CN1177979A - 新脂酶和其产生方法以及产生这种脂酶的微生物 - Google Patents
新脂酶和其产生方法以及产生这种脂酶的微生物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1177979A CN1177979A CN 96192388 CN96192388A CN1177979A CN 1177979 A CN1177979 A CN 1177979A CN 96192388 CN96192388 CN 96192388 CN 96192388 A CN96192388 A CN 96192388A CN 1177979 A CN1177979 A CN 1177979A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lipase
- bacterium
- value
- active
- measuring
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 title claims abstract description 96
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 title claims abstract description 96
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 title claims abstract description 96
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 title claims abstract description 96
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 31
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 24
- 241001453380 Burkholderia Species 0.000 claims description 19
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 19
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 16
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 15
- BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N Triolein Natural products O([C@H](OCC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)C(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N 0.000 claims description 13
- PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N Trioleoylglycerol Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N triolein Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N 0.000 claims description 13
- 229940117972 triolein Drugs 0.000 claims description 13
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 6
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 claims description 4
- 241000589771 Ralstonia solanacearum Species 0.000 claims description 3
- 241000190932 Rhodopseudomonas Species 0.000 claims 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 24
- 238000012545 processing Methods 0.000 abstract description 9
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 abstract description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 abstract 1
- 239000010865 sewage Substances 0.000 abstract 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 11
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 7
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 5
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- 125000005908 glyceryl ester group Chemical group 0.000 description 4
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 4
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N hexane Substances CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 3
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000007669 thermal treatment Methods 0.000 description 3
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JOOXCMJARBKPKM-UHFFFAOYSA-N 4-oxopentanoic acid Chemical compound CC(=O)CCC(O)=O JOOXCMJARBKPKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 L-rhamnosyl Chemical group 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 2
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UYXTWWCETRIEDR-UHFFFAOYSA-N Tributyrin Chemical compound CCCC(=O)OCC(OC(=O)CCC)COC(=O)CCC UYXTWWCETRIEDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N bakuchiol Chemical compound CC(C)=CCC[C@@](C)(C=C)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 2
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 2
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOPHWWJVQAKWLA-UHFFFAOYSA-N 1-amino-5-hydroxy-3-methylpentane-3-sulfonic acid Chemical compound NCCC(C)(CCO)S(O)(=O)=O GOPHWWJVQAKWLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- IJFXRHURBJZNAO-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC(O)=C1 IJFXRHURBJZNAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N Ethenol Chemical compound OC=C IMROMDMJAWUWLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001148466 Janthinobacterium lividum Species 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 241000589538 Pseudomonas fragi Species 0.000 description 1
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001722 carbon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003866 digestant Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 229910001651 emery Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 125000003976 glyceryl group Chemical group [H]C([*])([H])C(O[H])([H])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 150000004688 heptahydrates Chemical class 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012540 ion exchange chromatography resin Substances 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 1
- 229940040102 levulinic acid Drugs 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 150000002696 manganese Chemical class 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- HNEGQIOMVPPMNR-NSCUHMNNSA-N mesaconic acid Chemical compound OC(=O)C(/C)=C/C(O)=O HNEGQIOMVPPMNR-NSCUHMNNSA-N 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 229960004249 sodium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002336 sorption--desorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940070710 valerate Drugs 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical compound CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003487 xylose Drugs 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Images
Abstract
一种在高温下显示出高活性而不依赖于EDTA的存在的新脂酶。它具有在高温下水解脂质的足够活性,因此可广泛应用于医药、食品加工、化妆品制造、洗涤剂、污水处理、脂肪分解等工业领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种脂酶、产生该脂酶的方法以及产生该脂酶的微生物,更具体地说,本发明涉及一种在高温下显示出高活性的由属于青枯伯克氏菌(Pseudomonas solanacearum)的细菌产生的新耐热脂酶、产生该酯酶的微生物以及产生该脂酶的方法。
背景技术
脂酶是一种酶的普通种类,它水解甘油三酯,以前曾通过动物内部器官的提取,或者是用微生物来产生。
脂酶作为一种酶,广泛地用于食品加工调味奶制品产物、用作助消化的药物、用于血脂测定诊断,同时在工业上也用于脂肪和油脂的水解和改进。要求脂酶具有适于这些应用的各种性质,并且在各种领域应用耐热脂酶,并要求其有多种使用。
在食品加工中,从食品卫生的观点看,要求在高温下进行酶反应,其具有低的细菌污染。在脂肪和油脂的分解中,已考虑到应用脂酶。脂肪和油脂水解是产生脂肪酸的和甘油的方法,脂肪酸和甘油是石化产品诸如除垢剂、化妆品和表面活性剂的原料。目前,主要应用Colgate-emery法,这种方法使脂肪和油脂在250-260℃和50-55大气压与蒸汽接触,然而,这种方法需要大型设备,并不适合中、小规模肥皂生产。因此,研究了脂酶对脂肪和油脂的分解。
然而,组成各种脂肪和油脂的硬酯酸(熔点为67-70℃)和棕榈酸(熔点为63-64℃)在常温下为固体。因此,脂肪和油脂的反应必须在熔点以上的温度才能发生。所以,用于脂肪和油脂分解的脂酶必须有高的耐热性,同时在高温下具有高反应性。
而且,在最近几年,脂酶已用于解决造纸工业树脂问题(日本审查过的专利出版物平4-29794)。常规上适合解决树脂问题的酶反应最适温度是35-55℃。由于常规酶在70℃以上失活,造纸过程中酶反应的温度受到限制,因此使用脂酶的整个造纸过程中必须控制温度。而且,酶不耐热,这是限制酶在研磨处理部分用于解决树脂问题的原因之一。
目前,市场上大多数的公知的用于作为耐热脂酶之酶的热稳定性不够,也很不实用。因此日本一个未审查的专利出版物昭62-79782提出了一种耐热脂酶。然而,酶的最适温度是60-70℃,而且它的耐热性也不够,因为在70℃处理15分钟后剩余活性低于10%。此外,由于这种酶很难作用于三醋精和丁酸甘油酯,它的用途限于食品加工。已经公开了一种来源于根霉属的耐热脂酶(日本未检查专利出版物昭59-156282),但是这种酶的最适温度是60℃,在高温下的反应性不够。而且,有一些关于由臭味假单胞菌lipolytica变种产生的脂酶的报道,其最适温度为70℃,在60℃热处理4小时后失活(日本审查过的专利出版物昭50-25553);而由莓实假单胞菌产生的脂酶,最适温度为75-80℃,经过70℃20分钟的热处理以后,仍保持95%的活性(农业生物化学41,1353-1358(1977))。然而,这些酶最适温度不超过80℃。考虑到耐热性,在经过80℃热处理1小时后,其活性在一定程度上减少。因此,它们在耐热性方面不是十分令人满意的。
发明目的
如上所述,公知的脂酶在高温时的耐热性和反应性是不够的,那么,在实践上用脂酶的机会在一些领域(例如在食品加工、工业、造纸工艺)中就会很少,同时在应用脂酶的过程中还存在受限制的温度条件问题。
因而,本发明的目的是提供中具有高的耐热性的脂酶。同时,另一个目的是提供所述脂酶的产生方法、具有极好耐热性的脂酶和产生这种耐热脂酶的细菌。
附图简要描述
图1是显示反应pH值和由SD709产生的脂酶的相对活性之间的关系的图。
图2是显示由SD709产生的脂酶在变化的pH值、37℃保持1小时后的剩余活性的图。
图3是显示反应温度和由SD709产生的脂酶的相对活性之间的关系的图。
图4是显示由SD709产生的脂酶在pH值为7的条件下经过在各种温度处理1小时之后的剩余活性的图。
图5是显示由SD709产生的脂酶在存在和不存在EDTA时反应的温度和脂酶的相对活度之间的关系的图。
发明描述
本发明发明人分离、培养、筛选大量微生物获得了一种具有高耐热性和在高温下具有高的反应性的脂酶,同时发现由青枯伯克氏菌SD709(FERMP-14786)代表的菌株(其是在日本的Chiba县土壤中分离出来的)产生新的耐热脂酶。迄今为止,人们熟知由大量菌株产生的脂酶,但是仍还不了解来源于青枯伯克氏菌的耐热脂酶。本发明人确认新的耐热脂酶在高温下对脂类的水解特别有效,因而完成了本发明。也就是说,本发明提供了如下所给出的脂酶、其产生方法和产生这种脂酶的微生物。
1)一种脂酶,在30℃至100℃的温度范围内以甘油三油酸酯乳液为底物测定时,其具有从30℃到100℃的活性温度,从85℃到100℃的最适温度。优选的脂酶具有以下特性:
(1)活性pH值和最适pH值
在pH值4-12范围内用甘油三油酸酯乳液作为底物测定时,活性pH值为4-12,最适pH值为6.5-9.5。
(2)分子量
用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定时分子量为32,000±2,000。
2)一种脂酶,在30℃至100℃的温度范围内在5mM EDTA存在下以甘油三油酸酯乳液为底物测定时,其具有从30℃到100℃的活性温度,从85℃到90℃的最适温度。优选的脂酶具有以下特性:
(1)活性pH值和最适pH值
在pH值4-12的范围内用甘油三油酸酯乳液作为底物测定时,活性pH值为4-12,最适pH值为6.5-9.5。
(2)分子量
用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定时分子量为32,000±2,000。
3)在1〕或2〕中描述的脂酶,其是从属于假单胞杆菌属(Pseudomonas)的细菌培养物中获得的,优选地是,所说的属于假单胞杆菌属的细菌是青枯伯克氏菌(Pseudomonas solanacearum)。
4)在1〕或2〕中描述的脂酶,其是从属于青枯伯克氏菌SD709(FERMP-14786)的培养物获得的。
5)在1〕或2〕中描述的属于假单胞杆菌属的细菌,其产生了一种脂酶,优选的所述细菌是青枯伯克氏菌,更优选的是青枯伯克氏菌SD709(FERMP-14786),或者是其菌学(mycologically)上的等价物或者是它们的突变体。
6)一种产生脂酶的方法,其中包括培养5〕中所描述的细菌和从培养基获得1〕或2〕中所描述的脂酶。[产生菌株]
按照本发明,用于产生这种脂酶的微生物不是特别地受限制,只要这些细菌能产生具有如下描述的性质的脂酶。这样一种细菌可以从保存的菌株或者从自然界新近分离的微生物中选择得到,优选的细菌是一种属于假单胞杆菌属的细菌,一种更优选的细菌属于青枯伯克氏菌的细菌,进一步优选的是青枯伯克氏菌SD709和其菌学上的等价物。在本申请中,菌学上的等价物意味着具有几乎相同的菌学性质的菌株。等价物包括自然的或者是人工突变体,只要它们具有如下描述的性质。
产生本发明新的脂酶菌株的例子是SD709,本发明发明人是在日本的Chiba县土壤中分离出来的。
SD709菌株有如下性质。
(1)形态学: 杆状
(2)革兰氏染色剂: 阴性
(3)孢子: (-)
(4)游动性: (+)
(5)鞭毛: 极性多鞭毛
(6)氧化酶: 阳性
(7)过氧化氢酶: 阳性
(8)OF检验: 0
(9)荧光染色产物: (-)
(10)水溶性染色产物: (-)
(11)原儿茶酸裂解: 正
(12)精氨酸二水合酶: 阴性
(13)41℃生长: 不可能
(14)反硝化作用: 阳性
(15)明胶液化: 阳性
(16)淀粉分解: 阴性
(17)PHB积累: (+)
(18)同化
葡萄糖: +
D-木糖: -
D-核糖: +
L-鼠李糖: -
乙酰丙酸: +
柠檬酸盐: +
中康酸盐: -
福寿草醇: -
2,3-丁烯乙二醇: -
间羟基苯甲酸: -
色胺: -
蔗糖: +
辛酸盐: +
L-(+)-酒石酸: +
(19)醌: Q-8
将上述具有菌学分类性质的细菌与Bergey细菌分类学手册(1984)的其它菌株相比较,结果,该菌株被确定为青枯伯克氏菌。该菌株于1995年2月23日以P-14786保存在工业科学和技术机构国立生命科学和人体技术研究所(1-1-3,Higashi,Tsuduba,Ibaragi,Japan),并且依据布达佩斯条约,自1995年12月28 作为青枯伯克氏菌((Pseudomonas sp.)SD709(FERMBP-5358)转为国际保藏。
具有以下描述特性的产生脂酶的突变体可以自发获得或通过以上面的菌株作为亲本菌株诱变获得,并且这种突变体可用作产生脂酶的细菌,制备这种突变体的常规方法是,例如,一种包括用人工的方法(如紫外照射、用N-甲基-N-硝基-N-nitro soguanidine(NTG)处理等等)进行诱变的方法。将亲本菌株接种在含有油脂如橄榄油等的琼脂培养基上,选择在菌落周围形成较大、界限清晰的菌落,用脂酶产生培养基来培养,选择产率高的菌株。[脂酶的产生]
按照本发明的脂酶,主要是在培养产生脂酶的细菌之培养物中获得的。培养基的营养成份是广泛使用的。碳源:可以使用可同化的碳化合物或含有它们的物质,如葡萄糖、脂肪和油脂、玉米浸提物、Tween表面活性物质等。氮源:可以用可同化氮化合物或含有它们的物质,如铵盐、硝酸盐、大豆粉、肉膏、玉米浸提物、pharmamedia。无机盐:如磷酸盐、镁盐、钙盐、锰盐适合使用。
培养条件因培养基成份不同而有所变化,但是选择了用于生产所需脂酶的合适条件。通常,培养温度是10-35℃,优选的在20-30℃,培养时间大约是8-100小时,当脂酶含量达到最大时,终止培养。用于生产这种脂酶的培养基优选pH值是7-10。通过这样的培养,脂酶在细胞外产生了所需的脂酶(在培养物中)。[分离和纯化方法]
回收培养基中以上述方式所得到的脂酶,可以用常规方法经分离和纯化回收脂酶。
也就是说,通过用公知的合适方法(如过滤、离心)从培养物分离细菌细胞和固体培养基获得上清液或滤过物,用一种或数种分离和纯化方法处理浓缩或非浓缩的该分离液,从而得到脂酶。所述的分离活和纯化方法例如盐析法(通过加入可溶性盐沉淀酶)、有机溶剂沉淀法(通过加入亲水性有机溶剂沉淀酶或杂质)、吸附/解吸附法(使用离子交换树脂、凝胶过滤)、加或不加脂酶的喷雾干燥、冷冻干燥。[酶活性测定法]
以多聚甘油三油酸酯乳剂为底物(聚乙烯乙醇)(PVA)测定脂酶活性。活性测定实施方案如下。
将含有0.1ml酶溶液、0.4ml 200mM Tris缓冲液和甘油三油酸酯乳液的混合溶液放入具有密闭塞子的试管中加热至37℃反应10分钟,加入0.2ml盐酸使反应停止。制备甘油三油酸酯乳液,将2.5g甘油三油酸酯加入到10ml 2%PVA水溶液中(Poval PVA117(商标,Kuraray Co. Ltd.):PovalPVA205(商标,Kuraray Co. Ltd.)=9∶1),18000rpm低温离心10分钟使其均匀混合;反应停止后加入2ml N-己烷,2ml异丙醇和1ml蒸馏水,用力震荡后静置,用TLC-FID方法(Minagawa et al.,Lipids,18,732,1983)测定己烷层中样品的油酸含量。活性单位(U)为每分钟产生1毫摩尔油酸的脂酶量。[酶特性]
作为本发明这种脂酶的一个例子,由以上所述的青枯伯克氏菌SD709产生的脂酶其特性如下。(1)作用
其作用于甘油酯并水解其酯。(2)底物特异性
它广泛地水解各种甘油酯、酯等。相对活性以每一种甘油酯-PVA乳液作为甘油酯底物由上述的酶活性测定方法来测定。对甘油酯的分解能力为100,将所得的值与之比较得到其相对活性。丁酸甘油酯的相对活性为180,橄榄油为75,豆油为90,棉籽油为74。
酯的分解能力是通过以对硝基苯酚脂肪酸酯为底物在pH值为8.0,温度30℃时水解产生的对硝基苯酚(0D405)的比色法测定。
而相对活性则是以对硝基苯酚棕榈酸盐(pNPP)的分解能力为100,与之相比较对硝基苯酚戊酸盐(PNPL)为170,对硝基苯酚月桂酸盐(pNPV)为60。(3)活性pH值和最适pH值
用甘油三油酸酯乳液作为底物以上述的脂酶活性测定方法确定pH值。在4-12范围内确定了反应pH值,混合缓冲液由100mMe-氨基己酸、100mM双(2-羟乙基)亚氨基三(羟乙基)甲烷(bistris)、100mM N-三(羟乙基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)组成,在使用前用盐酸或氢氧化钠调节其pH值。反应的pH值与相对活性的关系如图1所示。在4-12范围内测定活性pH值为4-12,最适宜的pH值为6.5-9.5。(4)pH稳定性
用上述的酶活性测定方法测定在pH值4-12范围内以变化的pH值、37℃处理1小时后的剩余活性,pH值与剩余活性的关系如图2所示。在pH值4-11范围内,其剩余活性不低于50%。测定所用的缓冲液由以下溶液组成;pH4-5:醋酸/醋酸钠、pH6-7:磷酸、pH8-9:tris/盐酸、pH10-12:甘氨酸/氢氧化钠。(5)活性温度和最适温度
用同样方法测定,所不同的是以甘油三油酸酯乳液为底物,反应温度在30-100℃范围内变化。反应温度与反应活性的关系如图3所示。在30-100℃内确定的活性温度为30-100℃,最适温度为85-100℃。
用上述同样的酶活性分析法测定活性温度和最适温度,所不同的是以甘油三油酸酸乳液为底物,在5mM乙二胺四乙酸(EDTA)以及反应温度在30-100℃范围内变化。反应温度与相对活性的关系如图5所示。在30-100℃温度范围内确定的活性温度为30-100℃,最适温度为80-90℃。(6)温度稳定性
用上述酶活性测定方法测定pH7时,温度变化范围为30-100℃处理1小时后的剩余活性。处理温度与剩余活性的关系如图4所示。处理温度为80℃时,其剩余活性为100%。(7)分子量
由SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法得到的分子量为32,000±2,000。(8)等电点
由SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法得到等电点是8.8±0.5。
实施本发明的最好方式
现在,举出下列例子说明本发明,但这些例子不是用来限制本发明的范围。除非有其它说明,下列实施例中的%均为重量百分比。
实例1:培养产生脂酶的细菌(SD709)
将包含豆粉(2%)、葡萄糖(1%)、磷酸氢二铵(0.1%)、磷酸氢二钾(0.5%)、硫酸镁七水合物(0.1%)和碳酸钠(0.3%)液体培养基(2ml)放入直径18mm试管中,用高压灭菌器121℃下灭菌20分钟,接种一铂环量的青枯伯克氏菌SD709,并于30℃、130rpm培养24小时。然后离心分离去掉细菌细胞,获得脂酶溶液。该溶液脂酶活性为5U/ml。
实例2:培养产生脂酶细菌(SD709)和回收脂酶
将包含豆剂(2%)、磷酸氢二铵(0.1%)、磷酸氢二钾(0.5%)、硫酸镁heptahydrate(0.1%)和碳酸钠(0.3%)和Tween85(1%)液体培养基(2升)放入5升的培养罐中,120℃在高压灭菌器中灭菌20分钟,接种青枯伯克氏菌SD709,并于30℃、1000rpm换气振荡培养24小时。然后离心分离去掉细菌细胞,获得脂酶溶液。该溶液脂酶活性为20U/ml。
上述脂酶溶液用硫酸铵沉淀得到20%-30%的沉淀组分,沉淀用常规方法脱盐和冷结干燥得到粗脂酶粉剂。
实例3:纯化脂酶
将实例2中获得的脂酶粗粉剂溶解在10mM Tris/盐酸缓冲液(pH7)中,在含有10%饱和硫酸铵的10mM Tris/盐酸缓冲液(pH7)中进行透析,然后用Butyl-Toyopearl 650M(商标,Tosoh公司)疏水性色谱法得到活性组分。活性组分经过含有0.3mM次氯酸钙的10mM Tris/盐酸缓冲液(pH8)透析和DEAE-Cellulofine 800(商标,Seikagaku Corporation)吸附(离子交换层析树脂),用同样的缓冲液平衡,最后用氯化钠溶液洗脱得到活性组分。活性组分经脱盐和冷结干燥得到纯化的酶。
该冻结干燥产物的纯度由聚丙烯酰胺凝胶电泳来确定。
实例4:在乙二胺四乙酸存在时的高温活性
在实例2中所获得的酯酶的粗粉剂的活性在30-100℃范围变化的温度下、以甘油三油酸乳液为底物、在含有或不含乙二胺四乙酸(EDTA)情况下测定。以上面描述的相同的酶活性分析方法完成不含EDTA的测定,除了反应温度在在30-100℃范围变化。除了加入EDTA外,以不含EDTA的相同的测定方法进行存在EDTA时的测定。相对活性(与80℃、无EDTA时的100活性比较)与反应温度的关系如图5所示。由图5可见,本发明脂酶活性温度范围为30-100℃,即使有EDTA(无钙离子)存在时其最适温度为80-90℃。这表明,该脂酶在高温下有足够的活性。
工业实用性
本发明的脂酶有很高的耐热性,并且这种活性表现在可在高温下水解脂类,因此这种脂酶可以广泛地用于各个领域如:医药,食品加工,化装品制备、洗涤剂,废水处理,脂肪和油的分解,树脂控制。
本发明的青枯伯克氏菌SD709(FERMP-14786)或其菌学上的等价菌株,或它们的变体在有效地产生这种脂酶的本发明的制备方法中是有用的。
Claims (11)
1.一种脂酶,在30℃至100℃的温度范围内以甘油三油酸酯乳液为底物测定时,其具有从30℃到100℃的活性温度,从85℃到100℃的最适温度。
2.一种脂酶,在30℃至100℃的温度范围内在5mM EDTA存在下以甘油三油酸酯乳液为底物测定时,其具有从30℃到100℃的活性温度,从85℃到90℃的最适温度。
3.一种权利要求1所要求的脂酶,其具有以下特性:
(1)活性pH值和最适pH值
在pH值4-12范围内用甘油三油酸酯乳液作为底物测定时,活性pH值为4-12,最适pH值为6.5-9.5。
(2)分子量
用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定时分子量为32,000±2,000。
4.一种权利要求2所要求的脂酶,其具有以下特性:
(1)活性pH值和最适pH值
在pH值4-12的范围内用甘油三油酸酯乳液作为底物测定时,活性pH值为4-12,最适pH值为6.5-9.5。
(2)分子量
用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定时分子量为32,000±2,000。
5.一种权利要求1-4之任一所要求的脂酶,其是从属于假单胞菌属(Pseudomonas)的细菌培养物获得的。
6.一种权利要求5所要求的脂酶,其中所说的属于假单胞菌属的细菌是青枯伯克氏菌(Pseudomonas solanacearum)。
7.一种权利要求1-4之任一所要求的脂酶,其是从青枯伯克氏菌SD709(FERM-14786)的培养物获得的。
8.一种属于假单胞菌属的细菌,其产生权利要求第1-4之任一所要求的脂酶。
9.一种权利要求8所要求的细菌,其中所说的属于假单胞菌属的细菌是青枯伯克氏菌。
10.一种权利要求8所要求的细菌,其中所说的属于假单胞菌属的细菌是青枯伯克氏菌SD709(FERMP-14786)或者其菌学上的等价菌株,或者是它们的突变体。
11.一种产生脂酶的方法,该方法包括培养权利要求8-10之任一所要求的细菌,并从培养基中回收权利要求1-4之任一所要求的脂酶。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 96192388 CN1177979A (zh) | 1995-03-06 | 1996-02-27 | 新脂酶和其产生方法以及产生这种脂酶的微生物 |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP45803/95 | 1995-03-06 | ||
CN 96192388 CN1177979A (zh) | 1995-03-06 | 1996-02-27 | 新脂酶和其产生方法以及产生这种脂酶的微生物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1177979A true CN1177979A (zh) | 1998-04-01 |
Family
ID=5128243
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN 96192388 Pending CN1177979A (zh) | 1995-03-06 | 1996-02-27 | 新脂酶和其产生方法以及产生这种脂酶的微生物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN1177979A (zh) |
-
1996
- 1996-02-27 CN CN 96192388 patent/CN1177979A/zh active Pending
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1072718C (zh) | 脂肪酶及其微生物、该脂肪酶的制造方法及用途 | |
CN1047202C (zh) | 由头孢菌素乙酰水解酶基因编码的蛋白质的制备方法 | |
Lockwood et al. | The production of gluconic acid and 2-keto-gluconic acid from glucose by species of Pseudomonas and Phytomonas | |
CA2202553A1 (en) | Lipase, microorganism producing same, method for preparing said lipase and uses thereof | |
CN1216061A (zh) | 具有磷脂酶活性的蛋白质 | |
KR100260472B1 (ko) | 파에실로마이세스 릴라시누스 균주 및 이 균주가 분비하는 핵산 분해용 뉴클레아제 | |
CN1175112C (zh) | 制备外多糖的方法 | |
CA1245590A (en) | PROCESS FOR THE ENZYMATIC HYDROLYSIS OF D-.alpha.-AMINO- ACID AMIDES | |
SE446405B (sv) | Forfarande for framstellning av enzymet kolesteras genom odling av achromobacter delicatulus nrrl b-12115 och for hydrolys av kolesterolestrar av fettsyror genom anvendning av detta enzym | |
CN1177979A (zh) | 新脂酶和其产生方法以及产生这种脂酶的微生物 | |
DE3446304A1 (de) | Verfahren zur gewinnung von phenylalanin-dehydrogenase enthaltenden mikroorganismen, mikroorganismen, die in ihnen enthaltene phenylalanin-dehydrogenase und deren verwendung zur herstellung von l-(alpha)-aminosaeuren | |
CN1161455C (zh) | 大量产生ε-聚-L-赖氨酸的菌株和生产方法 | |
JP2002301494A (ja) | 活性汚泥及び排水処理方法 | |
EP0192401A2 (en) | Polypeptide product | |
EP0872548A1 (en) | Novel lipase, process for producing the same, and microorganism producing the same | |
FR2573091A1 (fr) | Nouvelle enzyme bacteriolytique et son procede de preparation | |
RU2157843C1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS CEREUS B 3б ГКМ ВИЗР № 98 ДЛЯ ОКИСЛЕНИЯ УГЛЕВОДОРОДОВ НЕФТИ И НЕФТЕПРОДУКТОВ | |
JP2964163B2 (ja) | R(―)―1,3―ブタンジオールの製造法 | |
Yonemoto et al. | Characterization of microbial system for degradation of bacterial endospores | |
RU2157841C1 (ru) | Штамм бактерий aсetobacter pasterianus абз-2 гкм визр n 102 для окисления углеводородов нефти и нефтепродуктов | |
JPH07303474A (ja) | アスペルギルス・ニガー sbo−30株 | |
JP3774581B2 (ja) | 熱安定性酵素およびその製造方法 | |
EP0188628A1 (en) | Process for producing fatty acids by fermentation | |
JPH05304949A (ja) | シュードモナス エスピー s10−071株及び該微生物の生産するリパーゼ | |
JPH0636756B2 (ja) | 光学活性カルボン酸及びその対掌体エステルの製造法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C53 | Correction of patent for invention or patent application | ||
COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: APPLICANT; FROM: NOVO NORDISK A/S TO: NUOWOQIMEIZI CO.,LTD. |
|
CP03 | Change of name, title or address |
Address after: Denmark bagsvaerd Applicant after: Novo Jymes A/S Address before: Denmark Applicant before: Novo Nordisk A/S |
|
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |