherapy | |
US10993967B2 (en) | Combinatorial cancer immunotherapy | |
US11464806B2 (en) | Genetically modified mesenchymal stem cells expressing an immune response-stimulating cytokine to attract and/or activate immune cells | |
RU2725799C2 (ru) | Онколитические аденовирусы, кодирующие биспецифические антитела, а также способы и применения, связанные с ними | |
RU2703438C2 (ru) | Расширенная адоптивная клеточная терапия | |
RU2739770C2 (ru) | Экспансия лимфоцитов с использованием композиции цитокинов для активной клеточной иммунотерапии | |
Zhang et al. | Biological effects of IL-15 on immune cells and its potential for the treatment of cancer | |
US20190209652A1 (en) | Modulating responses to checkpoint inhibitor therapy | |
US20230312671A1 (en) | Grp78 targeted adoptive cell therapy | |
Zeng et al. | Natural killer cell‑based immunotherapy for lung cancer: Challenges and perspectives | |
Rossowska et al. | Intratumoral lentivector-mediated TGF-β1 gene downregulation as a potent strategy for enhancing the antitumor effect of therapy composed of cyclophosphamide and dendritic cells | |
US11419898B2 (en) | Combinatorial cancer immunotherapy | |
US20230174653A1 (en) | B7-h3 chimeric antigen receptors | |
Kandage | Modulating anti-tumour-specific CD8+ cytotoxic T lymphocyte responses | |
Park | Effective Combination Immunotherapy Using Oncolytic Viruses (OV) and Chimeric Antigen Receptor (CAR) T Cells for Solid Tumors | |
James | Mechanisms of action for Ad5-TRAIL/CpG immunotherapy for the treatment of advanced renal cell carcinoma | |
James | Mechanisms of Action for Ad5-TRAIL/CpG Immunotherapy for the Treatment of Renal Cell Carcinoma |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |